比例稀释仪

今天在研读农业部781号公告-5-2006 《动物源食品中阿维菌素类药物残留量的测定 高效液相色谱法》，发现里面关于三氟乙酸酐的稀释有问题：1.在4.2试剂和材料中写的稀释比例是1:2http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/01/201601271633_583704_1627156_3.jpg2.在4.4.3净化和荧光衍生化以及4.4.4标准曲线的测定中写的稀释比例是1:1http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/01/201601271633_583705_1627156_3.jpg前后两段的描述不一致，究竟稀释比例是1:1还是1:2？3.查阅其它标准，GB29696-2013 《食品安全国家标准 牛奶中阿维菌素类药物多残留的测定 高效液相色谱法》中有如下描述：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/01/201601271638_583711_1627156_3.jpg参考GB29696-2013的描述，个人认为三氟乙酸酐稀释比例应该为1:2，农业部781号公告-5-2006的4.4.3和4.4.4的稀释比例1:1应该笔误。诸位大大意下如何，不妨讨论一下

[align=center][size=21px]安徽皖仪[/size][size=21px]DFC704[/size][size=21px]比例稀释装置使用心得[/size][/align][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/11/202311011822005551_7090_3389662_3.png[/img][size=16px]印象中[/size][size=16px]安徽皖仪是[/size][size=16px]一家[/size][size=16px]较大的[/size][size=16px]做实验室检测设备的公司，见过的[/size][size=16px]产品[/size][size=16px]有高效液相色谱仪、离子色谱仪、原子吸收分光光度计等，其中高效液相色谱仪和离子色谱仪很多年前就见过，展会上也经常能看到，第一感觉就是外观很好看。[/size][size=16px]不知道从那一年开始，市场上也慢慢开始能看到[/size][size=16px]安徽皖仪的[/size][size=16px]仪器有在线监测检测仪器，环保监测检测仪器了。[/size][size=16px]近期使用的一款[/size][size=16px]安徽皖仪的[/size][size=16px]DFC704[/size][size=16px]比例稀释装置[/size][size=16px]，也是有点特点，最明显最主要的就是特点是小，属于便携式类的仪器。[/size][size=16px]这款仪器和其它仪器另一个不同的地方就是它的显示屏在仪器的正上方，而不是前面板。仪器在前面板上有一个悬浮式流量计，电源插座也在前面板上，这些都是和别的厂家或以往仪器有很大的不同。[/size][size=16px]这款仪器就是[/size][size=16px]体积[/size][size=16px]小，[/size][size=16px]重量轻，[/size][size=16px]方便搬用，适合应急检测或现场例行检测，可与应急检测设备或便携式设备配套使用，当然和在线仪器、站房仪器、实验室仪器配套使用也完全没问题。[/size][size=16px]带触摸屏大显示器，显示清晰，触摸操作方便。它有些[/size][size=16px]功能一般，没那么大，[/size][size=16px]比如[/size][size=16px]受体积和结构的限制，只能接[/size][size=16px]一[/size][size=16px]路标气和稀释器，[/size][size=16px]换气时只能把原来气的管路卸下来换成要用的气的管路，这一点不是很方便。不过只[/size][size=16px]接[/size][size=16px]一[/size][size=16px]路标气和[/size][size=16px]稀释器[/size][size=16px]也能满足很多使用要求，很多现场也就检测一种气体。在说现场换[/size][size=16px]一[/size][size=16px]下气也就[/size][size=16px]拧[/size][size=16px]几个接头，也没多麻烦。[/size][size=16px]这种仪器价格也较便宜，专业性和针对性较强，与特定仪器搭配或用在特定条件下还是比较适用的，也算一种不错的仪器。[/size]

