程序冷冻仪

p　　精确认识细胞当中的大分子结构对于理解它们的功能至关重要。Amunts等人利用冷冻电镜获得线粒体核糖体大亚基3.2埃的分辨率结构，还有最近利用冷冻电镜获取的其他一些高分辨率结构，这些成就预示着分子生物学研究的新时代，获取近原子分辨率的大分子结构将不再是X射线晶体学和核磁共振的特权。/pp style="text-align: center "img alt="" src="http://img1.17img.cn/17img/old/NewsImags/images/2014912171159.jpg" style="width: 600px height: 350px "//pp　　图：利用冷冻电镜获得的近原子分辨率结构：(A)酵母线粒体核糖体大亚基，分辨率3.2 埃。(B) TRPV1离子通道，分辨率3.4 埃。(C)Fsub420/sub-还原[NiFe]氢化酶，分辨率3.36埃。注：该图并不是按比例绘制的。/pp　　核糖体是古老的，大规模的蛋白RNA复合物，它将线性遗传密码翻译成三维蛋白质。线粒体——半自主细胞器，为细胞提供能量，拥有它们自己的核糖体，这一点和细菌非常类似。许多抗生素，如红霉素，通过阻止细菌的核糖体翻译机器来抑制细菌的生长。当设计新的抗生素，不能让他们同时阻断线粒体核糖体很重要。因此，认识这两种核糖体的详细结构是很有价值的。其他核糖体的结构已经通过X射线晶体学确定。Amunts等利用冷冻电镜确定了线粒体核糖体的高分辨率结构，这在不到一年前，很少有人会想到可能实现。/pp　　不用晶体而能够做到这一点无异于是一场革命。主要是因为采用了新的探测器——具有前所未有的速度和灵敏度的直接电子探测器。直接电子探测器能够直接检测电子，而不是需要先将它们转换成光子，然后再转化为光电子探测进行，目前广泛使用的CCD(电荷耦合器件)相机就是这样，但它们的分辨率不是很好。照相胶片从工作原理上来说，高分辨率成像效果应该更好，但它很难和越来越重要的快速读出电子速度及高数据吞吐量相兼容。/pp　　大约10年前，Henderson和Faruqi意识到，应该有可能设计出一种结合了CCD相机和胶片优点的直接探测电子的传感器。他们和两个竞争团队研发的探测器，采用了和大多数手机中的摄像头芯片基本相同的有源像素传感器技术。然而，手机的芯片不能用于电子显微镜，因为强烈的电子束会瞬间破坏它们。因此，首先探测器必须能够抗辐射。第二，探测器所需的像素要大很多，以防止富含能量的电子一次激发多个像素。第三，摄像头采用的芯片必须非常薄，完成每次读出电子160万像素，否则电子散射将会使图像模糊并降低分辨率。目前传感器的厚度大约是一张纸厚度的一半。/pp　　冷冻电镜只需要少量的样品，因此那些无法分离得到大量样品，利用X射线晶体学方法进行分析的物质，现在可以利用冷冻电镜得到高分辨率结构。这同样适用于不容易结晶的非均相样品或柔性复合物，因为不同颗粒或构象的物质的冷冻电镜图像在图像处理阶段很容易分离开。/pp　　新的检测器提供了另一种决定性的优势：当电子束撞击薄的、不支持冷冻的样品时，它们的快速读出能够补偿小的不可避免地移动。在新的相机问世前，由于电子束诱导移动引起的模糊是一个看似不可逾越的问题。现在，通过快速连续拍摄，可以得到一个区域的数十张图像，并且电子束诱导移动被检测到并反转在电脑上。这种去除模糊的影响戏剧性的和天文学哈勃望远镜相类似，尽管在这两种情况下引起模糊的原因是不同的。/pp　　新的相机也促使了低温电子断层扫描成像的重大突破，低温电子断层扫描能够得到全细胞、细胞片、或细胞区室的三维图像，如线粒体。利用断层成像识别分子特征，采用标准CCD相机甚至已达到亚纳米细节，新的探测器问世也必然给断层成像研究带来巨大的变化。/pp　　在新相机问世的同时，强大的极大似然图像处理程序也被开发出来。这些程序定义可靠客观的标准，来对几万或几十万个的单粒子图像进行平均处理，为的是要实现高分辨率。先进的检测器和软件相结合，获取的冷冻电镜结构，在相同的标称分辨率下，其清晰度和map definition比采用X射线晶体学解析的结构要好，因为在冷冻电镜图像中包含着高质量的相位信息。/pp　　冷冻电镜的分辨率革命是否意味着X射线蛋白质晶体学时代即将结束?当然不是。在可预见的将来，分子量小于100kD的小蛋白，分辨率达到2 Å 或更好将依然是X射线晶体学的领域。但是对于大的，易碎的，或者柔性结构蛋白(如膜蛋白复合物)，它们很难形成晶体，但却在生物医学中起着关键的作用，新技术将对此带来重大突破。在未来，对分子量大、已知的蛋白复合物，如核糖体，进行结晶将可能不再是必要的。相反，它们的结构可以从容并迅速的通过冷冻电镜来确定。这真是激动人心的时刻。（编译：秦丽娟）/pp 原文检索：a href="http://www.sciencemag.org/content/343/6178/1443.short"http://www.sciencemag.org/content/343/6178/1443.short/a/p

骨头、塑料、生物、植物，这些商检、质检、高校等检测机构最常见样品您处理好了吗？处理后您的样品变性了吗？前处理的结果满足后续检测的需要了吗？您想让处理过程更简单吗？ 您希望一款仪器能一次解决以上所有问题，并能让样品前处理的过程更简单更安全吗？ 答案就是2009年RETSCH推出的新型研磨仪——全自动冷冻研磨仪cyomill。 她能轻易为您处理各类软性及中硬性材料的样品，特别对于塑料等热敏性材料，与cryomill更是绝佳的搭档。因为cryomill有专为冷冻研磨设置的一套智能系统！ 全自动冷冻研磨仪cryomill 现代化的设计外形让人眼前一亮：一个研磨平台，一个平衡平台；特殊接口与液氮罐相连；透明保护盖，可视研磨过程；图形显示菜单，令操作更简单，研磨程序尽在掌握之中。 利用高速撞击的球磨原理对样品进行粉碎，振动频率最大可达25HZ，能量大，可在极短的时间得到极高细度的样品，结果还可用于光谱分析样品制备。并且研磨过程始终处在-196℃液氮中，保证样品绝不变性。 突破样品前处理史上最先进的技术，cryomill可以设置程序，控制整个研磨过程，根据样品的性质及数量你可以设置预冷却时间、研磨频率和研磨时间、冷冻研磨循环次数等。仪器运行时，您只通过图形显示的面板就可以知道研磨所处的阶段，所以在整个研磨过程中你都无需与液氮接触，避免了手动操作的繁琐和危险。 每一个细节，cryomill都为您设想周全：智能系统可以储存9组参数，简化了您的实验室工作；配套液氮罐autofill自动进气功能；多种研磨配件可供选择，根据您的实际需要可以选择25ml、35ml、50ml研磨罐，选用适配器使用4个5ml 的研磨罐。 以韧性的多糖为例，使用全自动冷冻研磨仪cryomill将多糖冷冻2分钟，研磨1分钟，设置3个循环，研磨结果小于100um。 研磨前后的多糖对比 除了低温冷冻研磨之外，cryomill依然可以进行常温的干磨和湿磨，例如对纺织品、PCB板、土壤、矿石等软性、中硬性和硬性样品都能达到要求的粉碎细度。 金属矿样用cryomill常温研磨5分钟，出样尺寸小于150um。 研磨前后的矿石对比 如此智能又方便的仪器您怎能错过，记住RETSCH,记住全自动冷冻研磨仪cryomill——低温粉碎技术的新里程碑。 为让RETSCH的产品帮助到更多的实验室人员，RETSCH在推出的新品的同时举办全球客户回馈活动——”WE R PREPARED”, 登录www.retsch.cn 参与答题您就有机会参加RETSCH全球旅行，选择拉斯维加斯冒险之旅或者瑞典冰雕旅馆的非凡体验，或者直接赢取现金5000.00欧元！ 关注RETSCH, 关注2009！

程亦凡，美国加州大学旧金山分校（UCSF）教授、霍华德休斯医学研究所研究员。早年学习物理。1996年，在获得物理博士学位5年后，他转行进入结构生物学领域。2013年，他和合作者第一个用单颗粒冷冻电镜方法，将膜蛋白结构解到了近原子分辨率（3.4埃）的水平。迄今为止，程亦凡已在生命医学顶尖期刊上发表论文及综述文章达100多篇，近20篇在Nature、Cell、Science上发表。　　然而相比绝大多数成功的科学家来说，程亦凡是人到中年才获得普遍认可。2006年，已40多岁的程亦凡才刚刚做到助理教授，也许是加州大学旧金山分校年纪最大的助理教授。　　近期，赛先生就他的学术经历、研究课题、对结构生物学的贡献以及冷冻电镜(cryo-EM)发展趋势等问题专访了程亦凡博士。　　程亦凡　　赛先生：可不可以回顾一下你的研究历程？　　程亦凡：我情况和经历可能比较特殊。我本科学的是物理。1987年刚开始在武汉大学物理系读硕士研究生时，看到当时第一篇关于准晶体发现的文章，非常激动。因为当时电镜是研究准晶体结构最有效的手段，于是决定加入王仁卉老师课题组学习电子光学理论和电镜实验技术。博士研究生的研究工作是在中科院物理所李方华老师指导下进行的，也是从事电子光学，成象理论和高分辨电镜的理论和实验技术的学习、研究和应用。博士毕业之后，我先后在挪威和德国做博士后，继续从事材料科学方面的电镜研究。　　1996年，我转行到生物学领域。之后分别在美国和日本继续做博士后，分别在Ken Taylor和藤吉好则实验室学习冷冻电镜，研究二维晶体和膜蛋白结构。1999年底到哈佛医学院，加入Thomas Walz实验室。2003年参与解一个水通道的膜蛋白（AQP0）的结构时，获得了1.9埃的分辨率。直到2015年为止，这也还是冷冻电镜解的分辨率最高的一个结构。 2006年，我到加州大学旧金山分校(UCSF) 做助理教授，开始了自己独立的实验室工作。2010年前后开始和David Julius 实验室合作研究TRPV1（一种在疼痛和热知觉中起中心作用的蛋白质）的膜蛋白结构。　　自从1996年进入冷冻电镜和结构生物学领域以来，我就一直对冷冻电镜技术非常感兴趣。UCSF其它几位教授，包括John Sedat和David Agard，也都是这个领域的先驱者。David Agard教授在上世纪90年代初期就参与了第一代CCD相机的研制。他在很多年前就预见到相机开发对电镜技术的重要性，也一直从事这方面的研究。在直接电子探测器(Direct ElectronDetector，一种直接电子探测器件，能够直接检测电子，而不需要像传统CCD相机那样先将电子转换成光子，然后再由CCD记录光子信号）研发的早期，就预见到了单电子计数的重要性。2009年，我们得到美国国家自然科学基金(NSF)的资助，跟Lawrence Berkeley国家实验室和 Gatan公司一起合作开发单电子计数相机。David Agard是PI，我是co-PI。我主要负责相机的后期检测和应用开发。　　经过几年的努力，在2013年初，我们将TRPV1通道的结构解析到8埃的分辨率。随着我们在电镜技术上的突破，特别是单电子计数相机和我们自己开发的图象飘移校正技术的应用，我们很快将它的分辨率提高到了3.3-3.4埃。获得TRP通道的高分辨率结构实际上花了四年多的功夫，不是几个月时间一蹴而就的。这也是天时地利人和的结果。　　赛先生：从你刚才叙述的研究经历来看，你更多参与的是相机方面的工作么？　　程亦凡：也不是。我对膜蛋白一直很感兴趣，但因为我不擅长膜蛋白的二维结晶法，而当时单颗粒方法还无法用来研究较小的膜蛋白，所以有几年中断了膜蛋白研究。在我的实验室的初步建设走上轨道后，就又开始研究新的单颗粒方法，用来研究较小的膜蛋白结构。实际上，2009年时，我的实验室已把很大一部分精力转到膜蛋白领域。　　在电镜领域，我们自己有多年的技术积累，在很多领域一直都很领先。2003年，我做过的转铁蛋白复合物在当时是最小的，分辨率也是最高的。2008年时，我们解一个700kD的蛋白酶体的结构到5埃的分辨率，观察到一个10个氨基酸大小的多肽与蛋白酶的结合。这些在当时都是领域里领先的成果。　　赛先生：有资料显示，你是最早成功将冷冻电镜应用于解析蛋白结构的。可以这么理解么？　　程亦凡：冷冻电镜有三四十年的历史。最早用冷冻电镜做膜蛋白是Richard Henderson等人。1975年时，二维晶体膜蛋白结构分辨率已达到了7-8埃左右。Joachim Frank不仅是单颗粒电镜的开创者，可能也是最早用这种方法解析膜蛋白结构的先行者。第一个用单颗粒冷冻电镜方法做到原子分辨率并解出未知蛋白结构的人是周正红，他在2010年用单颗粒冷冻电镜方法解出了一个以前结构未知的二十面体病毒结构。更严格地说，我实验室是第一个用单颗粒的方法，而不是结晶的方法，将膜蛋白结构解到了近原子分辨率。　　赛先生：2013年你的成果出来之后，结构生物学家集体转向了冷冻电镜，在此之前主要是用X射线衍射法和核磁共振来研究小分子结构。为什么很多人会意识到冷冻电镜是一个更好的方法？　　程亦凡：它的确整个改变了结构生物学的前景。结构生物学的三大技术包括X光晶体学、冷冻电镜以及核磁共振。长期以来，冷冻电镜是这三项技术里最弱的一项。因为它的分辨率一直无法提升。这跟相机是有密切关系的。电子直接探测相机出现以后，分辨率一下子就提高了，但是当时还是没有引起很多人的重视，尤其是做晶体学研究的人，因为在他们看来，核糖体可以结晶，蛋白酶体也可以结晶。　　而TRP通道整个蛋白家族里还没有任何蛋白的晶体结构得到解析。十几年来，世界上很多晶体学实验室都在这个上面花费了大量的精力，却没有结果。TRPV1单颗粒电镜结构的获得给人们带来了很大的冲击，用X光晶体衍射法无法得到的晶体结构，冷冻电镜不需要结晶却做出来了。很多人开始重新重视起这个领域，包括施一公和颜宁，据说他们实验室的大部分人现在都在做冷冻电镜。　　赛先生：你2009年的工作中，是哪一部分产生了重大突破使得冷冻电镜整体上有了质的飞跃呢？　　程亦凡：从技术上说，有两个方面。其一是相机的突破。当时除了Gatan公司，还有另外两家公司（FEI和Direct Electron）也推出了直接电子探测相机。但是我们用到了独特的单电子计数技术。这个技术可以大大提高低分辨率的信噪比。这就使得相机图像的衬度能够提高很多。这是以前没有意识到的。那么这样一来，这个相机真正的优势在于做很小的蛋白。我当时第一个想到的就是做难度最大的膜蛋白。　　其二是计算方法上的改进。美国耶鲁大学的Fred Sigworth 最早在1999年提出将最大似然法（maximumlikelihood）用于处理单颗粒电镜图象。之后经过多个实验室的改进，到Sjors Scheres将这一方法，特别是将最大似然法用于三维构相分类，在他的新程序RELION中进一步完善，使单颗粒电镜图象处理能够将冷冻电镜的图像转变为精细的分子结构，让生物学家们更简单更清晰地看到分子机器。　　很多事情其实也是机缘巧合。 Sjors的程序刚出来的时候并没有很轰动。因为当数据质量不好的时候，Sjors程序的用途是有限的。而我们用的K2相机将图像的质量大大提高了。此时此刻正好遇到Sjors的新程序。这两样东西结合在一起，就变得异常强大了。如果说Sjors程序在三年以前出现，它不会产生那么大的影响。　　很多人说Sjors的程序改变了结构生物学。Sjors Scheres被Nature评为2014年十大科学人物。但他的成功也得益于相机技术的突破。同样，反过来也是一样的，相机的开发让冷冻电镜有一个革命性的飞跃，但是如果光有这个，而没有计算方法上的改进，相机的功能也不会完全展现出来。　　最后，用传统的方法，需要用生物化学的手段将样品提纯到一定纯度，有了用最大可能法进行三维构相分类之后，蛋白晶体即便没有提纯到那个纯度，我们也能解析到很好的程度。　　赛先生：回顾当初，你觉得您最大的贡献是什么？　　程亦凡：我觉得我很幸运。TRPV1文章的的第一作者廖茂富（现为哈佛医学院助理教授）有病毒学的背景。刚来我实验室的时候，他从来没有做过电镜，也从来没有做过计算。他的一个主要的课题，由于各种原因，一直没有大的进展。面对困难，他从来没有放弃过。在长期艰苦的工作中，他积累了很多的经验。也是因为他这种长期的积累，等到了某一个点上，一下子水到渠成。如果当时是另外一个人做这件事情的话，最终可能也能做成，但是不会有那么顺利。　　另一位第一作者，曹二虎（现为犹他大学助理教授），有非常扎实的结构生物学基础和经验，也有多年的TRPV1研究经验。他花了很多年优化TRPV1的表达和提纯。图象飘移校正技术文章的的第一作者是现在清华大学的李雪民教授。他也是中科院物理所李方华老师的学生，有非常扎实的电镜理论和实验基础。他的兴趣一直在开发方法方面，从头到尾参与了相机的鉴定应用程序开发。他是非常聪明的科学家。　　另外，我们在生物化学方面也一直用各种各样的办法来尝试做膜蛋白。如果我们从来没做过膜蛋白，上来直接做TRP通道，我相信也很难做到这种程度。我们也有最好的合作伙伴，UCSF的David Julius 和David Agard, 以及UCSF独特的研究环境。这些都是不可或缺的成功条件。　　我认可自己的一点是，我做的东西，很多都是别人说做不了的。David Agard对我的评价是，这么多年来一直不被教条所束缚，总是去挑战各种极限。这也是我一贯的工作的态度。　　赛先生：当时为什么想到去学电镜？　　程亦凡：我是学物理出身。物理学最令人激动的时候可能是上世纪二三十年代，我们这一代人学物理时就感觉有点生不逢时。1982年，Shechtman第一次发现准晶。当时郭可信先生和张泽、王大能发表了国际上第二篇关于准晶工作的文章。当时我们就觉得一下子跟着进入了一个领域的最前沿，令人非常激动，所以很多人都开始做准晶。我也是因为受此感染，想研究准晶，而去学电镜。但是做了十年以后，就感觉有点枯燥，但不断追求的心态还在。我这时选择转行做生物，也是历史的机缘。苏联解体后，美国停掉了“星球大战”计划，全世界的物理陷入了一种空前的危机之中。很多学物理的人都找不到工作，在那个时候，很多人转去做材料，而我对材料科学兴趣不大，感觉生物对我更有挑战一些，更有吸引力。　　赛先生：因为缺少生物学背景，有没有想到会遇到困难？　　程亦凡：这是肯定的。但是年轻的时候很多想法还是很幼稚的，也不怕难。直到现在我都觉得什么东西都学得会。比如我经常跟学生说：“you can learn anything you want, the only questionis how much you want to learn it.”　　我们对电子显微学的理解要远远超过很多以生物背景做冷冻电镜的人。在当时，我觉得这是我们的优势。我们的弱点是在刚转行时完全不懂生物，更不懂生物化学。但我觉得这些东西都可以学，如果你真想学，一定可以学会。所以也没有什么克服不了的困难。　　赛先生：问一个比较现实的问题，你一直在坚持做自己喜欢的事情，但是很晚才得到认可。你是如何看待这个问题的？　　程亦凡：我1991年博士毕业，做了5年的材料物理博士后。转行做生物时，我对自己说，我最多相当于重新读一个Ph.d，花五年十年学一个东西不算很长时间。那时候的人跟现在不太一样，少了很多浮躁。　　重要的是，我自己很喜欢，没有想过要放弃。我家人也很支持我，跟着我在全世界跑，从来没有过怨言。很多人选择放弃，很大一部分是家庭原因。希望稳定下来，找一份稳定的工作，那么不得不做出选择。　　我从来没有觉得自己比别人晚了很多。我一直觉得自己很幸运。　　赛先生：UCSF对教员的压力是不是没有那么大？　　程亦凡：UCSF的环境非常独特。我2006年才做助理教授。我当时的年纪在国内恐怕是找不到类似的工作的。另外，UCSF很赞赏我这种背景。我当时在美国其他地方找工作，经常碰到的评价是，你是物理学家，不懂生物学。我到UCSF面试的时候，我说我是一个物理学家，当时的系主任接的第一句话是：That’s great, you know things we don’t know。　　这也是我当时选择UCSF的一个主要原因，它给你的支持，不是说给了你多少资源，而是它对待你的宽容。我拿到终身教职的时候，我的这些文章都没有，这个时候他会看个人的潜力。给了我这种环境，却始终没有给过我任何压力。　　赛先生：冷冻电镜突破之后，目前的工作主要在哪一块？今后有哪些让你觉得兴奋的工作？　　程亦凡：当然有。我们实验室主要的工作还是专注在膜蛋白上。我感觉自己越来越像一个生物学家。我并不满足于只解析出结构，还希望能够理解它。所以TRP channel一直是我们实验室的一个主要方向。另外一方面，我也希望方法上能有所提高。比如提高分辨率。我也希望能够把蛋白做到更小，比如到100kDa以下。　　赛先生：有人把你和张益唐老师做了一个对比。因为你们都是1978级的毕业生。这一代人身上有三个特点：坚韧、有榜样的力量来鼓舞、不屈不挠必须把事情做成的心态。　　程亦凡：我看到过这种比较，某种程度上讲也许有一定道理，但也并不完全是。有道理是说，因为我们这代人经历的东西太多，我们经历过文化大革命，也见证了整个国家由改革开放带来的变迁，以及经济和科研上的由弱变强。也许是这些经历造成了我们这一代人身上的这些相似的特点。我想不同的是，我自己觉得我还是比较顺利的，一直都在做我喜欢做的科学，从来没有想过要放弃，所以也没觉得有多难。　　另外，每个人对成功的理解不一样。我觉得自己一直都挺成功的，并不是直到解了TRPV1结构才是成功了。对我来说，2003年发第一篇Cell文章，2006年拿到助理教授的位置，建立自己的实验室，2008年解蛋白酶体到5埃分辩率，到2012年拿到终身教职，和2015年当上霍华德休斯医学研究所研究员，还有我拿到的每一个grant，发的每一篇文章，每一步都是成功。当然也有很多想做而没做成的事，想拿而没拿到的grant，想发而没发了的文章，也有很多想做而没法做或没做成功的实验，等等，等等。这些成功与不成功都不会停在某一个点上，而是还会不停地继续下去。

p　　在深圳市的大力支持下，南方科技大学冷冻电镜实验室即将在南科大校园内落成，并投入使用。/pcenterimg alt="" src="http://www.sustc.edu.cn/upload/images/news/%E7%A7%91%E7%A0%94%E6%96%B0%E9%97%BB/1.gif" height="282" width="500"//centerp/pp　　2017年10月4日三位科学家因为开发并发展了冷冻电镜技术而获得诺贝尔化学奖。南科大在学校发展的战略布局上充分展现了前瞻性，早在2017年6月 10日，冷冻电镜项目就已正式立项，并邀请我国目前最优秀的青年结构生物学家之一杨茂君教授主持。“栽下一棵梧桐树，凤凰就来了”，南科大冷冻电镜实验室主任王培毅教授这样形容实验室对海内外人才强大的吸附力。自项目启动以来，实验室已吸引了来自海内外诸多青年才俊和重量级专家学者的加入。其中包括行业内唯一的中科院院士、我国最早使用冷冻电镜开展生物大分子研究工作的隋森芳院士。今年7月，2017年诺贝尔化学奖的三位得主之一、美国哥伦比亚大学 Joachim Frank教授将应我校陈十一校长邀请到访南科大，探讨开展进一步合作。/pcenterimg alt="" src="http://www.sustc.edu.cn/upload/images/news/%E7%A7%91%E7%A0%94%E6%96%B0%E9%97%BB/%E5%86%B7%E5%86%BB%E7%94%B5%E9%95%9C2%201.gif" height="282" width="500"//centerp/pp　　南方科技大学冷冻电镜实验室拟于今年年底正式挂牌成立，届时将同时举办国际研讨会，几乎所有在冷冻电镜方面的国际著名科学家都将出席，包括另一位2017年诺贝尔化学奖得主、剑桥大学MRC-LMB的Richard Henderson教授。/pp　　冷冻电镜技术改变了许多生物领域的研究方式，使得诸多研究能够快速取得重大突破。冷冻电镜技术已成为结构生物学研究的利器，这项技术克服了生物分子结构解析中的许多难点，被诺贝尔奖官方称为“使得生物化学进入一个新时代”。图像是我们理解一切事物的关键所在，将那些人眼不可见的物体成功地可视化，通常是科研产生突破的基础。 长久以来，人们认为电子显微镜只能用于非活性生物样品的成像，因为电子显微镜的高强度电子束会严重损伤生物样品，是冷冻电子显微技术改变了这一切。现在，研究人员可以将具有活性的生物大分子快速冷冻到液氮温度(-196度)，并在此温度下保持和转移，使样品最大限度保持原来形态。并将那些以前无法看见的生物变化的动态过程实现可视化——这对我们从原子尺度了解生命过程，以及研发药物带来决定性的影响。/pcenterimg alt="" src="http://www.sustc.edu.cn/upload/images/news/%E7%A7%91%E7%A0%94%E6%96%B0%E9%97%BB/%E5%86%B7%E5%86%BB%E7%94%B5%E9%95%9C3%201.gif" height="282" width="500"//centerp/pp　　南方科技大学冷冻电镜实验室拟安装300千伏冷冻电镜6台，200千伏冷冻电镜2台，120千伏电镜2台，共计10台冷冻透射电子显微镜及其它71台/套相关辅助仪器和样品制备设备，全部建成后，将是我国配套最齐全、最先进的冷冻电镜实验室。目前，两台300千伏冷冻电镜已完成安装，进入电镜性能综合调试阶段，预计将于8月开始试运行。一台120千伏电镜将于7月上旬投入使用。据悉，有关冷冻电镜的配置，我校前期作了大量调研工作，包括与实验室科学顾问委员会成员Richard Henderson教授进行了深入探讨，以保证每台冷冻电镜除了拥有一般共性之外，在配置上同时各具不同特性，以适应与支持南科大冷冻电镜实验室在接下来即将开展的一系列世界前沿性基础及应用研究。此外，实验室将积极开展多学科交叉研究，力争在冷冻电镜的软、硬件技术，设备和应用方面取得新的突破，克服冷冻电镜目前操作复杂、控制程序繁琐及应用成本较高的缺陷，实现冷冻电镜的常规应用。并与学校已经建成的X射线晶体学平台、生物质谱蛋白质组学分析平台形成互补，开展国际上最前沿的蛋白质科学研究，为结构生物学、细胞生物学、神经科学，化学、材料科学等领域搭建交叉学科平台。/pcenterimg alt="" src="http://www.sustc.edu.cn/upload/images/news/%E7%A7%91%E7%A0%94%E6%96%B0%E9%97%BB/%E5%86%B7%E5%86%BB%E7%94%B5%E9%95%9C4%201.gif" height="282" width="500"//centerp/pp　　地处粤港澳大湾区核心的深圳是一座新兴科技产业云集的城市，也被人们誉为中国最具有硅谷气质的城市。今年5月26日在深圳举行的“未来论坛X深圳峰会” 上，我校校长陈十一曾指出：和硅谷相比，深圳欠缺的还是基础研究能力，也包括应用基础研究，产业和研究的对接。南方科技大学建设的世界一流冷冻电镜实验室，旨在通过利用这一国际最先进的科学技术之一，大力发展基础科学研究，聚焦重大疾病诊断、新药开发、精准医疗、功能材料研发和基础学科建设等领域，促进深圳新材料、医疗卫生、健康产业和高等教育的发展。同时积极服务于国家战略需求，造福14亿中国人。/pcenterimg alt="" src="http://www.sustc.edu.cn/upload/images/news/%E7%A7%91%E7%A0%94%E6%96%B0%E9%97%BB/%E5%86%B7%E5%86%BB%E7%94%B5%E9%95%9C5%201.gif" height="282" width="500"//centerp/pp　　在新一轮科技革命和产业变革中，中国将创新作为引领发展的第一动力，把科技创新摆在国家发展全局的核心地位，大力实施创新驱动发展战略。在国家重大需求的牵引和顶层设计的指导下，利用冷冻电镜的技术优势，在核心技术和关键领域实现重大突破，对产业升级、经济转型发展产生巨大推力，正是南方科技大学冷冻电镜实验室建立的初衷和目标。/pp style="text-align: right "　　文字：任亦/pp style="text-align: right "　　视频制作：李艺松/pp style="text-align: right "　　摄像：蔡秉伦 黄立斌/p

