浮游植物流式细胞仪

干细胞移植对于白血病等多种疾病的治疗具有重要意义，而准确的干细胞绝对计数对于干细胞移植的成败又十分重要。流式细胞仪结合荧光单抗计数为干细胞绝对计数提供了一种快速、定量、重复性好的方法。细胞表型是细胞基本生物学性质之一。在细胞生物学的研究中，细胞表型反应出细胞群均质程度、细胞生物学功能、细胞分化程度、细胞衰老程度，是细胞产品的最为重要的质量标准。流式细胞术是检测细胞表型的通用技术。

干细胞移植对于白血病等多种疾病的治疗具有重要意义，而准确的干细胞绝对计数对于干细胞移植的成败又十分重要。流式细胞仪结合荧光单抗计数为干细胞绝对计数提供了一种快速、定量、重复性好的方法。细胞表型是细胞基本生物学性质之一。在细胞生物学的研究中，细胞表型反应出细胞群均质程度、细胞生物学功能、细胞分化程度、细胞衰老程度，是细胞产品的最为重要的质量标准。流式细胞术是检测细胞表型的通用技术。

本应用介绍了 Agilent NovoCyte Advanteon 流式细胞仪分析小颗粒的性能，包括由细胞形成的细胞外囊泡 (extracellular vesicle, EV) 和微球。NovoCyte Advanteon 流式细胞仪配备了先进的检测器，能够提供高灵敏度的侧向角散射 (side scatter, SSC)和荧光检测，获得比传统流式细胞仪更出色的检测结果。

随着科学技术的日益发展，寻找和获得先导化合物的方法越来越多，而流式细胞术在先导化合物发现中扮演着越来越重要的角色。确认人体免疫细胞细胞的最好方法之一是流式细胞术，它能根据细胞的显著特征（通常是外表面的蛋白）分析并分类细胞，同时显示很多关于一个细胞在免疫系统中的功能和位置的信息。

流式细胞计数具有高度的敏感性，可同时对目的菌进行定量和定性的检测。目前，流式细胞术以其高速、高灵敏度已经广泛应用于食品中各种病原性致病菌的快速检测，尤其是食品中的大肠杆菌的检测已经被FDA 列为食品安全的常规检测。

T 细胞是免疫应答的重要组成部分，能够识别和清除外来病原体和肿瘤细胞。然而，为了防止产生自身免疫和免疫病理学问题，必须严格控制 T 细胞应答。我们开发了一款用于 Agilent NovoCyte Advanteon 流式细胞仪的 16 色免疫表型分析 panel，可同时分析 T 细胞的分化、活化、衰竭和通过脱颗粒及细胞因子的表达分析其功能。理论上，这种方法可以全面分析 T 细胞在免疫应答中的功能。

相对于传统的平板法与显微计数法，流式细胞术具有快速、灵敏、精确并能进行多参数分析的特点，且在后期使用成本上具有一定的优势。

实验方法原理:取一定量的细胞悬液，先加入特异的第1抗体，待反应完全后洗去未结合抗体，在加入荧光标记的第二抗体，生成抗原-抗体复合物，以流式细胞仪检测其上标记的荧光素被激发后发出的荧光。

