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激光共焦显微拉曼光谱仪

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  • 【分享】三维显微激光拉曼光谱仪

    【分享】三维显微激光拉曼光谱仪

    三维显微激光拉曼光谱仪三维显微激光拉曼光谱仪装置Nanofinder30  Nanofinder30 三维显微激光拉曼光谱仪装置是日本首创,世界最初的分析装置。它能在亚微米到纳米范围内,测定物质化学状态的三维图像。它由共焦激光显微镜,压电陶瓷平台(或电动扫描器)和光谱仪组成。并能自选追加原子力显微镜和近场表面增强拉曼测定的功能。 最新测量数据[ 变形Si的应力测定]PDF刊登 用二维的平面分析来评价变形Si。空间分辨率130nm, 变形率0.01%(0.1cm偏移)。 半导体/电子材料(异状物,应力,化学组成,物理结构)薄膜/保护膜(DLC,涂料,粘剂)/界面层,液晶内部构造结晶体(单壁碳纳米管,纳米晶体)光波导回路,玻璃,光学结晶等的折射率变化生物学(DNA, 蛋白质, 细胞 组织等) 以亚微米级分辨率和三维图像,能分析物质的化学结合状态空间分辨率200nm(三维共焦点模式),50nm(二维TERS模式)能同时测定光谱图像(拉曼/萤光/光致荧光PL),共焦显微镜图像,扫描探针显微镜图像(AFM/STM)和近场表面增强拉曼图像(SERS)能高速度,高灵敏度地测定样品(灵敏度:与原来之比10倍以上)不需要测定前样品处理,在空气中能进行非破坏测定全自动马达传动系统的作用,测定简单 共焦显微镜模式不能识别结晶缺陷,然而光致荧光(PL)模式却能清楚地测到结晶缺陷 共焦激光显微镜模式的形状测定 光谱窗 560 nm 用光致荧光(PL)模式测到的结晶缺陷的光谱图像(560nm的三维映像) 用AFM和共焦显微拉曼法同时测定CNT,能判定它的特性 (金属,半导体)和纯度。 同时测定单壁碳纳米管(CNT)的原子力显微镜(AFM) 形貌图像和拉曼光谱图像的例子 :拉曼光谱: 激光488nm,功率1.5mW,曝光时间2 sec,物镜100×Oil, NA=1.35, 积分时间100 sec (AFM和拉曼图像测定时) AFM形貌图像(右上)表示了单壁碳纳米管混合物的各种形状结构。图像中用数字1到8来表示其不同形状。数字1-6测得了拉曼光谱(上图所示),判定为半导体CNT。但7-8测不到拉曼光谱,所以不是半导体CNT,而可能是金属CNT(可用He-Ne激光633nm验证)。最上面表示了RBM(173cm-1), G-band(1593cm-1)及D-band(1351cm-1)的拉曼光谱图像 综合激光器和光谱分析系统的长处,坚固耐用的复合设计,卓越的仪器安定性,是纳米技术测定装置中的杰出产品。 ※日本纳米技术2004大奖“评价和测量部门”得奖. ※日本第16届中小企业优秀技术和新产品奖 “优良奖”得奖. 光学器件配置图Nanofinder30 [img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2008/12/200812071751_122565_1634361_3.jpg[/img][img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2008/12/200812071751_122566_1634361_3.jpg[/img][~122567~][~122568~]

