紫外吸光度分析

（紫外/可见）吸光光度法讲座（1）吸光光度法是采用分光器（棱镜或光栅）获得纯度较高的紫外/可见单色光，基于物质对单色光的选择性吸收测定物质组分的分析方法。位于波长10～390nm之间的电磁辐射为紫外光，位于波长390～770nm之间的电磁辐射为可见光。各类电磁辐射的波长列于表1。表1 各类电磁辐射的波长‘辐 射－－－－－－－波长，λ/nm无线电波－－－－－－＞10（12）～10（9）【注：10的12次方到10的9次方】微 波－－－－－－－－－－109～106红外线a 、远红外－－－－－－－－106～3×104b、中红外－－－－－－－－3×104～3×103c 、近红外－－－－－－－－3×103～770可见光－－－－－－－－－－770～390紫外线－－－－－－－－－－390～10X射线－－－－－－－－－－－10～10－2【10的负2次方】γ射线－－－－－－－－－－－10－2～10－5吸光光度法是一种历史久远的分析手段，具有灵敏度高、准确度和稳定性较好、适用范围广、所需仪器简单价廉等优点。它通常用于微量组分的测定，业已广泛应用于各个领域的分析测试。吸光光度法也称做分光光度法，但是分光光度法的概念有些含糊，分光光度是指仪器的功能，即仪器进行分光并用光度法测定，这类仪器包括了分光光度计与[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Wp][color=#3333ff]原子吸收光谱[/color][/url]法（AAS）仪。吸光光度法的本质是光的吸收，因此称吸光光度法比较合理，当然，称分子吸光光度法是最确切的。

（紫外/可见）吸光光度法讲座（1）吸光光度法是采用分光器（棱镜或光栅）获得纯度较高的紫外/可见单色光，基于物质对单色光的选择性吸收测定物质组分的分析方法。位于波长10～390nm之间的电磁辐射为紫外光，位于波长390～770nm之间的电磁辐射为可见光。各类电磁辐射的波长列于表1。 表1 各类电磁辐射的波长 辐 射 波长，λ/nm 无线电波 ＞1012～109 微 波 109～106 红外线 远红外 106～3×104 中红外 3×104～3×103 近红外 3×103～770 可见光 770～390 紫外线 390～10 X射线 10～10－2 γ射线 10－2～10－5 吸光光度法是一种历史久远的分析手段，具有灵敏度高、准确度和稳定性较好、适用范围广、所需仪器简单价廉等优点。它通常用于微量组分的测定，业已广泛应用于各个领域的分析测试。 吸光光度法也称做分光光度法，但是分光光度法的概念有些含糊，分光光度是指仪器的功能，即仪器进行分光并用光度法测定，这类仪器包括了分光光度计与[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Wp][color=#3333ff]原子吸收光谱[/color][/url]法（AAS）仪。吸光光度法的本质是光的吸收，因此称吸光光度法比较合理，当然，称分子吸光光度法是最确切的。

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在进行紫外－可见分析时，若使用的不纯的单色光，测定的吸光度产生什么误差？正？负？或者不确定？

各位好！有个问题想请教大家：具体情况如下：配制60mg/L 重铬酸钾溶液，用岛津UV2450(普通紫外分光光度计)测量235nm、257nm、313nm、350nm出的吸光值，然后计算吸光系数，结果符合药典要求。现在有一台超微量紫外分光光度计，加样量2ul左右，测试的吸光度比岛津偏低，计算出来的吸光系数自然就比药典要求低！现在有问题：1、超微量紫外分光光度计是否能够用重铬酸钾溶液衡量吸光准确度？2、是所有的紫外分光光度计（无论普通还是微量），只要在量程范围内，测试同一物质吸光度是否都要一致？个人理解是需要保持一致！3、超微量紫外分光光度计通常用于核酸和蛋白浓度测量，如果重铬酸钾吸光系数不准确，是否影响核酸和蛋白的测量结果？4、如何评价超微量紫外分光光度计的性能？5、测量蛋白溶液的浓度CV很好，但是测量重铬酸钾的吸光值总在变化（不同时间测试变化较大，偏差可大于5%），又是什么原因？虽然对于上面的问题，我认为只要是紫外分光光度计，原理一致，那么在量程内就应该保证结果一致！现在想听听大家的意见和看法！

这两天在做紫外分光光计标准曲线，发现空白溶剂在280nm处吸光度是-0.462A，可去空白后，仪器界面就显示为-0.301A，这是什么原因？重做空白后又出现同样的结果，比色皿更换过后结果不变，是什么原因？？

