细菌污染程量仪

使用的磷酸缓冲液滋生了细菌，我的HPLC感觉被污染蛮严重的，求大佬们给点冲洗的意见，我的机子还有救么？C18的柱子

我个人认为，食品中细菌污染主要有以下几个途径1．食品原料本身的污染2．食品在生产、贮存、运输、销售过程中的污染3．食品从业人员及动物接触的污染

如何应对被重金属严重污染的珠三角土壤？据媒体报道，德国科学家新近研究出一种能吃掉有毒重金属的超能力细菌。昨日（2005年9月2日），就“细菌吃重金属”修复土壤的可能性和可行性，采访了广东省生态与土壤研究所研究员陈能场，他是省内正在做土壤修复的专家之一。他指出，理论上讲可行，但面临着如何分离收集细菌等问题。发现能吃核废料的细菌 据美国《物理学组织网站》报道，德国科学家在近日新发现了一种特殊的细菌。据称，这种细菌竟然能够在有毒的核废料中存活，还能够聚集吸附有毒重金属。外国科学家们认为，这种细菌具有如此强的适应能力，或许可以用于清洁金属有毒物的废弃场所。 对此，陈能场告诉，从理论上说，细菌吃掉重金属完全可能。“吃”实际上是一种吸附，即微生物如果能在有重金属的环境中存活，在新陈代谢过程中，自然会对重金属产生吸附作用。据介绍，这种方法过去的几年在日本、德国已有较好发展。 不过，据了解，国内目前对细菌吸收重金属的研究实验水平还远远不如国外。

新浪科技http://i2.sinaimg.cn/IT/2012/0905/U2727P2DT20120905091245.jpg 大肠杆菌，一种顽强的生命体。它将会是合适的火星殖民者吗？http://i2.sinaimg.cn/IT/2012/0905/U2727P2DT20120905091300.jpg　　英国研制的猎兔犬-2号火星着陆器，其经过特殊设计，专门用于搜寻火星生命体。但是遗憾的是它在降落火星后便失去了联系　　新浪科技讯 北京时间9月5日消息，据Discovery News网站报道，为了满足建造者们永不满足的好奇心，美国宇航局的好奇号火星车正在火星表面奋力前行，搜寻着这颗红色行星在现在或过去可能曾经存在过的宜居环境。然而，这里存在一个小小的可能性，那就是来自地球的微生物对火星环境的污染。这将干扰对火星潜在生命现象的研究进程。　　到目前为止，已经有数十颗美国，苏联和欧洲的探测器抵达火星。在离开地球之前这些探测器都经过了严格的消毒程序，然而这样的消毒真的就能保证100%的杀死那些顽强的地球偷渡者吗？　　而如果我们想要确认火星是否已经遭受到来自地球的生物学污染，这将打开一个天体生物学上的潘多拉魔盒——我们是否可能会在无意中将生命的种子带到另一颗行星上，最后这些微生物逐渐适应了那里的环境条件，并最终演化成为一种完全崭新的生物物种？　　对于这种生物学污染我们确实有理由对此感到担忧。在2006年，有报道称一种常见的土壤细菌“芽胞杆菌”在经过紫外光消毒之后仍然附着在探测器上，继续保持着健康和活力。　　但是反过来看，将微生物带上火星也将成为历史上最伟大的无心插柳式的科学实验：将有机物或生命体带上一颗原本没有生命的星球，在这里进行达尔文进化论的实际测试，并打开一扇通往地球早期历史的窗子。　　美国莱斯大学天体生物学专家詹尼特·赛菲特(Janet Siefert)写道：“从岩石纪录中我们已经知道复杂生命体是非常顽强的。尽管在历史上多次经历几乎被彻底摧毁的灾难，但是这些复杂生命体却每次都能逃过浩劫并成功地适应新环境。因此我们相信一旦生命在另一颗行星上被播种，它们就可以生存下去。”　　这位专家坚信，根据地球上的化石记录，这些微生物将会排除万难，改变自己的基因特征以便让自己最终快速适应崭新的生存环境。然而即便如此，这些生命体真的能经受住火星表面那种干燥，高辐射率的严酷环境吗？

[font=&]【题名】：[font=微软雅黑, &][color=#333333]饮用水细菌内毒素污染的风险识别与分析研究进展 [/color][/font][/font][font=&]【全文链接】: https://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-HJHX201503004.htm [/font]

随着我国经济快速发展，现代建筑的密封性越来越好；人们居住条件不断改善，各种新型装饰装修材料、家具大量涌入室内；空调的普遍使用导致人们开窗通风时间减少；以上三点都使得污染物在室内蓄积，污染程度越来越严重，对人们的健康构成巨大威胁。 室内空气污染主要有甲醛、苯、TVOC等有机性挥发物；厨房油烟；吸烟产生的污染；宠物带来的细菌污染；其他细菌、病毒等，2010年的甲型流感，其病毒也属于这一类污染。

