猪蓝耳抗体检测

GB/T 18089-2008 蓝舌病病毒分离、鉴定及血清中和抗体检测技术

目前来说，最常用的[url=https://www.thermofisher.com/cn/zh/home/life-science/antibodies.html]抗体检测[/url]方法应该是ELISA，既可以检测抗体的存在又可以对其定量。此方法用到的仪器主要有离心机，自动洗板机和酶标仪；用到的主要试剂有PBS溶液，吐温20，BSA，一抗，二抗和显色液。其他的抗体检测方法还有免疫扩散和免疫电泳，但是大多是定性或者半定量，而好处是操作简单，所需试剂少。

印度首都第五轮抗体检测超一半人阳性。

[font='calibri'][size=13px]什么是中和抗体？如何检测[/size][/font][font='calibri'][size=13px]假病毒[/size][/font][font='calibri'][size=13px]中和抗体？[/size][/font]什么是中和抗体？中和抗体是一类与病毒结合并使病毒失去传染性的抗体。当病毒侵入人体时，浆细胞会产生病毒特异性抗体，但只有少数是中和抗体。中和机制如下：(1)改变病毒表面的构象；(2)与吸附相关的病毒表位结合，阻断其与宿主细胞受体的相互作用；(3)与病毒形成免疫复合物，易于被巨噬细胞清除；(4)当病毒表面抗原与中和抗体结合时会激活补体，从而导致病毒裂解。S蛋白（spike protein）是SARS-CoV-2病毒的主要包膜蛋白，由S1和S2亚基组成的三聚体跨膜糖蛋白，负责识别宿主细胞受体即血管紧张素转换酶2(ACE2)并介导膜融合。S1亚基上的受体结合域(RBD)直接参与宿主受体识别并介导病毒入侵。S蛋白上的受体结合结构域(RBD)，被认为是病毒感染宿主细胞的关键位点和大多数中和抗体的靶标。中和抗体可阻止S1或RBD与ACE2结合，从而防止病毒侵入宿主细胞并最终阻止病毒感染(图1)。因此，S1或RBD的突变可能会导致SARS-CoV-2有较强的传染性。如何检测假病毒中和抗体？中和抗体检测试验包括病毒中和试验、假病毒中和试验和替代病毒中和试验。病毒中和试验中和抗体检测的金标准是病毒中和试验，主要包括空斑减少中和试验和微量中和试验。两种方法都使用定量的活病毒与不同稀释度的等量血清混合，并接种预先准备好的单层细胞。最后，根据空斑形成单位或细胞病变效应来评估中和抗体的效价。由于涉及到活病毒的操作，这些检测只能在生物安全三级实验室进行，极大地限制了空斑减少中和试验和微量中和试验的使用。假病毒中和试验目前，越来越多的实验室使用假病毒中和试验进行中和抗体检测。SARS-CoV-2假病毒以非致病性病毒(如复制缺陷型HIV-1)为载体，将载体病毒的包膜蛋白替换为SARS-CoV-2的S蛋白，并引入检测信号分子，例如GFP和荧光素酶。假病毒利用S蛋白的RBD结构域与ACE2结合，模拟病毒入侵的过程。中和抗体可有效抑制SARS-CoV-2假病毒感染宿主细胞(图2)，并通过信号检测评估中和抗体效价。由于假病毒为一次性感染病毒，不具备自我复制能力，无生物安全危险，所以这种方法可以在生物安全二级实验室进行。替代病毒中和试验替代病毒中和试验是基于竞争性酶联免疫吸附试验(ELISA)的原理，利用重组RBD蛋白与重组ACE2蛋白的结合作用来模拟病毒-细胞相互作用。样品中的中和抗体可有效阻断RBD蛋白与ACE2蛋白的结合。与病毒和假病毒中和试验相比，替代病毒中和试验更安全、更容易执行且耗时更少。中和检测服务信息由北京义翘神州科技股份有限公司(Sino Biological Inc.)为您提供，如您想了解更多关于SARS-CoV-2 (2019-nCoV) Spike假病毒中和检测服务报价、型号、参数等信息，欢迎来电或留言咨询。具体详情可点击：https://cn.sinobiological.com/services/pseudovirus-neutralization-assay-service

国家卫健委5月29日通报，全国新冠病毒疫苗接种超过6亿剂次。自3月27日超过1亿剂次以来，每亿剂次所需时间为25天、16天、9天、7天、5天，间隔不断缩短，这就是疫苗接种的中国速度。接种新冠病毒疫苗后，理论上体内会产生IgM、IgG及中和抗体，这些抗体与新冠病毒结合后将使病毒失去感染性。因此新冠病毒疫苗接种后，检测IgM、IgG及中和抗体水平，对于评价疫苗的免疫效果至关重要，同时为常态化新冠疫情防护政策调整提供基础性的数据参考。

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实验室常用的ELISA方法可以用来测定抗体，也可以用来测定抗原。我们可以根据试剂的来源和标本的情况以及检测的具体条件，可设计出各种不同类型的检测方法。下面就让上海劲马ELISA试剂盒为您分享其中关于双抗体夹心法检测抗原的操作步骤。双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法，操作步骤如下：1) 将特异性抗体与固相载体联结，形成固相抗体。洗涤除去未结合的抗体及杂质。2) 加受检标本，保温反应。标本中的抗原与固相抗体结合，形成固相抗原抗体复合物。洗涤除去其他未结合物质。3) 加酶标抗体，保温反应。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。4) 加底物显色。固相上的酶催化底物成为有色产物。通过比色，测知标本中抗原的量。只要获得针对受检抗原的异性抗体，就可用于包被固相载体和制备酶结合物而建立此法。如抗体的来源为抗血清，包被和酶标用的抗体最好分别取自不同种属的动物。如应用单克隆抗体，一般选择两个针对抗原上不同决定簇的单抗，分别用于包被固相载体和制备酶结合物。这种双位点夹心法具有很高的特异性，而且可以将受检标本和酶标抗体一起保温反应，作一步检测。劲马ELISA试剂盒小提示：双抗体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子抗原，但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原，因其不能形成两位点夹心。

一 抗体选择指南:检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择，为缩小抗体的选择范围选中合适的抗体，需要考虑如下几种因素：1. 分析或应用的类型2. 样本蛋白的结构性质3. 样本的种属4. 抗体宿主的种类5. 抗体的标记和检测1 分析试验的应用类型一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种分析类型，如：可以应用于WB IHC ICC ELASA 分析等，如果抗体说明书没有提及的应用类型，并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型，而仅是说明尚未经过此种分析试验验证，如果抗体不适用某些分析试验，则会在抗体说明书上标注出来不适于某分析试验。2 样本蛋白的结构性质了解样本蛋白的结构性质有助于选择最合适的抗体，至少两方面因素需要考虑(1)..待测样本蛋白的结构域：抗体是由各种不同免疫原免疫宿主而制备得来，其中的免疫原包括：全长蛋白、蛋白片断、多肽、全有机体（如：细菌）或细胞，抗体说明书一般都有免疫原的描述，如果打算检测的是蛋白片断或一种特殊的同型物或蛋白全长的某一区域，则必须选择用含此片段域的免疫原制备出的抗体。如果打算用FACS 流式检测活细胞的表面蛋白，则需要选择含该表面蛋白的胞外域来免疫制备的抗体。(2)样本的提取或处理过程：某些抗体要求样本经过某些特殊处理，例如：许多抗体只识别还原和变性的、表位已暴露不受二级四级结构阻碍的蛋白样本，另一方面，某些抗体仅识别天然折叠状态的蛋白。当选择免疫组化的抗体时，应注意某些抗体只识别未固定的冷冻的组织，而另一些抗体则适用于无需抗原修复解交联步聚的甲醛固定石蜡包埋的组织，这些都会在抗体说明书上应用部分标示出来3 样本的物种 应选择物种相同或有交叉反应的抗体，抗体可能与不同物种的同种靶蛋白有交叉反应，因其氨基酸序列同源性较高，如果样本的种类未列入抗体说明书上的交叉反应种属表中，并不意味着该抗体不适用于检测该物种的蛋白，而只是表示该物种尚未用此抗体检测验证过，应通过序列比对的方法来预测交叉反应，可应用Expasy 和 NCBI BLAST 来进行不同物种蛋白同源性比对。4 一抗宿主物种的选择一般说来，在使用偶联二抗结合无偶联物的一抗时，一抗宿主动物的物种选择较为重要，对于免疫组化而言，尽可能选择与样本不同种系物种的一抗，从而避免二抗与样本内源性免疫球蛋白产生交叉反应，例如：检测小鼠样本蛋白，则不应选择小鼠或大鼠源的一抗，最好选兔源的一抗，则二抗则可选择偶联了检测分子（酶、荧光素、生物素等）的抗兔IgG。如果选择有偶联物的一抗则不适用上述情况，除免疫组化外的其它对不含内源性免疫球蛋白样本的检测方法，则抗体宿主物种的影响不大，如对不含IgG 的细胞裂解物样本的western blotting检测，尽管如此，含有血清的组织裂解物和组织培养上清中含有免疫球蛋白，还原变性样本中含IgG，在western blot 检测中则结合出现IgG 分子50 and 25 kDa 的重链和轻链条带。5 二抗的选择 二抗应选用与使用的一抗相同的物种来源，例如：如果你的一抗是小鼠的单克隆抗体，二抗则选抗小鼠的二抗anti-mouse secondary。建议检查二抗说明书确保该抗体适用于你的检测应用， 二抗一般连接荧光素FITC 或发光团。6 双重染色抗体的选择用未偶联一抗进行细胞培养物或组织切片的双重免疫染色要求一抗来源于不同物种并且二抗分别识别其中之一，二抗说明书应描述其与其它物种来源的免疫球蛋有否有交叉吸附。

猪瘟抗体金标快速检测卡使用说明书【产品用途】本检测卡采用免疫原理和胶体金免疫层析技术制成，用于快速检测猪血液或猪血清中的猪瘟抗体,为国内最新检测试剂。检测时间仅需20 分钟，操作简便、快速、结果准确、直观、灵敏度高、容易判定。当猪瘟抗体滴度达到能抵御猪瘟强毒攻击时，在检测区和对照区各形成一条色线，则视为阳性，抗体滴度越高，检测线颜色越深；当猪瘟抗体滴度达不到抵御猪瘟强毒攻击的抗体滴度时，只在对照区形成一条色线，则视为阴性。本卡附带一张金标试纸与正相间接血凝试验实物参照图，将检测线的颜色深浅与参照图对照，便可粗略估计样品抗体的滴度。【操作步骤】1．打开包装袋，取出检测卡平放在桌面上，并做好标记；2．在检测卡的加样孔内加入2 滴（50-100ul）血液或血清样品；3．在20 分钟内观察和记录结果，超过20 分钟的结果只能作为参考。【结果判定】见右图阳性：在检测区（T）和对照区（C） 各出现一条紫红色线。检测线颜色越深，表明猪瘟抗体滴度越高。弱阳性：在检测区（T）和对照区（C）各出现一条紫红色线，但检测线颜色很浅。阴性：只在对照区（C）出现一条紫红色线。无效：都不出现紫红色线或只在检测区（T）出现紫红色线，对照区（C）不出现紫红色线。【结果参考意义】1．强阳性结果说明猪瘟抗体滴度较高，暂时不必进行猪瘟疫苗的接种免疫；2．弱阳性结果说明猪瘟抗体滴度只达到抵抗猪瘟强毒攻击的最低保护水平，这时应该及时进行猪瘟疫苗接种，此时也是猪瘟疫苗接种的最佳时间；3．阴性结果说明机体内无猪瘟抗体或抗体水平低于抵抗猪瘟强毒攻击的最低保护水平，如果动物群体健康，应该及时进行猪瘟疫苗接种。如果动物群体已有个别动物出现疑似猪瘟病时，则可作为诊断猪瘟病的一个参考依据。【注意事项】1．请严格按照说明书要求进行操作和结果判定。2．检测样品可以是猪血液或血清。3．检测卡从铝箔袋取出后应尽快使用，尽量避免长时间放置在空气中，否则吸潮后将失效。4．检测环境应保持一定的湿度，避风和避免在过高温度下进行操作。5．检测卡在室温下保存，如在2-8℃冷藏，使用时需平衡至室温后方可打开包装进行检测操作。【包装规格】单头份铝箔袋包装（内含检测卡、吸管和干燥剂）；50 头份/盒【贮藏和有效期】密封，在干燥处保存；在3-30℃下贮存，有效期为12 个月。

