支原体感染检测

最近我养细胞发现小黑点现象很严重，原来对“黑胶虫”一说嗤之以鼻，认为那不过是自欺欺人的借口，觉得怎么也不会发生在自己身上。但是真的就碰上了：要来的细胞传代以后就出现细胞间黑点，细胞空泡化，很多类似凋亡、坏死的细胞，最终细胞漂浮，完全死亡。上述现象很像所谓的“黑胶虫”。我感觉实际是支原体感染以后细胞生长不好造成的碎片和感染原虫的混合体。这种现象的直接原因是支原体等原虫感染，间接表象是小黑点，被以讹传讹成为了“黑胶虫”。光镜下看不到支原体，但是可以看到支原体感染的终末现象——细胞凋亡坏死，释放出大量碎片，看起来就像小黑虫子。查找类似的帖子——很多人是更换血清后出现这种问题；说空气传播的可能是一个培养箱的人都用了同一种血清，而不是可以通过培养箱空气传播；感染最可能是牛源性的支原体，通过产道或血行感染，所以兽用的泰乐菌素比较有效。用plasmocin等抗支原体的药物有效;用巨噬细胞共培养有效（吞噬支原体）；很多人更换进口血清就好了。感染也有个疾病谱，在质和量上从低烈度到高烈度，所谓“细胞生长不受影响”，其实是感染的烈度不高而已；烈度高的感染就出现细胞大量空泡形成，细胞间空旷地带出现大量黑点，细胞最终凋亡、坏死，漂起来。有些国产血清写着建议灭活，其实是挂羊头卖狗肉，那个56度30分钟更多的是为了杀杀支原体的。实际上也有杀不死的。但可以降低产品的风险。我用阿奇霉素（有针对支原体衣原体功效）75-100ug/ml的浓度洗了细胞和加入培养基中，小黑点确实明显抑制。不过我想根治就很难了。据说invivogen公司的plasmocin可以根治，不过就成本来说不如直接更换血清。以上是自己个人总结的一点看法。建议不要总拿子虚乌有的“黑胶虫”来说事。多考虑看不到的支原体，不要还停留在培根时代——只相信自己眼睛看见的。

由于工作的需要需要在7月1日前完成 欧洲药典6.1版2.6.7支原体检查法（若不是6.1版或USP也可，能够作为参照）的翻译愿以50分酬谢～～～～～～希望大家帮助，谢谢

多项研究发现，缺维生素A和维生素D，和对多种感染性疾病的抵抗力差有关。这不仅与新冠病毒有关，还和支原体肺炎有关。缺乏这两种维生素的人，会有更大风险感染严重的支原体肺炎，新冠病毒重症的风险也会增加。

由于传播途径多样、影响范围广泛，症状发展迅速，传染病仍然是世界范围内引起人类大量死亡的重要原因。21世纪以来多次严重疫情给我们留下深刻印象：一是2003年的“非典”（SARS），二是2009年的甲型H1N1流感（人感染猪流感），再有就是现在席卷全球的新型冠状病毒肺炎疫情。因此，传染病的防控一直是医学科学工作者面临的巨大挑战。其中，对病原体进行快速准确的鉴定是传染病精准防控的基础。中国医学科学院病原生物学研究所彭俊平研员自2000年起即深耕于病原体检测技术方法及基因组学、耐药机制相关的研究工作。近日，仪器信息网特别采访了彭俊平研究员，与他就核酸质谱技术在病原体检测领域的应用现状及前景进行了深入交谈。[align=center][img=彭俊平个人.JPG,600,337]https://img1.17img.cn/17img/images/202204/uepic/3407a132-360a-4424-b8f8-73b9d8028642.jpg[/img][/align][align=center]中国医学科学院病原生物学研究所 彭俊平研究员[/align][color=#ff0000]“国内最早开展核酸质谱病原体检测研究的团队之一”[/color]随着各项科学技术的进步，病原体检测技术也在不断发展，由病原分离、电镜观察、免疫学检测等传统生物学方法发展到[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]技术、芯片技术、测序技术、质谱技术等分子生物学方法。“因为引起疾病的病原体种类繁多，单一的平台技术不能解决所有问题，所以，我们的主要工作是利用各种平台技术对病原体进行筛查。”彭俊平介绍到，“多年来我们课题组一直致力于搭建一个病原体组合筛查技术体系，这也是我国在传染病防控领域的一个重要工作。另外，我们利用多重[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]反应结合飞行时间质谱技术（以下简称：核酸质谱）在病原体检测领域开展了10多年的工作，这也是我们多年来的一个重点发展方向。”核酸质谱是什么？彭俊平为笔者解答到，核酸质谱其实是基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF）在核酸水平的应用，是一种将多重[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]反应与质谱结合的复合技术。此前，MALDI-TOF主要应用于蛋白质水平的微生物鉴定研究，应用发展不过30多年，而MALDI-TOF在核酸水平的相关应用则是近些年提出的概念，应用发展时间就更短。最初，MALDI-TOF在核酸研究领域开展的应用是SNP基因分型，其首先通过[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]扩增含有SNP的基因组片段，再通过检测核酸分子在真空管中的飞行时间而获得样品分析物的精确分子量，从而检测出SNP位点信息。因为MALDI-TOF本身的高灵敏度和高通量等特点，使其非常适合应用于SNP多位点的筛查。而MALDI-TOF在病原体检测领域的研究则鲜少有报道。彭俊平课题组是国内最早开展核酸质谱病原体检测研究的团队之一。“我们是在2009年引进的这个技术平台，正好是H1N1全球大流行的时候，当时核酸质谱的技术水平还不足以帮助我们开展相关工作，因此我们就开始自己开发方法。”核酸质谱病原体检测的原理是利用MALDI-TOF检测多重[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]反应的产物，即单碱基延伸的产物质量大小，来判定检测靶基因的有无，从而进一步判定样本中目标病原体的有无。与传统的病原体检测技术相比，核酸质谱在灵敏度、检测通量以及操作简便性等方面均有一定优势。此外，核酸质谱检测的核酸序列均来源于公共数据库，不需要依赖其他的数据库。[color=#ff0000] “开发了7种人冠状病毒的检测方法，成功申请专利”[/color]经过多年的技术摸索，彭俊平团队利用核酸质谱在病原体检测领域做出了很多成果。最近其团队开发了7种人冠状病毒的检测方法，并申请了发明专利。目前，已知可以感染人的冠状病毒共有7种，其中包括2003年的“非典”SARS冠状病毒、2012年在中东地区出现的MERS冠状病毒以及2019年12月爆发的严重性呼吸系统综合征冠状病毒SARS-Cov-2。彭俊平介绍到，课题组是从2012年开始开展人冠状病毒的检测技术研究，其中一部分工作内容就是利用核酸质谱进行检测应用。该部分成果是与岛津公司合作开发的，利用一步法多重反应[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]与MALDI-TOF质谱联用鉴定7种人冠状病毒与新型冠状病毒的重要突变位点。“本次合作中我们将多重[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]反应从两步法改进为一步法，既缩短了实验时间，又减少了人为操作的工作。而且我们改进的方法适用于所有的RNA病毒，可以说是摸索出了一种通用的解决方案。”彭俊平介绍到，“和岛津合作成果的应用价值很明确，我非常期待未来该方法的推广。接下来我们也将继续和岛津合作在MALDI-TOF平台上开发出更多病原体检测解决方案，并合力推动核酸质谱在临床领域的应用。”笔者追问到目前国际上核酸质谱在病原体检测领域的应用现状如何？彭俊平坦言道，国际上相关的成果并不多，而团队于2009年就开展了相关研究，可以说是走在了国际前列。不过，目前核酸质谱病原体检测的应用还以科研阶段为主，临床应用正处于拓展阶段。此外，彭俊平也谈到他认为核酸质谱走向临床所面临的瓶颈，一是MALDI-TOF本身的硬件设备比较贵；其次，基于MALDI-TOF平台提供给临床应用的成熟方法不多。因此，核酸质谱这样的技术平台想要真正推广到临床，首先需要提供“一揽子”的解决方案，这样应用场景就会被打开。不过，彭俊平也观察到，无论国内还是国外，越来越多的团队和厂商开始关注这一领域，相信核酸质谱的临床应用情况将在短短几年之内得到很大的改变。最后彭俊平表示，未来核酸质谱病原体检测值得重点关注的方向有呼吸道感染疾病、腹泻性疾病和性传播疾病等，其涉及的病原体种类繁多，是核酸质谱可以“大展身手”的方向。后记：采访中彭俊平反复提到“病原体的组合筛查技术体系”，他也为笔者解释到，为了获取更全面的生物信息，往往需要多种技术平台共同解决问题，而不是希望用一个技术平台去解决所有的问题。回到MALDI-TOF这一技术来说，总有人拿质谱与NGS测序相比较，其实它们的应用场景和目标都不一样，发展核酸质谱也并不是为了替代测序技术。事实上，核酸质谱只需要在中高通量的检测中建立并巩固其“王者地位”，在此基础上能够再提升灵敏度和分辨率等性能，就为自身的发展开辟了新天地。

