匀浆蛋白浓定仪

生理盐水处理过的组织匀浆，乙酸乙酯涡旋离心之后，能直接做液质联用吗？

蛋白提取过程中，将组织样本冻干磨粉后加入水，盐、酸、碱等溶液进行提取，然后离心取上清和直接取少量组织以一定料液比加入缓冲液（200mM Tris-HCl、150mM NaCl、10mM EDTA、PH8.0）进行匀浆然后离心取上清这两种提取方式有什么区别？

我们做农残检测，样品前处理需要均质匀浆，按761方法，称取粉碎后的样品25克加入乙腈50毫升于150ml三角瓶中，用匀浆机进行匀浆，却发现匀浆机刀头过短，而刀头接触不到液面，而无法进行匀浆。拆开匀浆机刀头看，刀头长并是固定的，而无法伸长。后又咨询专家，都说国产的匀浆机刀头都较短，除非购买进口的。请问有何好的办法可以解决此问题。

我们做农残检测，样品前处理需要均质匀浆，按761方法，称取粉碎后的样品25克加入乙腈50毫升于150ml三角瓶中，用匀浆机进行匀浆，却发现匀浆机刀头过短，而刀头接触不到液面，而无法进行匀浆。拆开匀浆机刀头看，刀头长并是固定的，而无法伸长。后又咨询专家，都说国产的匀浆机刀头都较短，除非购买进口的。请问有何好的办法可以解决此问题。

如题，检测室只有一台ika匀浆机，做761时每个样品都用来匀浆，一个样品匀浆完，刀头用纯水冲洗干净，用滤纸搽干净再拿来处理另外一个样品。有时候纯水冲不干净，刀头里还留了点样品碎屑，很担心会污染下一个样品。请问各位大神是如何清洗匀浆机的？

匀浆机大致可分为：组织捣碎匀浆机，可调高速分散器（匀浆机）、固体样品粉碎机。组织捣碎匀浆机广泛应用于科研，医疗，化工制药，食品工业等领域，物料在匀浆杯中通过电机旋转驱动旋刀同时进行劈裂，碾碎，掺和等过程，是物料搅拌捣碎的过程。可调高速匀浆机是科研单位，大专院校，医药工业，农业，环境卫生，森林保护等部门实验室进行细碎，匀化，分散，强烈搅拌，润温，溶解有机物或无机物等的理想设备。 采用高速串激电机，稳定的硅控调节系统，操作较简单。固体样品粉碎机适用于工业，农业，厂矿，医药卫生，煤炭地质等科研单位。可以对各种植物，土壤，矿石，矿物质以及各种粮食进行粉碎处理。

[align=left][font='times new roman'][size=16px]动植物膜脂和膜蛋白提取方法[/size][/font][/align][align=left][font='times new roman'][size=16px]大豆卵磷脂和肺腺癌细胞膜脂提取物的制备[/size][/font][/align]对于大豆卵磷脂样品，首先去除胶囊，将100 mg大豆卵磷脂样品用10 mL正己烷/异丙醇（1:1，v/v）稀释溶解，样品在4℃下超声10 min，样品再经0.45 μm微孔膜过滤，以备后续使用。肺腺癌细胞膜脂的提取方法参照Folch法。首先裂解肺腺癌细胞，向细胞液中加入18 mL已经配好的氯仿-甲醇（2:1，v/v）混合溶剂，摇匀后置于高速低温离心机4℃，3000 r/min离心10 min（摇匀过程中时刻注意溶液的温度，尽量避免温度过高）。然后向该体系中加入约2 mL的超纯水，摇匀后离心。上清液移除后用少量的甲醇-水（1:1，v/v）小心清洗上表面，得到肺腺癌磷脂提取物，过0.45 μm滤膜后，N[font='times new roman'][sub][size=16px]2[/size][/sub][/font]吹干，备用。冰箱-20℃保存，临用时现配溶液。[align=left][font='times new roman'][size=16px] [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]肝脏膜蛋白质的制备[/size][/font][/align]参考试剂盒提取小鼠肝脏膜蛋白质的步骤如下：，试剂准备和组织预处理：取148 mg小鼠肝脏组织，用手术剪刀剪碎，移入4 mL离心管中，加入1 mL的膜蛋白提取剂A，冰浴15 min，之后将离心管中液体移入冰浴预冷玻璃匀浆器中，匀浆70次。去除未破碎的细胞：在4℃下将样品于900 g离心10 min，为了确保上清液的纯度应尽量避免接触沉淀。收集肝脏浆蛋白和细胞膜碎片：将上清液继续在4℃下1400 g离心40 min，获得细胞膜碎片。上清液（肝脏浆蛋白）应置于-70℃下保存备用。提取肝脏膜蛋白质：尽量将上一步骤中上清液吸取干净，避免肝脏浆蛋白的干扰。加入300 μL膜蛋白提取剂B，高速涡旋10 s后立即进行冰浴10 min，重复上述步骤三次。随后立即4℃下14,000 g离心15 min，吸取上清肝脏膜蛋白溶液，-70℃下保存备用。