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[font=宋体]抗体是生物体内重要的免疫分子，它们能够识别并攻击外部入侵者，如病毒和细菌。在医学、生物学和免疫学等领域，抗体标记与检测技术广泛应用于疾病诊断、治疗监测、药物研发等方面。本文将详细介绍[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-conjugation][b]抗体标记[/b][/url]与检测的种类和方法，包括直接标记、间接标记、免疫荧光、酶联免疫吸附试验等。通过对这些技术的了解和应用，我们可以更好地利用抗体进行疾病诊断和治疗监测，提高医疗水平和治疗效果。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]抗体与标记物[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]抗体广泛应用于多种免疫分析中，用于检测和定量抗原。直接识别抗原的抗体被称为一抗（[/font][font=Calibri]primary antibody[/font][font=宋体]），赋予检测的特异性。同时，在检测中还需加入标记物（详见后文“间接标记法 [/font][font=Calibri]Vs.[/font][font=宋体]直接标记法”），标记物的加入赋予可检测性。表[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]中列出了一些常用的免疫分析技术，及可能使用到的标记物。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][table][tr][td][b][font=微软雅黑]免疫分析方法[/font][/b][/td][td][b][font=微软雅黑]标记物[/font][/b][/td][/tr][tr][td][font=微软雅黑][font=微软雅黑]免疫印迹[/font][font=微软雅黑](WB)[/font][/font][/td][td][font=微软雅黑][font=微软雅黑]酶[/font][font=微软雅黑](通常为辣根过氧化物酶HRP或碱性磷酸酶AP)[/font][/font][/td][/tr][tr][td][font=微软雅黑][font=微软雅黑]酶联免疫吸附试验[/font][font=微软雅黑](ELISA)[/font][/font][/td][td][font=微软雅黑][font=微软雅黑]酶、生物素[/font][font=微软雅黑]/链亲和素[/font][/font][/td][/tr][tr][td][font=微软雅黑][font=微软雅黑]免疫荧光[/font][font=微软雅黑](Immunofluorescence)[/font][/font][/td][td][font=微软雅黑]荧光染料[/font][/td][/tr][tr][td][font=微软雅黑][font=微软雅黑]免疫组化[/font][font=微软雅黑](Immunohistochemistry)[/font][/font][/td][td][font=微软雅黑][font=微软雅黑]酶、生物素[/font][font=微软雅黑]/链亲和素[/font][/font][/td][/tr][tr][td][font=微软雅黑][font=微软雅黑]流式细胞术[/font][font=微软雅黑](Flow Cytometry)[/font][/font][/td][td][font=微软雅黑]荧光蛋白或染料、串联染料[/font][/td][/tr][/table][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]直接检测法 [/font][font=Calibri]Vs.[/font][font=宋体]间接检测法[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]检测技术可分为两大类：直接法和间接法。对于直接检测法，标记物通过共价键连接到一抗上。而对于间接检测法，标记物则是共价连接到与一抗特异性结合的二抗上。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]在间接法中，检测由两个部分组成：第一步，用未标记的一抗进行孵育（通常[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]小时），[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]若存在抗原[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]部分抗体与抗原结合，未结合的抗体则通过洗涤去掉，然后加入标记二抗。再次孵育（通常[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]小时），洗涤去掉未结合的二抗。然后对结合在抗体上的标记物进行量化。若有抗原存在时，标记物通常导致有色物质的生成或某一个波长的发射光量增加。当无抗原存在时，则无一抗的结合，也无二抗试剂的结合，因此无信号产生。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]在直接法中，标记物直接与一抗共价结合，因此仅需一轮孵育及洗涤步骤，而间接法则需要两轮孵育及洗涤步骤。直接法简化了试验的流程，但检测的灵活性降低。下表列举出了直接法[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]间接法的主要利弊。[/font][/font][table][tr][td][b][font=微软雅黑]方法[/font][/b][/td][td][b][font=微软雅黑]优点[/font][/b][/td][td][b][font=微软雅黑]缺点[/font][/b][/td][/tr][tr][td][font=微软雅黑]直接法[/font][/td][td][font=微软雅黑]仅需使用一抗，检测快速[/font][font=微软雅黑][/font][font=微软雅黑]无二抗的非特异性结合[/font][/td][td][font=微软雅黑][font=微软雅黑]由于标记可能导致一抗的免疫反应性降低[/font][font=微软雅黑] [/font][/font][font=微软雅黑][/font][font=微软雅黑]信号放大作用较弱[/font][/td][/tr][tr][td][font=微软雅黑]间接法[/font][/td][td][font=微软雅黑]一抗含有多个标记，二抗可结合的表位，因而灵敏度升高，信号放大作用较强。[/font][/td][td][font=微软雅黑][font=微软雅黑]二抗可能发生非特异性结合[/font][font=微软雅黑] [/font][/font][font=微软雅黑][/font][font=微软雅黑]孵育及洗涤步骤增多[/font][/td][/tr][/table][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]尽管直接标记法具有诸多潜在的优点，但为何如今众多的免疫分析仍采用间接法原理呢[/font][font=Calibri]?[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]无疑，最主要的原因就是直接标记一抗相对较复杂，确实从历来经验看，抗体标记都是由那些具有化学修饰技术的专业人员来完成的。在间接法中二抗试剂所起的信号放大效应究竟如何呢？是否直接标记法所产生的信号就很弱？其实在很多情况下，间接法的放大效应是让人产生错觉的。在与二抗试剂的孵育过程及洗涤过程中，一些一抗会与抗原发生解离，因此真正被放大的只是逐渐减少的一抗的量。其实在很多情况下，直接法也可获得与间接法相同甚至更好的结果。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]3.[/font][font=宋体]常见的抗体标记方法[/font][/b][/font][font=宋体]和所有蛋白质一样，抗体也是由氨基酸组成的。理论上，通过大多数氨基酸可以实现生物偶联。以下内容介绍了几种基于赖氨酸残基的抗体偶联和标记技术。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]①[/font][font=Calibri]NHS[/font][font=宋体]（琥珀酰亚胺）酯法[/font][/font][font=宋体]应用广泛的荧光染料（如罗丹明衍生物）是采用这种方法对抗体进行偶联。通常在磷酸盐缓冲液中进行，随后与未标记的染料在柱上进行分离。该方法的主要缺点是，由于酯类对水分敏感，酯类的稳定性差。因此，反应结束后，标记抗体应立即使用。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]吉妥珠单抗（[/font][font=Calibri]Gemtuzumab ozogamicin, Mylotarg[/font][font=宋体]）是全球范围内首个获批上市的抗体偶联药物（[/font][font=Calibri]ADC[/font][font=宋体]）。半合成的卡奇霉素衍生物具有[/font][font=Calibri]NHS[/font][font=宋体]酯，以便将卡奇霉素与人源化[/font][font=Calibri]IgG4[/font][font=宋体]的赖氨酸残基偶联。然而，由于患者的临床获益不足，[/font][font=Calibri]Mylotarg[/font][font=宋体]已于[/font][font=Calibri]2010[/font][font=宋体]年退市。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]②异硫氰酸盐法[/font][font=宋体][font=宋体]这种方法主要用于异硫氰酸荧光素（[/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]）染料的偶联，广泛用于荧光标记蛋白和抗体的制备。异硫氰酸盐比[/font][font=Calibri]NHS[/font][font=宋体]更稳定，但也更难制备，而且利用该方法，标记的反应效率可能会降低。与[/font][font=Calibri]NHS[/font][font=宋体]法一样，应在反应结束后通过层析法去除多余染料。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]③碳二亚胺法[/font][font=宋体][font=宋体]碳二亚胺衍生化合物将蛋白质上的羧基转换为反应中间体，可与赖氨酸发生反应。碳二亚胺的高反应性意味着它们可用于使用相对惰性的材料（如磁性或金颗粒）标记抗体。最常用的碳二亚胺为[/font][font=Calibri]EDC[/font][font=宋体]。[/font][font=Calibri]NHS[/font][font=宋体]有时可被添加至反应中，以辅助产生相对稳定的中间体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]该方法操作简单，但与[/font][font=Calibri]NHS[/font][font=宋体]一样，[/font][font=Calibri]EDS[/font][font=宋体]具有吸水性，因此，标记后抗体需立即使用。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]④高碘酸盐法[/font][font=宋体][font=宋体]这种方法可用于制备特异性的[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]标记抗体。高碘酸盐通过产生与赖氨酸残基相互作用的醛分子来激活[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]。[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]本身只有少量的赖氨酸残基，因此酶聚合的影响不大。[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]和抗体之间的键是可逆的，可通过添加氰基硼氢化钠使其保持稳定。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-conjugation[/font][/font]

[quote]项目概况绵阳高新区疾病预防控制中心人类免疫缺陷病毒抗体检测试剂采购项目 采购项目的潜在供应商应在绵阳高新区绵兴东路55号中沅广场世爵假日18楼获取采购文件，并于2023年08月14日 14点00分（北京时间）前提交响应文件。[/quote][font=inherit]一、项目基本情况[/font]项目编号：ZDSF(2023)0801号项目名称：绵阳高新区疾病预防控制中心人类免疫缺陷病毒抗体检测试剂采购项目采购方式：竞争性磋商预算金额：20.0000000 万元（人民币）最高限价（如有）：20.0000000 万元（人民币）采购需求：详见采购需求附件合同履行期限：签订合同后5个工作日内交清货物。本项目( 不接受 )联合体投标。[font=inherit]二、申请人的资格要求：[/font]1.满足《中华人民共和国政府采购法》第二十二条规定；2.落实政府采购政策需满足的资格要求：无3.本项目的特定资格要求：（1）供应商须符合《医疗器械监督管理条例》要求，若供应商是制造厂家的须具有《医疗器械生产许可证》或有效备案凭证；若供应商为经销商或代理商的须具有《医疗器械经营许可证》或有效备案凭证。（仅限医疗器械适用）（2）投标产品须符合《医疗器械注册与备案管理办法》要求并提供产品的注册/备案证明材料。（仅限医疗器械适用）[font=inherit]三、获取采购文件[/font]时间：2023年08月04日 至 2023年08月10日，每天上午9:00至12:00，下午14:00至17:00。（北京时间，法定节假日除外）地点：绵阳高新区绵兴东路55号中沅广场世爵假日18楼方式：获取磋商文件时，经办人员当场提交以下资料：供应商为法人或者其他组织的，只需提供单位介绍信（原件）、经办人身份证明（查验原件收复印件）；供应商为自然人的，只需提供本人身份证明。以上资料均盖单位鲜章。售价：￥300.0 元（人民币）[font=inherit]四、响应文件提交[/font]截止时间：2023年08月14日 14点00分（北京时间）地点：绵阳高新区绵兴东路55号中沅广场世爵假日18楼[font=inherit]五、开启[/font]时间：2023年08月14日 14点00分（北京时间）地点：绵阳高新区绵兴东路55号中沅广场世爵假日18楼[font=inherit]六、公告期限[/font]自本公告发布之日起3个工作日。[font=inherit]七、其他补充事宜[/font][font=inherit]八、凡对本次采购提出询问，请按以下方式联系。[/font]1.采购人信息名 称：绵阳高新区疾病预防控制中心地址：绵阳高新区石桥铺东路创意联邦6栋1单元302联系方式：赵金华 0816- 25306052.采购代理机构信息名 称：四川中达盛丰工程项目管理有限公司地　址：绵阳高新区绵兴东路55号中沅广场世爵假日18楼联系方式：蒋骐羽 0816-21997273.项目联系方式项目联系人：蒋骐羽电　话：　　0816-2199727

