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[align=center]斑马鱼的研究现状[/align][font=宋体][size=14px][color=black]斑马鱼([/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black]Zebrafish[/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black])作为新一代应用于药物活性检测的模式生物,目前其药理模型已基本成熟并广泛应用于医药药理研究。斑马鱼作为生物模型而被广泛应用于药物筛选,并成为研究心血管促生和抑制作用模型[/color][/size][/font][sup][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black][1][/color][/size][/font][/sup][font=宋体][size=14px][color=black]。斑马鱼在医药药理研究过程中,可用来研究器官发育和疾病模型,是常见的模式生物之一,斑马鱼的胚胎在肉眼观察下呈透明状,而且斑马鱼在染色剂或荧光标记下都可通过显微镜观察其体内器官。当斑马鱼用作生物模型检测活性成分的药理作用时,斑马鱼的药物用量少。斑马鱼在药物活性筛选时,其生长周期短,耗时少,效率高。在活性检测实验中,斑马鱼的实验操作简便。在受精后[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black]48[/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]小时后,斑马鱼的背动脉与轴静脉之间形成简单的循环网。在受精后[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black]72[/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]小时后,斑马鱼体内形成管脉系统,肠下静脉血管[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black](SIVs)[/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]初步形成[/color][/size][/font][sup][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black][2][/color][/size][/font][/sup][font=宋体][size=14px][color=black]。李艳[/color][/size][/font][sup][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black][3][/color][/size][/font][/sup][font=宋体][size=14px][color=black]等研究发现丹红注射液对斑马鱼节间血管具有明显的再生功能,对血管损伤具有明显的修复保护作用。该实验建立了研究血管新生干预作用的可靠实验方法。梁爱华[/color][/size][/font][sup][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black][4][/color][/size][/font][/sup][font=宋体][size=14px][color=black]研究发现斑马鱼的有些突变具有与人类疾病相似的临床症状,可作为先天性铁粒幼红细胞性贫血、骨髓再生障碍等血液性疾病模型和心肌收缩不良、心律不齐等心血管疾病模型。魏易洪[/color][/size][/font][sup][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black][5][/color][/size][/font][/sup][font=宋体][size=14px][color=black]等通过实验研究证明人参水煎液在较低浓度下可促进[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black]VRI[/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]模型斑马鱼节间血管([/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black]ISVs[/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black])增长,较高浓度的人参水煎液则会出现相反的毒副作用,建立节间血管([/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black]ISVs[/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black])抑制模型,并证明其方法的可行性。[/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]斑马鱼作为生物模型而被广泛应用于药物筛选,并成为研究心血管促生和抑制作用的主要模型之一。其繁殖生长周期短,子代数量多,可同时大规模检测不同样品。运用斑马鱼大规模快速比较药物含量高低,体现其模式生物的筛选作用,同时也能为研究心脑血管药物活性评价提供一定的参考。运用斑马鱼作为大规模快速比较药物含量高低的模式生物筛选药物的药理作用,大大提高了检测效率。