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细胞亚群测定仪

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细胞亚群测定仪相关的论坛

  • 流式细胞仪

    流式细胞仪(Flowcytometry)是对细胞进行自动分析和分选的装置。它可以快速测量、存贮、显示悬浮在液体中的分散细胞的一系列重要的生物物理、生物化学方面的特征参量,并可以根据预选的参量范围把指定的细胞亚群从中分选出来。

  • 流式细胞分选仪——“大海捞针”的工作原理

    流式细胞分选仪是一种能从混合异质细胞群中分离出特定不同的细胞亚群或者可以直接分离出单个细胞到孔板或者玻片的强大生物医学研究工具。BD的FASCAria III是一款业内十分经典的流式细胞分选仪,能同时分选4种不同类

  • 【讨论】怎么使细胞自动分析?

    热销细胞网推出的流式细胞仪是对细胞进行自动分析和分选的装置。它可以快速测量、存贮、显示悬浮在液体中的分散细胞的一系列重要的生物物理、生物化学方面的特征参量,并可以根据预选的参量范围把指定的细胞亚群从中分选出来.细胞热销网是针对细胞的一个专业平台,在这里有关于细胞的设备,仪器等产品。

  • 【分享】 流式细胞仪,生物导航网推出自动流式细胞仪

    流式细胞仪是对细胞进行自动分析和分选的装置。它可以快速测量、存贮、显示悬浮在液体中的分散细胞的一系列重要的生物物理、生物化学方面的特征参量,并可以根据预选的参量范围把指定的细胞亚群从中分选出来。多数流式细胞计是一种零分辨率的仪器,它只能测量一个细胞的诸如总核酸量,总蛋白量等指标,而不能鉴别和测出某一特定部位的核酸或蛋白的多少。也就是说,它的细节 分辨率为零。

  • 【分享】免疫细胞的分离和保存技术

    用体外方法对机体各种具有免疫反应的细胞分别作鉴定、计数和功能测定,是观察机体免疫状态的一种重要手段。为此,须将各种参与免疫反应的细胞从血液或脏器中分离出来。参与免疫反应的细胞主要包括淋巴细胞、巨噬细胞、中性粒细胞等。由于检测的目的和方法有同,分离细胞的需求和技术也异。有的仅需分离白细胞,有的则需分离单个核细胞(mononuclearcell),其中含淋巴细胞和单核细胞(monocyte),有的则需分离T细胞和B细胞以及其亚群。分离细胞选用的方法应力求简便可行,并能获得高纯度、高获得率、高活力的细胞。现用分离细胞群的原则,一是根据各类细胞的大小、沉降率、粘附和吞噬能力加以组分,另一则按照各类细胞的表面标志,包括细胞表面的抗原和受体加以选择性分离。 一、白细胞的分离 (一)血液中红细胞与白细胞比例约600~1000:1,两者的比重不同其沉降速度亦异,通常用两种方法加以分离。 本法是利用血细胞自然沉降率的分离法,采集血液后应及时抗凝,通常选用肝素抗凝法。肝素能阻止凝血酶原转化为凝血酶,从而抑制纤维蛋白原形成纤维蛋白而防止血液凝固。操作原则是将含抗凝血的试管直立静置室温30~60min后,血液分成明显三层,上层为淡黄色血浆,底层为红细胞,紧贴红细胞层上面的灰白层为白细胞,轻轻吸取即得富含白细胞的细胞群,离心洗涤后加入少量蒸馏水或含氯化铵的Gey溶液,经短时间的低渗处理,使红细胞裂解,经过反复洗涤可得纯度较高的白细胞悬液。 (二)聚合物加速沉淀法 本法是利用高分子量的聚合物如明胶、右旋糖酐、聚乙烯吡喀烷酮(polyvinylpyrolidone,PVP)等使红细胞凝集成串,加速红细胞沉降,使之与白细胞分离。本法的细胞获得率比自然沉降法高。

  • 流式细胞术详解 21.22章节 &参考文献

    95%。目前细胞分选主要用于研究,临床应用较少。血液学应用最多的是造血干细胞的研究,最近随着造血理论的深入研究关于造血干细胞究竟是否都是CD34+细胞出现一些争论,实验研究证明, CD34-造血干细胞较CD34+造血干细胞更具造血潜能,这些实验研究所用的CD34- 和CD34+细胞就是通过细胞分选获得的。小鼠造血干细胞分选一般按lin-c-Kit+CD34+/ lin-c-Kit+CD34-分选,人造血干细胞分选一般按lin-CD34+/ lin-CD34-分选。 为避免某些遗传性血液病如海洋性贫血、异常血红蛋白病的纯合子出生,产前诊断非常重要,这些疾病的主要靶细胞是红细胞,而孕妇血循环中存在着胎儿有核红细胞,只是数量非常少,利用流式细胞仪可从孕妇血液中分选出胎儿有核红细胞(分选条件:CD45-GPA+)进行基因分析,作出产前诊断。利用流式细胞仪分选免疫担当细胞进行细胞免疫学研究也是目前的热门课题。总之,流式细胞仪能够分选出你想得到的任何一亚群细胞,只要你想得到的某一亚群细胞有合适的单克隆抗体标记,流式细胞仪的分选功能将得到越来越多的科学研究和临床应用。二十二. 流式细胞术在血液学中的应用 其他流式细胞仪可能在两方面对骨髓增生异常综合症(MDS)有用,一是测定CD34阳性细胞数,以监测病情,二是测定核蛋白增殖因子(PCNA),有报告PCNA再在生障碍性贫血、骨髓增生异常综合症、白血病三种疾病中表达有明显差异,可辅助鉴别诊断。 此外流式细胞仪也可检耐药蛋白,如肺耐药相关蛋白(LRP)、多药耐药蛋白(MRP)、 P170等。 流式细胞仪也可检测细胞因子,细胞内细胞因子如白介素系列(IL-1—IL-14),肿瘤坏死因子(TNF),干扰素(IFN)等,[/color

  • 干细胞来源细胞治疗产品非临床安全性评价概述

    【序号】:5【作者】: 闫振龙1滕伊洋2,3张亚群【题名】:干细胞来源细胞治疗产品非临床安全性评价概述【期刊】:中国新药杂志. 【年、卷、期、起止页码】:2023,32(06)【全文链接】:https://kns.cnki.net/kcms2/article/abstract?v=3uoqIhG8C44YLTlOAiTRKibYlV5Vjs7ioT0BO4yQ4m_mOgeS2ml3UJqZ4gIU3H-zCo8_ufitmkiU1ot9HHsxg7A1VEcbm7Pk&uniplatform=NZKPT

  • 细胞培养的基础知识

    什么是细胞培养? 细胞培养是指从动物或植物中取出细胞,然后使其在合适的人工环境中生长。这些细胞可于培养前直接从组织中取出并采用酶或机械方法进行解离,或者也可来自已经建立的细胞系或细胞株。 原代培养 原代培养是指将细胞从组织中分离后,使其在合适的条件下增殖直到占据所有可用基质(即:达到汇合状态)的培养阶段。在此阶段,必须将细胞转移到新的容器中并更换新鲜培养基,从而对细胞进行传代培养,为其提供更多继续生长的空间。 细胞系 首次传代培养后,原代培养物即被称为细胞系或者亚克隆。来自于原代培养的细胞系寿命有限(即:有限细胞系,见下文),随着细胞的传代,生长能力最强的细胞会占据优势,最终导致细胞群体在基因型和表型上达到一定程度的均一性。 细胞株 如果将细胞系的一个亚群通过克隆或者其他方法从培养物中明确地选择出来,则此细胞系就成为一个细胞株。与亲代细胞系起始时相比,细胞往往会获得其他一些遗传学改变。 培养条件 各种细胞的培养条件相差很大,但是细胞培养的人工环境必须包括合适的容器,容器中含有一定的基质或介质,为细胞提供必需的营养素(氨基酸、碳水化合物、维生素、矿物质)、生长因子、激素和气体 (0,、CO,),并可调节其物理化学环境 (pH、渗透压、温度)。大多数细胞均具有贴壁依赖性,必须贴附在固体或半固体基质上培养(贴壁或者单层培养)而另一些细胞则可在培养基中漂浮生长(悬浮培养)。 有限细胞系与连续细胞系 正常细胞通常只能分裂有限的次数,随后就会丧失增殖的能力,这是一个由遗传决定的事件,被称为衰老 这种细胞系被称为有限细胞系。但是,一些细胞系会通过被称为转化的过程变为永生性细胞系,这一过程可自然发生,也可经化学或病毒诱导发生。有限细胞系发生转化获得无限分裂能力后,就成为连续细胞系。 冻存 如果传代时有多余的细胞,可通过适当的保护剂(例如:DMSO 或甘油)处理细胞,储存在 -130℃ 以下的温度下 (冻存),直到需要使用之时。

