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显微共聚焦激光拉曼光谱仪

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  • 【原创大赛】激光共聚焦显微拉曼光谱仪使用心得

    【原创大赛】激光共聚焦显微拉曼光谱仪使用心得

    [align=center]激光共聚焦显微拉曼光谱仪使用心得[/align][align=center]NQI研发中心 徐婧婧 [/align]拉曼散射效应是印度物理学家拉曼在1928年首次发现的,随后在法国和苏联也被观察到。拉曼散射是当光通过透明介质时,由于入射光与分子运动相互作用而引起频率的变化。在透明介质的散射光谱中,频率与入射光频率υ[sub]0[/sub]相同的成分称为瑞利散射;频率对称分布在υ[sub]0[/sub]两侧的谱线或谱带υ[sub]0[/sub]±υ[sub]1[/sub]即为拉曼光谱。拉曼散射光频率与入射光频率之差(即拉曼位移)反映了分子振动和转动能级的情况,并且激发光频率对此没有影响,此外在一定条件或状态下不同的物质分子具有独一无二的分子结构,因此拉曼效应可用于鉴别物质。此外,拉曼信号强度正比于分子振动与转动强度,因此也可用作定量分析。如今,拉曼光谱早已是一项成熟的非接触式无损检测技术,并在食品检测、环境监测、珠宝文物鉴定等领域有着广泛的应用。在拉曼光谱测量仪中显微共聚焦激光拉曼光谱仪以其极高的灵敏度成为现代研究工作中一种先进测试手段,其具有对样品无损伤、无需样品制备、分析速度快、信息精确、高灵敏度、高分辨率、高重复性等诸多优点,非常适合各种物质的快速测定和分析,在众多研究领域的材料结构分析中是不可替代的设备。显微共聚焦激光拉曼光谱仪的检测原理为:激光器发出的激光光束通过激光光路传递到显微镜,通过显微镜聚焦到被测样品,激发出频率发生改变的非弹性拉曼散射信号,经过信号光路,并光栅进行分光,然后采用高效光信号采集及处理系统获得全光谱范围内的拉曼散射信号,研究分子的振动能级,从而反应物质的结构信息。还可对选定区域进行点、线、面扫描,从而确定不同物质的成分分布状况。激光共聚焦显微拉曼光谱仪目前的生产厂商主要以进口厂家为主,主要有HORIBA Scentific、Renishaw、Thermofisher等厂家。不过高精度的拉曼光谱仪特别是激光共聚焦显微拉曼光谱仪价格昂贵,为了能够更好的发挥拉曼光谱仪的使用价值,使用时要格外注意操作规范并且在闲置时要对其进行合理的保养。主要注意以下几点:1.为防止仪器受潮而影响使用寿命,拉曼仪器所在实验室应经常保持干燥,即使仪器不用,也应每周开机至少两次,每次半天,同时开除湿机除湿。特别是霉雨季节,最好是能每天开除湿机。2.实验室里的CO[sub]2[/sub]浓度会对仪器寿命造成很大影响,因此实验室里的人数应尽量少,无关人员最好不要进入,还要注意适当通风换气。3. 为减少化学试剂对测定的影响,用于拉曼光谱分析仪的化学试剂应为光学试剂级,至少也要分析纯级。如发现化学试剂出现结块的现象,则应重新加热干燥。4.实验完毕后需要定期对机身进行保养,主要注意清除大颗粒灰尘、清洁镜头、机身。清洁过程中一定要注意使用合适的力道,太轻可能会导致清理不干净,太重又可能不慎损坏机身。以下是实验过程中利用激光共聚焦显微拉曼光谱仪测试的一些数据:[align=center][img=,690,467]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909160934496173_6576_3048281_3.jpg!w690x467.jpg[/img][/align][align=center]图1不同激光强度下4-巯基苯甲酸的拉曼光谱图[/align][align=center][img=,690,467]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909160935033673_5943_3048281_3.jpg!w690x467.jpg[/img][/align][align=center]图2尼尔蓝与4-巯基苯甲酸的双标记纳米粒子拉曼光谱图[/align]