冷冻饮品是以饮用水、食糖、乳制品、水果制品、豆制品、食用油等中的一种或多种为主要原料,添加或不添加食品添加剂,经配料、灭菌、凝冻而制成的冷冻固态制品。近些年来,微生物超标依然是冷饮食品质量安全的主要问题之一。　　质监局有关专家介绍，每年质监部门都不定期对市场上的冷饮进行抽查，每次抽查的结果都没有100%达到合格。问题主要集中在生产、运输和销售的环节上。菌落总数、霉菌、酵母菌等微生物超标是冷饮常见的问题。菌落总数超标，冷饮爽口不爽心夏天吃冷饮固然爽口又爽心，吃到不合格产品，一只冰糕下肚，等于吞下去不计其数的霉菌、酵母菌。　　存在的主要问题是细菌菌落总数和大肠菌群超标。细菌菌落总数的超标可能是生产过程中设备的通道、包装容器材料、空瓶、瓶盖消毒不彻底，生产工艺落后所致，因此必须加强生产工具、容器机械清洗消毒和机械设备的清洗消毒，改进落后的生产工艺，提高机械清洗消毒和机械化的生产能力。大肠菌群超标可能与水源直接或间接受到污染，从业人员个人卫生习惯较差有关，为此应加强法制教育，严格执行《食品卫生法》和国家对冷饮食品的卫生管理办法，坚持对从业人员体检和冷饮卫生知识的培训。应加强冷饮食品卫生预防性监督管理力度和卫生知识宣传教育的深度，把重点放在防止微生物的污染和个体私营单位的管理。　　冷饮在加工过程中，需要经过复杂的过程，对调料的配置、配料的粉碎等等，都需要经过较长的过程，且加工的过程中，冷饮直接裸露于空气之中的时间较长，容易造成菌落数超标和二次污染的问题，在包装之前，需要不间断的对于整个加工过程进行消毒灭菌。　　所以，需要找到一种正确实用高效的消毒灭菌方式才能很好解决冷饮菌落总数超标问题。　　动态消毒灭菌方式能够很好地应用于冷饮的加工过程，在包装之前，能够对于整个生产环境进行不间断消毒灭菌。据上海康久消毒技术有限公司工程师周立法介绍，这种消毒灭菌技术的杀菌原理是通过特殊的脉冲信号使得NICOLER发生腔产生逆电效应，生成大量的等离子体。在负压风机的作用下，污染空气被抽进发生腔内，带负电细菌被分解击破，整个杀菌过程只需0.1秒，再经药物浸渍型活性炭等组件二次杀菌过滤后，受控环境保持在“无菌无尘”标准。由于在对车间消毒时，人可同时在车间内工作，所以，该杀菌技术也可称作为“食品动态杀菌机”。　　定期清理奶垢能有效的防止微生物的滋生，而在清理奶垢时应注意空气杀菌，可大幅度减少微生物超标的可能性。

随着科技的不断进步，全自动冷冻研磨仪在科研领域中的应用越来越广泛。这款仪器采用先进的冷冻技术，能够快速、高效地研磨各种冰点以下样品，为实验研究提供了极大的便利。本文将详细介绍全自动冷冻研磨仪的构造、功能、使用方法以及优势，让读者了解这款科研利器的强大作用。一、仪器构造及原理全自动冷冻研磨仪主要由研磨室、研磨棒、样品杯、制冷系统、驱动系统和控制系统等组成。其主要工作原理是利用高速旋转的研磨棒对样品进行冲击和研磨，同时制冷系统将样品维持在较低的温度，以保持样品的物理特性。二、功能及应用领域全自动冷冻研磨仪具有多种功能，主要包括冷冻研磨、组织破碎、细胞破碎等。广泛应用于冰点以下样品的精细研究，如生物医药、化妆品、食品等领域。通过这款仪器，科研人员可以轻松获取高质量、高纯度的样品，为后续的实验分析提供可靠的原料。三、使用方法及注意事项使用全自动冷冻研磨仪使用方法及注意事项,需要按照以下步骤进行操作：准备样品：选择合适的样品杯，将待研磨的样品装入其中。冷冻样品：将样品杯放入制冷系统中，将样品冷却至所需温度。安装研磨棒：取出冷却好的样品杯，将研磨棒安装到研磨室中。开始研磨：将样品杯和研磨棒一起放入研磨室中，关闭研磨室，启动研磨程序。收集样品：研磨完成后，取出样品杯，收集研磨好的样品。在使用过程中，需要注意以下事项：确保样品杯和研磨棒的清洁度，避免污染样品。根据不同的样品性质选择合适的研磨程序和参数，避免样品受损。在研磨过程中，要保持制冷系统的正常运行，确保样品温度维持在所需范围内。研磨完成后，及时清理研磨室和研磨棒，保持仪器的清洁。四、全自动冷冻研磨仪的优势高效率：全自动冷冻研磨仪能够快速、高效地研磨各种冰点以下样品，大大提高了实验效率。高质量：通过精确控制研磨程序和参数，可以获得高质量、高纯度的样品，为后续实验提供可靠的原料。高安全性：全自动冷冻研磨仪具有完备的安全保护装置，能够确保实验过程的安全性。适用范围广：该仪器广泛应用于生物医药、化妆品、食品等领域，具有广泛的应用价值。全自动冷冻研磨仪作为一款先进的科研利器，为冰点以下样品的精细研究提供了极大的便利。通过这款仪器，科研人员可以获得高质量、高纯度的样品，为后续的实验分析提供可靠的原料。同时，全自动冷冻研磨仪的高效率、高质量、高安全性和广泛适用性等特点也使其在科研领域中具有广泛的应用价值。

细胞里面的生命活动井然有序，每一个部分都有其特定的结构，承担不同的功能。生物大分子则是一切生命活动的最终执行者，它们主要是核酸和蛋白。核酸携带了生命体的遗传信息，而蛋白是生命活动的主要执行者。自现代分子生物学诞生以来的半个世纪里，解析和分析生物大分子的结构、进而阐释其功能机制一直都是现代生命科学的核心问题之一。　　事实上，一切自然科学都涉及物质结构及结构间的相互作用为核心的研究方向，天文学研究宇宙、星体等的结构及其相互作用，粒子物理研究物质世界的基本粒子的结构和相互作用，甚至包括应用性很强的材料科学都是以研究新型材料的结构和性质等为核心。结构生物学研究的直接目的是弄清楚生命大分子结构，从而更好地理解生命，理解这个自然界中“逆热力学第二定律”而诞生的奇迹 最终目标是公众通常关心的实用价值。　　像数学物理公式不会直接造出飞机、导弹、计算机一样，蛋白质结构这样的基础研究不会直接转化为人们生产生活的必须物品。比较具体的应用，如药物设计、疫苗开发、医疗诊断和蛋白质分子性能改造(如科学实验或工业生产中酶活性稳定性优化)等是蛋白质结构研究比较容易被大众所理解的一个方向，但却只是其研究价值的一个侧面而已。　　蛋白质结构如同生命科学里的数学公式和物理定律，甚至在以后会充当生命科学里面的“化学元素周期表”，除了帮助发现或设计新药等，它更重要的价值是作为最基础最上游的研究之一，通过影响一切与其密切相关的下游科学和技术，从而改变我们的世界。　　结构生物学最早诞生于上个世纪中叶，它是一门通过研究生物大分子的结构与运动来阐明生命现象的学科，在其发展史上有两个里程碑式的事件，一个是 DNA双螺旋结构的发现，另一个肌红蛋白(Myglobin)晶体结构的解析，这两个事件都是上个世纪最重要的革命性科学进展，均在剑桥MRC分子生物学实验室完成，并且都于1962年获得了诺贝尔奖(一个生理学或医学奖，一个化学奖)。同时它们都是最早使用X射线的方法来解析生物大分子结构，而这个方法在过去半个世纪里，一直占据结构生物学的统治地位。　　在当今结构生物学研究中普遍使用的冷冻电镜，是上个世纪七八十年代开始出现、近两年飞速发展的革命性技术，它可以快速、简易、高效、高分辨率解析高度复杂的超大生物分子结构(主要是蛋白质和核酸)，在很大程度上取代并且大大超越了传统的X射线晶体学方法。　　革命性的冷冻电镜技术　　冷冻电镜并不是这两年才建立的。在蛋白质X射线晶体学诞生大约10多年以后的1968年， 作为里程碑式的电镜三维重构方法，同样在剑桥MRC 分子生物学实验室诞生，Aron Klug教授因此获得了1982年的诺贝尔化学奖。另一些突破性的技术在上世纪70年代和80年代中叶诞生，主要是冷冻成像和蛋白快速冷冻技术。这里面的代表科学家有Ken Taylor, Robert Glaeser和Jacques Dubochet等。　　快速冷冻可以使蛋白质和所在的水溶液环境迅速从溶液态转变为玻璃态，玻璃态能使蛋白质结构保持其天然结构状态，如果以缓慢温和的方式冷冻，这个过程会形成晶体冰，生物分子的结构将被晶格力彻底损坏。低剂量冷冻成像能够保存样品的高分辨率结构信息，确保了从电镜图形中解析蛋白质结构的可能性。与此同时Joachim Frank等则在电镜图像处理算法方面奠定和发展了这项技术的理论基础。由此冷冻电镜的雏形基本建立，总的思路为：　　1)样品冷冻(保持蛋白溶液态结构) 　　2)冷冻成像(获取二维投影图像) 　　3)三维重构(从二维图像通过计算得到三维密度图)。　　该方法为生物大分子结构研究提供了一个和X射线晶体学完全不一样的、全新的思路。但是由于技术方法的瓶颈，在此后30多年的时间里只能做一些相对低分辨率的结构解析工作，在分辨率上一直不能和X射线晶体学比较，甚至一度被嘲笑为”blob-ology“(英文讽刺语，“一坨轮廓的技术”)。冷冻电镜三维重构得到的电子云密度图和原子模型(局部)。张凯供图　　但对于冷冻电镜来说，技术难点远非单纯冷冻。冷冻成像和图像处理算法一直都是瓶颈。从冷冻电镜技术诞生以来的近30年时间里，其一直都有进展，只是相对比较缓慢。　　最重要的革命性事件大约发生在两三年前：一个是直接电子探测器的发明，另一个是高分辨率图像处理算法的改进。MRC分子生物学实验室的两位科学家Richard Henderson和Sjors Scheres在这次革命中起了关键作用(作者注：现代科技革命往往是诸多研究机构若干团队共同参与，此处仅列举关键代表，并且仅从技术角度讨论，不涉及生物学应用)。　　Richard Henderson是探测器方面的先驱，而Sjors Scheres则因他设计的Relion程序而名声大噪，他们由此当选为《自然》杂志2014年“十大科学进展年度人物”。两位科学家一个从硬件，一个从软件将冷冻电镜技术推向了巅峰，将冷冻电镜技术的分辨率推向了新高度。(作者注: Henderson教授的贡献远非探测器一个方面，包括冷冻电镜理论基础、算法、软件，重要生物大分子应用，如曾首次解析视紫红质跨膜螺旋等等方面 早在20多年前，他就通过一系列理论分析，预言了冷冻电镜研究的尺度、分辨率极限、技术瓶颈等等，并且断言：冷冻电镜将超越其它一切技术方法，成为蛋白质结构研究的主导工具，如今这些预言全部应验。)　　和此前使用的CCD相比，新发展的直接电子探测器不仅在电镜图形质量上有了质的飞跃，同时在速度上大幅提高，还可以以电影的形式快速记录电镜图像。这些特性同时也伴随着电镜图像处理方面的重大变革，电镜技术此前在分辨率上的一个主要瓶颈是电子束击打生物样品造成的图像漂移和辐射损伤。有了快速电影记录，我们就可以追踪图像漂移轨迹而对图像做运动矫正和辐射损伤矫正，大大提高数据质量。　　尽管如此，电镜图像处理一直都是一项极具挑战性的任务，主要的问题是冷冻电镜的图像噪音极高、信号极低，而我们的目标是从中提取近原子分辨率的结构信息，这就像在一个机器轰鸣的工厂里监测一只蚂蚁爬行的声音。冷冻电镜科学家就是要完成这项艰巨的任务，并且真的做到了。有了硬件和软件方面的双重提高，冷冻电镜的分辨率目前已得到了极大的提高，可以和晶体学相媲美 并且在其它方面已经大大超越了晶体学。　　主要体现在下面几个方面：　　第一，不需要结晶，研究对象范围大大扩展，研究速度大大提高。对于小分子，比方说无机盐矿物质等自发就能长出晶体，小而且稳定的蛋白质目前来说结晶并不困难，但是这类意义重大的蛋白几乎都已经解析完了，在科学上没有任何重大意义 当今时代，小蛋白已经完全不能满足科学家们强烈的探索欲望，结构生物学研究的对象越来越大，体系越来越复杂，结晶几乎成为不可能的事情，即使能结晶，也不一定衍射，有衍射也不一定能得到原子分辨率结构。　　很多年前，许多蛋白质晶体科学家为了完成一项艰巨的任务，一个课题少则5到10年，多则20年，核糖体从上世纪80年代初首次长出晶体到 2000年左右最终拿到原子分辨率结构整整经历了20年 线粒体呼吸链复合物I从上世纪90年代初研究，第一次报道完整晶体结构大约是20年以后。　　而冷冻电镜方法跳过超大分子复合物结晶难的这层技术屏障，以直接解析复合物的溶液状态的结构为目标。　　现在利用这项技术，在MRC-LMB一周时间就可以解析一个新的核糖体结构 英国皇家学会主席、MRC-LMB结构中心主任 Venki Ramakrishnan 教授，因为核糖体的晶体结构研究而获得2009年诺贝尔化学奖。他的实验室在2014年发表了最后一篇晶体结构文章，此后的文章全部以冷冻电镜为主。哥伦比亚大学有一个非常执着的博士后，研究兰尼碱受体(Ryanodine Receptor)晶体结构长达十年之久，最后放弃了晶体，转向了冷冻电镜技术，同时与清华大学教授颜宁和LMB的Scheres研究组合作，几个月就解决了这个难题，并且达到近原子分辨率。　　第二，样品需求量小，样品制备快，可重复性高。重要生物样品都是非常珍贵的，总体来说是以微克或者最多以毫克来计量，即使得到这点样品，也要花费生物学家几周、几个月甚至更长的时间(大多数时候都需要摸索各种条件使样品处于相对稳定的状态，以便做进一步结构研究)。　　蛋白质晶体一般要求高浓度大体积，没有量变就没有质变。而同样量的蛋白可以稀释以后制备若干冷冻电镜样品，每个样品有成百上千的区域，每个区域有几百个小孔，每一个小孔甚至可以收集多张照片。解析一般蛋白的原子结构需要几万个颗粒，而对于高对称性的样品几千个颗粒就足够。　　第三，可以研究天然的、动态的结构。X射线晶体学研究生物大分子结构的一个主要弱点是无法拿到天然的动态的结构，这是因为研究人员无论如何也无法绕开结晶这个过程。冷冻电镜就是要做这件事情：直接解析天然的、溶液态的、动态的(dynamic)，甚至原位(in situ)的结构，从而理解生命分子如何在空间和时间两个尺度上以活的动态的方式发挥功能。　　晶体学只能尝试不同的条件获得生物大分子某个或者某些固定的状态，而且容易出现晶体堆积引起的不真实相互作用方式。形象地说，冷冻电镜可以制作完整的高清电影，晶体学只能从电影里截屏。　　第四，技术革命还将开启巨大的潜在医疗价值。冷冻电镜技术方法在时间和精度方面的大幅度提高有时会导致不可预测的重大科学和应用价值。比如，活体病毒结构分析如果可以在分钟级别完成，这将有可能转化为潜在的医疗检测手段：从病人体内抽取血样或感染组织细胞，几分钟以后，非常清晰明了地展现病人在细胞内部结构层面的异常状况，甚至给出局部的原子结构图，从而给出精准的治疗方案。这个想法现在可能听起来有点像笑话，或许再过若干年人们就不这样认为了。　　当然冷冻电镜的革命性不仅仅体现在上述四方面，在此就不一一列举。有关冷冻电镜更加详细的介绍，可参见笔者等2010年的中文综述(《生物物理学报》，2010年7月，第26卷，第7期: 533-559)。文章中对未来几年的发展趋势所做的展望，如直接电子探测器的普及、非对称性蛋白复合物近原子分辨率结构解析、冷冻电镜相关计算性能的大规模提升等等，目前绝大多数都在过去的两三年内得以实现并飞速发展。　　华人学者在冷冻电镜领域的贡献　　在冷冻电镜的这场技术革命中，华人科学家功不可没，在某些方面甚至独领风骚，做出了诸多重大成果。　　加州大学旧金山分校(UCSF)的华人科学家程亦凡教授在2013年底，首次利用冷冻电镜技术解析近原子分辨率膜蛋白结构，这项成果在业界引起了巨大轰动。原因在于当所有电镜结构生物学家还在讨论膜蛋白到底能不能利用冷冻电镜技术看到二级结构，也是通常我们认为的中等分辨率水平的时候，程亦凡教授研究组直接解析了TRPV1 这个膜蛋白3.3埃近原子分辨率的结构(Nature，504：107–112)。　　笔者曾在该文章发表的半年前在一次国际会议上和冷冻电镜领域顶级学者深入讨论过如何获得清晰的膜蛋白α -螺旋结构，对方给出了悲观的结论：“恐怕不太可能，至少最近两年不可能”。　　事实上，此前蛋白质晶体学家已经有所耳闻“冷冻电镜可能在未来几年会超越并且取代晶体学”，但是谁也没想到会是以这样快速和震撼的方式登场，这在某种程度上引发了不少蛋白质晶体学家的“职业恐慌感”。这项成果的两个共同第一作者廖茂福、曹尔虎也都是非常杰出的青年华人科学家。　　加州大学洛杉矶分校的周正洪教授早在2008年到2010年左右，在这场电镜技术革命来临之前，在各项技术条件尚未成熟的情况下解析了一系列近原子分辨率病毒结构。当时采用的是传统胶片来成像，任务非常艰巨，连他还在上学的儿子也都帮忙一起洗胶片。张兴博士在这一系列稍早的重要成果中充当了先锋。早在2008年，第一个近原子分辨率的冷冻结构，也即3.8埃轮状病毒就是张兴博士作为第一作者完成的(PNAS, 105(6): 1867-1872)。从1968年Aaron Klug创立电镜三维重构理论，到2008年人们首次看到通过冷冻电镜获得近原子分辨率结构，整整用了40年。　　在国内，清华大学的隋森芳院士是我国冷冻电镜领域的先驱，不仅德高望重，还培养了一大批优秀的青年科学家，包括清华大学的王宏伟教授以及 MRC-LMB的白晓晨和畅磊福博士等等。王宏伟早年在隋老师实验室做研究生的时候，在我国研究设备和条件全面落后于国外的情况下依旧做出了许多非常出色的工作。　　MRC-LMB的多位青年华人研究人员对冷冻电镜发展都做出了重要贡献。白晓晨博士在MRC-LMB首次使用直接电子探测设备Falcon I 和Sjors Scheres博士的新程序Relion，获得了第一个不对称样品核糖体的近原子分辨率冷冻电镜结构，打响了冷冻电镜革命的第一枪，随后解析了一系列核糖体和蛋白复合物结构。畅磊福博士在LMB首次获得非核糖体不对称蛋白样品APC复合物的近原子分辨率结构，阐明了蛋白质泛素化的重要机理。笔者主要在LMB的Andrew Carter博士实验室从事动力蛋白结构和功能研究，并成功解析动力蛋白激活因子Dynactin结构，提出了目前为止动力蛋白最详尽可靠的运动和激活机制(Science, 347(6229):1441-1446. 封面文章)，同时独立发展冷冻电镜技术方法。　　1953年4月25日，MRC沃森和克里克在《自然》杂志发表DNA双螺旋结构，61年后的同一天，我国科学家、中科院生物物理研究所的朱平和李国红研究员在《科学》杂志以长文形式发表了30nm染色质冷冻电镜结构(DNA双螺旋之双螺旋)(Science , 344(6182): 376-380)。这项工作是冷冻电镜在核心生命科学问题中的成功应用，冷冻电镜部分的工作主要是笔者在生物物理所的同学宋峰博士完成的。　　生物物理所的程凌鹏博士(当前单位为清华大学)获得国内本土第一个原子分辨率的冷冻电镜结构，构建了蚕多角体病毒(CPV)的完整三维原子模型(PNAS，108(4)：1373-1378)。笔者也参与了部分工作, 被其高质量、干净的电子密度图震撼。近期程凌鹏与刘红荣博士合作，在国际上首次发表了CPV完整基因组和RNA聚合酶“原位三维结构” (Science, 2015, 349(6254):1347-50), 引起了很大轰动，这项成果是我国本土冷冻电镜技术和生物学应用的双重突破，被多名同行科学家称赞为”里程牌式发现“。　　我国著名科学家施一公最近发表了一系列重大蛋白复合物的冷冻电镜结构，包括γ -secretase、spliceosome等，被誉为过去几十年我国科学家对基础生物学领域的最大贡献。　　另外，在欧美和中国本土还有一大批华人学者在冷冻电镜或密切相关领域(cryoET等)做出诸多突破性成果，例如匹兹堡大学的张佩君教授(艾滋病毒结构研究)，德克萨斯大学的刘俊教授(细菌运动，噬菌体结构等研究)等，由于时间和篇幅问题，无法一一介绍。　　冷冻电镜的未来展望　　冷冻电镜技术目前仍然在快速发展中，未来冷冻电镜能做什么取决于这项技术能发展到什么程度。现代科学技术革命的一个最大特点是发展速度极其迅速，谁也不知道明天会发生什么，当然也不能十分准确的预知一个领域的发展方向。即便如此，笔者还是对这个领域有一些预测或期待(仅技术角度，不涉及具体生物学研究)。　　1)超大规模、超快速度数据采集和处理。和晶体学相比，冷冻电镜的效率在某些方面已经异常惊人。比如笔者近期与牛津大学王祥喜博士合作，在几个小时以内就可以拿到完整甲肝病毒原子结构，而此前王祥喜博士花费近一年时间结晶才最终拿到原子结构。但是科学技术发展是永无止境的̷̷　　但目前来说，结构生物学的巨大转型必须建立在速度和效率的双重前提下。这需要硬件、软件以及其它交叉学科等多方面的共同发展。　　除了生物学研究应用，笔者一直致力于冷冻电镜技术的发展，最近在提高电镜数据处理结果可靠性和分辨率前提下，上千倍地提高了其中几个环节，过去几百到上千CPU小时的事情，现在几分钟到几十分钟就完成了。但是这只是部分环节，在其它方面依旧非常耗时，整个技术的各个环节如何全面高效高速地完成还需要更多的优秀人才参与。对硬件的发展方面笔者并不是很熟悉，预计在未来会出现超高速度的电子显微镜，大幅度提高电镜原始数据的数量和质量。　　2)大尺度、高分辨率、高动态的生物大分子结构解析。理论上，冷冻电镜可像高清数码摄像机拍电影一样对生物大分子成像和重现其动态结构，研究深层机理。就目前而言，这一方面在技术上远未成熟。大尺度、高分辨率、高动态这几点拆解开来，每一个都不算太难，但是同时满足这几项需求几乎成为不可能的事情。但是这是未来结构生物学的方向，我们不仅仅要看简单的几张静态照片，我们还想看高清电影。　　关于这一点，笔者需要强调一下结构生物学和动力学模拟的区别。结构生物学的动态结构目的是以实验手段完整复原自然状态的动态结构，理解其中机理，是从实验数据出发“重现大自然原貌”的过程，是完完全全可靠的实验结果。而动力学模拟是从已有的理论或经验性的物理学规律出发预测一个生物大分子的动态特性，存在巨大的不确定性，其结果可靠性较差。期待在未来的某个时刻，两者会像上个世纪的理论物理和实验物理一样完美地结合，相互促进。　　大尺度复杂生物系统的高分辨率、动态机理研究涉及诸多学科，不是冷冻电镜一项技术就可以完成的，需要多学科科学家共同参与完成。　　3)高分辨单分子及原位结构研究。目前的结构生物学，无论晶体学、冷冻电镜还是核磁共振主要还是在研究“群体”结构。冷冻电镜相对晶体学在这一方面已经有了大幅度提高，可以通过分类的方法研究群体结构中的每一类结构。但实际上每个分子在时间和空间上除了共性，也必然有特性，如果一种方法强大到可以测得单个分子的高分辨率结构，这必然导致巨大革命，使得人们发现许许多多在群体结构研究层次上无法发现也无法理解的大量规律。　　注意这里强调的是单分子“高分辨率”结构，而不仅仅是单分子结构。单分子结构我们目前可以使用比如冷冻断层成像(cryoET)的手段获得，但是分辨率非常低，在如此低分辨率情况下，别说个体差异，很多群体结构差异都值得严重质疑。或许冷冻电镜技术若干年以后会实现这个目标，或许永远都不可能，或许这个目标被另外一个全新的技术彻底取代，冷冻电镜从此退出历史舞台。　　冷冻电镜：一个高度交叉的学科　　冷冻电镜领域一直是多学科高度交叉和相互促进才诞生的一个奇迹。数学、物理、化学、材料、计算机、软件、机械及自动化、精密仪器仪表等等缺一不可，当然最终的核心是生命科学(作者注：此处仅从结构生物学角度分析，并非泛指一般意义上生命科学是一切学科的核心)。生命科学提出问题，其它所有学科相互结合产生更好的解决方案。通过这些解决方案，发现更多神秘的生命现象，从而提出新的问题，诞生新的技术。　　举个例子，冷冻电镜图像信噪比极低，没有科学家的雄心勃勃，没有大批信号分析、图像处理甚至数学家的参与是不可能完成这样艰巨的任务。同时冷冻电镜领域的一些发现或需求，也为其它领域的科学家提供灵感来源和新的研究思路。MRC-LMB作为现代分子生物学的发源地和近两年来飞速发展的冷冻电镜技术核心研究机构，其一大特点就是多学科“零距离交叉”。从半个世纪前的DNA双螺旋模型、肌红蛋白晶体结构等到近两年冷冻电镜技术革命，一直将这一理念体现得淋漓尽致。技术的发展和重大科学问题的解决几乎都是同时进行的，当然科学问题或应用价值始终是核心和最终驱动力，脱离科学和应用需求的技术发展是没有意义的。　　另外一个比较具体的例子是笔者此前思考过的一个问题。在电镜领域出现直接电子探测设备之后，MRC-LMB的两台高端电镜，每天产生5到10T 的数据量，近期正在调试第三台，也许不久的将来，超大数据、超快速度电镜就会投入生产，这些将会导致全世界各个研究机构普遍出现一个严重的技术问题，就是如何高效、无损、快速地进行数据压缩存储和数据处理，当然这里的无损是相对特定生物样品和特定目标分辨率而言。这或许会引起一些信号处理和图像压缩方面的研究人员的兴趣。　　随着冷冻电镜对生物大分子复合物高分辨率结构研究趋于成熟，更加复杂的动态机理研究是必然趋势，这是冷冻电镜技术发展的一个潜在可能性。但是复杂生物体系的深入研究需要解决一系列数学理论、物理、计算难题，有的可能甚至超出了这些学科目前的研究范畴。近些年比较现实可行的是通过冷冻电镜手段，对特定蛋白复合物非随机情况下的高分辨连续动态构象进行分析。笔者认为，专业数学家的参与会大大加速冷冻电镜技术在这些方面的发展。　　生命体高度复杂，充满很多未知的和未被阐述清楚的规律，这里面有成千上万的生物大分子复合物，每一个复合物又与其它若干分子或复合物相互作用、相互影响，深入再深入地理解生命本质一直都会是冷冻电镜的重要方向。冷冻电镜是强大的基础研究手段，它通过解析高度复杂的生物大分子结构，帮助人们更好地理解生命规律，从而影响生命科学相关的一切下游学科和技术，当然也包括更好的发现和设计药物、医疗诊断等具体应用。我们期待在不久的将来，冷冻电镜技术会对科学研究和社会发展等方方面面都产生巨大影响。