浮游植物是水中悬浮生活的若干种藻类的总称。浮游植物作为水生态系统的重要成员，是鱼类天然饵料的重要组成。因浮游植物对环境变化十分敏感，在环境监测中也很重要。不同类型的水体或同一水体的不同季节，藻类组成是不相同的，各种藻类的相对量在不断地变化，此变化有一定的趋势。水中浮游植物组成和存量是养殖鱼类合理投放的重要科学依据，可服务于水生态研究及利用。浮游植物现存量是指某一瞬间单位水体中所存在的浮游植物量。其有两种表示方法：用数目单位表示成密度（一般用个/L为单位），用质量单位mg/L表示的现存量则为生物量。以往调查中，通常仅注重浮游植物的种类或数量，而对其生物量不够重视。因不同水体、不同种类的藻类在个体上的差异很大，仅仅用数量就很难评价不同水体中饵料生物的丰歉，故浮游植物的定量得以测算生物量为目标，才更科学。浮游植物生物量的经典研究方法有两类。一类是生物量“状态”测量（测干重，细胞数量和种群体积），其在理论上是将整个浮游植物作为代表生物量的指标，此方法偏差较、，可靠性不高。另一类是浮游植物生物量“集团”测量（测浮游植物细胞组份）。其包括浮游植物细胞三大组份颗粒态有机碳(POC)，颗粒态有机氮(PON)，颗粒态有机磷的测定和细胞其它组份的测定，如叶绿素a，ATP，蛋白质以及其它色素的测量。此方法测的是活细胞有效组份，且能精确地反映种群的生物量，但其难以反映生态系统中不同浮游植物物种对物质和能量传递的贡献。国外有些学者在测定了不同浮游植物细胞的碳含量、细胞体积、细胞表面积后，发现细胞体积与细胞碳含量的相关性要比与细胞表面积的更强，并建立了浮游植物细胞体积和细胞碳含量的回归方程。从而将各种浮游植物细胞计数结果，通过细胞体积与碳含量等生物量测量的关系转换为生物量，以便在物种水平上合理估算对浮游植物群落生物量。该生物量估算法用途很广泛：可了解浮游植物群落生物量的结构，以及不同浮游植物功能群或物种对生物量的贡献，进而对了解生态系统结构的意义重大。它从物种水平上还可了解浮游植物群落与生物量的相关生态过程，故对了解生态系统的功能，意义重大。镜检计数法是最直接的浮游植物生物量测量方法，也是迄今惟一可鉴定和计数浮游植物到物种水平的方法。其计数结果可用于定义浮游植物群落，分析种群分布和物种组成，以及群落在时间和空间上的块状分布，同时，计数结果也可将浮游植物细胞数量转化为生物量或能量，但传统直接计数法速度慢、费力，并需要相当丰富的分类学专业知识。为此，杭州万深检测科技有限公司融汇整理了国内外公开的各海量资源，推出卓越的AlgaeC浮游生物计数及辅助鉴定系统。该系统能分类统计浮游生物数量，并配有功能强大的浮游生物智能搜索图库，以帮助相关人员快速、简便地分类统计及鉴定浮游生物，该系统还包含有高效的浮游植物生物量测定模块。通常，浮游植物个体极小，不宜直接称重，且其细胞相对密度多数接近于1，故可用形态相似的几何体积公式计算来细胞体积，即：细胞体积转换法或几何体积拟合法。文献[1]研究表明：该方法对浮游植物细胞体积的估算较可靠和可行。目前的万深AlgaeC浮游生物计数及辅助鉴定系统采用此法已内置有34种不同的几何模型，并对常见藻类进行了多模型的编码对应，会根据属名自动推荐该选用的几何模型，使生物量测定的整个过程，既简单又方便（测量步骤具体详见附件）。该计算方法也类似用于浮游动物的生物量估算。参考文献[1] 孙军. 海洋浮游植物细胞体积和表面积模型及其转换生物量[D]. 中国海洋大学，2004[2] 赵文. 水生生物学. 北京：中国农业出版社，2005 附件生物量测量步骤：1、利用万深AlgaeC系统辅助鉴定种类并建立计数表之后，选定要测量的项，右键弹出菜单点击测量体积，如下图：2、打开体积测量窗体，系统根据种类给出推荐模型，也可根据实际需要自行从已内置的32个几何模型中选择。3、根据模型示意图，测量各项参数，即可获得体积。可测量直线长度、曲线长度，及拖动十字锚点调整测量值。对于测量困难的物种以原始参考文献提供的三维尺度比例进行折算。4、测量完成后，点击确定按钮，测量体积就会出现在计数中。分类统计完全部视野数量后，万深AlgaeC系统生成检验报告。示例截图如下：