.4 水质的细菌学检测 9.4.1 水中细菌总数的检测 9.4.1.1 目的和原理 水中细菌总数往往同水体受有机物污染的程度呈正相关，它是评价水质污染程度的一个重要指标之一。由于重金属及某些其它有毒物质对细菌有杀灭或抑制作用，因此总细菌数少的水样，并不能排除已被这些物质所污染。本试验采用标准平皿法对水样中细菌作计数，这是一种测定水中好氧的和兼性厌氧的异养细菌密度的方法，由于细菌在水体中能以单独个体、成对、链状，成簇或成团的形式存在，此外没有单独的一种培养基或某一环境条件能满足一个水样中所有细菌的生理要求，所以由此法所得的菌落数实际上要低于被测水样中真正存在的活细菌的数目。细期总数是指1毫升水样在营养琼脂培养基中，37℃、24小时培养后所生长的菌落数。一般规定，1毫升自来水中总菌数不得超过 100个。 9.4.1.2 材料和器皿 （1）培养基①营养琼脂培养基②2216E培养基：蛋白胨 5.0克 酵母膏 1.0克 FePO4 0.01克 琼脂 18.0克 陈海水 1000毫升 pH 7.6～7.8 （2）无菌采样瓶、灭菌移液管、灭菌培养皿，盛有90ml及 9mL灭菌蒸馏水的锥形瓶和试管。 9.4.1.3 方法和步骤 （1）采集水样。（2）吸取10 ml水样（河水、污水、游泳池水或港湾水等），注入盛有90ml无菌水或无菌海水的三角瓶中，混匀成10-1稀释液，在吸水样前，水样应彻底搅动均匀。（3）按10倍稀释法将水样稀释成10-2、10-3、10-4。（4）根据水样的洁净程度，污染严重者选取10-2、10-3、10-4稀释度；中等的选取10-1、10-2、10-3稀释度，每个稀释液分别注入两个培养皿，每皿 1ml。稀释度的选择是本试验精确度的关键，选择适宜者，平皿上菌落总数介于30—300个之间。（5）注入彻底融化，然后冷却到45℃的营养琼脂培养基（用于河水样）或2216E培养基（用于海水、港湾水样）约15ml，立即旋摇培养血，充分混匀，水平放置至固化。（6）接种河水的培养皿，倒置于37℃培养24小时。接种海水样，港湾水样的培养皿，应倒置后于18—20℃下培养到长出明显菌落（5天左右）止。 9.4.1.4 结果与分析 取同一稀释度的平板培养物，依菌落计算原则进行计算。（1）菌落计算原则平皿菌落的计算，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，防止遗漏，也可借助于菌落计数器计数。对长得相当接近，但不相触的菌落，应予以—一计数。对链状菌落，应当作为一个菌落来计算。平皿中若有较大片状菌落时则不宜采用，若片状菌落少于平皿的一半时，而另一半中菌落分布又均匀，则可将其菌落数的2倍作为全皿的数目。算出同一稀释度的平均菌数，供下一步计算时用。（2）计算方法①首先选择平均菌落数在30～300者进行计算。当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，即可用它作为平均值乘其稀释倍数（见表5－9的例1）。②若有两个稀释度的平均菌落数都在30—300之间，则应按两者的比值来决定。若其比例小于2，应报告两者的平均数；若大于2，则报告其中较小的数字（见表7-例2和例3）。③如果所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表5－9例4）④若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表5－9例5）。⑤如果全部稀释度的平均菌落数均不在30—300之间，则以最接近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表5－9例6）。③菌落计数的报告，菌落在100以内时，按实有数报告；大于100时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算，为了缩短数字后面的零数也可用10的指数来表示（见表5－9的“报告方式”栏）。 表5－9 稀释度选择及菌落报告方式 例次 不同稀释度的平均菌落数两个稀释度菌落数之比 菌落总数（个／ml）报告方式（个／ml） 10 -1 10 -2 10-3 1136016420-1640016000或1.6×104 22760295 461.63775038000或3.8×104 3289027160 2.22710027000或7×104 4无法计数4651513-513000510000或5.1×105 527 11 5 -270 270或2.7×102 6无法计数305 12- 30500 31000或3.1×104

一、目的和要求(1) 了解水细菌学检验的卫生学意义和基本原理，掌握水中细菌总数的检验方法。(2）了解平板菌落计数原则。二、原理水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求各不相同，无法找到一种在某种条件下使水中所有细菌均能生长繁殖的培养基。因此，通常选择一种大部分细菌能生长的培养基，通过生长出来的菌落大致计算水中细菌总数。目前一般是采用普通肉膏蛋白陈琼脂培养基。三、仪器与试剂(1)高压蒸汽灭菌器。(2）显微镜。(3）灭菌水。(4）肉膏蛋白陈琼脂培养基。蛋白陈 l0g牛肉膏 3g氯化钠 5g琼脂 15-20g蒸馏水 1000m将上列成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4-7.6，过滤，分装于玻璃容器中，经121℃ (151b①/in2）高压蒸汽灭菌20min，冷暗处备用。四、实验步骤1．水样的稀释根据水被污染程度的不同，可用无菌吸管做10倍系列稀释。①11b=0. 453 592掩，下同。2．接种以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1mL充分混匀的水样，注入灭菌平皿中，再倾注约15mL已融化并冷却到45℃左有的培养基，并立即转动平皿，使水样与培养基充分混匀。每个水样应倾注3个平皿。每次检验时另用3个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照。3．培养待冷却凝固后，翻转平皿，使皿底向上，置于37℃恒温箱内培养24h，进行菌落计数。3个平皿中的平均菌落数即为水样1mL中的细菌总数。4．菌落计数做平皿菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平皿的菌落数后，应求出同稀释度的平均菌落数，供下一步计算时应用。在求同稀释度的平均数时，若其中一个平皿有较大状菌落生长时，则不宜采用；而应以无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的平均菌落数；若片状菌落不到平皿的一半，而其余一半中菌落数分布又很均匀，则可将此半皿计数后乘2以代表全皿菌落数，然后再求该稀释度的平均菌落数。五、数据处理1．按各种不同情况进行计算(1) 首先选择平均菌落数在30-300者进行计算，当有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，则即以该平均菌落数乘其稀释倍数报告。(2) 若有两个稀释度，其平均菌落数均为30-300，则应按两者菌落总数之比值来决定。若其比值小于2，应报告两者的平均数；若大于2，则报告其中较小的菌落总数。(3）若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告(4）若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告。(5)若所有稀释度的平均菌落数均不在30-300，则以最接近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数报告。2．菌落计数的报告菌落数在100以内时按实有数报告。大于100时，采用2位有效数字，在2位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算，为了缩短数字后面的零数，也可用10的指数来表示，报告菌落数为“无法计数”时，应注明水样的稀释倍数。六、注意事项(1）严格无菌操作，防止污染。(2）根据水样污染程度选择稀释倍数，必要时做预实验。

定期检验无菌室空气污染情况，对改进灭菌措施，提高成品率是非常必要的。常用方法步骤如下： 1．平板检验法：用常规培养基，倒成平板，收入接种室。在事先熏蒸好的接种室，使用前半小时或1小时把供试的培养皿或试管打开，按预定时间盖好培养皿或试管。留对照皿不打开。然后一起放入30℃的温箱中培养48小时，检查有无菌殖生长，并由菌落形态，判断杂菌种类。一般要求平板培养基开盖5分钟，菌落不超过3个；叙面培养基开塞 30分钟者，以不出现菌落为合格。 2．斜面检验法：将常用的琼脂斜面培养基各取二管， 放入接种室，按无菌操作各将其中的一管的棉塞取出，放在灭菌的培养皿内。经过一定时间后，再将棉塞通过火焰，塞回试管，连同对照一起培养。经48小时后，检验有无杂菌生长。和上边方法同。 3．空气污染情况检验：在接种过程中，人员的出过、器材的搬放、接种操作的动作等原因造成空气污染，检验方法是在准备工作结束后，接种操作开始时，按上述方法打开培养皿盖子或试管塞，经5分钟、30分钟或直到工作结束时再盖好，以检验在不同的使用时间内，空气污染的程度。 如霉菌较多时；可先用5％石炭酸全面喷射后，再用甲醛熏蒸。如细菌较多时，可采取用乳酸和甲醛交替熏蒸的办法加以杀灭。

最近一段时间在实验室做的培养基经常会被一种细菌污染，不知是怎么污染进去的，这种菌可以在培养基表面和培养基内部生长，呈现出不同的形态，可以污染PDA，牛肉膏蛋白胨，LB培养基，其中在PDA中污染尤为严重，在PDA中加入抗生素后，未见污染用于接种真菌，而牛肉膏蛋白胨却是不是污染（同一批不全部污染），用于接种细菌的培养基有不能加抗生素，如何避免该菌的污染呢？