[font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/anti-idiotype-antibody][b]抗独特型抗体[/b][/url]是一种能够特异性结合另一抗体独特位的抗体。独特型由多个抗原决定簇（[/font][font=Calibri]Antigenic determinant[/font][font=宋体]）组成，每个抗原决定簇都是一个独特位。抗原决定簇或独特位可存在于重链可变区，也可存在于轻链可变区，或者存在于两条链组成的表面。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]抗独特型抗体在治疗性抗体药物开发过程中有着非常广泛的应用。由于抗独特型抗体与抗药抗体（[/font][font=Calibri]Anti-drug antibody, ADA[/font][font=宋体]）之间的相似性，抗独特型抗体在免疫原性（[/font][font=Calibri]Immunogenicity[/font][font=宋体]）分析中可作为阳性对照用于抗药物抗体总量的测定。另外，在抗体药的药代动力学（[/font][font=Calibri]PK[/font][font=宋体]）和药效学（[/font][font=Calibri]PD[/font][font=宋体]）分析中，抗独特型抗体可用于检测血液中抗体药物的含量（游离型、结合型和总量）。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]抗独特型抗体的不同应用[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]①药代动力学（[/font][font=Calibri]PK[/font][font=宋体]）分析[/font][/font][font=宋体][font=宋体]药代动力学（[/font][font=Calibri]PK[/font][font=宋体]）描述并表征了药物在人或动物体内的四个不同阶段：吸收、分布、代谢和排泄（也称为[/font][font=Calibri]ADME[/font][font=宋体]）。在药物开发中，[/font][font=Calibri]PK[/font][font=宋体]分析提供了药物与身体相互作用以及疗效强度和疗效持续时间的基本信息。在开发生物仿制药时，需要通过比较[/font][font=Calibri]PK[/font][font=宋体]分析来评价与原研药在生物活性的潜在差异。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]根据结合模式和性质的不同，抗独特型抗体可分为三种类型：抗原阻断型、抗原非阻断型和药物靶标复合物型。基于这些特点，可以建立不同形式的[/font][font=Calibri]PK[/font][font=宋体]检测，以测量血清中的抗体药物含量，包括游离型、结合型或总量。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]抗独特型抗体可用于定量检测动物或人血清中的抗体药物水平，是[/font][font=Calibri]PK[/font][font=宋体]研究的关键检测试剂。抗体药物定量分析有多种分析方法，其中[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]为最常用的形式。在抗独特型抗体捕获[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]中，将抗独特型抗体包被在平板上，再将含有抗体药物的样本加入系统中，然后用特异性结合药物的标记抗独特型抗体定量抗体药物。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]②免疫原性[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]抗药抗体（[/font][font=Calibri]ADA[/font][font=宋体]）检测[/font][/font][font=宋体][font=宋体]免疫原性评价主要采用抗药抗体（[/font][font=Calibri]anti-drug antibody, ADA[/font][font=宋体]）分析的方法进行，这是治疗性蛋白药物（如单克隆抗体、[/font][font=Calibri]ADC[/font][font=宋体]和融合蛋白）开发过程中的关键步骤。在这些情况下，通常采用多层次递进式进行（图[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]）。该方法首先采用高灵敏的筛选试验鉴别阳性抗体样本，使用验证性试验尽量减少假阳性结果，然后使用表征试验评估抗体的中和能力。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]在整个过程中，抗独特型抗体是必要的试剂。检测[/font][font=Calibri]ADA[/font][font=宋体]的检测方法有多种，包括[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]、放射免疫沉淀法（[/font][font=Calibri]RIPA[/font][font=宋体]）、表面等离子体共振（[/font][font=Calibri]SPR[/font][font=宋体]）和电化学发光检测（[/font][font=Calibri]ECL[/font][font=宋体]）。其中，桥联[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]是最常用方法，可用于检测所有[/font][font=Calibri]ADA[/font][font=宋体]同种型（[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IgM[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IgA[/font][font=宋体]等）。在典型的桥联[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]中，将抗体药物预包被在平板上，并将标记的抗体药物与患者样本一起孵育，以检测是否存在[/font][font=Calibri]ADA[/font][font=宋体]（图[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]）。抗独特型抗体将用作阳性对照或参比标准品，用于样本中[/font][font=Calibri]ADA[/font][font=宋体]的定性分析。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/anti-idiotype-antibody-service][b]抗独特型抗体制备[/b][/url][b]套餐[/b][/font][font=宋体][font=宋体]为支持药物开发，义翘神州为客户提供了从抗原制备、抗独特型抗体开发到检测方法建立和试剂盒开发的全方位、一站式的定制抗独特型抗体生产服务。我们拥有丰富的开发经验，包括不同抗体类型如全长[/font][font=Calibri]mAb[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]F(ab')2[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]VHH[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]ADC[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]bsAb[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白等。定制的抗独特型抗体可用于建立药代动力学（[/font][font=Calibri]PK[/font][font=宋体]）[/font][font=Calibri]/ADA[/font][font=宋体]检测方法，以测定样本中的特异性抗体药物或[/font][font=Calibri]ADA[/font][font=宋体]水平。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]服务：[/font][font=宋体]①抗独特型兔多抗制备服务[/font][font=宋体]交付内容：[/font][font=宋体]? 纯化抗体[/font][font=宋体][font=宋体]? [/font][font=Calibri]CoA[/font][/font][font=宋体][font=宋体]周期：[/font][font=Calibri]2-3[/font][font=宋体]个月[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]②抗独特型鼠单抗制备服务[/font][font=宋体]交付内容[/font][font=宋体][font=宋体]? 阳性克隆，[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]管细胞[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]克隆[/font][/font][font=宋体][font=宋体]? 纯化抗体，[/font][font=Calibri]10 mg/[/font][font=宋体]克隆[/font][/font][font=宋体][font=宋体]? [/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]抗体对（可选）[/font][/font][font=宋体][font=宋体]? [/font][font=Calibri]CoA[/font][/font][font=宋体][font=宋体]周期：[/font][font=Calibri]4~6[/font][font=宋体]个月[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/anti-idiotype-antibody[/font][/font]

[font=宋体][font=宋体]传统意义上，抗核抗体（[/font][font=Calibri]antinuclear antibodies[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]ANA[/font][font=宋体]）是所有抗细胞核抗原成分的自身抗体的总称，包括一大类抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]然而，随着[/font][font=Calibri]ANA[/font][font=宋体]检测技术的改进、尤其是培养细胞抗原基质（如[/font][font=Calibri]HEp-2[/font][font=宋体]细胞，即人喉癌上皮样细胞系）的广泛运用，[/font][font=Calibri]ANA[/font][font=宋体]针对的靶抗原成分已由细胞核扩展到整个细胞成分，包括细胞核、细胞浆、细胞骨架及细胞分裂周期蛋白等。目前对[/font][font=Calibri]ANA[/font][font=宋体]的定义为：以真核细胞的各种成分为靶抗原的自身抗体的总称。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]ANA[/font][font=宋体]的检测方法，目前国际及国内指南或共识推荐的均是间接免疫荧光法（[/font][font=Calibri]indirect immunofluorescence[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]IIF[/font][font=宋体]），而且是以[/font][font=Calibri]HEp-2[/font][font=宋体]细胞为实验基质的[/font][font=Calibri]IIF[/font][font=宋体]。此外还有[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]、线性免疫印迹法、化学发光免疫分析法等，各有优缺点。瑞金医院检验科实验室、皮肤科实验室均采用[/font][font=Calibri]IIF[/font][font=宋体]法检测[/font][font=Calibri]ANA[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]IIF-ANA[/font][font=宋体]规范的结果报告内容应包括：检测方法、定性结果（阳性[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]阴性）、荧光模型、滴度、临床建议。[/font][font=Calibri]IIF-ANA[/font][font=宋体]荧光模型分[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]类：细胞核荧光模型（[/font][font=Calibri]14[/font][font=宋体]种）、细胞浆荧光模型（[/font][font=Calibri]9[/font][font=宋体]种）、细胞有丝分裂荧光模型（[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]种）；国内共识建议必报的荧光模型有[/font][font=Calibri]13[/font][font=宋体]种，细胞核类的有均质型、斑点型（需区分致密斑点型）、着丝点型、核点型、核仁型、核膜型，细胞浆类的有胞浆纤维型、胞浆颗粒型、胞浆网状[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]线粒体型、胞浆极型[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]高尔基体型、胞浆棒状环状型、胞浆线性[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]肌动蛋白型。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]抗核抗体[/font][font=Calibri]P[/font][font=宋体]蛋白抗体阳性通常指的是抗核糖体[/font][font=Calibri]P[/font][font=宋体]蛋白抗体阳性，它可能意味着身体存在结缔组织疾病，尤其是系统性红斑狼疮（[/font][font=Calibri]SLE[/font][font=宋体]）。[/font][/font][/b][font=宋体][font=宋体]包括类风湿关节炎、干燥综合征的患者等，阳性率并不是很高，特异性也不是很好。系统性红斑狼疮是一种自身免疫性疾病，可能会对皮肤黏膜、肝功能、中枢神经系统等造成损伤。抗核糖体[/font][font=Calibri]P[/font][font=宋体]蛋白抗体对系统性红斑狼疮具有高度特异性，尤其是在伴有典型神经系统症状的中枢神经系统损害型红斑狼疮中，出现抗核糖体[/font][font=Calibri]P[/font][font=宋体]蛋白抗体阳性的几率比较高。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]所以出现抗体阳性后，一定要到医院请专科大夫来进行诊断，并来进行合理的解释，再进行其他实验室检查，包括血沉、[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]反应蛋白 、血尿常规、肝肾功能、类风湿因子，以及相关其他，如[/font][font=Calibri]SM[/font][font=宋体]抗体、核小体抗体、[/font][font=Calibri]SSA[/font][font=宋体]抗体、[/font][font=Calibri]SSB[/font][font=宋体]抗体等自身抗体检查。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/platform/facs-b-cell-sorting][b]单[/b][/url][/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/services/platform/facs-b-cell-sorting][b]B[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/platform/facs-b-cell-sorting][b]细胞分选平台[/b][/url]，可向全球客户提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/single-b-cell-antibody-service][b]单[/b][/url][/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/services/single-b-cell-antibody-service][b]B[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/single-b-cell-antibody-service][b]细胞抗体制备服务[/b][/url]，整个过程涉及单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞分离、测序、克隆和单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞抗体筛选等步骤。更多详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/single-b-cell-technology[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

