冷冻断裂仪

[b]免费在线讲座福利来了[img]http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09505.gif[/img]名额有限，越早报名，通过审核的机会越大呦！[b]新上讲座 1：[img]file:///C:/Users/yulp/AppData/Local/Temp/3%7D[ZNM7[JS%7BT~0%4SR(3~GF.gif[/img][b]《[b]ACD软件化合物成药性评价及结构优化[/b]》[/b] 举行时间：2017-09-7 10:00立即免费报名：[/b][url=http://www.instrument.com.cn/webinar/meeting_2903.html][b][/b][/url][url]http://www.instrument.com.cn/webinar/meeting_2714.html[/url][b]主讲人：[/b]闫朝辉[/b]ACD/Labs软件应用工程师。\于2012年担任ACD/Labs应用工程师至今，有丰富的软件应用及结构解析经验。[b]主要内容：[/b][img]file:///C:/Users/yulp/AppData/Local/Temp/@I%7B54YLBIABZ8W%7DU96V9GV4.gif[/img]在药物研发过程中，随着项目的深入，人力财力的投入也急剧增加，实验失败的风险也随之增大。往往新药研发单位在一期临床才进行药物的安全性方面评价及药物在体内的代谢等项目评估，因此也就存在极大的失败风险。如果在早期如药物的发现及筛选阶段即对候选物进行in sillico吸收、分布、代谢、排泄、毒性等方面的预测评估则可以减少后期失败的几率，并帮助研究者聚焦于具有合理成药性的先导物，做出快速、准确的项目决策。本次会议与您探讨利用ACD软件如何进行化合物成药性评价及结构优化。[b]新上讲座 2：[img]file:///C:\Users\yulp\AppData\Local\Temp\3}[ZNM7[JS{T~0%4SR(3~GF.gif[/img][b]《针对流体材料样品的冷冻断裂及真空冷冻传输等Cryo-SEM制样技术》[/b] 举行时间：2017-09-15 10:00立即免费报名：[/b][url=http://www.instrument.com.cn/webinar/meeting_2903.html][b][img]file:///C:/Users/yulp/Documents/Tencent%20Files/2850501230/Image/Group/[R)(F8H3IKU(@43DQ[32YWO.png[/img][img]file:///C:/Users/yulp/AppData/Local/Temp/8LDO48C$8@[GWU0353$FOVS.png[/img][/b][/url][url]http://www.instrument.com.cn/webinar/meeting_2582.html[/url]主讲人：吴长江镜制样应用工程师。徕卡公司工作八年，主要负责电镜制样产品的售后服务培训及售前技术支持，熟悉徕卡电镜制样全套产品线及电子显微镜样品制备流程，多次组织公司内部员工的产品培训及电镜用户技术交流会。致力于为国内电镜用户提供更好更方便的电镜样品制备方案.[b]主要内容：[/b][img]file:///C:/Users/yulp/AppData/Local/Temp/@I%7B54YLBIABZ8W%7DU96V9GV4.gif[/img]利用最新高压冷冻仪ICE实现流体材料的快速无损固定[img]file:///C:/Users/yulp/AppData/Local/Temp/@I%7B54YLBIABZ8W%7DU96V9GV4.gif[/img]利用冷冻断裂仪ACE900对冷冻后样品进行断裂、刻蚀、镀膜暴露其内部信息[img]file:///C:/Users/yulp/AppData/Local/Temp/@I%7B54YLBIABZ8W%7DU96V9GV4.gif[/img]配合冷冻真空传输系统VCT500及SEM冷台，实现流体样品的低温直接观察。[b]新上讲座 3：高压冷冻、冷冻替代与冷冻切片技术举行时间：2017-09-22 14:00立即免费报名：[/b][url]http://www.instrument.com.cn/webinar/meeting_2903.html[/url][b]主讲人：[/b]孙磊 是中科院生物物理所生物成像中心高级工程师，多年从事电镜生物样品制备工作，在该领域中具有全面的技术和丰富的经验，尤其在包含高压冷冻、冷冻替代、冷冻切片等技术在内的低温样品制备技术方面，走在国内前列。[b]主要内容：[/b][color=black]低温制样技术是近年兴起的生物电镜制样技术，它可以更加真实有效的保存生物体内结构，捕捉某些生理变化，与传统化学制样手段相比较，可以获得更丰富真实的生物体超微结构。低温制样技术包括高压冷冻、冷冻替代、冷冻切片等多种，讲座将围绕几种方法介绍原理、技术、实验仪器以及具体的实验技巧[/color][color=black]。[/color][color=black][/color][color=black][/color][color=black][/color][color=#ff6666][b]及时获取会议信息，进行业大群，获最新鲜资讯，生物领域用户请加微信请备注姓名，兴趣领域哟，呵呵哒[/b][/color][img=,100,100]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/08/201708231630_01_2507958_3.jpg[/img] [img=,100,92]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/08/201708231632_01_2507958_3.jpg[/img]