“像家一样”，这样的酒店宣传语估计要大打折扣了，理由就是———脏！ 日前，加拿大一项堪称最大规模的调查显示，包括速8、喜来登以及假日酒店在内的6大连锁酒店用品，如床上用品、遥控器等都有细菌，威胁住客健康。其中，床上用品最脏。“所有被调查的酒店用品都存在超级细菌”。床上用品和遥控器最脏　　此次试验是通过ATP(三磷酸腺苷)荧光检测。ATP含量可以清晰地表明样品中微生物与其他生物残余的多少，用于判断卫生状况。ATP显示数字在300至999之间为警示，超过1000则是细菌太多，检测不过关。　　调查发现，床上用品、浴室水龙头和遥控器是酒店房间内最脏的物品。细菌超标的床上用品占到了近一半。蒙特利尔速8酒店的床上用品污染水平最高，ATP数字达到26124，已经超过不达标水平线的25倍多。　　“为了防止疾病，医生建议勤洗手，但酒店的水龙头本身就脏得要命。”测试中，不过关的超过30%。位于多伦多的假日酒店，水龙头ATP数字达到11374，超过不达标水平线的11倍多。　　此外，超过70%的被测试的电视遥控器细菌污染水平超过1000，污染最严重的为温哥华的豪华酒店费尔蒙，ATP水平达到22292，超标21倍。“超级细菌”可能致命　　报道说，尽管各大酒店用品脏的程度不同，但都含有某种抗生素耐药性细菌，包括梭状芽孢杆菌和耐甲氧西林金葡菌。沃里纳称：“这两种细菌并不罕见，大约5%的人携带耐甲氧西林金葡菌没有任何症状。不过，一旦这些‘超级细菌’找对目标，就可能致命。”*******************************************************************************************你检测过床上用品吗？你检测过致病菌吗？你又知道这些超级细菌的存在吗？

[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/03/202403070915305401_3453_5604214_3.jpg!w690x690.jpg[/img]　　ATP测量仪是一种用于测量环境中ATP(三磷酸腺苷)浓度的仪器。ATP是生物体内能量转换的重要分子，广泛存在于各种生物体内，包括细菌、病毒、真菌等微生物。因此，ATP测量仪通常被用于环境监测、食品安全、医疗卫生等领域，以检测微生物的存在和数量。　　ATP测量仪的工作原理是基于荧光素酶和荧光素的反应。荧光素酶能够催化ATP与荧光素发生反应，产生荧光信号。荧光信号的强度与ATP的浓度成正比，因此可以通过测量荧光信号的强度来推算ATP的浓度。　　ATP测量仪具有快速、简便、灵敏度高、可重复性好等优点，因此在环境监测、食品安全、医疗卫生等领域得到了广泛应用。在环境监测方面，ATP测量仪可以用于检测水、土壤、空气等环境中的微生物污染情况，为环境保护提供科学依据。在食品安全方面，ATP测量仪可以用于检测食品中的微生物污染情况，保障食品的安全性和卫生质量。在医疗卫生方面，ATP测量仪可以用于检测医疗器械、手术室、病房等环境中的微生物污染情况，为医疗卫生提供有效的监测手段。　　除了以上应用领域，ATP测量仪还可以用于其他领域，如生物研究、制药工业等。在生物研究方面，ATP测量仪可以用于研究细胞代谢、微生物生长等方面的问题。在制药工业方面，ATP测量仪可以用于检测药品生产过程中的微生物污染情况，确保药品的质量和安全性。　　总之，ATP测量仪是一种重要的环境监测仪器，具有广泛的应用前景。随着科学技术的不断发展，ATP测量仪的性能和应用范围也将不断提高和扩大，为环境保护、食品安全、医疗卫生等领域的发展提供有力的支持。

据报载，云南省昆明市政府投资近4000万元的宝象河水体生物修复项目在羊甫分洪闸段实施，一种名为细菌治污的新技术正式应用于宝象河治理中。有关专家估计:1年半内，宝象河工程范围内的整体水质将达标。用现代微生物技术对生态环境进行改善，推动了环境科技的发展。细菌治污对环境污染事先预防和污染治理、生态改善及保护等而言，具有启示意义。大家谈谈细菌治污对环保的利与敝各有哪些？

αβ表面污染测量仪LB124一、配置：1. 大面积表面污染探测器2. 活度窗二、技术要求：l 显示：单色LCD 192×64像素，电子荧光照明l 探测器：ZnS:Ag闪烁体探测器l 测量模式：α、β同时、分别测量l 探测器尺寸：118mm×145mml 灵敏域：170cm2l 入射窗：金属处理过的塑料、6μm（0.4mg/ cm2）l 保护栅格透射率：80%l 尺寸：240mm×140mm×110mml 重量（带电池）：1300gl 数据记录：1000个测量值l 串行接口：RS232灵敏度l 效率（涉及的放射源面积100 cm2）C-14 11% β通道Cl-36 50% β通道Co-60 34% β通道Cs-137 49% β通道Pu-239 23% α通道Am-241 22% α通道l 本底： 约0.1 cps α通道 约15 cps β通道l γ灵敏度（外场Cs-137）：1μSv/hl β通道：100cpsl 溢出：20% (Po-210) α→β2×10-5 (Sr-90) β→αl 测量范围：(死时间10%)0～5000cps(α通道)0～50000cps(β通道)环境条件l 工作温度：-20℃～+40℃l 储存温度：-40℃～+60℃l 相对湿度：0%～95% （无冷凝）l 防护等级：IP53校准依据ISO 7503-1 或 DIN 44801

[font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][color=#05073b][size=18px]　　细菌检测仪工作原理，细菌检测仪的工作原理主要基于荧光素酶作用的ATP检测试剂，通过检测样品表面的ATP含量来判断细菌的数量。以下是细菌检测仪工作原理的详细解释：　　荧光素酶反应：细菌检测仪利用荧光素酶与ATP检测试剂反应，将样品表面的ATP转化为荧光素。这一过程中，荧光素酶起到催化作用，使得ATP与试剂中的荧光素结合。　　发光特性测定：转化后的荧光素在荧光素酶的催化下会发光，细菌检测仪通过测量这种发光的强度来判定样品表面的ATP含量。由于ATP是所有活细胞的基本能量单位，因此其含量可以间接反映细菌的数量。　　快速、准确测量：这种基于荧光素酶反应的测量方法非常快速且准确。一般来说，整个检测过程不超过30秒，使得细菌检测仪成为一种高效的工具，特别适用于需要快速检测细菌数量的场合。　　应用领域广泛：细菌检测仪广泛应用于食品、医药卫生、日化、造纸、工业水处理等多个行业。在食品行业中，它常被用于检测食品表面的微生物污染情况，以确保食品安全。　　综上所述，细菌检测仪通过荧光素酶反应的ATP检测技术，能够快速、准确地测量样品表面的细菌数量，为保障公共卫生和食品安全提供了重要的技术支持。[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/06/202406250932573396_8825_6098850_3.jpg!w690x690.jpg[/img][/size][/color][/font]