体外诊断试剂检测的孵育过程为什么要用温箱?这里说的包括酶联免疫，支原体检测。首先酶联免疫的是为了加快反应速度，如果在常温，可能比在温箱慢一倍的时间，而且常温并不恒定，今天是23度，明天可能是26度，不利于统计分析数据。支原体检测中是为了模拟人体温度环境，在这个温度下支原体的生长程度最能说明问题。那么问题来了，应该用鼓风干燥箱还是水浴式恒温培养箱呢？最好是水浴式的恒温培养箱，因为在孵育过程中如果湿度太低，会造成干板，就是说有可能造成板孔内的液体无法完全覆盖板底，造成反应不完全。支原体培养时会在培养基上滴加石蜡油，以减少水分挥发。尽管如此，还是应该首选水浴式恒温培养箱。

科学家发明了一种实验能显示伤口或损害是否被细菌感染并且MRSA是否存在。该实验是爱丁堡大学和NHSLothian联合发明的，可从伤口或溃面刷取样品，使用能检测MRSA的电传感条带分析。 在检测之前，为了增加这个存在的细菌的数量，研究者目前在实验室处理这些刷取的样品，但是希望在将来通过提高条带的敏感性避免进行这一步。这可能是科学家发明的一个能被在实验室外面使用的实验方法，如在开业医生或自己家里。检测细菌的能力比传统的实验更快速将能够即刻给患者用药。 目前，使用传统的技术在实验室检测证实MRSA是否存在于伤口需要花费一整天的时间。该实验是在参加皇家爱丁堡医院NHSLothian's糖尿病足临床研究患者的糖尿病溃疡足面刷取的标本发展而来的。 在这些患者中MRSA的检测对预防感染扩散是重要的，因为感染扩散能导致截肢和增加死亡率。Till Bachman博士，来自于爱丁堡大学药学院，将在3月29日爱丁堡生物传感器进展会议上展示他试验背后的研究成果。 他说：“抗生素耐药性在现代健康中正成为一个紧迫的问题，我们面临着进入后抗生素时代的严重危害。目前对MRSA的检测趋向于花费昂贵而且不是快速的。通过开发一种快速和划算的实验，我们能即刻知道目前是哪一种感染，这将提高治疗成功的机会” 爱丁堡科学家正在使用相似的技术去检测细菌之间感染扩散的信号，并且检测能显示对感染细菌的伤口反应下患者产生的化学物质。理解为什么细菌释放某些分子是这一过程的一部分将有助于帮组科学家识别感染的开始并且快速的治疗。