  • 【分享】三维显微激光拉曼光谱仪

    【分享】三维显微激光拉曼光谱仪

    三维显微激光拉曼光谱仪三维显微激光拉曼光谱仪装置Nanofinder30  Nanofinder30 三维显微激光拉曼光谱仪装置是日本首创,世界最初的分析装置。它能在亚微米到纳米范围内,测定物质化学状态的三维图像。它由共焦激光显微镜,压电陶瓷平台(或电动扫描器)和光谱仪组成。并能自选追加原子力显微镜和近场表面增强拉曼测定的功能。 最新测量数据[ 变形Si的应力测定]PDF刊登 用二维的平面分析来评价变形Si。空间分辨率130nm, 变形率0.01%(0.1cm偏移)。 半导体/电子材料(异状物,应力,化学组成,物理结构)薄膜/保护膜(DLC,涂料,粘剂)/界面层,液晶内部构造结晶体(单壁碳纳米管,纳米晶体)光波导回路,玻璃,光学结晶等的折射率变化生物学(DNA, 蛋白质, 细胞 组织等) 以亚微米级分辨率和三维图像,能分析物质的化学结合状态空间分辨率200nm(三维共焦点模式),50nm(二维TERS模式)能同时测定光谱图像(拉曼/萤光/光致荧光PL),共焦显微镜图像,扫描探针显微镜图像(AFM/STM)和近场表面增强拉曼图像(SERS)能高速度,高灵敏度地测定样品(灵敏度:与原来之比10倍以上)不需要测定前样品处理,在空气中能进行非破坏测定全自动马达传动系统的作用,测定简单 共焦显微镜模式不能识别结晶缺陷,然而光致荧光(PL)模式却能清楚地测到结晶缺陷 共焦激光显微镜模式的形状测定 光谱窗 560 nm 用光致荧光(PL)模式测到的结晶缺陷的光谱图像(560nm的三维映像) 用AFM和共焦显微拉曼法同时测定CNT,能判定它的特性 (金属,半导体)和纯度。 同时测定单壁碳纳米管(CNT)的原子力显微镜(AFM) 形貌图像和拉曼光谱图像的例子 :拉曼光谱: 激光488nm,功率1.5mW,曝光时间2 sec,物镜100×Oil, NA=1.35, 积分时间100 sec (AFM和拉曼图像测定时) AFM形貌图像(右上)表示了单壁碳纳米管混合物的各种形状结构。图像中用数字1到8来表示其不同形状。数字1-6测得了拉曼光谱(上图所示),判定为半导体CNT。但7-8测不到拉曼光谱,所以不是半导体CNT,而可能是金属CNT(可用He-Ne激光633nm验证)。最上面表示了RBM(173cm-1), G-band(1593cm-1)及D-band(1351cm-1)的拉曼光谱图像 综合激光器和光谱分析系统的长处,坚固耐用的复合设计,卓越的仪器安定性,是纳米技术测定装置中的杰出产品。 ※日本纳米技术2004大奖“评价和测量部门”得奖. ※日本第16届中小企业优秀技术和新产品奖 “优良奖”得奖. 光学器件配置图Nanofinder30 [img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2008/12/200812071751_122565_1634361_3.jpg[/img][img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2008/12/200812071751_122566_1634361_3.jpg[/img][~122567~][~122568~]

  • 【求助】激光拉曼光谱仪

    FTPL是不是就是激光拉曼光谱仪 ,那么光致荧光是怎么得来的?和博立叶变换红外光谱仪有什么区别?做的样品有什么不同吗?

  • 【原创】激光拉曼光谱

    我现在用reinshaw的共聚焦激光拉曼光谱测氧化铝中的应力。很多问题不明白,谁明白能在这里讲一下吗

  • 激光拉曼光谱原理简单介绍

    激光拉曼光谱,化学通用分析仪器,由激光光源、样品室、单色仪和光电检测器四部分组成,在地学领域主要用于鉴定矿物和测定流体包裹体的化学成分。其空间分辨率达1微米,并可作原位测定。学科:岩矿分析与鉴定  词目:激光拉曼光谱  英文:laserRamanspectroscopy  介绍:拉曼光谱是激发光子与物质分子发生非弹性碰撞后,频率发生改变的散射光谱,光子频率的改变称为拉曼位移,它是对物质进行定性分析的依据。拉曼光谱是拉曼(C.V.Raman)于1928年发现的。早期的拉曼光谱采用汞弧灯作光源激发样品分子,自20世纪60年代起,采用亮度高、单色性好、定向性高的激光作激发光源,称为激光拉曼光谱。拉曼光谱仪由激光光源、样品室、单色仪和光电检测器四部分组成,在地学领域主要用于鉴定矿物和测定流体包裹体的化学成分,如H2、O2、N2、CO2、CO、H2S、SO2、CH4、C2H6等,其空间分辨率达1微米,并可作原位测定。雷尼绍公司在1992年推出的RM系列激光拉曼光谱仪,在拉曼光谱领域开拓了一个新纪元。因此,于1993年获得查尔斯王子科学发明奖,1995年获得英国女皇技术奖和最佳科学仪器制造商奖。雷尼绍公司是通过了ISO9001质量认证的单位。雷尼绍激光拉曼光谱仪以其配置灵活性,高灵敏度及可靠性,成为用户的首选设备。  2003年,雷尼绍公司推出了配置更加灵活,使用更加简单,自动化程度更高的InVia系列拉曼光谱仪。用户可根据自己的需求选择不同的功能模块,及相应的自动化程度。inVia系列显微激光拉曼光谱仪的最高配置-inViaReflex提供上述包括全自动化的所有功能;其它的inVia系统随时可以逐步升级至inViaReflex。所有的inVia拉曼系统把具有极高的灵敏度作为标准,将配置灵活和高灵敏度集中于同一套拉曼谱仪上。  有多种附件:高精度三维自动平台,逐点扫描成像。大样品附件、高灵敏度光纤探头、变温及高压等附件。  有多种探测器:可选紫外或红外增强CCD,电子冷却,具有最佳分辨本领和最佳图像质量。可选第二探测器,PL测量扩展到1.7微米。  与其它仪器连用:可扩展为最新的拉曼和红外一体化的原位检测Raman/IR系统,与扫描电镜连用的SEM/Raman,与原子力/近场连用的AFM/NSOM/Raman。

