无菌取样袋

请教各位老师：食物中毒等应急事件采样，理化样品可以使用微生物的无菌采样袋进行取样吗？还是有专门用来理化采样的塑料袋？如果使用玻璃器皿的话很不方便，谢谢大家！

Millipore公司有没有无菌取样器？请帮忙提供一下型号、报价、用途、容量之类的。我是想用来取纯化水的，要保持无菌，最好容量大一点的。

规格5kg的罐头，做商业无菌取样需要取多少？

国标菌落的检测中，如何使用均质袋？用于稀释样品的生理盐水应该事先放进均质袋中一起灭菌，还是先装在容器中灭菌，做实验时再倒入均质袋中？这样的话，如何保证均质袋是无菌的？谢谢。

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在2020版药典中，1101无菌检查法，我们家是做口罩的，应该取样多少mg?两种培养基（硫乙醇酸盐培养基和胰酪大豆胨培养基），各做多少平行样品？谢谢各位老师指导[img=,690,920]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/10/202010241426170393_393_3112968_3.png[/img]

无菌水样取袋再灭菌后可以反复使用吗？

[align=left]【推荐讲座】《从法规角度看无菌工艺取样-默克制药工艺基础课堂》（2017-12-11 14:00） [/align][align=left] 讲座时间：[/align][align=left]2017年12月11日 14:00[/align][align=left]免费报名：[/align][align=left][url]http://www.instrument.com.cn/webinar/meeting_3234.html[/url][/align][align=left]讲座介绍：[/align][align=left]为生物制品选择正确取样解决方案时要考虑到产品、流程、环境，包括法规整体要求，以及测试/检查/保留方法。这必须建立在风险控制的基础上，确保选定的解决方案符合法规要求和公司期望。国际法规的监管趋势是无菌工艺取样的推动力。本次网络研讨会从国际法规的监管趋势，药物开发、质量、风险管理及质量管理体系探讨取样的需求，一致性和可靠性，流程等；封闭式取样解决方案封闭且无菌、减小污染风险、提供代表性样品等，能够满足法规期望，是未来的趋势；最后从法规发展趋势看，如何从QBD和生命周期管理的角度进行取样工艺的改善。 [/align][align=left] [/align][align=left]讲座内容：[/align][align=left]1、无菌工艺取样的推动力；[/align][align=left]2、无菌工艺取样详细的法规要求；[/align][align=left]3、传统取样方法的复杂性和风险；[/align][align=left]4、封闭式取样及该领域的最新趋势。[/align]

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无菌均质器，又称拍打式匀浆机，拍打式匀浆器。主要用于生物技术领域的组织分散、医药领域的样品准备、食品工业的酶处理以及在制药工业、化妆品工业、油漆工业和石油化工等方面。 　　该装置设有全开启式玻璃透明窗口门，易于清洗，玻璃透明窗口易于观察。采用大屏幕液晶显示，工作时间和均质速度智能可调，拍击器也可任意调整前后距离。可有效的分离实验样品表面和被包含在内的微生物均一样品，样品使用一次性无菌均质滤袋隔离操作，保证卫生和安全，不与仪器接触，无样品泄露而不需进行系统清洗，具有方便快速、结果准确、均质柔和、样品无污染、无损伤、不升温、不需灭菌处理，不需洗刷器皿的特点，重复性好的要求。本产品也适合肿瘤组织(如肠癌、胃癌、肝癌、乳腺癌)的匀浆，既可得到大量的单细胞。必要时，可通过延长均质时间，对组织细胞实现柔软的破碎。 　　BILON品牌无菌均质器是使从固体样品中提取细菌的过程变得非常简单，只需将样品和稀释液加入到无菌的样品袋中，然后将样品袋放入拍击式均质器中即可完成样品的处理。有效地分离被包含在固体样品内部和表面的微生物均一样品，确保无菌袋中混合全部的样品。处理后的样品溶液可以直接进行取样和分析，没有样品的变化和交叉污染的危险。应用领域：食品微生物分析;动物组织、生物样品、化妆品的均质处理;鱼、肉、蔬菜、水果、饼干;药品的微生物分析等。 　　在使用我公司的无菌均质器时，有八个需要注意的地方，正确对待这些问题，可以使均质器更好的为您服务。 　　1) 电源插头必须插紧到位，出现松动可能影响电脑控制器造成死机，如出现死机现象，请关闭后侧电源开关，关机3分钟后重新启动。 　　2) 在锤击板工作时请不要随意打开均质器门，以免样品液溢出。应按“开/停”建，设备自动停止运行。当把门关上后，再按“开/停”建，设备自动完成余下工作。切勿颠倒操作。 　　3) 仪器长期不使用应切断电源，拨去插头。防止无菌均质器内部电子元器件老化。 　　4) 均质器门底部为防止均质袋意外破裂，便于清洗溢出物，底部设计为空的，可放置接水盘，所以仪器运转时请勿用手从底部伸入，以免纹伤手指。均质器工作时最好不要打开均质器门，造成不必要的损失。 　　5) 机器在运转前，请仔细查看均质箱内有无异物，以免工作时发生故障和损伤均质袋。 　　6) 硬块，骨状，冰状物等坚硬锐利的物质不宜使用，以免破坏均质袋。 　　7) 仪器和均质袋的存放都应避免阳光的直接照射，特别是均质袋应存放在无阳光或避免紫外线照射的地方，以免老化。 　　8) 量少时，需加快速度时，均质物纤维比较坚韧时，则可用后面旋钮调节拍击板与可视窗的间距，来达到更好的均质效果。注意调整的距离，避免发生空击等损伤无菌均质器的情况发生。 　　无菌均质器正确使用步骤为： 　　1、把需处理的试品放入无菌均质袋中。 　　2、打开均质器门(可全开启)，将无菌袋开口在关闭均质器门时夹住。 　　3、设定使用程序(如拍击速度、拍击时间等)，进行拍击均质工作。 　　4、实验完毕后，打开均质器门，取出样品。 　　无菌均质器的使用如果做到以上几点，可以极大延长其使用寿命和使用效果。让我们正确使用无菌均质器从现在开始!