QX100一个应用的大方向是病原微生物的检测，尤其是复杂来源的样品。之前已有多篇HIV（病毒方面）相关的文献。最近又有2篇QX100对于细菌和衣原体检测方面的文献发表，结合之前的文献，可以得出，QX100可以对复杂来源样品中的病毒、细菌等病原微生物进行检测，而且是以绝对定量的方式进行，不再需要依赖于标准曲线，简化了实验操作。由英国科学家完成的采用QX100对沙眼衣原体的检测，发表于J Clinical Microbiol。沙眼衣原体是致盲的一个主要原因，该文章对1509个临床样品进行了双重的ddPCR反应体系与金标准Roche Amplicor CT/NG进行了对比，得到了如下的结论：

通过研究疯牛病和类似疾病（新型克雅氏病、克雅氏病、绵羊痒病），人们得出了关于疯牛病致病病原体的三个理论。这些理论使我们相信，这种病原体是： 　　一种未知的病毒或病毒类粒子：尽管病原体的大小符合病毒的特点，但其抗热性、抗化学物和缺少核酸的特征，不同于任何已知病毒。　　一种移动细菌（螺原体）：螺原体的许多感染特征和疯牛病相似，但没有直接的证据可以将螺原体和疯牛病联系起来。 　　一种变异蛋白（朊蛋白）：在感染了疯牛病的牛、新型克雅氏病患者、克雅氏病患者和患绵羊痒病的羊的脑部，都发现了变异朊蛋白。这种蛋白质比病毒小，在高温或消毒剂的作用下不发生改变。这种假说在媒体中最流行，但它与公认的许多生物学理论相矛盾。

【序号】：1【作者】：赵果园 【题名】： 院内快速血糖检测仪与检验科生化分析仪比对结果分析【期刊】：国际检验医学杂志【年、卷、期、起止页码】：2011年14期1612-1613页【全文链接】：http://www.cqvip.com/QK/94846A/201114/39324607.html【序号】：2【作者】：张燕;张之烽【题名】：461份宫颈分泌物标本支原体培养及药敏结果分析【期刊】：临床输血与检验【年、卷、期、起止页码】：2010年第04期346-347页 【全文链接】：http://www.cqvip.com/QK/84082X/201004/35574180.html【序号】：3【作者】：殷华【题名】：536例泌尿生殖道支原体培养及耐药性分析【期刊】：检验医学与临床【年、卷、期、起止页码】：2010年第04期328-329页【全文链接】：http://www.cqvip.com/QK/84477A/201004/33022915.html【序号】：4【作者】：徐鸿绪;黄健宇【题名】：泌尿生殖道支原体感染患者感染状况及耐药性分析【期刊】：中华实用诊断与治疗杂志【年、卷、期、起止页码】：2010年第03期311-312页【全文链接】：http://www.cqvip.com/QK/90065B/201003/33012069.html

[b]天津报告阳性感染者20例！今日7时起全员核酸检测.[/b]

