多功能血细胞分类计

目前血细胞分析仪检测原理包括电学和光学两种，电学包括电阻抗法和射频电导法，光法包括激光散射法和分光光度法。电阻抗法根据Coulter原理及血细胞非传导的性质，以电解质溶液中悬浮的血细胞在通过计数小孔时引起的电阻变化进行检测为基础，进行血细胞计数和体积测定。当有细胞通过小孔时，由于电阻增加，于瞬间引起电压变化及通过脉冲。细胞体积越大，脉冲振幅越高，细胞数量越多，脉冲数量也越多。脉冲信号经过：放大、阈值调节、甄别、整形、计数而得出细胞技术结果。电阻抗法可准确量出细胞（或类似颗粒）的大小，是三分类血液分析仪的主要应用原理，并与光学检测原理组合应用于五分类血液分析仪中。激光散射法应用了流式细胞术检测原理及细胞通过激光束被照射时，产生与细胞特征相应的各种角度的散射光。对经信号检测器接受的散射光信息进行综合分析，即可准确区分正常类型的细胞。激光散射法在区别体积相同而类型不同的细胞特征时，比电阻抗法分群更加准确。故激光散射法已成为现代五分类血液分析仪的主要检测原理之一。射频电导法是用高频电磁探针渗入细胞膜脂质可测定细胞的导电性，提供细胞内部化学成分、细胞核和细胞质、颗粒成分等特征信息。射频电流是每秒变化大于10000次的高频交流电磁波，能够通过细胞壁。分光光度法是所有类型的血细胞分析仪检测血红蛋白的原理，它利用血红蛋白与溶血剂在特定波长下比色，吸光度的变化与液体中血红蛋白含量成比例。

全自动血细胞分析仪——能依靠它们去计数吗？库尔特原理库尔特原理指出：悬浮在电解液中的颗粒随电解液通过小孔管时，在恒电流设计的电路中导致小孔管内外两电极间电阻发生瞬时变化，产生电位脉冲。脉冲信号的大小和次数与颗粒的大小和数目成正比。这主要是根据血细胞与稀释剂相比，血细胞是不良导体的特性而提出的。起初，原始的库尔特计数器只能计算和测量红细胞。后来，随着技术的不断发展和设备的不断改进，临床医生还可以利用它来计算和测量白细胞。到20世纪70年代，技术的进一步发展使技术人员能够分离血小板。全自动细胞计数器的演进传统意义上的血细胞计数器是通过研究外周血涂片，使用血细胞仪和白细胞分类计数而手动完成的（也称为100个细胞涂片分类，手动白细胞分类计数或手动计数器）。根据库尔特原理导致了库尔特计数器的发明，随后又开发出了技术先进的全自动血液细胞分析仪。自此，仪器的技术水平得到不断提高。由于技术的进步，一台仪器可以分析越来越多的参数，从而大大提高了血液检测的效率，减少在多台仪器上分析一个样品的情况。现代的细胞分析仪能够测量白细胞（WBC）、白细胞分类（五分类）、红细胞（RBC）、血红蛋白（HGB）、血小板（PLT）、平均红细胞体积（MCV）、平均血小板体积，并且可以自动计算血细胞比容（HCT）、平均红细胞血红蛋白（MCH）、平均红细胞血红蛋白浓度（MCHC）、红细胞分布宽度，血小板比积和血小板分布宽度。自动分析仪的其他重要因素包括它们运行的速度和每批次可以处理的样本数量（大处理容量可以减少周转时间）。即时检验（POCT）即时检验（[/

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许多关于细胞利用的一些生物学应用，如微生物学、细胞培养、血液检查等要求我们在实验中确定细胞的浓度。细胞计数非常简单，需要有一个计数板，称为血细胞计数板，或血细胞计数器。19世纪法国解剖学家Louis-Charles Malassez发明了这种血细胞计数板。血细胞计数板是由一片较厚的特制玻片构成，中间有一个垂直线网格。网格的尺寸是给定的，因此每条线覆盖的区域是已知的，这样就可以对一定体积内的溶液中的细胞数量进行计数，为后期的血细胞检测奠定基础。最为常见的血细胞计数板类型的中部有一个“H”形结构，上面有两个像镜子一样抛光的网格表面，并可在上面加上外罩。加载血细胞计数板开始进行计数之前，用擦镜纸拭去灰尘颗粒，确保血细胞计数板及其盖玻片处于洁净状态。安装在血细胞计数板上的盖玻片是特制的，明显厚于传统的显微镜盖玻片，这是因为它必须能够克服液滴的表面张力。确保在加载细胞悬液之前，先将盖玻片放置在计数表面，然后将吸液头和样本放进其中的一个V型孔中，并小心地挤出样本。利用毛细管作用充填盖玻片下部的区域。必须放入足够的液体以便覆盖整个镜片的表面，通常需要大约10ul，但不要溢出表面。您可以在一台血细胞计数板中加载两个样本，每个样本进入两个网格。将加载完的血细胞计数板放置在显微镜台上，然后将计数格在低倍镜焦距中显示。将样本静置几分钟，不要移动盖玻片，以免产生气泡导致计数困难。在血细胞计数板上进行血细胞计数一个血细胞计数板的整个网格包括9个方格，每个方格的面积为1mm2。血细胞计数板的中心区域有25个较大的方格，每个大的方格中又包含16个小方格。当进行计数时，仅对那些位于大方格两侧的各行中的细胞进行计数，以避免重复计数。悬液必须稀释到足够的程度，这样，细胞或其它颗粒才能均匀分布，不会再网格中相互重叠。为了判断细胞的活性，通常采用一种特殊的染色剂（如用台盼蓝稀释样本）。这种染色方法，又称为染色

TAG: ips 冈野荣之 干细胞 绒猴 http://img.antpedia.com/attachments/2010/12/27501_201012101146281.jpg　　据物理学家组织网12月8日报道，日本研究人员称，他们利用诱导多功能干细胞（iPS）使一只瘫痪小猴的运动能力恢复到接近正常水平，这只小猴因为脖子以下脊椎受伤而不能正常运动。　　日本东京庆应义塾大学冈野荣之教授称，这是世界上第一个在小型灵长类动物身上用干细胞修复脊椎损伤的例子。此前，他和研究小组曾用相似方法，帮一只小鼠恢复了运动能力。　　研究人员移植了四种基因到人体皮肤细胞，生成诱导多功能干细胞，然后再把诱导多功能干细胞注射到一只瘫痪的绒猴（美洲产小型长尾猴）体内。冈野荣之说，考虑到治疗最佳时机，研究人员在绒猴受伤后第九天进行了注射，这是最有效的时机。在随后的两到三周内，绒猴开始活动它的四肢。“6周以后，它恢复到了又能到处蹦跳的水平，这已经非常接近于正常水平。它用前肢抓住物体的力量也恢复到了80%。”　　但冈野荣之说，虽然用人类胚胎干细胞作为治疗癌症和其他疾病具有很大潜力，但要取得能发育成几乎所有组织的细胞，就要破坏人类胚胎，因此胚胎干细胞研究面临诸多争议，并受到宗教保守人士的反对。而日本研究人员的新研究为在人类身上使用类似医疗技术开拓了道路。

