色谱硅胶量

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Ultimate® SEC色谱柱是硅胶基质的体积排阻色谱柱，也可以称之为“球状蛋白亲水改性硅胶柱”（中国药典门冬酰胺酶指定色谱柱）。其色谱填料为高纯度、具有良好稳定性的硅胶微球表面键合亲水性聚合物。月旭公司采用特殊的表面修饰技术，确保了该填料具有良好的稳定性和批与批之间的重现性。 Ultimate® SEC填料采用独特的化学键合技术，在硅球表面键合了亲水性聚合物以及亲水性二醇基官能团。双重键合机制使水溶性高分子聚合物、蛋白、生物酶、多肽等生物样品的非特异性吸附极小，因而可广泛应用于水溶性聚合物及生物大分子的分离和测定。Ultimate® SEC色谱填料的特点1) Ultimate® SEC色谱填料由含二醇基官能团的刚性球形硅胶微球表面覆盖亲水性高分子聚合物所组成；2) Ultimate® SEC色谱填料内径为5 μm或3 μm的硅胶微球，能够获得最高的分离效率。3）Ultimate® SEC 120 Å小孔径色谱柱适合分离头孢类等极性目标物；300 Å适合分离蛋白、多肽等生物大分子；4) Ultimate® SEC产品目前有120 Å、300 Å、500 Å和1000 Å四种孔径规格的色谱柱。Ultimate® SEC色谱填料的技术参数http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/09/201209201443_392056_1628076_3.jpgUltimate® SEC色谱柱使用注意事项1）使用前，请把色谱柱用纯水冲洗40-60个柱体积，以确保柱填料能够充分被润湿，防止色谱柱在使用过程中造成固定相塌陷；2）色谱柱在用纯水流动相分析时，需要充分地用纯水流动相平衡色谱柱，待基线充分平稳后进样分析；3）由于该类型色谱柱一般用的流动性是纯水相的缓冲盐，因而色谱柱在使用完以后需要用纯水流动相充分冲洗色谱柱，以保证缓冲盐被充分的清除，防止缓冲盐对色谱柱固定相造成的伤害；4）长时间不使用色谱柱时， 该类型色谱柱保存方式类似于常规的色谱柱，即高比例的有机溶剂-水溶液中，一般有机溶剂的比例为90%。Ultimate® SEC色谱柱可替代市场上同类型产品1) Ultimate® SEC 120 Å可替代的其他厂家色谱柱有：日本东曹Tosoh公司的TSK gel G2000SWxl、日本昭和电工Shodex公司的 PROTEIN KW-802.5、Sepax SRT SEC-150等；2) Ultimate® SEC 300Å可替代的类型有： 日本东曹Tosoh公司的TSK gel G3000SWxl、日本昭和电工Shodex公司的 PROTEIN KW-803、Sepax SRT SEC-300等；3) Ultimate® SEC 500Å可替代的类型有：日本东曹Tosoh公司的TSK gel G4000SWxl、Sepax SRT SEC-300、日本昭和电工Shodex公司的PROTEIN KW-804；Ultimate® SEC型色谱柱性能评价色谱柱：Ultimate SEC(7.8×300 mm，5 μm，300 Å)；流动相：150 mM磷酸盐缓冲溶液，pH 7.0(具体配置方法为：称取17.997 g磷酸二氢钠，用超纯水定容至1000 mL，然后用1 M氢氧化钠调节至所需pH值)；检测波长：214 nm；流速：0.8 mL/min；柱温：室温(25 oC)；进样量：10 μL。样品处理方法：四种标准物质的浓度均为1.0mg/mL，解冻至室温后直接进样；http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/09/201209201447_392057_1628076_3.jpg四种标准物质色谱图(1.甲状腺球蛋白；2.牛血清蛋白；3.核糖核苷酸酶A；4.尿嘧啶)http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/09/201209201448_392058_1628076_3.jpg

这两天用正相硅胶柱检测一个样品，具体色谱条件是：流动相：二氯甲烷+正己烷+冰醋酸（70+30+0.5），波长254nm，流速0.8ml/min；柱子在运行流动相之前先用异丙醇小流速冲洗了1个小时，基线很平；接着用正己烷冲洗了1个小时，基线也很平稳，但是一换上流动相，基线就很不稳。刚开始怀疑可能流动相里进了水，但是把溶剂都换了又重新配了两遍，还是这种情况，只要用正己烷冲洗柱子，基线就能稳下来，只要一换流动相基线就特别不稳。第一次遇到这种情况，现在不知道到底该怎么解决了，望高手们多多帮，非常感谢。稳定和不稳定的基线，我以WORD的形式上传到附件了，急需救助！http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/01/201301092106_419456_2583865_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/01/201301092107_419457_2583865_3.jpg