微生物数量检测

请教：除了用平板计数法检测微生物的数量外，分光光度计能否检测出微生物的数量？

我们污水厂以前不做微生物检测，大肠杆菌和菌落都不检测，可是最近领导买来一个生物显微镜，说是让我看生化池里的微生物培养的情况，样品是活性污泥，让我看污泥里都有什么微生物？数量是多少？请问坛友们，我应该怎样操作呀？

目前用于环境样品微生物检测的手段有ELISA法，胶体金试纸法，PCR法，但如何有效的区分微生物种类与数量，以及活菌死菌始终是一个问题，大家针对微生物的检测来发表下自己的高见。

RT，实验室要进行饮用水水质微生物指标检测(主要检测菌落总数，总大肠菌群，耐热大肠菌群，大肠埃希氏菌），查看标准GB/T 5750-2006微生物检测部分，只能确定所用仪器及试剂的名称，但数量和规格对于我这个门外汉来说根本无法确定。求大拿给予指点，让俺定下型号规格和数量，另外，标准中有多种检测方法，对于小实验室来说，哪种标准更为合适？

[size=16px]　　atp测定仪适合检测哪些类型的微生物　　ATP测定仪是一种基于生物发光原理的快速检测仪器，通过测量样品中的ATP含量来评估微生物的活性水平。由于ATP是所有活细胞(包括微生物)的能量来源，因此ATP测定仪能够广泛应用于多种微生物的检测。　　具体来说，ATP测定仪适合检测的微生物类型包括但不限于：　　病原微生物：这是指那些能够引起疾病的微生物，例如大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等。这些微生物常常存在于食品、水源和环境中，对人体健康构成威胁。ATP测定仪能够快速检测这些病原微生物的存在，有助于及时采取防控措施。　　环境微生物：环境中的微生物种类繁多，包括细菌、真菌、病毒等。ATP测定仪可以用于评估环境样本(如土壤、水体、空气等)中的微生物污染程度，为环境监测和治理提供数据支持。　　食品微生物：食品中的微生物污染是食品安全领域的重要问题。ATP测定仪可以检测食品样品中的微生物活性，包括菌落总数、大肠菌群、霉菌和酵母等，从而评估食品的卫生状况和质量安全。　　需要注意的是，ATP测定仪检测的是ATP分子本身，而不是细胞数量或种类。因此，它更适用于快速评估样品中生物活性和细菌污染的程度，而不是用于鉴定具体的细菌种类。　　总的来说，ATP测定仪在多个领域都有广泛的应用，能够为微生物检测提供快速、准确的方法，有助于保障人们的健康和安全。[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/03/202403151354328485_5049_6098850_3.jpg!w690x690.jpg[/img][/size]