多功能血细胞计数器是由数字处理芯片、集成电路，以及显示屏、按键组成，与各种显微镜配合使用，由微电脑进行自动分类计数的数字化专用产品，能对骨多功能血细胞计数器髓细胞、外周血细胞、小巨核细胞进行全面的分类计数并自动计算出各项指标，能对细胞化学染色后的积分进行计算，并兼有常用的四则运算。 哺乳动物细胞现在能够执行电子计算机的功能：进行逻辑运算。来自瑞士的研究人员给细胞装配了一个复杂的基因网络使得它不仅仅能完成如1加1的简单任务。相关研究论文发表在6月3日的《自然》（Nature）杂志上。 这项研究由来自瑞士苏黎世联邦理工学院生物系统系生物技术与生物工程学教授Martin Fussenegger领导。在文章中，研究人员构建了一个能够执行逻辑运算的基因网络，并由此启动了特异的代谢步骤。“我们开发出了第一个真正的细胞计算器，”Fussenegger说。 利用生物成分，研究人员开发出了一套不同的元件可在不同的组合中相互连接，并随后执行逻辑运算。这些术语称之为“逻辑门”的电路元件利用了苹果分子根皮（phloretin）和抗生素红霉素作为输入信号。基于布尔逻辑（Boolean logic）进行计算。 通过组合和相互连接几个逻辑门，生物技术人员最终获得了“半加器”（ “half-adder）和“半减器”（ half-subtractor），这两种计算机技术中的中心电路元件。半加器是一种基本的数字电路可以合计二进制数；另一方面，半减器负责减去它们。这两种元件存在于每个数字计算器中，负责执行大部分的运算。在细胞结构试验中，两个生物计算机元件生成了实质的结果。 其他一些科学家已经在酵母和细菌中实现了不同的电路元件。在新系统中，所有都存在于单个细胞里，基于哺乳动物细胞的复杂性其轻易就超越了酵母和细菌。 相比于改变细菌或酵母细胞，研究人员因此更加接近治疗应用。对于Fussenegger教授而言，可以想象如果有必要，细胞计算器可在遥远的未来和步骤中用于监控患者的新陈代谢。可将这些智能细胞植入到糖尿病患者体内，例如通过开发一个电路识别疾病相关代谢产物，调控具治疗效应物质的释放，例如胰岛素。然而目前研究人员离这样的应用仍相距甚远。

目前血细胞分析仪在国内外医院都是进行血常规检查的必备仪器，它不但减轻了工作人员劳动强度，提高了实验结果的准确性，还提供了更多的相关实验指标，对疾病的诊断和鉴别诊断起了重要的作用。1检测系统 按照过去的老观念，添置设备就是买仪器，货比三家按性价比来选购仪器。但是传统的与当今理念显然存在差距，随着对检验管理的完善，政府对检验科开展的每个检验项目提出了更高的要求，卫生部关于印发《医疗机构临床实验室管理办法》的通知（卫医发〔2006〕73号）（下面简称《管理办法》）指出：“医疗机构临床实验室应当保证检测系统的完整性和有效性”。什么叫检测系统？《全国临床检验操作规程》3版明确指出：完成一个检验项目的检测所涉的仪器、试剂、校准品、质控品、消耗品、操作程序、维护保养程序等的组合，称为检测系统，若是人工操作，还必须包括操作人员。2检测系统重要性 检测系统的好坏将直接影响检测结果精密度、准确性和溯源性，但是如果每一个临床实验室对每一检验项目都做检测系统的评价是无法完成的，因此，国外厂商除了提供仪器以外，还将提供配套试剂、配套校准品，也规定了操作程序，形成了可靠的有溯源性的检测系统。上个世纪九十年代美国FDA、欧盟有关部门己经明确规定，在申报产品许可证时，不再是一台仪器的认可，而是要整个检测系统的申报与认可。用户按规定的检测系统（即封闭系统）去检测病人标本，质量是有保证的。现在我国有关部门也十分重视，有一定规模的国产血细胞分析仪厂家除了提供仪器以外，还可提供配套试剂、配套校准品和质控品，以及相应的检测系统评价报告，包括结果的溯源性。长期实践证明，只有形成固定的组合的检测系统才能保证检测结果的准确性和可靠性。选择单一的血细胞分析仪或是具有溯源性评价的检测系统，既是传统与当今理念的区别，笔者认为选择后者才能保证检测质量，保证结果的准确性。

我们公司明年准备进行全血质控的研发，我负责资料的收集！想问问大家一般全血质控物的生产一般都需要些什么仪器啊？生产过程中需要分离血细胞，出了离心机外还需要添购什么仪器呢？另外弱弱的请教个问题：有没有什么仪器能将不同体积大小的血细胞分别分离呢？例如我分离出红细胞，我想再分离出体积大小为某一范围的红细胞，有这样的仪器吗？这样可行吗？谢谢！谢谢大家！[em0706]