  • 【原创大赛】激光共聚焦显微拉曼光谱仪使用心得

    【原创大赛】激光共聚焦显微拉曼光谱仪使用心得

    [align=center]激光共聚焦显微拉曼光谱仪使用心得[/align][align=center]NQI研发中心 徐婧婧 [/align]拉曼散射效应是印度物理学家拉曼在1928年首次发现的,随后在法国和苏联也被观察到。拉曼散射是当光通过透明介质时,由于入射光与分子运动相互作用而引起频率的变化。在透明介质的散射光谱中,频率与入射光频率υ[sub]0[/sub]相同的成分称为瑞利散射;频率对称分布在υ[sub]0[/sub]两侧的谱线或谱带υ[sub]0[/sub]±υ[sub]1[/sub]即为拉曼光谱。拉曼散射光频率与入射光频率之差(即拉曼位移)反映了分子振动和转动能级的情况,并且激发光频率对此没有影响,此外在一定条件或状态下不同的物质分子具有独一无二的分子结构,因此拉曼效应可用于鉴别物质。此外,拉曼信号强度正比于分子振动与转动强度,因此也可用作定量分析。如今,拉曼光谱早已是一项成熟的非接触式无损检测技术,并在食品检测、环境监测、珠宝文物鉴定等领域有着广泛的应用。在拉曼光谱测量仪中显微共聚焦激光拉曼光谱仪以其极高的灵敏度成为现代研究工作中一种先进测试手段,其具有对样品无损伤、无需样品制备、分析速度快、信息精确、高灵敏度、高分辨率、高重复性等诸多优点,非常适合各种物质的快速测定和分析,在众多研究领域的材料结构分析中是不可替代的设备。显微共聚焦激光拉曼光谱仪的检测原理为:激光器发出的激光光束通过激光光路传递到显微镜,通过显微镜聚焦到被测样品,激发出频率发生改变的非弹性拉曼散射信号,经过信号光路,并光栅进行分光,然后采用高效光信号采集及处理系统获得全光谱范围内的拉曼散射信号,研究分子的振动能级,从而反应物质的结构信息。还可对选定区域进行点、线、面扫描,从而确定不同物质的成分分布状况。激光共聚焦显微拉曼光谱仪目前的生产厂商主要以进口厂家为主,主要有HORIBA Scentific、Renishaw、Thermofisher等厂家。不过高精度的拉曼光谱仪特别是激光共聚焦显微拉曼光谱仪价格昂贵,为了能够更好的发挥拉曼光谱仪的使用价值,使用时要格外注意操作规范并且在闲置时要对其进行合理的保养。主要注意以下几点:1.为防止仪器受潮而影响使用寿命,拉曼仪器所在实验室应经常保持干燥,即使仪器不用,也应每周开机至少两次,每次半天,同时开除湿机除湿。特别是霉雨季节,最好是能每天开除湿机。2.实验室里的CO[sub]2[/sub]浓度会对仪器寿命造成很大影响,因此实验室里的人数应尽量少,无关人员最好不要进入,还要注意适当通风换气。3. 为减少化学试剂对测定的影响,用于拉曼光谱分析仪的化学试剂应为光学试剂级,至少也要分析纯级。如发现化学试剂出现结块的现象,则应重新加热干燥。4.实验完毕后需要定期对机身进行保养,主要注意清除大颗粒灰尘、清洁镜头、机身。清洁过程中一定要注意使用合适的力道,太轻可能会导致清理不干净,太重又可能不慎损坏机身。以下是实验过程中利用激光共聚焦显微拉曼光谱仪测试的一些数据:[align=center][img=,690,467]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909160934496173_6576_3048281_3.jpg!w690x467.jpg[/img][/align][align=center]图1不同激光强度下4-巯基苯甲酸的拉曼光谱图[/align][align=center][img=,690,467]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909160935033673_5943_3048281_3.jpg!w690x467.jpg[/img][/align][align=center]图2尼尔蓝与4-巯基苯甲酸的双标记纳米粒子拉曼光谱图[/align]

  • 【资料】什么是共焦显微拉曼光谱仪?

    共焦拉曼指的是空间滤波的能力和控制被分析样品的体积的能力。通常主要是利用显微镜系统来实现的。 仅仅是增加一个显微镜到拉曼光谱仪上不会起到控制被测样品体积的作用的—为达到这个目的需要一个空间滤波器。

  • 如何计算显微拉曼光谱仪的激光光斑尺寸?

    显微拉曼光谱仪的空间分辨率在0.5-1微米之间,那么这个数值是如何得出的呢?空间分辨率与入射激光的波长是否有关系呢?今天我们主要来讨论一下这个问题。下面这个公式不知道大家是否熟悉,学光学的小伙伴应该认出了它就是衍射光斑直径公式啦:[align=center]D = 1.22 λ / NA[/align]我们可以认为对于显微拉曼光谱仪而言,能够实现的最小光斑尺寸就是衍射极限,简而言之,对于上述公式,其中D就是要计算的激光光斑直径,λ即激发激光波长,NA就是所使用显微物镜的数值孔径。举个例子,如果显微镜采用数值孔径为0.8的显微物镜,那激发波长为532nm的激光光斑直径理论上就应该约为811nm。但是实际上,由于显微拉曼光谱仪本身的光学系统要更加复杂,比如激光光子和拉曼光子的散射以及它们与样品表面的相互作用均会导致空间分辨率的下降,因此,显微拉曼光谱仪的空间分辨率通常为1微米左右。 通过公式我们还可以得出以下结论,在使用同样显微物镜的前提下,波长越短的激发激光能够提供更高的空间分辨率。同样,在使用同一波长激光的前提下,数值孔径越大的显微物镜能够提供越高的空间分辨率。小伙伴们以后如果需要使用显微拉曼光谱仪,就可以根据激光波长和显微物镜的数值孔径来对空间分辨率做一个初步判断啦~这篇文章最初发表在微信公众号RamanSpectra上,大家有兴趣可以关注一下,比心❤

