荧光共振能量转移 (FRET)
FRET 滤光片组FRET 是测量两个不同位点之间距离以及距离变化的有效工具,其对距离的变化非常敏感,被称为 “ 光谱尺 ” (spectroscopic ruler) ,其特征距离为 1 - 10 nm。 如果一个荧光基团 ( 供体 ) 的发射光谱和另一个荧光基团 ( 受体 ) 的吸收光谱有重叠,那么当两者的距离在 1 - 10nm 之间时,供体会通过偶极 - 偶极相互作用 (dipole - dipole interaction) 将能量以非辐射的方式传递给受体,供体回到基态而不发射荧光,同时受体被激发,衰变到基态时发射荧光,这一过程称为荧光共振能量转移。 FRET 效率值可通过荧光强度或者荧光寿命的测量得到,计算公式为:E = 1 - FDA/FD 或 E = 1 - τDA/τD其中,FD 为受体不存在时,供体的荧光强度;FDA 为受体存在时供体的荧光强度。τD 为受体不存在时,供体的荧光寿命;τDA为受体存在时,供体的荧光寿命。根据实验需求或者显微镜配置的不同,FRET 滤光片可以采用不同的搭配。在供体单激发的配置中,只包含一个激发片用来激发供体,包含两个发射片用来接收供体和受体的荧光。两个发射片需要安装在滤光片转轮上,通过转轮切换不同的发射片,分别进行供体和受体的荧光接收。如果将发射片安装在分光器件中,则需要额外配置一个用于分光的二向色镜。在有些实验中,需要对受体进行激发,比如确认所有受体分子的分布,对受体分子进行光漂白等。这种配置中包含两个激发片分别激发供体和受体,包含一个双波段二向色镜和两个发射片。两个发射片需要安装在滤光片转轮上,通过转轮切换不同的发射片,分别进行供体和受体的荧光接收。如果将发射片安装在分光器件中,则需要额外配置一个用于分光的二向色镜。ET系列 - 宽场 FRET 滤光片组 ( 供体单激发 )FRET 探针对激发片激发二向色镜发射片 (供体)发射片 (受体)分光二向色镜BFP/GFPET395/25xT425lpxrET455/50mET525/50mT495lpxr-UFCFP/YFPET436/20xT455lpET480/40mET535/30mT505lpxr-UFGFP/RFPET470/40xT495lpxrET525/50mET630/75mT570lpxr-UFCy3/Cy5ET545/25xT565lpxrET605/70mET700/75mT660lpxr-UFET 系列 - 宽场 FRET 滤光片组 ( 供体和受体双激发 ) 分光二向色镜BFP/GFPET402/15xET490/20x69002bsET455/50mET535/50mT495lpxr-UF FRET 探针对激发片 (供体)激发片 (受体)激发二向色镜发射片 (供体)发射片 (受体) CFP/YFPET430/24xET500/20x69008bsET470/24mET535/30mT505lpxr-UFGFP/RFPET470/40xET572/35x59022bsET525/50mET632/60mT570lpxr-UFCy3/Cy5ET545/25x ET640/30x59007bsET595/50mET690/50mT660lpxr-UFET 系列 - 溶液单分子 FRET / FRET-FCS 滤光片组FRET 探针对激光 激发片 (受体)激发二向色镜发射片 (供体)发射片 (受体)分光二向色镜BFP/GFP405 nm ZET405/20xZT405rdc-UF1ET455/50mET525/50mT495lpxrCFP/YFP442 nmZET436/20x ZT442rdc-UF1ET480/40mET535/30mT505lpxrGFP/RFP488 nmZET488/10xZT488rdc-UF1 ET525/50mET630/75mT570lpxrCy3/Cy5532 nmZET532/10xZT532rdc-UF1ET575/50m ET700/75mT660lpxrET 系列 - 表面单分子 FRET 滤光片组激光激发片激发二向色镜多波段发射片 (供体) 发射片 (受体)分光二向色镜405/488 nmZET405/488xZT405/488rpc-UF2ZET405/488mET450/50m ET525/50mT495lpxr-UF442/514 nmZET442/514xZT442/514rpc-UF2ZET442/514mET480/40mET545/40m T505lpxr-UF442/532 nmZET442/532xZT442/532rpc-UF2ZET442/532mET500/40mET585/65mT525lpxr-UF488/561 nmZET488/561xZT488/561rpc-UF2ZET488/561mET525/50mET610/75mT560lpxr-UF488/594 nm ZET488/594xZT488/594rpc-UF2ZET488/594mET525/50mET645/75mT570lpxr-UF488/640 nmZET488/640x ZT488/640rpc-UF2ZET488/640mET525/50mET655lpT570lpxr-UF532/640 nmZET532/640xZT532/640rpc-UF2 ZET532/640mET585/65mET655lpT635lpxr-UF分光二向色镜规格厂家型号分光二向色镜 发射片Carin ResearchOptoSplit II, OptoSplit II ByPass, Optosplit III, Multisplit V2, TwinCam, MultiCamUF2: 26 x 38 x 2mm, Flatness 25mm 直径,3.5mm 厚度 PhotometricsDC2, DV2UF1: 18 x 26 x 1mm, Flatness DVΛUF2: 26 x 38 x 2mm, Flatness QV2 UF1: 12.5mm Diameter, 1mm thickness Flatness HamamatsuW-View GeminiUF1: 25.5 x 36 x 1mm, Flatness UF2: 25.5 x 36 x 2mm, Flatness W-View Gemini-2CAndorOptosplit IIIUF2: 26 x 38 x 2mm, Flatness