请问：我要测定血液粘度（切变率可调，1-200）、血细胞压积、红细胞刚性指数等，最好用哪种仪器，价位如何？

一、细胞因子的概念细胞因子(cytokine)是由机体多种细胞分泌的小分子蛋白质，通过结合细胞表面的相应受体发挥以调节免疫应答为主的生物学作用。细胞因子具有 非常广泛的生物学活性，包括促进靶细胞的增殖和分化，增强抗感染和细胞杀伤效应，促进或抑制其它细胞因子和膜表面分子的表达，促进炎症过程，影响细胞代谢 等。二、细胞因子的命名细胞因子按其来源可分为：由单个核吞噬细胞产生的细胞因子称为单核因子(monokine)；由淋巴细胞产生的细胞因子称为淋巴因子 (lymphokine)等。按其作用可分为干扰素、集落刺激因子、肿瘤坏死因子、生长因子和趋化因子等。部分由不同细胞分泌的细胞因子，其基因及编码蛋 白与结构清楚者，在免疫调节、造血和炎症中发挥重要作用，又称为白细胞介素(interleukin，IL)。也可以依据结构或者其受体结构分类，我们的 趋化因子目前没有受体产品。三、细胞因子的特征1、低分子量；一般为＜60kD的多肽或糖蛋白。多以单体形式存在，少数为二聚体，三聚体。2、天然细胞因子由抗原、丝裂原或其他刺激物活化的细胞所分泌，通过旁分泌(paracrine)、自分泌(autocrine)或内分泌(endocrine)方式在局部发挥短暂作用。3、一种细胞因子可由多种细胞产生，同一种细胞可产生多种细胞因子。4、需通过与靶细胞表面相应受体结合后发挥其生物学效应。5、具有高效性、多效性、叠性、拮抗性、协同性和网络性。四、细胞因子的分类1、白细胞介素(interleukin，IL-s)最初是指由白细胞产生又在白细胞间发挥作用的细胞因子。2、干扰素（interferon,IFN)最早发现的细胞因子，有干扰病毒感染和复制的能力。分α、β和g三种类型。3、肿瘤坏死因子超家族(tumor necrosis factor，TNF)1975年发现的一种能使肿瘤发生出血坏死的物质。4、集落刺激因子(colony-stimulating factor，CSF)指能够刺激多能造血干细胞和不同造血祖细胞增殖分化，在半固体培养基中形成相应细胞集落的细胞因子。包括G-CSF（粒细胞）、M-CSF（巨噬细胞）、 GM-CSF（粒细胞、巨噬细胞）、Multi-CSF（多重）（IL-3）、红细胞生成素(EPO)、干细胞生长因子(SCF)、血小板生成素 (TPO)等。5、趋化因子(chemokine)主要功能是招募血液中的单核细胞、中性粒细胞、淋巴细胞等进入特定的淋巴器官和组织以及感染发生的部位。根据趋化因子近N端半胱氨酸(Cys)的位置、排列方式和数量，可分为CC、CXC、C、CX3C四个亚家族。6生长因子(growth factor，GF)生长因子(GF)是具有刺激细胞生长作用的细胞因子。五、细胞因子的生物学活性1.介导自然免疫、参与抗肿瘤和抗感染2.调节T、B细胞活化、生长和分化，介导细胞免疫和体液免疫3.刺激造血生成、刺激骨髓祖细胞生长和分化为各种成熟血细胞4.在炎症、感染和内毒素血症中的作用5.在超敏反应和自身免疫病中的作用6.细胞因子通过激活其相应受体（CKR），导致细胞的增殖与分化或分泌某种蛋白质。六、四种蛋白表达体系比较表达细胞优点缺点原核E. coli繁殖快、成本低、产量高遗传背景及基因表达调控机制清楚易于大规模培养，成本低廉蛋白常为包涵体，纯化困难无糖基化（分泌蛋白，细胞膜上蛋白不可用），生物活性不定无翻译后修饰，内毒素含量高酵母Pichia使用简单，表达量高，His-tag便于纯化，一定的翻译后加工可进行糖基化修饰，操作简单，适合大规模生产可诱导表达，也可分泌表达，产物便于纯化有时会出现蛋白切割问题糖基化不能满足要求昆虫High-5产量高 ，翻译后加工与哺乳动物相似对于部分有毒性或较难表达蛋白有优势无内毒素污染蛋白活性不如哺乳动物适合表达激酶等定位于细胞内的真核蛋白哺乳CHO HEK293完善的翻译后加工，活性接近天然蛋白周期长、技术要求高表达产量低

http://www.people.com.cn/mediafile/pic/20110923/86/4594416073619723782.jpg乍一看它们就像是肉桂色糖果，但其实这是人体内数量最多的血细胞类型——红血球（RRCs）。这种双面凹陷的细胞承担着为我们的机体输送氧气的重任，一个健康的成年女性体内每立方毫米血液内含有大约400~500万个红血球，而在成年男性体内，这一数字为500~600万。

日本东京大学的研究人员宣布，他们开发出了用诱导多功能干细胞（iPS细胞）制造血小板的技术，并通过动物实验确认了制造出来的血小板具有止血功能。iPS细胞是具有较强分化潜力的干细胞，由皮肤细胞等体细胞经基因改造“诱导”发育而成。培养这类细胞不需要利用人类早期胚胎，而且可以无限增殖，因此新技术有望用于大量生产输血用的血小板。东京大学副教授江藤浩之率领的研究小组，在11月22日的美国《实验医学杂志》（Journal of Experimental Medicine）月刊上发表论文说，他们首先利用人体皮肤纤维组织母细胞和脐带血细胞制造出iPS细胞，然后加入几种血液细胞增殖因子和营养细胞，培养出能够制造血小板的巨核细胞，最终制造出血小板。研究人员将制造出的血小板输给小鼠，发现血小板集中到受伤的血管上，形成血栓，正常发挥了血小板的功能。研究人员使用了与癌症有关的cMyc基因，能够高效制造巨核细胞并生产血小板。由于血小板中不存在含有遗传信息的细胞核，而且混杂其中的其他细胞的细胞核可以通过照射放射线和过滤去除，所以临床应用时不会有癌变的危险。血小板是血液细胞之一，能够凝固血液，防止出血。手术时使用的血小板现在完全依赖献血。研究小组准备确认新技术的安全性之后，早日将其应用于手术。

中国科技网伦敦9月20日电 英国科学家在最近一期《临床调查杂志》上刊发论文称，他们利用新的检测技术证明，导致亨廷顿病的有害蛋白是逐渐在血液细胞中积累起来的。他们在论文中对这些有害细胞是如何损害人的大脑进行了详细阐述，而这一新发现不仅有助于监测亨廷顿病的进展情况，也有助于开发抑制有害蛋白的新药。 亨廷顿病是一种致命的遗传神经疾病。患者由于基因突变导致机体细胞错误地制造一种名为“变异亨廷顿蛋白”的有害物质，这些异常蛋白会损坏部分脑细胞，导致患者神经系统逐渐退化，致使身体出现不可控制的抽搐，并能发展成痴呆，最后导致死亡。 发表论文的研究小组由英国伦敦大学学院、伦敦国王学院以及诺华生物医学研究所的研究人员组成。他们使用一种新的超敏测试技术测量亨廷顿病患者发病不同阶段体内变异亨廷顿蛋白的水平。这种测试技术名为时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET），可对变异亨廷顿蛋白进行极为精确的测量。研究人员发现，在亨廷顿病患者表现出相关症状之前，其体内变异亨廷顿蛋白即开始逐渐积累，而正常的亨廷顿蛋白含量则在整个发病过程中保持不变。核磁共振扫描显示，亨廷顿病患者脑萎缩的速度明显高于常人。而令研究人员惊讶的是，变异亨廷顿蛋白在白血细胞中的数量与脑萎缩的速率极为一致。这一发现表明，未来或许可以利用血检来预测神经退行性疾病患者脑萎缩的速度。 “使用TR-FRET技术测量变异蛋白水平，是治疗亨廷顿病的一个十分有用的新手段，”研究小组的领导者，伦敦大学学院的萨拉·塔布利兹教授说，“如今获得患者的血液样本很方便，这使得我们能够准确地研究变异亨廷顿蛋白的毒性。而变异亨廷顿蛋白水平与脑萎缩间的关联，使我们对亨廷顿病患者大脑退化的过程有了更新的了解。” 塔布利兹教授指出，TR-FRET技术对于未来基因沉默药物的临床试验也十分有用。她表示，基因沉默药物可用来抑制大脑中有毒蛋白的产生，十分有前途，但也极有可能产生副作用，因此了解药物降低变异亨廷顿蛋白水平的过程十分重要。而TR-FRET技术则提供了这样的手段，这对于新药的开发十分有利。（记者刘海英） 《科技日报》（2012-09-22 二版）

