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[center][color=#DC143C][size=4][font=黑体]微生物快速检验技术进展[/font][/size][/color] [/center] 人类进入21世纪,感染性疾患仍然是危害人类健康的重要疾患,尤其是对第三世界国家。WHO宣布近30年来,新发现了29种新病原体。Prion被确定为疯牛病和人类C-J等病的病原体,肯定了蛋白质颗粒可成为病原体,致使感染人类的微生物日趋复杂。常见致病微生物的威胁不但没有消除,且出现了严重的耐药问题,如葡萄球菌、肠球菌、铜绿假单胞菌、大肠杆菌、克雷白菌,给临床治疗带来巨大困难。HIV在世界范围内肆虐,STD病原微生物尚在蔓延。1993年,肺鼠疫在印度复燃,霍乱弧菌O139型有可能致成世界范围的第8次大流行。严峻的现实向微生物检验提出了更高的要求--更准确、更快速地检出与监测病原体。传统的微生物检验法的最大弱点是慢,难以适应诊断与治疗。近代,以PCR代表的分子生物学技术的发展及自动化仪器的应用已明显加快了微生物检验的速度,这些方面已有许多专著予以介绍。现仅就微生物实验室可常规应用的技术即快速微生物检查法作一介绍。
脉冲式均质器在食品微生物快速检测中应用研究 随着经济的发展,人民对食品安全性的要求也日益提高,如何更快更好的检测出食品能否放心食用就显得尤为重要。微生物指标是食品检测中一个重要的指标,而传统的检测方法操作准备繁琐且样品前处理带有一定的缺陷和局限性。为了提高检测效率,微生物检测可使用快速检测方法。现行国际上常用的快速检测方法为使用快速测试片。由于测试片上含有冷水可溶性凝胶,因此无需传统方法中倾倒琼脂的步骤,从而避免了对细菌可能造成的热损伤。相对于传统平板检测方法操作简便、结果稳定,具有良好的实用性能,可大大简化操作程序,提高检测速度。为了快速检测方法能更好的开展,选择适宜的样品前处理的均质方式可使检测数据更真实可靠。本文通过研究新式的脉冲式均质器与传统的拍打式、旋转搅拌式在使用效果上的差异,以得出使用脉冲式均质器在食品微生物快速检测中更优的结论。 一.材料(1) 试验材料 美国3M公司细菌总数测试片,美国3M公司酵母菌/霉菌测试片,检测样品来源于市场随机购买。(2) 主要培养基平板计数琼脂培养基、孟加拉红培养基、伊红美蓝琼脂、Baird-Parker 琼脂基础、亚硫酸铋(BS)琼脂。以上培养基均由广东环凯微生物科技有限公司提供。(3) 主要仪器设备ShockMixer-1 脉冲式样品前处理器(环凯制造)、拍打式均质器、搅拌式均质器、振荡器、高压蒸气灭菌锅、超净工作台、电子天平、移液枪、生化培养箱。(4) 菌株大 肠 埃 希 菌 、金黄色葡萄球菌、福氏志贺氏菌、乙型副伤寒沙门氏菌。以上菌种均由广东环凯微生物科技有限公司提供。(5) 脉冲式均质器的工作原理通过高频率震动内装食品样品的专用胶袋,产生强烈冲击波与高速搅动联合作用,将食品中的微生物驱赶到样品悬液中,形成菌浓度均匀的样品稀释液。减轻了对样品的破坏,从而极大地减少了样品碎片的产生。食品样液澄清度高,能与快速检测方法更配套。 二.试验方法1.平板法
1主题内容和适用范围1.1主题内容本标准规定了测定水和污水中生化需氧量(BOD)的微生物传感器快速测定法。本标准规定的生物化学需氧量是指水和污水中溶解性可生化降解有机物在微生物作用下所消耗溶解氧的量。1.2适用范围本标准适用于地表水、生活污水和不含对微生物有明显毒害作用的工业废水中BOD的测定。的测定。 1.3干扰及消除水中以下物质对本方法测定不产生明显干扰的最大允许量为:Co2+5mg/l;Mn2+5mg/l;Zn2+4mg/l;Fe2+5mg/l;Cu2+2mg/l;Hg2+2mg/l ;Pb2+5mg/l;Cd2+5mg/l;Cr6+0.5mg/l;CN-0.05mg/l;悬浮物250mg/l。对含有游离氯或结合氯的样品可加入1.575g/l的亚硫酸钠溶液使样品中游离氯或结合氯失效,应避免添加过量,对微生物膜内菌种有毒害作用的高浓度杀菌剂、农药类的污水不适用本测定方法。 2术语2.1生化需氧量在一定条件下,微生物分解存在于水中的某些可被氧化物质,特别是有机物所进行的生物化学过程中消耗溶解氧的量。2.2微生物菌膜将丝孢酵母菌在保持其生理机能的状态下封入膜中,称之为微生物菌膜或固定化微生物膜。2.3微生物传感器微生物传感器是由氧电极和固定化微生物膜组成。可检测微生物在降解有机物时引起的氧浓度的变化。2.4流通式水样或清洗液在蠕动泵的作用下连续不断的将样品或清洗液在单位时间内按一定量比送入测量池中。2.5间断式(加入式)将缓冲溶液加入到测量池中,使微生物传感器(微生物菌膜)与缓冲溶液保持接触状态,然后加入定量的被测水样,测得被测水样的BOD值。2.6恒温控制装置微生物电极的反应性能依赖于一定的温度条件,因此要求在试验过程中要有一稳定的温场,该装置在仪器中称之为恒温控制装置。2.7清洗液(缓冲溶液)清洗液是由磷酸二氢钾和磷酸氢二钠配置而成。其主要作用是作为缓冲液调节样品的PH值,清洗和维持微生物传感器使其正常工作,并具有沉降重金属离子的作用。 3原理测定水中BOD的微生物传感器是由氧电极和微生物菌膜构成,其原理是当含有饱和溶解氧的样品进入流通池中于微生物传感器接触,样品中溶解性可生化降解的有机物受到微生物菌膜中菌种的作用,而消耗一定的氧,使扩散的氧电极表面上氧的质量减少。当样品中可生化降解的有机物向菌膜扩散速度(质量)达到恒定时,此时扩散到氧电极表面上氧的质量也达到恒定,因此产生一个恒定电流。由于恒定电流的差值与氧的减少量存在定量关系,据此可换算出样品中生化需氧量。 4试剂分析纯试剂和蒸馏水,蒸馏水使用前应煮沸2-5min左右,放置室