[/color][/size][/font]参考文献[font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black][1] WesterfieLd M. The zebrafish book:aguide for the Laboratory use of zebrafish[/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]([/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black]Daniorerio[/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black])[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black][ M ]. Oregon: University of Oregon Press, 2007.[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black][2] KimmeL CB. Genetics and earLy deveLopmentof zebrafish[J]. Trends in genetics, 1989, 5 ( 8 ):283-288.[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black][3] [/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]李艳[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black], [/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]刘晓金[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black], [/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]王平[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black],[/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]等[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black]. [/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]丹红注射液对斑马鱼促血管作用的研究[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black][J]. [/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]中华中医药杂志[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black], 2016, 31 ( 06 ): 2270-2273.[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black][4] [/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]梁爱华[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black]. [/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]斑马鱼一种可用于中药药效和毒性筛选的鱼类模型[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black][J]. [/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]中国中药杂志[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black],2009, 34 ( 22 ):2839-2840[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black][5] [/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]魏易洪[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black], [/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]周忠焱[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black], [/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]朱灵妍[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black],[/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]等[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black]. [/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]人参水煎液对斑马鱼血管生长作用[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black][J]. [/color][/size][/font][font=宋体][size=14px][color=black]辽宁中医药大学学报[/color][/size][/font][font='Times New Roman',serif][size=14px][color=black], 2017, 19 ( 04 ) : 8-10.[/color][/size][/font]