在用户咨询产品时我们常常把组织研磨仪与组织匀浆器当做是同一种东西，其实我们通常所说的组织研磨仪与组织匀浆器是有一定的区别的：通常所指的组织研磨仪是利用研磨球对样品的撞击、摩擦使组织破碎研磨的仪器，其体积较大，电驱动摇臂运转，应用广泛；而通常说的组织匀浆器是一种玻璃仪器，体积较小，手动研磨，主要适用于柔软的内脏组织。组织匀浆器的常见种类：1. 杜恩斯组织匀浆器（Dounce Tissue Grinder） 硼硅酸盐玻璃材质，有一松一紧两个研磨杵，用于粗磨和精磨2. 杜阿尔组织匀浆器（Duall Tissue Grinder）特点是内面磨砂，适用研磨肌肉，心脏、肺等器官或组织3. 坦布鲁克组织匀浆器(Tenbroeck Tissue Grinder)4. 锥形组织匀浆器（Tapered Tissue Grinders）5. 槌头组织匀浆器（Potter-Elvehjem Tissue Grinders）

农残分析使用匀浆机提取，如何清洗匀浆机的刀头！

匀浆是农残分析中很常见的提取手段。匀浆时您拿什么做容器？离心管？？烧杯？？？其他？？？？

农残检测前处理匀浆机什么牌子好

实验室农残提取需要用到高速匀浆机，平时就涉及农产品,有没有用的好的推荐型号？德国IKAT25貌似好评很多，但是价格也挺贵。

做农残检测时匀浆机的刀头用乙腈还是丙酮好？

从 植物 叶片提取的植物总蛋白不但是家养类动物生长发育的重要营养物质，而且是具有潜力的新一代营养保健食品，因而掌握植物叶蛋白的提取方法至关重要，让我们一起了解这整个实验原理和过程吧。一、实验目的熟悉植物叶蛋白的几种提取原理和方法，了解其意义及其应用价值。二、实验原理植物叶蛋白或称绿色蛋白浓缩物(leaf protein concentration，简称LPC)，是从新鲜植物叶片中提取的高质量浓缩蛋白质，不仅是畜禽生长发育和生产畜产品的主要营养物质，而且目前也正成为人类的保健营养理想食品之一。天然蛋白存在于为数甚多的植物体内，对其分离应依据人们的利用目的及提取蛋白含量和品质加以考虑。天然蛋白质一般在溶液中呈稳定的亲水胶体状态，故LPC 亦称叶蛋白胶。其特点是：(1)水化作用 即蛋白质分子表面附有能有效防止蛋白质分子沉淀析出的水化膜;(2)电荷排斥作用 水化膜外还有电荷层(具阴、阳离子)能有效地防止蛋白质分子的凝集。故溶液蛋白质颗粒(溶质)呈溶解状态;(3)欲提取植物组织中的蛋白质必须利用溶解度的差异进行分离纯化(如盐析、有机溶剂分级沉淀法、疏水层析、结晶、加热、离心分离等法)，利用分子大小和形状差异进行分离纯化(分子筛层析法);还可利用电荷性质的差异分离纯化(离子交换法)。只要创造上述影响因素，即可使蛋白质从植物叶片中分离并沉淀出来。植物叶蛋白提取一般遵循如下基本原则：尽可能提高样品蛋白的溶解度，抽提最大量的总蛋白，减少蛋白质的损失;减少对蛋白质的人为修饰;破坏蛋白与其他生物大分子的相互作用，并使蛋白质处于完全变性状态。根据该原则，植物叶蛋白制备过程中一般需要有四种试剂①离液剂：尿素和硫脲等;②表面活性剂：又称去垢剂，早期常用NP-40、Tritonx-100等非离子型去垢剂，离子型去垢剂有SDS、胆酸钠、LiDS 等，还有象CHAPS(含它的蛋白溶液可以冻存)与Zwittergent 等双性离子去垢剂;③还原剂：DTT、DTE、TBP、Tris-base 等;④蛋白酶抑制剂及核酸酶：EDTA、PMSF、蛋白酶抑制剂混合物(Protease inhibitor cocktails)等，如为了去除缓冲液中存在的痕量重金属离子，可在其中加入0.1～5 mmol/LEDTA，同时使金属蛋白酶失活。三、仪器和试剂仪器离心机、移液器、研钵、离心管、冰箱。试剂1. 20 mL 样品提取缓冲液：2.5 mL 0.5 mol/LTris-HClhttp://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/10/A1381399946_small.jpg3. -20 ℃下预冷丙酮(含0.07% β-巯基乙醇)4. -20 ℃预冷的80%丙酮(含0.07% β-巯基乙醇)5. 