哪位有食品中重要人兽共患疾病病原体检测技术方面的资料，麻烦帮传一下，谢谢！haijun.yunfeng@yahoo.com.cn

人感染H7N9禽流感是由H7N9亚型禽流感病毒引起的急性呼吸道传染病。自2013年2月以来，上海市、安徽省、江苏省先后发生不明原因重症肺炎病例，其中确诊人感染H7N9禽流感3例，2例死亡。3例均为散发病例，目前尚未发现3例病例间有流行病学关联。一、病原学禽流感病毒属正粘病毒科甲型流感病毒属。禽甲型流感病毒颗粒呈多形性，其中球形直径80～120nm，有囊膜。基因组为分节段单股负链RNA。依据其外膜血凝素（H）和神经氨酸酶（N）蛋白抗原性不同，目前可分为16个H亚型（H1～H16）和9个N亚型（N1～N9）。禽甲型流感病毒除感染禽外，还可感染人、猪、马、水貂和海洋哺乳动物。可感染人的禽流感病毒亚型为H5N1、H9N2、H7N7、H7N2、H7N3，此次报道的为人感染H7N9禽流感病毒。该病毒为新型重配病毒，其内部基因来自于H9N2禽流感病毒。禽流感病毒普遍对热敏感，对低温抵抗力较强，65℃加热30分钟或煮沸（100℃）2分钟以上可灭活。病毒在较低温度粪便中可存活1周，在4℃水中可存活1个月，对酸性环境有一定抵抗力，在pH4.0的条件下也具有一定的存活能力。在有甘油存在的情况下可保持活力1年以上。二、流行病学（一）传染源。目前尚不明确，根据以往经验及本次病例流行病学调查，推测可能为携带H7N9禽流感病毒的禽类及其分泌物或排泄物。（二）传播途径。经呼吸道传播，也可通过密切接触感染的禽类分泌物或排泄物等被感染，直接接触病毒也可被感染。现尚无人与人之间传播的确切证据。（三）易感人群。目前尚无确切证据显示人类对H7N9禽流感病毒易感。现有确诊病例均为成人。（四）高危人群?。现阶段主要是从事禽类养殖、销售、宰杀、加工业者，以及在发病前1周内接触过禽类者。三、临床表现根据流感的潜伏期及现有H7N9禽流感病毒感染病例的调查结果，潜伏期一般为7天以内。（一） 一般表现。患者一般表现为流感样症状，如发热，咳嗽，少痰，可伴有头痛、肌肉酸痛和全身不适。重症患者病情发展迅速，表现为重症肺炎，体温大多持续在39℃以上，出现呼吸困难，可伴有咯血痰；可快速进展出现急性呼吸窘迫综合征、纵隔气肿、脓毒症、休克、意识障碍及急性肾损伤等。（二）实验室检查。1.血常规。白细胞总数一般不高或降低。重症患者多有白细胞总数及淋巴细胞减少，并有血小板降低。2.血生化检查。多有肌酸激酶、乳酸脱氢酶、天门冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸氨基转移酶升高，C反应蛋白升高，肌红蛋白可升高。3.病原学检测。（1）核酸检测。对患者呼吸道标本（如鼻咽分泌物、口腔含漱液、气管吸出物或呼吸道上皮细胞）采用real time PCR（或RT-PCR）检测到H7N9禽流感病毒核酸。（2）病毒分离。从患者呼吸道标本中分离H7N9禽流感病毒。（三）胸部影像学检查。发生肺炎的患者肺内出现片状影像。重症患者病变进展迅速，呈双肺多发磨玻璃影及肺实变影像，可合并少量胸腔积液。发生ARDS时，病变分布广泛。（四）预后。人感染H7N9禽流感重症患者预后差。影响预后的因素可能包括患者年龄、基础疾病、合并症等。四、诊断与鉴别诊断（一）诊断。根据流行病学接触史、临床表现及实验室检查结果，可作出人感染H7N9禽流感的诊断。在流行病学史不详的情况下，根据临床表现、辅助检查和实验室检测结果，特别是从患者呼吸道分泌物标本中分离出H7N9禽流感病毒，或H7N9禽流感病毒核酸检测阳性，可以诊断。1.流行病学史。发病前1周内与禽类及其分泌物、排泄物等有接触史。2.诊断标准。（1）疑似病例：符合上述临床症状及血常规、生化及胸部影像学特征，甲型流感病毒通用引物阳性并排除了季节性流感，可以有流行病学接触史。（2）确诊病例：符合疑似病例诊断标准，并且呼吸道分泌物标本中分离出H7N9禽流感病毒或H7N9禽流感病毒核酸检测阳性。重症病例：肺炎合并呼吸功能衰竭或其他器官功能衰竭者为重症病例。（二）鉴别诊断。应注意与人感染高致病性H5N1禽流感、季节性流感（含甲型H1N1流感）、细菌性肺炎、传染性非典型肺炎（SARS）、新型冠状病毒肺炎、腺病毒肺炎、衣原体肺炎、支原体肺炎等疾病进行鉴别诊断。鉴别诊断主要依靠病原学检查。五、治疗（一）对临床诊断和确诊患者应进行隔离治疗。（二）对症治疗。可吸氧、应用解热药、止咳祛痰药等。（三）抗病毒治疗。应尽早应用抗流感病毒药物。1.神经氨酸酶抑制剂：可选用奥司他韦（Oseltamivir）或扎那米韦（Zanamivir），临床应用表明对禽流感病毒H5N1和H1N1感染等有效，推测对人感染H7N9禽流感病毒应有效。奥司他韦成人剂量75mg每日两次，重症者剂量可加倍 ，疗程5-7天。扎那米韦成人剂量10mg，每日两次吸入。2.离子通道M2阻滞剂：目前实验室资料提示金刚烷胺（Amantadine）和金刚乙胺（Rimantadine）耐药，不建议单独使用。（四）中医药治疗。1.疫毒犯肺，肺失宣降症状：发热，咳嗽，少痰，头痛，肌肉关节疼痛。治法：清热宣肺参考处方：桑叶 金银花 连翘 炒杏仁 生石膏 知母 芦根 青蒿 黄芩 生甘草水煎服，每日1—2剂，每4—6小时口服一次。加减：咳嗽甚者加枇杷叶、浙贝母。中成药：可选择疏风解毒胶囊、连花清瘟胶囊、清开灵注射液。2.疫毒壅肺，内闭外脱症状：高热，咳嗽，痰少难咯，憋气，喘促，咯血，四末不温，冷汗淋漓，躁扰不安，甚则神昏谵语。治法：清肺解毒，扶正固脱参考处方：炙麻黄 炒杏仁 生石膏 知母 鱼腥草 黄芩炒栀子 虎杖 山萸肉 太子参水煎服，每日1—2剂，每4—6小时口服或鼻饲一次。加减：高热、神志恍惚、甚至神昏谵语者，上方送服安宫牛黄丸；肢冷、汗出淋漓者加人参、炮附子、煅龙骨、煅牡蛎；咯血者加赤芍、仙鹤草、侧柏叶；口唇紫绀者加三七、益母草、黄芪、当归尾。中成药：可选择参麦注射液、生脉注射液。（五）加强支持治疗和预防并发症。注意休息、多饮水、增加营养，给易于消化的饮食。密切观察，监测并预防并发症。抗菌药物应在明确继发细菌感染时或有充分证据提示继发细菌感染时使用。（六）重症患者的治疗。?重症患者应入院治疗，对出现呼吸功能障碍者给予吸氧及其他相应呼吸支持，发生其它并发症的患者应积极采取相应治疗。1.呼吸功能支持：（1）机械通气：重症患者病情进展迅速，可较快发展为急性呼吸窘迫综合征（ARDS）。在需要机械通气的重症病例，可参照ARDS机械通气的原则进行。①无创正压通气：出现呼吸窘迫和（或）低氧血症患者，早期可尝试使用无

大家一起来讨论阿如何消除污水中的病原体污染物那？

巨细胞病毒感染常见于A皿病人，男性同性恋中CMV感染率高达95％以上。巨细胞病毒感染可能对聊的细胞毒性及Kw复制具有协同作用，被认为是一种协同因子。在临床上可引起中枢神经系统感染以及脉络膜视网膜炎所致失明、慢性肠炎和肺炎。　　．念珠菌日食管盗不少艾滋病或艾滋病相关综合征病例出现口腔真菌感染，其中有少数病例出现弥漫性食官央。临床表现为在咽部、食管、直肠及肛门周围皮肤教膜感染．严重者有吞咽团难，肛周糜烂，病原体为念珠茵，常呈反复发作。一般以活检为主要诊断依据，如口腔白色念珠茵感染肉服难以辨别，有必要用钡剂吞咽并经气管镜采集标本进行培养和活检。　　．非结核分枝杆菌感染在艾滋病患者中常以局部或播散性感染出现。很容易从患者骨髓、淋巴结、肝活检组织及血液分离出分技杆菌。由于艾滋病不形成典型肉芽肿，甚至没有于酪样坏死性肉芽肿，对活检组织仍要做Nid-NMI删染色检查。　　．隐球菌病许多艾滋病患者具有中枢神经系统症状，除了xP本身所致感染外，常与隐球菌感染有关。临床上主要表现为脑膜炎症状。　　弓形虫病典型艾滋病患者身上，鼠弓形虫可侵犯思者肺部、脑、骨酷肌及皮肤，侵犯大脑可引起脑脓肿，有占位性神经病变体征。　　．单纯疤疹病毒感染许多艾滋病患者常常有单纯疤疹病毒感染史，表现为可在口、食管、肛门等部位引起慢性进行性广泛的溃疡性病变。艾滋病患者伴有这种感染，常常可引起广泛的戳膜溃疡．持续一个月以上，同时出现肺部、胃肠道或其他播散性感染。