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[font=宋体]急性肝损伤([/font]acute liver injury[font=宋体],[/font]ALI[font=宋体])是由无肝病或患有肝病但处于稳定状态的人员在受到长期熬夜、大量酗酒、肝脏缺血缺氧及药物中毒等因素所致[/font][sup][color=black][1-2][/color][/sup][font=宋体]。随着医学技术的发展,越来越多的研究者发现[/font]ALI[font=宋体]的发生发展与炎症反应、氧化与抵御氧化系统失衡及铁死亡等密切相关[/font][sup][color=black][3-5][/color][/sup][font=宋体]。肝脏损伤进一步恶化,会发展为更为严重的衰竭[/font][sup][color=black][6-7][/color][/sup][font=宋体],诱发机体免疫能力下降、血糖含量异常、脂质代谢紊乱等异常现象累及其他器官损伤。目前,[/font]ALI[font=宋体]的临床防治主要采用保肝药物进行治疗,严重者会选择肝脏替代治疗[/font][sup][color=black][8-10][/color][/sup][font=宋体]。 现代研究发现很多中药及有效成分在防治肝病领域表现出较好的前景[/font][sup][color=black][11-14][/color][/sup][font=宋体]。灯盏花素可以降低[/font][font=宋体]丙氨酸氨基转移酶[i][/i][/font][font=宋体]([/font]alanine aminotransferase[font=宋体],[/font]ALT[font=宋体])、[/font][font=宋体]天冬氨酸[/font][font=宋体]氨基转移酶[/font][font=宋体]([/font]aspartate aminotransferase[font=宋体],[/font]AST[font=宋体])和丙二醛([/font]malondialdehyde[font=宋体],[/font]MDA[font=宋体])水平,提高[color=var(--weui-LINK)]抗氧化剂[i][/i][/color]超氧化物歧化酶([/font]superoxide dismutase[font=宋体],[/font]SOD[font=宋体])的活性,有效调节核因子[/font]E2[font=宋体]相关因子[/font]2[font=宋体]([/font]nuclear factor-erythroid 2-related factor 2[font=宋体],[/font]Nrf2[font=宋体])信号通路,减轻酒精引起的肝损伤[/font][sup][color=black][15][/color][/sup][font=宋体]。[/font][font=宋体]秦皮甲素能够降低四氯化碳([/font]carbon tetrachloride[font=宋体],[/font]CCl[sub][color=black]4[/color][/sub][font=宋体][color=black])[/color][/font][font=宋体]引起的小鼠肝脏中纤维沉积现象,减少[/font]AST[font=宋体]、[/font]ALT[font=宋体]及胆红素([/font]total bilirubin[font=宋体],[/font]TBil[font=宋体])的含量,下调透明质酸酶([/font]hyaluronidase[font=宋体],[/font]HAase[font=宋体])、[/font]III[font=宋体]型前胶原([/font]procollagen type III[font=宋体],[/font]PCIII[font=宋体])和层黏连蛋白([/font]laminin[font=宋体],[/font]LN[font=宋体])的水平,并改善肝组织炎症与脂质空泡[/font][sup][color=black][16][/color][/sup][font=宋体]。因此,从天然药用植物探索抗[/font]ALI[font=宋体]活性物质仍然是目前临床防治[/font]ALI[font=宋体]的有效途径。[/font] [font=宋体]北桑寄生[/font][i]Loranthus tanakae[/i] Franch. et Sav.[font=宋体]是桑寄生科桑寄生属落叶灌木[/font][sup][color=black][17][/color][/sup][font=宋体],寄生对象为栎属、桦属、李属等树木,在中国、日本、韩国、朝鲜等均有分布[/font][sup][color=black][18][/color][/sup][font=宋体]。现代研究表明北桑寄生中含有糖类、甾体皂苷类、黄酮类等次生代谢物[/font][sup][color=black][19][/color][/sup][font=宋体]。其中黄酮类化合物在北桑寄生药材中含量丰富(约[/font]10.58%[sup][color=black][20][/color][/sup][font=宋体])。目前,北桑寄生的药理活性研究较少,还尚未见北桑寄生在治疗[/font]ALI[font=宋体]方面的研究报道。