  • 【转贴】激光拉曼光谱仪的应用

    激光拉曼光谱仪的应用无机化合物的分析   化学结构的测定--无机化合物对称性强,用红外光谱法很难解决,而拉曼光谱测无机原子团的结构、以及测络合物的结构是很方便的。   (1)对于汞离子在水溶液中,是以Hg+或Hg2+存在的,用红外光谱是无法确定的。因这两种离子在红外光谱上都无吸收带。在拉曼光谱中可看到(Hg--Hg)2+的强偏振线在169cm-1出现。   (2)铊离子在水溶液中是以一价形式存在。因拉曼光谱没有二价铊离子的强偏振线。   (3)镓的特征价过去曾有人提出所谓二氯化镓的实验式,如果如此,它应有顺磁性。但与实际不符。后来有人推断其结构可能是Cl2Ga-GaCl2镓原子间有一键,可能有两种构型:  ① 交错式属D2i点群(如丙二烯的氢)。   ② 平面式属C2v点群(乙烯中的氢)。   前者应出现九条拉曼线,有三条是偏振的,后者应出现六条拉曼线,也有三条偏振的。但实际结果表明其熔盐仅有四条拉曼线,其中只有一条是高度偏振的。其他皆为退偏振的。因此上述结构是不可能存在的。实验结果表明,其拉曼谱与水溶液中GaCl4-拉曼光谱相同:     GaCl2cm-1   GaCl4 cm-1      115       114      退偏振      153       149      退偏振      346       346      强偏振      380       386      退偏振因此所谓二氯化镓,其结构应为[Ca][Gacl]其中一个镓原子为三价,另一镓原子为一价。   无机化合物组成分析有三方面   ⑴测定强酸的离解度   ⑵测定溶液中络合物的稳定常数。  ⑶测定杂质和混合物的组成。  用红外光谱测定无机离子是比较困难的。这或因为所测对象是水溶液,或因为强氢键的形成而造成的谱带变宽,总之吸收带复杂化而不利于测定。拉曼光谱则不受水的影响,也无需特殊装置,拉曼光谱对无机离子或分子,以及它们的络合物的分析都是很方便的。硝酸根、硫酸根、高氯酸根、硫氰酸根等阴离子,其特征频率不正离子的性质和它的物理状态影响。   对于杂质的测定,例如亚硝酸根中微量硝酸根,用其他方法测定是很难办到的。而用激光拉曼光谱法则很方便。这是因硝酸根和亚硝酸根在拉曼谱上的特征吸收带互不干扰。特别是亚硝酸根的特征拉曼带810cm-1正好作天然内标,硝酸根的拉曼特征谱带在1055 cm-1.测1055cm-1谱带强度与810cm-1谱带强度之比,由工作曲线可检出。检出极为0.2%。

  • 【原创大赛】数数当前市场上的研究级拉曼光谱仪

    【原创大赛】数数当前市场上的研究级拉曼光谱仪

    拉曼光谱技术具有准确性高,信息量大,谱图容易辨认,差异性区分明显,拉曼位移与入射频率无关,分析速度快,可进行微量、微区、原位的非破坏性检验,维护费用低,和红外光谱互补等特点,在许多领域都有其独特的应用。  目前市场上的拉曼光谱仪可分为研究级拉曼光谱仪和便携式拉曼光谱仪两个大类。本文将先和广大版友探讨研究级拉曼光谱仪主要供应商的产品组成和特点。  当前主要的研究级拉曼光谱仪供应商有:雷尼绍,HORIBA Jobin Yvon,赛默飞,PerkinElmer,布鲁克,国内的生产商主要有天津港东和北京卓立汉光,另外天瑞仪器和天津拓普也有相关产品。  雷尼绍拉曼光谱产品主要为inVia系列,inVia系列拉曼光谱仪于2003年推出,该系列产品配置灵活,用户可根据自己的需求选择不同的功能模块,及相应的自动化程度,其最高配置型号为inVia Reflex。雷尼绍的产品主要针对高端的研究级拉曼光谱产品,虽然一直没有新的型号推出,但在仪器的成像功能和联用技术研究方面,一直在不断的改进。从逐点绘图成像到StreamLine Plus超高速成像技术,以及最新的三维(3D)拉曼成像技术。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/11/201211271503_407617_2086240_3.jpg  在联用技术方面,雷尼绍研发高效光学效率的接口使inVia显微拉曼可与Bruker、NT-MDT以及Nanonics Imaging公司的扫描探针显微镜直接耦合。inVia还支持新的针尖增强拉曼散射技术(TERS)以及近场光学显微技术(NSOM/SNOM)。  HORIBA Jobin Yvon目前主要的拉曼光谱产品主要由两个系列型号:LabRAM和XploRA。  LabRAM系列主要有LabRAM Aramis全自动激光拉曼光谱仪和LabRAM HR Evolution新长焦长拉曼光谱仪。  LabRAM Aramis全自动激光拉曼光谱仪于2005年在上海大学召开的全国光散射会议上首次于国内展出,该仪器设计将方便用户操作放在首位,所有的功能只需要点击软件即可实现。系统由膨胀系数几乎为零的合金型材制作框架,仪器核心部件都刚性地固定于一个整体性机箱内和机箱上。  LabRAM HR Evolution新长焦长拉曼光谱仪,是目前市场上焦长最长的单级共焦拉曼光谱仪,焦长达到800mm。该仪器更多的关注仪器的高性能和多功能性。可根据用户需求同时配置三个探测器,CCD、iCCD、EMCCD、InGaAs、PMT等用于扩展光谱范围及特殊应用。可与AFM、TERS、光致发光(PL)、样品加热冷却及其他联用。采用HORIBA Scientific的新版光谱分析软件包-LabSpec 6。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/11/201211271504_407618_2086240_3.jpgLabRAM HR Evolution新长焦长拉曼光谱仪  XploRA系列主要包括两款产品:XploRA精巧型全自动显微共焦拉曼光谱仪和XploRA INV智能型倒置显微拉曼光谱仪。  XploRA具有灵活的可移动性特点,其优势在于是目前市场上最精巧的有显微共焦功能的拉曼光谱仪。另外全自动也是该款仪器突出宣传的一个特点,仪器拥有3个内置激光器和4块光栅,,激发波长与光栅可以完全自动切换,可自由选择多种光谱分辨率。另外,在这款仪器当中HORIBA Jobin Yvon首次使用中文软件操作界面。  XploRA INV在继承了XploRA高自动化和结构紧凑的基础上,增加了倒置显微镜的分析功能。在仪器设计当中采用了开放性结构,确保可以自由添加和使用倒置显微镜的所有附件或其它附加装置。还可以选择性集成一些特有的模块和技术,如DuoScan扫描技术和3D共焦快速荧光成像模块。据介绍,该仪器还可以与AFM联用及进行TERS(针尖增强拉曼光谱)分析。  赛黙飞世尔科技分子光谱部(原尼高力仪器公司)主要有以下几种类型型号:Almega激光拉曼光谱仪、DXR智能拉曼光谱仪。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/11/201211271505_407619_2086240_3.jpgAlmega XR激光显微拉曼光谱仪  2001年赛黙飞世尔科技推出全自动Almega XR激光显微拉曼光谱仪,具有大容量样品仓和显微镜,自动化程度高,采样方式灵活;共聚焦设计拉曼显微镜可获得不同深度样品的真实信息,可提供目前数量最多超过20000张的无机与有机拉曼谱库。  2008年中旬,在 ALMEGA 系列基础上又推出了新型DXR 智能激光拉曼光谱仪,实现了仪器的高度智能自动化。光谱仪设计采用模块化单元组合,同时采用智能精确锁定技术,确保光路高稳定与检测结果高精确度与重复性。软件智能识别激光器、光栅与瑞利滤光片序列号与种类,并自动识别它们之间兼容性。  珀金埃尔默的主要型号是RamanStation 400 系列拉曼光谱仪,其主要宣传点是全球唯一的运用中阶梯光栅及二维面阵CCD检测器组合成的二维色散型拉曼光谱仪,和传统的获取高分辨率图谱所惯用的多块一维排列的闪耀光栅分别测量出特定谱带,再对测量所得的多个不同谱带进行光谱拼接的方法不同,该仪器可在一秒钟内获取覆盖整个波段的高分辨率的拉曼光谱图。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/11/201211271505_407620_2086240_3.jpg  布鲁克拉曼光谱仪主要有MultiRAM 独立式傅立叶拉曼光谱仪和RamII附件式拉曼光谱仪两个型号。  布鲁克推出了世界上第一台商品化的傅立叶拉曼光谱仪,MultiRAM 独立式傅立叶拉曼光谱仪中采用了布鲁克专利的RockSolidTM干涉仪,MultiRAM可以安装2个激光器和检测器,并且可选配自动偏振附件、光纤探针等附件,系统可以配置室温InGaAs检测器和高性能液氮冷却的Ge检测器。  RamII是世界上第一台全数字化的附件式傅立叶变换拉曼光谱仪,可同Brukr公司的Vertex系列高级研究级红外光谱联用。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/11/201211271506_407621_2086240_3.jpgMultiRAM 独立式傅立叶拉曼光谱仪  卓立汉光的主要拉曼光谱型号是:UVRaman100紫外共振拉曼光谱系统。该仪器由中国科学院大连化学物理研究所中国科学院李灿院士及其研究小组自行研制,是我国第一台紫外共振拉曼三联光谱仪。2008年和北京卓立汉光仪器有限公司合作进行产业化。该仪器采用了紫外激光激发可以很好的避免拉曼光谱分析中荧光本底的干扰问题;紫外激光激发拉曼信号效率更高;共振拉曼可以提供很高的共振增强因子,从而大幅度提升检测极限;由于采用的是三联单色仪滤除瑞利散射,而非陷波滤波器,设备可以测试地低到到几个波数的拉曼光谱。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/11/201211271507_407622_2086240_3.jpg  天津港东的拉曼光谱产品主要有两个型号:LRS-2/3激光拉曼光谱仪和LRS-5微区激光拉曼光谱仪。  LRS-2/3激光拉曼光谱仪采用半导体激光器作为光源,配有旨在减小杂散光的陷波滤波器,用高灵敏度、低噪声单光子计数器做接受系统。  LRS-5微区激光拉曼光谱仪在LRS-2/3的基础上配置了Olympus公司生产的显微镜作为激光会聚和拉曼光收集系统,可以进行微区分析。接收系统釆用的是Andor公司生产的面阵CCD

