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自从去年7月份初,我着手开始准备测血液中的汞元素,由于是新手,也没有专业的人员培训,所以就边学习边做,直到今年的3月份才把血液样本做完。算是比较成功。所以在这里我想分享下我的方法,虽然大致是引用文献的步骤,但也有自己经过改良的一部分,不足是肯定有的,希望懂的人可以过来指点下。 样品:0.2ml的血样。 试剂:37%的硝酸,双氧水,鹏氢化钠,氢氧化钠,重铬酸钾,汞标准品,盐酸。(最好是国药的,含汞少)。说到这个试剂,其实也是给我造成了很大的麻烦,开始的时候,使用的是实验室统一购置的天津和北京代理的试剂,做了好多次效果总是不理想,后面刚好一次凑巧的时间,碰到了我们实验室一个老师的老公,他刚好是做原子荧光类的工程师。所以给我提了很多意见,特别是购买试剂方面的问题。所以后面自己又重新购置了一批国药的试剂去做。步骤:1,取0.2ml血样加入微波消解罐中,然后加入3ml的硝酸和1ml的双氧水,反应5min左右。 2,放入微波消解仪中,100度保持2min,130度保持2min,160度保持2min,180度保持3min,200度保持5min。关于消解的温度和时间的设置,我也是改了很多回,回来工程师说不存在过度消解的问题,所以,后面我就延长的消解的时间,而且不同的物质在各个温度的消解情况是不一样的,所以温度应该设置间隔短一点较好,以20-30度间隔为佳。 3,消解完后冷却取出,加入0.5ml低溶度的盐酸,85度赶酸3h。关于赶酸的时间和温度我摸索了很长的时间,也试过用水浴的方法来做,但效果一直都不是很好,所以最后一直采用用赶酸仪赶酸。温度不能太高,100度以下为佳,关于温度这个问题也曾跟好几个工程师联系,他们都表示自己用的赶酸温度在85度上下,后面结果实验我采用了85度。 4,赶酸完成后,大概剩余0.5-1.0ml的液体,用配好的重铬酸钾溶液定容到10ml。 5,上机检测。 回收率:做回收率大概做了8次左右,上下也有一些浮动,但都维持在80-120之间。 有兴趣的可以试下,也可以留言商讨下。。。。。。。。。。。。。。。。 我感觉测汞的确很难做,国内外的文章也不多。 这是我自己快10个月的心得体会,希望对有需要的人能有所帮助。
尿液是监测人体OPs暴露最常用的生物样本,优点为样本易于收集,缺点是无法通过尿液中的代谢物推断出特定母体农药的信息。通过检测血液或血液制品可以直接监测血液中的OPs母体化合物,而不是代谢物。但是,血液样本不易收集,样本量有限且血液中农药浓度水平低,对分析技术的灵敏度要求更高。除了常用的尿液、血液样本外,其他样本如胎粪、脐带血、羊水等也在暴露评估中起着重要作用。胎粪可反映妊娠16周到分娩前的污染物长期累计暴露水平,是胎儿宫内暴露评估的良好基质。脐带血可以不用静脉穿刺即可得到相对较大的样本量 (30mL)。与胎粪只能检测妊娠期第16周到分娩这段时间的婴儿暴露剂量相比,测量羊水(妊娠12~20周期间)可以了解胎儿早期暴露情况。其他可用于暴露评估的生物样本如唾液、头发等在人体OPs生物监测与暴露评估研究中报道较少。
我们把医院或者血站用来分离血液的离心机称之为血液离心机, 血液分离是医学和生物工程实验中经常要做的事情,而血液分离方法很多,所用到的设备和操作过程有所差异。较为常见的是血库通过血库离心机进行血液分离。大部分化验项目检查的并不是全血,而是血浆或血清。血浆是指去掉血细胞的血液,而血清则是去掉纤维蛋白原的血浆。[align=center] [img=血液的基本组成,650,488]http://www.hexiyiqi.com/d/file/hexi2012xingyedongtai/2020-01-03/53dab9583176db8e76f7521f21af66f2.jpg[/img][/align]血液凝固的本质是血浆内的可溶性纤维蛋白原转变为不溶解的纤维蛋白,纤维蛋白呈细丝状,互相交织成网、网罗大量血细胞,形成凝胶状的血块。血凝后30分钟~1小时,血凝块中的血小板收缩蛋白收缩,使血块回缩变硬,挤出清澈的液体,称为血清。血清与血浆的区别,在于血清缺乏纤维蛋白原和参与血凝的凝血因子,但又增添了凝血过程中由血小板释放的少量物质。血浆或血清这两种成分无法直接从血液中分离,需要通过血液离心机进行离心分离获得。