英蓝技术之三：英蓝稀释1、英蓝稀释的作用在样品浓度过高时，我们可以将样品稀释之后再通过超滤单元或者渗析单元，实际上，稀释的这个步骤也可以交给英蓝技术来完成。另一个方面，对于实测的数据变化过大的样品，我们也很难组织实验，例如，对于一批样品来说，其待测离子的浓度差相差巨大，数据点很可能并不落在标准曲线之上。如果通过人为的判断，然后再对每个样品进行不同倍数的稀释，会面临大量的人工劳动和值守判断，自动进样器将毫无用武之地。此外，如果是手工做稀释的话，经常需要用到容量瓶，而容量瓶的彻底清洗是非常困难的，稍有不慎就会造成污染，很多方案利用自动进样器上的蠕动泵来实现稀释，即向每个样品位加入一定量的溶剂；或者在自动进样器与色谱仪之间加入一个缓冲的单元，利用蠕动泵向缓冲单元中分别加入样品和溶剂，从而达到稀释的目的。这种通过蠕动泵完成的稀释常常精度不够，而且需要在一个自动进样器上集成多个蠕动泵并分别控制，管路复杂且难于清洗，因此限制了其应用的范围。英蓝稀释采用了完全不同的方法，英蓝稀释的加液过程并不是通过蠕动泵完成的，而是通过专门的Dosino加液单元来完成。Dosino加液单元可以看做是一个固定式、多通道、连续流、无交叉污染的精密配液器，其精度可以达到移液量的万分之一，正是有了Dosino的帮助，使得稀释的过程可以完全做到精确、无误。2、英蓝稀释的操作过程：1）Dosino加液单元分别将样品和溶剂按照比例加入到英蓝稀释单元中2）英蓝稀释单元对样品和溶剂进行充分的搅拌混合3）进样测量4）测量的同时进行逻辑判断，根据信号是否落在标准曲线的范围内判断理想的稀释的倍数并自动确定是否进行二次稀释或进样测量5）自动排空英蓝稀释单元并清洗3、英蓝稀释应用实例脱硫废水经英蓝稀释后检测淋洗液：NaHCO3/Na2CO3: 1.0/3.2 mM自动稀释100倍检测，20μl进样英蓝稀释实例1 Cl 1896 ppm2 NO3 362 ppm3 SO4 1341 ppmhttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/12/201412111117_526682_312_3.jpg

[b][i]液相色谱的饭量？是指进样量吗？液相色谱进样量不是20μL吗？还用问？[/i][/b]是的客官，题目问的就是“液相色谱的进样量能有多大？”但是，这个问题是不严谨的。因为问这样的问题就相当于问“人的饭量有多大”一样，没有答案——人的饭量跟具体某个人的身材、身体状况、喜不喜欢吃米饭有关，还跟这碗米饭怎么煮有关：一勺子没加水的干米可以噎死人，一比一加水煮成的饭能吃两碗，一比九对水煮成的稀饭吃三、四碗没问题。那对于液相色谱来说，进样量除了跟色谱柱的尺寸、柱效、目标物与色谱柱的匹配度、梯度初始比例有关，也跟样品怎么“煮”成的有关：以反相色谱为例， 100%有机相（强溶剂=干米），50%有机相（弱溶剂=水，50%有机相=饭）和10%有机相（稀饭）的进样量是不一样的！相同色谱柱，进样溶剂不同，允许进样量不同的根本原因是溶剂效应：溶剂效应本质是大体积的强溶剂携带着目标物进到色谱柱后将取代流动相形成一个独立的液段，这一液段对目标物有很强的携带能力，且强溶剂液段在色谱柱中几乎没有保留，最终目标物被强溶剂拖带拉宽，形成很长的前延峰，甚至有一部分目标物被强溶剂脱裂跟随其一起在死时间出峰（图1A）。如果有一个方法，可以把强溶剂快速稀释成弱溶剂，是不是可以提高进样量？岛津设计了一种新的在线稀释技术，其原理如图1B，配置如图2：[img=图1.在线稀释技术的原理,640,330]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/05/201705142050_01_3214098_3.jpg[/img] 图1.在线稀释技术的原理[img=,640,202]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/05/201705142050_02_3214098_3.jpg[/img]图2.