PCR技术检测猪伪狂犬病毒及其潜伏感染部位的研究注：全文见资料中心。

互相学习！上传USP39131-3934页翻译，求EP6.0-2.6.7支原体翻译！哪位大侠有EP2.6.12-2.6.13中英译文，谢谢！[img]http://bbs.instrument.com.cn//images/affix.gif[/img][url=http://bbs.instrument.com.cn/download.asp?ID=193198]3931-3934.doc[/url]大肠杆菌样品的制备和预培养—按在 非无菌产品微生物学检测：微生物计数检查法章节下的描述，将不少于1克的供试品以1:10稀释来制备样品，并使用10毫升或对应1克或1毫升的数量，接种于适量（按照检查方法的适用性项下的内容来确定）的大豆酪蛋白消化物肉汤培养基，混匀，并在温度30o至35 o下培养18至24小时。选择和再次培养—摇动容器，转移1毫升大豆酪蛋白消化物肉汤培养基至100毫升的麦康凯（MacConkey）肉汤培养基，并在温度42 o至44 o下培养24至48小时。在温度30o至35o下，于麦康凯（MacConkey）琼脂培养基的平皿上再次培养18至72小时。说明—菌落的生长表明了大肠杆菌存在的可能性。这需通过鉴别检测来证明。如果没有菌落存在或如果确认鉴别检测为阴性，则该供试品符合该检测的要求。沙门氏杆菌样品的制备和预培养—按照在 非无菌产品微生物学检测：微生物计数检查法章节下的描述制备供试品，并使用对应不少于10克或10毫升的数量接种于适量（按照检查方法的适用性项下内容来确定）的大豆酪蛋白消化物肉汤培养基，混合，在温度30 o至35 o下培养18至24小时。选择和再次培养—转移0.1毫升大豆酪蛋白消化物肉汤培养基至10毫升氯化镁孔雀绿沙门氏菌富集肉汤培养基，并在温度30o至35o之间培养18至24小时。在木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂培养基的平皿内再次培养。在温度30 o至35 o之间培养18至48小时。说明—可能存在的沙门氏菌通过生长良好的红色菌落，带有或没有黑色中心来识别。这由鉴定试验来确认。绿脓杆菌样品的制备和预培养—按照在 非无菌产品微生物学检测：微生物计数检查法章节中的描述，将不少于1克的供试品以1:10稀释来制备样品，并使用10毫升或对应1克或1毫升的数量，接种于适量（按照检查方法的适用性项下描述来确定）的大豆酪蛋白消化物肉汤培养基，混匀。当检测贴剂时，通过无菌膜过滤器来过滤对应一贴制备品的样品（见 非无菌产品微生物学检测：微生物计数检查法章节中样品的制备项下贴剂），并置于100毫升大豆酪蛋白消化物肉汤培养基。在温度30o至35 o之间培养18至48小时。选择和再次培养—在十六烷三甲基溴化铵琼脂培养基的平皿内再次培养，并在温度30o至35 o之间培养18至72小时。说明—菌落的生长表明了绿脓杆菌存在的可能性。这需通过鉴别检测来证明。如果菌落不存在或如果确认鉴别检测为阴性，则该供试品符合该检测的要求。金黄色葡萄球菌样品的制备和预培养—按照 非无菌产品微生物学检测：微生物计数检查法章节中的描述，将不少于1克供试品以1:10稀释来制备样品，并使用10毫升或对应1克或1毫升的数量来接种适量（按照检查方法的适用性项下的描述来确定）于大豆酪蛋白消化物肉汤培养基，并使其均匀。当检测贴剂时，通过无菌膜过滤器来过滤对应一贴制备品的样品（见在 非无菌产品微生物学检测：微生物计数检查法章节里的样品的制备项下的贴剂），并置于100毫升大豆酪蛋白消化物肉汤培养基内。在温度30o至35o度下培养18至24小时。选择和再培养—再次培养在甘露醇氯化钠琼脂培养基的平皿上，并在温度30o至35o之间培养18至72小时。说明—金黄色葡萄球菌存在的可能性通过由黄色区域环绕的黄色或白色菌落的生长来识别。这需通过鉴别检测来证实。如果所描述类型的菌落不存在或如果确认鉴别检测为阴性，则该供试品符合该检测的要求。梭状芽孢杆菌样品的制备及热处理—按照 非无菌产品微生物学检测：微生物计数检查法章节中的描述，将不少于1克供试品以1:10稀释来制备样品，分别取相对应不少于10毫升的两个供试品。将其中一份在温度80o加热10分钟，并快速冷却。不要加热另外一份。选择和再培养—使用10毫升或对应1克或1毫升的产品来做检测（按照检查方法的适用性项下的描述来确定）在无氧的条件下、温度30o至35o之间，培养48小时。培养之后，将来自每个试管的培养物在哥伦比亚琼脂培养基上进行再次培养，并在无氧条件下、温度30o至35o之间，培养48小时。说明—杆菌（带有或没有内生孢子）厌氧性生长出现阴性过氧化氢酶反应的现象，表明了梭状芽孢杆菌的存在。这需通过鉴别检测来证实。如果所描述类型的菌落不存在或如果确认鉴别检测为阴性，则该供试品符合该检测的要求。白色念珠菌样品的制备和预培养—按照在 非无菌产品微生物学检测：微生物计数检查法章节中的描述制备供试品，并使用10毫升或对应不少于1克或1毫升的数量，接种于100毫升Sabouraud（沙氏）葡萄糖肉汤培养基，并混匀。在温度30o至35o之间培养3至5天。选择和再培养—对在Sabouraud（沙氏）葡萄糖琼脂培养基的平皿中进行再次培养，并且在温度30o至 35o之间培养24至48小时。说明—白色菌落的生长可以表明白色念珠菌的存在。这需通过鉴别检测来证明。如果这样的菌落不存在或者如果确认鉴别检测为阴性，则供试品符合该检测的要求。