需要大家的帮助，就是无菌包装的奶酪奶油，在常温放置一天后，会涨包，但是物生物合格(菌落，大肠未长），那是为什么会涨包呢？

药典规定无菌检查的检验量，出厂产品当批产量大于500支（装量≤100ml）的注射剂，所需的检验量是每种培养基不得少于20支，阳性对照另外增加1/2的检验量，也就是说做一批无菌检查所需的供试品应该是60支，且按照GMP的要求，注射制剂的无菌检查，应按照如果每批产品分不同消毒柜消毒，取样也要按每一消毒柜分别取，也就是说如果一批产品分10个消毒柜消毒，就要取10批，做10个无菌的样。我不知道各位做无菌的检验是否都按照上述的要求做的，也想请教各位，你们的检验量是多少？是否每批次都是按柜取样并做样的？

无菌室可以带原始记录和文件进去吗？望老师不吝赐教

第一次做盒饭中的商业无菌，由于盒饭都是固体，里面汤汁很少，而且取样也麻烦，是不是要先全部混合进均质器混匀，然后取少量的样品和等量的无菌蒸馏水再进行检测PH值。求各位前辈指点。

公司生产肉类罐头食品，出厂做商业无菌检验时，是否所有产品都要经过商业无菌检验，还是抽取样品做商业无菌检验？（监管人员到公司检查，要求在成品库内间商业无菌检验室，是否合理？）