课题组前期研究显示,北桑寄生总黄酮([/font]total flavonoids of [i]L. tanakae[/i][font=宋体],[/font]LTF[font=宋体])具有良好的抗氧化作用,可以促进脂多糖诱导的[/font]RAW264.7[font=宋体]细胞中[/font]Nrf2[font=宋体]转录活性,抑制炎症反应的发生[/font][sup][color=black][21][/color][/sup][font=宋体]。因此,本研究利用硫代乙酰胺([/font]thioacetamide[font=宋体],[/font]TAA[font=宋体])建立斑马鱼[/font]ALI[font=宋体]模型,对北桑寄生中黄酮类化合物的保肝活性进行研究,以期为北桑寄生的药理研究提供科学依据。[/font] [b][color=#ffffff][back=#7a4442]1 [font=黑体]材料[/font][/back][/color][/b]1.1 [font=黑体]动物[/font]AB[font=宋体]野生型斑马鱼品系、[/font]CZ320[font=宋体]肝脏荧光标记斑马鱼[/font]Tg[font=宋体]([/font][i]-1.7apoa2:GFP[/i][font=宋体])和[/font]CZ59[font=宋体]中性粒细胞荧光标记斑马鱼[/font]Tg[font=宋体]([/font][i]lyz:DsRED2[/i][font=宋体])由山东第一医科大学斑马鱼中心提供。斑马鱼养殖在昼夜交替周期为[/font]14 h/10 h[font=宋体]的循环系统中,水温控制在([/font]28[font=宋体]±[/font]1[font=宋体])℃,[/font]pH[font=宋体]值与盐浓度分别维持在[/font]7.4[font=宋体]、[/font]0.004%[font=宋体]左右,每日饲喂[/font]2[font=宋体]次丰年虾,[/font]1[font=宋体]次普通饲料。[/font][b][/b]1.2 [font=黑体]药品与试剂[/font]LTF[font=宋体]为本实验室自制[/font][sup][color=black][22][/color][/sup][font=宋体];芦丁对照品(质量分数≥[/font]98%[font=宋体],批号[/font]153-18-4[font=宋体])购自西安瑞林生物科技有限公司;[/font][i]N[/i]-[font=宋体]乙酰半胱氨酸([/font][i]N[/i]-acetylcysteine[font=宋体],[/font]NAC[font=宋体],质量分数≥[/font]98%[font=宋体],批号[/font]616-91-1[font=宋体])、油红[/font]O[font=宋体]粉末(批号[/font]1320-06-5[font=宋体])购自上海源叶生物有限公司;[/font]TAA[font=宋体](批号[/font]62-55-5[font=宋体])购自美国[/font]Sigma-Aldrich[font=宋体]公司;[/font]ALT[font=宋体]试剂盒(批号[/font]C009-2-1[font=宋体])、[/font]AST[font=宋体]试剂盒(批号[/font]C010-2-1[font=宋体])、[/font]MDA[font=宋体]试剂盒(批号[/font]A003-1-1[font=宋体])、[/font]SOD[font=宋体][color=var(--weui-LINK)]试剂盒[i][/i][/color](批号[/font]A001-3-2[font=宋体])、过氧化氢酶([/font]catalase[font=宋体],[/font]CAT[font=宋体])试剂盒(批号[/font]A007-2-1[font=宋体])购自南京建成生物工程研究所;还原型谷胱甘肽([/font]reduced glutathione[font=宋体],[/font]GSH[font=宋体])试剂盒(批号[/font]BC1175[font=宋体])、活性氧([/font]reactive oxygen species[font=宋体],[/font]ROS[font=宋体])试剂盒(批号[/font]CA1410[font=宋体])购自北京索莱宝科技有限公司;[/font]BCA[font=宋体]蛋白定量试剂盒(批号[/font]P0012[font=宋体])购自碧云天生物技术有限公司;苏木素[/font]-[font=宋体]伊红([/font]hematoxylin-eosin[font=宋体],[/font]HE[font=宋体])染液套装(批号[/font]G1003[font=宋体])购自武汉赛维尔生物科技有限公司;其他试剂均为分析级别。[/font]1.3 [font=黑体]仪器[/font]BO-IR[font=宋体]型组织研磨破碎仪(山东百欧医疗科技有限公司);[/font]HC-2518R[font=宋体]型高速冷冻离心机(中佳有限公司);[/font]DK-98-II[font=宋体]型电热恒温水锅(天津市泰斯特仪器有限公司);[/font]SpectraMaxABS[font=宋体]型酶标仪([/font]CMax Plus Molecular Devices[font=宋体]公司);[/font]HPG-280BX[font=宋体]型恒温培养箱(东联电子技术开发有限公司);[/font]IX83[font=宋体]型倒置荧光显微镜(日本[/font]Olympus[i][/i][font=宋体]公司);[/font]GL224I-ISCN[font=宋体]型万分之一天平(德国[/font]Sartorius[font=宋体]公司);斑马鱼养殖设备(上海海圣生物实验设备有限公司);[/font]JB-P5[font=宋体]型包埋机(武汉俊杰电子有限公司);[/font]CRYOSTAR NX50[font=宋体]型冰冻切片机(赛默飞世尔科技有限公司)。 [/font][b][color=#ffffff][back=#7a4442]2 [font=黑体]方法[/font][/back][/color][/b]2.1 [b]LTF[/b][font=黑体]含量检测[/font][font=宋体]配制芦丁对照品溶液,绘制回归方程。称取实验室自制的[/font]LTF[font=宋体],配制成质量浓度为[/font]1 mg/mL[font=宋体]的溶液,使用三氯化铝[/font]-[font=宋体]醋酸钠溶液显色,利用回归方程计算[/font]LTF[font=宋体]的含量[/font][sup][color=black][22-23][/color][/sup][font=宋体]。[/font]2.2 [b]LTF[/b][font=黑体]耐受浓度筛选[/font][font=宋体]将成熟健康的[/font]6[font=宋体]月龄斑马鱼以[/font]1[font=宋体]∶[/font]2[font=宋体]或[/font]2[font=宋体]∶[/font]2[font=宋体]的雌雄比放入产卵缸中,待自然产卵后,收集透明胚胎,用循环系统中的养鱼水清洗[/font]2[font=宋体]次,洗去粪便与杂质,转移至干净的培养皿,添加含有少量亚甲基蓝溶液的养鱼水,放置于[/font]28 [font=宋体]℃恒温培养箱内孵育[/font]3 d[font=宋体]。将受精后[/font]3 d[font=宋体]([/font]3 d post fertilization[font=宋体],[/font]3 dpf[font=宋体])健康[/font]AB[font=宋体]幼鱼转移到[/font]12[font=宋体]孔板中,每孔放入[/font]30[font=宋体]尾幼鱼,设置对照组和[/font]LTF[font=宋体]([/font]25[font=宋体]、[/font]50[font=宋体]、[/font]100[font=宋体]、[/font]200[font=宋体]、[/font]400[font=宋体]、[/font]800 μg/mL[font=宋体])组,各孔为[/font]4 mL[font=宋体]体系,对照组加入含[/font]0.1%[font=宋体]二甲基亚砜([/font]dimethyl sulfoxide[font=宋体],[/font]DMSO[font=宋体])的养鱼水,给药组加入不同质量浓度的[/font]LTF[font=宋体]药液,记录各组幼鱼生存情况,绘制生存曲线。[/font]2.3[b]LTF[/b][font=黑体]对[/font][b]TAA[/b][font=黑体]诱导的斑马鱼肝损伤的影响[/font]2.3.1 [font=宋体]斑马鱼荧光肝脏分析[/font] [font=宋体]选取具有荧光标记的[/font]3 dpf Tg[font=宋体]([/font][i]-1.7apoa2:GFP[/i][font=宋体])转基因斑马鱼幼鱼于[/font]6[font=宋体]孔板内,设置对照组、模型组、阳性药[/font]NAC[font=宋体]([/font]10 μmol/L[font=宋体])组和[/font]LTF[font=宋体]([/font]12.5[font=宋体]、[/font]25.0[font=宋体]、[/font]50.0 μg/mL[font=宋体])组,每孔[/font]15[font=宋体]尾。对照组给予斑马鱼养殖水,模型组加入[/font]7 mmol/L TAA[font=宋体]溶液,各给药组给予[/font]7 mmol/L TAA[font=宋体]和相应药物,给药处理[/font]72 h[font=宋体]。给药结束后,斑马鱼用三卡因麻醉,置于载玻片上,使幼鱼两眼重叠,用荧光显微镜采集同一体位图像,使用[/font]Image J[font=宋体]软件统计幼鱼的荧光肝脏面积。[/font]2.3.2 [font=宋体]斑马鱼体长与卵黄囊吸收延迟的面积统计[/font] [font=宋体]按“[/font]2.3.1[font=宋体]”项下方法分组和给药,给药结束后,使用[/font]Image J[font=宋体]软件测量幼鱼的体长与卵黄囊吸收面积。[/font]2.3.3 HE[font=宋体]染色[/font] [font=宋体]按“[/font]2.3.1[font=宋体]”项下方法分组和给药,给药结束后,将幼鱼固定后用石蜡包埋,制作切片,进行[/font]HE[font=宋体]染色,最后用中性树胶封片。在光学显微镜下采集图像,分析各组斑马鱼幼鱼肝脏组织病理状况。[/font]2.3.4 [font=宋体]油红[/font]O[font=宋体]染色[/font] [font=宋体]按“[/font]2.3.1[font=宋体]”项下方法分组和给药,给药结束后,各组随机选取[/font]10[font=宋体]尾幼鱼,三卡因麻醉后,用[/font]4%[font=宋体]组织固定液于[/font]4 [font=宋体]℃[/font][font=宋体]固定[/font]12 h[font=宋体]。用[/font]PBS[font=宋体]洗净固定液,在摇床上分别以[/font]20%[font=宋体]、[/font]40%[font=宋体]、[/font]80%[font=宋体]、[/font]100%[font=宋体]的[/font]1,2-[font=宋体]丙二醇梯度脱水[/font]10 min[font=宋体]。然后,用[/font]0.5%[font=宋体]油红[/font]O[font=宋体]染液在水浴中避光染色[/font]1 h[font=宋体],再用[/font]100%[font=宋体]、[/font]80%[font=宋体]、[/font]40%[font=宋体]、[/font]20%[font=宋体]的[/font]1,2-[font=宋体]丙二醇依次脱水[/font]15 min[font=宋体],最后用[/font]PBS[font=宋体]清洗,在显微镜下采集肝脏区域图像,利用[/font]Image J[font=宋体]软件测定肝脏处的平均光密度。