超声波细胞破碎仪是利用超声波在液体中的分散效应,使液体产生空化的作用,从而使液体中的固体颗粒或细胞组织破碎。常规使用方法是把要破碎的材料放到烧杯中，开电源设定时间（震动时间和间歇时间），将破碎仪的探头放到材料中。使用过程中，超声波发生器电路将50/60Hz的市电转换成18-21KHz的高频高压电能，因此破碎过程中会大量产热，一般在冰浴下破碎。超声波细胞破碎仪的两大组成部件为超声波发生器和换能器（有的配置有隔音箱）。1、超声波发生器：工作原理：由信号发生器来产生一个特定频率的信号，这个特定频率就是换能器的频率，一般应用在超声波设备中的超声波频率为20KHz、25KHz、28KHz、33KHz、40KHz、60KHz。2、换能器组件：换能器组件主要由换能器和变幅杆组成。3、隔音箱：可以有效地的降低工作过程中的所发出的噪音，保持实验室安静。超声波细胞破碎仪在我国的行业推广已进入成熟阶段，而应用仍不够普及!该仪器(设备)应用范围非常广泛，这是其它仪器设备所不能比拟的。也正因如此，该仪器(设备)的市场潜力很大，所以生产厂家也日趋增多，这也同时造成了超声清洗行业及市场的相对混乱，可以用八个字来形容“鱼龙混杂，良莠不齐”!超声波细胞破碎仪分类如下：一、按探头（“tip”）直径分类处理不用体积的样品需要选择不同“tip”头的超声波破碎仪。由于各制造厂家的产品结构不同，其“tip”头直径不尽相同。一般“tip”头从微量5mm(适合1ml处理量)到25mm(适合1000ml处理量)，有连续流探头，处理量可达80升/小时。可能会发生磨损的高能应用中会用到可更换“tip”头。当能量通过“tip”头被传递时，金属表面留下痕迹的地方会发生腐蚀。随着时间的推移，发生腐蚀的地方会产生轻微的蚀损斑。“tip”头可以用砂纸或纱布来打磨，除非是损坏到一定的程度；当这种情况发生时，“tip”头将很难进行调谐频率，取而代之的可能是发出长而尖的噪音，最终产生裂纹。 要有效地加工给定剂量的样品，有两个主要的因素需要考虑：“tip”头尺寸和输出功率。这两个因素必须同时匹配才能获得最佳效果。小功率大“tip”头，则“tip”头无法工作；而太大的功率则“tip”头可能损坏。购买时请注意所需型号附件。二、按功率分类超声波细胞破碎仪的功率大小是客户的首选指标，它决定着被破碎物的数量、大小、质量及效果。所以各生产厂家对此指标也都非常重视。一般情况下，实验室、化验室、研究所、药品检验所等科研单位，使用的功率都不大，（一般在500W以下）；而生物公司、制药厂、化工企业等生产单位，所用的功率大都在500W-2000W左右。由于各制造厂家的产品结构不同，其功率的标注方法也不尽相同。不过按照用户常用的惯例，一般有以下几种：50W、100W、150W、250W、300W、350W、500W、1000W、2000W。一般超声波细胞破碎仪输出功率可根据需要适度调节。 标准超声波细胞粉碎机产品的额定工作频率是20千赫兹。一些超声波细胞粉碎机有自动调谐功能可以使频率在一个小的范围内变化。

大神们，帮忙推荐台主要针对小鼠骨髓细胞数检测的仪器，再一个就是能对小鼠血细胞的种类分类，计数。要求不高。。但是这种针对性的仪器还这难找。。

十三.流式细胞术在血液学中的应用 淋巴瘤免疫分型 目前淋巴瘤的分类方法已从LSG的形态学分类逐渐转变为REAL分类法, REAL分类法是以肿瘤发生源为基础的分类方法,在原来的形态学基础上加上免疫学分型后再加以分类,这种分类方法不仅能够推断肿瘤的发生源,对治疗也有指导意义。因此淋巴瘤的免疫分型越来越重要。如同白血病免疫分型一样，淋巴瘤的免疫分型也是利用单克隆抗体检测淋巴瘤细胞的细胞膜和细胞浆抗原,分析其表现型,以了解被测淋巴瘤细胞所属细胞系列及其分化程度。流式细胞仪能对多数的淋巴瘤细胞的细胞膜和细胞浆抗原迅速客观地做出检测，在淋巴瘤的免疫分型中起着不可替代的作用。临床淋巴瘤的免疫分型的检测标本一般是淋巴结、脾脏、胸水、腹水等。在临床淋巴瘤的免疫分型工作中常可遇到以下四种情况：①B细胞系淋巴瘤②T/NK细胞系淋巴瘤③淋巴细胞系以外的造血细胞肿瘤④造血细胞以外的肿瘤。REAL分类淋巴瘤的免疫表型见表12.8。*：弱表达或阴性。BLBL :前B原始淋巴细胞淋巴瘤/白血病; BSLL: B-小淋巴细胞淋巴瘤; LPL:淋巴浆细胞样淋巴瘤; MCL: 斗篷细胞淋巴瘤; FCL:滤泡中心淋巴瘤; MZL: 边缘带B细胞淋巴瘤; SMZL :脾MZL ;HCL:毛细胞白血病; PC:浆细胞瘤;DLBL: B-弥漫性大细胞淋巴瘤; BL: Burkitts淋巴瘤; HBLB:高度B细胞淋巴瘤, Burkitts样; TLB L: 前T原始淋巴细胞淋巴瘤/白血病; TPLL: T幼淋细胞白血病; LGLT:大颗粒淋巴细胞白血病, T细胞型[col

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4.1 流式细胞仪基本原理1. 生物学颗粒分析原理① 流式细胞技术是在单细胞水平上，对于处在快速直线流动状态中的大量细胞或生物颗粒进行多参数、快速的定量分析和分选的技术，现已成为现代医学研究最先进的分析技术之一。应用流式细胞仪对于处在快速直线流动状态中的细胞或生物颗粒进行快速的、多参数的定量分析和分选的技术称为流式细胞术。② 生物学颗粒包括大的免疫复合物、DNA、RNA、蛋白质、病毒颗粒、脂质体、细胞器、细菌、霉菌、染色体、真核细胞、杂交细胞、聚集细胞等，所检测的生物颗粒的理化性质包括细胞大小、细胞形态、胞浆颗粒化程度、DNA含量、总蛋白质含量、细胞膜完整性和酶活性等。③ 流式细胞仪是以激光为光源，集流体力学技术、电子物理技术、光电测量技术、计算机技术以及细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术为一体的新型高科技仪器。 ④ 流式细胞仪是在荧光显微镜技术、血细胞计数仪和喷墨技术的基础上发展起来的。⑤ 鞘液和样品流在喷嘴附近组成一个圆柱流束，与水平方向的激光束垂直相交，染色的细胞受激光照射后发出荧光，这些信号分别被光电倍增管荧光检测器和光电二极管散射光检测器接收，经过计算机储存、计算、分析这些数字化信息，就可得到细胞的大小、活性、核酸含量、酶和抗原的性质等物理和生化指标。2. 流式细胞仪细胞分选原理在压电晶体上加上频率为30kHz的信号，使液柱断裂成一连串均匀的液滴。当某类细胞的特性与要分选的细胞相同时，流式细胞仪就会在这类细胞形成液滴时给含有这类细胞的液滴充以特定的电荷，带有电荷的液滴向下落入偏转板间的静电场时，依所带电荷的符号分别向左偏转或向右偏转，落入指定的收集器内，从而达到细胞分类收集的目的。4.2 流式细胞仪的分类和基本结构1. 流式细胞仪的分类流式细胞仪根据功能不同可分为临床型(亦称台式机)和科研型（亦称大型机）。流式细胞仪根据其结构不同又可分为一般流式细胞仪和狭缝扫描流式细胞仪。http://www.care100.com/yqxjpkc/images/112.gif