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1、拿样/取样拿样：已有人取好样品，放在一个固定的地方，检测员每天上班后，拿好一个干净的密闭容器，去把样品拿回实验室，期间必须防止样品被污染。取样：也叫抽样，需要自己去取/抽，去成品库取成品，去车间现场取半成品、接触面、非接触面、水、冰、内包袋、空气、辅料等。无菌取样，熟悉取样方法、流程，带好取样工器具，做好样品标识。取完样，放在干净密闭的容器，带回实验室，做好样品登记。2、无菌室灭菌 一般采用紫外灯灭菌。实验室前、后打开紫外灯照射30分钟。注意实验前关灯后30min方可进入室内工作。很多人分不清无菌室和超净工作台的使用和区别，本人理解：无菌室是用来做样品前增菌的，超净工作台是用来做致病菌分离和特征/可疑菌落的进一步验证的。3、配制培养基和相关试剂 现在用的干粉培养基较多，按照检测方法需要的培养基，采购回来就行；用过的厂家有：北京陆桥、青岛海博和广州环凯。按照样品数量配制相应的培养基，也可以多配点，放着冷藏保存，其有效期为7天。干粉培养基保质期一般是3年，开封后保质期为1年，但是使用的情况稀少。而配制培养基的水，我们一般选择单蒸水。 培养基一般选择湿热灭菌法，称量好干粉培养基，加入相应的单蒸水，搅拌溶解后分装，塞上瓶塞或试管塞，用报纸或牛皮纸包扎好，橡皮筋捆好，放入高压灭菌锅。现在有些实验室是手提式灭菌锅，其需要手动排气，人工计时，看压力表，比较累。 培养皿和吸管：一般选择干热灭菌，可我工作过的几个实验室，干燥箱基本是用来干燥的（使用温度高容易坏，灭菌时间太久不想等待），也可以不用外校。培养皿和吸管包扎好后，放入高压灭菌锅灭菌。 培养基、培养皿、吸管等，灭好菌后，需冷却；然后通过传递窗搬进无菌室。4、无菌室增菌 采样注意部位和代表性，一般采取可食部位，而致病菌采样部位视具体样品而定。为了注意交叉污染，现在一般采用拍打式均质器。5、做好标识 每个实验室标识最好是统一的做法，这样大家都能认识，把增菌好的试管和瓶子，通过传递窗拿到培养室放进相应的培养箱进行培养。6、整理无菌室 做完实验，需要把无菌室整理好，工器具摆好位置，台面做好清洁卫生。打开紫外灯灭菌30分钟。7、影响微生物检测结果的因素7.1人 上岗培训，熟悉检测方法；7.2机 仪器设备正常运行，定时维护保养；7.3料 材料正确，有效；7.4法 检测方法适合样品检测要求；7.5环 环境满足微生物检测要求。8、废弃物灭菌 实验后的培养基等废弃物，收集整理，放入灭菌袋内打包，经过121℃、30min灭菌后放到医疗废物收集桶内。

[font='Times New Roman'][font=宋体]国家药典规定必须对各工艺段的微生物指标进行检测，常规检测方法是做微生物培养，对菌落计数。该方法操作复杂，费时费力，不能保证实时在线和连续化生产的要求。[/font][/font][font=宋体][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/1p][color=#3333ff]近红外光谱[/color][/url]分析技术[/font][font='Times New Roman'][font=宋体]符合快速菌检的要求，采用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/1p][color=#3333ff]近红外光谱仪[/color][/url]可以对物料中的微生物进行扫描，由于微生物种类繁多，目前在细菌、霉菌的检测中已取得了较好的应用成果。由于样本中菌体数量跨度范围太大，从十几个到几千个，必须分段建立数学模型，通过先定性后定量的方式予以解决。定性判别样品菌体数量属于哪个数学模型，然后通过调用对应的数学模型预测具体的菌体数量，实现快速菌检。[/font][/font]

微生物检测，公司是否可以让另一家集团内公司（在同一楼办公）代做车间环境微生物检测（本公司无产品微生物检测要求），自己公司化验室无微生物检测设备和条件。这样是否合规和认可？有什么好方法解决。