  • Nature:终于逮到你了!肿瘤干细胞

    http://www.bioon.com/biology/UploadFiles/201208/2012080216013081.jpg癌症研究人员可以测定肿瘤细胞基因组的序列,扫描其异常的基因活性,剖析其突变的蛋白质和研究它们在实验室培养皿中的生长,但研究者一直无法跟踪细胞形成肿瘤的过程。现在三个独立研究小组在小鼠体内做到了这一点。他们的研究结果支持这样的观点:一小部分细胞驱动肿瘤的生长,而想要治愈癌症可能需要将这些所谓肿瘤干细胞清除。目前还无法确认,这些从脑瘤,肠癌和皮肤癌研究的结论是否适用于其他类型肿瘤,但是得克萨斯大学西南医学中心的路易斯·帕拉达认为,如果它们适用于其他肿瘤,"将深刻地改变目前的化疗疗效评价和临床疗法的制定标准"。 不仅是看某种疗法是否缩小肿瘤,研究人员将更关注是否杀死了正确的细胞。帕拉达和他的同事们想检测是否特异性标识健康成人神经干细胞的一个遗传标记,也可标识神经母细胞瘤中的癌症干细胞。他们发现,所有神经母细胞瘤样本中至少有几个标记细胞 - 大概是干细胞。未标记细胞可被标准化疗杀死,但肿瘤可迅速恢复。进一步的实验表明,未标记细胞起源于标记的细胞祖先。当研究者把化疗与抑制标记细胞的遗传手段相结合进行治疗时,帕拉达说,肿瘤显著缩小到"残留遗迹"的水平。在另一项研究中,荷兰乌得勒支Hubrecht研究所的干细胞生物学家们把注意力瞄着了肠道。利用药物驱动的荧光素标志物表达系统,他们在小鼠体内证实,多种不同类型的肿瘤细胞,其实是来源于同一干细胞的。而且,这些干细胞是肿瘤发展的驱动力。对皮肤癌的研究,Blanpain和他的小组标记单个肿瘤细胞,而不是特异地标记干细胞。他们发现,细胞表现出两种不同的分工模式:它们要么在慢慢耗尽前分裂出少数细胞,或者产生许多细胞。这再次证实,一类独特的细胞亚群是肿瘤生长的驱动力。研究者说,下一步的研究计划将是,搞清楚这些实验所跟踪的细胞如何与通过多年移植实验所确定的,假定的癌症干细胞相联系的。研究人员已经紧锣密鼓地在寻找杀死这些细胞的方法;现在他们有更多的工具来测试这样的策略是否会奏效。

  • 牛奶体细胞测定与牧场管理

    [b]奶牛体细胞测定与牧场管理[/b]是DHI(Dairy Herd Improvement)的必修课题。DHI即奶牛生产性能测定也称牛群改良,是一套完整的奶牛生产性能记录和管理体系,是一个实实在在通过度量和分析解决奶牛生产实际问题的方法,其目的是提高牛群的整体素质和生产水平,使用方法是从群体着眼,针对个体解决存在的问题。DHI检测的项目:一是牛群的产奶性能,包括每头牛的产奶量、乳脂率、乳蛋白率等;二是收集牛群饲养管理与经营方面的资料,如系谱资料、产犊日期、干奶日期、淘汰日期和牛群的年龄结构等,并将这些资料信息进行系统加工处理,所得结果再返回牛场指导牛场的经营管理,帮助提高牛场经济效益。DHI的用途具体体现为追踪个体牛表现、观察牛群表现、开发新目标、乳房炎管理、选种等方面的。  针对于[b]奶牛体细胞测定与牧场管理[/b]课题,最关键是乳脂率、乳蛋白率、体细胞数,其中体细胞直接影响产奶量、乳脂率、乳蛋白率和其它乳成分。通过体细胞数的变化,可反映牧场管理水平及牧场经营状况。DHI检测设备推荐本特利NexGen系列新一代牛奶成分+体细胞检测,检测速度400-600/小时,可以根据牧场需要进行配置,同时检测模块有丙酮和乳铁蛋白,对于预防奶牛酮病和乳房炎有提前预警作用。 [b]体细胞数(SCC)[/b]是指每毫升牛奶中所含的体细胞量,它反映牛场奶牛乳房健康状况,几乎参加DHI项目的每头泌乳牛都进行体细胞检测。它包括多种类型的细胞如白细胞和脱落的上皮细胞等,高SCC记录预示着大量的白细胞的存在和乳房感染几率较大。DHI报告可提供全群奶牛各胎次每月体细胞数值,可按照不同胎次统计出不同SCC水平的牛头数及所占百分比。  个体[b]奶牛体细胞数(SCC)[/b]直接反映了奶牛乳房健康状况,并能反映防治措施是否有效,需要说明一点,SCC的高低反映了乳房受感染的程度,而并非超过某一特定值就表示该牛一定有乳房炎而需要治疗。 牛群[b]体细胞数(SCC)[/b]是整个牛群乳房健康程度的标志。体细胞数、体细胞评分反映了该牛群的健康状况。对于体细胞高的牛群,应从挤奶设备的消毒效果,挤奶设备真空度及真空稳定性,奶衬性能及使用时间,牛床、运动场等卫生环境等方面找问题。 在DHI报告中提供了因[b]奶牛体细胞数(SCC)[/b]太高而造成奶牛产奶量的损失,应用该数据可以计算出奶牛场全年产奶量损失及直接经济损失。[b]奶牛体细胞数(SCC)[/b]与奶量损失的关系  DHI报告分析:脂肪蛋白比。一个牛群正常的脂肪和蛋白比例在1.1-1.2的范围内,或蛋脂比在0.8—0.85如果变化范围超过上限或下限,说明奶牛饲养管理方面有问题。  当脂蛋比低于1.1时表明  A、奶牛粗饲料在瘤胃中的发酵率降低  B、粗饲料的质量差  C、精料比例过大  D、瘤胃亚临床或临床型酸中毒  E、奶牛反刍减少,日粮中缺乏缓冲物质  当脂蛋比高于1.2时表明:  A、奶牛日粮中蛋白质不平衡,品质差,缺乏必需氨基酸,如蛋氨酸和赖氨酸。  B、日粮中能量不足,瘤胃微生物蛋白合成不足  C、奶牛干物质采食量不足  D、夏天热应激  E、饲料中添加了大量的油脂类脂肪  F、可发酵碳水化合物含量不足DHI报告中奶牛繁殖状况分析:平均泌乳天数。如果一个牛群具有正常的牛群结构,且常年均衡配种,那么该牛群的平均泌乳天数应改为150-170天。如果超过上限则表明:  A、所提供的产犊日的准确性  B、奶牛产后繁殖问题严重  C、配种技术员水平不高 D、存在严重的饲养管理问题  DHI报告在生产实践中的重要意义:DHI分析报告是奶牛场改进饲养方法、提高管理水平的基础。如根据奶牛泌乳曲线的变化、乳成分和奶牛体细胞和尿素氮测定结果,分析各类营养的平衡关系,以调整饲料配方和优化饲喂程序,保证牛群的正常管理,而使牛群发挥最大的生产潜力,提高生产水平。