对血清中抗原和抗体的检查,是诊断乙肝、疟疾、艾滋病等感染的关键步骤。离心类似洗衣机的甩干功能,血液各成分比重不同,因而会被离心力分层,得到分离开的血浆或血清。[align=center][url=http://www.hexiyiqi.com/hexi2012chanpinzhongxin/taishigaosulengdonglixinji/2012-10-17/69.html][img=检验科离心机]http://www.hexiyiqi.com/d/file/hexi2012chanpinzhongxin/taishigaosulengdonglixinji/2012-10-17/0e080cd46b2ee061b55caabaaee8cbf2.jpg[/img][/url][b][url=http://www.hexiyiqi.com/hexi2012chanpinzhongxin/shiyanshilixinji/]检验科离心机[/url][/b][/align]血液的成分:血液由有形成分和血浆所组成。其中有形成分(血细胞)占血液的45%,共有三类。血液离心机分离血液后得到以下成分:[align=center][img=血液,650,488]http://www.hexiyiqi.com/d/file/hexi2012xingyedongtai/2020-01-03/a0fa89f6139b90038394bd5a97578164.jpg[/img][/align]1.红细胞:是血液有形成分中数量最多的一种,其体积小,圆而扁平,边缘厚,中间凹入,无核,其主要成分是血红蛋白。2.白细胞:白细胞是无色、有核的圆形细胞,比红细胞略大。白细胞种类多,如有颗粒细胞、淋巴细胞等,它们在血液中各占有一定比例,当患病时,会发生变化,可作为诊断疾病的参考数据。3.血小板:血小板是很小的无核小体,其主要功能是促进血液凝固。血液中除有形成分外,其他部分即为血浆。血浆是血液中的液体成分。血浆中含许多重要物质,有蛋白质、无机盐(钾、钠、钙等)、抗体、激素等。其中水分占91%---92%。[b]如何分离血清样本:[/b]要根据分离目标体和分离精度要求结合你的分离设备来确定的,一般分离血清常见的就是小型的[url=http://www.hexiyiqi.com/hexi2012chanpinzhongxin/xingyezhuanyonglixinji/]医用离心机[/url](检验科离心机)分离血清样本。[b]分离方法:[/b]一般情况下,室温(37度)静置半小时以上,打开离心机,3500-4000rpm离心5-10分钟。分离得到血清。如果测酶等易降解的指标,按需要放4度静置半小时以上,离心。(放置37度一段时间的目的是让血液凝固,析出血清,因为血液凝固后,纤维蛋白收缩,血清就能析出。)[align=center][url=http://www.hexiyiqi.com/hexi2012chanpinzhongxin/xingyezhuanyonglixinji/2012-10-19/91.html][img=血液离心机]http://www.hexiyiqi.com/d/file/hexi2012chanpinzhongxin/xingyezhuanyonglixinji/2012-10-19/ffb91b7999fb68376c9ce901865efdf7.jpg[/img][/url][b]血液离心机[/b][/align][b]血液离心机操作步骤:[/b]1、使用各种离心机时,必须事先在天平上精密地平衡离心管和其内容物,平衡时重量之差不得超过各个离心机说明书上所规定的范围,每个离心机不同的转头有各自的允许差值,转头中绝对不能装载单数的管子,当转头只是部分装载时,管子必须互相对称地放在转头中,以便使负载均匀地分布在转头的周围。2、若要在低于室温的温度下离心时,转头在使用前应放置在冰箱或置于离心机的转头室内预冷。3、离心过程中不得随意离开,应随时观察离心机上的仪表是否正常工作,如有异常的声音应立即停机检查,及时排除故障。4、每个转头各有其最高允许转速和使用累积限时,使用转头时要查阅说明书,不得过速使用。每一转头都要有一份使用档案,记录累积的使用时间,若超过了该转头的最高使用时限,则须更换转头。