一、采集生产过程中的样品1、对插入点进行消毒。2、通过管道垫圈护着运送管上紧合不锈钢制喷嘴插入注射器针头。3、将注射器里的样品转移到样品容器。如果要采样单独来做微生物和化学成分分析，先用无菌工艺取微生物分析用的样品并贴上标签。4、把样品放到装有冰的样品盒里面，防止污染，并且立即把它连同样品数据一起转移到实验室。二、包装零售液体产品随机选择所有产品中有代表性的样品去检测。实验报告表格应包括生产日期（或者货架期产品的条码日期）。零售液体产品的取样是为了检查出产地和出产时间。当不可能收集一种产品的袋装产品时（如：产品包装在大的商品袋时），充分混合牛奶或牛奶产品，并且在无菌的状态下转移至少100mL的有代表性样品到无菌样品容器。收集一个温度控制样品,温度控制样品的大小必须至少是最大样品收集量的一半（如：如果样品收集1gal，温度控制样品必须是0.5gal或更大）。标明样品，迅速将它们放到装有冰的样品盒里，保持温度在0-4.4℃，防止污染（高于冷冻剂的顶部，或者用不渗水的塑料袋密封起来，特别是在运输过程中），将它们和样品数据一起在48h内送到实验室，时间越短越好。三、灌装机牛奶1、从先前未开启过的分装机管道采样，管道无需先用牛奶冲洗。取出大约500mL牛奶后收集样品，用来检测在用分装机的情况。2、收集一个温度控制样品。3、标明样品，迅速将它们放到装有冰的样品盒里，防止污染，将他们和样品数据一起在48小时内送到实验室，时间越短越好。四、调咖啡用的单独乳酪小袋装因为单一包装往往不能满足分析过程所需要的量，随意选择十个包装来满足检测和代表大多数的要求。包装应在不打开的情况下转移到实验室。（也就是说，取样前不要混合在一起）。1、经过巴氏杀菌和超巴氏杀菌的小袋装乳酪：标上条码、日期或实验室工作表上的批号，将小袋子放入塑料袋并密封，然后装有冰的样品盒里。2、干粉小袋儿装乳酪：就包装好的干燥产品放到一个袋子或盒子，避免污染和吸湿。不要把他们放到衣物里。在室温保存和运输样品。五、高压包装产品1、零售包装。(1)随机选择所需数量的包装。(2)标明样品，迅速将它们放到装有冰的样品盒里，防止污染，将他们和样品，数据一起送到实验室。2、商业包装。(1)随机选择所需数量的包装。(2)通过颠倒25次来混匀这些包装，或者搅拌30s。(3)无菌条件下分装吸取里至少100mL内容物采样容器。(4)标明样品，迅速将它们放到装有冰的样品盒里，防止污染，将它们和样品数据一起送到实验室。

[color=#333333][url=http://www.chinanoted.com/][color=#e53333]无菌均质器[/color][/url]，又称拍打式匀浆机，拍打式匀浆器，无菌均质器的应用范围如下：[/color][color=#333333]1[/color][color=#333333]、无菌均质器广泛用于动物组织、生物样品等均质处理，在食品、药品、化妆品、临床、分子学、毒素及细菌检测等领域均可应用，特别适合于微生物检测样本的制备。[/color][color=#333333]2[/color][color=#333333]、无菌均质器[/color][color=#333333]([/color][color=#333333]拍打式匀浆器[/color][color=#333333])[/color][color=#333333]是在国外系列产品技术基础上改进并放大的先进产品，具有均质柔和、样品无污染、无损伤、不升温、不需灭菌处理，不需洗刷器皿的特点。[/color][color=#333333]3[/color][color=#333333]、无菌均质器也适合肿瘤组织[/color][color=#333333]([/color][color=#333333]如肝癌、肠癌、胃癌、乳腺癌[/color][color=#333333])[/color][color=#333333]的匀浆，既可得到大量的单细胞，必要时，可通过延长均质时间，对组织细胞[/color][color=#333333]([/color][color=#333333]如肝脏等[/color][color=#333333])[/color][color=#333333]实现柔软的破碎。[/color][color=#333333]4[/color][color=#333333]、无菌均质器可有效地分离固体样品表面和被包含在内的微生物均一样品，样品装在一次性无菌均质袋中，不与仪器接触，运行快速、结果准确、重复性好的要求。[/color][color=#333333]该装置设有全开启式玻璃透明窗口门，易于清洗，玻璃透明窗口易于观察。采用大屏幕液晶显示，工作时间和均质速度智能可调，拍击器也可任意调整前后距离。可有效的分离实验样品表面和被包含在内的微生物均一样品，样品使用一次性无菌均质滤袋隔离操作，保证卫生和安全，不与仪器接触，无样品泄露而不需进行系统清洗，具有方便快速、结果准确、均质柔和、样品无污染、无损伤、不升温、不需灭菌处理，不需洗刷器皿的特点，重复性好的要求。本产品也适合肿瘤组织（如肠癌、胃癌、肝癌、乳腺癌）的匀浆，既可得到大量的单细胞。必要时，可通过延长均质时间，对组织细胞实现柔软的破碎。 [/color][color=#333333]biosafer[/color][color=#333333][url=http://www.chinanoted.com/][color=#e53333]无菌均质器[/color][/url]是使从固体样品中提取细菌的过程变得非常简单，只需将样品和稀释液加入到无菌的样品袋中，然后将样品袋放入拍击式均质器中即可完成样品的处理。有效地分离被包含在固体样品内部和表面的微生物均一样品，确保无菌袋中混合全部的样品。处理后的样品溶液可以直接进行取样和分析，没有样品的变化和交叉污染的危险。应用领域：食品微生物分析；动物组织、生物样品、化妆品的均质处理；鱼、肉、蔬菜、水果、饼干；药品的微生物分析等[/color][color=#333333]。[/color][color=#333333]在使用[/color][color=#333333]biosafer[/color][color=#333333]无菌均质器时正确对待这些问题，可以使均质器更好的为您服务。 [/color][color=#333333]1[/color][color=#333333]） 电源插头必须插紧到位，出现松动可能影响电脑控制器造成死机，如出现死机现象，请关闭后侧电源开关，关机[/color][color=#333333]3[/color][color=#333333]分钟后重新启动。[/color][color=#333333]2[/color][color=#333333]） 在锤击板工作时请不要随意打开均质器门，以免样品液溢出。应按“开[/color][color=#333333]/[/color][color=#333333]停”建，设备自动停止运行。当把门关上后，再按“开[/color][color=#333333]/[/color][color=#333333]停”建，设备自动完成余下工作。切勿颠倒操作。 [/color][color=#333333]3[/color][color=#333333]） 仪器长期不使用应切断电源，拨去插头。防止无菌均质器内部电子元器件老化。 [/color][color=#333333]4[/color][color=#333333]） 均质器门底部为防止均质袋意外破裂，便于清洗溢出物，底部设计为空的，可放置接水盘，所以仪器运转时请勿用手从底部伸入，以免纹伤手指。均质器工作时最好不要打开均质器门，造成不必要的损失。 [/color][color=#333333]5[/color][color=#333333]） 机器在运转前，请仔细查看均质箱内有无异物，以免工作时发生故障和损伤均质袋。[/color][color=#333333]6[/color][color=#333333]） 硬块，骨状，冰状物等坚硬锐利的物质不宜使用，以免破坏均质袋。 [/color][color=#333333]7[/color][color=#333333]） 仪器和均质袋的存放都应避免阳光的直接照射，特别是均质袋应存放在无阳光或避免紫外线照射的地方，以免老化。 [/color][color=#333333]8[/color][color=#333333]） 量少时，需加快速度时，均质物纤维比较坚韧时，则可用后面旋钮调节拍击板与可视窗的间距，来达到更好的均质效果。注意调整的距离，避免发生空击等损伤无菌均质器的情况发生。 [/color][color=#333333][url=http://www.chinanoted.com/][color=#e53333]无菌均质器[/color][/url]正确使用步骤为： [/color][color=#333333]1[/color][color=#333333]、把需处理的试品放入无菌均质袋中。 [/color][color=#333333]2[/color][color=#333333]、打开均质器门（可全开启），将无菌袋开口在关闭均质器门时夹住。 [/color][color=#333333]3[/color][color=#333333]、设定使用程序（如拍击速度、拍击时间等），进行拍击均质工作。 [/color][color=#333333]4[/color][color=#333333]、实验完毕后，打开均质器门，取出样品。 [/color][color=#333333]无菌均质器的使用如果做到以上几点，可以极大延长其使用寿命和使用效果。 [/color]