  • 【原创大赛】数数当前市场上的研究级拉曼光谱仪

    【原创大赛】数数当前市场上的研究级拉曼光谱仪

    拉曼光谱技术具有准确性高,信息量大,谱图容易辨认,差异性区分明显,拉曼位移与入射频率无关,分析速度快,可进行微量、微区、原位的非破坏性检验,维护费用低,和红外光谱互补等特点,在许多领域都有其独特的应用。  目前市场上的拉曼光谱仪可分为研究级拉曼光谱仪和便携式拉曼光谱仪两个大类。本文将先和广大版友探讨研究级拉曼光谱仪主要供应商的产品组成和特点。  当前主要的研究级拉曼光谱仪供应商有:雷尼绍,HORIBA Jobin Yvon,赛默飞,PerkinElmer,布鲁克,国内的生产商主要有天津港东和北京卓立汉光,另外天瑞仪器和天津拓普也有相关产品。  雷尼绍拉曼光谱产品主要为inVia系列,inVia系列拉曼光谱仪于2003年推出,该系列产品配置灵活,用户可根据自己的需求选择不同的功能模块,及相应的自动化程度,其最高配置型号为inVia Reflex。雷尼绍的产品主要针对高端的研究级拉曼光谱产品,虽然一直没有新的型号推出,但在仪器的成像功能和联用技术研究方面,一直在不断的改进。从逐点绘图成像到StreamLine Plus超高速成像技术,以及最新的三维(3D)拉曼成像技术。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/11/201211271503_407617_2086240_3.jpg  在联用技术方面,雷尼绍研发高效光学效率的接口使inVia显微拉曼可与Bruker、NT-MDT以及Nanonics Imaging公司的扫描探针显微镜直接耦合。inVia还支持新的针尖增强拉曼散射技术(TERS)以及近场光学显微技术(NSOM/SNOM)。  HORIBA Jobin Yvon目前主要的拉曼光谱产品主要由两个系列型号:LabRAM和XploRA。  LabRAM系列主要有LabRAM Aramis全自动激光拉曼光谱仪和LabRAM HR Evolution新长焦长拉曼光谱仪。  LabRAM Aramis全自动激光拉曼光谱仪于2005年在上海大学召开的全国光散射会议上首次于国内展出,该仪器设计将方便用户操作放在首位,所有的功能只需要点击软件即可实现。系统由膨胀系数几乎为零的合金型材制作框架,仪器核心部件都刚性地固定于一个整体性机箱内和机箱上。  LabRAM HR Evolution新长焦长拉曼光谱仪,是目前市场上焦长最长的单级共焦拉曼光谱仪,焦长达到800mm。该仪器更多的关注仪器的高性能和多功能性。可根据用户需求同时配置三个探测器,CCD、iCCD、EMCCD、InGaAs、PMT等用于扩展光谱范围及特殊应用。可与AFM、TERS、光致发光(PL)、样品加热冷却及其他联用。采用HORIBA Scientific的新版光谱分析软件包-LabSpec 6。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/11/201211271504_407618_2086240_3.jpgLabRAM HR Evolution新长焦长拉曼光谱仪  XploRA系列主要包括两款产品:XploRA精巧型全自动显微共焦拉曼光谱仪和XploRA INV智能型倒置显微拉曼光谱仪。  XploRA具有灵活的可移动性特点,其优势在于是目前市场上最精巧的有显微共焦功能的拉曼光谱仪。另外全自动也是该款仪器突出宣传的一个特点,仪器拥有3个内置激光器和4块光栅,,激发波长与光栅可以完全自动切换,可自由选择多种光谱分辨率。另外,在这款仪器当中HORIBA Jobin Yvon首次使用中文软件操作界面。  XploRA INV在继承了XploRA高自动化和结构紧凑的基础上,增加了倒置显微镜的分析功能。在仪器设计当中采用了开放性结构,确保可以自由添加和使用倒置显微镜的所有附件或其它附加装置。还可以选择性集成一些特有的模块和技术,如DuoScan扫描技术和3D共焦快速荧光成像模块。据介绍,该仪器还可以与AFM联用及进行TERS(针尖增强拉曼光谱)分析。  赛黙飞世尔科技分子光谱部(原尼高力仪器公司)主要有以下几种类型型号:Almega激光拉曼光谱仪、DXR智能拉曼光谱仪。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/11/201211271505_407619_2086240_3.jpgAlmega XR激光显微拉曼光谱仪  2001年赛黙飞世尔科技推出全自动Almega XR激光显微拉曼光谱仪,具有大容量样品仓和显微镜,自动化程度高,采样方式灵活;共聚焦设计拉曼显微镜可获得不同深度样品的真实信息,可提供目前数量最多超过20000张的无机与有机拉曼谱库。  2008年中旬,在 ALMEGA 系列基础上又推出了新型DXR 智能激光拉曼光谱仪,实现了仪器的高度智能自动化。光谱仪设计采用模块化单元组合,同时采用智能精确锁定技术,确保光路高稳定与检测结果高精确度与重复性。软件智能识别激光器、光栅与瑞利滤光片序列号与种类,并自动识别它们之间兼容性。  珀金埃尔默的主要型号是RamanStation 400 系列拉曼光谱仪,其主要宣传点是全球唯一的运用中阶梯光栅及二维面阵CCD检测器组合成的二维色散型拉曼光谱仪,和传统的获取高分辨率图谱所惯用的多块一维排列的闪耀光栅分别测量出特定谱带,再对测量所得的多个不同谱带进行光谱拼接的方法不同,该仪器可在一秒钟内获取覆盖整个波段的高分辨率的拉曼光谱图。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/11/201211271505_407620_2086240_3.jpg  布鲁克拉曼光谱仪主要有MultiRAM 独立式傅立叶拉曼光谱仪和RamII附件式拉曼光谱仪两个型号。  布鲁克推出了世界上第一台商品化的傅立叶拉曼光谱仪,MultiRAM 独立式傅立叶拉曼光谱仪中采用了布鲁克专利的RockSolidTM干涉仪,MultiRAM可以安装2个激光器和检测器,并且可选配自动偏振附件、光纤探针等附件,系统可以配置室温InGaAs检测器和高性能液氮冷却的Ge检测器。  RamII是世界上第一台全数字化的附件式傅立叶变换拉曼光谱仪,可同Brukr公司的Vertex系列高级研究级红外光谱联用。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/11/201211271506_407621_2086240_3.jpgMultiRAM 独立式傅立叶拉曼光谱仪  卓立汉光的主要拉曼光谱型号是:UVRaman100紫外共振拉曼光谱系统。该仪器由中国科学院大连化学物理研究所中国科学院李灿院士及其研究小组自行研制,是我国第一台紫外共振拉曼三联光谱仪。2008年和北京卓立汉光仪器有限公司合作进行产业化。该仪器采用了紫外激光激发可以很好的避免拉曼光谱分析中荧光本底的干扰问题;紫外激光激发拉曼信号效率更高;共振拉曼可以提供很高的共振增强因子,从而大幅度提升检测极限;由于采用的是三联单色仪滤除瑞利散射,而非陷波滤波器,设备可以测试地低到到几个波数的拉曼光谱。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/11/201211271507_407622_2086240_3.jpg  天津港东的拉曼光谱产品主要有两个型号:LRS-2/3激光拉曼光谱仪和LRS-5微区激光拉曼光谱仪。  LRS-2/3激光拉曼光谱仪采用半导体激光器作为光源,配有旨在减小杂散光的陷波滤波器,用高灵敏度、低噪声单光子计数器做接受系统。  LRS-5微区激光拉曼光谱仪在LRS-2/3的基础上配置了Olympus公司生产的显微镜作为激光会聚和拉曼光收集系统,可以进行微区分析。接收系统釆用的是Andor公司生产的面阵CCD