[font=宋体]细胞因子一般是通过与细胞表面相应的细胞因子受体结合而发挥生物学作用。细胞因子与其受体结合后，会启动复杂的细胞内分子相互作用，最终引起细胞基因转录的变化。[/font][font=宋体]已知的细胞因子受体绝大多数是[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/transmembrane-proteins][b]跨膜蛋白[/b][/url]，由胞外、跨膜和胞质区组成。胞外膜区是识别结合细胞因子的部位，胞质区在受体激活后启动信号转导。下面为大家介绍下细胞因子及其受体的分类有哪些？[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]一、细胞因子的分类[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]([/font][font=宋体]一[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]根据细胞种类不同分类[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]）淋巴因子[/font][font=Calibri](lymphokine) [/font][font=宋体]主要由淋巴细胞产生，包括[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]淋巴细胞、[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]淋巴细胞和[/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞等。重要的淋巴因子有[/font][font=Calibri]IL-2[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IL-3[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IL-4[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IL-5[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IL-6[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IL-9[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IL-10[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IL-12[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IL-13[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IL-14[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IFN-[/font][font=宋体]γ、[/font][font=Calibri]TNF-[/font][font=宋体]β、[/font][font=Calibri]GM-CSF[/font][font=宋体]和神经白细胞素等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]）单核因子[/font][font=Calibri](monokine) [/font][font=宋体]主要由单核细胞或巨噬细胞产生，如[/font][font=Calibri]IL-1[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IL-6[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IL-8[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]TNF-[/font][font=宋体]α、[/font][font=Calibri]G-CSF[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]M-CSF[/font][font=宋体]等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]）非淋巴细胞、非单核[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]巨噬细胞产生的细胞因子 主要由骨髓和胸腺中的基质细胞、血管内皮细胞、成纤维细胞等细胞产生，如[/font][font=Calibri]EPO[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IL-7[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IL-11[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]SCF[/font][font=宋体]、内皮细胞源性[/font][font=Calibri]IL-8[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]IFN-[/font][font=宋体]β等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]([/font][font=宋体]二[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]根据主要功能的不同分类[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]）白细胞介素[/font][font=Calibri](interleukin, IL) 1979[/font][font=宋体]年开始命名。由淋巴细胞、单核细胞或其它非单个核细胞产生的细胞因子，在细胞间相互作用、免疫调节、造血以及炎症过程中起重要调节作用，凡命名的白细胞介素的[/font][font=Calibri]cDNA[/font][font=宋体]基因克隆和表达均已成功，已报道有三十余种[/font][font=Calibri](IL-1[/font][font=宋体]―[/font][font=Calibri]IL-38)[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]）集落刺激因子[/font][font=Calibri](colony stimulating factor, CSF) [/font][font=宋体]根据不同细胞因子刺激造血干细胞或分化不同阶段的造血细胞在半固体培养基中形成不同的细胞集落，分别命名为[/font][font=Calibri]G([/font][font=宋体]粒细胞[/font][font=Calibri])-CSF[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]M([/font][font=宋体]巨噬细胞[/font][font=Calibri])-CSF[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]GM([/font][font=宋体]粒细胞、巨噬细胞[/font][font=Calibri])-CSF[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Multi([/font][font=宋体]多重[/font][font=Calibri])-CSF(IL-3)[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]SCF[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]EPO[/font][font=宋体]等。不同[/font][font=Calibri]CSF[/font][font=宋体]不仅可刺激不同发育阶段的造血干细胞和祖细胞增殖的分化，还可促进成熟细胞的功能。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]）干扰素[/font][font=Calibri](interferon, IFN) 1957[/font][font=宋体]年发现的细胞因子，最初发现某一种病毒感染的细胞能产生一种物质可干扰另一种病毒的感染和复制，因此而得名。根据干扰素产生的来源和结构不同，可分为[/font][font=Calibri]IFN-[/font][font=宋体]α、[/font][font=Calibri]IFN-[/font][font=宋体]β和[/font][font=Calibri]IFN-[/font][font=宋体]γ，他们分别由白细胞、成纤维细胞和活化[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞所产生。各种不同的[/font][font=Calibri]IFN[/font][font=宋体]生物学活性基本相同，具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节等作用。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]）肿瘤坏死因子[/font][font=Calibri](tumor necrosis factor, TNF) [/font][font=宋体]最初发现这种物质能造成肿瘤组织坏死而得名。根据其产生来源和结构不同，可分为[/font][font=Calibri]TNF-[/font][font=宋体]α和[/font][font=Calibri]TNF-[/font][font=宋体]β两类，前者由单核[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]巨噬细胞产生，后者由活化[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞产生，又名淋巴毒素[/font][font=Calibri](lymphotoxin, LT)[/font][font=宋体]。两类[/font][font=Calibri]TNF[/font][font=宋体]基本的生物学活性相似，除具有杀伤肿瘤细胞外，还有免疫调节、参与发热和炎症的发生。大剂量[/font][font=Calibri]TNF-[/font][font=宋体]α可引起恶[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]，因而[/font][font=Calibri]TNF-[/font][font=宋体]α又称恶[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]素[/font][font=Calibri](cachectin)[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]5[/font][font=宋体]）转化生长因子[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]β家族[/font][font=Calibri](transforming growth factor-[/font][font=宋体]β [/font][font=Calibri]family, TGF-[/font][font=宋体]β [/font][font=Calibri]family) [/font][font=宋体]由多种细胞产生，主要包括[/font][font=Calibri]TGF-[/font][font=宋体]β[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]TGF-[/font][font=宋体]β[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]TGF-[/font][font=宋体]β[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]TGF[/font][font=宋体]β[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]β[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]以及骨形成蛋白[/font][font=Calibri](BMP)[/font][font=宋体]等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]6[/font][font=宋体]）生长因子[/font][font=Calibri](growth factor,GF)[/font][font=宋体]如表皮生长因子[/font][font=Calibri](EGF)[/font][font=宋体]、血小板衍生的生长因子[/font][font=Calibri](PDGF)[/font][font=宋体]、成纤维细胞生长因子[/font][font=Calibri](FGF)[/font][font=宋体]、肝细胞生长因子[/font][font=Calibri](HGF)[/font][font=宋体]、胰岛素样生长因子[/font][font=Calibri]-I(IGF-1)[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IGF-[/font][font=宋体]Ⅱ、白血病抑制因子[/font][font=Calibri](LIF)[/font][font=宋体]、神经生长因子[/font][font=Calibri](NGF)[/font][font=宋体]、抑瘤素[/font][font=Calibri]M(OSM)[/font][font=宋体]、血小板衍生的内皮细胞生长因子[/font][font=Calibri](PDECGF)[/font][font=宋体]、转化生长因子[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]α[/font][font=Calibri](TGF-[/font][font=宋体]α[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]、血管内皮细胞生长因子[/font][font=Calibri](VEGF)[/font][font=宋体]等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]7[/font][font=宋体]）趋化因子家族[/font][font=Calibri](chemokinefamily) [/font][font=宋体]包括四个亚族[/font][font=Calibri]:(1)C-X-C/[/font][font=宋体]α亚族，主要趋化中性粒细胞，主要的成员有[/font][font=Calibri]IL-8[/font][font=宋体]、黑素瘤细胞生长刺激活性[/font][font=Calibri](GRO/MGSA)[/font][font=宋体]、血小板因子[/font][font=Calibri]-4(PF-4)[/font][font=宋体]、血小板碱性蛋白、蛋白水解来源的产物[/font][font=Calibri]CTAP-[/font][font=宋体]Ⅲ和β[/font][font=Calibri]-thromboglobulin[/font][font=宋体]、炎症蛋白[/font][font=Calibri]10(IP-10)[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]ENA-78 (2)C-C/[/font][font=宋体]β亚族，主要趋化单核细胞，这个亚族的成员包括巨噬细胞炎症蛋白[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]α[/font][font=Calibri](MIP-1[/font][font=宋体]α[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]MIP-1[/font][font=宋体]β、[/font][font=Calibri]RANTES[/font][font=宋体]、单核细胞趋化蛋白[/font][font=Calibri]-1(MCP-1/MCAF)[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]MCP-2[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]MCP-3[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]I-309[/font][font=宋体]。[/font][font=Calibri](3)C[/font][font=宋体]型亚家族的代表有淋巴细胞趋化蛋白。[/font][font=Calibri](4)CX3C[/font][font=宋体]亚家族，[/font][font=Calibri]Fractalkine[/font][font=宋体]是[/font][font=Calibri]CX3C[/font][font=宋体]型趋化因子，对单核[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]巨噬细胞、[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞及[/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞有趋化作用。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]细胞因子检测是判断机体免疫功能的一个重要指标！已被广泛用于疾病的诊断、病程观察、疗效判断及细胞因子治疗监测等。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体] [/font][/b][font=宋体]二、[/font][b][font=宋体]细胞因子受体分类[/font][font=宋体] [/font][/b][font=宋体][font=宋体]根据细胞因子受体的结构，可分为不同的家族或超家族，包括免疫球蛋白（[/font][font=Calibri]Ig[/font][font=宋体]）超家族、[/font][font=Calibri]I[/font][font=宋体]型细胞因子受体、[/font][font=Calibri]II[/font][font=宋体]型细胞因子受体、肿瘤坏死因子受体[/font][font=Calibri](TNFR)[/font][font=宋体]超家族和趋化因子受体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]①免疫球蛋白（[/font][font=Calibri]Ig[/font][font=宋体]）超家族[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫球蛋白超家族（[/font][font=Calibri]IgSF[/font][font=宋体]）是指分子结构中具有与免疫球蛋白相似域的分子超家族。[/font][font=Calibri]IgSF[/font][font=宋体]的所有成员都含有[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]～[/font][font=Calibri]7[/font][font=宋体]个[/font][font=Calibri]Ig[/font][font=宋体]样结构域，每个[/font][font=Calibri]Ig[/font][font=宋体]样结构域含有约[/font][font=Calibri]70[/font][font=宋体]～[/font][font=Calibri]110[/font][font=宋体]个氨基酸残基。它的二级结构是由两条反平行β[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]折叠状链形成的反平行β[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]片状平面，每条反平行β[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]片状链含有[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]～[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]个反平行β[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]折叠。每条反平行β片链由[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]～[/font][font=Calibri]10[/font][font=宋体]个氨基酸残基组成。β片内侧的疏水氨基酸可稳定[/font][font=Calibri]Ig[/font][font=宋体]的折叠。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]大多数[/font][font=Calibri]Ig[/font][font=宋体]域有一个二硫键垂直连接两个β片，构成二硫键的两个半胱氨酸约含[/font][font=Calibri]55[/font][font=宋体]～[/font][font=Calibri]75[/font][font=宋体]个氨基酸。少数[/font][font=Calibri]Ig[/font][font=宋体]域，如[/font][font=Calibri]CD2[/font][font=宋体]的第一域、[/font][font=Calibri]LFA-3[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]PDGFR[/font][font=宋体]的第四域、[/font][font=Calibri]CD4[/font][font=宋体]的第三域等，均缺乏二硫键。这种多肽链的球形结构的折叠称为免疫球蛋白折叠（[/font][font=Calibri]Ig fold[/font][font=宋体]）。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]②[/font][font=Calibri]I[/font][font=宋体]型细胞因子受体[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]I[/font][font=宋体]型细胞因子受体又称造血素受体，是表达在细胞表面的跨膜受体，能识别细胞因子并对其作出反应，具有[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]条α[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]螺旋链。这些受体具有某些保守的胞外域，缺乏内在的蛋白酪氨酸激酶活性。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]保守的胞外域有大约[/font][font=Calibri]200[/font][font=宋体]个氨基酸的长度，其中在氨基末端区域含有四个位置保守的半胱氨酸残基和一个位于跨膜域近端的保守氨基酸基团（[/font][font=Calibri]WSXWS[/font][font=宋体]）。这四个半胱氨酸是维持受体结构和功能完整性的关键。[/font][font=Calibri]WSXWS[/font][font=宋体]共识序列是细胞因子受体功能性蛋白与蛋白相互作用的识别位点。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]③[/font][font=Calibri]II[/font][font=宋体]型细胞因子受体[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]II[/font][font=宋体]型细胞因子受体又称[/font][font=Calibri]IFN[/font][font=宋体]受体，是表达在某些细胞表面的跨膜蛋白，它与一组选定的细胞因子结合并作出反应。通常Ⅱ型细胞因子受体是具有高亲和力和低亲和力成分的异二聚体或多聚体。这些受体一般由两条肽链组成，胞外区由[/font][font=Calibri]200[/font][font=宋体]个氨基酸残基组成，并含有[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]个不连续的半胱氨酸。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]④[/font][font=Calibri]TNFR[/font][font=宋体]超级家族[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]肿瘤坏死因子受体（[/font][font=Calibri]TNFR[/font][font=宋体]）超家族成员是细胞因子受体的一个蛋白质超家族，共享一个半胱氨酸丰富域（[/font][font=Calibri]CRD[/font][font=宋体]），由三个二硫键围绕[/font][font=Calibri]CXXCXXC[/font][font=宋体]的核心基团形成一个拉长的分子。目前[/font][font=Calibri]TNFR[/font][font=宋体]家族有[/font][font=Calibri]12[/font][font=宋体]个成员，包括[/font][font=Calibri]55kDa[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]75kDa[/font][font=宋体]的[/font][font=Calibri]TNFR[/font][font=宋体]，低亲和力的[/font][font=Calibri]NGFR[/font][font=宋体]，人[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞抗原（[/font][font=Calibri]CD40[/font][font=宋体]）和[/font][font=Calibri]Fas[/font][font=宋体]抗原。该家族的共同特点是其胞外区有[/font][font=Calibri]Cys[/font][font=宋体]（[/font][font=Calibri]4-6[/font][font=宋体]）丰富的假重复基团，每个基团含有[/font][font=Calibri]40[/font][font=宋体]个氨基酸残基。细胞内域较短，由[/font][font=Calibri]44[/font][font=宋体]～[/font][font=Calibri]221[/font][font=宋体]个氨基酸残基组成，无同源序列。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]⑤趋化因子受体[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]趋化因子受体是在某些细胞表面发现并与趋化因子相互作用的细胞因子受体。人类已发现[/font][font=Calibri]20[/font][font=宋体]种不同趋化因子受体，为[/font][font=Calibri]7[/font][font=宋体]次跨膜的[/font][font=Calibri]G[/font][font=宋体]蛋白偶联受体，并在细胞内与[/font][font=Calibri]G[/font][font=宋体]蛋白偶联进行信号转导，是[/font][font=Calibri]G[/font][font=宋体]蛋白偶联受体家族成员之一。趋化因子受体与相应的配体结合后，引发细胞内钙（[/font][font=Calibri]Ca2+[/font][font=宋体]）离子通量（钙信号传导）。既而引起细胞反应，包括趋化作用过程开始，将细胞运送到生物体内的理想位置。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多细胞因子详情可以查看义翘神州[url=https://cn.sinobiological.com/category/cytokine-protein][b]细胞因子蛋白[/b][/url]：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/category/cytokine-protein[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b][font=宋体] [/font]