  • 简谈激光共聚焦显微镜

    [url=http://www.leica-microsystems.com/cn/%E4%BA%A7%E5%93%81/%E5%85%B1%E8%81%9A%E7%84%A6%E6%98%BE%E5%BE%AE%E9%95%9C/]激光共聚焦显微镜[/url]用于对样品(如贴片细胞)进行荧光成像,一般具有几条不同波长的激光作为激发光,研究人员可根据自身不同的实验需要来选择合适的激光进行荧光成像。共聚焦显微镜相对于传统的荧光显微镜具有极大的优势。首先,激光共聚焦显微镜具有极高的层切能力,可以对样品进行三维成像。与普通荧光显微镜不同,共聚焦显微镜可以对待观察样品的某一平面清晰成像,通过改变样品的垂直位置对样品的不同平面进行依次成像,还可对样品的特定平面进行实时动态成像。其次,共聚焦显微镜相对于传统的荧光显微镜具有极高的分辨率,基本达到了光学显微镜分辨率的理论极限。再次,由于激光共聚焦显微镜基于单点扫描的成像模式,因此可以在此基础上开发出其他传统荧光显微镜不能达成的技术,如荧光漂白恢复技术,荧光相关光谱技术等。共聚焦显微镜在生物学和化学领域具有极其广阔的应用,如对样品的荧光信号进行定性定量分析,对组织样品进行三维结构观察等。

  • 【讨论】关于激光共聚焦显微镜版

    最近观察了一段时间激光共聚焦显微镜版,人气不是很旺。当初是我提出来要将激光共聚焦显微镜单独开版,主要是考虑到国内激光共聚焦显微镜的用户日益增多,而且激光共聚焦显微镜的应用领域与光学显微镜有一定差异,所以作为一个新的设备,应该有很多可以讨论和交流的。但是目前讨论交流确实存在一些问题。激光共聚焦显微镜的用户大头在生物医学研究所和大型医院,似乎这些用户群体不太愿意在论坛上交流,另一个应用领域在材料上,但是国内材料研究领域拥有激光共聚焦显微镜还是少数,所以真正活跃的用户不多。有感于此,建议将激光共聚焦显微镜版划到我的光学显微镜版作为一个子版,我来管理。

