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[em0804]最近在看文献的时候,看到一句话很不理解,说用磷酸缓冲溶液可以打开亲和色谱柱的亲和性,使其表面活化.这是什么意思?难道亲和色谱柱若没有使用磷酸缓冲液活化,难道就没有办法使用?期待各位大侠对我的指点.中国心
[font=宋体]链接:[/font]https://bbs.instrument.com.cn/topic/7752272问题描述:[font=宋体]亲和色谱有哪些用途?[/font]解答:a)[font=宋体]亲和色谱([/font]affinitychromatography[font=宋体])是将生物活性配体(如酶、抗体、激素等)键合到多孔微粒固体基质为固定相,不同[/font]pH[font=宋体]的缓冲溶液为流动相,依据生物分子与固定相配体间的特异、可逆的相互亲和作用力差异,形成可解离的配位复合物,实现分离和纯化。[/font]b)[font=宋体]亲和色谱的用途很广泛,可以用来从细胞提取物中分离纯化核酸、蛋白,还可以从血浆中分离抗体。分离重组蛋白就经常使用亲和色谱,通过基因修饰为蛋白加上一些人为的特性,这些特性使蛋白选择性地与配体结合,从而达到分离的目的。亲和色谱的另一大用途是从血浆中分离抗体。[/font]以上内容来自仪器信息网《样品前处理实战宝典》
用于亲和色谱的理想载体应具有下列特性:⑴不溶性:不溶于水;⑵渗透性:疏松网状结构,容许大分子自由通过;⑶有一定硬度,最好为均一的珠状;⑷具有大量可供反应的化学基团,能与大量配基共价连接;⑸非特异性吸附能力极低;⑹能抗微生物和酶的侵蚀;⑺有较好的化学稳定性;⑻亲水性。选择配基根据对纯化大分子的特异性的全面认识。 选择也的配基有两条标准:第一是蛋白质和配基之间必须有强的亲和力,解离常数在5mM以上不是好配基; 相反亲和力太高也是有害的,因为在解离蛋白质──配基复合物时所需的条件就要强烈,样可能使蛋白质变性。例如用抗生物素蛋白作配基纯化含生物素的羧化酶时,生物素──抗生物素蛋白复合物的解离常数达10-15M,解离时需要pH1.5,6M盐酸胍,在这种条件中。羧化酶数已经变性。选择配基的第二标准是,配基必须具有适当的化学基团,这种基团不参与配基与蛋白质之间特异结合,但可用于活化和载体相连接,同时又不影响配基与蛋白质之间的亲和力。 琼脂糖凝胶亲水性强,理化性质稳定 (商品名:Sepharose);聚丙烯酰胺凝胶理化性质稳定,耐有机溶剂及去污剂, 抗微生物能力强,特别适应用配基与提取物亲和力比较弱的物质。葡聚糖凝胶: 有良好的化学及物理性质,孔经小。 纤维素非特易吸附严重,廉价,易得。