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用体外方法对机体各种具有免疫反应的细胞分别作鉴定、计数和功能测定，是观察机体免疫状态的一种重要手段。为此，须将各种参与免疫反应的细胞从血液或脏器中分离出来。参与免疫反应的细胞主要包括淋巴细胞、巨噬细胞、中性粒细胞等。由于检测的目的和方法有同，分离细胞的需求和技术也异。有的仅需分离白细胞，有的则需分离单个核细胞（mononuclearcell），其中含淋巴细胞和单核细胞（monocyte），有的则需分离T细胞和B细胞以及其亚群。分离细胞选用的方法应力求简便可行，并能获得高纯度、高获得率、高活力的细胞。现用分离细胞群的原则，一是根据各类细胞的大小、沉降率、粘附和吞噬能力加以组分，另一则按照各类细胞的表面标志，包括细胞表面的抗原和受体加以选择性分离。 一、白细胞的分离 （一）血液中红细胞与白细胞比例约600～1000:1，两者的比重不同其沉降速度亦异，通常用两种方法加以分离。 本法是利用血细胞自然沉降率的分离法，采集血液后应及时抗凝，通常选用肝素抗凝法。肝素能阻止凝血酶原转化为凝血酶，从而抑制纤维蛋白原形成纤维蛋白而防止血液凝固。操作原则是将含抗凝血的试管直立静置室温30～60min后，血液分成明显三层，上层为淡黄色血浆，底层为红细胞，紧贴红细胞层上面的灰白层为白细胞，轻轻吸取即得富含白细胞的细胞群，离心洗涤后加入少量蒸馏水或含氯化铵的Gey溶液，经短时间的低渗处理，使红细胞裂解，经过反复洗涤可得纯度较高的白细胞悬液。 （二）聚合物加速沉淀法 本法是利用高分子量的聚合物如明胶、右旋糖酐、聚乙烯吡喀烷酮（polyvinylpyrolidone，PVP）等使红细胞凝集成串，加速红细胞沉降，使之与白细胞分离。本法的细胞获得率比自然沉降法高。