[/font]2.3.5 [font=宋体]斑马鱼匀浆蛋白浓度测定[/font] [font=宋体]按“[/font]2.3.1[font=宋体]”项下方法分组和给药,给药结束后,各选取[/font]45[font=宋体]尾幼鱼,吸净水分,准确称定质量,按质量与体积[/font]1[font=宋体]∶[/font]9[font=宋体]的比例加入[/font]0.9% [color=var(--weui-LINK)]NaCl[i][/i][/color][font=宋体]水溶液,利用冷冻匀浆机进行研磨,离心后吸取上清,用[/font]BCA[font=宋体]试剂盒测定蛋白浓度。[/font]2.3.6 [font=宋体]斑马鱼肝功能指标测定[/font] [font=宋体]按“[/font]2.3.1[font=宋体]”项下方法分组和给药,给药结束后,按“[/font]2.3.5[font=宋体]”项下方法制备[/font]10%[font=宋体]斑马鱼匀浆上清液,按试剂盒说明书测定[/font]AST[font=宋体]和[/font]ALT[font=宋体]活力。[/font]2.3.7 [font=宋体]斑马鱼体内[/font]ROS[font=宋体]水平检测[/font] [font=宋体]按“[/font]2.3.1[font=宋体]”项下方法分组和给药,给药结束后,每组收集[/font]15[font=宋体]尾幼鱼,采用终浓度为[/font]10 μmol/L DCFH-DA[font=宋体]荧光探针,室温避光染色[/font]20 min[font=宋体],在荧光显微镜下观察并进行拍照,用[/font]Image J[font=宋体]软件统计平均荧光强度以指示[/font]ROS[font=宋体]水平。[/font]2.3.8 [font=宋体]斑马鱼体内氧化应激相关酶的测定[/font] [font=宋体]按“[/font]2.3.1[font=宋体]”项下方法分组和给药,给药结束后,按“[/font]2.3.5[font=宋体]”项下方法制备[/font]10%[font=宋体]斑马鱼匀浆上清液,用上清液的蛋白质浓度进行归一化处理,测定[/font]CAT[font=宋体]、[/font]SOD[font=宋体]、[/font]MDA[font=宋体]、[/font]GSH[font=宋体]的含量。[/font]2.3.9 [font=宋体]中性粒细胞迁移数目统计[/font] [font=宋体]按“[/font]2.3.1[font=宋体]”项下方法分组和给药,给药[/font]72 h[font=宋体]后,观察斑马鱼幼鱼中性粒细胞迁移情况,统计卵黄囊附近的中性粒细胞迁移数目。[/font]2.4 [font=黑体]数据学分析[/font][font=宋体]使用[/font]SPSS[font=宋体]数据编辑器与[/font]Graphpad Prism 8.0.1[font=宋体]软件进行数据分析及制图,多组数据之间比较采用单因素方差分析([/font]One way-ANOVA[font=宋体])和[/font]Duncan[font=宋体]法,各组数据用[/font][font=宋体]表示。 [/font][color=#ffffff][b][back=#7a4442]3 [font=黑体]结果[/font][/back][/b][/color]3.1 [b]LTF[/b][font=黑体]含量测定[/font][font=宋体]根据吸光度([/font][i]A[/i][font=宋体])值,计算得芦丁的回归方程为[/font][i]y[/i][font=宋体]=[/font]10.676 [i]x[/i][font=宋体]+[/font]0.039 5[font=宋体],[/font][i]R[/i][sup][color=black]2[/color][/sup][font=宋体]=[/font]0.999 2[font=宋体];线性范围为[/font]0.000 8[font=宋体]~[/font]0.056 0 mg/mL[font=宋体]。以芦丁为对照品,测得[/font]LTF[font=宋体]质量分数为[/font]98.06%[font=宋体]。[/font]3.2 [b]LTF[/b][font=黑体]对斑马鱼的耐受性考察[/font][font=宋体]将[/font]3 dpf AB[font=宋体]斑马鱼暴露在不同质量浓度的[/font]LTF[font=宋体]溶液中,每[/font]24[font=宋体]小时观察记录幼鱼的存活情况。如图[/font]1[font=宋体]所示,当[/font]LTF[font=宋体]质量浓度为[/font]50 μg/mL[font=宋体]及以下时,幼鱼未出现出明显的发育、形态、行为异常。随着[/font]LTF[font=宋体]质量浓度增大至[/font]100 μg/mL[font=宋体],有[/font]3.3%[font=宋体]幼鱼开始死亡。[/font]LTF[font=宋体]质量浓度大于[/font]200 μg/mL[font=宋体],少量幼鱼出现脊背弯曲与游泳转圈等异常行为,死亡现象较为明显。斑马鱼给予[/font]200[font=宋体]、[/font]400[font=宋体]、[/font]800 μg/mL LTF[font=宋体]处理[/font]24 h[font=宋体]的生存率分别达到[/font]83.3%[font=宋体]、[/font]20.0%[font=宋体]、[/font]0[font=宋体]。[/font]400[font=宋体]、[/font]800 μ