[b][font=宋体]一、引言[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]荧光标记技术是生物学和医学领域中常用的可视化技术，其中荧光标记抗体凭借其独特的应用优势，在许多研究方向中发挥了重要作用。本文将详细介绍荧光标记抗体的原理、应用及最新进展。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]二、荧光标记抗体的原理[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]荧光标记技术是一种利用荧光物质对目标进行标记，通过特定波长的光激发后发出荧光，从而实现可视化检测的方法。荧光标记抗体则是将荧光物质与特异性抗体结合，形成荧光标记抗体，用于对目标抗原进行特异性结合和荧光标记。常见的荧光物质有荧光素、量子点、上转换纳米颗粒等。[/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体]三、荧光标记抗体的应用[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫分析：荧光标记抗体在免疫分析中具有广泛的应用，如酶联免疫吸附试验（[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]）、流式细胞术、免疫荧光染色等。通过荧光标记抗体与抗原的特异性结合，可以实现对目标抗原的高灵敏度、高特异性检测。例如，利用荧光标记抗体检测肿瘤标志物，有助于肿瘤的早期诊断和治疗监测。[/font][/font][font=宋体]细胞成像：荧光标记抗体在细胞成像中具有重要作用，可以用于观察细胞内特定抗原的表达情况，了解细胞的功能和行为。例如，利用荧光标记抗体对细胞膜抗原进行标记，可以观察细胞迁移、侵袭等行为。[/font][font=宋体]组织切片染色：荧光标记抗体也可用于组织切片染色，对病理组织中的特定抗原进行标记，有助于病理诊断和组织学研究。例如，利用荧光标记抗体对肿瘤组织进行染色，有助于肿瘤类型的鉴别和恶性程度的评估。[/font][font=宋体]药物筛选：荧光标记抗体在药物筛选中具有重要应用，可以用于药物作用靶点的检测和药物作用机制的研究。例如，利用荧光标记抗体对药物作用靶点进行标记，可以观察药物对靶点的影响，评估药物的疗效和安全性。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]四、展望[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]随着荧光标记技术的不断发展，荧光标记抗体在灵敏度、特异性和可视化效果等方面得到了显著提升。同时，新型荧光物质的开发和制备也为荧光标记抗体的应用提供了更多选择。未来，随着荧光标记技术的进一步优化和多色荧光标记技术的发展，荧光标记抗体将在更多领域发挥重要作用，为生物学、医学和其他相关领域的研究提供有力支持。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/immunofluorescence-service][b]免疫荧光检测服务[/b][/url]：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/immunofluorescence-service[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

该如何选择健康体检项目？目前健康体检项目很多，人们应根据自己家庭病史、年龄、性别、身体状况等方面，有针对性地选择体检“套餐”。1、一般人群常规检查　　对于身体没有症状、工作压力不太大以及生活、作息、饮食较为规律的中青年人，只需接受常规性体检即可。主要体检项目包括：内科、外科、胸部透视、腹部Ｂ超、心电图和化验血、尿常规以及肝肾功能、血脂两项、血糖等。2、白领筛查“亚健康”　　公司白领、从事脑力劳动强度较高的机关工作人员，因工作压力大、生活节奏快，并且作息不规律、应酬多、平时锻炼时间少，多坐少动，身体不同程度地存在“亚健康”状态，甚至有人已经患有高血压、脂肪肝等常见病。所以，建议这一人群在接受上述常规体检的基础上，再增加乙肝六项、血脂全项、血尿酸、胸部拍片和五官科、口腔科等项目；40岁以上人群应加查肛门指诊，以及早发现直肠肿物；中年女性还应增加妇科、宫颈涂片检验、乳腺扫描、Ｂ超检查。3、老年人体检应全面　　高血压、冠心病、糖尿病、恶性肿瘤以及慢性呼吸道疾病等是老年人的常见病，并且由于老年人各脏器功能减退，对躯体疼痛、发热等症状反应迟钝，极易因延误治疗而损伤脏器功能。老年人定期体检有利于早期发现病情，应把内科、神经内科作为必查项目，同时接受Ｂ超、心电图、经颅多普勒、脑电图、眼底照相，以及血尿常规、血糖、血流变和肝、肾功能检查，然后再根据医生临床观察，视情增加ＣＴ等相关检查项目。此外，老年男性还应检查前列腺，老年女性应增加妇科检查及宫颈涂片检测。

[font=宋体]在生物医学研究和治疗领域，[/font][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/monoclonal-antibody-production][u][font=宋体][color=#0000ff][b][font=宋体]单克隆抗体（[/font][font=Calibri]mAbs[/font][font=宋体]）[/font][/b][/color][/font][/u][/url][font=宋体][font=宋体]扮演着越来越重要的角色。特别是在癌症和慢性疾病的治疗中，抗体的亲和力[/font][font=宋体]——即其与目标抗原结合的紧密程度[/font][/font][font=宋体]，[/font][font=宋体]直接影响[/font][font=宋体]抗体药物的[/font][font=宋体]治疗效果。因此，开发一种既准确又可靠的抗体亲和力测定方法，对于提高治疗效率和开发新型抗体药物至关重要。[/font][b][font=宋体]传统[/font][font=宋体]的亲和力测定[/font][font=宋体]技术[/font][/b][font=宋体]目前存在多种测[/font][font=宋体]定[/font][font=宋体]抗体亲和力的方法，如放射免疫[/font][font=宋体]分析[/font][font=宋体][font=宋体]、表面等离子共振（[/font][font=Calibri]SPR[/font][font=宋体]）、流式细胞术[/font][/font][font=宋体]、酶联免疫吸附分析和动力学排阻分析[/font][font=宋体]等[/font][font=宋体]。作为一种成功的候选治疗药物，[/font][font=宋体][font=Calibri]mAbs[/font][font=宋体]必须能识别目标抗原上的天然表位，因此需要一种更加快速灵敏、直观简便的测定方法。[/font][/font][b][font=宋体]基于细胞的荧光法：一种新的[/font][font=宋体]检测[/font][font=宋体]技术[/font][/b][font=宋体][font=Calibri]Yu[/font][font=宋体]等人在杜克大学医学中心的研究中，开发了一种基于细胞的荧光[/font][/font][font=宋体]检测[/font][font=宋体]法[/font][font=宋体]（如基于细胞的[/font][font=宋体][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]法[/font][/font][font=宋体]）[/font][font=宋体]，用于测[/font][font=宋体]定[/font][font=宋体][font=宋体]抗体亲和力。这种方法通过使用荧光标记的抗体，并将其加入到固定在[/font][font=Calibri]96[/font][font=宋体]孔板上的抗原阳性和抗原阴性的细胞系中，通过计算特异性结合和非特异性结合的差值来测量抗体的亲和力。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]研究者通过与传统的流式细胞术和放射性（[/font][font=Calibri]I[/font][/font][sup][font=宋体][font=Calibri]125[/font][/font][/sup][font=宋体][font=宋体]）[/font][font=Calibri]Scatchard[/font][font=宋体]分析方法进行比较，验证了基于细胞的荧光法的有效性。结果显示，新方法得到的解离常数[/font][font=Calibri]KD[/font][font=宋体]值与传统方法相当，证明了这一新技术的准确性和可靠性。[/font][/font][font=宋体]此外，研究还展示了如何使用这种荧光法进行竞争性结合分析，进一步验证了抗体与抗原的特异性结合。这一功能对于研究抗体的结合表位和选择高亲和力抗体具有重要意义。[/font][b][font=宋体]基于细胞的荧光法的优势[/font][/b][font=宋体]与[/font][font=宋体]流式细胞术和[/font][font=宋体][font=Calibri]I[/font][/font][sup][font=宋体][font=Calibri]125[/font][/font][/sup][font=宋体]比色法等[/font][font=宋体]传统方法相比，基于细胞的荧光法具有多项优势。首先，该方法不使用放射性同位素，减少了实验的安全风险。其次，使用完整的细胞而非纯化的蛋白质，能够更真实地模拟抗体与天然抗原的相互作用。此外，该方法操作简便，成本低廉，适合高通量筛选，且能够在短时间内完成大量样本的分析。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]尽管基于细胞的荧光法具有诸多优势，但也存在一些局限性。例如，对于复杂样品的处理可能会产生非特异性结合，导致结果的误判。然而，随着技术的不断优化和发展，这些问题有望得到解决。[/font][font=宋体]尽管目前还未有人利用[/font][font=宋体]基于细胞的荧光法[/font][font=宋体]来评估抗体亲和力，但是其自身具备的优势[/font][font=宋体][color=#182026]表明[/color][/font][font='Segoe UI'][color=#182026]该方法具有作为抗体亲和力检测方法的潜力[/color][/font][font=宋体]，为抗体药物的开发和研究提供强有力的支持。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][/font][font=宋体]本篇[/font][font=宋体]文章[/font][font=宋体]由[/font][font=宋体]义翘神州[/font][font=宋体]编辑[/font][font=宋体]整理[/font][font=宋体]，[/font][font=宋体]同时[/font][font=宋体]义翘[/font][font=宋体]神州[/font][font=宋体]提供[/font][url=https://cn.sinobiological.com/services/spr-bli-assay-services][u][font=宋体][color=#0000ff][b][font=Calibri]SPR/BLI[/font][font=宋体]亲和力测定服务[/font][/b][/color][/font][/u][/url][font=宋体]，[/font][font=宋体]详情[/font][font=宋体]请[/font][font=宋体]点击[/font][font=宋体]！[/font][font=宋体][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]参考文献：[/font][font=宋体][font=Calibri]Yu X, Pegram CN, Bigner DD, Chandramohan V. Development and validation of a cell-based fluorescent method for measuring antibody affinity. J Immunol Methods. 2017 442:49-53. doi:10.1016/j.jim.2016.12.004[/font][/font][font=Calibri] [/font]

附件中是IgG 抗体分子由两条重链和两条轻链通过链间二硫键共价交联，重链和轻链的每个结构域还各含有1 对链内二硫键。含完整二硫键的天然IgG 不应含有自由巯基，但抗体分子内含少量自由巯基是一种普遍现象，而且在不同IgG 分子内甚至具有相似的分布形式。在人各种IgG 分子内均检测到了三硫键的存在。本文对IgG 分子内的自由巯基和三硫键修饰作一综述