  • 细胞分析仪最新功能介绍

    用途: 流式细胞仪是对细胞进行自动分析和分选的装置。它可以快速测量、存贮、显示悬浮在液体中的分散细胞的一系列重要的生物物理、生物化学方面的特征参量,并可以根据预选的参量范围把指定的细胞亚群从中分选出来。多数流式细胞计是一种零分辨率的仪器,它只能测量一个细胞的诸如总核酸量,总蛋白量等指标,而不能鉴别和测出某一特定部位的核酸或蛋白的多少。也就是说,它的细节 分辨率为零。 流式细胞仪主要由四部分组成。它们是:流动室和液流系统;激光源和光学系统;光电管和检测系统;计算机和分析系统 参数测量原理荧光信号主要包括两部分:①自发荧光,即不经荧光染色细胞内部的荧光分子经光照射后所发出的荧光;②特征荧光,即由细胞经染色结合上的荧光染料受光照而发出的荧光,其荧光强度较弱,波长也与照射激光不同。自发荧光信号为噪声信号,在多数情况下会干扰对特异荧光信号的分辨和测量。在免疫细胞化学等测量中,对于结合水平不高的荧光抗体来说,如何提高信噪比是个关键。一般说来,细胞成分中能够产生的自发荧光的分子(例核黄素、细胞色素等)的含量越高,自发荧光越强;培养细胞中死细胞/活细胞比例越高,自发荧光越强;细胞样品中所含亮细胞的比例越高,自发荧光越强。  减少自发荧光干扰、提高信噪比的主要措施是:①尽量选用较亮的荧光染料;②选用适宜的激光和滤片光学系统;③采用电子补偿电路,将自发荧光的本底贡献予以补偿。仪器的操作和使用  ①打开电源,对系统进行预热;  ②打开气体阈,调节 压力,获得适宜的液流速度;开启光源冷却系统;  ③在样品管中加入去离子水,冲洗液流的喷嘴系统;  ④利用校准标准样品,调整仪器,使在激光功率、光电倍增管电压、放大器电路增益调定的基础上,0和90散射的荧光强度最强,并要求变异系数为最小;  ⑤选定流速、测量细胞数、测量参数等,在同样的工作条件下测量样品和对照样品;同时选择计算机屏上数据的显示方式,从而能直观掌握测量进程;  ⑥样品测量完毕后,再用去离子水冲洗液流系统;  ⑦因为实验数据已存入计算机硬盘(有的机器还备有光盘系统,存贮量更大),因此可关闭气体、测量装置,而单独使用计算机进行数据处理;  ⑧将所需结果打印出来。热销细胞网是采用Accuri 型2号流式细胞仪,指示符®软件和工作站电脑供应在对市场价格领先的系统的一小部分的功能齐全的流式细胞仪的所有功能。在C6系统包括蓝色和红色激光,四色探测器和正向和侧向散射检测器加上软件,非常直观,你通常将和内收到您的Accuri小时运行的系统。

  • 离心机如何应用于红细胞压积容量测定

    [b]离心机[/b]如何应用于红细胞压积容量测定摘要:红细胞压积(packedcellvolume,PCV)又称红细胞比容(hematocrit,Hct),是指红细胞在血液中所占容积的比值,测定时将抗凝血在一定的条件下离心沉淀,即可测得每升血液中血细胞所占容积的比值。  1原理[b]离心机[/b]  在100刻度玻璃管中,充入抗凝血至刻度,经一定时间离心后,红细胞下沉并紧压于玻璃管中,读取红细胞柱所占的百分比,即为红细胞压积容量(PCV又称压容、比容)。  2.器材  (1)温氏管:管长11cm,内径约2.5mm,管壁有100个刻度。一侧自上而下标有0~10,供测定血沉用,另一侧标有10~0,供测定比容用。如无这种特制的管子,可用有100刻度的小玻璃管代替。  (2)长针头及胶皮乳头:选用长12~15cm的针头,将针尖磨平,针柄部接以胶皮乳头。也可用细长毛细吸管代替。  (3)水平电动离心机:转速能达4000rpm者。  3.方法  (1)用长针头吸满抗凝血,插入温氏管底部,轻捏胶皮乳头,自下而上挤入血液至刻度10处。  (2)置离心机中,以3000rpm的速度离心30~45min(马的血液离心30min,牛、羊的血液离心45min),取出观察,记录红细胞层高度,再离心45min,如与第一次离心的高度一致,此时红细胞柱层所占的刻度数,即为PCV数值用%表示。  4.注意事[b]离心机[/b]项  (1)温氏管及充液用具必须干燥,以免溶血。  (2)此时,离心机的转速必须达3000rpm以上,并遵守所规定的时间。  (3)用一般离心后[b]离心机[/b],红细胞层呈斜面,读取时应取斜面1/2处所对应的刻度数。血浆与红细胞层之间的灰白层由白细胞与血小板组成,不应计算在内。  5.临床意义  (1)红细胞压积增高:见于各种原因所引起的血液浓缩,使红细胞相对性增多,如急性胃肠炎、肠便秘、肠变位、瓣胃阻塞、渗出性胸膜炎和腹膜炎,以及某些传染病和发热性疾病。由于红细胞压积增高的数值与脱水程度成正比,因此在临床上可根据这一指标的变化而推断机体的脱水情况,并计算补液的数量及判断补液量的实际效果。另外。也见于各种原因所致的红细胞绝对性增多,如真性红细胞增多症、肺动脉狭窄、高铁血红蛋白血症等。  (2)红细胞压积降低:见于各种贫血,但降低的程度并不一定与红细胞数一致,因为贫血有小细胞性贫血、大细胞性贫血及正细胞性贫血之分。