海洋水体主要由纯水、非藻类颗粒物、浮游植物和有色可溶性有机物组成。海洋浮游植物通过光合作用合成氧气，为大自然生态系统重要一环。研究海洋水体中浮游植物分布，对于水体研究、生态研究都有着重要科研价值。水体中悬浮颗粒物指悬浮于水中一切有机和无机颗粒物，悬浮物是水体重要组成，同时也是影响水体光学特性重要因子。悬浮物一般分为两部分：一部分是藻类颗粒物，主要是浮游植物及微生物，可以通过色素完成光合作用，因此藻类颗粒物吸收特性可以反映水体初级生产能力；另一部分是非藻类颗粒物，包含藻类颗粒物分解残体、无机颗粒物及碎屑。目前来测试水体吸收系数有2 种方法，定量滤膜技术和手持设备现场测试。定量滤膜技术利用分光光度计测量滤液及滤膜上颗粒物吸光度，来推算浮游植物及非浮游植物颗粒含量。该方法可以分别测量水中主要组分，如浮游植物、非浮游植物颗粒物的吸收系数，然后推算出其含量。定量滤膜技术手持现场测试设备，测试结果更加准确、可靠。

扫描电镜主要是利用二次电子信号成像来观察样品的表面形态，即用极狭窄的电子束去扫描样品，通过电子束与样品的相互作用产生各种效应，其中主要是样品的二次电子发射。扫描电子显微镜可以观察到样品表面的微观结构，从微观结构出发来分析一下浮游植物的表面情况。

iQue® 高通量流式细胞仪作为一种高通量、多参数、低成本的细胞定量分析工具，为进一步提升CAR-T细胞的构建效率以及治疗反应等提供解决方案。

自1993年流式细胞仪首次运用于活性污泥中微生物群落结构分析以来，该技术逐渐成为空气、土壤、水等环境中微生物学研究中的一项重要工具。Joachimsthal等[1]对新加坡港的压舱水进行了细菌总数、肠道菌数、弧菌数和大肠杆菌数的检测，可以为压舱水的污染状况提供大量信息。Yamaguchi等[2]使用FCM分别对未污染和污染河水中细菌的呼吸活性和酯酶活性进行了检测，结果发现，菌体酯酶活性对污染状况更敏感，有酯酶活性的细菌比例与河水污染程度呈正相关，可以此作为评估环境水污染的指标。浮游生物也是造成水质破坏的一大因素，它们常可引起“水花”。所幸，流式细胞仪也可用于浮游生物的检测。2012年，Quan Zhou等[3]利用流式细胞术对太湖湖底沉积物中的微胞藻属菌体计数，并对微胞藻聚集体进行了群落分析，表明流式细胞仪可以高效监测微胞藻属的群落变化，具有高度适用性。

流式细胞技术可以快速测量、存贮、显示悬浮在液体中的分散细胞的一系列重要生物物理、生物化学方面的特征参量，并可以根据预选的参量范围把指定的细胞亚群从中分选出来。目前普遍应用于免疫学、血液学、肿瘤学、细胞生物学、细胞遗传学、生物化学等临床医学和基础医学研究领域。近几年随着CAR-T细胞疗法的兴起，流式细胞技术作为其产业链中的上游，广泛用于T细胞分选、转染等步骤。流式细胞技术的前处理涉及到抗原或抗体的标记，孵育，清洗、混匀等步骤，由于检测过程中不可避免存在人为误差和抗体损耗等现象，为了降低人为错误导致的各类浪费，同时提高样本处理效率，引进样本前处理自动化系统是未来的一个发展趋势。

我司的专业技术人员利用甲醛提取藻类色素样品，应用HPLC方法，利用Agilent 1260系列HPLC以 ZORBAX Eclipse Plus C8色谱柱(1.8μ m，2.1× 100 mm) 二极管阵列检测器(1260 DAD WR , G7115A)对浮游植物（硅藻、甲藻、青绿藻、隐藻、蓝藻、金藻等）或近海表层沉积物中色素进行定性与定量分析。用反式-β -阿朴-8' -胡萝卜醛（trans-β -Apo-8' - carotenal (Apo) ）内标，16种色素标准外标定性定量。