饱和硫酸铵溶液 称取(NH4)2SO4 80 g，加蒸馏水100 mL，加热50～60 ℃，搅拌溶解，室温过夜，用浓氨水调pH 至7.06. 0.05 molpH7.0的磷酸缓冲液10%NaCl 0.1mol 醋酸95%乙醇7. 植物叶片(草本植物、木本植物叶片等都可)四、实验步骤植物叶蛋白的提取主要有盐析法、有机溶剂沉淀法、加热法(含逐步和快速加热)、 离心分离法、结晶和重结晶法等。依据今后的开发方向(以饲料为基础，以食品、饮品为开发方向)及简便易行和使用的原则，主要采用盐析法、加热法和有机溶剂法分离提取叶蛋白(冷提和热提)。不同的提取方法，对样品的处理方式、程度和要求不同，结果也有差异。1. (NH4)2SO4 沉淀法提取叶蛋白取0.3 g 植物叶蛋白，用液氮充分研磨转入离心管中，加入3 mL 提取缓冲液，摇匀并放在4 ℃条件下提取1 h，充分溶解蛋白后，4 ℃10000 r/min 离心20 min，弃沉淀，上清液中加入(NH4)2SO4，混匀1 h，按1：2(v/v)加入-20 ℃预冷的80%丙酮，混匀后4 ℃12000 r/min 离心10 min，沉淀在-20 ℃冰箱中放置20 min，使丙酮完全挥发后加适量上样缓冲液，待沉淀充分溶解后，4 ℃12000 r/min 离心5 min，取上清液即为所提取的叶蛋白溶液。2. 改良丙酮沉淀法提取叶蛋白取0.3 g 左右的植物叶片，用液氮研磨，色素多的可按材料鲜重的10%加入PVP，并将充分研磨过的样品转入离心管中，加入4 mL 的提取缓冲液，摇匀并放在4 ℃条件下提取1 h，充分溶解蛋白。放置后的样品充分摇匀，4 ℃10000 r/min 离心30min，弃沉淀，上清液中加入2.5～3倍体积的村-20 ℃条件下过夜，让蛋白充分沉淀。之后，4 ℃10000 r/min 离心30min，其上清，沉淀置于-20 ℃下，使丙酮完全挥发，如有必要加入上样缓冲液溶解沉淀。缓冲液用量300 ul，沉淀充分溶解后，转移至1.5 mL 离心管中，4 ℃12000 r/min 离心15min ，取上清液即为所提取的叶蛋白溶液。该方法提取的蛋白质，提取效率高，杂质干扰少，电泳结果蛋白条带清晰，数量多。 3. 植物叶片总蛋白的提取—三氯醋酸—丙酮沉淀法①在液氮中研磨适量的叶片;②悬浮于含10%的三氯醋酸和含0.07% β-巯基乙醇(可用DTT 代替)的丙酮溶液在-20 ℃条件下冰浴;③让蛋白质沉淀过夜后离心(4 ℃ 10000 r/min 离心30~60min)，弃上清;④重悬沉淀浮于含0.07% β-巯基乙醇的预冷丙酮溶液中;⑤离心(同上)后真空干燥沉淀;⑥用上样缓冲液溶解沉淀，离心;⑦Brandford 法定量蛋白，然后分装至Eppendof 管中保存在-78 ℃备用。4. 分步提取可溶性叶蛋白(1)蛋白质浸出①水溶性蛋白质浸出：用0.05 molpH7.0的磷酸缓冲液(或蒸馏水)将样品制成匀浆液，然后离心15min(4000 r/min)，收集上清液即蛋白质浸出液，再将沉淀物按上述操作重复两次。②盐溶性蛋白质浸出用10%NaCl 将前者剩余沉淀物分离提取两次，收集蛋白质浸出液。(2)蛋白质沉淀用0.1mol 醋酸将蛋白质浸出液pH 值调至蛋白质等电点(pH4.5左右)，即8体积蛋白质浸出液加入1体积0.1 mol 醋酸，混匀，离心15min(3000 r/min)，弃去上清液，沉淀物即为可溶性叶蛋白。(3)蛋白质收集于沉淀物中加入95%乙醇，混匀，用定量滤纸过滤或抽滤，待风干后收集。植物总蛋白的提取方法以有机盐沉淀法为主，本文中介绍到的(NH4)2SO4沉淀法、丙酮沉淀法、三氯乙酸—丙酮沉淀法和分步提取法，各个方法各有特点和适用范围，各位如有更好的植物总蛋白提取方法，欢迎补充。