当我们要检测目的蛋白在组织中表达情况的时候，如何选择适合我们实验需要的抗体，并恰当保存使用，是每个科研人员需要细心考虑的。抗体种类繁多，品牌众多，技术参数不一，价格和质量更是相差甚大，如何购买到高质量价格合适的抗体，并准确地做出我们想要的结果，其中有很多细节需要注意。一、怎样选择适合你实验需要的抗体1. 一抗选择要点（1）确定抗体的名字，注意中英文名字、它名、亚型等信息。（2）确定你的实验类型，Elisa，WB，IHC，ICC，还是FACS。一般抗体的说明书都会列出该抗体经验证过适用于何种实验的类型，如果抗体说明书没有提及的应用类型，并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型，而仅是说明尚未经过此种实验验证，请根据说明书列出的已验证的类型来选择适合你实验的抗体。（3）确定实验样本的种属，Human，Mouse，还是Rat。一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种物种实验，请根据说明书列出已验证的种属来选择适合你实验的抗体。（4）样本蛋白的结构性质。了解样本蛋白的结构性质有助于选择最合适的抗体，待测样本蛋白的结构域和样本在提取和处理过程中是否会变性，蛋白空间构象的改变，会影响抗体的免疫亲和反应。（5）单多克隆抗体的选择。市面上的抗体还是以多克隆抗体为主，一般单克隆抗体特异性强，但亲和力相对小，检测抗原灵敏度相对就低；而多克隆抗体特异性稍弱，但抗体的亲和力强，灵敏度高，但易出现非特异性染色（可以通过封闭等避免）。2. 二抗选择要点（1）种属来源。主要根据一抗种属来源来决定购买二抗来源，如一抗是小鼠来源，那二抗就买抗小鼠的即可（羊、兔等均可）。（2）标记物的选择。有HRP、Biotin、荧光素等标记物。一般SP三步法二抗选择Biotin标记的二抗，以与后面的SP结合反应，而免疫荧光染色就需要购买不同荧光素标记的二抗，如罗丹明、FITC、Cy3等常用荧光素。二、抗体的稳定性1. 抗体的稳定性是自然界长期进化的结果。抗体是免疫系统中最重要的分子之一，其稳定性是自然进化筛选的结果。在众多物种中，抗体分子形成了保守而稳定的结构。2. 抗体分子的高Tm值。在室温下，甚至短时间温度达到50-60℃，抗体分子都能维持正确折叠，保持应有的活性。3. 抗体的纯度。采用先进的抗体纯化技术，确保抗体产品的高纯度，保障其抗体产品的稳定性。4. 抗体的浓度。高浓度的抗体产品可减少容器表面吸附造成的物质损失，高浓度的抗体稳定性更好，抗体产品中93%的浓度大于0.5mg/ml。三、怎样确定抗体购买渠道和品牌国外著名抗体品牌的质量一般没问题，但价格较贵，而且很多抗体品牌本身不生产抗体，所以能找到OEM抗体生产商生产的原装进口抗体，如美国的ProSci公司，大部分常用抗体都可以在ProSci网站上查找到，同样一支抗体能少花费1000元，对于一个普通实验室来说，那将节约非常多的科研经费，而且ProSci会提供信号通路的小包装抗体作为一个试剂盒，这样极大方便了用户，特别是经费不是很充足的用户。随着网络技术的越来越普及，我们自己就可以通过国内外的相关网站来检索，国外最大的生物试剂查询网站：biocompare，国内最大的生物试剂查询网站：丁香通，来查找我们所需要的产品资料。四、怎样保存已获得的抗体

随着生命科学的发展，围绕蛋白进行的研究越来越多，抗体试剂在实验中的重要性越来越举足轻重。面临着纷呈复杂的抗体试剂市场，如何选择到适合自己实验的抗体就变得尤为重要。一、关于特异性的选择：特异性的选择主要需要考虑四个方面：蛋白特异性、种属特异性、实验方法特异性、标记物的特异性。1、蛋白特异性：针对需要检测的蛋白查找抗体，几个细节要区分，重组表达的蛋白和内源性蛋白的检测，对抗体的要求是不一样的，注意查看抗体说明书的检测说明。如果重组蛋白不是全长表达，则需要注意抗体的免疫原区域是否在重组蛋白区域内。内源性蛋白最好能清楚其剪切与修饰的方式，特殊表型的蛋白需要进行序列比对，并结合抗体免疫原序列，查看交叉反应的情况。磷酸化蛋白检测需要确定具体位点，不同位点的磷酸化意味着可能有不同的机制存在，不宜一概而论。2、种属特异性：同种蛋白不同物种，有着或大或小的差异。目前大部分商品化抗体都是以人源蛋白序列为模板重组蛋白或设计多肽抗原的，根据蛋白的同源性情况与其他种属发生交叉反应。需要参照说明书注明的可反应种属信息。一些稀有种属很难找到抗体，可以通过蛋白的序列比对，选择同源序列免疫的抗体，不过一般这种情况生产商不会受理其关于质量的申诉，如果可以申请到免费的抗体样品，则利于抗体选择。3、实验方法特异性：目前使用抗体的实验方法有很多，不同的使用方法过程中，因为对蛋白样品的处理方式不一样，蛋白的含量有差异，对抗体的识别表位和效价要求都是不一样的。具体的根据说明书注明的产品应用方法进行选择。但是生产商一般不会将每个抗体都进行各种实验的检测，目前检测比较多的只是WB、IHC、IF等，如果针对具体的实验方法没有找到合适的抗体的，可以结合蛋白序列分析和抗体的抗原信息，选择尽可能有效果的抗体。同样，申请到免费的抗体样品是个很好的途径。4、标记物的特异性一般基于实验操作的实验方法不会使用带有标记的一抗，比如WB、IHC等，都是通过二抗类的试剂标记达到结果呈现的目的。但是基于仪器分析的一些实验，可能就会使用到直接标记的一抗，比如流式实验。那么需要了解到自己将要使用的仪器能检测到的荧光范围，针对不通的参数要求选择对应的标记物。在免疫荧光双标实验中，需要选配不同的荧光标记物。

抗核抗体（antinuclear antibody，ANA）又称抗核酸抗原抗体，是一组将自身真核细胞的各种成分脱氧核糖核蛋白（DNP）、DNA、可提取的核抗原（ENA）和RNA等作为靶抗原的自身抗体的总称，能与所有动物的细胞核发生反应，主要存在于血清中，也可存在于胸水、关节滑膜液和尿液中。抗核抗体识别是各种细胞核组分（细胞核生化成分），可特征地出现于许多疾病中。ANA鉴别诊断对于一些特定疾病的确认十分必要，而且对自身免疫性疾病的进一步诊断也很有价值。为了确保检测结果的准确性，对此相关部门对抗核抗体谱（IgG）检测制定了标准操作规程。在规程中，对于样品的要求写到，患者样本用样本缓冲液1:101稀释，如可取15μl血清用1.5ml样本缓冲液稀释并用漩涡混匀器进行充分混匀，不可用加样器混匀。选择一款稳定、高效的漩涡混匀器备显重要。化验室样品处理量大，选择一款快捷、省力的漩涡混匀器十分必要。意大利VELP推出了创新性红外感应漩涡混匀器，红外传感是VELP创新性的专利产品。VELP红外感应漩涡混匀器，一旦检测到试管，VELP漩涡混匀器自动开始震动，不需要施加任何外力，而且相比于传统的接触模式，VELP红外传感漩涡混匀器能确保在震动减少过程的急剧变化。VELP漩涡混匀器确保了样品的稳定性。VELP漩涡混匀器最大转速可以达到3000rpm，VELP漩涡混匀器可以满足大部分实验室的需求。VELP漩涡混匀器在实验中解放您的双手，让实验更快捷、更准确！

[font=宋体]抗体标记是一种生物技术，通过将标记物（如酶、荧光素、生物素等）共价连接到抗体上，使其与待检测物（如特定抗原）特异性反应，形成多元复合物。随后，借助相关仪器，可以直接观察试验结果或进行自动化测定，从而对抗原、抗体反应进行定性和定位研究，或进行定性和定量测定。下面为大家介绍几种高质量的标记抗体：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]①荧光色素标记抗体[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]这种标记方法是将荧光素与相应的抗体[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]或抗原[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]结合，将荧光标记的抗体[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]或抗原[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]与标本中相应的抗原形成荧光标记的抗体[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗原复合物，用荧光显微镜观察。在显微镜若存在荧光则意味着存在抗原抗体复合物，因此可根据已知的抗体[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]或抗原[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]推断出另一种未知抗原[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]或抗体[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]的存在。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]②[/b][url=https://cn.sinobiological.com/category/biotinylated-protein-elite][b]生物素标记抗体[/b][/url][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]抗体标记中生物素的引入使整个过程灵敏度大大提高！这种方法可使抗体或其它蛋白质的[/font][font=宋体]ε[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]氨基与酰化的生物素共价结合，生物素化的分子可以通过酶标记的抗生物素蛋白或荧光染料[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]链霉抗生物素蛋白复合物来检测。小分子水溶性生物素对链霉亲和素的高亲和力是该方法的设计基础。[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/category/biotinylated-protein-elite[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]③放射性碘标记抗体[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]蛋白质的碘标记方法有很多种，比如我们常用的化学法或酶促法通过氧化对蛋白质分子进行碘化等。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=宋体]④[/font][font=Calibri]PE[/font][font=宋体]标记抗体[/font][/b][/font][font=宋体][font=Calibri]PE[/font][font=宋体]标记抗体是指将[/font][font=Calibri]PE[/font][font=宋体]荧光染料与特定抗体结合而成的复合物，这种技术常用于生物医学研究中的荧光标记。[/font][font=Calibri]PE[/font][font=宋体]荧光染料是从红藻属藻类中提取得到的一种特殊色素，具有较高的荧光强度和稳定性。[/font][font=Calibri]PE[/font][font=宋体]标记抗体主要应用在流式细胞术和免疫组化等实验中。在流式细胞术中，[/font][font=Calibri]PE[/font][font=宋体]偶联抗体可以用于检测细胞表面标记物的表达情况，如[/font][font=Calibri]CD4[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]CD8[/font][font=宋体]等，可以实现对免疫细胞亚群的研究。在免疫组化和免疫组织化学等实验中，[/font][font=Calibri]PE[/font][font=宋体]偶联抗体可以用于检测细胞内标记物的表达，如细胞因子、转录因子等，可以深入研究细胞内信号传导通路及相关的生物学功能。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=宋体]⑤[/font][font=Calibri]PerCP[/font][font=宋体]标记抗体[/font][/b][/font][font=宋体][font=Calibri]PerCP-Cy5.5[/font][font=宋体]标记抗体是一种荧光标记的二抗，通常是在单抗上进行标记，具有很强的荧光强度和稳定性。[/font][font=Calibri]PerCP-Cy5.5[/font][font=宋体]标记抗体可以与细胞或细胞组分中的特定抗原结合，用于细胞表面标记、蛋白质定量分析、细胞周期和细胞凋亡研究等领域。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=宋体]⑥[/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]标记抗体[/font][/b][/font][font=宋体][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]标记抗体是将[/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]（异硫氰酸荧光素）与特异性抗体经适当方法连接而成的复合物。[/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]是一种荧光染料，能够与各种抗体蛋白结合，并产生强烈的荧光信号。这种标记技术常用于生物医学研究中的荧光标记，特别是在免疫学、细胞生物学和分子生物学等领域。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州除了为客户提供抗体开发，还可以提供[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-conjugation][b]抗体标记服务[/b][/url]，可提供的标记物包括[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]、生物素、荧光基团等。更多关于抗体标记及抗体标记方法详情可以参看[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-conjugation[/font][/font]