[b][font=微软雅黑]空白板常见易污染的微生物种类[/font][font=微软雅黑][/font][/b][font=微软雅黑]1、[/font][b][font=微软雅黑]空白PCA长菌[/font][/b][font=微软雅黑]，常见是芽孢污染，PCA上主要体现菌落总数的数值，无法具体分型，这种情况被芽孢污染的较多。[/font][font=微软雅黑]2、[/font][b][font=微软雅黑]空白孟加拉红琼脂平板上面长菌[/font][/b][font=微软雅黑]，确定是被霉菌污染。[/font][font=微软雅黑][/font][font=微软雅黑]a、[/font][b][font=微软雅黑]空白板芽孢污染[/font][/b][font=&][back=#fdfdfe]芽[/back][/font][font=微软雅黑]孢是某些细菌在不利环境条件下形成的一种休眠结构，具有极强的抗逆性。在实验室环境中，含有芽孢的细菌容易在培养基上形成污染。以下是一些常见的含有芽孢的细菌种类及其特点：[/font][b][font=微软雅黑]1）梭状芽孢杆菌 [/font][font=微软雅黑]特点[/font][/b][font=微软雅黑]：梭状芽孢杆菌是一种可以引起肠道感染的常见细菌，其芽孢形式使得细菌能够在环境中存活很长时间并容易传播。[/font][b][font=微软雅黑]污染表现[/font][/b][font=微软雅黑]：在培养基上可能形成不透明的菌落，但更重要的是其芽孢的存在增加了污染的顽固性和难以清除性。[/font][font=微软雅黑][/font][b][font=微软雅黑]2）芽孢杆菌属 [/font][font=微软雅黑]特点[/font][/b][font=微软雅黑]：芽孢杆菌属包含多种细菌，如枯草杆菌（Bacillus subtilis）和蜡样芽孢杆菌[i][/i]（Bacillus cereus）等，它们能够形成芽孢并广泛存在于土壤、水体和空气中。[/font][b][font=微软雅黑]污染表现[/font][/b][font=微软雅黑]：在培养基上可能形成各种形态的菌落，但芽孢的存在使得这些细菌具有极强的抗逆性和生存能力。[/font][font=微软雅黑][/font][b][font=微软雅黑]b. 空白板霉菌污染[/font][font=微软雅黑][/font][/b][font=微软雅黑]霉菌是一类多细胞、丝状真菌，广泛存在于自然界中。在实验室环境中，霉菌污染是常见的微生物污染之一。以下是一些常见的霉菌种类及其特点：[/font][font=微软雅黑][/font][b][font=微软雅黑]1）曲霉属[i][/i][/font][font=微软雅黑] [/font][font=微软雅黑]特点[/font][/b][font=微软雅黑]：曲霉属包含多种霉菌，如黄曲霉、寄生曲霉等，它们能够产生生物毒素，如黄曲霉毒素，对人体健康有害。[/font][b][font=微软雅黑]污染表现[/font][/b][font=微软雅黑]：在培养基上形成特征性的菌落，颜色多样，从黄色到绿色不等，菌落表面可能呈现绒状、絮状或两者混合的形态。[/font][font=微软雅黑][/font][b][font=微软雅黑]2）毛霉属[i][/i] [/font][font=微软雅黑]特点[/font][/b][font=微软雅黑]：毛霉菌丝体发达，菌落质地疏松，呈棉絮状，菌丝无隔膜，有多个细胞核。[/font][b][font=微软雅黑]污染表现：[/font][/b][font=微软雅黑]在培养基上形成白色或灰白色的菌落，菌落质地疏松，容易扩散。[font=微软雅黑]（转载自[/font][font=system-ui, -apple-system, BlinkMacSystemFont, 'Helvetica Neue', 'PingFang SC', 'Hiragino Sans GB', 'Microsoft YaHei UI', 'Microsoft YaHei', Arial, sans-serif][color=rgba(0, 0, 0, 0.298039)]食品微生物工程师[/color][/font][font=微软雅黑]）[/font][/font]

据美国物理学家组织网5月23日报道，英美科学家首次精确地展示了细菌中运送电荷的细胞内蛋白质分子结构，详细揭示了细菌如何将电子由细胞内推到细胞外的“细枝末节”，最新成果让使用细菌来发电这种美好的愿景更加接近现实，相关研究发表在《美国国家科学院院刊》上。 　　这个发现意味着，科学家们现在能着手研发合适的办法，将细菌直接“拴到”电极上，用这种方法制造出高效的微生物燃料电池。这项进步也能加速清理油污染或铀污染的微生物试剂的研发，同时也将加速由废物提供电力的燃料电池的研制。　　细菌内部的多层蛋白质就像细胞的有机输电线一样，使细菌内部产生的电子被运送到细胞表面。在最新研究中，英国东安格里亚大学生物科学学院的教授汤姆·克拉克领导的英美科研团队，使用名为X射线结晶学的方法揭示了一种依附于海洋细菌细胞表面的蛋白质的分子结构，细菌通过这个细胞转运电子。　　克拉克表示：以前我们并不知道细菌内的电子是如何到达细胞表面的，最新发现向我们展示了细菌将电子从细胞内推到细胞外的“细枝末节”。细菌可以吸进氧化物矿物质中的有机碳分子并在细胞内部“消化”它们，接着释放出电子。因此，细菌坐在岩石上并吸进岩石的过程可以应用于电极上，细菌能依靠电极呼吸并产生电子。精确展示这个过程让我们可以“顺藤摸瓜”，进一步研制出高效的微生物燃料电池等。　　以前，科学家们试图利用细菌表面的电力，但只能得到很少的电力，现在，利用这一最新发现，科学家们有望获得足以投入实际应用的电力。克拉克说：“我们所做的只是改变细菌生活的表面环境而已。”　　英国生物技术和生物科学研究院（BBSRC）和美国能源部对该科研项目提供了资助，美国能源部西北太平洋国家实验室的科学家也参与了该项目