用硝酸汞沉淀除去乳酪蛋白，但水解蛋白不会被除去，与饱和苦味酸产生沉淀反应。 试剂配制 除蛋白试剂：硝酸汞14g，加入100mL蒸馏水，加浓硝酸约2.5mL，加热助溶，待试剂全部溶解后加蒸馏水至500mL。溶液出现混浊等污染现象停止使用。 饱和苦味酸溶液：称取2 克固体苦味酸于烧杯中，用冷却的蒸馏水定容至100mL,后将定容好的溶液倒入烧杯中煮沸（沸腾即可），然后将液体冷却，待结晶析出后将上清液倒入试剂瓶中。 样品处理奶粉样品的处理： (1)将样品旋转振荡，使之充分混合； (2)准确称取6g 样品，加入50ml 中性温水（60℃左右），充分溶解样品。 原料奶样品：将样品充分混合即可。 操作方法 取5mL 待检处理过的样品，放入干净干燥的平皿或其他容器内，加除蛋白试剂5mL 混合均匀，边加边摇动，不可产生大体积蓄状物，将摇匀的液体用快速定量滤纸过滤于试管中，收集滤液约3mL左右。 然后沿试管壁慢慢加入饱和苦味酸溶液约0.5mL（每加0.5mL约需要30-40秒），切勿使滤液与苦味酸混合(加入的苦味酸溶液层不超出总液体体积的1/3)。 结果判断 方法判定一（沉淀圈判定）：加入苦味酸后，在10 秒内逆光或在黑色背景下）上下左右移动不同方位观察产生沉淀圈情况，无沉淀圈判定为阴性，有明显沉淀圈判定为阳性。 按产生沉淀圈情况进行“阴性、阳性”判定：

原理 用硝酸汞沉淀除去乳酪蛋白，但水解蛋白不会被除去，与饱和苦味酸产生沉淀反应。 试剂配制 除蛋白试剂：硝酸汞14g，加入100mL蒸馏水，加浓硝酸约2.5mL，加热助溶，待试剂全部溶解后加蒸馏水至500mL。溶液出现混浊等污染现象停止使用。 饱和苦味酸溶液：称取2 克固体苦味酸于烧杯中，用冷却的蒸馏水定容至100mL,后将定容好的溶液倒入烧杯中煮沸（沸腾即可），然后将液体冷却，待结晶析出后将上清液倒入试剂瓶中。 样品处理奶粉样品的处理： (1)将样品旋转振荡，使之充分混合； (2)准确称取6g 样品，加入50ml 中性温水（60℃左右），充分溶解样品。 原料奶样品：将样品充分混合即可。 操作方法 取5mL 待检处理过的样品，放入干净干燥的平皿或其他容器内，加除蛋白试剂5mL 混合均匀，边加边摇动，不可产生大体积蓄状物，将摇匀的液体用快速定量滤纸过滤于试管中，收集滤液约3mL左右。 然后沿试管壁慢慢加入饱和苦味酸溶液约0.5mL（每加0.5mL约需要30-40秒），切勿使滤液与苦味酸混合(加入的苦味酸溶液层不超出总液体体积的1/3)。 结果判断 方法判定一（沉淀圈判定）：加入苦味酸后，在10 秒内逆光或在黑色背景下）上下左右移动不同方位观察产生沉淀圈情况，无沉淀圈判定为阴性，有明显沉淀圈判定为阳性。 按产生沉淀圈情况进行“阴性、阳性”判定：