结构生物学的主要目标是，从机制上理解关键的生物学过程。研究这些过程中的大分子和复合体，确定它们的分子结构，可以得到最详细的基础信息。除此之外，获得药物靶标的分子结构也是药物开发的标准程序，人们可以在此基础上设计和优化治疗性的化合物。　　不久以前，单颗粒冷冻电镜(cryo-EM)还不是大多数结构生物学家们的第一选择。2013年以前，蛋白数据库(PDB)中的绝大多数分子结构还是X射线晶体衍射获得的。而现在，单颗粒冷冻电镜已经成为了X射线晶体衍射的有力竞争者，不仅在分辨率上能够与之匹敌，还适用于难以结晶的大分子。　　本期Cell杂志刊登了华人学者程亦凡(Yifan Cheng)博士的两篇文章。这两篇文章由浅入深的介绍了风头正劲的单颗粒冷冻电镜，为想要试水这一技术的新手们提供了入门指南，并且详细介绍了这一技术近年来取得的重要突破。　　程亦凡是加州大学旧金山分校的副教授，他原本是物理学博士，后来改用物理学方法研究生物问题。近来，程亦凡在冷冻电镜方面取得了突破性成果，受到了广泛的关注。　　单颗粒冷冻电镜入门　　单颗粒冷冻电镜是用于单颗粒样本的冷冻电镜技术，不需要结晶就可以确定蛋白质和大分子复合体的结构。这篇文章介绍了单颗粒冷冻电镜在结构分析时的实验步骤、注意事项、数据判读和入门指引，为希望了解这一技术的科学家们提供了宝贵的资源。(原文：A Primer to Single-Particle Cryo-Electron Microscopy)　　单颗粒冷冻电镜的技术突破　　这篇综述探讨了为冷冻电镜带来变革的硬件和软件突破。这些技术突破让单颗粒冷冻电镜能够获得质量空前的图像，达到接近原子水平的分辨率。与X射线晶体衍射相比，单颗粒冷冻电镜还是一个相对年轻的技术，仍处于快速发展中。但X射线晶体衍射完全依赖于结晶质量，这已经成为了一个重要的技术瓶颈。而单颗粒冷冻电镜在这方面可能更有吸引力。(原文：Single-Particle Cryo-EM at Crystallographic Resolution)　　相关新闻：程亦凡谈冷冻电镜技术发展&mdash &mdash 访美国加州大学旧金山分校副教授程亦凡

经典之作，博大精深——全新Eppendorf 5430 R台式高速冷冻离心机上市　　全球台式离心机的领导者Eppendorf公司，近日推出拥有精致体积，离心范围广泛的超高速冷冻离心机5430 R。该款机型运用先进离心机生产技术，将高达30,130 X g相对离心力的超高速冷冻离心与8款不同转子融入5430R的紧凑体积中，全面满足高品质的常规样品离心。　　5430R冷冻离心机继承了5430常温离心机的特点，是目前市场上可离心工作板、15/50ml Falcon管以及各类采血管的最小型冷冻离心机。其控温范围为-11℃-40℃，即使所有转子在最高转速时，均可维持腔体温度在4℃。同时还具备Fast Temp快速制冷和Fast Temp pro快速制冷编程功能(FT pro)确保快速可靠的制冷效果。卓越的离心系统对加速、减速、温度控制、转子平衡等特性进行优化，保证离心的安全和实验结果的重复性。大型背光液晶显示屏一目了然，清晰标明离心参数。快速程序按钮，可以随时调用最常用的离心程序。　　欲知详细产品信息，请登陆www.eppendorf.cn

方仓真空冷冻干燥机是一种国际流行的结构形式，主要特点：●预冻干燥在原位进行，高透光有机玻璃观察窗，干燥过程直观；●搁板温度可调、可控、可摸索、中试和生产工艺；●液晶屏显示，PID控制，显示干燥曲线；●方形托盘不易变形，易于操作，便于清洗；●可配置充气阀，可充干燥惰性气体；●液晶显示：搁板温度曲线、冷阱温度曲线、样品温度曲线、真空度曲线及组合曲线；●可储存16个程序，每个程序可设32段，冷冻干燥机在运行过程中可修改程序参数，并记录最后的干燥曲线；●电路系统采用PID控制；●配有RS232接口，可直接连接计算机实时显示冻干曲线。 技术参数：●干燥面积：0.2㎡●搁板层数：2层●搁板温度范围：-50℃～65℃●搁板间距：70mm●搁板尺寸：265*400*25●Ф22西林瓶：440支●Ф16西林瓶：868支●Ф12西林瓶：1554支●冷阱最低温度：≤-55℃（空载）●捕水能力：6kg/24h●盘装液体：2L●极限真空度：≤10Pa●冷却方式：风冷，通风良好，室温≤25℃●外形尺寸：605*610*1200（mm）

祝冷冻电镜之父Joachim Frank82岁生日快乐！约阿希姆弗兰克，德裔生物物理学家，美国国家科学院院士，现任美国哥伦比亚大学教授，研究领域包括生物化学、分子生物物理学等。1975年到2008年间，弗兰克教授完善了电子显微镜图像处理的单颗粒算法，发明了SPIDER软件，该软件至今为全世界上百家实验室广泛使用。弗兰克教授应用冷冻电镜和单颗粒技术，在解析原核和真核细胞核糖体结构和功能领域做出了非凡的贡献。2017年10月，弗兰克教授与雅克杜波谢、理查德亨德森共同获得诺贝尔化学奖，以表彰他们在“冷冻电镜用于生物分子结构的高分辨率解析领域”做出的巨大贡献。本期水木视界对约阿希姆弗兰克教授的诺奖感言自传进行翻译，期望更多冷冻电镜领域的同僚们能够了解这位冷冻电镜之父的传奇过往。原文："Joachim Frank Biographical"Copyright The Nobel Foundation 2017“Normally, my dog wakes me up in the morning. But today, it was the Nobel Prize!”—Joachim Frank以下内容为弗兰克教授诺奖感言：我于1940年9月12日出生在德国的魏德瑙镇。自1972年以来，魏德瑙镇一直是锡根市的一部分。锡根市拥有约10万左右的居民，位于北莱茵威斯特法伦州的南端。它周围的山区被称为锡格兰，在过去的几个世纪，锡格兰的铁矿开采、加工和冶炼行业都欣欣向荣。作为传统技术，铁矿的开采可以一直追溯到两千年前的凯尔特人。不过，在采矿和加工业转移到发达的鲁尔区后，留给锡格兰的任务就只剩钢铁的冶炼了：锅炉、铁管、铁轨、铁桶和许多其他由铁和钢制成的部件。魏德瑙镇的地标是“富士山”，一个巨大的铁矿渣堆，与日本的名山形状一致。此外，锡根也是奥兰治拿骚家族的所在地，他们是荷兰皇室的血脉。作为画家彼得保罗鲁本斯的出生地，锡根市为此而自豪。然而，画家彼得在锡根出生的原因则是一场闹剧：他的父亲与有身孕的母亲从科隆出发，在乘坐马车途径锡根时被逮捕。三个城市，锡根、科隆和安特卫普都声称彼得是他们的儿子，城市之间的争执是锡根上城区喷泉的永恒主题：在雕塑上，三位母亲一同抱着婴儿彼得保罗，并为之争吵。彼得保罗鲁本斯(Sir Peter Paul Rubens)1577年6月28日－1640年5月30日比利时画家，巴洛克画派早期的代表人物我的父亲威廉弗兰克是锡根法院的一名法官。他于1896年出生在魏德瑙。不过，他并没有完成全部的法律学业：他被征召并参加了一战中的凡尔登战役，并由于受伤而失去了大半个左手。他的母亲，也就是我的奶奶，出身于当地的一个富裕家族：施莱芬鲍姆家族，他们经营着繁荣的钢铁企业。我的爷爷是一名高中教师，来自锡根郊区的一个乡村家庭。我的母亲夏洛特来自杰出的曼斯科普夫家族，该家族在锡根的渊源可以追溯到15世纪。在18世纪，曼斯科普夫家族的一个分支在法兰克福定居，并通过国际葡萄酒贸易获得了无尽的财富和声誉。而在19世纪初，他们则与歌德的家族关系密切。左侧：1940年，与我的母亲夏洛特、父亲威廉、他的妹妹伊丽莎白、我的祖母阿玛莉-施莱芬鲍姆、哥哥赫尔穆特和妹妹英格伯格在一起。我的妹妹雷娜特将在四年后出生。右侧：我父母在魏德瑙的家，恩格斯巴赫大街3号，1905年的建筑图纸显示了原来的两层楼的阳台。我的母亲毕业于Stift Keppel高中，这是一所创办于13世纪的女子高中。婚后，她留在家里照顾她的四个孩子：我、我四岁的妹妹雷娜特和两个哥哥姐姐，英格伯格和赫尔穆特。我们的家宅大而庄严，是我的祖父母在1905年用红色双层玻璃砖建造的，极为坚固。它坐落于一块大小适中的土地上，与街道接壤的地方有一道锻铁栅栏。家宅的一楼和二楼有阳台，可以俯瞰后院。外侧的步道上铺满了装饰性碎石，并种着几颗黄杨树。[战争年代]锡根市，北莱茵威斯特法伦州，德国我出生于二战期间，而战争影响了我的整个童年。由于锡根市发达的钢铁制造业，它是盟军空袭的首要目标。在战争结束时，锡根市80%的建筑物都被夷为了平地。大约是我四岁的时候，一些邻居的房屋被陆续地炸毁了。在1944年2月的一次凌晨空袭中，我父母的房子也被炸毁。由于屋顶和上层被毁，其余的部分也因漏水而无法居住，我们不得不搬到北部20公里左右的希尔兴巴赫镇，在那里，我父亲的同事为我们提供了一套公寓。这套公寓位于威廉斯堡，它是一座18世纪依水而建的城堡，也是当时的法院大楼。在我的记忆中，我当时坐在城堡地下室的防空洞里，周围萦绕着婴儿的哭闹，飞机、空袭和无线电广播声，这些声音充斥着我青少年时期的噩梦。战争结束后的那段时间尤为艰难。母亲常常会乘坐去往乡下的火车，用我们家中剩余的铁制品换取黄油、火腿、面包、面粉和鸡蛋。“天然的黄油”来之不易，母亲会把它们搅拌进人造黄油中，但并不会稀释太多，这样我们就能尽可能长地记住黄油真正的味道。我们也有一个很大的花园，种植了苹果树、梨树和樱桃树。有一段时间，我们为了制作糖浆而种植了一些甜菜，并种植了烟草来满足父亲的吸烟习惯。我们还会在后院养鸡，甚至一度在阳台下面养了一头小猪。这些花园中的时光，使我得以近距离欣赏大自然。附近烧毁和倒塌的房屋瓦砾对我有一种错综复杂的吸引力，令我既恐惧又着迷。恐惧是对混乱和破坏的自然反应，特别是对一个孩子来说，这意味着危险无处不在。着迷的部分源自和其他同龄男孩一起在荒凉的土地上玩耍的经历，到处都堆满了砖头、罐子、扭曲的电线和塑料碎片。我们经常能发现老鼠窝，里面有一些尚处目盲的粉红色鼠崽。[启蒙教育]锡根市，北莱茵威斯特法伦州，德国我的小学就在家的街道对面，在那里我度过了四年的启蒙时光。八岁时，在还没有任何科学概念的时候，我在阳台下面的阴凉处开始了第一次实验，是天生的好奇心驱使我这样做的：我搭了一个架子，收集了一些利口酒的酒瓶，并用它们去装满我能得到的每一种液体：食用油、水、汽油，以及我长大一点之后得到的盐酸。凭着直觉，我把这些液体混合起来，把金属置入其中，并记录结果。我看着碳化钙在水中溶解，并着迷于激烈的反应和逸出气体的气味；我看着锌在盐酸中溶解并冒出气泡；我在一个与管子相连的金属容器中加热煤，因为我听说会有可燃的气体冒出来。迈耶百科词典，这是我在被毁的老房子里发现的一套20卷百科全书，每卷约1000页。这套百科全书登陆了海量的学术文章、技术图纸、彩色照片和世界各地的地图。在我识字之后，它们陪伴我度过了整个童年和青少年时期。我花了几年的时间把它们都读完了。这套出版于1905年的百科全书信心满满地宣称：人类已经把世上所有的东西都研究得不能再透彻，不过，1905年恰好也是爱因斯坦发表光电效应论文的一年，那篇论文证明了能量的量化，也就是量子力学的前身。对于那套百科全书来说，这还是挺讽刺的。如今，这套书的内容并没有太多的参考价值了，却对我来说有相当的纪念价值：它们被我视作纪念那套祖宅的传家宝。高中的科学课。在我身后右侧的两个身位处，他们是霍斯特施密特博金和乌尔里希梅博尔德。在未来，他们将成为物理学家。照片由@弗里德海姆施克提供。从五年级开始，我转学到了莫里茨文理中学，这是以奥兰治拿骚家族一位著名公爵命名的学校，而我是小学班20名学生中仅有的4名升学者之一(在德国的体系中，文理中学将初中和高中合并到一起)。在那里，我对科学课，特别是物理课产生了强烈的兴趣。同时，我扩大了实验范围，并在阁楼开辟了第二个试验场地。在那里我会尝试修补一些小玩意，例如用废弃或邮购的零件组装收音机：哥哥曾向我演示过如何组装一个水晶收音机，而我很快就痴迷于这些精巧的小物件，不可自拔。之后，我制作了几个花哨的微型收音机，并装在肥皂盒里。我的大部分零花钱都用在了阀门、晶体管、电阻器和电容器的购买上，而阁楼上则充满了松香焊接时产生的"蒸汽"味。幸运的是，我在学校里结识了一个志同道合的朋友，他就住在街对面。这时我应该补充一下，我的三个兄弟姐妹都在同一所文理中学上学。在获得高中毕业证后，我的哥哥去攻读并完成了工程博士学位，成为了一名职业安全领域的公务员。我的两个姐姐都在高中二年级时转去了职业学校，进行理疗师的就职培训。在结婚并将几个孩子拉扯大之后，长姐完成了她中断的高中学业，并进入大学，获得了生物化学的博士学位。而二姐从理疗师转型成了一位艺术家，她制作了许多漂亮的被子，直至1998年她因癌症早逝。[进入大学]弗赖堡市，巴登符腾堡州，德国我始终觉得，在大学里我注定会选择物理专业。而我的父亲常常质疑这个选择，理由是这个专业并不能糊口。1960年，在完成高中学业后，我去了弗赖堡大学(University in Freiburg)，并从省会城市搬到了僻静的小镇，镇上有一些大型哥特式教堂和许多迷人的中世纪建筑，这令我恍如隔世。我学习了微积分和线性代数，并学会如何去撰写严格的数学证明。此外，我也学习了数学物理学科的特殊函数和统计力学的课程。我视在亚琛攻读工程博士的哥哥为榜样，加入了著名的弗莱堡大学Suevia兄弟会，结识了一些朋友。但后来，受60年代政治动荡的影响和启发，我逐渐意识到了那些扎根于德国学生组织中的民族主义和右翼思想，并退出了兄弟会。当时的弗莱堡大学校长，臭名昭著的马丁海德格尔(Martin Heidegger)公开地支持元首。我曾经看到年迈但瘦小的海德格尔在大学门口发表公开演讲，这一举动在外界看来极为罕见。不过，他被一群学生簇拥着，我几乎看不到他。由于在学士毕业考试中表现突出，我得到了德国学术研究基金会的提名：这是一项特殊的奖学金，并在日后极大地拓宽了我的视野，使我能了解其他学科和人文领域。通过组织科学前沿会议，基金会促进了跨学科的讨论。在1964年的一次会议上，我第一次了解到 "中央教条"原则和DNA结构。也是在这里，我和神经生理学家沃尔夫辛格(Wolf Singer)初识，并开启了直至如今的长远友谊。我和辛格，以及志同道合的学生们一起成立了讨论小组，专注于当时的热门话题—“控制论”。[硕士与博士]慕尼黑市，巴伐利亚州，德国为了得到硕士学位，我前去慕尼黑大学物理系做毕业论文相关的工作。论文项目与液态金上的电子后向散射有关，这个深奥的课题与当时新兴的高能电子束技术息息相关。我的导师恩斯特金德(Ernst Kinder)曾在早期使用电子显微镜做了一些工作：他发现蝴蝶翅膀的彩色图案源自于微小鳞片处于亚显微排列时产生的光干扰。现在，他的办公室里仍然保留着一台古老的电子显微镜。这段经历让我对涉及电子显微镜的项目颇有好感。最终，我选择了沃尔特霍普(Walter Hoppe)作为我的博士导师，他是马克思普朗克蛋白质皮革研究所的X射线晶体学家，后转为电子显微镜专家，该研究所后来迁至马丁斯里德(Martinsried)，更名为马克思普朗克生物化学研究所(Max Planck Institutes)。霍普的研究内容是利用电子显微镜对生物分子进行三维成像的方法。我的论文则侧重于利用统计光学等领域的方法探索电子显微照片的特性。我在Optik杂志上发表的第一篇论文，研究了样品漂移对显微照片的光学衍射图案产生的影响，并以傅里叶理论解释了观察到的条纹。当霍普承认这是一项完全独立的工作，拒绝在作者栏签署他的名字时，我无比自豪。我的首次计算机编程使用了ALGOL编程语言，每次编译和运行新写的程序之前，我都要花费20分钟左右步行到大学。后来我学会了用FORTRAN语言进行编程，所使用的设备是IBM1130，它建造于我们研究所的一个小地下室里，我有时会在那里工作到深夜。研究所的生活方式十分独特，具有明显的巴伐利亚色彩，只需要步行短短的几分钟，就能从研究所步行到举办啤酒节的大草坪。在蘑菇生长的季节，人们会在清晨组织采摘蘑菇的活动。三至四名学生会组成户外小组，与一位对蘑菇了如指掌的专家一同出发，带回许多真菌和鸡油菇。我们会用锥形瓶和烧瓶将它们煮熟，撒上盐，与巴伐利亚面包一同食用。我们也曾在图书馆中用一桶啤酒和大块的肉饼来庆祝论文的刊登。当时的慕尼黑和现在一样，是一个文化活动丰富的城市，到处都是娱乐场所：每天去听一场古典音乐会算得上是日常了。我的一个古典音乐爱好者朋友也从弗莱堡搬到了慕尼黑，并邀请我去看了许多出色的演出。耳濡目染下，只靠几个开场音符，我就能辨认出许多古典交响曲。此外，慕尼黑歌剧院的票价平易近人，却总能提供宏大的体验。在那段时间里，我主要有两批朋友，一批是扬格罗内博格等人，格罗内博格是一位具有乌托邦思想的大学辍学生，住在慕尼黑郊外的小屋里。另一批是沃尔夫辛格等人，我通过学术研究基金会认识了他们，靠着沃尔夫辛格的介绍，我认识了我的第一任妻子凯茜恩格伯格。我们于1969年结婚，但这段婚姻只维持了不到10年。1968年，一次在希尔谢洛镇的会议让我有机会认识了几个未来在这个领域举足轻重的人。这次研讨会是由瓦尔特霍普和剑桥MRC分子生物学实验室的马克斯佩鲁茨(Max Perutz)共同组织的，佩鲁茨因在蛋白质X射线晶体学方面的开创性工作而闻名。在那里，我遇见了哈罗德埃里克森、理查德亨德森、肯霍姆斯、休赫胥黎和奈杰尔昂温等人。在下午，与会者们可以自由地滑雪，而上午和晚上都保留给讲座和讨论，其形式类似于戈登会议。与我的论文相关的两篇德文论文后来发表在了会议记录中，载于Bunsengesellschaft für Physikalische Chemie特刊。[博士后阶段]加利福尼亚州，美国1970年初夏，在慕尼黑工业大学的论文答辩结束后，我获得了哈克尼斯奖学金(Harkness Fellowship)，这使我可以前往美国两年，并自行决定进入哪些实验室。我选择了加州理工大学的喷气推进实验室(JPL)、加州大学伯克利的唐纳(Donner)实验室、和康奈尔大学。来自欧洲的我，却搬去了帕萨迪纳这样好莱坞一样的地方，那里有繁华的高速公路、紧靠棕榈树的小房子以及穿着网球鞋的小老太太，这种文化冲击难以言喻。事后看来，这三个实验室都给了我未来方向的重要推动力。当时的JPL拥有世界上最好的图像处理设备，并开发了一个模块化的图像处理系统VICAR，我可以将自己的程序挂在上面。这个软件包后来成为我开发SPIDER系统的模型。在唐纳实验室，我和鲍勃格莱泽的小组在一起，他专注于用电磁波进行结构研究的两个典型问题：样品的辐射损伤和对水合环境的需求。他和他的学生肯泰勒(Ken Taylor)已经在试验冷冻水化样品的制备，但当时雅克杜博歇(Jacques Dubochet)决定性的玻璃态冷冻技术还没有被发明出来。在康奈尔大学的本杰明西格尔小组里，我认识了肯唐宁(Ken Downing)和威廉戈德法布(William Goldfarb)。后来我邀请威廉加入了我在奥尔巴尼的团队。这时我需要提一句，1972年我在康奈尔大学时，我的儿子霍西亚扬弗兰克(Hosea Jan Frank)出生了。从美国回来后，我在1972年的冬天短暂地回到了马克思普朗克研究所，研究电子显微镜的部分相干性理论。这项工作使我与世界级的电子光学专家彼得霍克斯(Peter Hawkes)有了接触。1973年，我加入了剑桥大学卡文迪许(Cavendish)实验室的弗农埃利斯科斯莱特(Vernon Ellis Cosslett)小组，担任高级研究助理。与我往来的人中有欧文萨克斯顿(Owen Saxton)和彼得霍克斯(Peter Hawkes)。在卡文迪许的几年里，我进一步研究了部分相干理论，并找到了一种方法：通过计算同一区间的两个连续图像的互相关性来获得电子显微照片的信噪比。这时，单颗粒平均和重建的设想在我的脑海中占据了一席之地：将电子剂量分散到网格上随机排列分子的多个"副本"中。1975年，我发表了一篇概念性的论文，提出了利用溶液中重复出现的分子来检索分子结构的想法。之后，我和欧文一起研究了生物分子的明场图像，并确定了它们在特定的条件下能够以足够的精度排列，从而使图像达到了一定的平均分辨率，这项研究的结果在1977年共同发表。自此我开始相信，单颗粒的方法即使在弱原生对比度的条件下(即蛋白质与水)也能发挥作用。[Wadsworth研究中心]奥尔巴尼市，纽约州，美国1975年，我收到了纽约州Wadsworth研究中心的唐帕森斯(Don Parsons)发来的工作邀请。在那里，我最初的任务是细胞切片的断层重建，但我继续将研究重心放在了单颗粒方法的应用上。这两个领域的交叉使我意识到，我需要一个程序框架来确保后续程序设计的灵活性。因此，我开始对SPIDER进行开发，这是一个模块化的图像处理系统。随着单颗粒技术的发展，SPIDER成为向社会传播单颗粒技术的工具。它最初采取了买断制，只收取一次性费用，后来，它补充了创意共享许可，能够被免费地使用。之后，过了很多年的时间，单颗粒概念才得以被证明有效，我们收到了生物分子的实际图像：由加州大学洛杉矶分校的大卫艾森伯格(David Eisenberg)提供的谷氨酰胺合成酶，戈廷根大学的彼得辛斯海姆(Peter Zingsheim)提供的乙酰胆碱受体，以及罗氏的米罗斯拉夫布布里克(Miloslav Boublik)提供的核糖体。我的朋友马丁凯塞尔也利用休假的时间帮助我进行了一些研究。在每个案例中，二维平均数的可重复性证明了这种方法是合理的。然而，电子显微镜业内仍有不少人持怀疑态度。转折点出现1980年，我和荷兰学生马林范海尔(Marin van Heel)共同开发了一种解决异质性问题的方法。为了寻找具有挑战性的合适分子来尝试这项技术，我开始与法国图尔的让拉米(Jean Lamy)以及他的学生尼古拉斯博伊赛(Nicolas Boisset)合作，对各种节肢动物的血蓝蛋白进行成像。多年来我一直与尼古拉斯保持联系，直到他于2008年不幸去世。他的记录方式一丝不苟，并为单颗粒重建的原理制作了精美的幻灯片。奥尔巴尼镇是纽约州的首府，却淹没在了纽约市的光辉下。该镇被美丽的乡村所包围，仅靠步行便能进入阿迪朗达克山脉。搬到奥尔巴尼不仅让我得到了第一个独立职位，还释放了我在科学之外的领域进行创造性表达的冲动。我加入了一个艺术家集体，名为WORKSPACE，由杰西加雷特(Jacy Garrett)创立。当时，行为艺术正在全美范围内被重新定义，艺术家组织也如雨后春笋般出现。激浪派(FLUXUS)运动将大众的注意力引向了一些边缘的、偶然的东西。我并没有艺术相关的文凭，却凭借创造性的贡献成功地被WORKSPACE接纳了，这让我感觉不错。我参加了他们的邮件通信，并在几年内为一本名为PROP的小型文学杂志提供编辑工作。70年代末，我的第一次婚姻结束了。离婚协议使我们拥有对儿子的共同监护权，这让我在城里呆了相当长的一段时间，并见证我的儿子霍西安成长为一个多才多艺的艺术家，他之后将名字中的扬(Jan)改名为了泽(Ze)。1982年，我在奥尔巴尼遇到了我现在的妻子卡罗尔萨吉诺(Carol Saginaw)。卡罗尔最初在纽约州心理健康办公室工作，并在多年以来担任纽约州几个非营利组织的执行董事，从事心理健康工作，后来，她又从事了早期护理和教育工作。卡罗尔来自密歇根州的一个犹太家庭，她的许多家庭成员都在我祖国建造的毒气室中丧生了。尽管我们之间不同的背景带来了很多麻烦，但我们还是在1983年完婚，并幸福地生活到现在。在很大程度上，是卡罗尔的支持和对我的信任使我取得了胜利，并走到了我职业生涯的今天。同时，我也开始尝试用英语写小说，当威廉肯尼迪，以及后来的史蒂文米尔豪斯和尤金加伯对我的手稿给予非常积极的反馈时，我感到受宠若惊。对我来说，用第二语言去创造性地表达自己的想法是令人兴奋的，因为我当时并不确定未来是否会回到德国生活。在纽约州立大学的尤金加伯(Eugene Garber)教授的小说写作课程结束后，他班上的学员，包括我在内，决定继续以作家小组的形式聚会。这个小组内的一些建设性批评，以及我后来加入的其他小组，都磨练了我的写作，帮助我认识到“自己的声音”。自此，写作成为了我生活的一部分。现在回过头来看，我早期对单颗粒冷冻电镜的贡献主要是由三个因素促成的：我工作的地方安静祥和，也没有任何教学要求，此外，美国国立卫生研究院的稳定支持也必不可少。这种支持一直持续到了今天。我很幸运地在1982年邀请到迈克尔雷德马赫加入了我的团队，他是一名德国学生，也曾师从于沃尔特霍普，在任意几何形状的三维重建方面颇有建树。在我的实验室里，迈克尔一手设计了随机圆锥形重建程序，在1986年完成了第一个完全不对称分子的三维重建，即大肠杆菌核糖体的大型亚单位。采用雅克杜波谢的新型快速冷冻和玻璃化技术，我们很快就能重建水合、原生状态的生物分子。从那时起，也就是20世纪80年代末，我们一直努力研究的技术逐渐走向了成功，尽管我们并不能确定单颗粒冷冻电镜技术是否能够在分辨率方面和产生原子结构的倾向性方面与X射线晶体学竞争。1985年，在第一届戈登3DEM会议上，以前和现在的实验室成员在奥尔巴尼重聚。从左到右：马林范海尔，让皮埃尔布雷图迪尔，阿德里安娜弗尔肖尔，布鲁斯麦克伊文，约阿希姆弗兰克，泰瑞瓦根克内西，迈克尔拉德马赫，马丁凯塞尔在1985年，我们的女儿玛丽尔贝丝出生，并成为了我们生活的中心。在她两岁的时候，我收到了在英国剑桥的分子生物学实验室(MRC-LMB)休假的邀请，邀请者是理查德亨德森。我们在小谢尔福德村(Little Shelford)的国王小屋租了一个迷人的小房子，小屋后有一个花圃，女儿玛丽尔会在那里与其他孩子玩耍。我们在康河上划船，并在剑桥周围美丽的公园里散步。在实验室里，我的大部分互动对象都是赵华(Wah Chiu)，他是我第一次访问罗伯特格雷瑟(Bob Glaeser)的实验室时遇到的学生，也和我在同一个时间段加入了分子生物学实验室。利用赵华收集到的响尾蛇毒素二维晶体数据，并在他的帮助下，我成功开发了斑块平均法，这是一种结构重建的方法，利用了晶体小区间的"局部"平均数：基本上是应用于晶体碎片的单颗粒方法。在奥尔巴尼，我们重建的第一批分子是血蓝蛋白，这是我们与法国的让拉米研究小组合作的延续。与范德比尔特大学的悉尼弗莱舍(Sydney Fleischer)的另一项合作，使我第一次有机会研究鱼尼丁(Ryanodine)受体的结构。不过，关于核糖体结构的工作仍然最让我着迷。早在1990年，我就深信自己的实验室能够对核糖体的结构和功能作出重大贡献，我开始招募有核糖体背景的生物化学家。阿金德拉阿格瓦尔(Rajendra Agrawal)，他在贝拿勒斯印度大学的缅甸实验室接受过培训，是第一个将"核糖体专家级"的知识带入实验室的人。其他人后来也陆续地加入进来，其中包括在柏林Knud Nierhaus实验室受训的克里斯蒂安斯佩恩(Christian Spahn)。三维电子显微镜戈登会议(3DEM)是促进冷冻电镜社区讨论和传播样品制备、仪器和数据处理新技术的重要会议。该会议成立于1985年，最初每两年召开一次，后来改为现在的年度会议。我在1987年当选为会议的副主席，随后在1989年与David DeRosier一起当选为主席，这标志着单颗粒技术得到了整个学界的认可。1994年，马克思普朗克医学研究所的肯霍姆斯和拉斯姆施罗德为我提供了再次在德国工作的机会。通过我的研究生朱军(音译)和博士后帕维尔潘切克的努力，在X射线结构出来之前，我们得到了大肠杆菌核糖体的第一个高清密度图。也是在海德堡，我写出了一本关于三维电子显微镜的书，该书于1996年出版，并在和2006年第二次出版。1998年，我被任命为霍华德休斯医学研究所(HHMI)的研究员，并在之后任职了19年，直到最近我才退休。在这些年里，我的实验室继续开发冷冻电镜，并与几个合作者实现非常具有挑战性的生物项目，这都离不开霍华德休斯医学研究所的资助。也是在那个时候，Wadsworth中心与纽约市的八个机构一起组成了一个结构研究的联盟，称为纽约结构生物学中心，该中心支持核磁共振、X射线晶体学和冷冻电镜。这让我能够与哥伦比亚大学和纽约的其他领先机构建立密切的联系。2005年3DEM戈登会议上的奥尔巴尼团聚照片。从左到右：比尔巴克斯特，马丁凯塞尔, 尼古拉斯博伊塞，约阿希姆弗兰克，克里斯蒂安斯帕恩，坦维尔谢赫，帕维尔佩内泽克，阿金德拉阿格拉瓦尔，刘铮(音译)，何塞玛利亚卡拉索2000年，在我60岁生日的时候，我在伦斯勒维尔镇(Rensselaerville)组织了一次会议，以延续安德斯利尔哈斯(Anders Liljas)在瑞典发起的一系列关于翻译功能的结构基础相关会议。会议的地点坐落在一个美丽的公园里，离奥尔巴尼有一个小时的车程。在这次会议期间，我和曼斯艾伦伯格(Mns Ehrenberg)花了不少时间，就核糖体结构和功能的合作制定了具体计划。这开启了一个令人振奋的研究旅程，并一直持续到现在，我们研究了启动、解码、mRNAtRNA转位、终止和循环过程的结构基础，为关于翻译机制的丰富知识库做了很多的贡献。2017年夏天，我的家人在我们位于伯克希尔的阿尔福德的房子里。上方，从左到右：霍西阿(泽)和他的儿子约拿，汤姆墨菲(玛丽尔的丈夫)，约阿希姆弗兰克下方，从左到右：泽的妻子乔迪布兰特和他们的女儿罗丝，玛丽尔，我的妻子卡罗尔萨吉诺。这时，我的孩子们都长大成年了，有着自己的生活。我的儿子泽弗兰克在布朗大学主修神经科学，并出于弹吉他的爱好成立了一个乐队。他在音乐和艺术方面的特殊才能在少年时期就得到了体现。后来他搬到了纽约，开始做网页设计。通过一个偶然的途径，他登上了TED演讲的舞台，随后在一夜之间成为了一个互联网人物。最近，他任职于Buzzfeed，职位是媒体总监。他现在与妻子和两个孩子住在洛杉矶。我的女儿玛丽尔弗兰克在巴纳德学院主修语言学。她会说多种语言，在日本教过英语，还曾为一个拉丁裔非营利组织工作，现在是代码学院的程序员和课程开发人员。她已经结婚了，并定居在纽约布鲁克林。[哥伦比亚大学]纽约州，纽约市，美国2008年，我加入了哥伦比亚大学，成为生物化学、分子生物物理学系和生物科学部门的职员。在30多年的奥尔巴尼牧区生活后，重返纽约是相当令人兴奋的，这为我提供了许多合作机会。我带来了HHMI的FEI Polara显微镜，连同后期购买的FEI F20显微镜一起，在哥伦比亚大学建立了冷冻电镜实验室。之后，我立刻被单分子FRET合作领域所吸引，这是由斯坦福大学Puglisi实验室的鲁本冈萨雷斯建立的领域。在哥伦比亚大学的头四年里，我们的冷冻电镜项目进展缓慢，因为它仍然受到记录介质的限制。当直接电子检测相机被商业化后，发生了翻天覆地的变化，冷冻电镜领域被彻底改变了，也为我的实验室开辟了许多新的合作途径，特别是在通道结构方面。最近，哥伦比亚大学建立了一个冷冻电镜设施，由于捐助者的慷慨，以及和三个校区院长的合作，哥伦比亚大学现在正朝着成为世界领先的冷冻电镜中心之一前进。看着新技术在整个工业化领域广泛传播，我十分振奋，单颗粒冷冻电镜现在能够填补分子结构研究的巨大空白：膜结合的通道和受体，以及许多高柔性的大分子结构都可以被解析。冷冻电镜技术有望在未来几年大大增加人类医学的成就。[末尾致谢]诺贝尔颁奖典礼，斯德哥尔摩市，瑞典在过去五年中，一些实验室陆续解析了许多近原子结构，这引起了全世界对冷冻电镜领域之前数十年工作的关注，这些工作不仅仅归功于受到表彰的诺贝尔奖获得者和他们的小组，更是整个冷冻电镜领域的成就。因为从长远来看，自1990年冷冻电镜技术开始得到认可，许多团体在各个方面都做出了重大贡献：样品制备、数据收集自动化、计算、验证和原子模型的建立。这些贡献不胜枚举。在走到这一步的整个过程中，我受到了不少眷顾。我想对我的家人们表示感谢，特别是我的妻子卡罗尔，感谢她/他们在漫长时间里的稳定支持。我的妹妹英格伯格接受过生物化学方面的培训，她是我家庭中唯一能够理解我工作内容的人。在我的朋友中，我需要特别指出马丁凯瑟(Martin Kessel)对我早期工作的鼓励和支持，以及何塞玛丽亚卡拉索(Jose-Maria Carazo)对我一路走来的许多启发。最后，得到诺贝尔奖的认可令我激动，且受宠若惊。用阿尔弗雷德诺贝尔遗嘱中的话来说，诺贝尔奖的得主将是那些造福全人类的终身成就者，只有少数人能够达到这个目标。那些先行者，欧内斯特卢瑟福、莱纳斯鲍林、玛丽居里...他们的成就是难以逾越的。于我而言，一夜之间，我的人生被完整地定义了，或者说，许多与我未曾谋面的人能够了解我的经历，听我用自己的言语讲述我的故事，我感激这个机会。引用资料1. Frank, J. (1975). “Averaging of low exposure electron micrographs of non-periodic objects.” Ultramicroscopy 1, 159–162.2. Frank, J., Shimkin, B., and Dowse, H. (1981). “SPIDER — A modular software system for image processing.” Ultramicroscopy 6, 343–358.3. Frank, J. (2006). Three-Dimensional Electron Microscopy of Macromolecular Assemblies (New York, Oxford U. Press).4. Frank, J. (2015). “Generalized single-particle cryo-EM – a historical perspective.”再次祝愿Joachim Frank教授生日快乐！