  • 【资料】激光共聚焦扫描显微镜一些介绍

    激光共聚焦扫描显微镜简介一、 激光共聚焦显微镜的基本组成激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscope LSCM)是20世纪80年代发展起来的一项具有划时代意义的高科技新产品,是当今世界最先进的细胞生物学分析仪器。激光共聚焦显微镜利用激光作为光源,在传统光学显微镜基础上采用共轭聚焦的原理和装置,以及通过针孔的选择和PMT的收集,并带有一套对其所观察到的对象进行数字图像分析处理的系统软件。与传统光学显微镜相比,它具有更高的分辨率,实现多重荧光的同时观察并可形成清晰的三维图象等优点。所以它问世以来在生物学的研究领域中得到了广泛应用。激光共聚焦显微镜主要有四部分组成:1、显微镜光学系统。2、扫描装置。3、激光光源。4、检测系统。整套仪器由计算机控制,各部件之间的操作切换都可在计算机操作平台界面中方便灵活地进行。1.1 显微镜光学系统  显微镜是LSCM的主要组件,它关系到系统的成象质量。显微镜光路以无限远光学系统可方便地在其中插人光学选件而不影响成象质量和测量精度。物镜应选取大数值孔径平场复消色 差物镜,有利于荧光的采集和成象的清晰。物镜组的转换,滤色片组的选取,载物台的移动调节,焦平面的记忆锁定都应由计算机自动控制。1.2 扫描装置  LSCM使用的扫描装置在生物领域一般为镜扫描。由于转镜只需偏转很小角度就能涉及很大的扫描范围,图象采集速度大大提高,512×512画面每秒可达4帧以上,有利于那些寿命短的离子作荧光测定。扫描系统的工作程序由计算机自动控制。1.3 激光光源  LSCM使用的激光光源有单激光和多激光系统。多激光器系统在可见光范围使用多谱线氩离子激光器,发射波长为457nm、488nm和514nm的蓝绿光,氦氖绿激光器提供发射波长为543nm的绿光,氦氖红激光器发射波长为633nm的红光,新的405nm半导体激光器的出现可以提供近紫外谱线,但是小巧便宜而且维护简单。1.4 检测系统  LSCM为多通道荧光采集系统,一般有三个荧光通道和一个透射光通道,能升级到四个荧光通道,可对物体进行多谱线激光激发,样品发射荧光的探测器为感光灵敏度高的光电倍增管PMT,配有高速12位A/D转换器,可以做光子计数。PMT前设置针孔,由计算机软件调节针孔大小,光路中设有能自动切换的滤色片组,满足不同测量的需要,也有通过光栅或棱镜分光后进行光谱扫描功能的设置。二、激光共聚焦显微镜的特点以及在生物领域的应用传统光学显微镜相比,激光共聚焦显微镜具有更高的分辨率,实现多重荧光的同时观察并可形成清晰的三维图象等优点,在对生物样品的观察中,激光共聚焦显微镜有如下优越性:1、对活细胞和组织或细胞切片进行连续扫描,可获得精细的细胞骨架、染色体、细胞器和细胞膜系统的三维图像。2、 可以得到比普通荧光显微镜更高对比度、高解析度图象、同时具有高灵敏度、杰出样品保护。3、***图象的获得,如7 维图象(XYZaλIt): xyt 、xzt 和xt 扫描,时间序列扫描旋转扫描、区域扫描、光谱扫描、同时方便进行图像处理。 4、细胞内离子荧光标记,单标记或多标记,检测细胞内如PH和钠、钙、镁等离子浓度的比率测定及动态变化。5、荧光标记探头标记的活细胞或切片标本的活细胞生物物质,膜标记、免疫物质、免疫反应、受体或配体,核酸等观察;可以在同一张样品上进行同时多重物质标记,同时观察; 6、对细胞检测无损伤、精确、准确、可靠和优良重复性;数据图像可及时输出或长期储存。 由于共聚焦显微镜的以上优点,激光共聚焦显微镜在以下研究领域中应用较为广泛:1、细胞生物学:如:细胞结构、细胞骨架、细胞膜结构、流动性、受体、细胞器结构和分布变化、细胞凋亡机制;各种细胞器、结构性蛋白、DNA、RNA、酶和受体分子等细胞特异性结构的含量、组分及分布进行定量分析;DNA、RNA含量、利用特定的抗体对紫外线引起的DNA损伤进行观察和定量;分析正常细胞和癌细胞细胞骨架与核改变之间的关系;细胞黏附行为等 2、生物化学:如:酶、核酸、受体分析、荧光原位杂交、杂色体基因定位等,利用共聚焦技术可以取代传统的核酸印迹染交等技术,进行基因的表达检测,使基因的转录、翻译等检测变的更加简单、准确。3、药理学:如:药物对细胞的作用及其动力学;药物进入细胞的动态过程、定位分布及定量 4、生理学、发育生物学:如:膜受体、离子通道、离子含量、分布、动态;动物发育以及胚胎的形成,骨髓干细胞的分化行为;细胞膜电位的测量.荧光漂白恢复(FRAP)、荧光漂白丢失(FLIP)的测量等。 5、遗传学和组胚学:如:细胞生长、分化、成熟变化、细胞的三维结构、染色体分析、基因表达、基因诊断; 6、神经生物学:如:神经细胞结构、神经递质的成分、运输和传递; 7、微生物学和寄生虫学:如:细菌、寄生虫形态结构; 8、病理学及病理学临床应用:如:活检标本的快速诊断、肿瘤诊断、自身免疫性疾病的诊断; 9、免疫学、环境医学和营养学。如:免疫荧光标记(单标、双标或三标)的定位,细胞膜受体或抗原的分布,微丝、微管的分布、两种或三种蛋白的共存与共定位、蛋白与细胞器的共定位;对活细胞中的蛋白质进行准确定位及动态观察可实时原位跟踪特定蛋白在细胞生长、分裂、分化过程中的时空表达,荧光能量共转移(FRET)。