做农残，遇到“匀浆提取”这个概念，不是很确定，是一项工作还是两相分开的工作呢？

[font=宋体]膜蛋白是细胞膜上的重要组成部分，参与了多种生物功能的实现。然而，在膜蛋白的研究和应用中，我们经常遇到一些问题。本文将对膜蛋白常见问题进行解析，旨在帮助读者更好地理解和应用膜蛋白。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]什么是膜蛋白？[/font][/b][font=宋体][font=宋体]膜蛋白是嵌入或附着在细胞膜上的蛋白质。[/font] [font=宋体]它们在细胞膜的功能中起着至关重要的作用，例如细胞信号传导、分子运输和细胞间通讯。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]膜蛋白的结构是怎样的？[/font][/b][font=宋体][font=宋体]膜蛋白具有多种结构，但它们通常由疏水区和亲水区组成。[/font] [font=宋体]疏水区域与膜的脂质双层相互作用，而亲水区域面向细胞外或细胞内环境。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]膜蛋白是如何分类的？[/font][/b][font=宋体][font=宋体]膜蛋白根据它们在细胞膜内的位置及其功能进行分类。[/font] [font=宋体]它们可分为整合膜蛋白、外周膜蛋白、跨膜蛋白或脂质锚定蛋白。[/font][/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体]整合膜蛋白的作用是什么？[/font][/b][font=宋体]整合膜蛋白嵌入细胞膜内，在分子运输、细胞信号传导和细胞粘附中起着至关重要的作用。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]外周膜蛋白的作用是什么？[/font][/b][font=宋体]外周膜蛋白位于细胞膜表面，参与细胞信号传导、细胞粘附和酶活性。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]什么是跨膜蛋白？[/font][/b][font=宋体]跨膜蛋白跨越细胞膜的整个厚度，参与分子运输、细胞信号传导和细胞粘附。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]膜蛋白如何将分子转运穿过细胞膜？[/font][/b][font=宋体]膜蛋白使用多种机制将分子转运穿过细胞膜，包括被动转运、主动转运、促进扩散和渗透。[/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体]膜蛋白在疾病中的意义是什么？[/font][/b][font=宋体][font=宋体]膜蛋白参与许多疾病过程，包括癌症、囊性纤维化和阿尔茨海默病。[/font] [font=宋体]了解膜蛋白的结构和功能有助于开发针对这些疾病的新疗法。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]膜蛋白的提取方法[/font][font=宋体]有哪些[/font][font=宋体]？[/font][/b][font=宋体]①冷热交替法、反复冻融法、超声破碎法、玻璃匀浆法、自溶法和酶处理法，使细胞破碎，然后通过梯度离心得到含有膜蛋白的粗组分。[/font][font=宋体][font=宋体]②先分离膜，然后提取。如选用液氮研磨组织，加入匀浆缓冲液及蛋白酶抑制剂，然后差速离心、蔗糖密度梯度离心。收集[/font][font=Calibri]37%[/font][font=宋体]与[/font][font=Calibri]41%[/font][font=宋体]间的成分，即为质膜部分。裂解即可收集膜蛋白。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]③刮下细胞后将细胞溶于有蛋白酶抑制剂的缓冲液中，于室温与液氮罐中反复冻融[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]次。[/font][font=Calibri]5000[/font][font=宋体]转[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]度离心，驱除核及未裂解的细胞。取上清[/font][font=Calibri]12000[/font][font=宋体]转[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]度离心[/font][font=Calibri]10[/font][font=宋体]分钟取沉淀溶于有蛋白酶抑制剂的缓冲液中。[/font][font=Calibri]12000[/font][font=宋体]转[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]度离心[/font][font=Calibri]10[/font][font=宋体]分钟取沉淀溶于有蛋白酶抑制剂的缓冲液[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]中提取后测蛋白浓度，[/font][font=Calibri]SDS-PAGE[/font][font=宋体]电泳，分装后[/font][font=Calibri]-20[/font][font=宋体]度保存备用。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]以上方法仅供参考，实际操作中可能需要根据具体情况进行调整。提取膜蛋白时，需要注意保持其生物活性，尽量减少对其结构和功能的破坏。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]膜蛋白有哪些？[/font][/b][font=宋体]膜蛋白是一类位于细胞膜上的蛋白质，具有重要的生物功能。根据其结构和功能，可以将膜蛋白分为不同的类型，包括：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]①外周膜蛋白：也称为外在膜蛋白，主要分布在细胞膜的内外表面上，多为水溶性，以非共价（氢键或离子键）的形式与膜的极性端结合在一起。[/font][font=宋体][font=宋体]②内在膜蛋白：也称为整合膜蛋白，在膜蛋白中占比最高，约为[/font][font=Calibri]70%-80%[/font][font=宋体]。一般穿过整个细胞膜，分为跨膜部分和膜外部分，跨膜部分可以为β桶状结构，或者由几个α螺旋围成的亲水性孔道，有利于物质的传输。[/font][/font][font=宋体]③脂锚定蛋白：一类以共价键形式与磷脂连接的蛋白，由于磷脂可以插入细胞膜中，带着蛋白质一起镶嵌到膜上。[/font][font=宋体]此外，还有一些特殊类型的膜蛋白，如糖蛋白、转运蛋白和酶等。这些蛋白在细胞的生命活动中起到了至关重要的作用。例如，转运蛋白可以参与物质的跨膜运输，而酶则可以催化特定的化学反应。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]在研究膜蛋白时，可以采用不同的技术手段，如[/font][font=Calibri]X[/font][font=宋体]射线晶体学、核磁共振和冷冻电镜等。这些技术可以帮助科学家们了解膜蛋白的三维结构，从而更好地理解其功能机制。同时，由于膜蛋白在药物设计和细胞治疗等领域具有广泛应用价值，因此对其结构和功能的深入研究具有重要的实际意义。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]详情可关注义翘神州[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/transmembrane-proteins][b]跨膜蛋白[/b][/url]页面：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/transmembrane-proteins[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