揭示生物学样本和材料样本原本无法观察到的内部结构冷冻断裂是一种将冰冻样本劈裂以露出其内部结构的技术。冷冻蚀刻是指让样本表面的冰在真空中升华，以便露出原本无法观察到的断裂面细节。金属/碳复合镀膜能够实现样本在SEM（块面）或TEM（复型）中的成像，主要用于研究如细胞器、细胞膜，细胞层和乳胶。这项技术传统上用于生物学应用，但现在逐渐在物理学和材料科学中展现出重要意义。近年来，研究人员通过冷冻断裂电子显微镜，尤其是冷冻复型免疫标记（FRIL），对膜蛋白在动态细胞过程中所发挥的作用有了新的见解。作者：Gisela Höflinger图1：麦叶上的蚜虫适合于电子显微镜的环境电子显微镜的样品室通过抽真空处理降至极低压力。置于这种环境下的活细胞无法有效保全结构，因为细胞构成中的大部分水分会快速蒸发。生物样本的制备方法有很多种。样品材料被（固定）保存，这样后续脱水对原位结构的破坏最小，同时可以使用环境扫描电镜（SEM）或者将水冷冻。高压冷冻是观察自然状态下含水结构的唯一方法。高压冷冻所形成的冰不是六边形冰（从水变为六边形冰时体积会增加）而是无定形冰，因此体积保持不变。所以，对渗透和温度变化敏感的结构得以保留（见文章“高压冷冻基础介绍”）。要观察诸如细胞器、细胞膜、乳胶或液体的表面界面等结构，冷冻断裂是唯一的方法。通过刀片（或类似物）或释放弹簧负载的外力来破开冷冻样本，并沿着最小阻力线断裂样本。图2：冷冻断裂（来源：http://en.wikibooks.org/wiki/Structural_Biochemistry/Lipids/Membrane_Fluidity） 水的升华与凝结 – 冷冻蚀刻与污染要暴露冷冻断裂面，需要把冰去除。这就需要通过把断裂面的冰升华去除以保存样品的结构。升华的过程是冰不经过液态过程直接转化为气态。而液态过程会导致样品体积和结构的破坏。图3：ES，细胞外表面；PF，细胞膜冷冻断裂面；EF，细胞膜外层冷冻断裂面；FS，细胞膜内表面；Cyt，细胞质水的升华/冷凝过程取决于特定温度下的饱和压力，以及水或冰在室内的有效水分压。注意：良好的真空度会降低水分压。例如：温度为-120℃的冰或冰冻样本饱和压力约为10-7 mbar。如果样品室内达到这个压力，则冷凝和蒸发处于平衡状态。蒸发的分子数量等于冷凝的分子数量。在更高压力下，冷凝速度要快于升华速度 – 因此冰晶会在样本表面上生长。必须采取一切手段来避免这种情况。样本上方一个较冷（比样本更冷）的冷阱会降低局部压力，从而起到了冷凝阱的作用。从样本中带出的水分子优先附着在较冷的表面上。在低于饱和压力的压力下，更多的分子升华而不是冷凝，同时会发生冷冻蚀刻。执行冷冻蚀刻直到样本完全无冰，这一过程称为冷冻干燥。仅适用于合理时间内执行的小样本。该过程分为几个步骤，需要从大约-120℃加热到-60℃，同时在每个步骤上使温度保持一定时间。该过程需要几天的时间来完成。图4：饱和蒸汽压力（感谢Umrath 1982提供的图片）样本温度低于-120℃时，蚀刻速度非常慢，蚀刻持续时间会增加到不切实际的程度。如果真空室的压力固定，则可以通过提高样本温度来提高蚀刻速度。对于生物样本，要特别小心温度高于-90℃。蚀刻速度会大幅提高。另外，要注意玻璃态冰中形成六边形冰晶从而导致脱水伪像。纯水的理论升华速度会降低，因为：• 样本深处的水升华速度比表面的水更慢。• 盐和大分子溶剂会降低升华速度。• 生物样本中大量存在的结合水会降低升华速度。通过冷冻断裂生成图像冷冻断裂和冷冻蚀刻技术往往采用高真空精细镀膜技术，将超细腻重金属和碳薄膜沉积于断裂表面。冷冻断裂样本在一定角度下用金属覆盖，然后在碳背衬膜（徕卡EM ACE600冷冻断裂或徕卡EM ACE900与徕卡EM VCT500）上生成复型进行TEM成像或在SEM的试块面上进行成像。对于这两种方法，冷冻断裂表面经过一定的蚀刻时间后以相同的方式进行镀膜。首先在一定角度下进行一层薄的（2-7nm）重金属镀膜，以形成地形对比度（阴影）。其次再针对重金属薄膜，在90°下进行一层厚的碳层（15-20nm）镀膜，以稳定超薄电子束蒸发。此时的蚀刻处理会停止。要对极小的结构进行成像，需要在极低的角度（2–8°）镀膜重金属并在镀膜期间旋转样本。这样可增加细丝状及其它细小结构的对比度。此项技术又称为小角度旋转投影。蒸镀重金属薄膜需要采用电子束蒸发镀膜技术。这种镀膜技术可实现精细定向沉积。碳的支撑层稳定了未被金属覆盖的结构。随着温度的升高，这些结构会改变它们的轮廓，样本不会完全导电，复型也不会粘在一起。冷冻断裂酵母的单向投影图5：低温SEM，BSE（背散射电子）图像。Walther P, Wehrli E, Hermann R, Müller M.（1995）双层镀膜获取高分辨率低温SEM。J Microsc. 179, 229-237。图6：复型，TEM图像（感谢Electronmicroscopy ETH Zürich提供图片）。Walther P, Wehrli E, Hermann R, Müller M.（1995）双层镀膜获取高分辨率低温SEM。J Microsc. 179, 229-237。图7：徕卡高压冷冻，真空冷冻传输至冷冻断裂系统中，利用电子束发射枪和旋转样本底座来进行冷冻蚀刻和低温镀膜。徕卡真空冷冻传输至低温SEM。油/水基样品，–100℃（升华）3分钟暴露油脂结构。图8：徕卡高压冷冻，真空冷冻传输至冷冻断裂系统中，利用电子束发射枪和旋转样本底座来进行冷冻蚀刻和低温镀膜。徕卡真空冷冻传输至低温SEM。原生生物游仆虫混合培养的羽纹硅藻。感谢英国波特斯巴NIBSC的Roland Fleck博士提供图片图9：徕卡冷冻断裂系统及徕卡真空冷冻传输至低温SEM的HPF、冷冻断裂、冷冻蚀刻和低温镀膜。油/水基乳液破裂，露出洋葱状薄片结构，形成液滴。感谢汉堡拜尔斯多夫Stefan Wiesner博士提供的图片。图10：TEM中的酵母细胞复型。经徕卡高压冷冻和徕卡冷冻断裂复型制备。感谢Elektronenmikroskopie ETH Zürich提供的图片。图11：大麦叶上的真菌。安装于徕卡冷冻断裂仪样本台上，并通过冷却样本台在液氮下进行冷冻。徕卡冷冻断裂仪对样品进行部分冷冻干燥（在更高的样本温度下冷冻干燥）。使用钨镀膜。徕卡真空冷冻传输至低温FESEM 5keV。相关产品徕卡EM ACE900 高端EM样本制备冷冻断裂系统徕卡EM VCT500了解更多：徕卡官网

p　　国家蛋白质科学研究（上海）设施（简称：上海设施，网址：http://www.sibcb-ncpss.org/）是国家重大科技基础设施，是全球生命科学领域首个综合性的大科学装置。上海设施位于浦东新区张江高科技园区中区西部（上海市海科路333号）。/pp　　上海设施旨在成为具有国际竞争力的蛋白质科研设施，同时拥有国际一流的蛋白质科学设施平台以保障国内外科研用户的高效实验平台及高质量科研设施的需求；聚集培养生命科学与生物技术特别是蛋白质研究的人才，提升国家蛋白质研究能力；进而促进我国蛋白质基础研究的飞跃发展。上海设施将立足于国家生命科学与生物技术及相关研究领域雄厚的研究基础和创新实力，成为兼具蛋白质科学研究、技术及成果的转化、集成和应用平台的国家级的重要科学研究单元。/pp　　上海设施现因工作扩展的需要，面向社会公开招聘冷冻电镜管理技术员2名。受聘者将有机会接受此技术的全面培训。/pp　　一、招聘岗位名称及人数：/pp　　冷冻电镜系统120KV 管理技术员1名/pp　　冷冻电镜系统200KV 管理技术员1名/pp　　二、工作职责:/pp　　冷冻电镜系统120KV管理技术员岗位职责：/pp　　1. 负责管理120KV电镜及其附属设备的日常维护和部分维修工作。/pp　　2. 负责电镜用户的上机测试服务、制样设备及电镜使用培训及技术支撑。/pp　　3. 负责用户课题的初步技术审核、电镜机时的预约和机时的统计。/pp　　4. 高压冷冻-冷冻替代电镜制样以及负染制样、超薄切片制备等工作。/pp　　5. 负责系统备品备件的预算、采购执行、仓库管理及报销等工作。/pp　　6. 领导安排的其他工作。/pp　　冷冻电镜系统200KV管理技术员岗位职责：/pp　　1. 负责管理200KV电镜的日常维护和部分维修工作。/pp　　2. 负责电镜用户的上机测试服务、制样设备及电镜使用培训及技术支撑。/pp　　3. 负责冷冻样品杆和干泵以及冷冻制样仪器的日常维护和部分维修工作。/pp　　4. 负责用户课题的初步技术审核、电镜机时的预约和机时的统计。/pp　　5. 完成领导安排的其他工作。/pp　　三、任职条件:/pp　　1. 已有或即将获得生物化学、细胞生物学、生物物理等相关专业全日制本科以上学历；/pp　　2. 有生物电镜、结构生物学等研究经验者优先；/pp　　3. 热爱平台工作性质，积极主动，有团队精神；/pp　　4. 有较好的英语听、说、阅读能力；/pp　　5. 为人诚实，易于沟通，身体健康，能长期稳定工作。/pp　　四、招聘方式及程序:/pp　　1、应聘材料：/pp　　（1）《附件：img src="/admincms/ueditor1/dialogs/attachment/fileTypeImages/icon_doc.gif"/a title="" href="http://img1.17img.cn/17img/files/201710/ueattachment/ff416f6f-237b-4788-a3d4-2cf136bb3bfd.docx" target="_blank" textvalue="应聘人员信息登记表.docx》；"应聘人员信息登记表.docx》；/a（点击附件名称下载）/pp　　（2）应聘函，包括对应聘岗位的理解、认识及工作设想等；/pp　　（3）个人简历（包括联系电话、电子邮箱）；/pp　　（4）2封推荐信；/pp　　（5）有关材料：身份证复印件、学历及学位证书复印件、相关资格证书复印件、获奖证书复印件等；/pp　　（6）个人认为重要的其他材料。/pp　　2、资格审查/pp　　对应聘者进行资格审查，通过初审者，将另行通知面试时间和地点。/pp　　3、请将上述材料的电子版或扫描件发至hr-ncpss@sibcb-ncpss.org（请在应聘材料和邮件主题栏注明应聘岗位和姓名，按如下格式：“姓名—应聘部门—应聘岗位”），本岗位招满前有效。/pp　　4、谢绝来电来访，应聘材料恕不退还，招聘单位将予以保密。/pp　　5、上述岗位按照公开报名、资格审查、面试、决定聘任的程序和方法进行。/pp /p

p style="text-align: center "span style="color: rgb(31, 73, 125) "strongEppendorf 5910 R 台式高速多功能冷冻离心机/strong/span/pp style="text-align: center"img src="http://img1.17img.cn/17img/images/201808/insimg/dc0472e5-ebea-4277-ac39-9623c4dd51a1.jpg" title="Centrifuge-5910-R.png"//pp　　型号：5910 R/pp　　品牌： Eppendorf/pp　　供应商报价： 面议/pp　　参考报价： 13万-18万 (备注：实际价格11万-17万间)/pp　　样本： 暂无/pp　　产地：德国/pp　　5910 R 台式高速多功能冷冻离心机 核心参数/pp　　最大离心力 22,132 x g/pp　　典型配置 水平转子离心机/pp　　仪器功能 冷冻离心机/pp　　仪器种类 台式离心机/pp　　产地类别 进口/pp　　离心等级 生物大分子/pp　　尺寸 770x660x370 mm/pp　　最大转速 14,000 rpm/pp　　最大容量 4*750 mL/pp　　特征参数 高速离心机/pp　　全新 5910 R 台式高速冷冻离心机离心容量高达 4 × 750 mL，新型水平转子可实现离心管、离心瓶及工作板的离心—无需更换转子吊篮和适配器。/pp　　本款离心机在实现高通量和高性能的同时，还兼具精致小巧的外观和人体工程学的操作。采用备受欢迎的 5920 R 高速冷冻离心机的现代化用户操作界面和高级温控管理系统，为您带来全新体验。/pp　　strongspan style="color: rgb(31, 73, 125) "S-4x通用水平转子/span/strong/pp style="text-align: center"img src="http://img1.17img.cn/17img/images/201808/insimg/3bb1f303-104f-42f9-a8e7-c57d5e8cf59c.jpg" title="Rotor-S-4xUniversal_conicals-50+DWP.jpg"//pp　　S-4 x 通用水平转子具有出色的多用途性--一个吊篮，可实现离心管、离心瓶和工作板的离心。/pp　　 “三合一”组合适配器：一个适配器，可离心 50 mL 锥底管、250 mL 平底瓶、175-225 mL 锥底瓶和 96/384 孔微孔板/pp　　 “二合一”组合适配器：一个适配器，可离心 5 mL、15 mL 和工作板/pp　　strongspan style="color: rgb(255, 0, 0) "优势：/span/strong/pp　　通用转子、通用吊篮与适配器，节省更换的时间，提升效率，且可选择QuickLock 气密性吊篮盖，方便操作。/pp　　 节约时间：无需更换吊篮与适配器/pp　　 节省成本：组合适配器，节约购买多种适配器的选择/pp　　 节省空间：无需额外的空间保存不同的吊篮/pp　　简便而智能的操作系统/pp　　5910 R 离心机操作系统功能强大/pp　　 菜单操作式系统提供多语言选择，大型背光显示屏/pp　　 可储存多达99个用户自定义程序/pp　　 5个快捷程序按键，快速运行常用程序/pp　　 FastTemp pro 自动快速制冷编程功能，在预定的时间和日期自动快速制冷/pp　　产品特性/pp　　 水平吊篮和多种适配器选择，适用于 0.2 mL 至 750 mL 离心管和试剂瓶/pp　　 工作板转子可离心各类 MTP 微孔板、PCR 板、细胞培养板和深孔板/pp　　 固定角转适用于高离心力分子生物学应用，可离心 0.2 mL 至 50 mL 离心管/pp　　 最大相对离心力 22,132 × g(14,000 rpm)/pp　　 Eppendorf QuickLock® 气密性快速锁定转子盖和吊篮盖，便于快速操作/pp　　 轻轻一按即可关闭离心机盖/pp　　 静音操作，提供舒适的实验室环境/pp　　 占地面积小，节省了宝贵的实验室空间/pp　　 转子自动识别和失衡检测，确保离心安全/pp　　 温控范围：-11 ° C 至 40 ° C/pp　　 FastTemp 快速制冷功能/pp　　 FastTemp pro® 快速制冷编程功能，可以预先设定制冷时间和日期/pp　　 持续制冷功能，在离心结束后，仍维持设定温度 - 保护您的样品/pp　　 ECO 自动待机功能，8 小时(可调节)无使用后自动停止压缩机工作，节约能耗，延长压缩机使用寿命/pp　　 动态压缩机控制技术(DCC)，优化制冷性能/pp　　span style="color: rgb(0, 0, 0) "strong相关资料/strong/span/pp style="line-height: 16px "img src="/admincms/ueditor1/dialogs/attachment/fileTypeImages/icon_pdf.gif"/a href="http://img1.17img.cn/17img/files/201808/ueattachment/6dc08415-2e69-4ce5-a633-92170d4f8386.pdf"5910 R 台式高速多功能冷冻离心机.pdf/a/p

p style="text-align: center "strong第四届全国冷冻电子显微学与结构生物学专题研讨会在京举行/strong/pp　strong　仪器信息网讯/strong 2015年6月8日-11日，第四届全国冷冻a href="http://www.instrument.com.cn/zc/1139.html"电子显微/a学与结构生物学专题研讨会在北京举行，本次会议的主题为“中国冷冻电子显微学的新阶段”。这是冷冻电镜研究领域第一次独立举行的全国性会议，相比于2009年在中国电子显微学年会期间二三十人的一个分会场，此次会议的参加人数达到了近200人。来自海内外的华人学者共聚一堂，交流冷冻电子显微学的最新研究成果。/ppspan style="color:#0000ff "　strong　三十年的坚持与守望/strong/span/pp　　据了解，我国在该领域的研究起始于上个世纪八十年代，当时国内的条件非常艰苦，电镜都没有几台，更不用说计算机、软件系统。然而就是在当时那样艰苦的条件下，以清华大学隋森芳院士为代表的老一辈科学家因为看好这一技术的发展前景，依然坚持推进我国在这一领域的研究工作。同时，一直以来许多海外学者对于国内冷冻电子显微学的发展给予了极大的支持和帮助。/pp　　隋森芳在此次会议中多次提到海外学者对于我国冷冻电子显微学发展的贡献。他说：“我们所有这个领域的人都不能忘记他们的贡献。在上个世纪90年代，国内的条件非常困难，我们还处在起步阶段。王大能、周正洪他们这些在国外都已经很有名的学者，每次回来都会来我们的实验室，不分日夜的帮我们安装软件、调试程序，手把手的教学生制样，培养学生。一直到现在，程亦凡、隋海心、章佩君、徐晨等许多海外学者还经常到国内来交流和培训学生。”/ppspan style="color:#0000ff "　　strong迎来新的发展阶段/strong/span/pp　　近几年来，随着国家科研投入的加大以及一批优秀的海外学者回到国内。我国在该研究领域与国际先进水平的差距逐渐缩小。在本次会议上就有不少优秀的研究成果展示，如清华大学施一公教授研究组在世界上首次揭示了人源& #947 分泌酶复合物(& #947 -secretase)的精细三维结构 清华大学王宏伟、生物物理所刘迎芳课题组合作揭示了A型流感病毒RNA聚合酶复合体的三维冷冻电镜结构等。/pp　　另外，还有一些学者已经开始从事方法学的研究，尽力去发展完善这一技术。如：中科院生物物理所孙飞与中国科学院计算技术研究所张法合作开发了针对断层扫描成像三维重构算法ICON。/pp　　北京大学尹长城介绍说：“在2009年第一届会议上，只要是相关的研究，都可以在会议上作报告。但是现在只有高水平的研究成果才有机会展示。”美国匹兹堡大学教授章佩君也表示：“本次会议报告的水平非常高，我们看到了许多一流的研究成果。”/pp　　同时为了推进人才培养，近年来国内组织开展了一系列的培训班。如自2008年起每隔一年举行的郭可信电子显微学和晶体学暑期培训班，以及自2013年起每隔一年举行的国际冷冻电镜图像处理技术培训班和今年开始举行的冷冻电镜成像技术培训班。/pp　　当前，我国已经有许多年轻的学者成长起来，他们在国际顶尖的实验室做着非常出色的工作，如：英国MRC的白晓辰、畅磊福，还有美国加州大学洛杉矶分校的江健森等。/ppspan style="color:#0000ff "　strong　百尺竿头 更进一步/strong/span/pp　　虽然目前我国在该领域的研究取得了一定的成绩，隋森芳仍然提出：“国内冷冻电子显微学研究这5年的发展非常快，也有一些重要的成绩，但总的来说都还是点，整个领域还需要进一步发展。”/pp　　另外，国内科研的软环境与国外相比还是有一定的差距。中科院生物物理所黄小俊介绍说，“目前国内研究所需的一些耗材试剂，需要从国外采购，这样不仅耗时、遇到问题沟通交流也不是很方便。”据了解，有时遇到试剂质量问题，甚至会给科研人员的研究带来不必要的困扰，耽误研究进程。/pp　　还有伴随着国内冷冻电子显微学的快速发展，技术人才短缺的问题逐渐显现出来。在本次会议上，国家蛋白质科学研究中心(上海)研究员丛尧，还有浙江大学教授洪健都发出了求贤令，希望能有合适的人才加入工作。洪健在会议中表示：“由于待遇体制等方面的原因，引进课题负责人相对容易，要招到合适的冷冻电镜技术人员却很难。”/ppspan style="color:#0000ff "　strong　科研文化的坚守与传承/strong/span/pp　　近年来，随着冷冻电镜仪器、直接电子探测相机、图像处理算法的发展，冷冻电镜的分辨率取得了革命性的突破，吸引了越来越多研究人员的关注，许多以X射线晶体学、NMR为技术手段的研究人员也开始进入这一领域。/pp　　在隋森芳院士看来，我国冷冻电镜领域的研究人员就像一个大家庭，海内外的研究人员关系一直非常融洽。长期以来，大家相互帮助、相互支持，有很多的交流和合作。他殷切的期望这种文化氛围随着该领域人员队伍的壮大，依然能够得到很好的坚守和传承。/pp　　同时，隋森芳指出冷冻电镜的工作需要积累，要做好这一工作，需要从样品制备、电镜技术、结构解析，到问题的解决都要去学习，这是一个系列的完整的工作，切忌急功近利，要耐得住性子，仔细的做好这项工作。/pp　　据了解，到目前为止我国已经在清华大学、生物物理所、国家蛋白质科学中心(上海)采购并安装了最先进的Titan Krios透射电子显微镜，浙江大学的第一台Titan Krios即将落户，而电镜三维重构技术的发源地英国目前也只有一台类似的冷冻电子显微镜。王宏伟表示：“和老一辈科学家的艰苦条件相比，我们现在的科研环境好了很多，我们应该抓住机遇，做出更好的成绩。”/pp style="text-align: right "strong　　撰稿：秦丽娟/strong/pp style="text-align: center "a href="http://www.instrument.com.cn/webinar/icem2015/"img alt="" src="http://img1.17img.cn/17img/old/NewsImags/images/201565105926.gif" style="width: 600px height: 151px "//a/p