[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/bispecific-antibody][u][font=宋体][color=#0000ff]双特异性抗体[/color][/font][/u][/url][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]Bispecific Antibodies, BsAbs[/font][font=宋体]）是一种新型的生物治疗药物，它们能够同时结合两种不同的抗原，在多种疾病治疗，尤其是癌症[/font][/font][font=宋体]治疗[/font][font=宋体][font=宋体]方面展现出巨大的潜力。然而，由于[/font][font=Calibri]BsAbs[/font][font=宋体]的结构复杂性和作用机制的多样性，为它们的生物活性检测和表征带来了挑战。本文将探讨[/font][font=Calibri]BsAbs[/font][font=宋体]的生物活性检测策略，并结合案例研究，提供对这一领域的深入见解。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]BsAbs[/font][font=宋体]的结构多样性与作用机制[/font][/font][/b][font=宋体][font=Calibri]BsAbs[/font][font=宋体]的设计和开发受益于对传统单克隆抗体（[/font][font=Calibri]mAbs[/font][font=宋体]）的深入了解。它们具有与常规[/font][font=Calibri]mAb[/font][font=宋体]相似的表位特异性和可[/font][/font][font=宋体]改造[/font][font=宋体]性，[/font][font=宋体]可[/font][font=宋体]以结合两个不同的[/font][font=宋体]抗原位点[/font][font=宋体][font=宋体]。[/font][font=Calibri]BsAbs[/font][font=宋体]的结构非常多样化，取决于预期的作用机制（[/font][font=Calibri]MoA[/font][font=宋体]）和所需的药代动力学[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]药效学（[/font][font=Calibri]PK/PD[/font][font=宋体]）特性。[/font][font=Calibri]BsAbs[/font][font=宋体]的作用机制大致可分为四类：细胞桥接型、受体[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]配体阻断或激活型、辅助因子模拟型和“归巢”型。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]BsAbs[/font][font=宋体]生物活性检测的挑战与策略[/font][/font][/b][font=宋体][font=宋体]开发[/font][font=Calibri]BsAbs[/font][font=宋体]的生物活性检测方法需要[/font][/font][font=宋体]深入理解[/font][font=宋体]其分子的作用机制，以及[/font][font=宋体]全面了解[/font][font=宋体]不同生物分析方法的原理和应用。生物活性检测对于生物制品的表征和控制至关重要，也是解释临床研究结果的关键。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1. [/font][/font][font=宋体]分阶段检测[/font][font=宋体]方法[/font][font=宋体]对于生物治疗药物的生物活性检测，行业和监管机构普遍接受分阶段[/font][font=宋体]检测[/font][font=宋体][font=宋体]的方法。在产品开发的早期阶段，通常首选结合方法进行检测。随着产品开发的推进，更复杂的、反映[/font][font=Calibri]MoA[/font][font=宋体]的基于细胞的生物活性检测方法被开发出来，并在上市申请提交前进行验证。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2. [/font][font=宋体]作用机制驱动的设计[/font][/font][font=宋体][font=宋体]生物活性检测策略是由药物预期的生理[/font][font=Calibri]MoA[/font][font=宋体]驱动的。与其它分析技术不同，生物活性检测针对每[/font][/font][font=宋体]种[/font][font=宋体]治疗药物[/font][font=宋体]都是[/font][font=宋体]独一无二的。一个设计良好的生物活性检测[/font][font=宋体]方法[/font][font=宋体]能够准确捕捉药物候选物的生物活性。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3. [/font][font=宋体]整体[/font][font=Calibri]BsAbs[/font][font=宋体]表征策略[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]BsAbs[/font][font=宋体]的效力和安全性评估依赖于成功开发一个药理学和临床相关生物分析策略，该策略能够反映双[/font][/font][font=宋体]特异性[/font][font=宋体]抗体的生物活性，并能够区分高[/font][font=宋体]级[/font][font=宋体]结构、效力和[/font][font=宋体]疗效[/font][font=宋体]。[/font][font=宋体]其中[/font][font=宋体][font=宋体]重要的是开发表征和生物分析方法来研究重要的质量属性，包括整体稳定性、片段化[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]聚集[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]免疫原性、抗原特异性、亲和力、结合和解离速率、双靶点结合的亲和力（对于在同一细胞上的两个靶点的分子）和[/font][font=Calibri]MoA/[/font][font=宋体]生物活性。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]BsAbs[/font][font=宋体]生物活性检测案例研究[/font][/font][/b][font=宋体][font=Calibri]1. ELISA[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]SPR[/font][font=宋体]技术[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]SPR[/font][font=宋体]技术常用于表征[/font][font=Calibri]BsAbs[/font][font=宋体]的体外抗原结合特性。[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]具有灵敏度高、开发速度快[/font][/font][font=宋体]和[/font][font=宋体][font=宋体]成本相对较低等优点，而[/font][font=Calibri]SPR[/font][font=宋体]能够实时监测结合事件，提供动力学和热力学参数。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2. [/font][font=宋体]细胞表面配体结合检测[/font][/font][font=宋体][font=宋体]通过流式细胞术和基于细胞的报告基因分析，可以评估[/font][font=Calibri]BsAbs[/font][font=宋体]与其目标的结合特异性和选择性，这些信息在传统的[/font][font=Calibri]SPR[/font][font=宋体]或[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]基础结合分析中无法捕获。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3. [/font][font=宋体]效力检测[/font][/font][font=宋体][font=宋体]针对[/font][font=Calibri]BsAbs[/font][font=宋体]的效力检测策略具有挑战性，因为其复杂的[/font][font=Calibri]MoA[/font][font=宋体]涉及两个[/font][/font][font=宋体]靶点[/font][font=宋体][font=宋体]结合。效力检测应该根据[/font][font=Calibri]MoA[/font][font=宋体]进行定制，同时满足[/font][font=Calibri]QC[/font][font=宋体]和监管[/font][/font][font=宋体]部门的要求[/font][font=宋体]，成为稳[/font][font=宋体]定[/font][font=宋体]和灵敏的方法，以检测稳定性中的任何结构变化。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4. [/font][font=宋体]效应功能检测[/font][/font][font=宋体][font=宋体]一些[/font][font=Calibri]BsAbs[/font][/font][font=宋体]通过[/font][font=宋体]靶向细胞表面蛋白或受体[/font][font=宋体]来[/font][font=宋体]增强[/font][font=宋体][font=Calibri]ADCC[/font][/font][font=宋体][font=宋体]效应功能。根据[/font][font=Calibri]MoA[/font][font=宋体]和其他分子特异性因素，效应功能可能与[/font][/font][font=宋体]一些[/font][font=宋体][font=宋体]安全事件相关，因此，优选效应功能减弱的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]区域。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]结论[/font][/b][font=宋体][font=Calibri]BsAbs[/font][/font][font=宋体]是[/font][font=宋体]一个[/font][font=宋体]极具前景的[/font][font=宋体][font=宋体]新兴治疗领域。由于[/font][font=Calibri]BsAbs[/font][font=宋体]与单特异性抗体在结构和生物学上的差异，为[/font][font=Calibri]BsAbs[/font][font=宋体]开发生物活性检测策略带来了独特的挑战和考虑。本文[/font][/font][font=宋体]总结[/font][font=宋体][font=宋体]了目前可用的生物分析技术平台、生物活性检测方法和相关的案例研究，以提供对设计[/font][font=Calibri]BsAbs[/font][font=宋体]放行和表征策略的见解。[/font][/font][font=宋体]了[/font][font=宋体][font=宋体]解和开发良好的生物活性检测对于[/font][font=Calibri]BsAbs[/font][font=宋体]的整体控制策略至关重要，它们将[/font][/font][font=宋体]随着[/font][font=宋体][font=Calibri]BsAbs[/font][font=宋体]分子和[/font][/font][font=宋体]现有[/font][font=宋体]分析技术的发展[/font][font=宋体]而不断发展[/font][font=宋体]。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]本文[/font][font=宋体]由[/font][font=宋体]义翘[/font][font=宋体]神州[/font][font=宋体]进行[/font][font=宋体]整理[/font][font=宋体]，[/font][font=宋体]同时[/font][font=宋体]提供快速高效的[/font][url=https://cn.sinobiological.com/services/bispecific-antibody-service][u][font=宋体][color=#0000ff]双特异性抗体表达服务[/color][/font][/u][/url][font=宋体][font=宋体]。从抗体序列开始，我们可以表达多种双特异性抗体形式，如[/font][font=Calibri]BiTE[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Diabody[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]CrossMab[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]DVD-IgG[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]参考文献：[/font][font=宋体][font=Calibri]Register AC, Tarighat SS, Lee HY. Bioassay Development for Bispecific Antibodies-Challenges and Opportunities.[/font][/font][font=Calibri] Int J Mol Sci. 2021 22(10):5350. Published 2021 May 19. doi:10.3390/ijms22105350[/font]