  • 激光共聚焦显微镜系统的原理和应用

    激光共聚焦显微镜系统的原理和应用激光扫描共聚焦显微镜是二十世纪80年代发展起来的一项具有划时代的高科技产品,它是在荧光显微镜成像基础上加装了激光扫描装置,利用计算机进行图像处理,把光学成像的分辨率提高了30%--40%,使用紫外或可见光激发荧光探针,从而得到细胞或组织内部微细结构的荧光图像,在亚细胞水平上观察诸如Ca2+ 、PH值,膜电位等生理信号及细胞形态的变化,成为形态学,分子生物学,神经科学,药理学,遗传学等领域中新一代强有力的研究工具。激光共聚焦成像系统能够用于观察各种染色、非染色和荧光标记的组织和细胞等,观察研究组织切片,细胞活体的生长发育特征,研究测定细胞内物质运输和能量转换。能够进行活体细胞中离子和PH值变化研究(RATIO),神经递质研究,微分干涉及荧光的断层扫描,多重荧光的断层扫描及重叠,荧光光谱分析荧光各项指标定量分析荧光样品的时间延迟扫描及动态构件组织与细胞的三维动态结构构件,荧光共振能量的转移的分析,荧光原位杂交研究(FISH),细胞骨架研究,基因定位研究,原位实时PCR产物分析,荧光漂白恢复研究(FRAP),胞间通讯研究,蛋白质间研究,膜电位与膜流动性等研究,完成图像分析和三维重建等分析。一.激光共聚焦显微镜系统应用领域:涉及医学、动植物科研、生物化学、细菌学、细胞生物学、组织胚胎、食品科学、遗传、药理、生理、光学、病理、植物学、神经科学、海洋生物学、材料学、电子科学、力学、石油地质学、矿产学。二.基本原理传统的光学显微镜使用的是场光源,标本上每一点的图像都会受到邻近点的衍射或散射光的干扰;激光扫描共聚焦显微镜利用激光束经照明针孔形成点光源对标本内焦平面的每一点扫描,标本上的被照射点,在探测针孔处成像,由探测针孔后的光点倍增管(PMT)或冷电耦器件(cCCD)逐点或逐线接收,迅速在计算机监视器屏幕上形成荧光图像。照明针孔与探测针孔相对于物镜焦平面是共轭的,焦平面上的点同时聚焦于照明针孔和发射针孔,焦平面以外的点不会在探测针孔处成像,这样得到的共聚焦图像是标本的光学横断面,克服了普通显微镜图像模糊的缺点。三.应用范围:细胞形态学分析(观察细胞或组织内部微细结构,如:细胞内线粒体、内质网、高尔基体、微管、微丝、细胞桥、染色体等亚细胞结构的形态特征;半定量免疫荧光分析);荧光原位杂交研究;基因定位研究及三维重建分析。1.细胞生物学:细胞结构、细胞骨架、细胞膜结构、流动性、受体、细胞器结构和分布变化2.生物化学:酶、核酸、FISH(荧光原位杂交)、受体分析3.药理学:药物对细胞的作用及其动力学4.生理学:膜受体、离子通道、细胞内离子含量、分布、动态5.神经生物学:神经细胞结构、神经递质的成分、运输和传递、递质受体、离子内外流、神经组织结构、细胞分布6.微生物学和寄生虫学:细菌、寄生虫形态结构7.病理学及临床应用:活检标本诊断、肿瘤诊断、自身免疫性疾病诊断、HIV等8.遗传学和组胚学:细胞生长、分化、成熟变化、细胞的三维结构、染色体分析、基因表达、基因诊断四.激光共聚焦显微镜在医学领域中的应用A.在细胞及分子生物学中的应用1.细胞、组织的三维观察和定量测量2.活细胞生理信号的动态监测3.粘附细胞的分选4.细胞激光显微外科和光陷阱功能5.光漂白后的荧光恢复6.在细胞凋亡研究中的应用B.在神经科学中的应用1.定量荧光测定2.细胞内离子的测定3.神经细胞的形态观察C.在耳鼻喉科学中的应用1.在内耳毛细胞亚细胞结构研究上的应用2.激光扫描共聚焦显微镜的荧光测钙技术在内耳毛细胞研究中的应用3.激光扫描共聚焦显微镜在内耳毛细胞离子通道研究上的应用4.激光扫描共聚焦显微镜在嗅觉研究中的应用D.在肿瘤研究中的应用1. 定量免疫荧光测定2. 细胞内离子分析3. 图像分析:肿瘤细胞的二维图像分析4. 三维重建 E.激光扫描共聚焦显微镜在内分泌领域的应用1. 细胞内钙离子的测定2. 免疫荧光定位及免疫细胞化学研究3. 细胞形态学研究:利用激光扫描共聚焦显微镜 F.在血液病研究中的应用1. 在血细胞形态及功能研究方面的应用2. 在细胞凋亡研究中的应用 G.在眼科研究中的应用1. 利用激光扫描共聚焦显微镜观察组织、细胞结构2. 集合特殊的荧光染色在活体上观察角膜外伤修复中细胞移行及成纤维细胞的出现3. 利用激光扫描共聚焦显微镜观察视网膜中视神经细胞的分布以及神经原的树枝状形态4. 三维重建H. 激光扫描共聚焦显微镜在肾脏病中的应用可以系统观察正常人肾小球系膜细胞的断层扫描影像及三维立体影像水平,使图像更加清晰,从计算机分析系统可从外观到内在结构,从平面到立体,从静态到动态,从形态到功能几个方面对系膜细胞的认识得到提高。

  • 共聚焦显微拉曼光谱

    拟购买一套共聚焦显微拉曼光谱系统,现主要参考的厂家有JY、Renishaw等几个厂家,不知道这些哪个比较好?各自有什么优缺点?现在哪个厂家的份额比较多?