最近研究所买了活细胞工作站，但功能似乎开发的不到位，求助那位战友可以相互讨论讨论在使用活细胞工作站拍摄时遇到的问题

常见的真核细胞翻译的起动因子的功能 各种版本的教材和专著上写的常见的真核细胞翻译的起动因子的功能太乱了，我根据Michael B.Mathews, Nahum Soneberg,John W.B.Hershey,Translational Control onBiology and Medicine,Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2007, 整理了出来。1．eIF1：起始密码子的识别：（1）使不正确的密码子与反密码子配对解离并且correct parings in poor sequence contexts in P site，（2）介导40S亚基对于正确的AUG密码的辨识的相关反应。参与确保起始密码子选择的忠实性（与原核的IF3相似）。2．eIF1A：与原核生物的IF1功能相似，eIF1A可以占领真核细胞的核糖体A位（40S亚基），并使得40S亚基的一些结构域的相对位置发生变化。此外，eIF1A与eIF1还能够增强eIF3将80S核糖体解离为40S和60S亚基的活性。3．eIF2：携带（Met-tRNAi Met）与40S亚基结合，形成三元复合体（40S complex），eIF2有GTPase活性。eIF2结合上的GTP水解为GDP+Pi的反应由eIF5介导，结合上eIF2的GDP与GTP交换反应由eIF2B介导。4．eIF2B：结合在eIF2的GDP更换为GTP的反应由eIF2B催化，否则eIF2B上的GDP掉下来换上GTP的过程非常缓慢。5．eIF3：有依赖性RNA的（RNA independent）解离80S核糖体为40S和60S亚基的活性，此活性可被eIF1A加强，部分地被eIF1增强。eIF3能够结合到60S亚基的内表面的平台部位（platform），并且锁住40S亚基到达18Sr RNA元件（18r RNA属于40S亚基的通道），18Sr RNA元件位于40S亚基与60S亚基的内部接触面（inter subunit），并且象一座桥一样连接40S亚基中的B2b和B2d。eIF3的另外功能：促进mRNA的结合与核糖体40S亚基的结合。6．eIF4F：eIF4A，Eif4E和eIF4G各一个分子组成一个完整的eIF4F分子。7．eIF4A：RNA helicase，使mRNA去除二级结构，其本身是较低的非持续性的螺旋酶（nonprocessive helicase），其酶活性能够被eIF4B所活化。也可以认为eIF4B是eIF4A的cofactor，eIF4B可能是增加了eIF4A与mRNA的亲合性而增加了eIF4A的RNA螺旋酶活性。8．eIF4B：与eIF4A共同行使RNA螺旋酶活性，去除mRNA的二级结构。9．eIF4E：真核mRNA的5'-帽子的结合蛋白。10．eIF4G：连结eIF4E与PAB。11．eIF5：与eIF2结合时会增强eIF2的GTPase活性，eIF5也是核糖体依赖性的GTPase。eIF5的GAP功能对40S亚基与60S亚基的结合是一个必需的先决条件（prerequisite），至少在细胞内是如此，因为敲除了酵母细胞eIF5基因会削弱翻译起并且引起48S前起始复合物（PTCs）的堆积。12．eIF5B：有GTPase活性，eIF5B结合上GTP但未水解时，会占领核糖体40S亚基的A位。eIF5B的功能与原核的eIF2近似，eIF5B有很弱的结合Met-tRNAi Met活性。13．eIF6：亚单位解聚，结合于60S亚单位。参考：Michael B.Mathews, Nahum Soneberg,John W.B.Hershey,Translational Control onBiology and Medicine,Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2007, P113, P91-P94, P100-P101, P103, P110-P111, P116, P104-105, P114, P250-P251, P253-254,P319。