请问各位老师，做果蔬有机磷检测，前处理中匀浆完之后，匀浆机大家是怎么洗的啊？

做蔬菜中农药残留，前处理要用到高速匀浆机，想买IKA的，它的刀头是多大尺寸的合适？S 25 D - 14 G - KS 分散刀头，这个刀头适合吗？买IKA时，它带刀头吗？还用再另外花钱买刀头吗？

果蔬农残检测前处理中，匀浆机可不可以用果蔬机替代？因为现在市场上的一些果蔬机是可以达成浆状的？

现本人正在选购匀浆机，用于肉品匀浆，现有二种开型号（IKA T-18basic和弗鲁克FA-25）不知哪种性能好一点？是否还有更好的？

自动匀浆机，用于生物样品制备的，一般报价多少？有知道的版友帮忙推荐几台看看！！[em09511][em09511]

最近在学习农残检测的一些标准，在样品的前处理中提到一些仪器如：均质机、分散机、匀浆机，不知道这几个仪器的应用区别在哪里。

请教各位农残高手，蔬菜取回应该怎么去除表面的其它污染，而又不损失被测物质？通常匀浆是取哪一部分？我是第一次做植物，请求帮助

在能力验证时，很多样品是人为添加进去的，这时候，我觉得添加进样品的农残，一般不会进入细胞（动物或植物），是要样品的表面，我觉得采用超声提取的效率会高于匀浆，不知道我的想法正确吗？