一、细菌的分布： 微生物种类繁多，繁殖迅速，分布广泛，不论自然界的空气、土壤、水，生活中的食物、各种物体和器械表面，以及动物和人的皮肤粘膜、与外界相通的腔道中都广泛存在着数量极其庞大的各种微生物，其中以细菌、放线菌最多。因此，了解微生物在自然界及正常人体的分布，对于在医疗实践及某些科学实验中树立无菌观念有着重要的意义。 （一）空气中细菌的检查（设计性实验选题） （二）水中细菌的检查（设计性实验选题） （三）人体皮肤表面细菌的检查（设计性实验选题） 【附录】细菌菌落的计数方法 ①选择生长均匀，无片状菌苔生长的平皿观察。一般先用肉眼观察，用记号笔在平板底上进行点数（以免遗漏），然后再持放大镜检查有无遗漏的微小菌落。 ②如菌落多而密集，可用分区法或菌落计数器计数。分区法是用记号笔在平皿底部通过圆心做垂直线，分为http://www.bbioo.com/bio101/UploadFiles/200611/20061113123705956.gif四区，再分别选择菌落密集和稀疏的两个区，再做平分线，使每一小区为平皿面积的1／8 或1／16，然后再分别挑选菌落稀疏和密集的两小区 进行计数，所得数乘以8或16，即为该平皿的菌落总数。（图４-1） ③简易的菌落计数器是一块玻璃板上刻划有144个面积为1平方厘米的正方形小格。将长有菌落的培养皿放上，计算10个小方格内的菌落数，如为30个，则平均1小方格为3个菌落。若培养皿直径是9厘米，则半径为4.5厘米，整个培养皿上的菌数是3个×3.1416×（4.5）2=191个菌落。二、外界因素对细菌的影响微生物和外界环境有密切的关系，当外界环境适宜就能进行正常的新陈代谢生长繁殖；当外界环境条件发生巨大改变，可导致微生物的主要代谢活动发生障碍，生长停顿，甚至死亡。在医学上常用人工的方法造成对微生物不利的环境，来抑制或杀灭微生物，以达到消毒灭菌的目的。其方法大致可分为物理、化学和生物三大类。 （一）物理因素对细菌的影响 1、温度对细菌的影响2、紫外线杀菌试验 （二）化学因素对细菌的影响 化学消毒剂的杀菌作用（三）生物因素对细菌的影响 噬菌体的特异性裂解细菌试验 【材料】大肠杆菌、痢疾杆菌的肉汤培养物、痢疾杆菌噬菌体、普通肉汤、普通琼脂平板。 【方法】 （1）将琼脂平板划分成三等份，注明1、2、3。 （2）分别以接种环取菌后，在1、3处涂布痢疾杆菌，2处涂布大肠杆菌。http://www.bbioo.com/bio101/UploadFiles/200611/20061113123903343.gif（3）分别沾取一接种环的痢疾杆菌噬菌体加于1、2处中央，（注意不要交叉污染），另取一接种环的肉汤放于3处中央。 （4）置37℃孵育24小时后取出，观察噬菌斑出现的位置（见图4-2），并记录之。 （四）细菌对抗生素的敏感性试验---纸片扩散法 　　又称Bauer-Kirby法。是将干燥的浸有一定浓度抗菌药物的滤纸片放在已接种一定量某种细菌的琼脂平板上，经培养后，可在纸片周围出现无细菌生长区，称抑菌圈。测量抑菌圈的大小，即可判定该细菌对某种药物的敏感程度。体外药敏结果可作为病人治疗选用药物的参考。 【材料】金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌18～24小时培养物、普通琼脂平板、小镊子；含有青霉素、庆大霉素、红霉素、复合磺胺、链霉素等抗生素的干燥滤纸片。 【方法】 （1）将金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌培养物密集均匀地涂布整个平板。 （2）将含有抗生素药物的滤纸片用烧灼灭菌的镊子分别贴于平板表面，相互间应间隔一定距离。 （3）37℃培养24小时后，观察结果。 【结果】 根据药物纸片周围抑菌圈直径的大小来判断该菌对各种药物的敏感程度。判断标准见表4-1 （五）中草药对细菌的抑菌作用测定

[align=center][color=#333333]食品安全问题天天有，真是叫人防不胜防呀！他就像小家碧玉似的，一不留神就会受到感染。近日，从江苏省检验检疫局获得消息称，欧盟食品快速预警系统通报我国1批次出口八角不合格，原因是受到霉菌污染。这次江苏的不合格八角经英国转运，已经分销到了比利时、荷兰、芬兰等欧洲国家。事后江苏也积极组织了企业关于食品安全知识的学习和监测力度。虽然有关部门不断出台食品安全法律法规以及加强市场监管，但食品安全事件屡屡出现，甚至一些全球500强企业屡屡卷入食品安全事件。不光对社会，民众对待食品安全产生了极大的恐慌，甚至对生产企业也是致命的打击。这样的代价是巨大的，因霉菌污染产品出现问题，导致品牌，订单，销量，利润等一系列的连锁反应。那么我们如何面对难以清除的霉菌呢。[/color][/align][color=#333333] [/color][color=#333333]春天来了，草儿绿了，花儿红了，又一个生机勃勃季节到了。但同时，气温升高，雨水增多，空气湿度大，这个季节的食物极易受到霉菌的污染,发生霉变。食物发霉是一种常见的自然现象，微生物在环境中无处不在，食物在生产、加工、运输、储存、销售过程中，很容易被微生物污染。只要温度适宜，微生物就会生长繁殖，分解食物中的营养素，以满足自身需要。这时食物中的蛋白质就被破坏了，食物会发出臭味和酸味，失去了原有的坚韧性和弹性，颜色也会发生变化。[/color][color=#333333] [/color][color=#333333]霉菌原本在土壤、水中、动物的粪便、植物等有营养源和水分的环境中生长。而霉菌形成的孢子会随风四处飘散或附着于昆虫等而散布。在空气中浮游的霉菌孢子大部分会于半径100m 以内落下,而因气流条件等因子的不同, 也有移动较远距离的例子。空气中浮游的霉菌孢子, 会与灰尘粒子一起在建筑物内外落下。在室内时, 会因清扫操作和气流变化等, 而再度在空气中浮游。这些浮游的霉菌若落下附着于食品上, 而食品的营养源、水分、温度等条件, 恰适于污染的霉菌生长时, 此时孢子即会萌芽生长, 而造成食品腐败变质。在空气中飞散的霉菌种类很多, 但对干燥抵抗力较弱的霉菌, 很快即可能死亡, 而残存的多为一些较耐干燥的霉菌,由孢子态可长时间在空中残存。空气浮游的霉菌形成的落菌, 常为造成许多加工食品污染的原因。对于利用加热处理的食品, 其霉菌污染源为加热工程后的落菌污染作业人员手指、副原料和机械等, 而落菌污染为最重要的污染源。在食品制造设施内, 空气中的浮游菌和落菌增加的原因, 有以下几点: [/color][color=#333333](1) [/color][color=#333333]粉碎原料飞散 [/color][color=#333333](2) 工厂内霉菌生长 [/color][color=#333333](3) 未经处理的外气流入 [/color][color=#333333](4) 空气滤网未适当维护清理 [/color][color=#333333](2) [/color][color=#333333]地板和工厂内突出物堆积的尘埃飞散 [/color][color=#333333](3) [/color][color=#333333]瓦楞纸箱与包装袋等处理不良 [/color][color=#333333](7) [/color][color=#333333]设施内清扫不良。[/color][color=#333333] [/color][color=#333333]随着食品行业的发展，人们已经逐步懂得了杀菌消毒的重要性。在食品生产中使用消毒剂消毒，已经成为消毒的主要方式。但在实践生产中，如何从根源控制食品厂空气中的霉菌，采取怎样的消毒措施可以预防食品霉菌污染呢？实际情况比较复杂，对消毒剂的要求很高。虽然能杀灭霉菌的方式很多，但同时也会有负面作用，有的不能带人杀菌，面临停工，有的杀菌不彻底，面临二次污染，有的稳定性差，受温度，PH值，光线等因素产生危险，甚至爆炸。想对霉菌彻底说拜拜，传统消毒杀菌剂治标不治本的方式，以慢慢的退出了历史的舞台。奥克泰士的出现，传承了传统消毒杀菌剂的优点，屏蔽了杀菌时的缺点。其主要成分为过氧化氢 银离子，产品无色，无味，无毒，无残留，在杀菌时不需要其他任何辅助材料和添加剂。在相对密封的环境下，扩散均匀，包容性、通透性好，克服了紫外线杀菌存在的消毒死角的问题，达到全方位、快速、高效的消毒杀菌目的。另外，由于它的灭菌广谱性，既可以杀灭细菌繁殖体、芽胞、病毒、真菌和原虫孢体等多种微生物，还可以破坏肉毒杆菌和毒素及立克次氏体等，同时还具有很强的除霉、腥、臭等异味的功能。奥克泰士在环境中可自然分解为氧气和水，这是奥克泰士作为消毒灭菌剂的独特优点。奥克泰士利用空气中的氧气产生的，消毒氧化过程中，多余的氧原子（O）在30分钟后又结合成为分子氧（O2），不存在任何残留物质，解决了消毒剂消毒时，残留物的二次污染问题，同时省去了消毒结束后的再次清洁。在食品行业消毒清洗中的应用，以及环境、空间的使用及运行比较，奥克泰士消毒与其他消毒剂相比具有很大的经济效益和社会效益。[/color][color=#333333] [/color]奥克泰士--德国原装进口，食品级无色无味无毒无残留型，主要成分为过氧化氢银离子，是目前国际上最为先进的一款食品厂空间微生物杀菌消毒剂，由于其独特的作用原理，能够杀灭包括芽孢、细菌孢子、真菌孢子、放射菌、分支杆菌、酵母菌、霉菌、病毒在内的所有类型的微生物。IFS国际食品标准认证，欧盟EMAS检测认证，ISO9001、ISO14001环境管理体系认证，德国莱茵TUV认证等。是一款高效广谱的食品级杀菌消毒剂。具有杀菌彻底，不产生微生物耐药性，无任何毒性残留，不造成重复污染等特点。采用的氧化剂为过氧化氢，它与稳定剂结合形成复合溶液。作为催化剂添加的痕量银离子可以保持长久的效用。银离子的杀菌作用是基于单价银离子通过共价键和配位键来与细菌蛋白质牢固结合，从而使细菌钝化或沉淀。能在食品厂空间消毒中迅速杀灭各种微生物（包括芽孢）或者抑制微生物繁殖的高效广谱的食品级进口高效杀菌剂。现已十分广泛的应用于各种食品厂空间消毒中。