支原体感染，真的吗？

新华社新加坡4月13日电（记者陈济朋）据新加坡媒体日前报道，新加坡研究人员研发出一种病毒检测芯片，可一次性快速检验上万种病原体。 据介绍，这种病毒检测芯片由新加坡基因组研究所的研究团队研制，通过快速分析病患DNA样本，可在24小时内详细检测出患者感染何种病毒或细菌。 研究人员表示，这种检测芯片可以一次性检测高达7万种病毒和细菌等病原体，其中包括最新出现的H7N9禽流感病毒。 相比之下，传统的病毒或细菌测试方法，一般针对某一种特定的病原体进行测试，难以同时检测多种病原体。 研究人员说，这种新的检测手段可以尽快明确病因，减少确诊时间，并且成本也不高。目前这种病毒检测芯片还只用于实验用途，研究人员希望该芯片通过相关部门批准后尽快投入市场。

[font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=18px]河北唐山通报，27日完成的全域全员核酸检测，共检测出110例阳性感染者，全部从隔离点检出。[/size][/font]

[font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=18px]截至16日6时，天津市第三次全员核酸检测共检出59例阳性感染者，均来自津南区。[/size][/font][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=18px]截至16日6时，天津市第三次全员核酸检测共检出59例阳性感染者，均来自津南区。[/size][/font]

[center]人类首次拍摄寄生虫感染细胞图像 有利研发疫苗[/center]美国新出版的《公共科学图书馆• 病原体》杂志报告说，澳大利亚悉尼世纪研究所的科学家利用独创的技术，首次成功地拍摄记录下了细胞被寄生虫感染以及寄生虫随后开始向全身传播的图像。 悉尼世纪研究所免疫成像项目主任沃夫冈• 温宁格教授介绍说，他们的研究借助了能够实时观察活细胞的大功率多光子显微镜。他表示，皮肤中的树状细胞是他们研究的对象。他们发现，在正常条件下，表皮内的细胞处于静止状态，而真皮内的细胞却极其活跃，不停地移动，似乎是在搜寻病原体。在人为地将利什曼虫（Leishmania）引入细胞中后，他们观察到了寄生虫被细胞“拾起”以及开始向整个身体蔓延的过程。 利什曼病是一种经由沙蝇叮咬所传播的原虫疾病。据估计，在非洲、中东和南美某些地区，利什曼病的感染患者近1200万人，每年新增病例大概200万宗。利什曼病导致患者皮肤溃疡，并能影响病人的内脏，如脾、肝和骨髓。如果不采取治疗措施，那么病人或许会有生命危险。 直观跟踪病原体在细胞中的活动状况，为人们设计和研发防病疫苗提供了重要条件。温宁格表示，通过研究，他和同事对病原体如何被免疫系统识别以及参与的细胞有了基本了解。这意味着人们能分析那些可以识别帮助利什曼虫病原体感染患者的分子，并将这些分子作为疫苗针对的目标。此外，他们还能了解其他感染的免疫反应，以便开发出更好的疫苗。 世纪研究所执行理事马修• 瓦达斯教授认为，帮助研究人员拍摄免疫过程的多光子显微镜如同医学研究中的哈勃望远镜。哈勃让人们清晰地观察宇宙万物，而多光子显微镜则提供了独特的细胞观察方法，帮助人们全新地了解免疫系统是如何工作的。信息来源:科技日报

(一)食品中四环素族抗生素药物的限量四环素类抗生素，包括金霉素、土霉素、四环素等，为抑菌性广谱抗生素，除革兰阳性、阴性细菌外，对立克次氏体、衣原体、支原体、螺旋体均有作用，广泛用于多种细菌及立克次氏体、衣原体、支原体等所致的感染。它们自1948年问世以来，陆续被应用于临床，并已成为应用最多、最广泛的广谱抗菌素，目前四环素是我国广泛运用于防治感染性疾病的兽药之一，畜禽喂饲了一定量的四环素后，如代谢时问不足，则残留于肌肉及各器官组织内，食用这些畜禽后，不仅损害人类健康，且由于人体内的病原菌长期接触这些低浓度的药物，从而产生对四环素的耐药性，引起人类和动物感染性疾病治疗的失败。许多国家对TCs残留实施例行监控，欧盟及我国均规定牛乳中四环素类抗生素的最大残留限量为0.1mg／kg。(二)测定土霉素、四环素、金霉素残留的方法①GB／T 20764—2006可食动物肌肉中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量的测定。适用于牛肉、羊肉、猪肉、鸡肉和兔肉中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量的测定。其方法是用O.1mol／L Na2EDTA—Mcllvaine(pH值为4.00±0.05)缓冲溶液提取可食动物肌肉中的四环素族抗生素残留，提取液经离心后，上清液用Oasis HLB或相当的固相萃取柱和羧酸型阳离子交换柱净化，以乙腈十甲醇+0.01mol／L草酸溶液(2+l+7)为流动相，液相色谱一紫外检测器测定。该法检出限量：土霉素、四环素、金霉素、强力霉素均为O.005mg／kg。②GB／T 18932．23 2003蜂蜜中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量的测定方法——液相色谱一串联质谱法，适用于蜂蜜中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量的测定。试样中四环素族抗生素残留，用O.1mol／L Na2EDTA—Mcllvaine(pH值为4．OO±0.05)缓冲溶液提取，提取液经离心后，上清液用Oasis HLB或相当的固相萃取柱和阴离子交换柱净化，采用配有电喷雾离子源的液相色谱一串联四极杆质谱仪测定。该法检出限：土霉素、四环素为0．01mg／kg；金霉素、强力霉素为0.02mg／kg。③DB33T 691—2008水产品中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量的测定——高效液相色谱荧光检测法，适用于水产品中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量的测定：样品经柠檬酸缓冲液提取，正己烷脱脂，Oasis HLB固相萃取柱净化，以咪唑缓冲溶液一甲醇为流动相，用高效液相色谱荧光检测器检测，外标法定量。本方法检出限为土霉素0.0lmg／kg，四环素0.01mg／kg，金霉素O.03mg／kg，强力霉素0.03mg／kg。