用途： 流式细胞仪是对细胞进行自动分析和分选的装置。它可以快速测量、存贮、显示悬浮在液体中的分散细胞的一系列重要的生物物理、生物化学方面的特征参量，并可以根据预选的参量范围把指定的细胞亚群从中分选出来。多数流式细胞计是一种零分辨率的仪器，它只能测量一个细胞的诸如总核酸量，总蛋白量等指标，而不能鉴别和测出某一特定部位的核酸或蛋白的多少。也就是说，它的细节 分辨率为零。 流式细胞仪主要由四部分组成。它们是：流动室和液流系统；激光源和光学系统；光电管和检测系统；计算机和分析系统 参数测量原理荧光信号主要包括两部分：①自发荧光，即不经荧光染色细胞内部的荧光分子经光照射后所发出的荧光；②特征荧光，即由细胞经染色结合上的荧光染料受光照而发出的荧光，其荧光强度较弱，波长也与照射激光不同。自发荧光信号为噪声信号，在多数情况下会干扰对特异荧光信号的分辨和测量。在免疫细胞化学等测量中，对于结合水平不高的荧光抗体来说，如何提高信噪比是个关键。一般说来，细胞成分中能够产生的自发荧光的分子（例核黄素、细胞色素等）的含量越高，自发荧光越强；培养细胞中死细胞/活细胞比例越高，自发荧光越强；细胞样品中所含亮细胞的比例越高，自发荧光越强。　　减少自发荧光干扰、提高信噪比的主要措施是：①尽量选用较亮的荧光染料；②选用适宜的激光和滤片光学系统；③采用电子补偿电路，将自发荧光的本底贡献予以补偿。仪器的操作和使用　　①打开电源，对系统进行预热；　　②打开气体阈，调节　压力，获得适宜的液流速度；开启光源冷却系统；　　③在样品管中加入去离子水，冲洗液流的喷嘴系统；　　④利用校准标准样品，调整仪器，使在激光功率、光电倍增管电压、放大器电路增益调定的基础上，0和90散射的荧光强度最强，并要求变异系数为最小；　　⑤选定流速、测量细胞数、测量参数等，在同样的工作条件下测量样品和对照样品；同时选择计算机屏上数据的显示方式，从而能直观掌握测量进程；　　⑥样品测量完毕后，再用去离子水冲洗液流系统；　　⑦因为实验数据已存入计算机硬盘（有的机器还备有光盘系统，存贮量更大），因此可关闭气体、测量装置，而单独使用计算机进行数据处理；　　⑧将所需结果打印出来。热销细胞网是采用Accuri 型2号流式细胞仪，指示符®软件和工作站电脑供应在对市场价格领先的系统的一小部分的功能齐全的流式细胞仪的所有功能。在C6系统包括蓝色和红色激光，四色探测器和正向和侧向散射检测器加上软件，非常直观，你通常将和内收到您的Accuri小时运行的系统。

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1. 利用诱导性多功能干细胞构建出小鼠精子祖细胞日本京都大学研究人员通过体外诱导胚胎干细胞(ESCs)和诱导性多功能干细胞(iPSCs)，形成原始生殖细胞样细胞(primordial germ cell-like cells, PGCLCs)，最后进一步分化，通过体内植入不能生育的小鼠睾丸中，产生了外观正常的精子。将这些精子注射到雌性小鼠的卵细胞中，不久雌性小鼠生出了健康的小鼠后代。2. 鉴定出阿尔茨海默病Alzheimer's disease的生物标记美国研究人员利用一种一般性和无偏差的方法---组合文库筛选(Combinatorial Library Screening)来鉴定出诊断上有用的抗体，而避免进行抗原鉴定。该方法涉及利用非自然的合成分子组合文库对病人血清样品和对照样品进行比较性筛选，这样就可鉴定出病人血清样品中要比和对照样品中保留极其多IgG抗体的分子，随后利用这些分子作为捕获试剂来捕获诊断上有用的抗体。研究人员利用多发性硬化症(multiple sclerosis)小鼠模式动物和证实这种方法的实用性，并利用该方法在阿尔茨海默病小鼠模式动物中鉴定出两种候选的IgG抗体生物标记。3. 发现干细胞多能性的选择性剪接开关加拿大多伦多大学研究人员发现了进化上保守的特异的FOXP1选择性剪接开关,可调控干细胞的多能性。研究人员发现这种剪接开关产生的FOXP1胚胎干细胞特异性异构体，与典型的FOXP1异构体相比，着不同的DNA结合性质。选择性剪接事件改变了FOXP1胚胎干细胞特异性异构体的DNA结合性质，促进维持多能性所需的转录因子基因的表达，包括OCT4、NANOG、NR5A2和GDF3，同时抑制胚胎干细胞分化所需的基因。同时，研究小组还发现FOXP1胚胎干细胞特异性异构体促进体细胞高效重编程为诱导性多功能干细胞(iPSC)。4. 追踪神经胶质瘤的起源美国研究人员利用双标记嵌合分析(Mosaic Analysis with Double Markers，MADM)---该技术的精髓在于用绿色荧光蛋白明确标示突变细胞，还有一个关键特色就是无论一个突变的绿色细胞何时产生，总是同时产生一个正常的红色细胞---来分析神经胶质瘤(glioma)的起源。他们将胶质瘤病人体内发现的两种流行突变p53与NF1导入神经干细胞(neural stem cells, NSCs)中，对源自神经干细胞的所有细胞系所作的进一步分析清楚地显示了少突胶质前体细胞(Oligodendrocyte precursor cells,OPCs)是该肿瘤的来源细胞，因为任何可见的肿瘤标志可被检出之前，变异的绿色少突胶质前体细胞的数量大大超过了其正常的红色对应物数量，足足超了130倍。为了进一步证实这点，研究人员也将p53与NF1突变直接导入小鼠少突胶质前体细胞，结果发现这些小鼠产生神经胶质瘤，从而再次证实少突胶质前体细胞是神经胶质瘤的来源。5. 发现新的组蛋白修饰方式美国芝加哥大学Ben Mary癌症研究所研究人员在细胞中筛查出了67个新组蛋白修饰标记，并从中发现了一种新型组蛋白翻译后修饰方式---赖氨酸巴豆酰化(lysine crotonylation)修饰。通过进一步的结构及基因组定位分析，研究人员证实氨酸巴豆酰化修饰是一种进化高度保守，且在生物学功能上完全不同于组蛋白赖氨酸乙酰化的蛋白质修饰方式。研究人员还发现在人类体细胞和小鼠精子细胞基因组中，组蛋白赖氨酸巴豆酰化分布于基因活性转录启动区域或增强子上。在减数分裂后的精子细胞中，赖氨酸巴豆酰化高丰度集中在性染色体上，被用来标记睾丸特异性基因。