来源：农民日报 时间：2008年2月26日 位于以色列海法的Checklight公司利用地中海沿岸一种夜间会发光的细菌开发出一种对水中污染物极为敏感的物质，将这种物质做成的基底与发光细菌相结合，再配上一个光度计，即可快速便捷地对水质进行实时监测。只要将这种发光细菌放到含有害物质的水中，它们就会发出报警光信号，对这种信号测量分析，即可对污染物性质和污染程度做出判断。　　该公司首席执行官尼瑞特表示，随着污染物和恐怖活动的增多，保证饮用水安全显得格外重要。目前，饮用水质量检测尚缺乏一种便捷有效的实时检测手段，此项技术，正好可以填补这一空白。　　实验显示，用这种方法检测水质，只要15分钟即可获得结果，检测成本一次只需数美元，而且能现场完成，即便是浓度很低的污染物也能及时发现，这样便可为管理部门及时采取措施，避免饮用水污染造成的损害赢得宝贵时间。

[font=微软雅黑][color=#333333]以出口水产制品为例，食品厂中单增李斯特菌（也称为单核细胞增生李斯特菌）的污染途径可以涉及多个环节，这些环节共同构成了潜在的污染链。以下是对这些污染途径的详细分析：[/color][/font][font=微软雅黑][color=#333333][/color][/font][b][b][font=微软雅黑][color=#333333][back=#ffffff]1）[/back][/color][/font][font=微软雅黑][color=#333333][back=#ffffff]环境条件对单增李斯特菌生存的影响[/back][/color][/font][font=微软雅黑][color=#333333][back=#ffffff][/back][/color][/font][/b][font=微软雅黑][color=#333333][back=#ffffff]低温潮湿环境[/back][/color][/font][/b][font=微软雅黑][color=#333333][back=#ffffff]：单增李斯特菌是一种能在低温下生长繁殖的细菌，其生长温度范围广泛（0.4~50℃），甚至在-20℃下也能存活一年之久。同时，潮湿环境也为细菌的生长提供了必要的水分条件。因此，水产车间的低温潮湿环境为单增李斯特菌的生存和繁殖提供了有利条件。[/back][/color][/font][font=微软雅黑][color=#333333][back=#ffffff][/back][/color][/font][b][b][font=微软雅黑][color=#333333][back=#ffffff]2）[/back][/color][/font][font=微软雅黑][color=#333333][back=#ffffff]具体污染途径[/back][/color][/font][font=微软雅黑][color=#333333][back=#ffffff][/back][/color][/font][/b][font=微软雅黑][color=#333333]a [/color][/font][font=微软雅黑][color=#333333]原料污染[/color][/font][font=微软雅黑][color=#333333][/color][/font][font=微软雅黑][color=#333333]养殖环节[/color][/font][/b][font=微软雅黑][color=#333333]：水产品原料在养殖过程中可能因水源、饲料或养殖环境受到单增李斯特菌的污染。这些污染菌可能附着在鱼体表面或内脏中，难以彻底清除。[/color][/font][font=微软雅黑][color=#333333][/color][/font][b][font=微软雅黑][color=#333333]运输与储存[/color][/font][/b][font=微软雅黑][color=#333333]：在运输和储存过程中，如果温度控制不当或包装破损，也可能导致原料受到外界环境中单增李斯特菌的污染。[/color][/font][font=微软雅黑][color=#333333][/color][/font][b][font=微软雅黑][color=#333333]b [/color][/font][font=微软雅黑][color=#333333]加工环境污染[/color][/font][font=微软雅黑][color=#333333][/color][/font][font=微软雅黑][color=#333333]设备、工具污染：[/color][/font][/b][font=微软雅黑][color=#333333]水产车间内的设备、工具在长期使用过程中容易积累污垢和细菌。如果清洁和消毒不彻底，就会成为单增李斯特菌的滋生地。特别是在低温潮湿环境下，细菌更容易在设备表面和缝隙中存活和繁殖。[/color][/font][font=微软雅黑][color=#333333][/color][/font][b][font=微软雅黑][color=#333333]人员操作[/color][/font][/b][font=微软雅黑][color=#333333]：加工过程中的人员操作也是导致交叉污染的重要因素。工作人员的手部、衣物等如果未经过充分清洁和消毒，就可能将病菌带入生产区域。[/color][/font][font=微软雅黑][color=#333333][/color][/font][b][font=微软雅黑][color=#333333]c 包装材料污染[/color][/font][font=微软雅黑][color=#333333][/color][/font][/b][font=微软雅黑][color=#333333]包装材料如果未经严格消毒或存在质量问题，也可能成为单增李斯特菌的传播途径。特别是在低温潮湿环境下，包装材料上的水分和营养物质更容易促进细菌的生长。[/color][/font][font=微软雅黑][color=#333333][/color][/font][b][font=微软雅黑][color=#333333]d [/color][/font][font=微软雅黑][color=#333333]空气与水流传播[/color][/font][font=微软雅黑][color=#333333][/color][/font][/b][color=#333333]水产车间内的空气和水流也是潜在的传播途径。如果车间内的空气中含有单增李斯特菌，就可能通过空气流动污染到产品表面。同样地，如果水流受到污染，也可能在清洗和加工过程中将病菌传播到产品上。[font=微软雅黑]（转载自[/font][font=system-ui, -apple-system, BlinkMacSystemFont, 'Helvetica Neue', 'PingFang SC', 'Hiragino Sans GB', 'Microsoft YaHei UI', 'Microsoft YaHei', Arial, sans-serif][color=rgba(0, 0, 0, 0.298039)]食品微生物工程师[/color][/font][font=微软雅黑]）[/font][/color]