在线稀释技术仪器配置在线稀释技术将强溶剂与高比例的弱溶剂通过高效混合器瞬间稀释成一个90-95%的弱溶剂，再注入到色谱柱，因为弱溶剂无法推动目标物往前移动，此时目标物将在柱头聚焦，待目标物全部聚焦在柱头，再提高强溶剂比例，使分析物分离得到尖锐对称的色谱峰。[b]那这个快速煮粥技术……不，这高大上的在线稀释技术有什么用？在线稀释技术的应用1——[b]大体积水的直接进样[/b][/b]在线稀释技术最初被应用在大体积水样的直接进样分析中：大部分的普通液相色谱柱是不允许100%水样直接进样的，因为其硅胶基质容易被水解离形成不可逆损坏。使用在线稀释技术可以在大体积水进样的同时加入小比例的有机相（5%或10%），使其在线形成液相色谱可接受的进样溶剂。图3为1mL水直接进样分析十种抗生素得到的色谱图，全程自动化运行，灵敏度高、精密度好。[b][img=,496,351]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/05/201705142118_01_3214098_3.jpg[/img][/b]图3. 大体积进样在线分析系统用于水中抗生素的直接检测[b]在线稀释技术的应用2——大体积有机相的直接进样[/b]大部分的样品前处理都包括强溶剂的萃取或强溶剂的洗脱定容为终结——因为强溶剂对目标物的溶解度高。然而大体积的强溶剂直接进样很容易噎死色谱柱。用我们的在线稀释技术可以完美解决：利用在线稀释大体积分析系统直接进样分析200μL乙腈白菜提取液中24种农残，得到色谱峰尖锐对称，方法精密度优异，灵敏度大大提高。图4为本系统与普通超高效液相色谱系统的谱图对比，可见左图200μL进样溶剂在普通超高效液相色谱系统有非常严重的溶剂效应，而在右图在线稀释大体积系统中峰型尖锐对称，灵敏度大大提高。[b][img=,640,233]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/05/201705142119_01_3214098_3.jpg[/img][/b]图4. 大体积进样分析系统用于白菜中多种农残的高灵敏检测；Qisheng Zhong, et al. Journal of Chromatography A, 2016, 1442, 53-61[b]在线稀释技术的应用3——双步稀释SPE-UHP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS[/b]大体积进样量有可能会带来一个问题，即基质杂质增加，影响定量准确度。固相萃取SPE是一种有效的样品富集和除杂手段，广泛应用于食品、环境或生物样品的前处理。但手工操作的离线SPE存在操作繁琐复杂、耗时、重现性差等缺点，而在线SPE-HPLC可以部分解决以上问题。目前的在线SPE-HPLC系统一般分为两步进行，第一步是富集+除杂质，第二步是解吸+分离。见图5所示。该系统通常由两个流路连接一个六通阀组成，萃取柱连接在六通阀上。第一个流路（虚线部分）是提取和富集，另一个流路（实线部分）是样品的解吸和高效液相色谱分离。分析开始时，样品由自动进样器导入，随后被液相泵推动通过SPE柱完成目标物的富集（弱保留杂质流经SPE柱而无保留）。然后切换阀门，SPE柱被切换到两个色谱泵和色谱柱之间，流动相A和B兼任解吸液，将目标物从SPE柱上解析下来并随后进入色谱柱进行分离分析。[img=,640,303]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/05/201705142119_02_3214098_3.jpg[/img]图5.在线SPE系统常见的配置和流路构造然而，这个系统有几个缺点：首先解吸分离步骤中，SPE柱连在两个泵和色谱柱之间，这意味着只能耐受常压的SPE柱要承受和高效液相色谱柱相同的压力；其次，如果使用与这个SPE柱相匹配的常规色谱柱，通常直径为4.6mm，最优流量为1mL/min，超出了ESI源离子化承载的流量，因此需要通过降低流速或柱后分流等手段减少ESI负荷，最终导致方法灵敏度下降；第三，流动相A和B兼任解吸液和分离溶液，在大多数情况下，最佳解吸溶液与最佳流动相不是同种溶液，最终导致解吸效率下降或峰展宽；最后，样品为生物样品或高比例强溶剂萃取液时，在进样前需要用弱溶剂离线稀释，虽然离线稀释即耗时又间接减小了进样浓度，但非常有必要：一是将目标化合物与基质脱附（如药物与蛋白质的脱附）；二，将高比例强溶剂稀释为高比例弱溶剂，以提高过柱过程中在萃取柱上的保留。