商业无菌结果判定该批罐头食品经审查生产操作记录正常，抽取样品经保温试验未胖听或泄漏，保温后开罐，经感官，PH或涂片镜检，或接种培养，确证无微生物增殖现象，则为商业无菌。该批罐头食品经审查生产操作记录，未发现问题；抽取样品经保温试验有一罐及一罐以上发生胖听或泄漏，或保温后开罐，经感官，PH或涂片镜检，或接种培养，确证有微生物增殖现象，则为非商业无菌请问确证无微生物增殖，怎么知道有没有增殖啊，还要做哪个样品的对比吗？经接种培养后检出芽孢杆菌，就说明是非商业无菌吗还有低酸性罐头食品的需氧厌氧培养条件怎么控制啊，本人是新手谢谢哪位大侠解答，

最近在验证果冻产品的CCP关键限值，想知道果冻经过巴氏杀菌能达到商业无菌吗 我们是铝箔袋软袋灌装产品

听到这样一种说法：要求灭菌产品必须按照灭菌柜的柜次取样和检验。就是说一个批号注射剂产品有几个灭菌柜就需要分别对相应灭菌柜进行取样无菌检查和留样。我们现在没有这么做，只是在最终灯检结束后，随机抽取所需取样量和留样量，当然，按照最先的说法，自然是一种保证，但是我总觉得实际中可操作性不强，大家怎么看呢？有这么做的么？