  • 什么是CAR-NK细胞疗法?CAR-NK细胞制备过程详解

    [font=宋体][b][font=宋体]什么是[/font][font=Calibri]CAR-NK[/font][font=宋体]细胞疗法[/font][font=Calibri]?[/font][/b][/font][font=宋体][font=宋体]自然杀伤([/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体])细胞是具有高度细胞毒性的非特异性免疫效应细胞,具有消除肿瘤细胞和感染病毒细胞等异常细胞的能力。[/font][font=Calibri]CAR-NK[/font][font=宋体]细胞疗法在血液瘤和实体瘤中发挥显著的效果,与[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]疗法相比,[/font][font=Calibri]CAR-NK[/font][font=宋体]细胞疗法更安全,引起细胞因子释放综合征([/font][font=Calibri]CRS[/font][font=宋体])和移植物抗宿主病([/font][font=Calibri]GVHD[/font][font=宋体])的可能性更低,具有更强的抗肿瘤活性,是一个现货免疫细胞的理想选择。[/font][font=Calibri]CAR-NK[/font][font=宋体]细胞的来源广泛,包括脐带血([/font][font=Calibri]UCB[/font][font=宋体])、外周血([/font][font=Calibri]PB[/font][font=宋体])、人诱导多能干细胞([/font][font=Calibri]hiPSCs[/font][font=宋体])、人胚胎干细胞([/font][font=Calibri]hESC[/font][font=宋体])、造血干细胞([/font][font=Calibri]HSC[/font][font=宋体])和[/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞系。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]CAR-NK[/font][font=宋体]细胞的制备过程:[/font][/b][/font][font=宋体][font=宋体]? 对不同来源的[/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞进行分离和制备时,可以用[/font][font=Calibri]CAR[/font][font=宋体]表达载体(如慢病毒)进行修饰;[/font][/font][font=宋体][font=宋体]? 在特定的扩增培养基中扩增[/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞;[/font][/font][font=宋体][font=宋体]? 建立的[/font][font=Calibri]CAR[/font][font=宋体]‐[/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞通常采用静脉注射,以选择性杀死肿瘤细胞。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][url=https://cn.sinobiological.com/category/solutions/car-nk-therapy][font=Calibri]CAR-NK[/font][font=宋体]细胞疗法整体解决方案[/font][/url][/b][/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州为制药公司提供综合性的[/font][font=Calibri]CAR-NK[/font][font=宋体]细胞疗法开发解决方案,包括从[/font][font=Calibri]CAR[/font][font=宋体]开发、[/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞获取和表征、[/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞活化和扩增、[/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞纯化、[/font][font=Calibri]CAR-NK[/font][font=宋体]细胞制备到[/font][font=Calibri]CAR-NK[/font][font=宋体]细胞质量控制的每一阶段。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]①[/font][font=Calibri]CAR[/font][font=宋体]开发:[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]CAR[/font][font=宋体]可特异性识别肿瘤细胞表面抗原并与其结合,因此获得高质量[/font][font=Calibri]CAR[/font][font=宋体]是开发中的关键步骤。基于[/font][font=Calibri]15+[/font][font=宋体]年的经验积累和技术沉淀,义翘神州建立了四大抗体开发平台(噬菌体抗体库、杂交瘤、流式单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞、[/font][font=Calibri]BeaconB[/font][font=宋体]细胞)满足[/font][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]发现的需求。同时我们还提供用于[/font][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]筛选和[/font][font=Calibri]CAR[/font][font=宋体]亲和力检测的多种[/font][font=Calibri]CAR-NK[/font][font=宋体]靶点蛋白和[/font][font=Calibri]SPR/BLI[/font][font=宋体]亲和力检测服务,支持[/font][font=Calibri]CAR-NK[/font][font=宋体]研究。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]②[/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞获取和表征:[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞源于脐带血([/font][font=Calibri]UCB[/font][font=宋体])、外周血([/font][font=Calibri]PB[/font][font=宋体])、人诱导多能干细胞([/font][font=Calibri]hiPSCs[/font][font=宋体])、人胚胎干细胞([/font][font=Calibri]hESC[/font][font=宋体])、造血干细胞([/font][font=Calibri]HSC[/font][font=宋体])和[/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞系。由于[/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞来源广泛,需要对[/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞进行分离,清除[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞、[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞或其他污染物。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞被定义为[/font][font=Calibri]CD3-CD16+CD56+[/font][font=宋体]的淋巴细胞。根据[/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞表面标志物[/font][font=Calibri]CD16[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]CD56[/font][font=宋体]的差异性表达,可将[/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞划分为两个亚群[/font][font=Calibri]CD56brightCD16dim/[/font][font=宋体]? 和[/font][font=Calibri]CD56dimCD16+[/font][font=宋体]。根据这些不同的表面标志物,利用流式抗体进行检测从而区分[/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞亚群。义翘神州已开发高质量的[/font][font=Calibri]CD3[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]CD16[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]CD25[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]CD56[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]KIR2DL1[/font][font=宋体]流式抗体,可有效分离和表征[/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞群或亚群。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]③[/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞活化和扩增:[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]在外周血白细胞中,只有约[/font][font=Calibri]5%-15%[/font][font=宋体]为[/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞,如何获得足够的[/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞仍是患者采用免疫治疗的主要挑战。从[/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞活化阶段进行高效的[/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞转导,以诱导细胞增殖。目前[/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞培养存在多种培养方式,应用最广泛的两种方法为饲养层细胞培养和细胞因子培养。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]GMP[/font][font=宋体]级细胞因子[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]相关法规明确规定,对于细胞治疗药物中原材料的选择,应尽量采用符合药典标准的原材料或批准上市的药品,优先级是:药品级>[/font][font=Calibri]GMP[/font][font=宋体]级>[/font][font=Calibri]RUO[/font][font=宋体]级。[/font][font=Calibri]GMP[/font][font=宋体]级细胞因子对于[/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞的发育和存活具有重要调节作用,如[/font][font=Calibri]IL-21[/font][font=宋体]能诱导[/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞的成熟,并增强其细胞毒性。[/font][font=Calibri]GMP[/font][font=宋体]级细胞因子作为重要原料应用到[/font][font=Calibri]CAR-NK[/font][font=宋体]药物开发过程中,可在体外扩增过程中高效激活[/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞。义翘神州严格遵循[/font][font=Calibri]GMP[/font][font=宋体]质量管理体系,成功开发出高质量、高活性的[/font][font=Calibri]GMP[/font][font=宋体]级细胞因子:[/font][font=Calibri]IL-2[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IL-7[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IL-12[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IL-15[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IL-21[/font][font=宋体],助力[/font][font=Calibri]CAR-NK[/font][font=宋体]细胞培养。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]④[/font][font=Calibri]CAR-NK[/font][font=宋体]细胞制备:[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]慢病毒包装是[/font][font=Calibri]CAR-NK[/font][font=宋体]细胞制备的关键环节。影响慢病毒包装是否成功的因素包括载体系统、转染试剂和慢病毒滴度等。义翘神州提供高品质的无血清[/font][font=Calibri]HEK293[/font][font=宋体]培养基、[/font][font=Calibri]Sinofection[/font][font=宋体]转染试剂和超级核酸酶,用于慢病毒载体的高效转染。同时我们还提供细胞库检测服务和核酸酶残留检测试剂盒,满足[/font][font=Calibri]CAR-NK[/font][font=宋体]细胞制备需求。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]⑤[/font][font=Calibri]CAR-NK[/font][font=宋体]细胞质量控制:[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]为确保[/font][font=Calibri]CAR-NK[/font][font=宋体]细胞治疗产品的安全性,需要进行严格的质量控制检测,包括活细胞比例检测、细胞群或亚群检测、[/font][font=Calibri]CAR[/font][font=宋体]阳性率检测和杀伤效力评价等。义翘神州提供高质量的产品和服务,支持[/font][font=Calibri]CAR-NK[/font][font=宋体]细胞质量控制检测。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以参看:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/category/solutions/car-nk-therapy[/font][/font]

  • 【原创大赛】从流式细胞仪的结构浅析维修

    【原创大赛】从流式细胞仪的结构浅析维修

    DHI测定设备主要由三部分组成,乳成分测定仪,体细胞测定仪和自动进样器,其中乳成分测定仪和体细胞测定仪则用同一个自动进样器。本文主要从体细胞测定仪的结构和工作原理分析阐述维修该设备的一些步骤。1、流式细胞仪的结构体细胞测定仪主要采用流式细胞仪OR术的原理。流式细胞术(flow cytometery, FCM)是20世纪70年代发展起来的一种可以快速、准确、客观,可同时检测单个微粒(通常是细胞)的多项特性,并加以定量的技术。流式细胞仪是一种集激光技术、电子物理技术、光电测量技术、电子计算机以及细胞荧光化学技术为一体的新型高科技仪器设备。一般其结构分为3部分:样品室及液流驱动系统;激光光源及光学系统;信号检测、储存、数据处理系统。仪器内部光学结构见图1。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/08/201308071351_456588_1644065_3.jpg从图1可以清晰的看出仪器的内部结构。其中样品室(也称为观察室)是仪器的核心部件之一,在样品室中被检测样品与激光相交,而样品室由石英玻璃制成,其形状为细孔,只供单列细胞流过,检测区在该孔的中心,这种结构的样品室的光学特性良好,流速较慢,因而细胞受照射时间长,可收集的细胞信号光通量大,配上广角收集透镜,可获得很高的检测灵敏度和测量精度。图2为流式细胞仪的模拟图,从图2更能直观的看到仪器的构造。通过仪器的构造了解仪器的工作原理,为仪器的维修打下坚实的基础。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/08/201308071353_456590_1644065_3.jpg图2 流式细胞仪的模拟图1.1激光光源和光学系统目前流式细胞仪的光源采用激光(laser)光源。激光是一种相干光源,它能提供单波长、高强度及稳定性高的光照,是细胞微弱荧光快速分析的理想光源。由于细胞快速流动,每个细胞经过光照区的时间仅为1μs左右,每个细胞所携带荧光物质被激发出的荧光信号的强弱,与被照射的时间和激发光的强度有关,因此细胞需要足够的光照强度。1.2流式细胞仪的分析原理经过染色液染色的样品溶液通过样品管被压进喷嘴的中央,同时无细胞的鞘液也被压入喷嘴,形成包绕细胞的鞘液流,使细胞以单列进入样品室,与水平方向的激光光束(波长488nm)垂直相交。稳定的液流推进装置,使染色的样品呈单列,每个细胞以均等的时间依次通过激光照射区。被荧光染色的细胞受照射后,产生两种信号,一种是散射光信号,其又分为前向散射光(Forward scatter,FSC)和侧向散射光(Side scatter,SSC),前者一般与细胞体积的大小呈正比,而后者与细胞的颗粒度和复杂性有关。2、故障分析2.1光源散射当用离子液或标样对体细胞进行测定时,如果测定结果偏低,其原因很有可能是激光聚焦的问题,发生激光的散射,导致结果偏低。其现象见图3。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/08/201308071357_456602_1644065_3.jpg[/