为解决以上缺点，岛津设计了双步稀释SPE-UHP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS在线分析系统，其配置和流路设计见图6。[img=,640,411]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/05/201705142119_03_3214098_3.jpg[/img]图6. 双步稀释SPE-UHP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS在线分析系统的硬件配置和流路设计；专利号CN103940941B[b]这个系统有三个分析步骤：[/b]（1）第一步是样品的稀释和提取。样品通过自动进样器直接注入系统，通过泵D稀释溶剂推送进入高效混合器1，样品被在线稀释为弱溶剂。然后稀释液加载到固相萃取柱完成目标物的富集及杂质的去除。（2）当富集除杂完成后，切换阀1，进行目标物的解吸和捕获。在这一步中，泵C推送最优的解吸液到固相萃取柱，目标物被解吸液解吸并移动经过500μL定量环，调整分析方法至绝大部分目标物捕集到定量环1中，切换定量阀进入第三步。（3）第三步是解吸液的柱前稀释，以及进行超高压的样品分离分析。柱前稀释的原理即为此前提到在线稀释，可即时将解吸液稀释为90%以上的弱溶剂，然后才进入超高压液相色谱柱。此时弱溶剂完全没有洗脱能力，因此目标物将在色谱柱头进行聚焦。之后改变有机相比例，实现梯度洗脱，得到尖锐的色谱峰形。在此过程中实现了解吸液的柱前稀释、超高压的色谱分离。此时超高压色谱柱使用的是最优流速，且无需分流，与质谱完美匹配，提高分析的灵敏度。[b]该在线系统相对于普通SPE-HPLC系统有以下优点：[/b]（1）实现萃取前样品的在线稀释，免除离线稀释的手工误差；（2）破除分离色谱柱的局限性，可以使用UHPLC高压柱，分离条件与SPE萃取条件相互独立，与ESI质谱相匹配；（3）独立解吸泵推送解吸液：可以使用最优解吸条件，并具有解吸效率最高，解吸时间最短，解析液体积最小等优点；（4）解吸溶剂的截获&切换：在解吸条件最优的条件下，使用500 μL定量环（可随SPE尺寸调整），确保解析液全部被截获；定量环还起到压力过度作用，SPE柱不与UHPCL柱串联，全程处于低压状态；（5）大体积解吸溶液的在线稀释，实现柱头聚焦和有效UHPLC分离。我们用这个系统先后应用于植物提取液中三种植物激素和血浆样品中十种抗精神病药的直接检测，得到了满意的结果：（1）双步稀释SPE-UHP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS在线分析系统用于植物提取液中植物激素的直接检测[img=,640,210]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/05/201705142119_04_3214098_3.jpg[/img]图7. 双步稀释SPE-UHP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS在线分析系统用于植物提取液中三种植物激素的直接检测；Qisheng Zhong, et al. Journal of Chromatography A, 2014. 1359: 131-139.（2）双步稀释SPE-UHP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS在线分析系统用于血浆中十种抗精神病药的直接检测[img=,640,475]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/05/201705142120_02_3214098_3.jpg[/img]图8.双步稀释SPE-UHP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS在线分析系统用于血清中十种抗精神病药的直接检测； Qisheng Zhong, et al. Journal of Separation Science, 2016, 0,1-9.由以上应用实例我们可以看到，使用岛津独有的在线稀释技术，可以大大提高超液相色谱的饭量，不但能提高灵敏度，而且能够应用在在线分析系统，实现目标物的富集和杂质去除，得到满意的分析结果。（转载于：中国岛津）