1、技术路线以生物群落监测技术为主，以生物毒理学监测技术为辅，优先开展水环境生物监测，逐步拓展大气污染植物监测；巩固现有水生生物监测网，逐步健全全国流域生物监测网络，以达到通过生物监测手段说清环境质量变化规律的目的。2、项目和频次生物监测指标及频次水体 监测指标 监测项目 频次 备注 河流 底栖动物 种类、数量 2次/年 必测 大肠菌群 数量 6次/年 必测 着生生物 种类、数量 2次/年 选测 浮游植物 种类、数量 2次/年 选测 湖泊水库 叶绿素a 含量 2次以上/年 必测 浮游植物 种类和密度 2次以上/年 必测 大肠菌群 数量 6次/年 必测 底栖动物 种类、数量 2次/年 选测 城市水体 下列5种方法任选一种：1、鱼类急性毒性试验2、蚤类急性毒性试验3、藻类急性毒性试验4、发光细菌急性毒性试验5、微型生物群落级毒性试验 96小时死亡率48小时LC5096小时EC50抑光率 选测 环境空气 SO2 植物叶片中硫含量 2次/年 必测 叶绿素a和浮游植物可视具体情况增加频次，夏季水华易发季节，应加大监测频次，主要湖泊监测频次夏季不得低于1次/每月。对污染较重的水体，增加水体或底泥的生物毒性测试。3、方式方法水环境生物监测，以生物群落监测为主，针对不同的水体和监测的目的，采用不同的监测指标和方法。河流监测指标以底栖动物和总大肠菌群数监测为主，结合着生生物监测和浮游植物监测进行分析评价，河流水质评价采用Shannon多样性指数。湖泊、水库主要监视其富营养化情况，监测指标以叶绿素A、浮游植物为主要指标，结合底栖动物的种类、数量和大肠菌群进行分析。湖泊水质评价方法采用①Shannon多样性指数；②Margalef指数；③藻类密度标准（湖泊富营养化评价标准）。 大气环境生物监测，主要是对二氧化硫开展植物监测，监测指标为叶片中硫含量的分析。测试植物选择当地分布较广、对SO2具有较强吸附与蓄积能力的植物叶片。

声明：本人是做销售的，做试验不多，可能会有所偏差，欢迎高人指出。微生物检测一般分为常规菌检测和致病菌检测：常规菌检测的目的是一种指示菌，一般以CFU/ML来计量，比如总菌数和大肠菌群，这两个一般是用来评价食品被污染的程度，因为按常理，我们生活当中接触的致病菌还是相对较少的，而且人体本身也具有免疫功能，所以如果这两个指示菌如果不超标的话，我们就有理由相信该食品是相对安全的，注意：不是绝对安全。传统的检测方法也很简单，一般就是培养富集后计数，其大致流程是这样：1）取样，一般都是取25g样品加入到225ml的生理盐水中，取样方法会根据样品不同有所不同。比如肉制品，可以用剪刀剪碎。2）均质，要保证均质的力度不能太大，如果太大有可能损害样品中的微生物，有些检验人员可能就是用手捏一捏，甩一甩，也有用拍击式均质器的3）稀释，一般来说稀释3个梯度，10倍，100倍，1000倍，而且每个稀释梯度要倒两个平板。4）培养，把事先准备好的培养基（培养基的制备，一般要经过配比，高压灭菌等过程，当然也有配制好的商业培养基，进口的有MERCK，国产的也很多，比如陆桥）倒平板，然后划线培养或者涂抹均匀即可，只要保证尽量把含菌的稀释液涂抹开，不要有菌落重叠的现象，然后放入培养箱的进行培养，培养温度与所检测微生物不同而不同，比如大肠菌群是37度，粪大肠菌群要略高一点，具体多少，我也记得不是很清楚了5）计数，找一个比较容易计数的梯度进行计数，然后根据稀释倍数反推出样品中的微生物，计数说简单点就是数菌落的数量，如果你涂抹够开的话，每个培养前的微生物会长成一个菌落，所以个1个菌落就代表1个培养前的微生物。（说到这，我就想起我以前老是想，一个菌落是由很多个微生物组成的，光数菌落怎么会得出样品中微生物的个数呢？这就是没有考虑培养前与培养后的变化。^_^）常规菌大概就是这样啦，目前大多数检验单位都在使用这种传统的培养方法，其优点就是便宜，廉价，但是比较慢，如今市面上有很多总菌数和大肠菌群的快速商业方法，比如3M，他们在纸片上提供现成的培养基，只需把稀释液直接接种到培养基即可，相比较而言，节省了我们制备培养基的时间，不过貌似在培养时间上并没有缩短。还有检测培养基电导率方法来检测的，因为培养前，培养基都是大分子物质，这些物质的电导率相对较低，经过微生物代谢后，被分解为小分子物质，所以电导率急剧增加，通过建一个曲线来反推微生物的个数。致病菌的检测是不得检出的，所以要比常规菌要复杂，所耗时间更长，有可能还需要用没有选择性的培养基进行前增菌，然后再用选择性培养基进行增菌，如果有可疑菌落再挑取利用生化反应进行鉴定。比如沙门氏菌，检测流程大致如下：1）取样，同常规菌2）均质，同常规菌3）前增菌，先要用无选择性的培养基进行富集增菌，因为有可能样品中所含的沙门氏菌受伤，或较少，直接用选择性培养基培养的话，沙门氏菌不会生长，从而出现假阴性。4）增菌，用选择性的培养基进行培养，这样大部分的微生物在选择性的培养基上都不会生长，就如同过滤一样，如果长菌，根据菌落形态学来判断到底是否为可疑菌落，如果没有可疑菌落，可以判定为阴性，如果有，挑取并做生化反应鉴定是否是真的沙门氏菌5）做生化反应进行鉴定，这里就不说了，我也不太清楚，就知道有这个流程。这个方法其特点就是廉价，但是耗时极长，如果真是一个阳性样品可能需要1个星期的时间，所以市面上也很多快速的商业方法，一般都是利用免疫学的原来来检测，比如梅里埃的产品，还有ELISA的方法。上面只是简单介绍了一下微生物的检测方法，其他的我觉得都是大同小异，供大家参考！