请教一下，国产的匀浆器类型和生产商多吗？质量是否能保障（如高速时的升温问题）

条条大路通罗马，纯化之路千万条。本篇是写给蛋白质纯化新手的，就一些最常用的纯化工艺、概念方法作一些列举。以起始原料的不同来进行分类，分为：大肠杆菌、酵母、细胞培养、腹水、血清、生物组织六个板块。板块一、大肠杆菌（这里讨论的大肠杆菌为非分泌到培养基中的重组蛋白，是否有重组蛋白分泌到培养基中的工程菌我没有见过。）一、关于菌体的量大肠杆菌表达的基因工程蛋白是纯化人员最方便获得的原料，对纯化工艺开发来说几乎没有原料方面的限制。常看到有战友用个几毫升的菌液去做纯化，对此我十分不解，同样要做，为什么不多做点呢？很少的菌体会给纯化带来一些难以估计的问题，工艺的重复性和放大往往出现问题。因此，要做个好工艺就多发酵表达一些菌体吧。我做纯化时，初始工艺摸索用的菌体量一般为10g左右。二、关于是否包涵体表达包涵体的定义我就不讲了。我要讲的是，一个基因工程蛋白是否是包涵体表达的说法本身就不完全准确。至于包涵体在电镜下的晶体颗粒表现等等对我们纯化来说毫无意义，我相信做纯化工艺的人没有谁去看这个电镜，也不关心。我们判断的依据只是SDS-PAGE，目的蛋白在破菌沉淀中，我们就认为是包涵体表达，但这是一个似是而非的结论。看着没问题，实际上是有毛病的。关键在于你用的是什么破菌缓冲液！有些蛋白在用缓冲液A破菌时是在破菌沉淀中，而用缓冲液B破菌时却在破菌上清中。缓冲液A和B的差别可能只是pH上相差1-2个单位。那么它是包涵体表达还是可溶上清表达呢？说这个问题主要在于有些战友往往非常在意他的目标蛋白是否包涵体表达。甚至还有包涵体表达就用专门的包涵体蛋白纯化方法等等。我们应该关心的是目标蛋白在什么缓冲体系下是可溶的，在什么缓冲体系下是不溶的！不要让包涵体这个概念给你误导。三、关于表达量我们常常在发表的文章上看到，我这个工程菌的目标蛋白的表达量达到菌体总蛋白的30%、50%等等。我要说都是文章的作者在忽悠。不知道他们是如何定量的，用的最多的大概就是SDS-PAGE的扫描分析吧。且不说一个SDS-PAGE不能表现出所有的菌体蛋白，电泳的染色方法、染色脱色强度、照片的曝光强度、扫描分析时的条带选择等等无不对这个百分比影响巨大。在公司的QC部门做的对此应该最有体验，20%的条带要它变成30%又有何难？我的观点是对待表达量的描述不可定量，只能定性。如用：很低、较低、中等、较高、很高等来描述。有一个指标与表达量密切相关，那就是单位体积的菌体量。两者的乘积才是单位体积发酵液的目标蛋白产率。与表达量相关的指标还有纯化倍数、纯化收率等，这些指标我们也常常在发表的文章中看到。同样，我也认为都是不准确的。除非你用的是活性测定的方法，用蛋白活性收率来表征。纯化工艺的难易有时候也与表达量相关，表达量高时往往纯化也方便的多。所以，尽量提高你的目标蛋白表达量不只是基因工程上游和产量的问题，还是纯化工艺开发的问题。四、菌体破碎（1）破菌前处理诱导表达的菌体在发酵离心后，最好先用PBS缓冲液或其它缓冲液立即洗涤一次。菌体洗涤可以去除一些培养基中的杂质，及代谢产物，减少对后续纯化的影响。如果菌体已经冻存过，冻融的菌体可能有部分破碎，就不要洗涤菌体了。小量菌体的悬浮可以用5ml的枪头吹打，再磁力搅拌。大量菌体的悬浮可以用分散乳化机。破菌缓冲液的用量一般为1∶10—1∶20，即1g湿菌体用10—20ml的破菌缓冲液。（2）破菌缓冲液的选择选择何种破菌缓冲液，应该与后续的纯化方法密切相关，不能一刀切。而且，破菌缓冲液还与是否可溶表达相关。对于可溶表达的重组蛋白，一般就选用第一步层析纯化的平衡缓冲液为破菌缓冲液。对于不可溶表达的重组蛋白，最简单的就是选用PBS为破菌缓冲液。在选用破菌缓冲液时，有个小小的trick，加EDTA。有个别重组蛋白很脆弱，在超声破菌时就有大量的降解。注意，不是表达降解，而是超声过程中降解。特别是用pET32表达的his-tag融合蛋白容易降解，我运气好，遇到过2次这种超声降解。第一次碰到时，害得我好苦。反复找原因，是诱导表达温度？是超声温度过高？超声功率？外源蛋白酶污染？……最后用EDTA解决了。在破菌缓冲液中加0.5mM的EDTA就不会降解了。推测原因，可能是大肠杆菌自身有那么一种蛋白酶，破菌释放后就正好会攻击我的宝贝蛋白。而这种蛋白酶是金属蛋白酶，加EDTA后把它的枪栓（金属离子）给卸了，我的蛋白小命也就保全了，哈哈。第二次在SDS-PAGE上看到降解时，心里就不慌了。可能有战友会问，his-tag的蛋白加了EDTA后还怎么过Ni柱啊，恭喜你，问对了。我的解决方案是先过离子交换柱。