  • 激光扫描共聚焦显微镜在细胞生物学中的应用

    激光扫描共聚焦显微镜是近十年发展起来的医学图像分析仪器,与传统的光学显微镜相比,大大地提高了分辨率,能得到真正具有三维清晰度的原色图像。并可探测某些低对比度或弱荧光样品,通过目镜直接观察各种生物样品的弱自发荧光。能动态测量Ca2+ 、pH值,Na+、Mg2+等影响细胞代谢的各种生理指标,对细胞动力学研究有着重要的意义。同时激光扫描共聚显微镜可以处理活的标本,不会对标本造成物理化学特性的破坏,更接近细胞生活状态参数测定。可见激光扫描共聚焦显微镜是普遍显微镜上的质的飞跃,是电子显微镜的一个补充,现已广泛用于荧光定量测量,共焦图像分析,三维图像重建、活细胞动力学参数分析和胞间通讯研究等方面,在整个细胞生物学研究领域有着广阔的应用前景。1. 定量荧光测量ACAS可进行重复性极佳的低光探测及活细胞荧光定量分析。利用这一功能既可对单个细胞或细胞群的溶酶体,线粒体、DNA、RNA和受体分子含量、成份及分布进行定性及定量测定,还可测定诸如膜电位和配体结合等生化反应程度。此外,还适用于高灵敏度快速的免疫荧光测定,这种定量可以准确监测抗原表达,细胞结合和杀伤及定量的形态学特性,以揭示诸如肿瘤相关抗原表达的准确定位及定量信息。2. 定量共聚焦图像分析借助于ACAS激光共焦系统,可以获得生物样品高反差、高分辨率、高灵敏度的二维图像。可得到完整活的或固定的细胞及组织的系列及光切片,从而得到各层面的信息,三维重建后可以揭示亚细胞结构的空间关系。能测定细胞光学切片的物理、生物化学特性的变化,如DNA含量、RNA含量、分子扩散、胞内离子等,亦可以对这些动态变化进行准确的定性、定量、定时及定位分析。3. 三维重组分析生物结构ACAS使用SFP进行三维图像重组,SFP将各光学切片的数据组合成一个真实的三维图像,并可从任意角度观察,也可以借助改变照明角度来突出其特征,产生更生动逼真的三维效果。4. 动态荧光测定Ca2+、pH 及其它细胞内离子测定,利用ACAS能迅速对样品的点,线或二维图像扫描,测量单次、多次单色、双发射和三发射光比率,使用诸如Indo-1、BCECF 、Fluo-3等多种荧光探针对各种离子作定量分析。可以直接得到大分子的扩散速率,能定量测定细胞溶液中Ca2+对肿瘤启动因子、生长因子及各种激素等刺激的反应,以及使用双荧光探针Fluo-3和CNARF进行Ca2+和pH的同时测定。5. 荧光光漂白恢复(FRAP)——活细胞的动力学参数荧光光漂白恢复技术借助高强度脉冲式激光照射细胞某一区域,从而造成该区域荧光分子的光淬灭,该区域周围的非淬灭荧光分子将以一定速率向受照区域扩散,可通过低强度激光扫描探测此扩散速率。通过ACAS可直接测量分子扩散率、恢复速度,并由此而揭示细胞结构及相关的机制。6. 胞间通讯研究动物细胞中由缝隙连接介导的胞间通讯被认为在细胞增殖和分化中起非常重要的作用。ACAS可用于测定相邻植物和动物细胞之间细胞间通讯,测量由细胞缝隙连接介导的分子转移,研究肿瘤启动因子和生长因子对缝隙连接介导的胞间通讯的抑制作用,以及胞内Ca2+、PH和cAMP水平对缝隙连接的调节作用。7. 细胞膜流动性测定ACAS设计了专用的软件用于对细胞膜流动性进行定量和定性分析。荧光膜探针受到极化光线激发后,其发射光极性依赖于荧光分子的旋转,而这种有序的运动自由度依赖于荧光分子周围的膜流动性,因此极性测量间接反映细胞膜流动性。这种膜流动性测定在膜的磷脂酸组成分析、药物效应和作用位点,温度反应测定和物种比较等方面有重要作用。8. 笼锁-解笼锁测定许多重要的生活物质都有其笼锁化合物,在处于笼锁状态时,其功能被封闭,而一旦被特异波长的瞬间光照射后,光活化解笼锁,使其恢复原有活性和功能,在细胞的增值、分化等生物代谢过程中发挥功能。利用ACAS可以人为控制这种瞬间光的照射波长和时间,从而达到人为控制多种生物活性产物和其它化合物在生物代谢中发挥功能的时间和空间作用。9. 粘附细胞分选ACAS是目前唯一能对粘附细胞进行分离筛选的分析细胞学仪器,它对培养皿底的粘附细胞有两种分选方法: ① Coolie-CutterTM法,它是Meidian公司专利技术,首先将细胞贴壁培养在特制培养皿上,然后用高能量激光的欲选细胞四周切割成八角形几何形状,而非选择细胞则因在八角形之外而被去除,该分选方式特别适用于选择数量较少诸如突变细胞、转移细胞和杂交瘤细胞,即使百万分之一机率的也非常理想。 ② 激光消除法,该方法亦基于细胞形态及荧光特性,用高能量激光自动杀灭不需要的细胞,留下完整活细胞亚群继续培养,此方法特别适于对数量较多细胞的选择。10. 细胞激光显微外科及光陷阱技术借助ACAS可将激光当作“光子刀”使用,借此来完成诸如细胞膜瞬间穿孔、切除线粒体、溶酶体等细胞器、染色体切割、神经元突起切除等一系列细胞外科手术。通过ACAS光陷阱操作来移动细胞的微小颗粒和结构,该新技术广泛用于染色体、细胞器及细胞骨架的移动。

  • atp测定仪适合检测哪些类型的微生物

    [size=16px]  atp测定仪适合检测哪些类型的微生物  ATP测定仪是一种基于生物发光原理的快速检测仪器,通过测量样品中的ATP含量来评估微生物的活性水平。由于ATP是所有活细胞(包括微生物)的能量来源,因此ATP测定仪能够广泛应用于多种微生物的检测。  具体来说,ATP测定仪适合检测的微生物类型包括但不限于:  病原微生物:这是指那些能够引起疾病的微生物,例如大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等。这些微生物常常存在于食品、水源和环境中,对人体健康构成威胁。ATP测定仪能够快速检测这些病原微生物的存在,有助于及时采取防控措施。  环境微生物:环境中的微生物种类繁多,包括细菌、真菌、病毒等。ATP测定仪可以用于评估环境样本(如土壤、水体、空气等)中的微生物污染程度,为环境监测和治理提供数据支持。  食品微生物:食品中的微生物污染是食品安全领域的重要问题。ATP测定仪可以检测食品样品中的微生物活性,包括菌落总数、大肠菌群、霉菌和酵母等,从而评估食品的卫生状况和质量安全。  需要注意的是,ATP测定仪检测的是ATP分子本身,而不是细胞数量或种类。因此,它更适用于快速评估样品中生物活性和细菌污染的程度,而不是用于鉴定具体的细菌种类。  总的来说,ATP测定仪在多个领域都有广泛的应用,能够为微生物检测提供快速、准确的方法,有助于保障人们的健康和安全。[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/03/202403151354328485_5049_6098850_3.jpg!w690x690.jpg[/img][/size]