使用紫外分光光度计检测含量和溶出度前，都需要扫个最大吸收波长再测定吸光度吗？外标法和吸收系数法都要扫吗？有没有相关文件规定？

GB/T 6682-2008规定，要达到一级水的要求，其中水的吸光度（254nm，1cm光程）要求小于等于0.001。现在我刚买了一台上海仪电分析的型号752N的紫外可见分光光度计，但它的读数最小只能是0.001，按我的想法，要满足要求，仪器应该可以直接读出譬如0.0009这样的值才是可以的吧！那我买的仪器应该是不能用于测一级水了吧！我的问题是：1、一般测出来的值，是多少？2、网上查了很多紫外可见分光光度计的吸光度测量范围，都是写-0.300A~3.999A，请问这种仪器能用于测量么？ 是否有的紫外可见分光光度计的吸光度测量范围会是-0.3000A~3.9999A的呢？3、我想买一台仪器用于测量，什么仪器能满足要求？请知道的朋友介绍一下！拜托了！感激不尽！

紫外—可见分光光度分析法一、基本要求掌握：本章要求掌握分光光度法的特点、基本原理、测定方法及计算方法；分子吸收光谱与电子跃迁类型，物质对光的选择吸收与吸收光谱曲线，摩尔吸收系数与吸收系数，吸光度与透光度，偏离朗伯-比尔定律的原因；掌握显色反应条件及光度测量条件的选择；掌握紫外—可见分光光度计的主要部件，各部件的作用及仪器原理，主要类型及特点；掌握差示分光光度法的原理、特点。理解：物质分子结构与紫外吸收光谱的关系，吸收波长位移与分子结构变化的关系；紫外—可见分光光度定量分析影响结果准确度的各种因素。了解：了解紫外—可见分光光度法测定灵敏度和选择性的途径；双波长分光光度法等其它分光光度法定量测定的方法；紫外—可见分光光度法在有机化合物的结构解析方面的作用及在其他方面的应用。二、 基本概念与重点内容A概述 1．紫外—可见分光光度法的特点 灵敏度与准确度较高；选择性较好；设备简单、操作简便。 2．分光光度法的发展过程 目视比色法 光电比色法 分光光度法 3． 分子的紫外—可见吸收光谱 分子的紫外—可见吸收光谱是基于物质分子吸收紫外辐射或可见光，其外层电子跃迁而成，又称分子的电子跃迁光谱。紫外—可见分光光度法是基于物质分子的紫外—可见吸收光谱而建立的一种定性、定量分析方法。4． 光的基本性质 5．物质对光的吸收及吸收光谱6．紫外—可见吸收光谱与电子跃迁类型7．生色团与助色团B 光的吸收定律1．光吸收的基本定律（朗伯-比尔定律）2．吸光度与透光率、百分透光率之间的关系3．工作曲线的绘制与应用4．吸光系数、摩尔吸光系数和桑德尔灵敏度5． 偏离朗伯-比尔定律的因素C紫外-可见分光光度计1． 分光光度计的主要部件2． 在紫外和可见光区进行测量时，分别选择何种光源3． 单色器的主要元件 光栅；棱镜4． 分光光度计中的检测器类型早期：光电池；光电管；光电倍增管。 5．紫外-可见分光光度计的类型及特点D显色测定试样的制备和光度测定条件的选择、1．显色反应及其影响因素2．测定读数误差和测定条件的选择 5．入射波长的选择E 分光光度定量测定方法与其他应用 1．单组分的测定 通常采用 A-C 标准曲线法定量测定。 2.多组分的同时测定 3．紫外可见吸收光谱在有机化合物结构解析中的作用 了解共轭程度、空间效应、氢键等；可对饱和与不饱和化合物、异构体及构象进行判别。在有机化合物结构解析中，紫外可见吸收光谱没有红外吸收光谱提供的结构信息多。 4．紫外—可见吸收光谱中有机物发色体系信息分析的一般规律

如题：紫外可见每次同浓度的标准品的吸光度为什么不一样？每次吸光度差很大？是光源不行了吗？

毛细管电泳紫外检测吸光度信号比要测的样品吸光度还大

紫外测反应后油的吸光度，前几次的结果都是在360nm处出现峰值，且最大值不超过1.25。这次测吸光度曲线直升9.999，这是为什么呢？求大佬解答！[img=,137,927]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/03/202403041647232708_4539_6401627_3.png!w137x927.jpg[/img]