1 水中大肠菌群（Coliform group）细菌的检测 1 .1目的和原理 如果水源被粪便污染，则有可能也被肠道病原菌污染而引起肠道传染病。由于肠道病原菌在水中数量较少，故从水中特别是自来水中分离病原菌常常非常困难。大肠菌群细菌是肠道好氧菌中最普遍和数量最多的一类细菌，所以常常将其作为粪便污染的指示菌。即根据水中大肠菌群细菌的数目来判断水源是否受粪便所污染，并间接推测水源受肠道病原菌污染的可能性。一般规定每1000ml自来水中大肠菌群细菌不得超过3个。 大肠菌群细菌是指一类好氧或兼性厌氧，能发酵乳糖，在乳糖培养基中经37℃ 24小时培养，能产酸产气，革兰氏阴性，无芽孢的杆菌。本试验采用多管发酵法，以最近似数的方式来记载，此一数字是根据概率公式来估算，有大于实际数字的倾向，在增加每种稀释度的试管重复数后，可减少偏差。本法除了用于检测水样（淡水或海水）外，尚可用于泥浆、沉积物、污泥等的检测。测定时先将这类固体或半固体样品预先称重，再加水稀释，可取50克样品，置于盛有450ml灭菌磷酸盐缓冲液并装有玻璃珠、石英砂的锥形瓶中，振荡1—2分钟，便成10-1稀释，以用于检验。 1.2 材料与器皿 （1）培养基二倍浓度的乳糖胆汁液体培养基一倍浓度的乳糖胆汁液体培养基伊红——美蓝琼脂（E．M．B．）培养基亮绿乳糖胆汁（B．G．B）液体培养基营养琼脂培养基（2）灭菌移液管、灭菌稀释水、试管、杜汉氏小管、革兰氏染液、灭菌培养皿 1.3 方法与步骤 （1）假定试验①用10ml水样，接种到二倍浓度的乳精胆汁管中去，重复接三支 。②用lml水样，接种到一倍浓度的乳精胆汁管中去，重复接种三支。③制备水样 10-1和 10-2的稀释液。④分别接种lml10-1和 10-2稀释液到一倍浓度的乳糖胆汁管中，每个稀释液接种三支。⑤在35℃中培养48小时，观察有无气体和酸产生。⑥在48小时以内，培养管内倒置的杜汉氏管中有任何量的气体积累，便可断定为阳性假定试验。若培养管内液体清晰而杜氏管中有气泡时，可能为放置不当而残存的空气泡，不可与产气的阳性反应相混同。无气泡着为阴性。产酸者呈黄色。(2) 确信试验①取呈阳性和阳性可疑的初步发酵试管，轻轻振荡或转动，然后以无菌的金属接种环，转移1环培养物至亮绿乳糖胆汁管中，于35C℃培养48小时。如在倒置的杜汉氏管中产气，不论其量多寡，皆为阳性确信试验。②凡初步发酵试验管在24小时之前就显示活跃的发酵（产气量占杜汉氏管10％以上）的试管，应及时转移至确信试验的培养基。（3）完成试验①取上述阳性确信试验管，在伊红一美蓝平板上划线分离，为了确保获得分离的单菌落，须注意以下事项：a．划线间距至少相隔0.5厘米 b．接种针尖端要稍弯曲 c．先对发酵管轻击，并使之倾斜，以免接种针挑取到任何膜状物或浮渣，d.划线时要用针尖的弯曲部分接触琼脂培养基平面，以免刮伤或戳破培养基。划线后培养皿倒置，于35C培养24小时。② 24小时后，观察在EMB平板上出现的单个菌落，具核心及深绿色金属光泽者为较典型的大肠菌群菌落。尽可能挑取典型的或接近典型的大肠菌群菌落，在营养琼脂斜面上划线，置37 ℃培养24小时。挑取斜面培养物制成涂片，进行革兰氏染色，凡属革兰氏阴性杆菌，即确认了大肠菌群细菌的存在。③ 在EMB平板上呈较典型的大肠菌群细菌还可再次转接至乳糖胆汁发酵管中，在37℃下培养48小时，产生气体者即确认了大肠菌群细菌的存在。④ 根据证实有大肠菌群细菌存在的阳性管数查表5－10，以确定大肠菌群数。整个试验的步骤见图5－7所示。 图5－7 大肠菌群细菌的检测 1.4 结果及分析 将上述各个试验阶段的结果列表记录，并最后算出水中所含大肠菌群的最大可能值（表5－10）。 表5－10 最近似数（MPN）指数和95%置信度检索表 出现阳性反应的试管数每100ml中的MPN指数95% 置信度 在3支10ml 试管中在3支1ml 试管中在3支0.1ml 试管中下限 上限 0013 0.59 0103 0.5 13 10040.520 1017121 1107123 11111336 12011336 2009136 20114337 21015344 21120789 22021447 2212810150 300234120 301397130 3026415380 310437210 3117514230 31212030380 3209315380 32115030440 32221035470 330240361300 331460712400 33211001504800 本试验所用的培养基系选择培养基，许多细菌都不能利用培养基中的乳糖来发酵产气产酸，而大肠菌群细菌及少数其它种类的细菌可发酵乳糖产气产酸。培养基中的胆汁（牛、羊或猪的胆酸盐）是表面活性剂，它不会抑制大肠菌群细菌的生长，但能抑制其它革兰氏阳性细菌，如芽孢形成菌的生长。在胆汁缺乏时可用0.1克的十二烷基磺酸钠替代。溴甲酚紫（或亮绿）是pH的指示剂，大肠菌群在发酵乳糖产气外还同时产酸，该指示剂有助于我们判断发酵的进程。在假定试验的初步发酵管中，可能有极少数能发酵乳糖产气的非大肠菌群细菌混在阳性可疑反应管中，通过确信试验和完成试验，对初步发酵中的阳性可疑管进行复发酵试验，并进行革兰氏染色和细菌形态观察，即可将那些少量的非大肠菌群细菌（“假阳性管”）删除去，放在记录时须把三步试验都呈阳性的试管数计入阳性反应管。 1.5 培养基配制 （1）乳糖胆汁液体培养基： 蛋白胨 20.0克 乳糖 5.0克 胆酸钠 5.0克 1.6％溴甲酚紫乙醇溶液 1毫升 蒸馏水 1000毫升. 将蛋白胨、乳糖、胆盐加热溶解于1000毫升蒸馏水中，调pH至7.2～7.4，加入1.6％溴甲酚紫乙醇溶液1毫升，充分混匀，分装于有倒置杜汉氏小管的试管中，注意小管中不得有气泡，115℃灭菌20分钟。（2）伊红－美蓝琼脂（E．M．B）培养基①蛋白胨琼脂培养基（其成分为蛋白胨10.0克；琼脂18.0克；蒸馏水1000毫升；pH7.6） ②20％乳糖 2毫升 ③2％伊红溶液 2毫升 ④0.5％美蓝溶液 1毫升 将已灭菌的蛋白胨琼脂培养基加热溶化，冷却至60 ℃左右时，将已灭菌的乳糖溶液、伊红溶液及美蓝溶液按上述量以无菌操作加入，摇匀后即倒平板。乳糖在高温灭菌易被破坏，故必须严格控制灭菌温度，一般为115℃，20分钟。（3）亮绿乳糖胆汁（B.G.B.）液体培养基蛋白胨 10.0克 乳糖 10.0克 胆酸钠 20.0克 亮绿 0.0133克 蒸馏水 1000毫升 pH 7.4 分装试管后，加入杜汉氏小管，115℃灭菌20分钟。