  • 便携式拉曼光谱仪激光器使用寿命是多少

    [font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][color=#05073b][size=18px]  便携式拉曼光谱仪激光器使用寿命是多少,便携式拉曼光谱仪的激光器使用寿命并不是一个固定的数值,因为它受到多种因素的影响。以下是一些影响激光器使用寿命的关键因素以及相应的解释:  控制发射功率:合理地控制激光器的发射功率是延长激光器寿命的有效方法之一。控制发射功率可以缓解晶体加热的程度,从而减缓晶体老化的速度。  维护工作环境:保持工作环境的良好通风和恒温状态,控制温度在激光器所允许的范围内,能够有效地延长激光器的使用寿命。  日常维护工作:多关注激光器的运行状态,及时更换性能不佳的部件,定期清洗光学元件和泵浦激光器,做好日常维护工作,也可以有效延长激光器的使用寿命。  具体到数值上,由于不同品牌和型号的便携式拉曼光谱仪激光器存在差异,以及使用环境、操作方式等因素的不同,因此无法给出确切的使用寿命数字。  然而,一般而言,如果正确操作和维护,激光器的使用寿命可以达到数千小时甚至更长。但是,这只是一个大致的估计,实际使用寿命可能因具体情况而异。  为了延长便携式拉曼光谱仪激光器的使用寿命,建议用户遵循以下几点:  仔细阅读并遵守产品说明书中的操作和维护指南。  定期对激光器进行清洁和检查,确保其处于良好的工作状态。  避免将激光器暴露在极端温度、湿度或灰尘环境中。  遵循正确的开关机顺序和操作流程,避免对激光器造成不必要的损害。  总之,虽然无法给出便携式拉曼光谱仪激光器确切的使用寿命数字,但通过正确的操作和维护,可以有效地延长其使用寿命。[/size][/color][/font]

  • 【求助】激光拉曼光谱仪

    FTPL是不是就是激光拉曼光谱仪 ,那么光致荧光是怎么得来的?和博立叶变换红外光谱仪有什么区别?做的样品有什么不同吗?

  • 【原创】用显微共聚焦拉曼光谱仪测样品选择激光光源条件的小技巧

    本人是2010届北京印刷学院本科应届毕业生芦同学,由于在做毕业设计,题目为常用颜料的拉曼光谱数据库建设。每天需要测量大量的常用颜料的拉曼光谱,在每天的重复工作时,我总结了一下选择激光种类以及参数的小技巧。在测量有机颜料时,一般可以先采用785的激光,10%的能量,5秒测量1次,先用这个条件尝试一下,然后转换回视频模式,看看有机颜料样品有没有被烧坏,有机样品在测量时特别容易被烧坏,大家在测量时一定要注意转换回视频模式看看,有的时候忘记看颜料是否被烧很可能测得的已经不是原样品的拉曼峰了。如果拉曼峰被激发出来了且颜料未被烧坏,则可以采用1%的能量,用长时间的测量来获得噪音比较低的光谱图。在测量无机样品时一般采用532的激光,也是10%的能量先测5秒一次。若为金属化合物的颜料则可以大胆的用10%能量的不同激光去尝试,且不必担心样品是是否被烧坏。这就是本人总结的一点点不成熟的经验。谢谢大家的指导,在这个论坛我学到了很多。同时我还想请大家把自己对拉曼光谱测量的一些小技巧告诉我。