[font='calibri'][size=13px]免疫学检测形成的原因有哪些？免疫学[/size][/font][font='calibri'][size=13px]检测包括哪些？[/size][/font]免疫学检测形成的原因：免疫学检测是基于免疫系统对外来物质或抗原的反应而产生的，可分为体液免疫学检测和细胞免疫学检测两大类。体液免疫学检测是通过血液、唾液、乳汁等体液样本中的免疫球蛋白、补体、免疫复合物等成分的含量及其分布来反映机体的免疫状态。当机体受到病原体或某些生物物质的刺激时，免疫系统会产生相应的抗体和细胞因子等免疫反应，这些免疫反应产物可通过体液免疫学检测方法进行检测。细胞免疫学检测是通过检测机体内的免疫细胞和免疫分子的含量及其分布来反映机体的免疫状态。当机体受到病原体或某些生物物质的刺激时，免疫系统会产生相应的抗原提呈细胞，并引导记忆细胞和效应细胞的产生，这些记忆细胞和效应细胞可以在特定情况下识别和消灭病原体或肿瘤细胞，这些细胞和效应细胞本身也可以被检测出来。总之，免疫学检测的目的是通过检测机体的免疫反应，了解机体的免疫状态，为疾病的诊断、治疗和预防提供重要的依据。免疫学检测包括哪些？免疫学检测是指通过各种方法检测机体对病原体或某些生物物质的免疫反应程度，以及机体内的免疫细胞、免疫分子和免疫活性物质的含量及其分布等情况的一种医学技术。免疫学检测广泛应用于各种疾病的诊断、治疗和预防，包括感染性疾病、自身免疫性疾病、肿瘤免疫学诊断等。以下是一些常见的免疫学检测项目：体液免疫学检测：主要包括免疫球蛋白的测定，如IgA、IgM、IgE等；补体检测，如总补体溶血活性、补体C1、C2等；免疫复合物检测，如抗体-抗原复合物、补体-抗体复合物等；细胞免疫学检测：主要包括T细胞亚群分析、B淋巴细胞分化抗原检测、自然杀伤细胞抗体检测、T细胞活化抗体检测等；抗体检测：如抗药抗体、中和抗体等；细胞因子检测：如白细胞介素-2、-4、-6等；自身抗体检测：如抗核抗体、抗胰岛素抗体等；感染免疫检测：如病毒特异性抗体、细菌特异性抗体等。总之，免疫学检测是一种非常重要的医学技术，可以帮助医生判断机体的免疫状态，为疾病的诊断和治疗提供重要的依据。免疫学检测是根据抗原、抗体反应的原理，利用已知的抗原检测未知的抗体或利用已知的抗体检测未知的抗原，可定性、定位和定量的检测。依托自主研发生产的优质抗体、蛋白试剂、先进的实验仪器以及经验丰富的技术人员，义翘神州建立了全面的免疫学检测平台，包括ELISA、Western Blot、IHC、IF、Flow Cytometry、IP/Co-IP、Biacore、Octet等检测技术。义翘神州免疫学检测服务包含：①WB/Sally Sue高通量检测服务②[url=https://cn.sinobiological.com/services/flow-cytometry-service]流式细胞检测服务[/url]③免疫组化检测服务④多重免疫荧光和免疫组化服务⑤免疫荧光检测服务⑥HE染色及特殊染色服务⑦ELISA/ELISpot检测服务⑧IP/Co-IP检测服务⑨TMA芯片定制服务更多详情可以查看：https://cn.sinobiological.com/services/immunoassay-service

[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=54998]食物和动物饲料的微生物学.食物病原体检测用聚合酶链式反应[/url]

由细菌、病毒、支原体、衣原体等多种病原微生物所致的感染性疾病遍布临床各科，其中细菌性感染最为常见，因此抗菌药物也就成为临床最广泛应用的药物之一。在抗菌药物治愈并挽救了许多患者生命的同时，也出现了由于抗菌药物不合理应用导致的不良后果，如不良反应的增多，细菌耐药性的增长，以及治疗的失败等，给患者健康乃至生命造成重大影响。抗菌药物的不合理应用表现在诸多方面：无指征的预防用药，无指征的治疗用药，抗菌药物品种、剂量的选择错误，给药途径、给药次数及疗程不合理等。为提高细菌性感染的抗菌治疗水平，保障患者用药安全及减少细菌耐药性，特制订《抗菌药物临床应用指导原则》（以下简称《指导原则》）。《指导原则》对感染性疾病中最重要的细菌性感染的抗菌治疗原则、抗菌药物治疗及预防应用指征以及合理给药方案的制订原则进行阐述，并列出常用抗菌药物的适应证及注意事项，各种常见细菌性感染的病原治疗，以期达到提高我国感染性疾病的抗菌治疗水平，减缓细菌耐药性的发展，降低医药费用的目的。《指导原则》共分四部分，一是“抗菌药物临床应用的基本原则”，二是“抗菌药物临床应用的管理”，三是“各类抗菌药物的适应证和注意事项”，四是“各类细菌性感染的治疗原则及病原治疗”。对上述内容有以下几点说明。1、本《指导原则》为临床应用抗菌药物获取最佳疗效，并最大程度避免或减少不良反应而制定，不是教材或参考书，也不涉及具体的给药方案。2、本《指导原则》主要限于治疗细菌、支原体、衣原体、立克次体、螺旋体、真菌等病原微生物所致感染性疾病的抗菌药物，不包括各种病毒性疾病和寄生虫病的治疗药物。3、本《指导原则》中抗菌药物临床应用的基本原则在临床治疗中必须遵循，各类抗菌药物的适应证和注意事项以及各种感染的病原治疗则供临床医师参考。4、为加强对抗菌药物临床应用的管理，本《指导原则》对抗菌药物应用中的管理也提出了要求，应当遵循。5、本《指导原则》仅涉及国内临床常用抗菌药物的部分品种，重点介绍各类药物的抗菌作用、适应证和注意事项，有关抗菌药物临床应用的详细内容仍应参考有关专业书籍。6、本《指导原则》中涉及临床各科部分常见和重要的感染性疾病，其他未涉及的感染仍应参考有关专业书籍。7、在医疗工作中临床医师仍应结合患者具体情况，制订个体化给药方案。8、“病原治疗”中除本《指导原则》所列通常选用的药物品种外，临床医师可根据患者临床情况、细菌耐药性及当地药物供应情况选用最合适的抗菌药物。