乳粉微生物的检测 我们检测菌落总数、大肠菌群、霉菌、酵母菌、阪崎肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌 还用微生物检测B12、叶酸、游离生物素 现在我们检测菌落总数、大肠菌群、霉菌、酵母菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌偶尔用测试片做，测试片检测的结果还算可以 简单、方便、不污染 在做微生物的时候 每次消毒很彻底 却污染 有时候不彻底消毒 却不污染 微生物到底是一个什么样的东西呢？ 一个看不见 摸不到的东西 大家谈谈对微生物的检测和微生物的理解

摘要： 　　微生物的检测，无论在理论研究还是在生产实践中都具有重要的意义，本文分生长量测定法，微生物计数法，生理指标法和商业化快速微生物检测简要介绍了利用微生物重量，体积，大小，生理代谢物等指标的二十余种常用的检测方法，简要介绍了这些方法的原理，应用范围和优缺点。　　概述：　　一个微生物细胞在合适的外界条件下，不断的吸收营养物质，并按自己的代谢方式进行新陈代谢。如果同化作用的速度超过了异化作用，则其原生质的总量（重量，体积，大小）就不断增加，于是出现了个体的生长现象。如果这是一种平衡生长，即各细胞组分是按恰当的比例增长时，则达到一定程度后就会发生繁殖，从而引起个体数目的增加，这时，原有的个体已经发展成一个群体。随着群体中各个个体的进一步生长，就引起了这一群体的生长，这可从其体积、重量、密度或浓度作指标来衡量。微生物的生长不同于其他生物的生长，微生物的个体生长在科研上有一定困难，通常情况下也没有实际意义。微生物是以量取胜的，因此，微生物的生长通常指群体的扩增。微生物的生长繁殖是其在内外各种环境因素相互作用下的综合反映。因此生长繁殖情况就可作为研究各种生理生化和遗传等问题的重要指标，同时，微生物在生产实践上的各种应用或是对致病，霉腐微生物的防治都和他们的生长抑制紧密相关。所以有必要介绍一下微生物生长情况的检测方法。既然生长意味着原生质含量的增加，所以测定的方法也都直接或间接的以次为根据，而测定繁殖则都要建立在计数这一基础上。微生物生长的衡量，可以从其重量，体积，密度，浓度，做指标来进行衡量。　　生长量测定法　　体积测量法：又称测菌丝浓度法。　　通过测定一定体积培养液中所含菌丝的量来反映微生物的生长状况。方法是，取一定量的待测培养液（如10毫升）放在有刻度的离心管中，设定一定的离心时间（如5分钟）和转速（如5000 rpm），离心后，倒出上清夜，测出上清夜体积为v，则菌丝浓度为（10-v）/10。菌丝浓度测定法是大规模工业发酵生产上微生物生长的一个重要监测指标。这种方法比较粗放，简便，快速，但需要设定一致的处理条件，否则偏差很大，由于离心沉淀物中夹杂有一些固体营养物，结果会有一定偏差。　　称干重法：　　可用离心或过滤法测定。