  • 高分辨率激光共焦显微成像技术新进展

    共焦显微镜因其高分辨率和能三维立体成像的优点被广泛应用在生物、医疗、半导体等方面。文章首先分析了影响共焦显微镜分辨率的因素,主要有光源、探测器孔径和杂散光等;并结合这些因素介绍了双光子共焦碌微镜、彩色共焦显微镜、荧光共焦显微镜、光纤共焦显微镜;然后从提高系统成像速度的方面介绍了波分复用共焦显微镜和频分复用共焦显微镜;最后分析了共焦显微镜的发展趋势。一、引言随着人们对于生物医学的研究,传统的光学显微镜已经无法满足研究的需要,人们需要可以实现三维成像的显微镜。1957年Marvin Minsky提出了共焦扫描显微镜的原理。1969年,耶鲁大学的Paul Davidovits和M.David Egger设计了第一台共焦显微镜,1987年第一台商业化共焦显微镜的问世,真正实现了三维立体成像。与普通光学显微镜相比,共焦显微镜具有极其明显的优点:能对物体的不同层面进行逐层扫描,从而获得大量的物体断层图像;可以利用计算机进行图像处理;具有较高的横向分辨率和纵向分辨率;对于透明和半透明物体,可以得到其内部的结构图像;还可以对活体细胞进行观察,获取活细胞内的信息,并对获得的信息进行定量分析。自共焦显微原理被提出以来,引起了研究者的广泛关注,提高显微系统的分辨率和改善系统的性能是研究者开发新型显微镜时考虑的主要因素。近几十年,国内外学者通过对共焦显微成像系统的三维点扩散函数、光学传递函数等方面的分析,得出影响显微系统分辨率的因素,主要包括系统的激励光源、探测器孔径、杂散光等。此外,共焦显微镜的成像速度也是决定系统性能的一个重要因素,专家们也一直在进行提高系统成像速度的研究。本文主要从提高显微系统分辨率和系统成像速度这两个方面来介绍共焦显微镜的发展情况。二、共焦扫描显微镜分辨率的提高光源、探测器孔径和杂散光等是影响共焦显微镜分辨率的几个主要因素,因此可以通过改善这些方面来提高显微系统的分辨率。1.光源显微镜的成像性质在很大程度上取决于所采用光源的相干性,有关研究表明,光源相干性好的系统其分辨率要比相干性差的系统要好,并且照明光源对分辨率的改变范围达到了26.4%。因此,选取适合的照明光源对提高显微系统的分辨率有很大帮助。常规的共焦扫描显微镜主要使用普通单色激光作为光源,随着技术的进步,目前已经出现了使用飞秒激光、超白激光、高斯光束作为光源的共焦显微镜,以提高系统性能,获得更高的分辨率。①飞秒激光为光源的双先子扫描共焦显微镜双光子扫描共焦显微镜通常使用近红外的飞秒激光作为激发光源,由于红外光具有较强的穿透性,它能探测到生物样品表面下更深层的荧光图像,并且生物组织对红外光吸收少,随着探测深度的增加衰减会变小,另一方面红外光的衍射低,光束的形状保持性好。2005年,Wild等人利用双光子扫描共焦显微技术实时观察和定量分析了PAHs在植物叶片表面和内部的光降解过程。后来又进一步研究了菲从空气到叶片的迁移过程、菲在叶片内部的运动及其分布情况等,该技术可观测PAHs在叶片内部的最大深度约为200μm。②白激光( supercontinuum laser)为光源的彩色共焦显微镜彩色共焦显微镜是利用光学系统的彩色像差,光源的不同光谱成分会聚焦到样品的不同深度,通过分析由样品反射的光谱能有效地获得样品的扫描深度。2004年,美国宾夕法尼亚州立大学的Zhiwen Liu课题小组使用光子晶体光纤产生的超连续谱白光作为彩色共焦显微镜的光源,这种超连续谱白光具有大的带宽,能够提高系统的扫描范围,能达到7μm扫描深度。另外超白激光有较高的空间相干性,无斑点噪声,能提高系统的信噪比和扫描速度。