  • 【转帖】第四种淋巴细胞—NKT细胞

    第四种淋巴细胞—NKT细胞 通常认为,构成机体免疫系统的淋巴细胞有三种细胞系组成,一是由胸腺产生的T细胞,二是由骨髓分化而来的产生抗体的B细胞,三是自然杀伤(NK)细胞。而新近发现存在第四种淋巴细胞—NKT细胞。1. NKT细胞的发现1986年,克隆成功了NKT细胞的特征性抗原受体基因。将其命名为Va14基因,与其他T细胞抗原受体的(TCR)基因不同,有其独特的结构特征。1987年美国国立卫生研究所的Fawlkes与瑞士的Budd分别领导的两个研究小组报告指出,胸腺细胞中的T细胞通常不能表达受体,仅有部分未成熟T细胞选择表达V-β8.2受体。随后的研究证明这种细胞不是T细胞,考虑是NK细胞的受体,这种细胞集团的数量极少,生理意义不明。1994年,这两个研究小组的研究人员发现,他们报道的细胞为同一细胞,从此NKT细胞的研究引起人们的广泛关注。T细胞识别的抗原是蛋白质,而NKT细胞是别的抗原是α-Gal-Cer即所谓的糖脂质,这是该免疫系统与通常的免疫系统重要的不同点。NKT细胞的分化与T细胞不同的是在胸腺形成前的胎生初期6.5日在胸腺外组织分化。NKT细胞与T细胞比较,机能处于不发达状态。T细胞分化为功能不同的Th1和Th2细胞群,Th1细胞产生INFγ及IL-2,引起迟发行过敏症等细胞性炎症。Th2细胞能产生IL-4和IL-10,参与变态反应及抗体产生等体液免疫反应。而NKT细胞不但能分泌Th1和Th2细胞因子,同时还具有与CD8+伤害性T细胞(cytotox-ic Tlymphocyte,CTL)相同的杀伤靶细胞作用。毫无疑问,NKT细胞在免疫调节系统中占有重要位置。NKT细胞与疾病可能有诸多关系,可能与自身免疫性疾病的发病机制、变态反应的调节、抗肿瘤作用、及抑制寄生虫感染等有关。2. NKT细胞的多样性分化NKT细胞具有T细胞和NK细胞细胞两重性质,既能表达Va14/Ja281特定的T细胞受体又能由CD1介导识别脂质抗原。NKT细胞的分化是否依赖胸腺尚有争议。根据其表达TCR等多种表面抗原的不同,提示NKT细胞存在两个以上细胞群。从CD4/8的表达看,可将其分为(1)CD4-NKT细胞,(2)CD8-NKT细胞,(3)CD4和CD8均不能表达的DN-NKT细胞。第一类的全部和第二类的半数是Va14/Ja281-T细胞。3.人类NKT细胞人末梢血中的DN-NKT细胞V区域,可高度表达Va24/JaQ(这与鼠的Va14/Ja281高度相似)及Vβ11(与鼠Vβ18高度相似)。这种TCR的组合表达可见于DN-NKT细胞和CD4+细胞。而未见于CD8+细胞。小鼠的CD1相当于人的CD1d的Va24/JaQ。此外,人末梢血中1~2%的T细胞能表达抑制性受体,即抑制型NK细胞受体(KIR),而Va24/JaQ+细胞则不能表达。它的NK相关分子是CD16、CD56或CD57,Va24/JaQ+细胞异不能表达这些分子。在小鼠中还可以看到Va24/Ja281+T细胞以外的NKT细胞。人类Va24/JaQ+细胞与KIR+T细胞能形成不同的亚群。且具有不同的功能。4. NKT细胞分化的胸腺依赖性这是目前存在争议的问题,可以肯定地说NKT细胞分化过程中胸腺是有作用的。NKT细胞多见于胸腺及脾脏以外的肝脏和骨髓种,胸腺缺损的小鼠与正常小鼠比较,NKT的分化并不少。将出生三日小鼠的胸腺摘除,虽然NKT细胞的分化显著受到抑制,但此时CD8+NKT细胞的分化未受到影响。由此认为CD8+NKT细胞在胸腺外分化的可能。5. NKT细胞产生细胞因子的意义 NKT细胞是指能够表达NKT细胞标志NKT1.1的T细胞,其机能具有T细胞和NKT细胞双重特征。NKT细胞在TCR和NKR介导下,产生大量的IL-4及INFγ,对肿瘤细胞有细胞伤害作用。 NKT细胞能表达T细胞的TCR与NK细胞的NKR-P1两种受体,特别是NKT细胞多数表达Va14TCR,识别CD1抗原,而NKR-P1识别各种糖链。 NKT细胞,特别是CD4-NKT细胞,对TCR刺激可产生大量IL-4及IFNγ,同时具有ThO型细胞因子产生能力。NKT细胞不但产生IL-4的主要细胞,而且强力产生IFNγ。IFNγ参与自身Th1诱导,具有极强的Th1诱导能力,从而是IL-2产生亢进。它同时还具有Th2细胞分化抑制功能。IL-12能诱导NKT细胞产生IFNγ。IL-12对TCR的刺激是IFNγ的产生显著亢进。综上所述,NKT细胞不但是IL-4和IFNγ的强力产生细胞,同时参与Th1/Th2分化的抑制,而这些作用都不是单纯的。 虽然NKT细胞能大量产生细胞因子,但仅在机体内保持这种功能。当初一度认为,NKT细胞只是IL-4的产生细胞,而不是Th2分化的必需细胞。并不认为在CD1缺损的小鼠中NKT细胞的分化和对TCR刺激使IL-4产生减少,且对Th2分化必需的IL-4及IgE的产生没有多大影响。但给小鼠投于α-GalCer可使NKT细胞活化,IL-4的产生诱导Th2的应答。有报告指出,同样投于α-GalCer,可使NKT细胞产生IFNγ而致IgE产生低下。由此可见,NKT细胞能产生IL-4与IFNγ两种功能相反的细胞因子。这种微妙的协调作用可能是NKT机能表达的重要特征。NKT细胞的活化通常伴有T细胞、B细胞及NK细胞的活化,这对NKT细胞活化后的免疫应答有较大影响。

  • 流式细胞仪操作规程(复旦大学分子病毒学实验室)

    名称:流式细胞仪操作规程(复旦大学分子病毒学实验室)关键词:流式细胞仪目的:流式细胞仪开机程序、预设获取模式文件、设定和调整、样品分析、关机程序一.开机程序1.检查稳压器电源,打开电源,稳定5分钟。2.打开储液箱,倒掉废液, 并在废液桶中加入400ml漂白水原液。打开压力阀,取出鞘液桶,将鞘液桶加至4/5满(一般可用三蒸水,做分选必须用PBS或FACSFlow),合上压力阀。确实盖紧桶盖,检查所有管路是否妥善安置。3.将FACSCalibur开关打开,此时仪器功能控制钮的显示应是STANDBY,预热5-10分钟。排出过滤器内的气泡。4.如果需要打印,打开打印机电源。5.打开电脑,等待屏幕显示出标准的苹果标志。6.执行仪器PRIME功能一次,以排除Flow cell中的气泡。7.分析样品时,先用FACAFlow 或PBS进行HIGH RUN约2分钟。做过分选后,每次开机后需冲洗管道:向分选装置上装上两个50ml离心管,不接通浓缩系统,摁下右下角白色按钮开始冲洗。待自动停止后接通浓缩装置,同上法冲洗一次。二.预设获取模式文件(Acquisition Template Files)1.从苹果标志中选择CELLQuest见一个新视窗,可利用此视窗编辑一个获取模式文件。2.选取屏幕左列绘图工具中的Dot plot,绘出一个或多个Dot Plots(点图)。从Dot Plot对话框中选取Acquisition作为图形资料来源,并确定适当的x轴和y轴参数。3.选取屏幕左列绘图工具中的Histogram,同上法可绘出Histogram(直方图)。4.将此视窗命名后储存于FACStation G3\BD Applications \CELLQuest Folder \EXP文件夹中,下次进行相同实验时可直接调用。本计算机中已设定两个模式文件:ACQ和EXP,储存于FACStation G3\BD Applications \CELLQuest \EXP文件夹中,ACQ用于细胞DNA检测,EXP用于细胞表面标志分析。三.用CELLQuest进行仪器的设定和调整1.从苹果画面中选取CELLQuest,进入CELLQuest后在File指令栏中打开合适的获取模式文件。2.从屏幕上方Acquire指令栏中,选取Connect to Cytometer(快捷键: +B)进行电脑和仪器的连机。将出现的Acquisiton Control对话框移至合适位置。3.从Cytometer指令栏中,开启Detectors/Amps、Threshold、Compensation、Status等四个对话框,并将它们移至屏幕右方,以便获取数据时随时调整获取条件。也可以用 +1,2,3,4获得此四个对话框。4.在Detectors/Amps对话框中,先为每个参数选择适当的倍增模式(amplifier mode):线性模式Lin或对数模式Log。一般进行细胞表面抗原分析如分析外周血的淋巴细胞亚群时,FSC和SSC多以线性模式Lin测量,且DDM Param选择FL2,而FL1, FL2与FL3则以对数模式Log测量;分析细胞DNA含量时,FSC,SSC,FL1,FL2,FL3皆以Lin进行测量,且DDM Param选择FL2;分析血小板表型时,FSC,SSC,FL1,FL2,FL3等均以Log进行测量。5.放上待检测的样品,将流式细胞仪设定于RUN,流速可在HIGH 或LOW上。6.在Acquisiton Control对话框中,选取Acquire,开始获取细胞。在以下的仪器调整过程中随时选取Pause,Restart以观察调整效果。未完全调整好之前不要去掉SETUP前的“”。7.在Detectors/Amps对话框中,调整FSC和SSC探测器中的信号倍增度:PMT voltages(粗调)与Amp Gains(细调),使样品信号出现在FSC-SSC点图内,且三群细胞合理分布。8.在Threshold 对话框中选择适当的参数设定Threshold,并调整Threshold的高低,以减少噪音信号(细胞碎片)。一般做细胞表型时用FSC-H而做DNA时用FL2-H