[font=宋体][font=Calibri]wb[/font][font=宋体]抗体选择单克隆还是多克隆抗体呢？首先要看你做的是什么物种，根据物种特异与否选择单抗或者多抗。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]一般小鼠、大鼠等常用模式动物可以选择鼠源单克隆抗体，其特异性较好，如果是不常见动物模型，建议选择多克隆抗体。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]当然，单抗或者多抗也不是一定的，需要去查询抗原决定簇的归属，一般是找到抗体所对应的特异氨基酸序列，到数据库与你要做的物种进行比对，如果匹配度较高（[/font][font=Calibri]85%[/font][font=宋体]以上），则建议购买尝试。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]二抗的选择相对就简单了，根据一抗的种属特异性进行二抗选择即可。[/font][font=宋体][font=宋体]如一抗选用鼠源（[/font][font=Calibri]Mouse[/font][font=宋体]）抗体，则二抗选用抗小鼠抗体即可（[/font][font=Calibri]e.g. Goat Anti-Mouse[/font][font=宋体]），注意二抗的反应特性（荧光、生物素或[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]偶联等）[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]其次就是多查阅文献，查看和[/font] [font=Calibri]Western Blot [/font][font=宋体]实验相关的 [/font][font=Calibri]SCI [/font][font=宋体]文献，查看要做的种属和指标关联度高的文献。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]Western Blot [/font][font=宋体]实验应该如何选择一抗和二抗[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]抗体分类：根据重链恒定区的血清学类型，可将抗体分为[/font] [font=Calibri]IgM[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]IgA[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]IgD[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]IgE [/font][font=宋体]五类，它们的重链分别为 [/font][font=Calibri]mu, gamma, alpha, delta, epsilon [/font][font=宋体]链。在上述每一类别中，按重链构造上的变异又可分为几个亚类，例如人的 [/font][font=Calibri]IgG [/font][font=宋体]可分为 [/font][font=Calibri]IgG1[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]IgG2[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]IgG3[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]IgG4 [/font][font=宋体]四个亚类。 轻链分为两种类型，[/font][font=Calibri]kappa[/font][font=宋体]链和[/font][font=Calibri]lambda[/font][font=宋体]链，但每种抗体中只存在一种类型的轻链。 [/font][/font][font=宋体][font=宋体]二抗：二抗是在其它宿主体内制备的能与一抗或一抗片段结合的抗体，上面通常连有酶或荧光素等标签。由于二抗所具备的优点使得其在免疫学实验中得以应用广泛，如[/font] [font=Calibri]western blot[/font][font=宋体]（通过与特异性抗体结合来鉴定蛋白质），[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]（以耦联有酶的抗体或抗原为标记来检测特异性的蛋白质，尤其是相应的抗原或抗体），免疫组织化学（检测组织中的特异性抗原），免疫细胞化学（通过免疫学方法检测细胞的抗原组成），流式细胞术（通过检测激光所激发荧光来鉴定分离不同类型的细胞）及免疫沉淀（通过抗原与抗体的特异性结合作用来分离相应抗原）。二抗针对某一特定物种（如小鼠）的所有抗体均具有特异性，因而使用标记的二抗可以免去对每一个一抗进行标记，大大节省了时间和费用；此外，一个一抗分子可以同时结合几个二抗分子，从而使信号大大增强，提高了实验灵敏度。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=宋体]如何选择二抗[/font][font=宋体]——根据一抗种属及类型选择合适的二抗[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]广义上是指专门和进行特异性反应和结合的抗体，在免疫学反应中，经常需要针对试验选择不同的二抗，上海信帆生物科技有限公司为您的科研工作提供适合和全面的二抗产品。检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择，同时在后继试验中也会有不同的检测方案，因此在选择二抗的时候要综合考虑一抗的类型及后继检测方案的要求，一般来说，选择合适的二抗需要从下面几个方面考虑：【一抗的种属来源】[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]二抗应选用与使用的一抗相同的物种来源，例如：如果你的一抗是小鼠源的单克隆抗体，二抗则选抗小鼠的二抗（山羊抗小鼠或者兔抗小鼠等均可）；如果一抗是从兔血清里制备的兔源多克隆抗体，则相应的二抗需要选择抗兔的二抗。即根据一抗的物种来源选择相应的抗该物种的二抗。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]二抗需与一抗的类别或亚类相匹配。这通常是针对单克隆抗体而言。多克隆抗体主要是[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]类免疫球蛋白，因此相应的二抗就是抗 [/font][font=Calibri]IgG [/font][font=宋体]抗体。其中单克隆抗体的类别及亚类通常会在产品说明书中都会有描述，如果你的一抗是小鼠 [/font][font=Calibri]IgM[/font][font=宋体]，那么相应的二抗就应当是抗小鼠 [/font][font=Calibri]IgM[/font][font=宋体]。如果单克隆一抗是小鼠 [/font][font=Calibri]IgG [/font][font=宋体]的某一亚类（[/font][font=Calibri]IgG1[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]IgG2a[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]IgG2b[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]IgG3[/font][font=宋体]），那么几乎所有的抗小鼠 [/font][font=Calibri]IgG [/font][font=宋体]都可以与之结合，或者你也可以选择专门针对这一亚类的二抗，例如，如果你的一抗是小鼠 [/font][font=Calibri]IgG1[/font][font=宋体]，那么你可以选择抗[/font][font=Calibri]IgG1 [/font][font=宋体]的二抗，此种抗体在双标记实验中尤其适合。在不清楚一抗为何种类[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]亚类的情况下，可以选用抗相应物种 [/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]一般来说，不同的种属来源与二抗的质量没有必然的联系，来源于山羊的二抗与来源于驴的二抗在一般的实验里没有太多的差别。然而在一些特殊的实验里，如双标实验里，如果其中一个一抗是山羊来源的，一个是小鼠来源的，则相应的二抗分别要抗山羊和抗小鼠的二抗，这时候，二抗就不能选择山羊或者小鼠来源的。有相应的驴来源的二抗，非常适合做类似双标的免疫实验。【二抗的耦联标记】[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]一般来讲，耦联到二抗上的探针主要有酶（辣根过氧化酶[/font] [font=Calibri]HRP [/font][font=宋体]和碱性磷酸酶 [/font][font=Calibri]AP [/font][font=宋体]或其衍生物，[/font][font=Calibri]PAP[/font][font=宋体]），荧光基团（[/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]、 [/font][font=Calibri]Rhodamine[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Texas Red[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]PE[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Rhodamine[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Dylight [/font][font=宋体]等）、生物素、金颗粒。选用哪种探针的二抗主要取决于具体的实验。对于 [/font][font=Calibri]Western Blot [/font][font=宋体]和 [/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]，常用的二抗是酶标二抗；而细胞或组织标记实验（细胞免疫化学，组织免疫化学，流式细胞术）中通常使用荧光基团标记的二抗，免疫组化中也可以使用辣根过氧化酶或碱性磷酸酶标记的二抗。如果想要更大程度的放大检测信号，可以使用 [/font][font=Calibri]Biotin/Avidin[/font][font=宋体]检测系统。在一些荧光检测方案中，则需要选择不同的荧光标记；而金颗粒标记的二抗则更多的应用于免疫电镜中。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供单抗和多抗制备服务，同时有[/font][font=Calibri]Western Blot[/font][font=宋体]检测服务，详情可以关注[/font][/font][font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/polyclonal-antibody-production-services][b]多克隆抗体制备服务[/b][/url]：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/polyclonal-antibody-production-services[/font][/font][font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/monoclonal-antibody-production-services][b]单克隆抗体定制服务[/b][/url]：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/monoclonal-antibody-production-services[/font][/font][font=宋体][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/services/western-blot-wb-service][b]Western Blot[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/western-blot-wb-service][b]检测服务[/b][/url]：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/western-blot-wb-service[/font][/font][font=Calibri] [/font]

[font=宋体]什么是抗体开发？抗体开发包含了抗体生成和表征的全过程。首先，将目的抗原注射入实验动物体内，使其免疫系统生成大量抗体。[/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-development][b]抗体开发[/b][/url]的方法各有不同。例如，多克隆抗体可直接从血清中纯化，而单克隆抗体则需要先培养杂交瘤或先构建噬菌体展示抗体库。[/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州作为行业领先的抗体研发公司，提供从抗原合成、研发和生产的一站式[/font][font=Calibri]CRO[/font][font=宋体]服务。通过我们的抗体制备平台，我们随时准备帮助您应对研究中遇到的严峻挑战。[/font][/font][b][font=宋体]义翘神州提供抗体定制开发服务：[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]快速单克隆抗体开发、[url=https://cn.sinobiological.com/services/fast-antibody-service][b]快速多克隆抗体开发[/b][/url]、磷酸化抗体定制服务、[url=https://cn.sinobiological.com/services/anti-idiotype-antibody-service][b]抗独特型抗体服务[/b][/url][/font][b][font=宋体]抗体开发技术平台：[/font][/b][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供一站式的定制抗体开发服务，包括多克隆抗体开发、单克隆抗体开发，以及针对特定应用的抗体开发，例如[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]、蛋白免疫印迹、免疫组化和流式细胞术。多年来，从抗原设计到抗体纯化和鉴定，我们花费了多年时间优化和调整抗体开发过程中的关键参数。我们以自主研发的技术和极具竞争力的效率为优势，为客户提供专业服务。由我们开发的高成功率和更高质量的抗体将使我们的客户受益其中。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]①抗原制备[/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州利用计算机辅助模拟和设计机制，开发出应用在多肽抗原设计中的自主研发技术。这种经过优化的方法大大地提高了抗体的质量和成功的概率。义翘神州还成功制备出[/font][font=Calibri]6000[/font][font=宋体]多种重组蛋白质，可线上购买，作为抗原用于免疫反应和筛选。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]②优化小鼠杂交瘤技术[/font][font=宋体]义翘神州多年来一直致力于优化小鼠杂交瘤技术，极大程度提高抗体质量和成功率。因此，义翘神州已经开发出适用多种应用的优质抗体。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]③自主研发二代兔单克隆技术[/font][font=宋体]义翘神州花费多年时间优化其自主研发的兔单克隆抗体开发平台，该平台能以合理的成本制备出高亲和力的抗体。义翘神州曾利用该平台制备出优质兔单克隆抗体产品作为目录产品，还为定制客户开发过治疗性抗体候选产品，并取得了巨大的成功。义翘神州利用这一先进平台助力于全球客户开发兔单克隆抗体，作为试剂或治疗性候选产品。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]④重组抗体生产[/font][font=宋体][font=宋体]经过多年的工艺开发，义翘神州已建立四种抗体生产平台，可用于快速高通量抗体生产和大规模抗体批量生产。从基因序列到纯化抗体（[/font][font=Calibri]10[/font][font=宋体]克），只需几周时间，即可将成品送至您手中。义翘神州拥有先进的技术，极大节省了抗体生产的时间和成本。很多大型医药公司都利用我们的平台来支撑他们的抗体研究和开发项目。在过去的几年里，我们实现了几乎[/font][font=Calibri]100%[/font][font=宋体]的成功率，生产了成千上万的高质量单克隆抗体产品。为制药和生物技术领域客户带来了好的业务发展和市场营销。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]⑤抗体应用验证平台[/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州建立了多个抗体应用验证平台，包括[/font][font=Calibri]WB[/font][font=宋体]检测平台、免疫组化（[/font][font=Calibri]IHC[/font][font=宋体]）检测平台、流式（[/font][font=Calibri]FACS[/font][font=宋体]）检测平台、免疫荧光（[/font][font=Calibri]IF[/font][font=宋体]）检测平台以及免疫沉淀（[/font][font=Calibri]IP[/font][font=宋体]）检测平台。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]详情可以关注义翘神州抗体开发页面。[/font][font=宋体][font=宋体]文章来源：抗体开发[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-development[/font][/font][font=Calibri] [/font]

[font=宋体]主流的[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-development][b]抗体开发平台[/b][/url]有多个，其中最常用的是基于杂交瘤技术的平台。该技术通过将免疫细胞与肿瘤细胞融合，产生能够产生抗体的杂交瘤细胞，从而制备出单克隆抗体。随着技术的发展，基于噬菌体展示技术的平台也逐渐成为主流。该技术通过将抗体片段与噬菌体蛋白融合，展示在噬菌体表面，从而筛选出具有所需特性的抗体。此外，基于转基因小鼠技术的平台也是常用的抗体开发平台之一。这些平台为抗体开发提供了强大的技术支持，使得研究人员能够快速、高效地开发出针对特定抗原的抗体。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供一站式的[url=https://cn.sinobiological.com/services/custom-antibody-services][b]定制抗体开发服务[/b][/url]，包括多克隆抗体开发、单克隆抗体开发，以及针对特定应用的抗体开发，例如[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]、蛋白免疫印迹、免疫组化和流式细胞术。多年来，从抗原设计到抗体纯化和鉴定，我们花费了多年时间优化和调整抗体开发过程中的关键参数。我们以自主研发的技术和极具竞争力的效率为优势，为客户提供专业服务。由我们开发的高成功率和更高质量的抗体将使我们的客户受益其中。下面是义翘神州抗体开发平台：[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]①抗原制备[/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州利用计算机辅助模拟和设计机制，开发出应用在多肽抗原设计中的自主研发技术。这种经过优化的方法大大地提高了抗体的质量和成功的概率。义翘神州还成功制备出[/font][font=Calibri]6000[/font][font=宋体]多种重组蛋白质，可线上购买，作为抗原用于免疫反应和筛选。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]②优化小鼠杂交瘤技术[/font][font=宋体]义翘神州多年来一直致力于优化小鼠杂交瘤技术，极大程度提高抗体质量和成功率。因此，义翘神州已经开发出适用多种应用的优质抗体。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]③自主研发二代兔单克隆技术[/font][font=宋体]义翘神州花费多年时间优化其自主研发的兔单克隆抗体开发平台，该平台能以合理的成本制备出高亲和力的抗体。义翘神州曾利用该平台制备出优质兔单克隆抗体产品作为目录产品，还为定制客户开发过治疗性抗体候选产品，并取得了巨大的成功。义翘神州利用这一先进平台助力于全球客户开发兔单克隆抗体，作为试剂或治疗性候选产品。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]④重组抗体生产[/font][font=宋体][font=宋体]经过多年的工艺开发，义翘神州已建立四种抗体生产平台，可用于快速[url=https://cn.sinobiological.com/services/high-throughput-antibody-production-service][b]高通量抗体生产[/b][/url]和大规模抗体批量生产。从基因序列到纯化抗体（[/font][font=Calibri]10[/font][font=宋体]克），只需几周时间，即可将成品送至您手中。义翘神州拥有先进的技术，极大节省了抗体生产的时间和成本。很多大型医药公司都利用我们的平台来支撑他们的抗体研究和开发项目。在过去的几年里，我们实现了几乎[/font][font=Calibri]100%[/font][font=宋体]的成功率，生产了成千上万的高质量单克隆抗体产品。为制药和生物技术领域客户带来了好的业务发展和市场营销。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]⑤抗体应用验证平台[/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州建立了多个抗体应用验证平台，包括[/font][font=Calibri]WB[/font][font=宋体]检测平台、免疫组化（[/font][font=Calibri]IHC[/font][font=宋体]）检测平台、流式（[/font][font=Calibri]FACS[/font][font=宋体]）检测平台、免疫荧光（[/font][font=Calibri]IF[/font][font=宋体]）检测平台以及免疫沉淀（[/font][font=Calibri]IP[/font][font=宋体]）检测平台。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以关注[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-development[/font][/font]