在2011年美国SPEX公司全新推出了6970EFM冷冻研磨机，比起舊款更为实惠、更为安全、处理量为舊款的2倍。　　与舊款不同之处如下:　　1.包括两个研磨室，研磨通量高，可同时使用二个6801样品瓶(1-100g)或者八个6751样品瓶(0.1-5g)。　　2.智慧型记忆功能，可以记忆并储存10组不同操作程序，实用又便利 设置编程，可使研磨室根据不同的指令独立运行，灵活性高。　　3.全密闭的液氮自动填充系统，无液氮泄露，操作员不直接接触液氮。　　更完整的信息请参考我们展场。　　http://www.instrument.com.cn/netshow/SH101334/C124842.htm6970EFM　　美国SPEX-中国独家总代理德可纳利科技集团　　最先进生化科技、生命科学和纳米科学的前处理和进样之设备仪器　　划世纪研究:　　• 1991年在ALPS发现的5300年前的冰人的骨头碎片进行前处理　　• 俄罗斯沙皇尼古拉斯二世遗体DNA检测　　• 美国航天局(NASA)对研磨月球和火星岩石土壤 - 解开外太空生命之谜　　• 911恐怖袭击、2003大海嘯遇难者确认

6月29日，中国政府采购网发布《中国疾病预防控制中心公共卫生创新计划项目-病原冷冻电镜结构研究平台和高通量数字玻片成像系统公开招标公告》，中国疾病预防控制中心拟以9260万元人民币采购一批仪器设备，包含300kv冷冻透射电子显微镜1台（套），200KV冷冻透射电子显微镜1台（套），冷冻双束电镜1台（套），120kv透射电子显微镜1台（套），工作站1台（套），高压冷冻仪1台（套），冷冻电镜投入式冷冻制样设备2台，辉光放电仪1台（套），等离子清洗仪1台（套），真空离子溅射仪1台（套），正置荧光显微镜 （FIB光电联用光镜）1台（套），倒置荧光显微镜1台（套），液氮罐1台（套），高通量数字玻片成像系统1台（套）。以上仪器均接受进口产品。采购需求：包号品目号品目名称数量（台/套）是否接受进口产品分包预算金额（人民币万元）备注11-1300kv冷冻透射电子显微镜1是9000非单一产品采购包核心产品1-2200KV冷冻透射电子显微镜1是1-3冷冻双束电镜1是1-4120kv透射电子显微镜1是1-5工作站1是1-6高压冷冻仪1是1-7冷冻电镜投入式冷冻制样设备2是1-8辉光放电仪1是1-9等离子清洗仪1是1-10真空离子溅射仪1是1-11正置荧光显微镜 （FIB光电联用光镜）1是1-12倒置荧光显微镜1是1-13液氮罐1是22-1高通量数字玻片成像系统1是260单一产品采购包交货期合同签订后12个月内交货地点/项目现场中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所指定地点用途实验备注：本项目采购标的对应的《中小企业划型标准规定》所属行业为：工业采购标的需满足的质量、安全、技术规格、物理特性等要求：第1包 品目1-1 300kv冷冻透射电子显微镜一、技术参数：1、分辨率 ▲1.1、信息分辨率：≤0.12nm1.2、点分辨率：≤0.25nm1.3、线分辨率：≤0.14nm2、电子枪2.1、采用场发射电子枪2.2、使用寿命≥1年2.3、束斑漂移：≤0.5nm/min （10分钟内平均束斑漂移）2.4、亮度：≥7.5*107 A/m2srV2.5、辐射安全：≤0.5uSv/hr@距离0.1米电子枪3、加速电压3.1、最高加速电压：≥300kV3.2、在80kV至300kV间加速电压连续可调4、照明系统4.1、完全平行光系统，可实现多模式照明，在TEM模式中对大视野和可变视野都能够平行照明。▲4.2、线性畸变≤0.5% (TEM模式在18k×和155k×放大倍数之间)5、控制系统：控制软件具备应用脚本软件，用户可自行编写程序控制电镜进行特定或某些复杂的实验。6、真空系统：无油真空系统。7．放大倍数7.1、TEM模式放大倍数范围100×-700,000×7.2 在任何放大倍数实现完全无旋转成像8、物镜8.1、相机长度范围：300mm-2,500mm8.2、焦距≥3.5mm 8.3、物镜极靴间距≥10mm8.4、球差系数：≤3mm8.5、色差系数：≤3mm8.6、物镜光阑：70um、100um9．样品台系统9.1、计算机控制≥4轴样品台9.2、X/Y轴行程≥2mm9.3、Z轴行程≥0.4mm9.4、最大倾斜角度：不少于±70°9.5、最大图像漂移：X/Y方向 ≤1μm(+/- 70°内倾转)9.6、重复性：≤ 400nm(3次重复测试 ) 10. 自动进样系统10.1、一次能够装载≥10个样品，并能够自动更换和转移样品，所有样品均可回收并重复使用。10.2、待用样品在低温样品停泊装置保持在冷冻状态≥120小时。10.3、能够自动补充液氮。10.4、冰生长率：≤1%/24小时 (透射信息损耗)10.5、最低温度：≤-170 ℃10.6、样品交换后漂移：交换40分钟后：≤0.035nm/s▲10.7、同一样品在镜筒内可以保持在冷冻状态，连续收集数据时间≥72小时。11、电镜操作 11.1、具有低剂量曝光功能。11.2、可设置多个用户的等级，每个用户之间的参数 设置相对独立。11.3、要求电镜安装所需房间高度≤4m。12、直接电子探测系统 12.1、像素数≥4000×4000像素。12.2、像素大小≥5μm12.3、电子计数读出模式下量子转化效率（300kV）：0 Nyquist，DQE≥ 0.85；1/2 Nyquist，DQE，≥ 0.65；1 Nyquist，DQE≥0.25。 12.4、超分辨读出模式下，最大画幅≥10000×8000像素。12.5、辅助相机：可伸缩式；采集矩阵≥4K×4K, 像素物理尺寸≥5μm。12.6、原厂集成数据采集软件。12.6.1、能够自动进行单颗粒数据收集包括自动扫描整个样品、测定冰层厚度、进行低剂量数据收集。12.6.2、能够进行自动化电子断层扫描数据采集。13、能量过滤器探测系统 (300kV)13.1、温度稳定性（狭缝漂移/24h）：≤1.5ev13.2、能量狭缝最小宽度：≤2ev13.3、图像几何畸变：≤0.5%13.4、图像色差畸变：≤0.4%13.5、探测器内部帧率：≥200fps14、相位板系统14.1、对比度增强≥140%14.2、采用无孔相位板系统14.3、可自动加热恢复14.4、可用区域≥80%14.5、相位偏转：40-80nC剂量时，≥0.2πRad二、主要配置：1、300kV冷冻电镜主机：1套2、直接电子探测器：1套（含辅助相机）3、能量过滤器系统：1套4、三维重构软件：1套 5、相位板：1个6、备用场发射灯丝：1根7、冷冻电镜配套UPS电源（断电情况下维持一小时）：1台 8、冷冻电镜上样专用耗材：1000套三、验收和培训1、工作流验证工作：采用标准样品，达到出厂要求。2、10天应用专家现场培训。3、根据项目进展情况进行安装。安装调试完成，符合厂家性能参数验收标准，培训后2个月内，用户进行验收，验收合格后开始计算质保期。 4、供货周期：合同签订后12个月内。5、质保期：3年（包括电镜主机，包括相机，循环水机和空压机）。6、负责电镜安装场地（≤80㎡）环境改造，满足设备使用要求的电磁场、震动、温度、湿度、噪声及地线的指标。品目1-2 200KV冷冻透射电子显微镜一、技术参数：▲1、信息分辨率：≤0.23nm。2、加速电压2.1、最高加速电压：≥200kV2.2、加速电压通过软件控制切换2.3、高压稳定性：≤1ppm/10min3、电子枪3.1电子枪类型：场发射超亮型电子枪，使用寿命≥1年▲3.2 束流：≥0.5nA@1nm束斑4、放大系统4.1 放大倍数：低倍≤100倍；高倍≥650,000倍 4.2 相机长度范围：250mm-2.5m5、真空系统5.1、采用无油真空系统，由机械泵、涡轮分子泵和离子泵等构成5.2、真空度：电子枪真空度≤5 x10-7 Pa；样品区真空度≤2.7 x10-5 Pa6、物镜6.1、球差系数：≤3mm6.2、色差系数：≤3mm7、自动进样系统7.1 一次能够装载和更换≥10个样品，并能够自动更换和转移样品。待用样品在低温样品停泊装置保持在冷冻状态连续无污染存放时间≥72小时。样品可以回收和重复使用。7.2、能够自动补充液氮。7.3、冰生长率：≤5%/24小时 (透射信息损耗)7.4、最低温度：≤-170 ℃7.5、样品交换后漂移：交换60分钟后，≤0.05nm/s8、样品台 8.1、X/Y轴行程：不少于±1mm；8.2、Z轴行程：不少于±0.35mm；8.3、最大倾斜角度：不少于±70°；9、直接电子探测系统 9.1、像素矩阵≥4000×4000像素9.2、像素大小≥5μm9.3、超分辨读出模式下，最大画幅≥ 10000×8000像素9.4、原厂集成数据采集软件。9.4.1、能够自动化地进行单颗粒数据收集——自动扫描整个样品，测定冰层厚度，进行低剂量数据收集。9.4.2、能够进行自动化的电子断层扫描数据采集。10、相机系统10.1、像素数≥4000 ×4000像素10.2、像素大小≥10μm10.3、读取速率：≥1 fps@4kx4k；≥25 fps@512x51211、电镜操作11.1、具有低剂量曝光功能。11.2、可设置多个用户等级，每个用户之间的参数设置相对独立。二、主要配置：1、200kV冷冻电镜主机：1套2、直接电子探测器系统：1套3、相机：1套4、备用场发射灯丝：1根 5、配套UPS电源（断电情况下维持一小时）：1套6、三维重构软：1套 7、电镜主机配套操作和数据收集软件:1套三、售后服务：1、供货周期：合同签订后12个月内。2、质保期：验收合格后3年（包括相机，循环水机和空压机、电镜主机）。3、负责电镜安装场地（≤60㎡）环境改造，满足设备使用要求的电磁场、震动、温度、湿度、噪声及地线的指标。品目1-3 冷冻双束电镜一、设备用途： 用于冷冻电子断层三维重构样品的制备工作。二、技术参数1、电子源： 1.1、肖特基场发射电子枪；1.2、使用寿命：≥9个月；1.3、束流范围：1.5pA-300nA；1.4、加速电压范围：500V-30kV；▲1.5、冷冻状态分辨率（冷台）：≤6nm@ 2kV2、 离子源 2.1、离子源寿命：≥1000小时；2.2、加速电压范围：500V -30kV； 2.3、离子束流：1.5pA–50nA范围内≥12挡可选；2,4、具备针对非导电样品的漂移抑制模式；▲2.5、离子束分辨率（冷冻状态）：≤7.0nm@30kV3、真空系统 3.1、无油真空系统；3.2、仓室真空度：室温，≤4*10-4 Pa；冷冻，≤8*10-5 Pa；4、冷冻样品台 4.1、可旋转冷台，冷冻条件下旋转范围：≥360°；4.2、冷冻降温时间：≤30min；4.3、XY轴行程：≥50mm；4.4、Z轴行程：≥40mm；4.5、冷冻状态下倾斜角范围：-10°~ +50°；4.6、冷冻温度：≤ -170℃；5、图像处理 5.1、图像存储格式：TIFF（8bit, 16bit或24bit）、BMP、JPG；5.2、图像存储矩阵：≥ 6000×4000像素；5.3、电子扫描旋转：≥360°5.4、驻留时间范围（扫描）：25ns/pixel-25ms/pixel；6、冷冻机械臂6.1、机械臂针尖温度：≤-160°6.2、机械臂漂移：≤250nm/min6.3、集成红外观测相机，用于样品和腔室观测；6.4、内置样品沉积保护层，可以待剪薄切片层保护，避免被离子束损伤； 6.2、内置喷镀装置，对冷冻下的剪薄切片进行导电化处理。三、主要配置：1、双束主机：1套2、空压机、循环水机、UPS电源：1套3、光电联用软件：1套4、电镜主机操作系统软件：1套5、耗材5.1、备用场发射灯丝：1根5.2、备用离子源：2个5.3、上样耗材：100个四、售后服务：1、供货周期：合同签订后12个月内。2、质保期：验收合格后3年（包括相机，循环水机和空压机、电镜主机）。3、负责电镜安装场地（≤40㎡）环境改造，满足设备使用要求的电磁场、震动、温度、湿度、噪声及地线的指标。品目1-4 120kv透射电子显微镜一、技术参数：1、物镜1.1、线分辨率≤0.2nm 1.2、放大倍数：30×-600,000×，放大倍数全程连续可调，包含所有模式。1.3、恒定功率双物镜设计，具备高对比度模式，配置物镜高对比度极靴。1.4、焦距≥3mm1.5、极靴间距：≥10mm2、电子源2.1、热电子型电子源 ▲2.2、加速电压：20 kV-120kV2.3、高电压切换时间：≤1分钟3、照明系统3.1、照明模式：具备平行光模式和汇聚束模式3.2、透镜级数：≥2级聚光镜，用户可选强度限制（用于样品保护）和缩放限度（用于恒定屏幕强度）。4、成像系统▲4.1、成像系统：CPU控制≥6级透镜系统，物镜、中间镜和投影镜均≥2级。4.2、图像不随放大倍数放大而旋转， XY样品移动方向，XY坐标不变。4.3、衍射长度：0.1-8m。4.4、探测相机（速度≥40fps）和主相机，探测相机实现远程控制电镜。4.5、全自动控制聚光镜光阑、物镜光阑系统。4.6、可自动聚焦，并调整欠焦量。4.7、自动补偿：可以自动补偿合轴、自动补偿图像旋转。5、真空系统5.1、配置机械泵、分子泵和离子泵构成的无油真空系统。5.2、镜筒真空度：冷却温度下，≤2×10-5 Pa；环境温度下≤3.5×10-5 Pa6、样品台6.1 样品杆：单倾样品杆6.2、样品移动：6.2.1、样品移动：CPU控制≥5轴马达驱动。6.2.2、样品位移：X/Y：≥2 mm，调节步长≤0.05 μm；Z：≥0.70 mm。6.3、样品台倾斜角：不少于±80◦，调节步长≤0.5◦6.4、漂移：≤1 nm/min（标准样品杆）7、主相机 7.1、像素矩阵：≥4k×4k 7.2、像素大小：≥10um7.3、冷却方式：水冷7.4、图像存储模式：tiff、jpg、bmp、gif等各式自由转换。二、主要配置要求：1、120kV冷冻电镜主机：1套2、主相机：1套3、备用六硼化镧灯丝：3支4、备用钨灯丝：50支 5、120kv配套 UPS电源：1台6、主机配套标准操作软件：1套三、售后服务：1、供货周期：合同签订后12个月内。2、质保期：验收合格后3年（包括相机，循环水机和空压机、电镜主机）。3、负责电镜安装场地（≤20㎡）环境改造，满足设备使用要求的电磁场、震动、温度、湿度、噪声及地线的指标。品目1-5 工作站一、用途：用于300kv和200kv 冷冻电镜的数据存储和数据处理。二、技术参数： 1. 工作站：4台1.1架构：4U机架式服务器 1.2内存：32*32G DDR4 ECC1.3 GPU：8*英伟达 V100 1.4 CPU：2*英特尔Gold 6230R CPU1.5 SSD：2*4TB；机械硬盘≥14T1.6网络连接：2*万兆网口 1.7电源和风扇：配置2000W冗余电源及风扇2.存储服务器：1台2.1架构: 4U机架式服务器 2.2内存: 4*32G DDR4 ECC2.3 CPU:2*英特尔Silver 4210 CPU2.4 SSD:2*480G2.5加速盘：4*480G SSD2.6机械硬盘：1P 2.7网络连接: 2*万兆网口 2.8电源和风扇: 配置2000W冗余电源及风扇3. 下载服务器：1台3.1 CPU：1*英特尔W-22453.2 内存：2*32GB DDR4 ECC 3.3 硬盘：1*480G SSD；2*8T HDD4.提供配套的机柜，万兆网线，交换机，服务器搭建的配套附属设备。5.提供配套的软件部署，数据采集，数据处理等技术支持培训的服务。6. 负责工作站安装场地（≤40㎡）环境改造，满足设备使用要求的电磁场、震动、温度、湿度、噪声及地线的指标。品目1-6 高压冷冻仪一、主要技术指标：1. 电量消耗2. 维持主机运行液氮消耗≤80L/天。3. 高压冷冻每样品液氮消耗≤80mL。4. 允许冷冻不同样品，≥9（3x3）个冷冻循环。5. 样品存储杜瓦瓶可自动旋转定位多个存储位置。6. 无需乙醇等溶液作为冷冻同步溶液。7. 每次冷冻循环之间的复原时间≤1分钟。8. 维持主机运行时噪声值9. 高压冷冻样品时噪声值10. 玻璃化厚度（有效冷冻固定厚度），≥200μm。11. 工作压力2000-2600 bar。12. 彩色图像触摸屏设计控制面板，（用户可自行设置工作流程），冷冻完成后数据可通过USB导出。13. 冷冻速率：12000K/s -25000K/s。14. 剩余液氮自动排放。15. 设有工作照明灯：LED环形照明。16. 样品冷冻杜瓦瓶监测液面高度，自动填充。17. 配备观察用显微镜。 17.1光学系统：变焦，变倍式光路系统，保证在任何倍率下都可以呈现鲜明、清晰的图像。17.2变焦比≥6.3 ：1，变焦范围：0.65X-4X。17.3观察镜筒：高眼点双目镜筒，大倾角（≥35°），瞳距可调节。 17.4配备宽视野*10倍目镜、视场数≥23 mm，屈光度可调节。17.5 至少内置1倍物镜，且工作距离≥110mm。品目1-7 冷冻电镜投入式冷冻制样设备一、数量：2套二、主要技术指标：1. 工作温度：18-25℃2. 相对湿度：90%-100%3. 液氮环境下栅格从冷却剂转移至栅格盒:半自动4. 双面拍合或单面拍合5. 可编辑拍合时间6. 吸附压力可调7. 有杜瓦瓶液氮可烘烤8. 触屏控制和踏板控制9. 一次可转移≥2个Grid box10. 小体积样品：可使用吸液管通过人工气候室左侧和右侧的小口手动应用11. 应用时间和等待时间：由软件控制，可在用户界面设置。12. 多样品应用、吸干动作和玻璃化时间控制：精确定时控制13. 吸干设备14. 样品吸干方式: 过滤纸吸15. 吸干动作次数和吸干持续时间：≥10次/样品，由软件控制，可在用户界面设置。16. 吸干补偿及排液时间：软件控制，可由用户定义17. 玻璃化18. 自动遮板控制19. 冷却剂容器和微栅样品杆温度控制:同步降低温度可保持微栅浸没在冷却剂内20. 冷却剂容器包括整合式抗污染圈品目1-8 辉光放电仪一、主要技术指标1. 辉光放电电流 0-30mA2. 样品台直径≥75mm，带玻片用滑槽3. 样品台高度1-25mm可调4. 样品腔内腔尺寸：直径≥100mm，高度≥90mm5. 工作真空范围1.1-0.20mbar 品目1-9 等离子清洗仪一、主要技术指标1. 清除系统：芯片控制系统2. 工作模式：真空清除透射样品杆和污铜网样品的污染3. 样品杆：TEM4. 时间设定：0-30min , 1min/步5. 真空系统：干泵无油真空系统6. 真空级别：120秒内达到最高真空7. 室温控制：15℃-30℃8. 电源：AC100V-240V，50Hz±1 Hz品目1-10 真空离子溅射仪一、主要技术指标1. 真空度：5x10-5 mbar2. 样品仓大小：硼硅酸盐玻璃工作腔室，内径≥100mm，高≥125mm3. 靶面至样品台距离：可调范围为20-50mm4. 溅射电流：0-40mA5. 溅射时间：0-999s6. 溅射速率：（在压力为7Pa,放电电流40mA，靶材距离样品30mm时）Pt≥15nm/min，Pt-Pd≥20nm/min，Au≥35nm/min，Au-Pd≥25nm/min7. 最大样品尺寸：直径≥60mm，高度≥20mm8. 靶材：根据需要，可选配Au，Pt，Au-Pd，Pt-Pd，C 品目1-11 正置荧光显微镜 （FIB光电联用光镜）一、主要技术指标1. 光学系统：无限远校正光学系统，保证光通过目镜到物镜整个光路中的所有棱镜及镜片时的绝对平行；2. 具有明场、相差功能，具有顶部双摄像出口；3. 物镜转换器≥七孔位；4. 放大倍数：50X-1000X；5. 透射光照明：12V100W卤素灯照明器；6. 调焦：带有三档调焦装置；调焦旋钮高度可调节；7. 宽视野三目镜筒：视野≥25mm，分光比例0/100%,50/50%,100/0%（可100%分光给照像部分）；8. 载物台：低位置同轴驱动旋钮的高抗磨损性陶瓷覆盖层载物台；用户可自己将操作杆左右手更换；X-Y移动无暴露齿条；9. 荧光光源：光源寿命≥2000h，红绿蓝三色带滤块；10. 光学部件：10.1万能聚光镜：带有孔径光阑的聚光镜，有效光阑刻度上具有彩色标注且与物镜颜色代码对应；10.2目镜：10X宽视野目镜，视野数为≥22mm；11. 图像捕捉及分析系统；12. 摄录系统；12.1数字式科研级数码、彩色冷CCD；12.2 CCD芯片规格：≥2/3”，≥500万像素；12.3像素大小≥3μm；13. CCD工作温度：低于室温20℃；14. 曝光时间：1msec- 60sec；15. 彩色深度：36位RGB色彩深度。品目1-12 倒置荧光显微镜一、主要技术指标1. 研究级高端倒置显微镜手动版，支持明场、荧光、相差功能。支持多模块扩充功能；2. 主机：2.1手动物镜转换器和手动粗微轴调焦（最小微调刻度单位：≤1μm），行程≥12mm，粗调旋钮扭矩可调，备有上限调节；2.2侧光路出口，视野直径≥19mm；2.3具有控制面板，含光强控制和光强按钮；2.4备有6孔物镜转盘；2.5具有侧接口，可百分百手动分光至相机或目镜。3. 光学系统：无限远校正光学系统，齐焦距离≥45mm。4. LED透射光照明装置：带TTL光闸，寿命≥30000小时。5. 观察镜筒：双目镜筒，观察角度可在30-45度范围内调节。6. 目镜：10×，视场直径为≥24mm。7. 手动载物台，配有样品移动尺、通用型标本托板和各种孔板夹，可匹配多种培养板、皿及玻片。8. 聚光镜：8.1编码型固定式，配备相差环。8.2聚光镜顶透镜：数值孔径≥0.4；工作距离≥40mm。9. 物镜：9.1 4X或5X：平场半复消色差荧光相差物镜，数值孔径≥0.12，工作距离≥14.0mm。9.2 10X：平场半复消色差荧光相差物镜，数值孔径≥0.32，工作距离≥11.13mm。9.3 20X：半复消色差长工作距离荧光相差物镜，数值孔径≥0.55，工作距离≥6.9mm。9.4 40X：半复消色差长工作距离荧光物镜，带矫正环，数值孔径≥0.6，工作距离3.3-1.9 mm。10. 荧光设备：10.1光学载体：保护荧光无杂散光干扰。10.2手动外置荧光轴模块，内含透镜组。10.3荧光滤块转盘：≥6位，可最多安装5个荧光滤块。10.4荧光挡板：荧光使用期间可保护使用人眼睛。10.5荧光激发块 10.5.1 DAPI（蓝色）荧光滤块，激发350/50nm，分光镜400 nm， 发射460/50 nm 带通10.5.2 FITC（绿色）荧光滤块，激发470/40 nm，分光镜510 nm，发射515 nm长通10.5.3 TXR（红色）荧光滤块，激发560/40 nm，分光镜585 nm，发射630/75 nm带通10.6荧光光源：长寿命荧光光源，质保寿命≥3000小时，随开随关，不影响使用寿命，≥5档光强调节。11. 彩色制冷相机：≥500万真实像素，拍摄时分辨率可调，支持彩色、黑白模式，致冷温度-20℃，曝光时间4微秒-200秒，全像素模式下≥40帧/秒。品目1-13液氮罐一、技术参数1. 250L 22psi低压液氮罐 6个2. 165L 22psi低压液氮罐 1个3. 200L 350psi高压液氮罐 1个4. 35L样品存储罐 4个 5. 4L样品转移罐 8个6. 样品运输盒 8个6.1 旋转透明盖，底座内螺纹，四孔各有编号6.2 常温TEM载网和冷冻载网通用第2包 品目2-1高通量数字玻片成像系统一、工作条件1、环境温度：20°C-30°C；2、环境湿度：≤85%（25℃）；二、技术要求1、扫描系统主机：1.1、全自动数字玻片扫描系统具有明场扫描、荧光扫描等多种成像功能，不同成像方式电动切换；1.2、单次样品装载量≥90张，可以持续添加玻片；1.3、系统具有显微成像光路，明场科勒照明；1.4、可通过软件编辑控制流程；1.5、多相机配置。预览相机快速识别拍摄样品及标签，明场扫描通过彩色相机成像；荧光扫描通过黑白相机成像；1.6、聚光镜：电动聚光镜1个，兼容强度传输方程（TIE）成像模式；1.7、像素分辨率：20x物镜下，≤0.50μm/pixel；40x物镜下，≤0.50μm/pixel；60x以上物镜下，≤0.30μm/pixel；1.8、电动扫描载物台，行程≥300×100mm；1.9、Z轴对焦范围≥3mm；1.10、可识别条形码，二维码，OCR码；2、物镜：2.1、≥20×物镜：平场复消色差物镜，数值孔径≥0.75，W.D.工作距离≥0.6mm2.2、≥40×物镜：平场复消色差物镜，数值孔径≥0.95，W.D.工作距离≥0.2mm▲2.3、≥60×物镜：平场复消色差物镜，数值孔径≥1.4，W.D.工作距离≥0.1mm▲2.4、配自动加油器，配合60X以上油镜使用，实现全自动扫描；3、样品舱室及兼容玻片：3.1、单次装载数量≥90片（玻片尺寸≥25mmx75mm），可以持续添加玻片；3.2、每张玻片相互隔离，待机和扫描时始终保持水平状态；3.3、配备样品上样器，用于快速装载玻片；3.4、兼容多种规格的玻片。4、扫描速度：4.1、明场扫描：使用20×/0.75物镜、扫描分辨率≤0.50μm /pixel、扫描面积15mm×15mm时，所用时间≤75s；4.2、荧光扫描：使用20×/0.75物镜，≥6个荧光通道成像，扫描分辨率≤0.50μm/pixel、扫描面积15mm×15mm时，所用时间≤500s。5、明场扫描：5.1、光源：LED光源，波长范围：400-700nm；▲5.2、具有自动Z轴扫描成像及景深扩展功能；5.3、明场扫描配置彩色相机，物理像素≥2400(H)×2000(V)。6、荧光扫描： 6.1、光源：配备LED光源或长寿命金属卤化物光源，激发波长范围400-700nm； ▲6.2、电动荧光转盘孔位≥6位，通道之间切换时间≤50ms；6.3、具有强度传输方程（TIE）照明模式，并能为一个单独通道成像，可与荧光图像叠加；6.4、荧光滤色片：可实现多色荧光标记的样品成像；6.5、荧光扫描单色相机：物理像素≥2000(H)×2000 (V)。7、扫描工作站：7.1、硬件7.1.1、CPU：≥6核，主频≥3GHz7.1.2、内存≥128G；固态硬盘≥4TB7.1.3、独立显卡，显存≥8GB7.1.4、彩色液晶显示器≥32英寸7.1.5、操作系统：Windows系统 7.1.6、打印机：彩色激光打印机7.2、扫描及图像处理软件：7.2.1、控制所有电动硬件、识别处理信息、图像可视化；7.2.2、自动程序化图像采集：个性化设定图像采集程序，自动完成≥150张样品扫描；7.2.3、具有预扫描和导航功能；7.2.4、多维图像采集：多通道成像、Z-Stacks成像、拼图及多点成像等；7.2.5、多种聚焦策略可选，满足不同类型样品的大视野拼图；7.2.6、自动对焦：可设定相应的聚焦地形图，自定义编辑样本聚焦点位置；7.2.7、具备图像压缩模式，可设定图像压缩比率7.2.8、图像格式：JPG、TIFF、BMP等；7.2.9、可进行同屏比较；7.2.10、测量参数包含长度、面积和角度等7.3 图像分析软件7.3.1 全景图像数据分析软件，具有免疫组化/免疫荧光切片中细胞核、细胞质、细胞膜染色的识别、阴性/阳性细胞计数、 染色强度分析、细胞阳性比率统计。7.3.2可进行明场图像免疫组化组织及细胞定量分析，自动化进行单个视野或者整张玻片阳性及阴性组织的精确识别，阳性及细胞的细胞核，细胞浆，细胞膜等区域的精确识别，并导出各类分析结果数据；7.3.3免疫荧光组织及细胞定量分析，自动化进行单个视野或者整张玻片多通道荧光图像的阳性及阴性组织的精确识别，量化细胞核、细胞膜、细胞浆中免疫荧光标记物表达，并导出各类分析结果数据。7.3.4 可自定义输出分析数据，包括：组织面积，阳性及阴性区域面积数据及阳性区域百分比等数据；阳性及阴性细胞数量、细胞长度、面积、周长、交界长度、H-Score评分等数据；光谱特征、真实染色空间、滤镜和（前后关联）特征。8、数字玻片成像系统的全部软硬件均为同一厂家提供，产品软硬件售后支持和维修也由同一厂家负责。三、主要配置：1、高通量玻片成像主机：1台2、图像扫描工作站：1台3、图像扫描软件：1套4、图像分析计算机：1套5、图像分析软件：1套6、校正用明场校正玻片、荧光校正玻片各1个四、售后服务1、质保期：安装完毕后24个月或发货之日起30个月免费质保,以先到为准。2、安装调试及应用培训：由专业人员负责安装、调试；安装过程中负责介绍仪器操作、日常保养注意事项；提供现场操作培训及操作手册。3、培训：仪器到位之后，由工程师完成培训，帮助用户掌握仪器的基本操作。4、出现问题在报修后24小时内相应，3个工作日内相关人员到达机器所在地点启动后续维护维修工作。