  • 【云唐】atp测定仪的作用有哪些

    [img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/03/202403070918214602_9274_5604214_3.jpg!w690x690.jpg[/img]  ATP测定仪是一种广泛应用于生物学、医学、环境科学等领域的仪器,用于检测样品中三磷酸腺苷(ATP)的含量。ATP作为细胞内的能量“货币”,其含量与细胞的代谢活性、生物量、微生物污染等密切相关。因此,ATP测定仪在多个领域都有着重要的作用。  在生物学领域,ATP测定仪常被用于研究细胞的生长、分裂、代谢等过程。通过测定不同条件下细胞内的ATP含量,可以了解细胞的代谢活性、能量状态以及细胞损伤程度等信息。例如,在药物研究中,ATP测定仪可以用于评估药物对细胞代谢活性的影响,从而筛选出具有潜在疗效的药物。  在医学领域,ATP测定仪的应用也十分广泛。例如,在手术室中,医生可以利用ATP测定仪快速检测手术器械和手术区域的清洁程度,以确保手术过程的无菌性。此外,ATP测定仪还可以用于监测患者的免疫功能、感染程度以及肿瘤细胞的代谢活性等。通过监测患者体内的ATP含量,医生可以及时了解患者的病情变化情况,从而制定更加精准的治疗方案。  在环境科学领域,ATP测定仪同样发挥着重要作用。例如,在饮用水处理过程中,ATP测定仪可以用于检测水中的微生物污染情况。由于ATP是微生物细胞内的能量来源,因此ATP的含量与微生物的数量和活性密切相关。通过测定水中的ATP含量,可以及时发现潜在的微生物污染问题,从而采取相应的处理措施保障饮用水的安全性。  此外,ATP测定仪还在食品安全、农业生产等领域得到了广泛应用。在食品安全领域,ATP测定仪可以用于检测食品表面的微生物污染情况,以及评估食品的卫生质量。在农业生产中,ATP测定仪可以用于检测土壤中的微生物生物量、活性以及植物根系的代谢活性等,从而为农业生产和土壤改良提供科学依据。  总之,ATP测定仪作为一种重要的分析仪器,在多个领域都有着广泛的应用。通过快速、准确地检测样品中的ATP含量,ATP测定仪为生物学、医学、环境科学等领域的研究提供了有力的支持,为保障人类健康、促进科技进步作出了重要贡献。随着科学技术的不断发展,ATP测定仪将在更多领域发挥其独特的作用,为人类社会的可持续发展贡献力量。

  • 还原糖测定仪有什么用

    还原糖测定仪有什么用

    还原糖测定仪是一种用于测量食品、生物样本或其他物质中还原糖(如葡萄糖、果糖等)含量的仪器。还原糖是一类能够还原氧化剂的糖类,具有重要的生物学和食品学意义。还原糖测定仪的主要用途如下:  食品分析: 还原糖测定仪在食品工业中用于测量食品样品中的还原糖含量,如果汁、蜂蜜、糖果等。这有助于确定食品的甜味程度,评估食品的质量和口感,并进行食品配方和加工控制。  饮料生产: 饮料行业经常使用还原糖测定仪来监测饮料中的糖分含量,以确保产品的口味一致性和质量。  食品营养分析: 在食品营养分析中,还原糖测定仪可以用于测量食品中的糖分含量,为食品的营养信息提供数据基础。  生物学研究: 在生物学和生物化学研究中,还原糖测定仪可以用于测量细胞培养基、生物样本中的葡萄糖等还原糖的含量。这有助于研究细胞代谢、能量产生等生物过程。  医学应用: 还原糖测定仪在医学诊断中也有应用,如血糖测定。医疗人员可以使用这些仪器来测量血液样本中的葡萄糖含量,用于糖尿病的监测和诊断。  生产过程控制: 在食品生产和相关工业中,还原糖测定仪可以用于生产过程控制,确保产品在生产过程中的糖分含量符合规定。  总之,还原糖测定仪在食品工业、食品营养分析、生物研究和医学诊断等领域都有重要的应用。它们能够快速、准确地测量还原糖含量,为品质控制、研究和诊断提供必要的数据支持。[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/09/202309010953010897_3417_5604214_3.jpg!w690x690.jpg[/img]

  • 【金秋计划】片仔癀通过调节肠道菌群和记忆调节性T细胞减轻刀豆球蛋白A诱导的自身免疫性肝炎

    [b][size=15px][color=#595959]自身[/color][/size][size=15px][color=#595959]免疫[/color][/size][size=15px][color=#595959]性肝炎(AIH)[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]是一种以淋巴细胞浸润和自身抗体产生为特征的界疾病,然而其病因尚不清楚。有研究发现,在AIH患者的外周血中维持免疫稳态的必需因子调节性T (mTreg)细胞的频率降低,表明Treg细胞数量不足和Treg细胞功能异常可能在AIH的发病过程中起重要作用。AIH的治疗通常采用高剂量的类固醇以抑制免疫系统。有研究表发现,复合益生菌可调节[b]肠道菌群[/b]和肠道通透性,降低辅助性T细胞1型(Th1)和Th17细胞水平,提高Treg细胞水平,抑制[b]TLR4/核因子-κB (NF-κB)通路[/b]的激活,调节AIH的发生。因此,对于AIH患者,Treg细胞与肠道微生物群的相互作用可能提供一种可行的治疗策略。[/color][/size][size=15px][color=#595959]中药常用[b]片仔癀(PTH)[/b]含有牛黄、麝香、三七、蛇胆等成分,常用于治疗肝脏疾病,包括AIH。研究发现,PTH通过控制NF-κB信号通路和NLRP3炎性小体,减少血液中IL-1、IL-6和IL-17的产生,减轻胶原性[/color][/size][b][size=15px][color=#595959]关节炎[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]小鼠的关节炎症。然而,PTH治疗AIH的确切机制尚不完全清楚。[/color][/size][align=center] [/align] [size=15px][color=#595959]通过测定AIH小鼠肠道菌群结构和[b]记忆调节性T (mTreg)细胞[/b]功能水平的变化,探讨PTH在AIH小鼠模型中的作用机制。[/color][/size] [align=center] [/align] [size=15px][color=#595959]给予PTH预防10 d后,用刀豆球蛋白A(Con A)诱导AIH小鼠模型。流式细胞术检测小鼠mTreg细胞水平,16S rRNA分析小鼠肠道菌群,western blotting检测[b]toll样受体(TLR)2、TLR4/核因子-κB (NF-κB)和CXCL16/CXCR6信号通路[/b]的激活情况。[/color][/size] [align=center] [/align] [size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959]PTH减轻AIH小鼠肝脏病理损伤,降低辅助性T - 17细胞数量和干扰素-γ、[/color][/size][b][size=15px][color=#595959]肿瘤[/color][/size][size=15px][color=#595959]坏死[/color][/size][size=15px][color=#595959]因子[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]- α、白细胞介素(IL)-1β、IL-2、IL-6、IL-21的表达。同时,[b]PTH刺激有益菌的丰度[/b],促进TLR2信号的激活,从而增加Treg/mTreg细胞数量产生IL-10,抑制TLR4/NF-κB和CXCL16/CXCR6信号通路的激活。[/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size] [align=center] [/align] [b][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959]PTH调节肠道菌群平衡,恢复mTreg细胞,减轻实验性AIH,与TLR/CXCL16/CXCR6/NF-κB信号通路密切相关[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]。这些发现提示PTH可能通过平衡肠道菌群,干扰mTreg细胞调节Treg细胞分化,是AIH的一种天然替代疗法。[/color][/size]