Agilent NovoCyte 系列流式细胞仪是流式细胞分析领域中的创新突破，提供单激光到 5 激光 30 通道，涵盖低、中、高不同配置的需求，拥有出色的灵敏度、稳定性、分辨率、速度和灵活性。动态检测范围达 7.2 个数量级，可轻松识别 100 纳米至 50 微米范围内的颗粒。其具有一键开关机、样品间自动清洗等自动维护功能，且核心硬件采用业内顶尖的品牌，可确保仪器性能与结果的稳定性。并可搭配自动上样系统，兼容不同孔管类型，集成到不同的实验室自动化平台中，实现无人值守自动化采集。与高度简洁直观的 NovoExpress 软件配合使用，系统可实现全自动运行，在数据采集、分析和报告方面提供卓越的用户体验。另外，NovoExpress 软件具有合规的审计追踪功能，在帮助科研用户的同时，也能更好地服务于企业用户。

流式细胞术（flowcytometry，FCM）是一种综合应用光学、机械学、流体力学、电子计算机、细胞生物学、分子免疫学等学科技术，使被测溶液流经测量区域，并逐一检测其中每一个细胞的物理和化学特性，从而对高速流动的细胞或亚细胞进行快速定量测定和分析的方法。

细胞凋亡通常称为细胞程序性死亡，是由基因控制的主动性细胞死亡过程。越来越多数据发现，细胞凋亡与多种疾病密切相关，如癌细胞具有连续增殖、抵抗细胞凋亡能力，利用流式细胞仪分析细胞凋亡可为肿瘤诊断，疗效评价和预后预测提供了重要的参考指标。

流式细胞术作为当代最先进的细胞定量分析技术之一，其工作原理是在细胞分子水平上通过单克隆抗体对单个细胞或其他生物粒子进行多参数、快速的定量分析。它可以高速分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个参数。默克密理博旗下Guava微毛细管细胞分析平台系列，可在短时间内迅速完成上百个样本的检测；在精确完成细胞活力计数的同时，还可实现细胞凋亡检测、分期；抗体工程细胞株的高效筛选；单抗生物学活性如EC50、ED50指标测定等功能。在高通量检测的基础上，维护成本几乎为零，大大提高了企业的生产效率，降低了生产风险。为高端现代化企业研发、生产、质控提供了全套解决方案！

众所周知，流式细胞系统可以分析细胞，在出现了流式微球分析（Cytometric Bead Assay，CBA）技术后，可以定量分析细胞分泌物，如众多的细胞因子、外分泌蛋白甚至某些细胞次级代谢产物。但是，二者能否合而测之？答案是肯定的，我们今天的主角就是为了完成使命而生的——More in One（图 1）。

在新型冠状病毒肺炎（Novel coronavirus pneumonia, NCP）的各个诊疗方案中，我们仍然能够发现与流式细胞术相关的检测得到了不少认可与建议，那么，究竟流式细胞术在新型冠状病毒感染的诊断与治疗中，有哪些用途呢？这些基于流式的检测又是否对临床具有实际意义的帮助呢？我们从现有的已经官方发布的新型冠状病毒肺炎的诊疗方案中，寻到了建议进行流式相关检测的依据。即，对于新型冠状病毒感染，在有条件的情况下，建议进行淋巴细胞亚群和细胞因子的检测。

实验原理:主要根据细胞凋亡时在细胞、亚细胞和分子水平上所发生的特征性改变，包括细胞核的改变、细胞器的改变、细胞膜成分的改变和细胞形态的改变等进行检测。

T细胞受体(TCR)和免疫球蛋白一样，是由多个基因片段的基因重组产生的。这种重组产生了大量的T细胞，每一个都针对一种独特的多肽抗原 (peptide antigen)。T细胞对病毒、细菌、肿瘤细胞以及来自正常组织的多肽（在自身免疫性疾病中）有反应。每个多肽的特异性只在循环T细胞的一小部分中被发现，这使得抗原特异性反应的研究变得困难。MACSQuant® 流式细胞分析仪预富集后分析流程将目的稀有细胞以抗体磁珠标记，再对其他分析标记物进行不同多色荧光标记(Sample treatment)，直接上样流式细胞仪(Load sample)。先使用预富集模块功能，在内建的磁力柱上富集目的稀有细胞 (MACS enrichment)，随后进行细胞分析(Flow analysis)，不因过多操作流程而损失细胞，同时获得更多分析数据。