仪器信息网讯南方科技大学于11月22日公开招标发布，针对“冷冻电镜项目二期采购”项目，预算2.83亿元采购4套300kV场发射冷冻透射电子显微镜、4套其它电子显微镜相关设备、45套蛋白样品制样及冷冻电镜实验室通用设备、13套细胞样品制备设备等。其中4套300kV场发射冷冻透射电子显微镜预算金额为2.18亿元。　　据报道，2018年11月19日，南方科技大学冷冻电镜中心揭牌，中心将安装300千伏冷冻电镜6台，200千伏冷冻电镜2台，120千伏电镜2台，共计10台冷冻透射电子显微镜及其它71台/套相关辅助仪器和样品制备设备，全部建成后，将是我国配套最齐全、最先进的冷冻电镜实验室。　　4套300kV场发射冷冻透射电子显微镜招标信息如下表：招标时间招标单位相关招标名称数量预算金额金额小计11月22日南方科技大学300kV冷冻电子显微镜，直接电子探测器,相位板，生物样品能量损失谱仪1套4700万元2.1808亿元300kV冷冻电子显微镜，直接电子探测器,相位板，能量损失过滤器1套4700万元300kV冷冻电子显微镜，直接电子探测器,相位板，球差校正器,能量损失谱仪1套5200万元300kV冷冻电子显微镜，直接电子探测器,相位板，球差校正器,色差校正器，能量损失过滤器1套7208万元　　项目背景如下：　　在生命科学领域，运用高分辨冷冻电子显微镜、电子断层三维重构、光镜-电镜联合等手段，研究蛋白质大分子及细胞精细结构已经成为当今生命科学的最前沿。应用这些设施在超低温冷冻条件下研究蛋白质大分子复合物和细胞的三维空间结构，解决了许多生命科学研究中的重大科学问题，成为Science，Nature，Cell，PNAS等国际知名刊物生命科学的主流方向。　　华南地区300kV级别的冷冻透射电镜数量极少，限制了研究蛋白质大分子空间结构以及细胞三维动态结构的条件，涉及细胞生物学、神经生物学、结构生物学等国际前沿课题的研究手段匮乏，严重影响了华南地区生命科学、医学、药学等诸多学科的创新性研究进程。为了使我校在高端生物医学冷冻电镜硬件方面成为华南区的研究中心，为生命科学、医学、药学、也包括材料科学和环境科学等提供一流的分析测试硬件条件，促进各学科的交叉，在现有冷冻电镜中心上更加完善高端仪器设备，需要购置最高端的冷冻透射电镜，以及相应的制样设备和计算分析系统。　　300kV冷冻透射电镜是高端冷冻电镜平台的主体，作为目前世界上最先进的冷冻透射电镜，具有高分辨率、高稳定性、全自动远程控制等优异性能，可进行冷冻电镜单颗粒、单轴或双轴ElectronTomography、扫描透射ElectronTomography、二维电子晶体学(如MicroED)的研究。　　项目货物总清单如下表：序号采购计划编号货物名称数量单位备注财政预算限额（元）一201800361007300kV场发射冷冻透射电子显微镜4台接受进口218,080,000二201800361007其它电子显微镜相关设备4台接受进口15,660,000三201800361007蛋白样品制样及冷冻电镜实验室通用设备45台接受进口6,110,000四201800361007细胞样品制备设备13台接受进口37,220,000五201800361007GPU计算工作站6套接受进口6,000,000　　招标技术要求如下表：序号货物名称招标技术要求1300kV场发射冷冻透射电子显微镜1.1300千伏冷冻电子显微镜，直接电子探测器,相位板，生物样品能量损失谱仪1.分辨率1.1信息分辨极限：小于0.14nm1.2点分辨率：小于0.25nm1.3线分辨率：小于0.14nm2．电子枪▲2.1采用热场发射超亮电子枪.2.2使用寿命长于1年。3.加速电压▲3.1加速电压最高为300kV4．照明系统▲4.1三聚光镜完全平行光系统完全平行光系统，可实现多模式照明，在TEM模式中对大视野和可变视野都能够平行照明。4.2线性畸变小于1%5．控制系统控制软件提供应用脚本软件，方便用户自行编写程序控制电镜进行特定或某些复杂的实验。6．真空系统6.1采用无油真空系统。7．放大倍数范围大于100× ～700,000× 8．相机长度范围大于250mm～2,500mm9．样品台系统9.1X/Y轴行程不小于2mm▲9.2Z轴自动控制行程不小于0.7mm9.3最大倾斜角度不小于± 70° 10.自动进样系统▲10.1一次性能够装载和更换12个或以上样品，并能够自动更换和转移样品。待用样品在低温样品停泊装置保持在冷冻状态连续无污染存放时间不小于4天（96小时）。10.2能够自动补充液氮。10.3冰生长率：低于0.2nm/小时10.4最低温度：小于-170℃10.5样品交换后漂移交换5分钟后：小于1.2nm/s交换15分钟后：小于0.45nm/s交换30分钟后：小于0.25nm/s交换60分钟后：小于0.05nm/s11.电镜操作11.1具有低剂量曝光功能。11.2有用户等级并可设置任意多个用户，每个用户之间的参数设置相对独立。12.直接电子探测系统▲12.1像素数大于4000× 4000像素▲12.2像素大小大于14μm▲12.3DQE大于0.45@1/2Nq(300kV快速模式)；DQE大于0.6@1/2Nq(300kV电子计数模式)12.4数据收集的自动化：能够自动化地进行单颗粒数据收集——自动扫描整个样品，测定冰层厚度，并选择区域进行低剂量数据收集；能够进行自动化的电子断层序列图像数据采集工作，在倾转过程中能够进行位置对中、焦距矫正和曝光时间调整；13．相位板系统13.1对比度增强大于140%▲13.2采用Volta相位板系统13.3可自动加热恢复14.三维重构14.1最大倾角：大于± 70° 14.2三维重构软件包括：提供电镜原厂集成数据采集软件一套14.3最大图像漂移：X/Y方向小于2μm(+/-70° 内倾转)14.4重复性：小于400nm(样品杆重复3次进入15．冷却水循环系统、空压机设备各1套。15．样品快速冷冻装置1套1.2300千伏冷冻电子显微镜，直接电子探测器,相位板，能量损失过滤器1.分辨率1.1信息分辨极限：小于0.14nm1.2点分辨率：小于0.25nm1.3线分辨率：小于0.14nm2．电子枪▲2.1采用热场发射超亮电子枪.2.2使用寿命长于1年。3.加速电压▲3.1加速电压最高为300kV3.2提供300kv和200kv预对中4．照明系统▲4.1三聚光镜完全平行光系统完全平行光系统，可实现多模式照明，在TEM模式中对大视野和可变视野都能够平行照明。4.2线性畸变小于1%5．控制系统控制软件提供应用脚本软件，方便用户自行编写程序控制电镜进行特定或某些复杂的实验。6．真空系统6.1采用无油真空系统。7．放大倍数7.1放大倍数范围大于100× ～700,000× 8．相机长度8.1长度范围大于250mm～2,500mm9．样品台系统9.1X/Y轴翕动行程不小于2mm▲9.2Z轴自动行程不小于0.7mm9.3最大倾斜角度不小于± 70° 10.自动进样系统▲10.1一次能够装载和更换12个或以上样品，并能够自动更换和转移样品。待用样品在低温样品停泊装置保持在冷冻状态连续无污染存放时间不小于4天（96小时）。10.2能够自动补充液氮。▲10.3冰生长率：低于0.2nm/小时10.4最低温度：小于-170℃10.5样品交换后漂移交换5分钟后：小于1.2nm/s交换15分钟后：小于0.45nm/s交换30分钟后：小于0.25nm/s交换60分钟后：小于0.05nm/s11.电镜操作11.1具有低剂量曝光功能。11.2有用户等级并可设置任意多个用户，每个用户之间的参数设置相对独立。12.直接电子探测系统▲12.1像素数大于4000× 4000像素▲12.2像素大小大于14μm▲12.3DQE大于0.45@1/2Nq(300kV快速模式)；DQE大于0.6@1/2Nq(300kV电子计数模式)12.4数据收集的自动化：能够自动化地进行单颗粒数据收集——自动扫描整个样品，测定冰层厚度，并选择区域进行低剂量数据收集；能够进行自动化的电子断层序列图像数据采集工作，在倾转过程中能够进行位置对中、焦距矫正和曝光时间调整；13．相位板系统13.1对比度增强大于140%▲13.2采用Volta相位板系统13.3可自动加热恢复14.三维重构14.1最大倾角：大于± 70° 14.2三维重构软件包括：提供电镜原厂集成数据采集软件一套14.3最大图像漂移：X/Y方向小于2μm(+/-70° 内倾转)14.4重复性：小于400nm(样品杆重复3次进入15．冷却水循环系统、空压机设备各1套。16．样品快速冷冻装置1套17.底插式能量过滤器：配备最新一代能量过滤系统，可以实现能量过滤成像；能量分辨率小于0.8ev1.3300千伏冷冻电子显微镜，直接电子探测器,相位板，球差校正器,能量损失谱仪1.分辨率1.1信息分辨极限：小于0.14nm1.2点分辨率：小于0.25nm1.3线分辨率：小于0.14nm2．电子枪▲2.1采用热场发射超亮电子枪.2.2使用寿命长于1年。3.加速电压▲3.1加速电压最高为300kV4．照明系统▲4.1三聚光镜完全平行光系统完全平行光系统，可实现多模式照明，在TEM模式中对大视野和可变视野都能够平行照明。4.2线性畸变小于1%4.3配备物镜球差校正器5．控制系统控制软件提供应用脚本软件，方便用户自行编写程序控制电镜进行特定或某些复杂的实验。6．真空系统6.1采用无油真空系统。7．放大倍数范围大于100× ～700,000× 8．相机长度范围大于250mm～2,500mm9．样品台系统9.1X/Y轴行程不小于2mm▲9.2Z轴自动控制行程不小于0.7mm9.3最大倾斜角度不小于± 70° 10.自动进样系统▲10.1一次性能够装载和更换12个或以上样品，并能够自动更换和转移样品。待用样品在低温样品停泊装置保持在冷冻状态连续无污染存放时间不小于4天（96小时）。10.2能够自动补充液氮。▲10.3冰生长率：低于0.2nm/小时10.4最低温度：小于-170℃10.5样品交换后漂移交换5分钟后：小于1.2nm/s交换15分钟后：小于0.45nm/s交换30分钟后：小于0.25nm/s交换60分钟后：小于0.05nm/s11.电镜操作11.1具有低剂量曝光功能。11.2有用户等级并可设置任意多个用户，每个用户之间的参数设置相对独立。12.直接电子探测系统▲12.1像素数大于4000× 4000像素▲12.2像素大小大于14μm▲12.3DQE大于0.45@1/2Nq(300kV快速模式)；DQE大于0.6@1/2Nq(300kV电子计数模式)▲12.4配CMOS辅助相机一套，4Kx4K,像素物理尺寸不小于14μm，动态范围不低于16bit，可伸缩式12.5数据收集的自动化：能够自动化地进行单颗粒数据收集——自动扫描整个样品，测定冰层厚度，并选择区域进行低剂量数据收集；能够进行自动化的电子断层序列图像数据采集工作，在倾转过程中能够进行位置对中、焦距矫正和曝光时间调整；13.能量过滤器直接电子探测系统▲13.1高分辨率电子采集记录装置：直接电子探测器,无需光电转换▲13.2点阵尺寸大于5Kx4K▲13.3象素点大小不大于5.7µ m13.4DQE@1/2Nq(300kV):大于0.4▲13.4读出速度：大于1000frame/s13.5底插式能量过滤器：配备最新一代能量过滤系统，可以实现能量过滤成像；成分分析；能量分辨率小于0.8ev；14．相位板系统14.1对比度增强大于140%▲14.2采用Volta相位板系统14.3可自动加热恢复15.三维重构15.1最大倾角：大于± 70° 15.2三维重构软件包括：提供电镜原厂集成数据采集软件一套15.3最大图像漂移：X/Y方向小于2μm(+/-70° 内倾转)15.4重复性：小于400nm(样品杆重复3次进入16．冷却水循环系统、空压机设备各1套。17．样品快速冷冻装置1套1.4300千伏冷冻电子显微镜，直接电子探测器,相位板，球差校正器,色差校正器，能量损失过滤器1.分辨率1.1信息分辨极限：小于0.14nm1.2点分辨率：小于0.25nm1.3线分辨率：小于0.14nm2．电子枪▲2.1采用热场发射超亮电子枪.2.2使用寿命长于1年。3.加速电压▲3.1加速电压最高为300kV3.2提供300kv和200kv预对中4．照明系统▲4.1三聚光镜完全平行光系统完全平行光系统，可实现多模式照明，在TEM模式中对大视野和可变视野都能够平行照明。4.2线性畸变小于1%▲4.3用户定制图像矫正系统（可根据用户需求进行调整）5．控制系统控制软件提供应用脚本软件，方便用户自行编写程序控制电镜进行特定或某些复杂的实验。6．真空系统6.1采用无油真空系统。7．放大倍数7.1放大倍数范围大于100× ～700,000× 8．相机长度8.1长度范围大于250mm～2,500mm9．样品台系统9.1X/Y轴翕动行程不小于2mm▲9.2Z轴自动行程不小于0.7mm9.3最大倾斜角度不小于± 70° 10.自动进样系统▲10.1一次能够装载和更换12个或以上样品，并能够自动更换和转移样品。待用样品在低温样品停泊装置保持在冷冻状态连续无污染存放时间不小于4天（96小时）。10.2能够自动补充液氮。▲10.3冰生长率：低于0.2nm/小时10.4最低温度：小于-170℃10.5样品交换后漂移交换5分钟后：小于1.2nm/s交换15分钟后：小于0.45nm/s交换30分钟后：小于0.25nm/s交换60分钟后：小于0.05nm/s11.电镜操作11.1具有低剂量曝光功能。11.2有用户等级并可设置任意多个用户，每个用户之间的参数设置相对独立。12.直接电子探测系统▲12.1像素数大于4000× 4000像素▲12.2像素大小大于14μm12.3DQE大于0.45@1/2Nq(300kV快速模式)；DQE大于0.6@1/2Nq(300kV电子计数模式)12.4配CMOS辅助相机一套，4Kx4K,像素物理尺寸不小于14μm，动态范围不低于16bit，可伸缩式12.5数据收集的自动化：能够自动化地进行单颗粒数据收集——自动扫描整个样品，测定冰层厚度，并选择区域进行低剂量数据收集；能够进行自动化的电子断层序列图像数据采集工作，在倾转过程中能够进行位置对中、焦距矫正和曝光时间调整；13．相位板系统13.1对比度增强大于140%13.2采用Volta相位板系统13.3可自动加热恢复14.三维重构14.1最大倾角：大于± 70° 14.2三维重构软件包括：提供电镜原厂集成数据采集软件一套14.3最大图像漂移：X/Y方向小于2μm(+/-70° 内倾转)14.4重复性：小于400nm(样品杆重复3次进入15．冷却水循环系统、空压机设备各1套。16．样品快速冷冻装置1套17.底插式能量过滤器：配备最新一代能量过滤系统，可以实现能量过滤成像；能量分辨率小于0.8ev二其它电子显微镜相关设备2.1直接电子探测器1.高分辨率电子采集记录装置：直接电子探测器,无需光电转换2.点阵尺寸大于5Kx4K3.象素点大小不大于5.7µ m4.DQE@1/2Nq(300kV):大于0.45.读出速度：大于1000frame/s2.2CMOS相机1.单像素尺寸14μm2．可伸缩式3.安装位置：底装4.操作电压：最大电压至400keV5.Lowdose低剂量观测：有，减少电子束对样品的辐射损伤6.动态范围：16位2.3CMOS相机1.单像素尺寸55μm2.512X512像素3.安装位置：底装4.操作电压：最大电压至200keV5.读取速率：在512× 512时 1300幅/秒三蛋白样品制样及冷冻电镜实验室通用设备3.1自动载网投入冷冻仪1.单面液体吸附2.乙烷致冷方式：液氮致冷；3.环境仓温度控制范围：+4℃至+60℃；4.环境仓湿度控制范围：室内湿度至90%；5.乙烷容器温度：-100° C～-196° C，可自由设定；6.乙烷容器容积大于2mL；7.制备好的冷冻样品临时存放温度小于-196℃；8.可以控制冷冻样品制备参数：加样后停留时间，滤纸吸附时间，吸附后停留时间，滤纸吸附力度；9.冷冻样品制备时间参数控制精度小于0.5秒；10.需具备冷冻样品制备防冰污染装置；11.具备液晶触屏控制器，可存储大于5组程序；3.2等离子清洗仪1.用途：用于除去透射电镜样品及样品杆上的污染，防止碳沉积以降低图像分辨率及对样品微区分析造成误判。还可利用该仪器清洗各类光阑等电子显微镜配件。特别适用于场发射透射电镜和场发射扫描电镜。用这种低能高频等离子体清洗样品表面，不会改变样品元素成份和表面结构特征2.具有独立控制流量气氛通道。通入气体压力为25psi。3.无油真空系统：泵体部分由多级隔膜泵和超静音分子泵组成，真空度可达10E-4Pa等级，分子泵抽气速度达80L/s，在保证真空度的同时，可在两分钟之内达到抽真空和放气过程；整个清洗过程在4分钟内可以完成。4.配备清洗FEI电镜样品杆接口适配器5.可清洗扫描电镜样品载台及不规则样品，侧拉门设计样品舱，最大样品尺寸65mm直径，38mm高。6.基本真空6.7e-4Pa，操作真空66.7Pa。7.换样抽真空时间 1分钟。8.射频功率2W到65W之间调节，可无任何损伤清洗多孔碳支持膜9.清洗时间：一般普通污染样品 2分钟，严重污染的样品 10分钟10.重现性：可以自动记录下同类产品清洗的条件，下次清洗同类产品时可同样条件进行11.触摸屏式电脑控制，可以控制等离子清洗功能以及分子泵抽气功能3.3辉光放电亲水处理仪1.辉光电流：0-30mA2.高压功率：30W3.样品台：Ø 75mm，25x75mm载玻片槽4.样品台高度：1-25mm5.工作时间：0-900sec6.样品室尺寸：Ø 120*100mmH7.真空控制：潘宁规8．工作真空度：1.1-0.20mbar9.参数设置：3寸屏设置10.操作模式：自动/手动可选3.4真空镀膜机1.极限真空：5E-6Torr2.抽气速度：30分钟内从大气抽到5E-5Torr3.镀膜均匀性和重复性3.14英寸片片内均匀性优于± 5%4.2阀门控制/蒸发过程控制，泵操作和通过PLC控制的软件互锁4.3提供下列操作模式：自动抽真空自动放气手动–允许手动操作（通过触摸屏）维修模式–包含所有手动控制功能，只有硬件互锁仍然有效3.5喷碳镀膜机1.主要用于通过离子溅射或碳丝蒸发方式，对样品表面进行均匀的金属或碳镀膜，实现非导电样品的导电处理，适宜于SEM观察及能谱/波谱分析；2.系统包括真空系统.离子溅射和碳丝蒸发模块.辉光放电模块.样品台等组成，可兼容冷冻传输系统3.全自动程序控制，自动完成抽真空，镀膜，放气等过程；4.脉冲式碳丝蒸发方式，可精确控制碳膜厚度；5.内置石英膜厚检测器，精确控制镀膜厚度.精度小于O.lnm；6.触摸屏控制，简单方便；7.采用隔膜泵和涡轮分子泵，无油真空系统，隔膜泵流速大于13L/min，涡轮分子泵流速大于66L/s，真空度小于2x10-6mBar8.溅射电流范围0至150mA可调9.采用方形样品仓，尺寸大小大于宽200mmx深150mmx高195mm；10.样品台内置旋转，工作距离调节范围30-100mm；11.配有样品冷台和用于冷冻断裂的钨钢刀具3.6金属镀膜机1.真空室尺寸：150mm直径x165mm高2.蒸发源：直径6.15mm高纯碳棒3.样品台：12孔样品台支架样品台距碳棒高度为60mm4.真空度：一级Atm-0.001mb二级1x10-3mbto5x10-6mb5.工作电流：0-200A6.控制方式：自动程序控制模式和全手动操作模式7.时间设置：1-30seconds8.电压设置0.1-5.5V9.放气模式：自动10.分子泵抽气速率：80l/sec.11.抽气时间：1.5min（常压到1X10-4mbar）12.极限真空度：5X10-6mbar3.7自增压液氮存储罐1.直径（毫米）：大于5082.高度（毫米）大于16353.最大液氮容量（升）：大于1864.空罐重量（公斤）：小于935.可用液氮容量（升）：大于1806.蒸发率（升/天）：小于0.01257.TC-DOT额定（巴）：6.98.安全卸压阀（巴）：1.59.内胆安全膜(巴)：1210.全景液位仪11.特强筒顶支承12.全围圈式避震环13.尼龙网套作运输保护3.8样品存储罐1.静态保持天数(天）:大于1302.工作时间（天）：大于813.蒸发率（升/天：）小于0.274.液氮容量（升）：大于355.空罐重量（公斤）：小于17.26.满罐重量（公斤）：小于45.57.瓶颈直近（毫米）：小于1198.总高度（毫米）：小于6819.提桶数量（个）：大于1010.提桶尺寸(毫米)：小于67× 27911.2ml冻存管容量（支）：大于10203.9液氮转移罐1.静态保持天数(天）:大于102.液氮容量（升）：大于43.空罐重量（公斤）：小于34.满罐重量（公斤）：小于6.25.瓶颈直近（毫米）：小于306.总高度（毫米）：小于4327.外径（毫米）：小于1933.10液氮转移罐1.静态保持天数(天）:大于1092.液氮容量（升）：大于253.空罐重量（公斤）：小于10.54.满罐重量（公斤）：小于30.85.罐口直径（毫米）：小于646.总高度（毫米）：小于6557.外径（毫米）：小于3968.可以选配液氮回收装置9.可以选配液氮倾倒装置10.可以选配长柄勺11.可以选配脚轮底座3.11样品运输罐及运输盒1.静态保持天数:大于162.工作时间（天）：大于113.蒸发率（升/天：）小于0.234.液氮吸附量（升）：大于3.75.空罐重量（公斤）：小于5.36.满罐重量（公斤）：小于8.37.瓶颈直近（毫米）：小于918.总高度（毫米）：小于4939.提桶数量（个）：1个10.2ml冻存管存放量：102个11.提桶尺寸(毫米)：67× 27912.新概念吸附剂，快速吸附液氮13.国际航空运输协会（IATA）许可运输容器14.盖子有密封涂层，配套安全锁3.12大容量液氮存储罐1.样品容量：大于6000个2.0ml标准冻存管。2.样蒸发率(升/天)：小于0.843.冻存架顶层温度达到小于-190℃4.满重（公斤）：小于186.45.空罐重（公斤）：小于556.静态保持天数：大于1947.工作时间（天）：大于1208.液氮总容量：大于165升9.罐口直径：大于216mm10.外直径(毫米)：小于68311.罐体总高度：小于991mm12.盖子有密封涂层，配套安全锁13.冻存架数量：614.冻存架层数；1015.液位报警器：可选配3.13液氮存储罐辅助装置回收3.14液氮存储罐辅助装置脚轮3.15液氮存储罐辅助装置倾倒四细胞样品制备设备4.1大体积样本多能反卷积成像系统1．电子束分辨率1.1高真空模式：二次电子像分辨率小于0.8nm@15kV，小于0.8nm@1kV 1.2低真空模式：二次电子像分辨率小于1.2nm@15kV，小于1.8nm@3kV 2．电子束参数2.1着陆电压：20V~30kV▲2.2电子束流：1pA~400nA，连续可调 2.3物镜光阑：自动控制，加热自清洁2.4电子枪自动烘烤，自动合轴3．样品室和样品台▲3.1样品室从左到右内径大于340mm3.2分析工作距离大于10mm3.3扩展接口大于123.4EDS接受角：35度4．样品台及样品4.1五轴马达驱动全对中样品台。▲4.2移动范围：X大于110mm；Y大于110mm；Z大于65mm；倾斜T=-15~+90° ；R=360° 连续旋转4.3重复精度 2.0um(0° 倾角)4.4最大样品高度：到全对中高度为85mm4.5最大样品重量不低于：样品台在任何位置500克，可以达到2Kg@0° .4.6最大样品尺寸不低于：直径122mm无限制旋转（对更大的样品，可以放进去观察，但是，旋转有限制）5．探测器5.1配备T1分割式透镜内低位探测器5.2配备T2透镜内高位探测器5.3配备E-T二次电子探测器▲5.4配备低真空二次电子探测器5.5配备样品室红外CCD探测器IR-CCD▲5.6舱内一体化等离子清洗6．真空系统6.1完全无油真空系统6.21x220l/s涡轮分子泵(TMP)6.31xPVP-旋片式干泵6.42x离子泵(IGP)7．样品室真空度7.1样品室真空度（高真空模式）＜6x10-6mbar（24小时抽真空后）▲7.2样品室真空度（低真空模式）＜500Pa.8．图案处理器8.1电子束驻留时间：0.025-25,000µ s/象素8.2图像扫描：最高达6144x4096像素分辨率。8.3图像文件格式：TIFF(8，16或24-bit)，BMP或JPEG。8.4单窗口或四窗口图像显示。8.5SmartSCAN智能扫描技术(256帧平均或积分,线积分或平均,隔行扫描)DCFI(漂移补偿帧积分)4.2双束离子减薄成像系统1．电子光学系统▲1.1分辨率：1.1.1在最佳工作距离下；小于0.6nm@30kV；小于0.7nm@1kV1.1.2在束重合点：小于0.6nm@15kV；小于1.2nm@1kV1.2加速电压：200V～30kV1.3着陆电压：20V～30kV1.4电子枪：高稳定度肖特基场发射电子枪▲1.5电子束流：0.8pA～100nA，连续可调1.6灯丝寿命大于1年▲1.7物镜及光阑：恒功率物镜，物镜光栏应能自加热自清洁▲1.8浸入式电磁物镜2．样品台2.1样品台：最大水平宽度大于3mm@7mm工作距离大于7mm@60mm工作距离可通过图像拼接实现额外的观察视野3.样品室▲3.1内宽大于379mm3.2分析工作距离大于4mm3.3接口大于213.4可集成等离子清洗仪4．离子束4.1离子源寿命大于1000小时4.2加速电压500V～30kV4.3束流强度0.1pA～65nA4.4不少于15位孔光阑5．样品台5.1高精度5轴电动样品台，XY轴为压电陶瓷驱动▲5.2XY范围大于150mm5.3Z范围大于10mm5.3样品台旋转：360?× n5.4倾转范围：-10?～+60?5.5XY重复精度小于1um6．探测器6.1Elstar镜筒内SE/BSE探测器(TLD-SE，TLD-BSE)6.2Elstar镜筒内SE/BSE探测器(ICD)6.3Everhardt-Thornley二次电子探测器(ETD)▲6.4DSB可伸缩式低电压高对比度透镜背散射探测器6.5红外相机，用于检查样品和镜筒▲6.6Nav-Cam™ 样品室导航相机7．真空系统7.1无油真空系统7.2由涡轮分子泵，前级机械泵，和离子泵组成7.3样品室真空度：优于2.6× 10-6mbar（连续抽真空24小时后）7.4排气时间：小于5分钟8.支持软件8.1最多可支持4窗口实时图像8.2图像登记功能，可在导入的图像中进行样品导航8.3可直接导入BMP位图文件或流文件8.4图像拼接功能4.3冷冻离子减薄系统1.电子源：1.1肖特基场发射电子枪；1.2使用寿命：大于12个月；1.3连续可控的束流设计；1.4双物镜设计▲1.5束流范围：大于1.5pA–400nA；1.6加速电压范围：大于200V–30kV；▲1.7分辨率：小于6nm@2kV(冷冻状态下)；1.8配置自动光阑1.9电子减速功能，实现低电压着陆，着陆电压：小于5kV2.离子源2.1采用液态镓金属离子源；2.2寿命：大于1200小时；2.3加速电压范围：大于500V–30kV；▲2.4离子束流：1.5pA–65nA，不少于15步可调；2.5针对非导电样品标配漂移抑制模式；2.6分辨率：小于7.0nm@30kV(冷冻状态下)；3.真空系统3.1完全无油真空系统；3.2腔室真空度（室温）：＜4× 10--4Pa；3.3腔室内真空度（冷冻）：＜6× 10-5Pa；4.冷冻样品台4.1可旋转冷冻样品台4.2旋转范围：大于360° 4.3冷冻降温时间：小于30min；▲4.4XY轴行程：大于110mm；4.5Z轴行程：大于65mm；4.6冷冻状态下倾斜角范围：-15° 至+55° ；4.7冷冻温度：小于-170℃4.8样品载网可直接在冷冻状态下转移至冷冻透射电镜，无需重新载样处理；4.9样品台大小：大于110mm× 110mm5.图像处理5.1图像存储格式：TIFF（8bit,16bit或24bit）.BMP.JPG；5.2图像存储分辨率：大于6144× 4096像素；5.3利用一体化图像软件，最大图片分辨率：64K× 64K；5.4电子扫描旋转范围：大于360° ；5.5驻留时间范围（扫描）：大于25ns/pixel至25ms/pixel；6.冷却水循环系统.空压机各一套：6.1连续冷却温度可调：5-40℃；6.2温度控制精度：小于0.1℃6.3冷却功率：大于1100W；6.4空压机容量大于4L7.主机其他主要参数7.1集成的红外观测相机，用于样品和腔室观测；7.2内置样品Pt沉积保护层设计，可以对待剪薄切片层保护，避免被离子束损伤；7.3内置喷镀功能，对冷冻下的剪薄切片进行导电化处理；7.4冷冻台传输须与双束主机为同一品牌，实现高度自动化操作；8.专业图像处理软件8.1可实现拼图功能，最多至64K× 64K图像拼接；8.2可以与其他品牌的光学显微镜联用，实现光电关联功能；8.3支持自动/半自动识别样品区域与校准4.4多功能修块机1.铣刀转速：300～20000rpm可调，LCD屏幕显示；2.铣刀控制：步进0.5.1.10.100μm可选，旋钮控制，步进计数LCD3.可修整最小样品面：200μm边长；4.配有抽提过滤装置；5.配有相同品牌体视显微镜，放大倍数7.5至60倍；6.配有多种样品夹具4.5临界点干燥仪1.应用于扫描电镜观察的样品制备，当CO2在特定的温度和压强下，气相和液相界面消失，达到临界状态。使浸泡在有机试剂中的样品过渡到CO2中，在其临界状态下干燥样品，从而达到完好保存样品外观结构的目的；2.样品室大于60× 62mm，容积大于175ml，可选配填充板，将容积降至30ml，有效降低CO2消耗量3.样品室顶部和前部有视窗，螺旋盖封闭设计，带有探测器；如样品室未关牢，系通会自动报警4.样品室LED照明，亮度可调；5.操作控制采用触摸屏设计，温度.压强.CO2灌注速率.CO2出气速率都由程序设定，用户可编程存储，有效提高重复性；4.6自动染色仪1.铜网数量大于20铜网/次2.试剂消耗量小于6ml/次，与所用程序相关；3.废液可分类收集4.可编程序数量大于10个5.清洗程序大于2个6.可编程的染色程序参数：4.7高压冷冻仪1.每个样品冷冻至液氮中所需时间小于1秒；2.液氮杜瓦瓶容量大于15L3.开机到主机冷却稳定液氮消耗量小于30L/天；4.每样品运行冷冻循环液氮消耗量小于80ml；4.高压冷冻速率12000K/s至25000K/s；4.玻璃化厚度（有效冷冻固定厚度）大于200μm；5.冷冻压力大于2100bar；6.一体化触摸屏控制面板，自带菜单提示，冷冻完成后温度/压力曲线显示，冷冻数据可通过USB导出存储7.多种样品装载系统，可对超大样品进行高压冷冻固定；4.8冷冻光镜电镜偶联系统1.系统用于从冷冻样品的样品制备仪器中，以快速.安全.无污染的标准转移样品到徕卡显微系统的固定载物光学显微镜中，所有过程均在低温条件下进行2.在移动至冷冻透射电镜之前，可在专用的荧光显微镜中节省时间识别你的ROI；3.系统运行冷却温度范围从-195℃至+25℃，加热温度范围从+25℃至+60℃；4.配有体积大于25L的杜瓦瓶，在22℃时冷却能力可保持大于24小时；5.从22℃降至-195℃需要时间小于10分钟；6.专用全电动正置荧光显微镜，配有100W卤素灯透射光照明，长寿命荧光光源，紫色.兰色.绿色窄通荧光激发滤块，具测量功能的电动载物台，高速高灵敏度数码相机；7.使用专用的冷冻物镜，工作距离大于0.28mm，最优分辨率小于385nm4.9真空冷冻传输系统1.系统用于无污染的冷冻样品传输，主要由传输装置.各种样品载架及冷冻样品装载工作站组成；2.可以在冷冻或常温.真空或保护气体条件下传输样品；3.连接制样流程，优化样品传输，随时监控样品的温度和真空度；4.可为所有应用提供标准和定制样品架，充分满足特定应用中对样品架的需求；5.保证样品在不同的制备和分析系统之间传输时得到有效保护，以免样品受到污染和形成冰晶；6.真空冷冻操作，随时连接，实现零污染样品处理；4.10光学显微镜1.采用HCS无限远校正光学系统，及完美设计令整个光学系统保证优越的高光亮度.高解像度及高衬比度影像，具有明场和数码成像功能；2.全金属主机，T型镜座设计，稳定性好，利用双金属热补偿调焦系统，有效增强机械性及热稳定性，有效减少积温引起的焦面漂移；3.二档同轴粗/微调焦系统，调焦驱动钮高.低位可调，适合不同大小的手掌贴着桌面操控调焦，有效降低手掌.手臂.肩膀的肌肉疲劳，具有载物台限位装置，能有效防止压碎标本；4.防止肩部劳损的对称操作设计，载物台驱动装置和聚焦按钮在显微镜上同一高度，并且离操作者的距离相同，形成对称操作，操作显微镜时，两手可以放在一条直线上，肩部与身体轴线成一直角；5.超硬浅米色镀陶瓷载物台，坚固耐刮.耐腐蚀，行程大于76mmx25mm；载物台驱动手柄可左.右更换，使左.右手操作皆为可能，另外可轻松实现XYZ轴单手调节，载物台钢丝传动，阻尼可调，扭矩可调，XY移动无暴露齿条，带刻度，可方便记录座标位置；6.单手可操作玻片夹，方便另一只手同时执笔记录，提高了工作效率；7.聚光镜顶透镜电动，10倍以下的物镜，聚光镜顶镜自动弹出，10倍以上的物镜，聚光镜顶镜自动弹入，聚光镜数值孔径0.9/1.25，孔径光栏具有彩色标记，并且与物镜放大倍数的颜色标记相匹配，带有物镜倍数标注8.六孔内倾式电动物镜转换器，高齐焦性.高同轴性，任意在所有物镜中转换或选定任何两个物镜之间切换，方便预览与观察；9.自动光强记忆功能，光强随物镜转换而相应变换，转换物镜无需调节亮度，避免急速改变光强给眼睛带来的伤害；10.宽视野三目镜筒，50%/50%分光，倾角30度，瞳距调节55-75mm，视场数大于25mm11.宽视野10倍目镜，高眼点，屈光度可调；12.采用LED冷光源照明，LED灯泡功率大于4W，寿命大于10万小时，配有中灰减光滤色片；13.采用高级平场消色差物镜，5倍物镜数值孔径大于0.12，10倍物镜数值孔径大于0.25，20倍物镜数值孔径大于0.40，40倍物镜数值孔径大于0.65，100倍物镜数值孔径大于1.25；14.与显微镜同品牌专业数码CCD，解析度大于500万像素（2592x1944）,1/2.3英寸彩色芯片，全分辨率（1920x1080像素）实时速度大于30幅/秒，提供1x-12x的电子增益，像素尺寸大于2.35微米x2.35微米，色彩深度大于24位，曝光时间从0.5ms到500ms，具有SD卡插口，可将图像.视频采集存储于SD卡内，具有HDMI接口，可与高清显示设备连接使用，进行镜下图像的实时预览.拍摄照片及动画(MP4)，并可实时回放，浏览，可配红外遥控器，可用于图像与视频采集，并控制摄像头，调节工作参数4.11体视显微镜1．整机光路设计采用格林诺夫光学原理2．主机变倍比大于9:1，最大放大倍数大于4403．1倍复消色差物镜，放大倍数6.1-55倍，分辨率大于500线/毫米，工作距离大于122毫米4．10倍目镜，视场数大于23mm，屈光度可调节5．双目观察筒，瞳距调节50-76mm，视场数大于23mm6．LED透射光和落射光底座，长寿命LED冷光源透射照明，灯泡寿命大于25000小时；五数据处理，存储，传输系统5.1GPU计算工作站1.GPU数：8块TeslaV1002.混合精度：1petaFLOPS3.GPU显存：256GB系统总容量4.CPU:双路20核英特尔至强E5-2698v42.2GHz5.NVIDIACUDA核心数量：409606.系统内存：512GB2133MHzDDR4RD1MM7.存储空间：4块1.92TBSSDRAID08.网络：双10GbE,4IBEDR9.软件：UbuntuLinux主机操作系统六其他#投标商认为需要的项目（如用户认可，可作为加分项）　　【招募时间】，聚焦仪器行业关注热点，仪器信息网仪器论坛特别开设“冷冻电镜(Cryo-EM)”版面，并于即日正式上线。旨在促进Cryo-EM学术交流和成果传播，为相关专家学者、一线用户等提供交流讨论在线平台。欢迎冷冻电镜专家学者前来分享互动!【版面链接】　　同时，为更好促进Cryo-EM技术交流、针对网友不同提问深入探讨，“冷冻电镜(Cryo-EM)”版面的版主专家招募活动正式开启，欢迎自荐或推荐合适人选!　　【申请条件】　　1.熟悉冷冻电镜的操作或样品制备等，具有一定的专业技术水平 　　2.乐于分享经验并解答版友求助问题。　　【版主专家职责】　　1.活跃论坛，规范版面秩序 　　2.发起话题，组织活动，引导讨论 　　3.积极解答版友的求助帖 　　4.发现推荐新版主、专家。　　【版主专家福利】　　1.仪器信息网科学仪器发展年会ACCSI(科学仪器行业年度盛会)针对版主、专家定向邀请，免费参会 　　2.仪器论坛协助版主、专家发展论坛个人品牌，塑造个人形象，提升版主、专家在科学仪器行业声望 　　3.仪器论坛每季度会进行优秀版主、专家评选，不仅有现金奖励，更会提供专属证书，为版主、专家证明荣誉 　　4.仪器信息每年举办的小蜜蜂奖励金评选(科学仪器行业内，对实验员名利双收的奖励)，会着力关注用户在论坛中的表现，仪器论坛优先举荐合格的版主、专家。　　【申请方法】　　方法一：加微信xyz4077(小叶子)　　方法二：填写表单——仪器信息网论坛冷冻电镜版面版主专家招募链接