  • 全自动还原糖测定仪应用范围

    全自动还原糖测定仪应用范围

    [size=16px]  全自动还原糖测定仪是一种用于测定食品、饲料、生物样品等中还原糖含量的仪器。它通过化学分析方法,测量样品中还原糖的浓度,广泛应用于食品工业、生物化学、医药等领域。其应用范围包括但不限于以下几个方面:  食品工业: 在食品生产中,全自动还原糖测定仪可以用来监测和控制食品中的糖分含量,包括糖果、巧克力、饼干、饮料等。这有助于确保产品的质量、口感和风味的一致性。  饲料工业: 在饲料生产中,全自动还原糖测定仪可以用来分析饲料中的糖分含量,帮助饲料生产商制定合适的饲料配方,以满足不同动物的营养需求。  生物化学研究: 在生物化学研究中,全自动还原糖测定仪可以用来测定细胞培养基、培养物中的糖分含量,从而研究细胞代谢和生长过程。  医药领域: 全自动还原糖测定仪在药物研发和生产中也有应用,用于监测药物中的糖含量,以确保药品的质量和稳定性。  环境监测: 在环境监测中,全自动还原糖测定仪可以用于测定水体、土壤等样品中的还原糖含量,从而了解环境中有机物的分布和污染情况。  农产品质量检测: 在农产品质量检测中,全自动还原糖测定仪可以用来测定水果、蔬菜等农产品中的糖分含量,以指导采摘和销售。  总之,云唐全自动还原糖测定仪在食品、饲料、生物化学、医药等领域的应用范围十分广泛,有助于实现精确的糖分分析,从而保障产品质量和研究成果的准确性。[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/08/202308301629258474_7582_6098850_3.png!w690x690.jpg[/img][/size]

  • 【原创大赛】【流式细胞仪系列之三】谱图解析

    【原创大赛】【流式细胞仪系列之三】谱图解析

    流式细胞仪测试的结果,在仪器内是标明荧光强度,前向角散射光强度,侧向角散射光强度,或其他参量的电压值或电流值。本特利微生物测定仪的样品经过染色后,被液流系统送到样品室,激光照射染色后的样品溶液后产生荧光,被检测器光电倍增管检测,将光信号转化为电信号,通过数模转换在计算机上存储结果,数据以CSV格式存储在c/data文件夹下。 一个数字文件,有易于加工处理和分析的优点,但通常缺乏直观性,如能用一组图形来表明各个参量的相互关系,对操作者来说更为直观。本特利流式细胞仪数据的显示为单参数直方图(histogram)和二维点图(dot plot)两种。 微生物测定仪有三个谱图,见图1。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/12/201412251429_528941_2648817_3.jpg图1仪器显示谱图1、脉冲高度图(pulseheight/intensity)http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/12/201412251430_528942_2648817_3.jpg图2 脉冲高度图 脉冲高度图以脉冲高度为横坐标,细胞数量为纵坐标作图。2、脉冲宽度图(pulsewidth/duration)http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/12/201412251430_528943_2648817_3.jpg图3 脉冲宽度图 脉冲高度图以脉冲高度为横坐标,细胞数量为纵坐标作图。3、二维点图(dot plot)http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/12/201412251430_528944_2648817_3.jpg图4 二维点图 单参数直方图的限制是:只能表明一个参数与细胞数量间的关系,不能显示两个独立参数与细胞的关系。当需要研究两个或更多测定量关系时,可采用二维点图的显示方式。 在图1中,我们可以把二维点图和对应的直方图都画在一起。点图横坐标表示脉冲高度(height),纵坐标表示脉冲宽度(width)。二维点图上每个点代表一个细胞,每个点与横坐标的距离表示该点的脉冲高度,每个点与纵坐标的距离表示该点的脉冲宽度。 绘制全部细胞群体的脉冲高度图,即图2中的脉冲高度图,同理绘制脉冲宽度图。我们可以由点图得到两个直方图,但由两个直方图无法反演成一个二维点图,这说明一个点图所携带的信息量大于两个直方图所携带的信息量。 从三个谱图的坐标位置,我们很明显能看出三者之间的关系。4、软件中的设置及结果显示http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/12/201412251430_528945_2648817_3.jpg图5 软件设置积分起始位置 选择TOOLS-OPTIONS-CALIBRATION,可以看出脉冲高度积分范围设置和脉冲宽度的积分范围设置。 对于以上三个图而言,最终的结果为脉冲高度的积分面积来表示。所以,其样品的测试结果严重依赖于积分范围,尤其是积分的起始位置。仪器上设置的积分起始位置为0.4。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/12/201412251430_528946_2648817_3.jpg图

  • 【讨论】FCM试验者请进

    论坛里有从事FCM(流式细胞仪)的工作者吗?最近我在进行淋巴细胞亚群分类,中间遇到些问题,想跟有经验者请教一下。

  • 不同的创新 满足不同的需求——5款新型流式细胞仪选购比较

    由于近期苹果联合创始人乔布斯的逝世,创新又再次成为了热点,这位梦想家用他的创造力和想象力重新诠释了创新的涵义,那就是以“用户体验”至上,追求完美。针对更高的需求,才会有更多的创新。创新精神遍及各个行业和各种产品,近年来流式细胞仪研发领域也不乏创新的产品,比如原理创新,操作创新,成像创新等,这些不同的创新,能满足不同的用户需求。流式细胞分析技术在现代细胞分子生物学研究中起着越来越重要的作用,这种分析技术是通过对单个细胞性状的快速测定,并结合先进的计算机分析系统,使得在短时间内可对大量细胞进行定性、定量测定。但以往进行流式细胞仪操作和分析需要技术熟练的研究团队,而且这一设备价值也不菲——起码也要10万美元,有些甚至达到50万美元,这对于许多实验室来说并不容易负担。近年来一些主流生物技术企业相继推出了新型流式细胞仪,不单将原本需要一支工程师队伍进行安装的大型设备压缩成为可以单人运送的紧凑型仪器,并让这一原本需要专人专业培训才能上手的复杂技术变得更加容易操作,而也价格也更加实惠——目前的流式细胞仪分析系统设置大部分都是自动化的,相关试剂盒也经过了多次验证,简化了操作,降低了入门门槛。一些大型的公司,比如Sony和BD加大了研发力度,开发出了10万美元以下的流式细胞仪,在美国其客户群开始由中心实验室转向了个人实验室。虽然简化了操作,但是这些新型的流式细胞仪也不是说就能立即上手的,用户在购买之前要弄清楚这一技术到底能做什么,不能做什么,有时实验室购买了流式细胞仪后觉得又不适用了,这样即浪费资源,也耽误时间,因此了解自己需要什么,了解不同仪器的优缺点十分重要。以下是目前市面上较受关注的几个新型流式细胞仪,通过分析它们的优点和缺点,也许您在选购的时候就更有目的性了。以上为转贴,版主如觉得不妥可删除

  • 细胞周期的测定原理与操作步骤

    一、原理细胞周期指细胞一个世代所经历的时间。从一次细胞分裂结束到下一次分裂结束为一个周期。细胞周期反应了细胞增殖速度。单个细胞的周期测定可采用缩时摄影的方法,但它不能代表细胞群体的周期,故现多采用其他方法测群体周期。测定细胞周期的方法很多,有同位素标记法、细胞 计数法等,这里介绍一种利用BrdU渗入测定细胞周期的方法。BrdU(5-溴脱氧尿嘧啶核苷)加入培养基后,可做为细胞DNA复制的原料,经过两个细胞周期后,细胞中两条单链均含BrdU的DNA将占l/2,反映在染色体上应表现为一条单体浅染。如经历了三个周期,则染色体中约一半为两条单体均浅染,另一半为一深一浅。细胞 如果仅经历了一个周期,则两条单体均深染。计分裂相中各期比例,就可算出细胞周期的值。http://img.dxycdn.com/trademd/upload/asset/meeting/2013/08/27/A1377590583.jpg二、仪器、用品与试剂1. 仪器、用品:同常规细胞培养2. 试剂:BrdU(1.0 mg/ml),甲醇、冰醋酸,Giemsa染液,秋水仙素,2×SSC液三、操作步骤1. 细胞生长至指数期时,向培养液中加入BrdU,使最终浓度为10 μg/ml。2. 44小时加秋水仙素,使每ml中含0.1 μg。3. 48小时后常规消化细胞至离心管中,注意培养上清的漂浮细胞也要收集到离心管中。4. 常规染色体制片。5. 染色体玻片置56 ℃水浴锅盖上,铺上2×SSC 液,距紫外灯管6 cm处紫外照射30分钟。6. 弃去2×SSC液,流水冲洗。7. Giemsa液染色10分钟,流水冲洗,晾干。8. 镜检100个分裂相,计第一、二、三、四细胞期分裂指数。9. 计算:细胞 周期(Tc)=48/(小时)附:(1)BrdU配制: BrdU 10 mg十双蒸水10ml 4 ℃下避光保存。(2)2×SSC配制: NaCl 1.75克,柠檬酸三钠,2H2O 0.88克,加水至100 ml,4 ℃保存。

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