TJ2011高通量组织研磨仪对植物叶片的液氮冷冻研磨实验处理材料：植物叶片 （水稻、玉米、小麦、草、蔬菜叶等）1 装物料：将植物叶片截成所需的小段，用镊子夹住，放入1.5/2ml的离心管管底，对离心管进行编号。现以24空离心管适配器为例；2 装研磨珠：每个离心管内装上1个5mm碳化钨（或氧化锆）研磨珠，或3mm碳化钨（或氧化锆）研磨珠5个；3 冷冻保存：将铝合金夹具夹住24孔，固定好，放到专业液氮盒中，加液氮冷冻，3-5分钟，充分冷冻夹具及管内样品。4 溶剂加入：如有需要，在每个离心管中，小心加入裂解液或其他溶剂；4 主机运转：设定转速与时间例如1500转/分钟 3min，点击Start5 研磨过程：在典型研磨时间（2~3min）内，研磨结束。可同时得到2*24=48个通量的样品；6 取下夹具，进行下一步实验。注意事项：在上夹具时，要注意一是要带上厚一点的手套，防止被液氮冻伤；一是要迅速，且要保证螺栓拧紧，卡上保险扣。然后，启动研磨。TJ2011高通量组织研磨仪同时适用动物组织（骨骼、肌肉、内脏、毛发等）的研磨，高通量提取DNA/RNA。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/02/201202141110_349211_1812435_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/02/201202141110_349212_1812435_3.jpg

最近一直在摸索着用高压冷冻和冷冻替代样品制备技术，刚开始做的时候冰晶特别严重，如下图Hela细胞。冰晶已经把细胞超微结构破坏的不行了。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609231539_611900_2423894_3.jpg经过很长时间的摸索，得到以下制样方法：1 取样1.1 培养细胞：取适量的细胞悬浮液，低速离心成细胞团，去上清，细胞团呈米糊状，用移液枪取适量细胞，填满Carrier，加入适量冷冻保护液1-Hexadecene，滤纸吸取多余水分，使冷冻保护液液面略高于Carrier（Carrier用丙酮清洗，然后在空气中晾干，用1-Hexadecene浸泡备用）。1.2 小鼠肝脏：从活体上取出的组织，先用锋利的刀片在低温下切成尽可能薄片状，从中挑选合适的部分切下来，然后装入Carrier，加入适量冷冻保护液1-Hexadecene，滤纸吸取多余水分，使冷冻保护液液面略高于Carrier。2高压冷冻高压冷冻仪在使用前，要先做一些准备工作：要先加入足够的液氮，并加入压力液甲基环己烷，然后用空载的carrier高压冷冻三次，保证高压冷冻仪在最佳工作状态。2.1 将上述装有样品的carrier快速安置到高压冷冻仪，准备高压冷冻。2.2 高压冷冻样品，迅速把样品冷冻下来，并做好记录。通过高压冷冻仪冷冻样品后产生的冷冻速度和压力变化曲线，可以选择冷冻效果较好的样品继续下面实验。2.3 转移样品，首先把现配的替代液1%锇酸（0.5g锇酸溶于50mL丙酮）分装到2mL冻存管中，迅速放入液氮冷冻备用，冷冻过程中保持冷冻管直立。与此同时，冷冻替代仪加满液氮，将自制的冻存管架放入样品腔，预冷至-100℃。用预冷的镊子，在液氮下将Carrier分别装入冻存管，冻存管盖不宜拧的过紧，然后迅速转移到冷冻替代仪样品腔室的冻存管架里。3 冷冻替代 步骤 温度 时间 1 -100℃ -90℃ 4h 2 -90℃ 72h 3 -90℃ -60℃ 8h 4 -60℃ 8h 5 -60℃ -30℃ 4h 6 -30℃ 8h 7 -30℃ -20℃ 2h 8 -20℃ 8h 9 -20℃ 4℃ 2h 10 4℃ 1h 温度达到4℃后，用4℃的丙酮浸洗样品3次，每次15分钟。此过程中，会有部分样品与Carrier分离，若还有没分离的可以用解剖针将样品从Carrier中剥离。4 渗透包埋分别用以下渗透液渗透。 步骤 渗透液 浓度 时间 1 Epon812/丙酮 1:1 1.5-2h 2 Epon812/丙酮 3:1 6-12h 3 Epon812 100% 1h 4 Epon812 100% 8h 5 Epon812 100% 1h然后将样品转移至包埋槽，60℃烘箱聚合48h。5 超薄切片把两种生物样品对应的每一个包埋块分别超薄切片，各捞两个铜网，并染色。6 电镜观察观察细胞内超微结构保存情况，对感兴趣区域拍照。终于有所改善，如下图的小鼠肝脏细胞，轮廓十分清楚，结构保存完好。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609231516_611895_2423894_3.jpg局部放大后观察，能看见核孔，双层核膜，甚至是膜的磷脂双分子层结构（这是在常规化学固定制样中很难看到的），看到这些让人激动不已。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609231516_611894_2423894_3.jpg碰巧看见一个正在分裂的线粒体。线粒体脊很清楚，双层膜紧挨着，不像常规制样间隙那么大。另外，线粒体基质保存完好，所以线粒体整体较细胞基质反差大。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609231516_611893_2423894_3.jpg以下是常规化学固定制样的结果，可与上面高压冷冻及冷冻替代制样技术结果对比：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609231644_611928_2423894_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609