[font=宋体]本文主要介绍了单克隆抗体与多克隆抗体的定义，并介绍单抗、多抗在制备流程、特点及应用上的区别。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]单抗与多抗的定义：[/b][/font][font=宋体][font=宋体]抗原上可以引起机体产生抗体的分子结构叫做抗原决定簇，也称为抗原表位。一个抗原可以有许多不同的抗原决定簇，因此，机体也可以产生多种不同的抗体。由单一[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞克隆产生的高度均一、仅识别某一特定抗原表位的抗体，称为单克隆抗体（单抗）。而由多个[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]淋巴细胞克隆产生的，受到多种抗原决定簇刺激并可以与多种抗原表位结合的抗体就是多克隆抗体（多抗）。从某种角度而言，多抗是多种单抗的混合物。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]单抗和多抗制备上的区别：[/b][/font][font=宋体][font=宋体]经过特定抗原处理过的[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]淋巴细胞与骨髓瘤细胞通过细胞融合的方法得到杂交瘤细胞，经[/font][font=Calibri]HAT[/font][font=宋体]培养基筛选、[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]检测效价后就得到阳性克隆株，最后进行细胞培养或将细胞注入到动物（一般为[/font][font=Calibri]balb/c[/font][font=宋体]小鼠）腹腔中用腹水培养，收集上清[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]腹水纯化后就能得到单克隆抗体。而制备多克隆抗体就没有单克隆抗体繁琐，只需将抗原（纯度越高越好）直接注入到动物体内进行免疫，经过[/font][font=Calibri]3~4[/font][font=宋体]次免疫，[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]测其效价合格后，收集血液离心得到上清，纯化后即能得到多克隆抗体。因此多抗制备周期比单抗的短，多抗首次制备价格也比单抗要低。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]单抗多抗应用上的区别：[/b][/font][font=宋体][font=宋体]单抗和多抗都有各自鲜明的特点与优势。单克隆抗体的特异性高，一旦制备成功就可以永续的生产完全一致的单克隆抗体，因此可以对其特异性进行全面、系统地验证。但如果所识别的抗原表位被破坏，实验的结果将会受到很大的影响，这也是单抗的缺点之一。而多克隆抗体的特异性较差，即使是使用相同的抗原制备多抗，不同批次间也会存在差异，因而在特异性、一致性方面有很大的局限。所以在用多抗做免疫检测时，更容易造成背景，例如在[/font][font=Calibri]WB[/font][font=宋体]中有杂带，在[/font][font=Calibri]IHC[/font][font=宋体]中背景较深等等。虽然还存在着交叉反应[/font][font=Calibri]*[/font][font=宋体]的问题，但由于多抗识别多个抗原表位，即使是有少数几个抗原表位被破坏或者抗原构象改变，实验的结果也不会受到影响。在相同条件下，使用多抗可以提高检测的灵敏度，对于丰度偏低的蛋白也更容易检出。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]如果对抗体的特异性要求高，用量较大或需要长期使用一致的抗体，制备的抗体应用要求多（[/font][font=Calibri]WB/IP/IF/ICC[/font][font=宋体]等[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]，可以选择制备单克隆抗体。若对抗体的特异性要求不高，需要做沉淀和凝集反应的检测性实验或者只需做[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]检测，可以选择制备多克隆抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州是一家抗体试剂和定制抗体的领先供应商，目前已成功交付了数以万计的抗体项目，客户涵盖科研院校、生物制药公司、诊断公司和其他生物技术公司等。目前提供单克隆抗体定制服务和多克隆抗体定制服务。想了解更多关于单抗和多抗区别详情可以查看：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/monoclonal-antibody-production-services[/font][/font][font=宋体][font=宋体]多克隆抗体定制服务：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/polyclonal-antibody-production-services[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]单克隆抗体制备：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/monoclonal-antibody-production[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=Calibri] [/font]

[font=宋体][font=宋体]抗体标记，作为生物学和医学领域的关键技术，它的核心在于将标记物（如酶、荧光素、生物素等）以共价的方式连接到抗体上。这一过程犹如赋予抗体一双[/font][font=宋体]“魔法眼睛”，使其能够精准地识别并结合特定的抗原。抗体与标记物的结合，再与待检测抗原发生特异性反应，形成一种多元复合物。这种复合物的形成，不仅增强了检测的灵敏度，也提高了识别的特异性。这一特性使得抗体标记技术在生物学、医学和生物工程领域中发挥着举足轻重的作用。借助高端的仪器设备，如荧光显微镜、射线测量仪、酶标检测仪、电子显微镜和发光免疫测定仪等，我们能够直接观察或自动化测定试验结果。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]这不仅在细胞、亚细胞、超微结构及分子水平上对抗原、抗体反应进行深入的定性和定位研究，还为各种[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]和固相免疫分析方法提供了强大的技术支持，从而在体液中的半抗原、抗原进行精准的定性和定量测定。如今，抗体标记技术已经成为医学病理学、免疫组织化学、分子生物学、生物制药等领域不可或缺的分析与研究工具。而酶标记法、生物素化标记法、荧光素标记法和胶体金标记法等常见的抗体标记技术，更是推动了相关领域的飞速发展。抗体标记技术，不仅为我们打开了一扇探索生物微观世界的大门，更为相关领域的研究与应用提供了强大的技术支持。在未来的生物学、医学和生物工程研究中，抗体标记技术无疑将继续发挥其无可替代的作用。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]常用的抗体标记技术[/font][/b][font=宋体][b][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]抗体的酶标记法[/font][/b][/font][font=宋体]通过共价键经适当方法将酶联结在抗体上，制成酶标抗体，再借酶对底物的特异催化作用，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，这些有色产物可用肉眼、光学显微镜和电子显微镜观查，也可以用分光光度计测定，呈色反应显示了酶的存在，从而证明发生了相应的免疫反应。[/font][font=宋体][font=宋体]实验中使用偶联剂使酶与抗体结合，即通过应用单、双或多功能试剂，分别与大分子的抗体所存在的功能性基团发生反应，生成酶[/font][font=宋体]—抗体偶联复合物。不同的酶—抗体复合物制备方法中，最广泛应用的戊二醛法，本法与其它偶联方法相比，具有操作简单、反应条件温和，及实用面广等长处。[/font][/font][font=宋体]酶标记抗体的质量主要取决于纯度好、活性强及亲和力高的酶和抗体，其次要有良好的制备方法。高质量的抗体则可通过提取纯化而获得。在制备方法上，宜选用产率高、不影响结合物的活性和不混杂干扰性物质且操作简便易行的方法。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1) [/font][font=宋体]辣根过氧化物酶[/font][font=Calibri](HRP)[/font][/font][font=宋体][font=宋体]辣根过氧化物酶（[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]）标记单抗和多克隆抗体的常用方法是过碘酸钠法。其原理是[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]的糖基用过碘酸钠氧化成醛基，加入抗体[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]后该醛基与 [/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]氨基结合，形成[/font][font=Calibri]Schiff[/font][font=宋体]氏碱。为了防止[/font][font=Calibri]HRP[/font][font=宋体]中糖的醛基与其自身蛋白氨基发生偶合，在用过碘酸钠氧化前先用二硝基氟苯阻断氨基。氧化反应末了，用硼氢化钠稳定[/font][font=Calibri]Schiff[/font][font=宋体]氏碱。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2) [/font][font=宋体]碱性磷酸酶（[/font][font=Calibri]AKP[/font][font=宋体]）[/font][/font][font=宋体][font=宋体]碱性磷酸酶（[/font][font=Calibri]AKP[/font][font=宋体]）用于标记抗体，常用戊二醛一步法，将酶和单抗混合，再加入适量戊二醛，使酶和抗体蛋白的[/font][font=Calibri]NH2[/font][font=宋体]分别与两个醛基结合，制备成结合物。该法简便，但所得产物不均一，抗体活性损失大，酶标记率低。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]抗体的生物素化标记[/font][/b][/font][font=宋体][font=宋体]亲和素与生物素都可与蛋白质[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]包括抗原、抗体、酶等[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]、荧光素等分子结合而不影响后者的生物活性，是理想的标记剂。一个抗体分子可偶联数十个生物素或亲和素分子，而亲和素或生物素分子又可与酶或荧光素结合，从而组成一个生物放大系统，显著提高检测的灵敏度。常用的有亲和素–生物素标记法[/font][font=Calibri](Labeled avidin biotin[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]LAB)[/font][font=宋体]、亲和素[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]生物素桥法[/font][font=Calibri](bridged avidin biotin, BAB)[/font][font=宋体]和亲和素[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]生物素[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]过氧化物酶复合物法[/font][font=Calibri](avidin biotin peroxid ase complex[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]ABC)[/font][font=宋体]。本实验可使抗体或其它蛋白质的ε[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]氨基通过手臂与酰化的生物素共价结合。其后，生物素化的分子可应用酶标[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]亲和素或荧光染料[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]链霉亲和素复合物来检测。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]3.[/font][font=宋体]抗体的荧光标记法[/font][/b][/font][font=宋体][font=宋体]荧光抗体标记技术是将荧光素以化学方法与特异性抗体共价结合，形成荧光素[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]蛋白质结合物（即荧光标记抗体），此结合物仍保留着抗体活性，同时具有荧光素的示踪作用。当它与相应的抗原特异结合后，借助于荧光显微镜观察呈现明亮的特异荧光。实验中常用异硫氰基荧光黄（[/font][font=Calibri]fluorescein isothiocyanate, FITC[/font][font=宋体]）作为标记物，在碱性溶液中，[/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]上的化学基团异硫氰基（[/font][font=Calibri]-N=C=S[/font][font=宋体]）与抗体蛋白自由氨基（主要是赖氨酸的ε[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]氨基）结合，形成荧光抗体，以测定细胞相应抗原的存在。[/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]具有很高的量子产量（发射光与吸收光的比值[/font][font=Calibri],0 .85[/font][font=宋体]），而且形成的偶联物的稳定性很好。[/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]是应用最广的荧光染料，流式细胞仪就按[/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]的特性，设计了激光波长为[/font][font=Calibri]488 nm,[/font][font=宋体]很接近于[/font][font=Calibri]FITC[/font][font=宋体]的最大激发波长[/font][font=Calibri]492nm[/font][font=宋体]）。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]4.[/font][font=宋体]免疫胶体金标记抗体及检测抗原[/font][/b][/font][font=宋体]胶体金是一种常用的标记技术，是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术，有其独特的优点。近年已在各种生物学研究中广泛使用。在临床使用的免疫印迹技术几乎都使用其标记。同时在流式、电镜、免疫、分子生物学以至生物芯片中都可能利用到。[/font][font=宋体][font=宋体]胶体金在光镜和电镜中均为有效的标记物，可以检测单一和多重抗原。胶体金在电解质中不稳定，但被蛋白质包被的胶体金是稳定的。一般常用免疫球蛋白或蛋白[/font][font=Calibri]A[/font][font=宋体]包被胶体金，可作标记二抗进行免疫检测，本方法应用范围广，染色后的样品可以长期保存。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-conjugation][b]抗体标记[/b][/url]详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-conjugation[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b][font=Calibri] [/font]