  • 激光共聚焦显微镜系统的原理和应用(光学)

    激光共聚焦显微镜系统的原理和应用激光扫描共聚焦显微镜是二十世纪80年代发展起来的一项具有划时代的高科技产品,它是在荧光显微镜成像基础上加装了激光扫描装置,利用计算机进行图像处理,把光学成像的分辨率提高了30%--40%,使用紫外或可见光激发荧光探针,从而得到细胞或组织内部微细结构的荧光图像,在亚细胞水平上观察诸如Ca2+ 、PH值,膜电位等生理信号及细胞形态的变化,成为形态学,分子生物学,神经科学,药理学,遗传学等领域中新一代强有力的研究工具。激光共聚焦成像系统能够用于观察各种染色、非染色和荧光标记的组织和细胞等,观察研究组织切片,细胞活体的生长发育特征,研究测定细胞内物质运输和能量转换。能够进行活体细胞中离子和PH值变化研究(RATIO),神经递质研究,微分干涉及荧光的断层扫描,多重荧光的断层扫描及重叠,荧光光谱分析荧光各项指标定量分析荧光样品的时间延迟扫描及动态构件组织与细胞的三维动态结构构件,荧光共振能量的转移的分析,荧光原位杂交研究(FISH),细胞骨架研究,基因定位研究,原位实时PCR产物分析,荧光漂白恢复研究(FRAP),胞间通讯研究,蛋白质间研究,膜电位与膜流动性等研究,完成图像分析和三维重建等分析。一.激光共聚焦显微镜系统应用领域:涉及医学、动植物科研、生物化学、细菌学、细胞生物学、组织胚胎、食品科学、遗传、药理、生理、光学、病理、植物学、神经科学、海洋生物学、材料学、电子科学、力学、石油地质学、矿产学。二.基本原理传统的光学显微镜使用的是场光源,标本上每一点的图像都会受到邻近点的衍射或散射光的干扰;激光扫描共聚焦显微镜利用激光束经照明针孔形成点光源对标本内焦平面的每一点扫描,标本上的被照射点,在探测针孔处成像,由探测针孔后的光点倍增管(PMT)或冷电耦器件(cCCD)逐点或逐线接收,迅速在计算机监视器屏幕上形成荧光图像。照明针孔与探测针孔相对于物镜焦平面是共轭的,焦平面上的点同时聚焦于照明针孔和发射针孔,焦平面以外的点不会在探测针孔处成像,这样得到的共聚焦图像是标本的光学横断面,克服了普通显微镜图像模糊的缺点。三.应用范围:细胞形态学分析(观察细胞或组织内部微细结构,如:细胞内线粒体、内质网、高尔基体、微管、微丝、细胞桥、染色体等亚细胞结构的形态特征;半定量免疫荧光分析);荧光原位杂交研究;基因定位研究及三维重建分析。1.细胞生物学:细胞结构、细胞骨架、细胞膜结构、流动性、受体、细胞器结构和分布变化2.生物化学:酶、核酸、FISH(荧光原位杂交)、受体分析3.药理学:药物对细胞的作用及其动力学4.生理学:膜受体、离子通道、细胞内离子含量、分布、动态5.神经生物学:神经细胞结构、神经递质的成分、运输和传递、递质受体、离子内外流、神经组织结构、细胞分布6.微生物学和寄生虫学:细菌、寄生虫形态结构7.病理学及临床应用:活检标本诊断、肿瘤诊断、自身免疫性疾病诊断、HIV等8.遗传学和组胚学:细胞生长、分化、成熟变化、细胞的三维结构、染色体分析、基因表达、基因诊断四.激光共聚焦显微镜在医学领域中的应用A.在细胞及分子生物学中的应用1. 细胞、组织的三维观察和定量测量2. 活细胞生理信号的动态监测3. 粘附细胞的分选4. 细胞激光显微外科和光陷阱功能5. 光漂白后的荧光恢复6. 在细胞凋亡研究中的应用B.在神经科学中的应用1. 定量荧光测定2. 细胞内离子的测定3. 神经细胞的形态观察C.在耳鼻喉科学中的应用1. 在内耳毛细胞亚细胞结构研究上的应用2. 激光扫描共聚焦显微镜的荧光测钙技术在内耳毛细胞研究中的应用3. 激光扫描共聚焦显微镜在内耳毛细胞离子通道研究上的应用4. 激光扫描共聚焦显微镜在嗅觉研究中的应用D.在肿瘤研究中的应用1. 定量免疫荧光测定2. 细胞内离子分析3. 图像分析:肿瘤细胞的二维图像分析4. 三维重建 E.激光扫描共聚焦显微镜在内分泌领域的应用1. 细胞内钙离子的测定2. 免疫荧光定位及免疫细胞化学研究3. 细胞形态学研究:利用激光扫描共聚焦显微镜 F.在血液病研究中的应用1. 在血细胞形态及功能研究方面的应用2. 在细胞凋亡研究中的应用 G.在眼科研究中的应用1. 利用激光扫描共聚焦显微镜观察组织、细胞结构2. 集合特殊的荧光染色在活体上观察角膜外伤修复中细胞移行及成纤维细胞的出现3. 利用激光扫描共聚焦显微镜观察视网膜中视神经细胞的分布以及神经原的树枝状形态4. 三维重建H. 激光扫描共聚焦显微镜在肾脏病中的应用可以系统观察正常人肾小球系膜细胞的断层扫描影像及三维立体影像水平,使图像更加清晰,从计算机分析系统可从外观到内在结构,从平面到立体,从静态到动态,从形态到功能几个方面对系膜细胞的认识得到提高。北京中科研域科技有限公司(蔡司显微镜代理商)地址:北京市朝阳区建国路15号院甲1号北岸1292,一号楼406室联系人:张辉13911188977 邮编:100024电话:010-57126588 传真:010-85376588E-mail:[email=zhs_8000@126.com][color=#0365bf]zhs_8000@126.com[/color][/email]