商业无菌：罐头食品经过适度的杀菌后，不含有致病性微生物，也不含有在通常温度下能在其中繁殖的非致病性微生物。这种状态叫做商业无菌. 商业无菌的检查一般是在根据产品PH范围进行相应的温度保温后，对保温中已经胀袋或胖听的产品可直接判读为不符合商业无菌要求；如果生产需要判断胖听的原因，则必须进行微生物鉴别培养！但对于保温后正常的产品，需在无菌状态下进行留样后，对感官与PH进行检查（PH变化一般以0.5为标准），通常下都要进行镜检，看是否存在细菌增殖现象，如果有细菌增殖，则必须将留样品进行细菌培养了。如果镜检也良好，则可直接判断商业无菌！

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1、洁净室（无菌室）要符合规范要求：无菌室应采光 良好、避免潮湿、远离厕所及污染区。面积一般不超过10m2，不小于5m2；高度不超过2.4m。由1—2个缓冲间、操作间组成（操作间和缓冲间的门不应直对），操作间和缓冲间之间应具备灭菌功能的样品传递箱。在缓冲间内应有洗手盆、毛巾、无菌衣裤放置架及挂钩、拖鞋等，不应放置培养箱和其他杂物；无菌室内应六面光滑平整，能耐受清洗消毒。墙壁与地面、天花板连接处应呈凹弧形，无缝隙，不留死角。操作间内不应安装下水道。 无菌操作室应具有空气除菌过滤的单向流空气装置，操作区洁净度100级或放置同等级别的超净工作台，室内温度控制18—26℃，相对湿度45%—65%。缓冲间及操作室内均应设置能达到空气消毒效果的紫外灯或其他适宜的消毒装置，空气洁净级别不同的相邻房间之间的静压差应大于5Pa，洁净室（区）与室外大气的静压差大于10Pa。无菌室内的照明灯应嵌装在天花板 内，室内光照应分布均匀，光照度不低于300lx。缓冲间和操作间所设置的紫外线杀菌灯（2—2.5w/m3），应定期检查辐射强度，要求在操作面上达40uw/m2。不符合要求的紫外杀菌灯应及时更换。 2、建立使用登记制度在登记册中可设置以下项目内容：如使用日期、时间、使用人、设备运行状况、温度、湿度、洁净度状态（沉降菌数、浮游菌数、尘埃粒子数 ）、报修原因、报修结果、清洁工作（台面、地面、墙面、天花板、传递窗、门把手）、消毒液名称等。3、建立使用标准操作规范（SOP）并严格管理:SOP内容至少要有以下几点： （1）规定净化系统使运转时间要求每次实验前应开启净化系统使运转至少1h以上，同时开启净化台和紫外灯。 （2）物品进入洁净室（无菌室）基本要求：凡进入洁净室（无菌室）的物 品必须先在第一缓冲间内对外部表面用消毒剂消毒灭菌，再经物流缓冲间、传递窗1h以上，及无菌空气吹干后送入无菌室。注意带纤维、易发尘物品不得带进净化实验室。无菌室内固定物品不得任意搬出。 （3）人员进入洁净室（无菌室）要求：实验人员进入洁净室（无菌室）不得化妆、带手表、戒指等首饰；不得吃东西、嚼口香糖。应清洁手后进入第一缓冲间更衣，同时换上消毒隔离拖鞋，脱去外衣，用消毒液消毒双手后戴上无菌手套，换上无菌连衣帽（不得让头发、衣等暴露在外面），戴上无菌口罩。然后，换或是再戴上第二副无菌手套，在进入第二缓冲间时换第二双消毒隔离拖鞋。再经风淋室30s风淋后进入无菌室。 （4）温湿度观察要求：观察温度计、湿度计上显示的温湿度是否在规定的范围内，并作为实验原始数据记录在案。如发现问题应及时寻找原因，及时报修和及时报告实验室主管，并将报修原因和结果记录归档。 （5）沉降菌落计数与浮游菌测定要求：在每次实验同时，对操作室和层流台做微生物沉降菌落计数，将结果记录在使用登记本上，并作为实验环境原始数据记录在实验报告上。每周1次，或在无菌检查等必要时，在每次实验同时对操作室和净化台进行浮游菌测定，将结果记录在使用登记本上，并作为实验环境原始数据记录在实验报告上。 （6）消毒要求：无菌室每周和每次操作前用0.1%新洁尔灭或2%甲酚液或其他适宜消毒液（常用消毒剂的品种有：5—20倍稀释的碘伏水溶液、0.1%新洁尔灭溶液、1：50的84消毒液、75%乙醇溶液、3%碘酒溶液、5%石炭酸（来苏儿）消毒溶液、2%戊二醛水溶液、尼泊金乙醇消毒液（处方：对羟基苯甲酸甲酯21.5g；对羟基苯甲酸丙酯8.6g，75%乙醇10ml）等，所用的消毒剂品种与使用要进行有效性验证方可使用，并定期更换消毒剂的品种）擦拭操作台及可能污染的死角，方法是用无菌纱布浸渍消毒溶液清洁超净台的整个内表面、顶面、及无菌室、人流、物流、缓冲间的地板、传递窗、门把手。清洁消毒程序应从内向外，从高洁净区到低洁净区。逐步向外退出洁净区域。然后开启无菌空气过滤器及紫外灯杀菌1—2h，以杀灭存留微生物。在每次操作完毕，同样用上述消毒溶液擦拭工作台面，除去室内湿气，用紫外灯杀菌30min。 （7）其他要求：如遇停电，应立即停止实验，离开无菌室。关闭所有电闸。重新进入无菌室前至少开启机房运转1h以上。4、洁净度检查的要求与方法：无菌室在消毒处理后，无菌试验前及操作过程中需检查空气中菌落数，以此来判断无菌室是否达到规定的洁净度，常有沉降菌和浮游菌测定方法。 （1）沉降菌检测方法及标准：以无菌方式将3个营养琼脂平板带入无菌操作室，在操作区台面左、中、右各放1个；打开平板盖，在空气 中暴露30min后将平板盖好，置32.5℃士2.5℃培养48h，取出检查，3个平板上生长的菌落数平均小于1个。 （2）浮游菌检测方法及标准：用专门的采样器，宜采用撞击法机制的采样器，一般采用狭缝式或离心式采样器，并配有流量计和定时器，严格按仪器说明书的要求操作并定时校检，采样器和培养皿进入被测房间前先用消毒房间的消毒剂灭菌，使用的培养基为营养琼脂培养基或药典认可的其他培养基。使用时，先开动真空泵抽气，时间不少于5min，调节流量、转盘、转速 。关闭真空泵，放入培养皿，盖上采样器盖子后调节缝隙高度。置采样口采样点后，依次开启采样器、真空泵，转动定时器，根据采样量设定采样时间。全部采样结束后，将培养皿置32.5℃士2.5培养48h，取出检查，浮游菌落数平均不得超过5个/m3。 每批培养基应选定3只培养皿做对照培养。 无菌操作台面或超净工作台还应定期检测其悬浮粒子，应达到100级（一般用尘埃粒子计数仪）检测，并根据无菌状况必要时置换过滤器。5、定期进行洁净度再验证：定期（每季度、半年、1年）或当洁净室设施发生重大改变时，要按国家标准GB/T16292-16294-1996《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》进行洁净度再验证，以确保洁净度符合规定，保存验证原始记录，定期归档保存，并将验证结果记录在无菌室使用登记册上，作为实验环境原始依据及趋势分析资料。并定期对洁净室的环境检测数据进行趋势分析和评估，根据评估结果，了解洁净室设施环境质量的稳定状况及变化趋势，决定是否有必要修订相应的警戒和纠偏限度。6、定期更换新的紫外灯管、更换净化系统的初效、中效、高效头：定期（至少每年1次）更换新的紫外灯管，以确保紫外灯管灭菌持续有效。并同时在使用登记本上做好更换记录，定期归档保存。至少2年1次，或按洁净度验证实际情况，定期更换初效、中效、高效头。以确保净化系统的功能持续有效，并同时在使用登记本上做好更换记录，定期归档保存。7、使用过程中应尽可能减少人员的走动或活动：平时实验室内应尽可能减少人员的走动或活动，同向洁净室的门要关闭或安装自动闭门器使其保持关闭状态。8、洁净度不符合规定时立即停止使用：发现洁净度不符合规定时，应立即停止使用，寻找原因，彻底清洁、必须经洁净度再验证符合规定后，才再使用，并同时将情况记录在无菌室使用登记册上，定期归档保存。9、对进入的外来人员或维修人员进行指导和监督：非微生物室检验人员不得进入洁净室（无菌室），对必须进入的外来人员或维修人员要进行指导和监督。10、洁净室（无菌室）的日常管理：建立安全卫生值日制度，一旦发现通风系统、墙壁、天花板、地面、门窗及公用介质系统等设施有损坏现象，要及时报告并采取相应的修复措施，并保存记录及时归档。从洁净室（无菌室）环境中检测到的微生物应能鉴别至属或种，保留鉴别实验原始记录及菌种，作为无菌生产、无菌检查洁净室环境质量、消毒剂有效性评估及污染源调查的依据，并且也是为无菌检查阳性结果的调查提供第一手资料。