③使用高斯光束的荧光共焦显微镜荧光共焦显微镜是通过激光照射样品激发样品发出荧光,再通过探测器接受荧光对样品进行观察的共焦显微镜。华南农业大学的杨初平等人研究了不同光源孔径和束斑尺寸的高斯光束对荧光共焦显微镜分辨率的影响表明:与一定孔径尺寸的平行光束相比,采用高斯光束系统可以获得更好的分辨率。 2. 探测器孔径和杂散光共焦显微镜中探测器孔径能滤除部分杂散光,提高系统的分辨率和信噪比。根据相关文献对共焦扫描显微镜的三维光学传递函数与探测器孔径之间的依赖关系的研究,可以得到探测小孔直径为:d=β*1.22λ/NA,式中,β为物镜的放大率,λ为光的波长,NA为物镜的数值孔径。由该公式确定探测器小孔的直径,一方面满足了共焦扫描系统对探测器小孔直径的要求,从而保证高的横向和纵向分辨率,另一方面,又最大限度地使由试样中发射的荧光能量被探测器接收。为了更进一步提高系统分辨率,许多研究者对共焦显微镜中探测孔径进行了改进,例如使用单模光纤代替普通针孔孔径,还有双D型孔径等。① 使用单模光纤的光纤共焦显微镜在光纤共焦显微镜中用光纤分路器代替传统共焦显微镜中的光束分路器,并以单模光纤来代替光源和探测器的微米尺寸针孔孔径。使用单模光纤的优点在于:首先,在采用寻常针孔制作的共焦显微镜中,光源、针孔、探测器等有可能不在一条直线上从而会引起像差;但是在光纤作为针孔的共焦显微镜中,即使有的部件偏离直线时也不会引入像差。其次,使用单模光纤代替微型针孔,容易清除针孔的污染,而且不易受污染。第三,在使用光纤的系统中,可以自由移动显微镜部分而不必挪动探测器。2006年德克萨斯大学使用光纤共焦显微镜进行口腔病变检测,测得的系统横向和轴向分辨率分别为2. 1µm和10µm,成像速度为15帧/s,可观测范围为200µm×200µm。② 具有D型孔径的共焦显微镜近几年,具有对称D型光瞳的共焦显微成像技术引起广泛的关注,图1所示是该系统示意图。2006年美国东北大学的Peter J.Dwyer等人使用这种共焦显微镜进行了人体皮肤内部成像的实验,测得横向分辨率为1.7士0.1µm。2009年新加坡国立大学的Wei Gong等人采用傍轴近似方法理论分析了在共焦显微镜中使用双D型孔径对轴向分辨率的影响。分析表明在图1中的d值给定时,进入瞳孔的光信号强度l会随着探测器尺寸的增加而增加;但是在探测器尺寸给定时,光信号强度I会随着d的增加而单调递减。在使用有限大小的探测器时,改变d的大小,轴向分辨率可以得到改善。 http://www.biomart.cn//upload/userfiles/image/2011/11/1321512815.png 图1 双D型孔径共焦成像系统示意图在共焦成像光学系统中,到达像面的杂散光会在像面上产生附加的强度分布,从而进一步降低了像面的对比度,限制了系统分辨率的提高,因此在显微系统设计时,杂散光的影响也是不容忽视的。一般除了使用探测小孔来抑制杂散光,其他的一些设备例如可变瞳滤波器等对杂散光也有很好的过滤作用。最近以色列魏茨曼科学研究所的O.sipSchwartz and Dan Oron等人提出在系统中使用可变瞳滤波器,这个滤波器能够使多光子荧光共焦显微镜达到分辨率阿贝极限的非线性模拟,从而改善系统的分辨率。三、共焦扫描显微成像速度的提高共焦显微镜快速的成像速度为研究者观察生物细胞中快速动态反应提供了良好的条件。在共焦扫描显微成像系统中,传统的方法是通过改善扫描探测技术来提高成像速度。现有的扫描探测技术主要有Nipkow转盘法、狭缝共焦检测法、多光束的微光学器件检测法。这些方法可以改善扫描速度,但是与系统分辨率,视场之间都存在矛盾,因此又诞生了两种提高成像速度的新型显微镜:波分复用共焦显微镜和频分复用共焦显微镜。