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基因芯片技术对于疾病耐药性检测可从两个方面加以实现：1.在肿瘤中，通过检测肿瘤耐药基因的表达变化来分析对药物的抗性；2.在感染性疾病中，病原体的耐药性检测可通两种方式：表达谱芯片检测药物诱导的表达改变来分析其耐药性；寡核苷酸芯片检测基因组序列的亚型或突变位点从而分析其耐药性。一、多药耐药基因的表达检测肿瘤治疗中对细胞毒素药物的抗性是引起治疗失败的重要原因，是限制化疗的重要因素。机制是复杂的，由肿瘤的综合特征决定，如存活细胞的比例、血液的供给是否充分、特殊的细胞机制及多药耐药表型，多药耐药是指当肿瘤细胞暴露在某一化学治疗药物后会产生对此药及其他结构上没有联系的药物的交叉抗性，可由不同的机制引起，如MDR1、MRP、LRP等基因的过度表达，拓扑异构酶II和谷胱甘肽代谢的改变等，另外，其他促进DNA修复和抑制细胞凋亡的基因表达改变也可能导致多药耐药。检测多药耐药基因表达的变化不但可以研究恶性肿瘤的不同耐药机制，还可以用于临床诊断，以指导制定治疗方案。目前已建立了几种多药耐药检测方法，在RNA水平上有：Northern blot、Slot blot、RT-PCR、Rnase protection assay和原位杂交，从蛋白水平上的检测方法有免疫组化、Western blot及流式细胞仪等。这些方法一次只能对一个基因进行研究，效率低，难以定量检测耐药基因表达增加的幅度。基因表达谱芯片可同时对成千上万的基因表达进行检测，可以大大加速这方面的研究，在设计芯片时，可以将已知肿瘤相关基因及标记基因都点到芯片上，同时，芯片上还包含目前所有报导过的耐药基因。这样可以同时得到肿瘤的各个方面的信息。另外基因芯片还可以帮助发现新的耐药基因。二、病原体耐药性检测细菌对三种以上不同类抗菌药物耐药者即可称为多重耐药菌（multi-drug resistant bacteria, MDR）。MDR感染在全球的状况十分严重，对婴幼儿、免疫缺陷者和老年人的威胁巨大，1992年美国疾病控制中心（CDC）的资料表明，有13300例住院患者，是因为对所使用的抗菌药物耐药，细菌感染得不到控制而死亡。MDR感染已成为治疗上的难点和研究上的热点。MDR大多为条件致病菌，革兰阴性杆菌（GNR）占较大比例，如肠杆菌科中的肺炎杆菌、大肠杆菌、阴沟杆菌、粘质沙雷菌、枸橼酸菌属、志贺菌属、沙门菌属等，以及绿脓杆菌、不动杆菌属、流感杆菌等。革兰阳性菌中有甲氧西林耐药葡萄球菌（MRS），尤以MRSA和MRSE为多；万古霉素耐药肠球菌（VRE），近年来在重症监护室（ICU）中的发病率有明显增高；青霉素耐药肺炎链球菌（PRSP），常引起肺炎、脑膜炎、菌血症和中耳炎，人结核分支菌等。此外尚有淋球菌、脑膜炎球菌、霍乱弧菌等。耐药性又称抗药性，一般是指病原体的药物反应性降低的一种状态。这是由于长期应用抗菌药，病原体通过产生使药物失活的酶、改变原有代谢过程，而产生的一种使药物效果降低的反应，因而作用的剂量要不断增加。细菌对抗菌药物的耐药机制可有多种，最重要者为灭活酶的产生，如β-内酰胺酶、氨基糖苷钝化酶等；其次为靶位改变如青霉素结合蛋白（PBPs）的改变等；其他尚有胞膜通透性改变，影响药物的进入；细菌泵出系统增多、增强，以排出已进入细菌内的药物；以及胞膜主动转运减少、建立新代谢途径、增加拮抗药物等，两种以上的机制常可同时启动。耐药菌及MDR的发生和发展是抗菌药物广泛应用，特别是无指征滥用的后果。找到耐药菌的耐药基因，从而根据这些耐药基因设计新型抗生素，或将耐药菌分成不同的亚型，针对不同的亚型在临床上使用相应的抗生素，达到改善治疗效果的目的。国外采用基因芯片技术，检测耐药菌基因的改变，即检测耐药基因。如Michael Wilson就曾使用此方法检测到肺结核杆菌中脂肪酸合成酶II、fbpC、efpA、fadE23、fadE24和ahpC基因发生改变与耐药性有关。提供了新药物作用的靶目标，并指导抑制这些靶目标试剂和药物的合成。在感染性疾病中，病原体的耐药性检测可通过两种方式：1.表达谱芯片检测药物诱导的基因表达改变来分析其耐药性；2.寡核苷酸芯片检测基因组序列的亚型或突变位点从而分析其耐药性。用基因芯片不仅可以同时检测耐药菌的多个耐药基因，还可以同时对多个耐药菌的多个耐药基因进行检测。对临床上用药和新药物的合成均具有指导作用。