各部门、各学会成员：根据《河南省食品科学技术学会团体标准管理办法》、《河南省食品科学技术学会团体标准制定程序（试行）》的规定，学会标准化专业委员会对《冷冻肉解冻失水率的测定 恒温循环水浴解冻法》团体标准进行了立项评审，所申报的团体标准符合立项条件，现批准立项。请各起草单位严格按照有关规定和要求组织开展团体标准制定工作，严把标准质量关，增强标准的适用性和有效性，按时完成标准编制工作。 河南省食品科学技术学会2023年11月13日河南省食品科学技术学会关于《冷冻肉解冻失水率的测定 恒温循环水浴解冻法》团体标准立项的公告.pdf

苏州市莱顿科学仪器有限公司www.sepu17.cn www.laidun17.com www.labhc.cn 电话：0512-66325740 传真：0512-68027230TGL-16台式高速冷冻离心机（带NO.1角转子） 惊爆价：RMB10500.00促销，数量有限，欲购从速。。。。。。原价：RMB21800.00 TGL-16台式高速冷冻离心机产品的特点：· 体积小巧，节约实验室空间。 · 采用全钢结构，不锈钢离心腔。 · 直流无刷电机驱动，运行平稳，宁静。 · 触摸面板、大屏幕液晶屏显示。 · 运行中可随时更改参数，无需停机。 · 自动计算并同步显示离心力RCF值。 · 设有短时离心专用点动键。 · 10档加减速控制，最快升速25秒。 · 15组程序存储空间，用户可自由编程，调用。 · 电子门锁。 · 采用进口制冷压缩机组，确保最高转速下温度保持在4℃以下。 · 故障自诊断系统，运行中检测到超速、转速丢失、超温、门盖异常开启等故障，立即减速停机，提高仪器安全性能。TGL-16台式高速冷冻离心机技术参数型号TGL-16支持电源AC 220± 22V 50Hz 10A温度精度± 2℃最高转速16000r/min总功率600W最短加/减速时间30s/25s最大相对离心力17800xg整机噪声 57dB（A）转速精度± 50 r/min最大容量12× 5 ml外形尺寸（长× 宽× 高）630× 350× 300（mm）转子识别/定时范围1min～99min外包装尺寸（长× 宽× 高）820× 460× 440（mm）净重45 Kg温度设置范围?-20℃～+40℃离心腔直径Ф250mm毛重65 Kg压缩机组进口高性能压缩机组、无氟制冷剂 转子参数转子号转子订货号名称容量最高转速最大相对离心力挂杯、挂架、吊篮订货号名称规格适配器订货号名称规格NO.1809100角转子12x1.5ml16000r/min17800× g///805005适配器0.2ml805004适配器0.5ml TGL-16台式高速冷冻离心机

上海卢湘仪离心机仪器有限公司作为专业生产离心机的企业，生产历史悠久、技术力量雄厚，深受业内欢迎。近期上海卢湘仪又传来重大消息，即山东某制药厂又订购了一批上海卢湘仪L800R大容量冷冻离心机。 据了解，L800R大容量冷冻离心机是专门针对大容量需求的客户设计，此机型样品处理量大，是中心血站、制药、生物工程等领域的专业产品，一次可分离12x400ml三联袋或四联袋，24x200ml三联袋；该离心机采用进口高性能压缩机组，无氟制冷剂R404a，符合环保要求；另外该离心机拥有强大的控制系统，可实现分段阶梯离心预设程序调用、分级密码管控， 确保使用仪器安全可靠，便于精细化管理。 生物制药离心机的制药技术作为一种高新技术，为医疗业、制药业等相关行业的发展开辟了广阔的前景，较大地改善了人们的生活，提高了工作生产效率。因此，生物技术被世界确定为21世纪科技发展的关键技术和新兴产业。 生物制药离心机是专业针对固体颗粒微小、比重非常接近的液固两相、液液固三相分离，是制药、食品、化工、生物制品、饮料制品等多个行业的重要设备。其工作原理是通过强大离心作用下将不同比重的物料从而有效分离，从而达到分离目的。 随着国家对仿制药与原研药的科研不断投入，国内的药品市场已由国外进口药的主导市场慢慢向国内仿制药或原研药的市场转变，虽然中国目前暂时还是仿制药大国，仿制药品种、品规数量都很巨大，多数国产仿制药质量与原研药存在较大差距，但是随着国内制药设备与制药生产技术的不断提升，国产药品的质量和疗效也将会实现质的突破，逐渐拉近与市场上进口原研药差距并最终实现取代。 上海卢湘仪有着悠久的历史和雄厚的技术力量，从企业成立到现在，一直致力于推进国产离心机的创新发展，目前上海卢湘仪的离心机拓展国际市场已出口到美国、德国、英国、加拿大、泰国等30多个国家。在国内满足国内销售的同时一直注重制药企业的发展，通过不断改良离心机的制作工艺与产品精度，为国内制药企业对制药离心机的需求与发展历程上助上一臂之力。 据了解，历经四十多年的发展，上海卢湘仪已先后设计生产了国内高速冷冻离心机GL-25M。制造了国内的316L不锈钢材质的连续流转子。超大容量冷冻离心机在2400ml方杯的基础上，研制出制药行业提取方便的2000ml圆杯，并配有316L不锈钢材质的离心杯，为制药行业认证企业提供了良好的配套。此次山东某制药厂订购上海卢湘仪L800R大容量冷冻离心机也是对其产品品质、技术力量以及良好服务的再一次肯定。

日本TOMY 公司kitman-T24 台式高速冷冻离心机促销从即日起凡购买日本TOMY的kitman离心机，可享受特殊折扣，有效期2011年12月到2012年3月1.快速预冷功能Pre-Temp从25度到设定温度4度，只需5分钟特有迅速降温技术！机身只有29cm，小巧节省空间 2.二程序连续运行模式 多种组合特别适合试剂盒的提取，设定2个程序可连续运行。节省实验时间。适用于各种试剂 3.省电模式长时间操作，压缩机自动停止型号KITMAN-24转头TMP-2最高转速13,500rpm最大离心力17,730G最大容量2mlx24电机模式感应电机温度设定范围-9至 35℃(1℃增量)速度设定范围0rpm或300至13,500rpm(100rpm增量)时间设定10至50秒(10秒增量),1至99分钟,无限安全装置安全锁 不正常速度检测 盖开关检测 不平衡检测 电机过流检测 过流刹车(同时也用作电源开关) 不正常腔体温度检测 制冷剂HFC-135a(135克)电压220V,50HZ电流3A功率(加热功率)400W(344Kcal/h)尺寸(WxDxHmm)290x515x295净重37Kg

冷冻电子显微镜的进展为大分子蛋白质结构测定提供了潜力，但是在多域蛋白质的域间方向建模，成功率仍然很低。近日，Nature子刊，作者使用冷冻电子显微镜开发了自动的域增强建模（DEMO-EM）方法。DEMO-EM方法通过结合刚体域拟合和柔性装配模拟（具有深度神经网络域间距离分布的灵活装配模拟）的渐进式结构精调程序，从冷冻电子显微镜图中组装多域蛋白结构。该方法在包含多达 12 个连续和不连续结构域的大规模蛋白质基准集上进行了测试，这些结构域具有中到低分辨率的密度图，其中，对于 97% 的案例，DEMO-EM 生成的模型具有正确的域间方向（模板建模分数（TM 分数）0.5），并且优于最先进的方法。DEMO-EM流程图使用结核分枝杆菌依赖性因子的三域蛋白进行说明从查询序列开始，域边界首先由FUpred和ThraDom预测，每个域的模型由DI-TASSER生成。同时，使用深度学习卷积网络DomainDist预测域间距离。其次，每个域模型都通过拟牛顿搜索独立地拟合到密度图。第三，初始全长模型通过两步刚体REMC模拟优化，以最小密度图和全长模型之间的DCS。第四，使用由DCS、域间距离分布和基于知识的力场引导的REMC模拟，通过原子级、分段级和域级精调的柔性装配对从刚体装配模拟中选择的最低DCS模型进行精调，得到decopy构象由SPICKER聚类以获得质心模型。最后，对全原子模型再次进行柔性装配模拟，其中质心模型的约束增加了能量，最终模型是用FASPR和FG-MD侧链重新包装后的最低能量模型构建。DEMO-EM是一种基于冷冻电镜图的多域蛋白质结构确定的分层方法，由四个连续步骤组成：（1）确定域边界并对单个域建模（2）将域模型与密度图匹配初始框架生成（3）用于域位置和方向优化的刚体域结构组装（4）全长结构模型的柔性结构组装和细化模拟从冷冻电镜合成密度图构建多结构域蛋白从查询的氨基酸序列开始，首先应用LOMETS[1]从PDB创建多个模版比对，其中ThreaDom用于根据域保守分数预测域边界。如果蛋白质被LOMETS定义为“简单”目标，并且比对覆盖率95%，则应用ThraDom预测的域定义。否则，通过FUpred（通过最大化域内接触的数量[3]和最小化由基于深度学习的神经网络ResPRE[2]）预测的接触图上的域间接触的数量来预测域边界。接下来使用DI-TASSER[4]生成每个域的结构模型，它是I-TASSER[5]的一个版本，通过将深度学习预测的残基间接触和距离图以及氢键电位结合到迭代搜索全基因组和宏基因组序列数据库来构建多序列比对（MSA）。然后根据TripletRes预测的接触选择最前面的MSA，将其输入到ResPRE[2]，TripletRes是基于深度残基神经网络预测距离图、氢键网络和扭转角。这些预测的约束被集成到I-TASSER力场中以指导replica-exchange 蒙特卡洛模拟（REMC）。最终模型由SPICKER聚类并由FG-MD改进。对于包含来自查询序列不同区域的两个或多个片段的不连续域，域模型是通过顺序连接所有片段的序列获得的。基于深度神经网络的域间距离预测为了帮助指导域方向组装，域间距离图由深度残差神经网络算法DomainDist预测，DomainDist 是TripletRes 的扩展，最初开发它是为了基于共进化矩阵的三元组预测残基间接触图，但在这里扩展以预测 2-20 Å 范围内 36 个 bin 内残基间距离的概率。DomainDist 程序在从 PDB 收集的 26,151 种蛋白质的非冗余数据集上进行训练，其中每种蛋白质的 MSA 是使用 HHblits搜索 Unilust30 序列数据库构建的. 除了 TripletRes 中采用的二维 (2D) 协同进化特征外，还采用了三个一维 (1D) 特征，包括隐马尔可夫模型、Potts 模型的序列和场参数的 one-hot 表示并平铺到两个维度并与二维协同进化特征连接。神经网络结构是按照卷积策略设计的，使用 ResNet 基础模块。神经网络模型由 Adam 优化算法训练，以最小化交叉熵损失。尽管 DEMO-EM 只考虑了域间距离信息，但在训练过程中同时考虑了域内和域间距离信息。基于拟牛顿的域匹配和冷冻电子密度图对于来自 DI-TASSER 的每个单独的域模型，我们使用有限内存Broyden-Fletcher-Goldfarb-Shanno (L-BFGS)，一种具有六维 (6D) 平移-旋转自由度的准牛顿优化算法，来识别与密度图相关性最高的域的最佳位置和方向。由于L-BFGS是一种局部优化方法，其结果取决于初始解，因此作者通过枚举欧拉角的所有组合( φ, θ and ψ )，以步长Srot_ang穿过密度图空间。对于domain pose，密度相关分数（density correlation score，DCS）用于指导L-BFGS模拟。Nvol是voxels的个数（网格点），ρEM (vi ) 是第i个voxel的实验密度。decopy结构探针密度定义为：刚体域组装执行两轮刚体域组装模拟以优化域位置和方向。在第一轮中，这些域被视为粒子，并进行快速的REMC模拟，以根据全局模拟密度相关性调整各个域的位置。第二轮刚体REMC模拟用于微调域位姿，其具有更详细的能量立场。原子级灵活的域组装和细化灵活的域组装和细化过程包含两个阶段的模拟，具有渐进的voxels分辨率和采样焦点。在第一阶段，实施了6种不同的动作，（1）LMProt 扰动，（2）围绕连接两个末端的轴的片段旋转，（3）片段沿序列的构象移位，（5）刚体段平移，（5）刚体尾部旋转和（6）刚体域级平移和旋转。第二阶段，使用在所有原子上计算的DCS实现Voxel大小为2 Å 的更精细的密度图。此外，所有残基都有相同的概率被选中进行移动和采样。当交换次数达到 100 时，模拟终止。选择最低能量的诱饵来构建最终模型，侧链原子由 FASPR 重新包装，然后是 FG-MD 细化。结果表2显示了从同一组预测域模型开始时从 MDFF 和 Rosetta 获得的结果，其中初始构象由 Situs 和 MAINMAST 建模组装。这些数据再次表明，DEMO-EM 的表现优于 MDFF、Rosetta 和 MAINMAST，全长模型的平均 TM 分数分别比 MDFF、Rosetta 和 MAINMST 高 60.0%、87.2% 和 144.4%。最后，作者在所有 51 个案例上将 DEMO-EM 与最先进的端到端深度学习结构预测方法 AlphaFold2 进行了比较。由上表所示, 虽然 AlphaFold2 预测的单个域的 TM-score (0.89) 比 DEMO-EM (0.84) 高，这可能是因为 DI-TASSER 构建的域模型质量较低，整体质量DEMO-EM 构建的全长模型（TM-score 为 0.88）优于 AlphaFold2（TM-score 为 0.84），DEMO-EM 在 28 出时获得了比 AlphaFold2 更高的 TM-score 51 种蛋白质。作者还将 AlphaFold2 构建的相同全长模型输入 MDFF、Rosetta 和 DEMO-EM，以检查灵活组装和细化过程的性能。所有方法都改进了初始全长模型，即使对于最佳预测模型，也显示了冷冻电镜数据的有用性。源代码：https://zhanggroup.org/DEMO-EM/参考资料[1] Zheng, W. et al. LOMETS2: improved meta-threading server for fold-recognition and structure-based function annotation for distant-homology proteins. Nucleic Acids Res. 47, W429–W436 (2019)[2]Li, Y., Hu, J., Zhang, C., Yu, D.-J. & Zhang, Y. ResPRE: high-accuracy protein contact prediction by coupling precision matrix with deep residual neural networks. Bioinformatics 35, 4647–4655 (2019)[3] Zheng, W. et al. FUpred: detecting protein domains through deep-learning based contact map prediction. Bioinformatics 36, 3749–3757 (2020)[4] Zheng, W. et al. Protein structure prediction using deep learning distance and hydrogen‐bonding restraints in CASP14. Proteins 89, 1734–1751 (2021)[5]Yang, J. et al. The I-TASSER suite: protein structure and function prediction. Nat. Methods 12, 7–8 (2015).