  • 【参数解读总结篇】拉曼光谱仪的技术参数解读与使用

    【参数解读】拉曼光谱仪的技术参数解读与使用http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20131206/5096242/拉曼(Raman)光谱与红外吸收光谱同为研究物质的分子振动能级来分析物质的组成,但相对于红外吸收光谱,拉曼光谱的谱线通常较为简单且有独特性,而且被测物不需进行前处理,因此在判读物质的组成成分时有明显的优势, 然而以前拉曼光谱由于系统组成复杂庞大且昂贵,只有极少数的专家有能力购买与驾驭,从而限制了其应用的推广。幸运的是,近年来由于元器件(全息陷波滤光片,科学级CCD探测器等) 的革命性发展,使得Raman光谱的测量不再昂贵艰难,从而带动了拉曼光谱研究的热潮与普及。拉曼光谱仪可分为5个部分:激光光源、样品室、分光系统、光电探测系统、记录仪和计算机。http://img3.17img.cn/bbs/upfile/images/20131206/2013120622071955.jpg◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆激光拉曼光谱仪适用于液体、固体样品的分析, 配有旨在减小杂散光的陷波滤波器。1、常用的激光器都是哪些?你的仪器配置几个?325,355,457, 488, 514, 532, 633, 785;一般的设备可以配置3个2、共焦显微镜拉曼光谱和激光拉曼光谱的仪器配置和应用区别在哪?共聚焦拉曼利用共聚焦孔pinhole提供非常高的空间分辨率;非常适合纳米材料领域的研究3、探测器都有哪些?前入射、背入射CCD,开放式ccd, EMCCD, InGaAs4、应该如何根据测试样品来选择仪器配置?考虑仪器配置时,激光波长的选择非常重要。拉曼光谱仪一般由以下五个部分构成。一、光源它的功能是提供单色性好、功率大并且最好能多波长工作的入射光。目前拉曼光谱实验的光源己全部用激光器代替历史上使用的汞灯。对常规的拉曼光谱实验,常见的气体激光器基本上可以满足实验的需要。在某些拉曼光谱实验中要求入射光的强度稳定,这就要求激光器的输出功率稳定。二、外光路外光路部分包括聚光、集光、样品架.滤光和偏振等部件。(1) 聚光:用一块或二块焦距合适的会聚透镜,使样品处于会聚激光束的腰部,以提高样品光的辐照功率,可使样品在单位面积上辐照功率比不用透镜会聚前增强105倍。(2) 集光:常用透镜组或反射凹面镜作散射光的收集镜。通常是由相对孔径数值在1左右的透镜组成。为了更多地收集散射光,对某些实验样品可在集光镜对面和照明光传播方向上加反射镜。(3) 样品架:样品架的设计要保证使照明最有效和杂散光最少,尤其要避免入射激光进入光谱仪的入射狭缝。为此,对于透明样品,最佳的样品布置方案是使样品被照明部分呈光谱仪入射狭缝形状的长圆柱体,并使收集光方向垂直于入射光的传播方向。几种典型样品架的空间配置参见右图。(4) 滤光:安置滤光部件的主要目的是为了抑制杂散光以提高拉曼散射的信噪比。在样品前面,典型的滤光部件是前置单色器或干涉滤光片,它们可以滤去光源中非激光频率的大部分光能。小孔光栏对滤去激光器产生的等离子线有很好的作用。在样品后面,用合适的干涉滤光片或吸收盒可以滤去不需要的瑞利线的一大部分能量,提高拉曼散射的相对强度。(5) 偏振:做偏振谱测量时,必须在外光路中插入偏振元件。加入偏振旋转器可以改变入射光的偏振方向;在光谱仪入射狭缝前加入检偏器,可以改变进入光谱仪的散射光的偏振;在检偏器后设置偏振扰乱器,可以消除光谱仪的退偏干扰。三、色散系统色散系统使拉曼散射光按波长在空间分开,通常使用单色仪。由于拉曼散射强度很弱,因而要求拉曼光谱仪有很好的杂散光水平。各种光学部件的缺陷,尤其是光栅的缺陷,是仪器杂散光的主要来源。当仪器的杂散光本领小于10-4时,只能作气体、透明液体和透明晶体的拉曼光谱。四、接收系统拉曼散射信号的接收类型分单通道和多通道接收两种。光电倍增管接收就是单通道接收。五、信息处理为了提取拉曼散射信息,常用的电子学处理方法是直流放大、选频和光子计数,然后用记录仪或计算机接口软件画出图谱。欢迎大家参与讨论,补充自己想交流的参数,说说自己的认识或者提出自己的疑问!!!

  • 【求助】高温观察用激光共焦扫描显微镜的疑惑

    最近在了解高温观察用激光共焦扫描显微镜,看了很多有关采用CLSM观察的高温熔化、凝固和固态相变的观察,感觉很不错。但是我在论坛里看见采用激光扫描共焦显微镜拍摄的很多三维组织图像照片,这种激光共焦扫描显微镜和宝钢、首钢的那种高温观察用的激光扫描共焦显微镜是不是不一样啊??激光共焦扫描显微镜是不是也分好几种啊,请专家解惑,我刚刚接触,不是很了解。另外高温观察用激光共焦扫描显微镜大概多少钱啊,在哪里买呢,谢谢大家