无菌技术是在医疗护理操作过程中，保持无菌物品、无菌区域不被污染、防止病原微生物 侵入人体的一系列操作技术。无菌技术作为预防医院感染的一项重要而基础的技术，医护人员必须正确熟练地掌握，在技术操作中严守操作规程，以确保病人安全，防止医源性感染的发生。 无菌技术的概念和原则 （一）无菌技术的概念 1.无菌技术（aseptic technique） 是指在执行医疗、护理技术过程中，防止一切微生物侵入机体和保持无菌物品及无菌区域不被污染的操作技术和管理方法。 2.无菌物品(aseptic supply) 经过物理或化学方法灭菌后，未被污染的物品称无菌物品。 3.无菌区域(aseptic area) 经过灭菌处理而未被污染的区域，称无菌区域。 4.非无菌区(non-aseptic area) 未经灭菌或经灭菌后被污染的物品或区域，称非无菌物品或区域。 5.相对无菌区(relative aseptic area) 相对无菌区指无菌物品自无菌容器内一经取出，就认为是相对无菌，不可再放回。无菌区边缘向内3cm为相对无菌区。 6.污染物品 (infectant)污染物品指未经过灭菌处理，或灭菌处理后又被污染的物品。 （二）无菌技术操作原则 1.操作前准备 （1）操作环境应清洁、宽敞、定期消毒；物品布局合理；无菌操作前半小时应停止清扫工作、减少走动、避免尘土飞扬。 （2）工作人员应做好个人准备，戴好帽子、口罩，修剪指甲并洗手，必要时穿无菌衣、带无菌手套。 2.操作中保持无菌 （1）工作人员应面向无菌区，手臂应保持在腰部或操作台台面以上，不可跨越无菌区避免面对无菌区谈笑、咳嗽、打喷嚏。 （2）用无菌持物镊取用物品；无菌物品一经取出，即使未用，也不可放回无菌容器内；一套无菌物品仅供一位患者使用，避免交叉感染。 （3）无菌操作中，无菌物品疑有污染或已被污染，应予更换并重新灭菌。 3.无菌物品保管 （1）无菌物品必须与非无菌物品分开放置。 （2）无菌物品不可暴露于空气中，应存放于无菌包或无菌容器中，无菌包外须标明物品名称、灭菌日期，并按失效期先后顺序排放。 （3）定期检查无菌物品的灭菌日期及保存情况。无菌包在未被污染的情况下保存期一般为7天，过期或受潮应重新灭菌。

无菌操作简介　　用于防止微生物进入人体组织或其它无菌范围的操作技术称为无菌操作。如外科手术需防止细菌进入伤口．在各种生物实验中,为了防止微生物地生长和繁殖影响实验的进行,也要在无菌的环境下进行. 要求　　1操作前将界面上的细菌和病毒等微生物杀灭。 　　2操作过程中是界面与外界隔离,避免微生物的侵入。无菌操作原则：　　一、在执行无菌操作时，必须明确物品的无菌区和非无菌区。 　　二、执行无菌操作前，先戴帽子、口罩、洗手，并将手擦干，注意空气和环境清洁。 　　三、夹取无菌物品，必须使用无菌持物钳。

无菌操作基本技术 1. 实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射30-60 分钟灭菌，以70 %ethanol 擦拭无菌操作台面，并开启无菌操作台风扇运转10分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面。操作间隔应让无菌操作台运转10分钟以上后，再进行下一个细胞株之操作。 2. 无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置，其它实验用品用完即应移出，以利于气流之流通。实验用品以70 % ethanol 擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在台面之中央无菌区域，勿在边缘之非无菌区域操作。 3. 小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约45° 角取用， 尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。4. 工作人员应注意自身之安全，须穿戴实验衣及手套后才进行实验。对于来自人类或是病毒感染之细胞株应特别小心操作，并选择适当等级之无菌操作台(至少Class II)。操作过程中，应避免引起aerosol之产生，小心毒性药品，例如DMSO及TPA等，并避免尖锐针头之伤害等。