细菌DNA的提取2006-10-24 17:19这里提供的是由Marmur于1961年建立，经Dale等人简化和发展，此方法略加修改后可用于其他细菌种类。主要原理是：采用去垢剂破碎细菌细胞，酚－氯仿萃取蛋白，使用核糖核酸酶和蛋白酶K进行进一步的纯化，所提取的DNA无RNA和蛋白质污染，可用于限制性内切酶消化，分子克隆。⑴材料①20倍SSC缓冲液：3mol/l NaCl; 0.3mol/l 醋酸钠；pH 7.0(高压灭菌后，4摄氏度保存可长期使用)②酚/氯仿（1：1）：一般市售的酚需要重蒸处理，市售的酚常含有杂质而呈粉色和淡黄色，需要重蒸二次，收集沸点160℃部分，小瓶分装，瓶内空腔充氮气，－20℃密封保存，以免氧化，用前从冰箱中取出，68℃蒸馏水饱和，加入8—羟基喹啉（100g酚加0.1g），酚变为黄色。8—羟基喹啉是抗氧化剂，并能部分抑制核糖核酸酶，含8—羟基喹啉的酚用等体积1.0mol/L pH 8.0Tris 缓冲液抽提，再用0.1mol/L pH 8.0含0.2％β－巯基乙醇的Tris缓冲液抽提数次，酚溶液的pH应大于7.6。此酚溶液在平衡缓冲液覆盖下4℃可保存一个月，纯化和制备酚溶液都要带手套，以免损伤皮肤。③核糖核酸酶：无DNA酶污染，将胰RNA酶（RNA酶A）溶于10mmol/LTris－Cl(pH 7.5)15mmol/L Nacl 溶液中，浓度为10mg/ml.于100℃加热15分钟，缓慢冷却至室温，分装后于－20℃保存。④蛋白酶K ⑤TES缓冲液：10mmol/L Tris-HCl, pH 8.0; 10mmol/L NaCl;1mmol/l EDTA⑵方法①取单菌落接种于5mlLB培养液中，37℃振荡培养过夜。（使用试管）②将上述菌液接种于200mlLB培养液中，37℃振荡培养过夜。（使用500ml或1000ml三角瓶）③离心，收集沉淀（5000r/m,10分钟）④将沉淀悬浮于20ml 20倍SSC缓冲液中，混匀。⑤加入200mg SDS，室温下振荡过夜，使细菌细胞充分裂解，裂解液呈粘稠状⑥加入等体积的酚/氯仿溶液，温和地混匀，细心地回收上层水相（注意不要触及二相之界面），重复萃取三次⑦加入2倍体积无水乙醇，此时可见到絮状DNA沉淀或用玻璃棒绕取收集⑧将DNA溶于15ml 2倍SSC溶液中，加入核糖核酸酶（最终浓度50ug/ml），37℃保温1小时⑨加入蛋白酶K（50ug/ml）,继续保温1小时⑩加入等体积苯酚萃取一次，在回收的水相中加入2.5倍体积的无水乙醇，－20℃静止过夜25000g，4℃，离心15分钟，收集沉淀，用－20℃无水乙醇洗涤一次；将DNA在真空干燥器中抽干，溶于10mlTES缓冲液中，4℃保存备用。⑶说明①本方法可用于其他种类细菌，但是溶菌条件需略加修改，对革兰氏阳性菌（如葡萄球菌），在SDS处理前需要使用溶菌酶裂解细胞壁，对于另外一些细菌（如分枝杆菌），在加入SDS后，将溶液加温至65℃是可取的。②一些种类的细菌含大量核酸酶，去垢剂不能完全抑制其活性，用TES缓冲液代替SSC缓冲液可通过EDTA的作用抑制核酸酶活性，必须注意的是，TES缓冲液离子强度较低，在加入乙醇之前需用醋酸钠调节DNA溶液的离子强度（醋酸钠的最终浓度为0.3mol/L）③DNA溶液中残留少量酚和氯仿，可在乙醇沉淀之前用水饱和乙醚萃取去除④比较纯净的DNA溶液的Ａ260/A280及A260/A235大于1.7