  • 【转贴】激光拉曼光谱仪的应用

    激光拉曼光谱仪的应用无机化合物的分析   化学结构的测定--无机化合物对称性强,用红外光谱法很难解决,而拉曼光谱测无机原子团的结构、以及测络合物的结构是很方便的。   (1)对于汞离子在水溶液中,是以Hg+或Hg2+存在的,用红外光谱是无法确定的。因这两种离子在红外光谱上都无吸收带。在拉曼光谱中可看到(Hg--Hg)2+的强偏振线在169cm-1出现。   (2)铊离子在水溶液中是以一价形式存在。因拉曼光谱没有二价铊离子的强偏振线。   (3)镓的特征价过去曾有人提出所谓二氯化镓的实验式,如果如此,它应有顺磁性。但与实际不符。后来有人推断其结构可能是Cl2Ga-GaCl2镓原子间有一键,可能有两种构型:  ① 交错式属D2i点群(如丙二烯的氢)。   ② 平面式属C2v点群(乙烯中的氢)。   前者应出现九条拉曼线,有三条是偏振的,后者应出现六条拉曼线,也有三条偏振的。但实际结果表明其熔盐仅有四条拉曼线,其中只有一条是高度偏振的。其他皆为退偏振的。因此上述结构是不可能存在的。实验结果表明,其拉曼谱与水溶液中GaCl4-拉曼光谱相同:     GaCl2cm-1   GaCl4 cm-1      115       114      退偏振      153       149      退偏振      346       346      强偏振      380       386      退偏振因此所谓二氯化镓,其结构应为[Ca][Gacl]其中一个镓原子为三价,另一镓原子为一价。   无机化合物组成分析有三方面   ⑴测定强酸的离解度   ⑵测定溶液中络合物的稳定常数。  ⑶测定杂质和混合物的组成。  用红外光谱测定无机离子是比较困难的。这或因为所测对象是水溶液,或因为强氢键的形成而造成的谱带变宽,总之吸收带复杂化而不利于测定。拉曼光谱则不受水的影响,也无需特殊装置,拉曼光谱对无机离子或分子,以及它们的络合物的分析都是很方便的。硝酸根、硫酸根、高氯酸根、硫氰酸根等阴离子,其特征频率不正离子的性质和它的物理状态影响。   对于杂质的测定,例如亚硝酸根中微量硝酸根,用其他方法测定是很难办到的。而用激光拉曼光谱法则很方便。这是因硝酸根和亚硝酸根在拉曼谱上的特征吸收带互不干扰。特别是亚硝酸根的特征拉曼带810cm-1正好作天然内标,硝酸根的拉曼特征谱带在1055 cm-1.测1055cm-1谱带强度与810cm-1谱带强度之比,由工作曲线可检出。检出极为0.2%。

  • 【参数解读】拉曼光谱仪的技术参数解读与使用

    【参数解读】拉曼光谱仪的技术参数解读与使用

    拉曼(Raman)光谱与红外吸收光谱同为研究物质的分子振动能级来分析物质的组成,但相对于红外吸收光谱,拉曼光谱的谱线通常较为简单且有独特性,而且被测物不需进行前处理,因此在判读物质的组成成分时有明显的优势, 然而以前拉曼光谱由于系统组成复杂庞大且昂贵,只有极少数的专家有能力购买与驾驭,从而限制了其应用的推广。幸运的是,近年来由于元器件(全息陷波滤光片,科学级CCD探测器等) 的革命性发展,使得Raman光谱的测量不再昂贵艰难,从而带动了拉曼光谱研究的热潮与普及。拉曼光谱仪可分为5个部分:激光光源、样品室、分光系统、光电探测系统、记录仪和计算机。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/12/201312062207_481118_1608710_3.jpg◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆列举部分仪器的个别参数,供参考:技术参数:波长:200-800nm,波长精度: ≤ ± 0.4nm,波长重复性 ≤ 0.2nm,杂散光 ≤ 10-3,线色散倒数 2.7nm/mm,谱线半宽度,波长在589nm处狭缝高3mm,宽0.2mm,谱线半宽度≤0.2nm,相对孔径:D/f = 1/11 光栅:1800L/mm 入射狭缝:宽度0—1mm 连续可调,示值精度0.01mm/格 探测器:面阵CCD探测器(1024×256像素) 陷波滤波片:532nm,光谱带宽:20nm 激光光源:半导体激光器532nm〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓分割线〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓请您来解析:1、常用的激光器都是哪些?你的仪器配置几个?2、共焦显微镜拉曼光谱和激光拉曼光谱的仪器配置和应用区别在哪?3、探测器都有哪些?4、应该如何根据测试样品来选择仪器配置?欢迎大家参与讨论,补充自己想交流的参数,说说自己的认识或者提出自己的疑问!!!往期回顾:【参数解读】快速溶剂萃取仪的技术参数解读与使用

  • 【资料】共焦激光扫瞄显微镜

    共焦激光扫瞄显微镜ZEISS所提供之英文数据,内容包含:1.影像构成原理2.电子信号处理[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=32959]共焦激光扫瞄显微镜[/url]

  • 【资料】拉曼相关技术-共焦显微拉曼光谱技术

    [size=5][b]共焦显微拉曼光谱技术[/b] [/size][size=5]  显微拉曼光谱技术是将拉曼光谱分析技术与显微分析技术结合起来的一种应用技术。与其他传统技术相比,更易于直接获得大量有价值信息,共聚焦显微拉曼光谱不仅具有常规拉曼光谱的特点,还有自己的独特优势。辅以高倍光学显微镜,具有微观、原位、多相态、稳定性好、空间分辨率高等特点,可实现逐点扫描,获得高分辨率的三维图像,近几年共聚焦显微拉曼光谱在肿瘤检测、文物考古、公安法学等领域有着广泛的应用。 [/size]

  • 【原创】新安装激光共焦显微镜

    单位新安装了激光共焦显微镜Olympus 3100放大倍数:120x-14400x分辨率:XY 0.12um;Z 0.05um观察模式:明场,暗场,激光共焦,微分干涉。[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=67336]Olympus 3100 手册[/url]

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