紫外测量吸光度值不准，什么原因，请指

紫外测量吸光度值不准，什么原因，请指

请问各位老师，紫外石油的空白吸光度应该在什么范围内呢？谢谢。

请问各位大神，我在做紫外法测石油时，空白吸光度有0.191这么大，正己烷是符合要求的，这是什么情况啊

紫外法测地表水石油类，样品吸光度值为负值，-0.004，请问这种情况会出现吗？是什么原因？

紫外分光光度计岛津UV－1700，将纯水放里面做参照，外面通道仍放纯水，调零，吸光度不为零，一会蹦有0.016，将比色皿取出，调零，为0.012，是哪出问题了？

穿心莲总内酯紫外分光光度法测定穿心莲总内酯的紫外检测方法很少，最近查了一篇，过程如下：精密取穿心莲提取液（以活性炭去除叶绿素）适量，加20%乙醇液2ml，加2%3，4-二硝基苯甲酸1ml，加2%KOH1ml，摇匀，静置15min，以60% 甲醇定容至10ml，于550nm波长处测定吸光度。在对供试液进行测定时，分别于显色后的6，8，10，12，14，16，18..............40 min 测定，发现随着时间的后移，其吸光度在不断减小。而文献资料上要求静置15min后测定，请问这是什么原因？谢谢！

我利用紫外可见吸光光度计读水的吸光值读出负值。我是先开机调零后，再利用空白的石英比色皿做对照调零显示的是254nm 0.000A，接着将纯化水做样品去读数，结果显示的是负数：-0.031 请问我的操作是不是有问题？还是我的方法有问题？ 有别的方法可以检测出纯水的吸光值吗？

紫外测水中阴离子洗涤剂的时候吸光度总是变动、 总是不断变小、、 是什么原因啊 ？？

紫外可见分光光度计的吸光度范围是多少?在什么范围里最准确?

各位大侠，小生最近在学习紫外光谱的基础知识，有一个问题看了很多教材还是不明白：在做紫外吸收的时候，溶剂极性对吸收的最大波长有影响，这个我是知道的，但是溶剂极性对吸光度的大小有影响吗？如果有影响，那么是什么机理呢？希望各位高手不吝赐教，谢谢了！[em0808]

用紫外-可见分光光度计测定DNA水溶液的吸光度时,吸光度A值第二圈比第一圈小0.01,是什么原因阿,一般???要是说是因为紫外灯照过比色皿中DNA溶液时,导致水份挥发了,呐DNA的吸光度液应该变大才对阿???到底怎么回事阿请高人指教,谢谢^_^

紫外可见分光光度计的吸光度范围是多少?在什么范围里最准确?

求助各位大神，为什么我按中国药典做紫外的验证，杂散光，波长都符合规定，吸光度的准确度就不符合要求，应该怎么改进？称取60mg 基准重铬酸钾用0.005mol/L硫酸溶液定容至1000mL

紫外可见分光光度计是一种应用很广的分析仪器。当前已成为全世界使用最多、覆盖应用面最广的分析仪器。它的应用领域涉及制药、医疗卫生、化学化工、环保、地质、机械、冶金、石油、食品、生物、材料、计量科学、农业、林业、渔业等领域中的科研、教学等各个方面，用来进行定性分析、纯度检查、结构分析、络合物组成及稳定常数的测定、反应动力学研究等。由于仪器涉及到光学、电学和结构等，所以它需要在一定的环境中应用 定量分析　　根据琅伯-比尔定律，样品的浓度和吸光度是成正比关系的，浓度越大，吸收值越高，所以分光光度计用的最多的还是定量分析，定量分析的种类有很多，这里先容常用的几种定量分析方法：　　A、尽对法：尽对法是紫外可见分光光度计诸多分析方法中使用最多的一种方法。这是一种以琅伯-比尔定律A=εbC为基础的分析方法，某一物质在一定波长下ε值是一个常数，石英比色皿的光程是已知的，也是一个常数。因此，可用紫外可见分光光度计在λmax波优点，测定样品溶液的吸光度值A。然后，根据琅伯比尔定律求出C=A/εb，则可求出该样品溶液的含量或浓度。　　B、标准法：在选定的波优点，在相同的测试条件下，分别测试标准样品溶液C标和被测试样品溶液C样的吸光度A标和A样。然后，按下式求得样品溶液的浓度或含量。　　C样=A样/A标×C标　　C、标准曲线法　　紫外可见分光光度计最常用的定量分析方法是标准曲线法。即先用标准物质配制一定浓度的溶液，再将该溶液配制成一系列的标准溶液。在一定波长下，测试每个标准溶液的吸光度，以吸光度值为纵坐标，标准溶液对应得浓度为横坐标，绘制标准曲线。最后，将样品溶液按标准曲线绘制程序测得吸光度值，在标准曲线上查出样品溶液对应的浓度或含量。　　D、其它分析方法　　除上述几个分析方法外经常使用的分析方法外，还有比吸收系数法、最小二乘法、解联立方程法和示差分光光度法