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大家好: 我想利用免疫电镜检测热应激前后小鼠囊胚中热休克蛋白70的定位情况,有两种方案:1.包埋前免疫电镜:胚胎经多聚甲醛-戊二醛混合液固定后,然后清洗,渗透,封闭,分别与一抗和二抗反应,然后再用锇酸固定,脱水,812包埋。2.包埋后的免疫电镜:胚胎经多聚甲醛-戊二醛混合液固定后,脱水,体温包埋剂渗透,包埋,聚合,超薄切片,最后进行免疫染色。 第一种方案:不知道热休克蛋白70的抗原性保存如何?另外,不知道免疫标记效果如何就进行包埋,是不是有点盲目? 第二种方案 超微结构和抗原性都保存较好,试验重复性好。但是包埋剂比较贵,而且本试验室没有聚合用的低温冰箱和紫外灯。 请各位大虾帮帮我!
摘要:本文介绍了分子伴侣的基本概念,以及分子伴侣的几种主要类型;简要说明了蛋白质折叠的概念及特点;在此基础上,进一步阐述了分子伴侣的功能,并以GroEL和GroES为例简述了分子伴侣在蛋白质折叠过程中的作用机理。最后介绍了分子伴侣概念的延伸,及其研究意义和展望。关键词:分子伴侣 蛋白质折叠 折叠病 20世纪60年代,人们就发现了由于组成蛋白质的氨基酸错误可以导致分子病,后来人们发现,即使一级结构正常,蛋白质的二级结构乃至立体结构异常也可导致疾病,即蛋白质折叠病,如疯牛病、老年性痴呆、囊性纤维性炎等。蛋白质折叠病的发现激励人们去寻找蛋白质折叠的分子机理,近年来研究中发现,分子伴侣在在蛋白质折叠中起重要作用。1分子伴侣简介1.1分子伴侣的基本概念分子伴侣(Molecular Chaperone),也有人翻译为“分子伴娘”。1978年,Laskey等首先用“分子伴侣”描述核质素(nucleoplasmin)在核小体组装过程中的作用。1987年,Ellis将凡能促进蛋白质折叠和组装的蛋白质统称为分子伴侣。随后,Ellis等又提出了分子伴侣的基本概念:在蛋白质折叠和组装过程中,分子伴侣防止多肽链内或链间因疏水键等相互作用表面瞬间暴露而形成错误结构,并且还可以破坏已经形成的错误结构。分子伴侣本身不是折叠或组装产物的一部分。1.2分子伴侣的几个例子Nucleoplasmins:体内的一系列过程,如DNA复制,RNA转录与剪接,核小体或核糖体的装配,都涉及到带正电的蛋白质与带负电的核酸之间较强的离子键的相互作用。实验发现,这些过程都与Nucleoplasmin相类似的蛋白质的参与。Charperonin(Cpn):是指在细菌、线粒体、质体中发现的一类序列同源的Charperonins,该家族具有独特的双层7-9元环状结构的寡聚蛋白(Hemminngwen;cheng 1998),它们的作用是促进体内正常条件以及应急反应下的蛋白质折叠,这一过程需要ATP提供能量。Cpns包括细菌的GroEL、叶绿体的Rubisco亚基结合蛋白(RuSBP)与线粒体的热休克蛋白Hsp60。Stress-70家族:该家族首先在热休克反应中发现,并研究多年,近些年来,发现Stress-70也在蛋白质的折叠与装配过程中起作用,因而受到广泛关注。参与这些作用的Stress-70的成员有:E. coli的DnaK、酵母细胞质的Ssa1p和Ssa2p、内质网的Kar2p和线粒体的Ssc1p。哺乳动物细胞质的Hsp70蛋白和Prp73多肽识别蛋白、内质网的Bip。这些蛋白可被细胞内未折叠蛋白质的增多而诱导并识别靶分子,在其他热休克蛋白或细胞因子的参与下,水解ATP调节蛋白的构象或折叠状态。Stress-90家族:分子量在90ku左右,包括大肠杆菌胞
【序号】: 1【作者】: 刘琦,导师:常志文【题名】: 热休克蛋白60与动脉粥样硬化相关性研究【学位年度】: 2005【授予单位】: 首都医科大学【授予学位】:博士【序号】: 2【作者】: 张晓敏,导师:邬堂春【题名】:热休克蛋白60抗原、抗体和70抗体在冠心病发病中的作用——自身免疫反应的特征【学位年度】: 2008【授予单位】: 华中科技大学【授予学位】:博士在万方网上能搜到,希望大家帮忙,谢谢!