无菌室的建设要求 　　1、工作室应矮小、平整，面积只需4米2左右，高2.2—2.3米，内部装修应平整、光滑，无凹凸不平或棱角等，四壁及屋顶应用不透水之材质，便于擦洗及杀菌; 　　2、室内采光面积大，从室外应能看到室内情况; 　　3、为保证无菌室的洁净，无菌室周围需设缓冲走廊，走廊旁再设缓冲间，其面积可小于无菌室; 　　4、无菌室、缓冲走廊及缓冲间均设有日光灯及供消毒空气用紫外灯，杀菌外灯离工作台以1米为宜 ，其电源开关均应设在室外; 　　5、无菌室与缓冲间进出口应设拉门，门与窗平齐，门缝要封紧，两门应错开，以免空气对流造成污染。 　　无菌室的使用与管理 　　1、无菌室应保持清洁整齐，室内仅存放必须的检验用具如酒精灯、酒精棉、火柴、镊子、接种针、接种环、玻璃铅笔等，不要放与检测无关的物品; 　　2、室内检验用具及凳桌等保持固定位置，不随便移动; 　　3、每2—3周用2%石炭酸水溶液擦拭工作台、门、窗、桌、椅及地面，然后用3%石炭酸水溶液喷雾消毒空气，最后紫外灯杀菌半小时; 　　4、定期检查室内空气无菌状况，细菌数应控制在10个以下，发现不符合要求时，应立即彻底毒灭菌/无菌室无菌程度的测定方法：取普通肉汤琼脂平板、改良马丁培养基平板各3个(平板直径均9厘米)，置无菌室各工作位置上，开盖曝露半小时，然后倒置进行培养，测细菌总数应置37℃温箱培养48小时;测霉菌数则应置27℃温箱培养5天。细菌`霉菌总数均不得超过10个为; 　　5、无菌室杀菌前，应将所有物品置于操作之部位(待检物例外)，然后打开紫外灯杀菌30分钟，时间一到，关闭紫外灯待用; 　　6、进入无菌室前，必须于缓冲间更换消毒过的工作服、工作帽及工作鞋; 　　7、操作应严格按照无菌操作规定进行，操作中少说话，不喧哗，以保持环境的无菌状态。 　　器材及场所的灭菌消毒 　　微生物检验用器材及场所必须进行灭菌或消毒处理，不同的对象采用不同的处理方法。 　　1、高压蒸汽灭菌: 工作服、口罩、稀释液等，置高压杀菌锅内，一般采用121℃灭菌半小时,当然不同的培养基有不同的要求,应分别处理; 　　2、火焰灭菌： 接种针、接种环等可直接火焰灭菌; 　　3、高温干燥灭菌： 各种玻璃器皿、注射器、吸管等，置于燥箱中160℃灭菌2小时; 　　4、一 般消毒: 无菌室内的凳、工作台、试管架、天平、待检物容器或包装均无法进行灭菌，必须用其他方法进行消毒处理，采用2%石炭酸或来苏儿水溶液擦拭消毒，工作人员的手也用此法进行消毒; 　　5、空气的消毒： 开启紫外灯照射30—60分钟即可。 　　6、 操作要领： 　　1)准备工作 　　. 先进行无菌室空间的消毒，开启紫外灯30—60分钟; 　　. 检验用的有关器材， 搬入无菌室前必须分别进会灭菌消毒; 　　. 操作人员必须将手清洗消毒，穿戴好无菌工作衣、帽和鞋，才能进入无菌室; 　　. 进入无菌室后再一次消毒手部，然后才进行检验操作。 　　2)操作过程注意事项 　　. 动作要轻，不能太快，以免搅动空气增加污染;玻璃器皿也应轻取轻放，以免破损污染环境; 　　. 操作应在近火焰区进行; 　　. 接种环、接种针等金属器材使用前后均需灼烧，灼烧时先通过内焰，使残物烘干后再灼烧灭菌; 　　. 使用吸管时，切勿用嘴直接吸、吹吸管，而必须用洗耳球操作; 　　. 观察平板时不好 开盖，如欲沾取菌落检查时，必需靠近火焰区操作，平皿盖也不能 大开，而是上下盖适当开缝; 　　. 进行可疑致病菌涂片染色时，应使用夹子夹持玻片，切勿用手 直接拿玻片，以免造成污染，用过的玻片也应置于消毒液中浸泡消毒，然后再洗涤; 　　. 工作结束，收拾好工作台上的样品及器材，最后用消毒液擦拭工作台。