p　　strong仪器信息网讯/strong 继2017年诺贝尔化学奖颁发发明冷冻电镜的三位学者后，冷冻电镜技术已成为显微学术界热点，尤其在蛋白结构解析领域。同时，基于冷冻电镜的很多科研成果刊登在Nature、Science、Cell等顶刊上，冷冻电镜技术也被冠名为“NSC神器”。/pp　　2018年6月20日，武汉病毒研究所以2789.1万元采购了日本电子1套球冷冻透射电镜JEM-Z300FSC。9月11日，哈尔滨工业大学也在国家政府采购平台发布招标公告，拟以6700万元的预算金额采购2套冷冻电镜。/pp　　10月18日，中国政府采购平台公布了“哈尔滨工业大学冷冻电子显微镜系统采购项目中标公告”，公告显示，赛默飞(FEI)成功以6633万元中标了该项目的2套冷冻电子显微镜系统。/pp　　具体中标信息如下：/pp style="text-align: center "span style="color: rgb(0, 176, 240) "招标信息表/span/pp style="text-align: center "span style="color: rgb(0, 176, 240) "/span/ptable align="center" border="1" cellpadding="0" cellspacing="0"tbodytr class="firstRow"td style="border: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " width="32"p style="text-align:center"strongspan style="font-family: 宋体"中标时间/span/strong/p/tdtd style="border: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " width="62"pstrongspan style="font-family:宋体"采购单位/span/strong/p/tdtd style="border: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " width="55"p style="text-align:center"strongspan style="font-family: 宋体"中标标的名称/span/strong/p/tdtd style="border: 1px solid windowtext padding: 0px " width="81"p style="text-align:center"strongspan style="font-family: 宋体"产品名称/span/strong/p/tdtd style="border: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " width="90"p style="text-align:center"strongspan style="font-family: 宋体"中标金额/span/strong/p/tdtd style="border: 1px solid windowtext padding: 0px " width="113"p style="text-align:center"strongspan style="font-family: 宋体"中标供应商/span/strong/p/td/trtrtd rowspan="2" style="border: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " width="32"p style="text-align:center"span9/span月span11/span日/p/tdtd rowspan="2" style="border: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " width="62"p style="text-align:center"哈尔滨工业大学/p/tdtd style="border: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " width="55"p style="text-align:center"span300KV/span冷冻透射电镜/p/tdtd style="border: 1px solid windowtext padding: 0px " width="81"p style="text-align:center"span1/span套/p/tdtd rowspan="2" style="border: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " width="90"p style="text-align:center"span6633/span万元/p/tdtd rowspan="2" style="border: 1px solid windowtext padding: 0px " width="113"p style="text-align:center"赛默飞（spanFEI/span）/p/td/trtrtd style="border: 1px solid windowtext padding: 0px 7px " width="55"p style="text-align:center"span200KV/span冷冻电镜/p/tdtd style="border: 1px solid windowtext padding: 0px " width="81"p style="text-align:center"span1/span套/p/td/tr/tbody/tablepbr//p

4月25日，Science杂志以长幅研究论文(Research Article)形式发表了中科院生物物理所朱平研究组和李国红研究组合作利用冷冻电镜三维重构技术解析的30nm染色质左手双螺旋高清晰三维结构这一重要研究成果。　　在这项研究当中，朱平研究员长期从事冷冻电镜三维重构应用研究，李国红研究员长期从事30nm染色质及表观遗传调控研究，他们二人通过多年的紧密合作，发挥各自专长和优势，在国际上率先解析了30nm染色质的高清晰三维结构，使我国在相关领域的研究处于世界前列。　　日前，仪器信息网编辑特别采访了从事冷冻电镜(注：下文提到的冷冻电镜特指300kV和200kV场发射冷冻透射电子显微镜)应用研究的朱平研究员，请他为我们介绍了自己与冷冻电镜结缘的故事，以及冷冻电镜的特点和应用情况，希望使广大网友能对冷冻电镜有更多的了解。中国科学院生物物理所朱平研究员　　因对三维重构技术的喜爱，与冷冻电镜结缘　　Instrument：朱老师，您好!首先请您为我们介绍一下您和冷冻电镜结缘的故事。　　朱平：其实我并不是生物专业出身，我的本科是在浙江大学学习金属材料热处理，1990年毕业后，我被保送到西安交通大学断裂疲劳国家重点实验室读硕士研究生，博士研究生期间又到清华大学机械系开始学习焊接专业，研究焊接接头断口分析，当时有一个很热门的研究方向是断裂表面的分形研究，断裂表面的分形维数和断裂性能被认为是密切相关的。开始我们只是做断口轮廓线的分形研究，但发现由于断裂表面不是各向同性的，不同的方向可能会对应不同的分形维数，所以我们就尝试利用扫描电镜立体对照相方法将断裂表面三维形貌重构出来，来研究断裂面的二维分形维数。　　博士毕业后我在清华做了一年讲师，由于对电镜三维重构比较感兴趣，我就据此联系国外的进一步研究机会。恰好这时美国佛罗里达州立大学一个研究艾滋病毒结构的实验室需要做电镜三维重构的人员，于是我就将在材料研究中积累的关于电镜和三维重构的知识转到了对生物样品的研究，从而有机会开始接触冷冻电镜。　　Instrument：到美国佛罗里达州立大学后，您主要开展了哪些方面的研究工作?　　朱平：当时，我所在的实验室是比较早开始艾滋病毒表面包膜蛋白结构重构研究的单位。开始我们只是想通过电镜技术来研究艾滋病毒表面很重要的一个包膜蛋白gp120的结构。后来，研究者发现虽然不同的艾滋病毒抗体具有毒株特异性，但有几种抗体它们对于多种艾滋病毒都有中和活性，所以我们也开始研究这些广谱中和抗体的结构特点。　　在最初的研究中，我们主要利用普通电镜，通过负染色方法研究表达纯化出来的艾滋病毒表面包膜蛋白gp120以及它们与不同的中和抗体形成的复合物的结构。后来我们的研究发现这些包膜蛋白在真实病毒表面的三维结构及分布对艾滋病毒的感染非常重要，所以就转向研究整个艾滋病毒颗粒及表面蛋白的三维结构。我们是最早将电子断层成像方法应用于艾滋病毒三维结构重构的研究组，并利用负染色电子断层成像方法获得了艾滋病毒表面的包膜蛋白的一个高清晰三聚体结构和分布图，发在美国科学院院刊上。由于负染色法对病毒结构影响很大，虽然观察到了艾滋病毒表面的gp120蛋白的结构为三聚体，但同时结构信息损失也很多。所以之后我们逐渐开始采用冷冻电镜电子断层成像法来开展研究，并做出了一个艾滋病毒冷冻电镜三维重构图像，于2006年在Nature上发表了一篇文章，也产生了较大影响。　　Instrument：2008年您以&ldquo 百人计划&rdquo 身份加入到生物物理所生物大分子国家重点实验室，请问促使您回国发展以及加入生物物理所的原因主要有哪些?　　朱平：在美国待了几年后，我也有了回国工作的念头，于是就开始和国内的相关研究单位联系。结构生物学研究是生物物理所的传统优势研究学科，所里也非常看好冷冻电镜在结构生物学研究方面的发展前景，已经在采购相应的设备，可以说这里有一个非常好的平台。　　回国后，我们依然做一些艾滋病毒及疫苗的研究工作，同时也开展一些其他病毒的研究，如高对称性病毒的高分辨结构解析等。　　另外，回国后我参加了以&ldquo 千人计划&rdquo 身份回国的许瑞明老师主持的科技部的一个&ldquo 973&rdquo 项目，其中我负责的一个课题就是利用冷冻电镜研究染色质的结构。后来，李国红老师回国，我们一起开始做染色质的冷冻电镜三维重构研究。　　冷冻电镜是结构生物学研究的重要手段，但入门和上手都有一定难度　　Instrument：请问和普通电镜技术相比，冷冻电镜在生物研究当中有哪些特点和优势?　　朱平：普通电镜主要用于观察样品形貌，要看到原子分辨率的细节很难做到 另外制样方法如染色、固定等对样品的结构破坏很严重。而冷冻电镜可以将样品瞬间冻成玻璃态，冷冻速度平均可达以几万摄氏度每秒，这样样品所有的结构细节则都被保留下来。但是由于没有经过染色，直接观察样品的衬度就会差很多，所以需要三维重构来慢慢挖掘它的结构信息。　　另外，结构生物学研究当中最常用的方法蛋白质晶体学的一个很大的瓶颈就是样品结晶，如将蛋白质产生结晶，需要各种各样的条件 此外在生物体中蛋白质往往不是单独起作用，而是多个蛋白质结合到一起的超大分子复合体，这样的超大分子复合物要长晶体就更难。但冷冻电镜不需要长晶体，直接将样品冰冻即可进行分析。300kV Titan Krios场发射冷冻透射电子显微镜　　Instrument：目前，国际上冷冻电镜研究的热点主要集中在哪些方面?　　朱平：这两年冷冻电镜的应用主要集中在结构生物学研究，分析的样品类型从病毒、核糖体扩展到了其它蛋白。冷冻电镜三维重构早期比较多的应用是病毒分析，因为病毒结构比较对称，可以得到比较高的分辨率。近年来，随着仪器硬件及软件性能的提升，冷冻电镜结构解析的分辨率越来越高，现在我们可以做到近原子级别的分辨率。对于一些不对称的样品也能获得比较高的分辨率，所以冷冻电镜三维重构在其它蛋白质的结构分析研究上也比较热。　　Instrument：冷冻电镜技术应用的难点有哪些?要让冷冻电镜更好的在科学研究当中发挥作用，需要哪些积累?　　朱平：冷冻电镜的操作程序比较多，入门和上手都有一定的难度。先从制样来说，单冷冻这一步，就有许多的玄机在其中。冻的冰层太厚，电子束穿不过去，冰层太薄又会被完全蒸发 而冷冻的速度如果慢了就会形成冰晶，冰晶遇到电子束发生衍射，我们就无法观察到样品 此外，环境的变化，如空气的温度和湿度变化，甚至每次使用的滤纸如果不同都会对制样效果有影响。　　在照片的拍摄中，要调节好电镜的状态，掌握照相的细节，这样才能拿出一张好的二维冷冻电镜照片。如，电子束照射在样品表面时，如果调节不好很可能就把样品轰坏了。所以需要调焦，找准位置，然后慢慢放大。得到好的二维照片后，接着还有一大堆的图像处理工作。　　当然现在软件自动化程度更高了，仪器的操作也比以前容易了。比如制样，有专门的制样设备，通过计算机控制温度、湿度、滤纸吸收的时间长短，使制样的可重复性高了很多。不过要使用好电镜，还是有许多的经验在其中。北京大学丁明孝老师正在组织国内优秀的专家撰写一部电镜实验操作手册，虽然这本书以普通电镜为主，但其中至少会有一章来介绍冷冻电镜的基本情况，以及如何使用好冷冻电镜，希望更多的人了解这一技术。　　Instrument：请问目前我国冷冻电镜的研究和应用水平怎么样?　　朱平：近年来，为推动我国生物学快速发展，国家不断加大投资力度。一方面引进了不少人才，另外在仪器配置方面，我国不少单位已经或将要建设国际一流的冷冻电镜设备平台，如清华大学、生物物理所、北京大学、上海生命科学研究院等。　　其实十几年前，我们就有很多优秀的电镜人才，只是国家没有这么大的投入。就是在&ldquo 小米加步枪&rdquo 的条件下，他们也做的非常好。现在我们的高端电镜配置已在世界前列，但人才依然是最重要的，目前国内在冷冻电镜研究方面确实也没有那么多的人才，希望有更多的年轻人被培养出来。　　科学的竞争也很残酷，团队合作才能走得更快更远　　Instrument：最后，请问对于在高水平期刊上发表文章，您有哪些心得体会，以及团队合作在科学研究当中的重要性。　　朱平：一是要有好的项目，好的科学问题 二要有好的设备 三要有好的团队 最后还要坚持。首先要敢于挑战科学难题，另外也要敢于面对挑战中的困难，要耐得住性子去做，要有长时间做不出来的准备。我们这个项目，前后花了5年时间，期间遇到了很多的困难。　　在30nm染色质结构解析研究中，不同的研究组分工合作，发挥各自的特长也是我们这个项目的重要特点。在我们的研究当中，染色质样品的组装非常重要，我们需要均一的样品，否则电镜状态再好，再会调节操作和计算处理，也无法获取样品真正的结构信息。　　我对组装染色质样品没有太多的经验，而李国红老师长期从事30nm染色质及表观遗传调控方面的研究，但冷冻电镜三维重构也需要一个较为长期的积累和经验，面对30nm染色质这么一个复杂的超大分子复合体，其结构解析有很多技术上的困难和挑战，若要让李老师重头来学电镜也不是很容易的事。还有许瑞明老师参加了我们很多的项目讨论，给了我们很多的鼓励，这也很重要。　　科学的竞争也很残酷，我们知道世界上还有其他的团队也在做同样的研究，而我们能够先做出来，一个重要的因素就是我们是几个团队一起在做。采访编辑：秦丽娟　　附录：朱平研究员个人简历　　1986.9-1990.6 浙江大学 学士　　1990.9-1993.6 西安交通大学 硕士　　1993.9-1997.6 清华大学 博士　　1997.7-1998.12清华大学 讲师　　1999.3-2008.5 美国佛罗里达州立大学生物系 博士后、助理研究员、副研究员(Non tenure-track faculty系列)　　2008.6-至今　 中国科学院生物物理研究所课题组长、&ldquo 百人计划&rdquo 研究员

日前，4台高端冷冻电镜顺利进驻无锡佰翱得生物科学有限公司。至此，江阴企业佰翱得坐拥8台冷冻电镜，其中包括3台国际最先进的第四代冷冻电镜Titan Krios，一举成为全球最大商业冷冻电镜服务供应商。图自佰翱得冷冻电镜国际创新中心（笔者注：佰翱得早在2012年，就拥有当时最完善的室内晶体衍射平台。为适应全球结构解析需求，2018年，采购了一台200kv的TF20冷冻电镜，大大提高了样品优化的效率。 在2020年，为进一步整合上下游能力加速研发，采购了最新一代的300kv的冷冻电子显微镜，此时，平台的冷冻电镜数量为4台。日前，二期佰翱得冷冻电镜平台的4台冷冻电镜（2台Krios G4、1台Glacios、1台120Kv冷冻透射电镜）顺利入驻，平台冷冻电镜数量达到8台）冷冻电镜技术于2017年摘得诺贝尔化学奖，是指不需要晶体就能在原子分辨率水平上解析药靶结构的新崛起技术。经过4年沉淀，佰翱得成功把冷冻电镜SPA和MicroED两大技术应用到新药研发过程中，可为国内外生物医药企业提供药靶蛋白制备、生物分析与化合物筛选、复合物晶体结构与冷冻电镜结构解析，以及结构模拟、三维结构计算、化合物虚拟筛选等计算结构生物学技术服务，大幅加速“源头创新”新药研发进程。据了解，由于拥有国际领先的蛋白制备平台，佰翱得冷冻电镜技术具备得天独厚的技术优势，促使该企业实现了多项行业领先：2017年在国内率先筹建商业化冷冻电镜平台；2018年引进国际顶尖的冷冻电镜专家，打造国际领先科学团队；2019年装备了中国生物医药工业界第一台冷冻电镜设备，成为全球首家推出从基因到冷冻电镜结构一体化服务的标杆企业。无锡佰翱得生物科学有限公司由双良集团与多名拥有国际药企工作经历的海归科学家联合创立，截至目前已为近200家国内外客户的超过3000个新药研发项目提供服务。

北京四环冻干机LGJ-S40冷冻干燥机压盖型主 要 特 点：1. 符合生物制药标准的结构设计。冻干腔体内部圆角、表面粗糙度、搁板平整度、腔体内部材料均满足制药标准；2. 控制系统稳定可靠。采用PLC可编程逻辑控制系统和7寸彩色触摸屏，系统运行更稳定可靠，人机交互友好，中英文语言转换，可以实现手机端、电脑端远程控制，具有三级权限；3. 实时显示记录真空度、冷阱温度、物料温度、搁板温度并形成冻干曲线，每分钟存储一次数据，可连续记录物料和设备状况数据，支持数据离线浏览、分析、打印及存储，配置USB通讯接口和TCP接口；4. 冻干过程可控制。冻干过程均由可编程程序自动控制，半自动或全自动控制可实时切换，实现冻干过程全程参数控制；5. 冻干室与冷阱腔体分离设计，实现了药品级中试机标准的同时更大的提高了捕水效率和能力；6. 采用中间介质循环技术。搁度控温，板层温度均一、可控性强，板层平整，冷热量传导良好；7. 双机复叠制冷技术。采用原装进口全封闭式压缩机组和国际标准绿色环保冷煤，制冷迅速，冷阱温度低，捕水能力强；8.具有压缩机二次启动廷时保护及压力过载保护系统；9.干燥室采用耐高压、耐低温航空亚克力材质高透明门，可观察物料冻干变化全过程；10.搁板硅油制冷及加热，具有温度、速率可调、可控，运用PID模糊控制计算，实现原位预冻及升华功能；11.冷阱具备自动化霜功能；12.可选配负压掺气系统接口。内置0.2μm滤芯，减少样品二次污染，可回填氮气或惰性气体；13.配备压盖系统；14. 可选配洁净室安装方式，并提供洁净室安装解决方案；15.可选配真空度调节功能实现冻干工艺摸索；16.可选配共晶点在线测试功能，更好的优化样品升华工艺；17.可选配计算机上位机实时监控和图表记录； 北京四环冻干机LGJ-S40冷冻干燥机压盖型技 术 参 数 1、达标冷阱温度（空载）：≤-80℃ (环境温度≤30℃)2、极限冷阱温度（空载）：≤-85℃ (环境温度≤25℃)3、达标真空度（空载）：≤10 Pa4、极限真空度： 1 Pa5、捕水量：8Kg6、物料托盘、冻干量：4+1搁板，层间距65mm，冻干面积0.4㎡，φ16西林瓶约1650个，φ22西林瓶约870个7、搁板尺寸（长×宽）：280mm×360mm8、搁板控温范围：-50℃～70℃（控温精度：±0.5℃）9. 物料温度探头：每层搁板1支（可选配四个）10、主机外形尺寸（长×宽×高）：760mm×800mm×1600mm(不含压盖）11、整机功率：3300W12、适用电源：AC380V 25A 50Hz（可选配AC220V 16A 50Hz）13、整机重量：285KG14、适用环境：环境温度≤30℃ 15、主要配置：主机一台、真空泵一台. 可 选 配 件： 真空度调节、进口真空泵、高速真空泵油、真空泵进气口粉尘过滤器、真空泵排气口油雾过滤器、惰性气体充气接口、共晶点测试仪 GMP洁净室安装创新点：在仪器的自动化、原位化、实时化等方面有了显著提高；实时显示记录真空度、冷阱温度、物料温度、搁板温度并形成冻干曲线，每分钟存储一次数据，可连续记录物料和设备状况数据，支持数据离线浏览、分析、打印及存储，配置USB通讯接口和TCP接口北京四环冻干机LGJ-S40冷冻干燥机压盖型

ThawSTAR CB细胞程序解冻复苏仪（冻存袋） -----------------------------------------------------------------------------------------------------近年来，随着再生医学、免疫细胞疗法的快速发展，建立标准的产品工艺迫在眉睫！冷冻状态下存储和运输的细胞制品，可以通过移动电源实现，但是产品的解冻复苏仍然采用传统的水浴解冻方式，这样无法避免污染和解冻错误操作带来的风险，这是业内长期以来一直面对的难题。现在，可以用ThawSTAR CB细胞程序复苏仪实现冷冻状态的细胞在标准程序运算方法的解冻复苏。ThawSTAR CB适用于实验室研发、工艺生产以及质量控等环节冻存细胞的程序解冻复苏工艺使用，ThawSTAR CB是一款专门针对冷冻细胞在冻存袋内进行标准程序解冻复苏的复苏仪，每次解冻一个袋子，可对25mL~1000mL规格的冻存袋内灌装10mL~275mL的细胞进程序解冻复苏。仪器提供了6个标准解冻算法，同时可以按照用户要求提供额外的定制化解冻方法。优势：l 标准解冻复苏过程：通过生物材料温度传感控制技术自动运算解冻复苏时间终点。l 操作简单：直观的软件操作界面，方便执行QC质量控制和选择对应的程序解冻复苏算法，适用于市面上的主要品牌冻存袋。l 保障待解冻生物样品安全：通过阻隔袋可以有效避免样品在解冻复苏过程中损失、污染，同时也提供了样品袋在工位内的定位放置作用。l稳定可靠： ThawSTAR CB通过过程加热专利技术以及实时温度传感与控制技术相结合，提供了准确可靠可验证的过程复苏工艺，复苏曲线被记录在一起内部不可改写。创新点：几十年来，行业内冻存袋内细胞的解冻复苏一直采用水浴解冻，ThawSTAR CB细胞程序复苏仪历时5年开发，今年正式问世，4月起开始在国内销售。特点：1）针对25mL到1000mL常用规格的冻存袋，内冻存10mL至275mL的细胞液进行程序解冻复苏，标配6条标准的解冻复苏曲线，最大程度的避免了人为主观推测造成的错误操作。2）干式解冻复苏，避免了水浴的污染风险，可以在洁净室内进行操作。3）复苏曲线不可改写，数据可传输打印，更符合实验室基本需求和GMP生产数据要求。4）可以定制化复苏曲线。5) 设计紧凑，节约空间，方便操作，方便清洁。ThawSTAR细胞程序复苏仪

仪器信息网讯 2015年5月29日-6月2日，&ldquo 2015全国生物医学农林电镜技术研讨会暨生物电镜前沿技术培训班&rdquo 在浙江大学举行。本次会议特别邀请了国内外知名专家教授和电镜工作者讲授生物电子显微镜技术的最新发展，交流生物样品制备和应用方面的技术经验，并安排部分学员参加实验操作及演示。　　上海同济大学生命科学学院祝建教授作了题为&ldquo 关于原位冷冻电镜技术的一点想法&rdquo 的报告。祝建教授　　祝建介绍说：&ldquo 冷冻电镜技术可以分为单颗粒冷冻电镜技术和原位冷冻电镜技术。其中单颗粒冷冻电镜技术目前国际上做了许多工作，近来也比较火。近年来，我国为了开展这方面工作，购置了许多相关的高端仪器设备。该技术需要将细胞内的活性蛋白分子提纯后在体外分析，但是在体外做的不错的结构最终还需要到体内去验证，如在体内蛋白质是否也是按照相应的结构来执行功能。所以这方面的工作还需要进一步深入。&rdquo 　　祝建表示，原位冷冻电镜的最终目的是研究大分子的结构、功能和机制统一的问题，从而解释生命现象。原位冷冻电镜技术包括冷冻固定、超薄切片，再加上电镜分析、数据采集、三维重构等。冷冻固定可以分为快速冷冻和高压冷冻。高压冷冻技术就是为了使组织的冷冻成为可能而问世，可以冷冻200&mu m厚的样品。而快速冷冻技术只能冷冻30&mu m厚的单细胞层。从冷冻速度来看，快速冷冻的速度稍快一些。　　祝建说：&ldquo 目前，国内购买了多台高压冷冻仪。其实并不是所有的样品都适合高压冷冻，大组织块、一定厚度的样品用高压冷冻最好，其他的单细胞样品用快速冷冻一样能达到很好的效果，而且快速冷冻技术更简便。&rdquo 　　&ldquo 冷冻固定之后，如果在冷冻电镜下分析需要与冷冻超薄切片技术相结合。如果在常温电镜下分析，则还需要冷冻置换、包埋、切片等步骤，现在买高压冷冻仪的单位基本都是要和冷冻置换结合起来。冷冻置换是冷冻固定之后非常必要的低温脱水技术，脱水过程中脱水剂中所含有的固定成分还将在合适的低温温度下对样品进行二次固定。如果要减少样品收缩，则需要快速冷冻固定，慢慢脱水。&rdquo 祝建说道。　　另外，祝建还谈道：&ldquo 原位分析的另外一种途径是标记，通过标记实现定位、定性、定量分析。因为我们无法看到一些结构细节和大分子，所以用抗体来标记连接我们能看到的荧光分子或金颗粒来实现间接原位分析。&rdquo 　　最后，祝建总结说，在实际应用中，要根据样品的特点，从快速冷冻、高压冷冻、冷冻置换、超薄切片、冷冻超薄切片、离子束切片等制样技术中选择合适的组合方法来制样。还有我们要考虑将原位冷冻电镜与单颗粒冷冻电镜结合起来获取有效的分析结果。撰稿：秦丽娟

项目概况中国医科大学附属盛京医院高速冷冻离心机等实验室设备项目二次招标项目的潜在供应商应在辽宁政府采购网获取招标文件,并于2021年11月16日 09时00分（北京时间）前递交投标文件。一、项目基本情况项目编号：JH20-210000-44658项目名称：中国医科大学附属盛京医院高速冷冻离心机等实验室设备项目二次包组编号：001预算金额（元）：2,900,000.00最高限价（元）：2,900,000.00采购需求：查看合同履行期限：合同签订后2个月内。需落实的政府采购政策内容：优先采购节能产品和环境标志产品，促进中小企业、残疾人企业、监狱企业发展，以及支持创新产品和服务。本项目（是/否）接受联合体投标：否二、供应商的资格要求1.满足《中华人民共和国政府采购法》第二十二条规定。2.落实政府采购政策需满足的资格要求：无。3.本项目的特定资格要求：（1）投标产品属于医疗器械的，须提供医疗器械经营许可证、医疗器械注册证(包括附件或附页，有效期内加盖公章的复印件)，医疗器械产品生产许可证（国产产品需提供）。（2）投标产品为进口产品的，须提供制造厂商的授权书；如为总代理商授权的，还须提供制造厂商的授权书。三、政府采购供应商入库须知参加辽宁省政府采购活动的供应商未进入辽宁省政府采购供应商库的，请详阅辽宁政府采购网 “首页—政策法规”中公布的“政府采购供应商入库”的相关规定，及时办理入库登记手续。填写单位名称、统一社会信用代码和联系人等简要信息，由系统自动开通账号后，即可参与政府采购活动。具体规定详见《关于进一步优化辽宁省政府采购供应商入库程序的通知》（辽财采函〔2020〕198号）。四、获取招标文件地点：辽宁政府采购网售价：免费五、提交投标文件截止时间、开标时间和地点地点：供应商在辽宁政府采购网电子评审系统提交投标文件，并在提交投标文件截止时间前将备份投标文件提交到天行健项目管理咨询（北京）有限公司六、公告期限供应商认为自己的权益受到损害的，可以在知道或者应知其权益受到损害之日起七个工作日内，向采购代理机构或采购人提出质疑。2、质疑函内容、格式：应符合《政府采购质疑和投诉办法》相关规定和财政部制定的《政府采购质疑函范本》格式，详见辽宁政府采购网。1、参加辽宁省政府采购活动的供应商，请详阅辽宁政府采购网“首页-办事指南”中公布的“辽宁政府采购网关于办理CA数字证书的操作手册”和“辽宁政府采购网新版系统供应商操作手册” 和“辽宁省政府采购网供应商制作电子标书操作手册”，具体规定详见《关于启用政府采购数字认证和电子招投标业务有关事宜的通知》（辽财采〔2020〕298号）和《关于完善政府采购电子评审业务流程等有关事宜的通知》（辽财采函〔2021〕363 号）。2、请投标人在获取招标（采购）文件过程中，完整填写本项目联系信息（联系人、联系方式、邮箱等），以确保招标文件变更时采购代理机构能及时以书面形式通知。3、投标人需自行准备电子设备（电脑等电子设备应提前做好CA锁安装调试），确保能够按时进行电子文件解密。电子文件解密时限为投标文件提交截止时间后的30分钟内。如投标人未按照规定的时限响应按照无效投标文件处理。4、请各投标人随时关注政府部门疫情防控规定和要求，为加强个人防护工作，请到现场的投标人代表自行戴好口罩，配合现场工作人员登记问询工作。5、投标人可以采用邮寄形式提交备份投标文件，并于提交投标文件截止时间前将备份投标文件送达提交地点。6、请各位投标人从民生银行大厦东南门进入，至楼下与项目联系人电话（024-31905999转8510、8525；024-62151152）联系，负责项目的工作人员将接您到10层办公区办理业务。九、对本次招标提出询问，请按以下方式联系名 称： 中国医科大学附属盛京医院联系方式： 廖主任 024-23895213名 称： 天行健项目管理咨询（北京）有限公司联系方式： 024-31905999转8510、8525开户行： 建设银行沈阳通汇支行账号： 21001530008052502563项目联系人： 孙女士、李女士 电 话： 024-31905999转8510、8525