EDTA带负电荷，用Q/DEAE吸附EDTA，或用SP柱吸附目标蛋白后，再透析一下，过Ni柱纯化。爱探险的dora跳着舞，成功啦，you did it！。（3）破菌方法大肠杆菌的破碎方法常用的大概有：反复冻融加溶菌酶法、超声法和压力匀浆法。一般来说处理菌体的量也是这个顺序。冻融方法我不喜欢，处理量太少且费时，要买溶菌酶，还是个外源蛋白。我喜欢强力型的超声和压力匀浆。超声法是小规模和中等规模破碎菌体的首选，选择好相应的超声探头，一次处理菌体量为0.1g-100g。压力匀浆为中到大规模破菌的首选，处理量大、快，破菌效果好，但发热量大，对温度非常敏感的蛋白慎用。超声破菌：以10g湿菌体为例，加入破菌缓冲液100ml，玻璃烧杯中磁力搅拌悬浮充分。冰水浴超声。设置超声时间4s，间隙时间4s，超声功率400-600W，超声次数100-200次。压力匀浆：以200g湿菌体为例，加入4℃预冷的破菌缓冲液3000ml，用分散乳化机充分混匀。匀浆压力800bar左右，压力匀浆发热非常大，流出液要冰水浴加磁力搅拌。一次匀浆完毕后，让菌液充分冷却后再进行二次匀浆。匀浆完毕的菌液如果粘度比较大，可用超声破碎仪超声40次，打碎核酸减小粘度，以方便离心和纯化。（4）破菌后离心高速冷冻离心机离心，50ml的小管18000rpm，20min，4℃；500ml的瓶用10000rpm，30min，4℃。50ml小管的离心效果比500ml的瓶好，如果你的溶液量在300ml以下，还是勤快点，多装几根50ml的小管吧。（5）过滤对上清可溶表达的蛋白在收集破菌离心上清后，必须过滤后才能上柱纯化。在园子里常看到有战友说我的柱流速很慢，层析柱压缩等很厉害，柱头有杂质堵了等等，这多数是因为没有进行过滤操作。过滤一般采用真空负压抽滤，可以选择0.8um的膜或双层滤纸过滤。多数层析的要求都是过柱溶液需经过0.45um的膜过滤，但实际上对破菌后的上清液或包涵体的溶解上清样，0.45um膜太难过滤了，mission impossible，无法完成操作。所以在实际工作中，我们都是采用双层滤纸或0.8um的膜过滤。在此推荐我用的一套设备组合：millipore wp6122050型台式真空压力两用泵和Sartorius 16201不锈钢过滤器，非广告，好用哦。五、包涵体处理前面说过对纯化来说，我不赞成包涵体的提法，但为了表述方便还是不妨借用一下，谁…谁在拍砖头啊。（1）包涵体洗涤我的蛋白是包涵体表达，用什么来洗涤啊？此类问题战友常问。其实还真不好回答。用什么溶液来洗涤包涵体也是与后续纯化方法相关的。例如，后面接离子交换层析，洗涤液不能加盐；后面接Ni柱，洗涤液不能加EDTA等等。罗列了一些可用的洗涤液成分如下，根据自己的需求来增减。pH6.0-pH9.0：高pH使得包涵体倾向于溶解，杂蛋白也去除的好些，但高pH有可能使目的蛋白降解。10-50mM PB，10-50mM Tris：维持缓冲环境，后接离子交换时选低一点的浓度。0-0.5N NaCl：盐洗涤有助于核酸的去除，多年前有位做干扰素的可爱老太太教我，盐洗涤后包涵体的OD280/260的比值（溶解后）会升高很多，也就是核酸去除很多，有利于后续纯化。0.5-5mM DTT：提供还原环境，打开蛋白中的二硫键，使得包涵体倾向于溶解，有利于杂蛋白的去除。但浓度太高了使得包涵体真的溶解就不是洗涤了。后续用Ni-IDA柱不可以加，用Ni-NTA柱少加。0-1%beta-ME：同DTT，还原能力稍弱。气味那个香啊……0-2N Urea：变性剂，有利于包涵体中氢键、疏水键、范德华力……的打开，有利于洗涤去除杂蛋白。同样高浓度会使包涵体溶解。类似的是盐酸胍，更强的变性剂，更高的价格，我等不穷的人也消费不起。当然，你很富就用吧，有时候更有利于包涵体蛋白的线性化。0.05-1%Triton X100：非离子型表面活性剂，像洗衣粉一样用了。同样的还有zwittergent，一种我一直想找机会试试的东东，当年为了溶解beta干扰素包涵体搞得我好苦。0-2mM EDTA：螯合剂，去除金属离子，有利于蛋白的稳定和溶解。Ni柱禁用。其它：期待各路英豪奉献。（2）包涵体溶解看了包涵体洗涤部分，怎么溶解包涵体应该心中有数了。无非就是pH，变性剂，还原剂，表面活性剂等等的组合。经典的包涵体溶解液的配方为：pH8.0，20mM Tris，8M Urea。说它经典，是因为我用的最多，嘻嘻。再根据个性蛋白纯化的需要往这个配方里面加调料，如Ni柱纯化的咪唑、氯化钠；溶解或吸附不好时再加点DTT、Triton。包涵体的溶解也有两个小Trick，独门秘籍哦。第一，包涵体沉淀在溶解时往往会有一些像硬胶状的块块，有弹

请问761方法中匀浆就是萃取的过程吗