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我公司现有一台ABI基因测序仪需要维修,请对测序仪维修保养有经验的工程师给予联系。。。。联系方式:13560329096,莫先生
[font=Arial, &][color=#333333]目的[/color][/font][font=Arial, &][color=#333333] 研究6 种甘肃道地药材中药饮片中污染微生物的群落特征,建立6种中药饮片负载微生物的种属及其丰度信息数据库,为6种中药饮片微生物限度标准制定提供依据。 [/color][/font][font=Arial, &][color=#333333]方法[/color][/font][font=Arial, &][color=#333333] 收集市售当归、党参、黄芪、甘草、板蓝根和半夏6种中药饮片各30批,合计180批,参照2020年版《中国药典》,检查180批中药饮片样品的需氧菌总数(total aerobic microbial count, TAMC)、霉菌和酵母菌总数(total combined yeasts and molds count, TYMC)、耐胆盐革兰阴性菌(bile-tolerant gram-negitive bacteria, BGB)及沙门菌,并基于16S rDNA高通量测序方法研究中药饮片中污染微生物的群落特征。 [/color][/font][font=Arial, &][color=#333333]结果[/color][/font][font=Arial, &][color=#333333] [color=#333333]本研究以当归、党参、黄芪、甘草、板蓝根和半夏6种共计180批中药饮片为研究对象,[/color]180批样品均检出需氧菌、酵母菌和霉菌。首先参照2020年版《中国药典》采用传统培养法对微生物污染情况进行分析,180批样品均检出需氧菌、酵母菌和霉菌。通过16S rDNA高通量测序对每种中药饮片进行了微生物多样性分析,建立了6种中药饮片负载微生物的种属及其丰度信息数据库,污染微生物分布于38个门、935个已鉴定属,不同类别中药饮片中的优势菌属具有明显差异。植株自身和加工储存环节引入是饮片微生物群落的两种重要来源。 [/color][/font][font=Arial, &][color=#333333]结论[/color][/font][font=Arial, &][color=#333333] 研究表明,16S rRNA高通量测序方法比传统培养法能够获得更加全面的中药饮片中污染微生物群落信息, 不同类别中药饮片中的优势菌属具有明显差异。中药饮片微生物污染具有一定的致病风险,饮片的微生物限度标准亟待完善,饮片生产加工过程控制亟待加强。[/color][/font]
以下问题是我摘抄的,当时记在我的记录本上,所以没有记下名字,很是抱歉。但是我想拿出来这是对大家的一种共享,所以祈求大家原谅。Q:我将PCR产物纯化后送测,结果说是双模板,测序峰重叠,请问是模板不纯吗?A:应该指的是模板不纯。可能是割胶纯化时,范围偏大,非目的基因片断亦混入其中。该非目的片断的大小与目的片断也类似。如果片断长度大的话,可以先连一下克隆载体,这样测序应该没有问题。 测序峰重叠不知道你讲的时双峰类型的还是指比较杂乱的而且无序的重叠: 如果是双峰(TP),有可能是标本来源是杂合子的缘故,如果是后者,原因很多,一般看打印出的测许结果大致可以判断。原因:1。有时候PCR产物可能就是失败的产物或者浓度很低。2.提纯不好,非目的片段保留。3.测序时Matrix等条件的错误。Q:测序结果不好,测序峰比较乱,基线不平,测许公司说含有复杂结构,现急需要该序列,请问高手这种情况该怎么办?有什么测许方法?A;我自己曾经亲自做过测序,对于这种情况,一般是有解决的方法的。不过公司不愿意为了你自己的一个样品去专门摸索条件。1. 最大可能是提取的质粒不纯,可以将质粒再次转化后挑单克隆重做(很奏效)。2. 直接在测序前的模板热变性使用86度,5分钟而不是大多数的96度3分钟3. 实在不行切后分别放到T载体上,一般都可以保证顺利读出序列。最后值得一提的是如果能自己根据理论序列给设计几个比较合理的测序引物可能一切就OK了。Q:上星期将我的PCR纯化产物拿到TAKARA测序,结果今天公司打电话来说测了100多个bp就读不下去了,建议我克隆后再测,我的PCR产物纯化只有很亮的一条带,不知道为什么测不出来。答:测不下去的原因主要是序列里面有困难序列,二级结构或短序列重复,比如发卡结构和AT长重复等,甲基化的影响不大清楚,本人认为不会影响测序。所以,PCR产物测不下去的话,克隆后也很难保证测过去。其实就测序来说,PCR产物还是质粒都无所谓,只要样品纯可以了。正向测不通反向再测也可能会测通,因为DNA中正链和反链二级结构不是完全一样的,正链中遇到困难序列在反链中可能相对简单,测序酶可能可以急需合成DNA。另外,还可以改一下测序PCR的反映条件等等,也可以测通。