  • 激光共聚焦扫描显微镜图片集

    激光共聚焦扫描显微镜图片集

    提供照片出自OLYMPUS激光共聚焦扫描显微镜想了解本产品一切信息者可与本人联系:Olympus.zzq@126.com[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2006/06/200606021415_19451_1625155_3.jpg[/img]

  • 【参数解读总结篇】拉曼光谱仪的技术参数解读与使用

    【参数解读】拉曼光谱仪的技术参数解读与使用http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20131206/5096242/拉曼(Raman)光谱与红外吸收光谱同为研究物质的分子振动能级来分析物质的组成,但相对于红外吸收光谱,拉曼光谱的谱线通常较为简单且有独特性,而且被测物不需进行前处理,因此在判读物质的组成成分时有明显的优势, 然而以前拉曼光谱由于系统组成复杂庞大且昂贵,只有极少数的专家有能力购买与驾驭,从而限制了其应用的推广。幸运的是,近年来由于元器件(全息陷波滤光片,科学级CCD探测器等) 的革命性发展,使得Raman光谱的测量不再昂贵艰难,从而带动了拉曼光谱研究的热潮与普及。拉曼光谱仪可分为5个部分:激光光源、样品室、分光系统、光电探测系统、记录仪和计算机。http://img3.17img.cn/bbs/upfile/images/20131206/2013120622071955.jpg◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆激光拉曼光谱仪适用于液体、固体样品的分析, 配有旨在减小杂散光的陷波滤波器。1、常用的激光器都是哪些?你的仪器配置几个?325,355,457, 488, 514, 532, 633, 785;一般的设备可以配置3个2、共焦显微镜拉曼光谱和激光拉曼光谱的仪器配置和应用区别在哪?共聚焦拉曼利用共聚焦孔pinhole提供非常高的空间分辨率;非常适合纳米材料领域的研究3、探测器都有哪些?前入射、背入射CCD,开放式ccd, EMCCD, InGaAs4、应该如何根据测试样品来选择仪器配置?考虑仪器配置时,激光波长的选择非常重要。拉曼光谱仪一般由以下五个部分构成。一、光源它的功能是提供单色性好、功率大并且最好能多波长工作的入射光。目前拉曼光谱实验的光源己全部用激光器代替历史上使用的汞灯。对常规的拉曼光谱实验,常见的气体激光器基本上可以满足实验的需要。在某些拉曼光谱实验中要求入射光的强度稳定,这就要求激光器的输出功率稳定。二、外光路外光路部分包括聚光、集光、样品架.滤光和偏振等部件。(1) 聚光:用一块或二块焦距合适的会聚透镜,使样品处于会聚激光束的腰部,以提高样品光的辐照功率,可使样品在单位面积上辐照功率比不用透镜会聚前增强105倍。(2) 集光:常用透镜组或反射凹面镜作散射光的收集镜。通常是由相对孔径数值在1左右的透镜组成。为了更多地收集散射光,对某些实验样品可在集光镜对面和照明光传播方向上加反射镜。(3) 样品架:样品架的设计要保证使照明最有效和杂散光最少,尤其要避免入射激光进入光谱仪的入射狭缝。为此,对于透明样品,最佳的样品布置方案是使样品被照明部分呈光谱仪入射狭缝形状的长圆柱体,并使收集光方向垂直于入射光的传播方向。几种典型样品架的空间配置参见右图。(4) 滤光:安置滤光部件的主要目的是为了抑制杂散光以提高拉曼散射的信噪比。在样品前面,典型的滤光部件是前置单色器或干涉滤光片,它们可以滤去光源中非激光频率的大部分光能。小孔光栏对滤去激光器产生的等离子线有很好的作用。在样品后面,用合适的干涉滤光片或吸收盒可以滤去不需要的瑞利线的一大部分能量,提高拉曼散射的相对强度。(5) 偏振:做偏振谱测量时,必须在外光路中插入偏振元件。加入偏振旋转器可以改变入射光的偏振方向;在光谱仪入射狭缝前加入检偏器,可以改变进入光谱仪的散射光的偏振;在检偏器后设置偏振扰乱器,可以消除光谱仪的退偏干扰。三、色散系统色散系统使拉曼散射光按波长在空间分开,通常使用单色仪。由于拉曼散射强度很弱,因而要求拉曼光谱仪有很好的杂散光水平。各种光学部件的缺陷,尤其是光栅的缺陷,是仪器杂散光的主要来源。当仪器的杂散光本领小于10-4时,只能作气体、透明液体和透明晶体的拉曼光谱。四、接收系统拉曼散射信号的接收类型分单通道和多通道接收两种。光电倍增管接收就是单通道接收。五、信息处理为了提取拉曼散射信息,常用的电子学处理方法是直流放大、选频和光子计数,然后用记录仪或计算机接口软件画出图谱。欢迎大家参与讨论,补充自己想交流的参数,说说自己的认识或者提出自己的疑问!!!

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