目前，流式细胞术以其高速、高灵敏度已经广泛应用于食品中各种病原性致病菌的快速检测，尤其是食品中的大肠杆菌的检测已经被FDA 列为食品安全的常规检测，其流式检测方法已收录于Current Protocol Cytometry.2001 May Chapter 11 中（Flow cytometric detection of pathogenic E. coli in food）。文章：流式细胞术在食源致病菌检测中应用的研究进展( 李萍，温平威等. 《食品工业科技》2013 年 第14 期)流式细胞仪检测食源致病菌的原理：流式细胞仪在检测食源致病菌时主要以全菌为对象，其一般检测过程如图1（B）所示，待测样品中的细菌一般要经过增菌或富集后再进行检测，增菌的过程一般通过液体培养基培养来实现，而富集可通过免疫磁富集法来实现。经过增菌或富集后的细菌与标记有荧光的抗体混合，充分反应后用流式细胞仪直接进行检测。若样品不需要增菌或富集，则可直接与标记有荧光的抗体反应后进行检测。检测过程中，样品中的细菌在鞘液的带动下，以单个细胞的方式依次通过激光检测口，检测到的光散射信号和荧光信号最后被转换成为数字信号并由计算机输出。

Aurora光谱流式细胞仪拥有5激光64个荧光通道的配置机型，可以轻松地实现更多颜色需求的流式分析，今天分享一个35色的免疫分型方案

生物检测技术的发展通常旨在提高检测的分辨率，或增加可以同时检测的生物特征数量。利用荧光素标记检测细胞特征的传统荧光流式是临床检测的常用技术，但由于荧光素数量限制，可同步检测的指标有限。流式质谱技术利用稳定的金属同位素标记抗体，可以在单细胞分辨率下同时检测超过40个生物学指标，显著增强了流式细胞术分析生理、病理过程中免疫系统的能力。本文在临床应用场景中比较了传统荧光流式和流式质谱两种技术手段对淋巴细胞的分群能力，旨在说明流式质谱技术具有优于荧光流式的技术特点，在未来能够广泛应用于临床样本检测。

采用锥虫蓝拒染法、四氮唑蓝比色法检测SAHA 对U266细胞增殖的影响。AllllexinV和PI染色后应用流式细胞仪检测SAHA 作用U266细胞的凋亡率，Hoechst33342染色法检测凋亡细胞的形态。Western-blot方法检测信号转导通路Ras/Raf/Mek/Erk相关蛋白的表达水平。

质谱流式技术利用稳定的金属同位素标记抗体，可以在单细胞分辨率下同时检测超过40个生物学指标，显著提高了对生物样本的分析维度。本文通过对比Starion星瀚?在不同时间产生的淋巴细胞分群结果，评估其在临床应用场景中的批次间稳定性，并与荧光流式细胞仪（贝克曼库尔特DxFLEX，苏械注准20182400262）的检测结果进行比较，旨在展示Starion星瀚?质谱流式系统的优异性能。

探讨左金丸水提物WEZP对人胃癌细胞SGC-7901 生长的活性抑制和凋亡诱导作用。Hochest染色细胞出现核固缩状和颗粒状荧光等典型的凋亡学特征。流式细胞仪PI单染亚二倍体峰分析各剂量WEZP作用。 结论是WEZP对SGC-7901生长有明显的抑制作用并可诱导SGC-7901的凋亡。

这些片段或染色体在分裂末期不能进入主核，在子细胞进入下一次分裂间期时，便浓缩成主核之外的小核，即微核。目前有辐射、化学诱变剂等较多理化因素可引起染色体断裂，且均可导致细胞分裂从而产生微核现象。