一般干重为湿重的10-20%。在离心法中，将一定体积待测培养液倒入离心管中，设定一定的离心时间和转速，进行离心，并用清水离心洗涤1-5次，进行干燥。干燥可用烘箱在105℃或100℃下烘干，或采用红外线烘干，也可在80℃或40℃下真空干燥，干燥后称重。如用过滤法，丝状真菌可用滤纸过滤，细菌可用醋酸纤维膜等滤膜过滤，过滤后用少量水洗涤，在40℃下进行真空干燥。称干重发法较为烦琐，通常获取的微生物产品为菌体时，常采用这种方法，如活性干酵母（activity dry yeast, ADY）,一些以微生物菌体为活性物质的饲料和肥料。　　比浊法：　　微生物的生长引起培养物混浊度的增高。通过紫外分光光度计测定一定波长下的吸光值，判断微生物的生长状况。对某一培养物内的菌体生长作定时跟踪时，可采用一种特制的有侧臂的三角烧瓶。将侧臂插入光电比色计的比色座孔中，即可随时测定其生长情况，而不必取菌液。该法主要用于发酵工业菌体生长监测。如我所使用UNICO公司的紫外-可见分光光度计，在波长600nm 处用比色管定时测定发酵液的吸光光度值OD600，以此监控E.Coli的生长及诱导时间。　　菌丝长度测量法：　　对于丝状真菌和一些放线菌，可以在培养基上测定一定时间内菌丝生长的长度，或是利用一只一端开口并带有刻度的细玻璃管，到入合适的培养基，卧放，在开口的一端接种微生物，一段时间后记录其菌丝生长长度，借此衡量丝状微生物的生长。微生物计数法　　血球计数板法:　　血球计数板是一种有特别结构刻度和厚度的厚玻璃片，玻片上有四条沟和两条嵴，中央有一短横沟和两个平台，两嵴的表比两平台的表面高0.1 mm，每个平台上刻有不同规格的格网，中央0.1 mm2面积上刻有400个小方格。通过油镜观察，统计一定大格内微生物的数量，即可算出1毫升菌液中所含的菌体数。这种方法简便，直观，快捷，但只适宜于单细胞状态的微生物或丝状微生物所产生的孢子进行计数，并且所得结果是包括死细胞在内的总菌数。　　染色计数法：　　为了弥补一些微生物在油镜下不易观察计数，而直接用血球计数板法又无法区分死细胞和活细胞的不足，人们发明了染色计数法。借助不同的染料对菌体进行适当的染色，可以更方便的在显微镜下进行活菌计数。如酵母活细胞计数可用美蓝染色液，染色后在显微镜下观察，活细胞为无色，而死细胞为蓝色。　　比例计数法：　　将已知颗粒（如霉菌孢子或红细胞）浓度的液体与一待测细胞浓度的菌液按一定比例均匀混合，在显微镜视野中数出各自的数目，即可得未知菌液的细胞浓度。这种计数方法比较粗放。并且需要配制已知颗粒浓度的悬液做标准。　　液体稀释法：　　对未知菌样做连续十倍系列稀释，根据估计数，从最适宜的三个连续的10倍稀释液中各取5毫升试样，接种1毫升到3组共15只装培养液的试管中，经培养后记录每个稀释度出现生长的试管数，然后查最大或然数表MPN（most probably number）得出菌样的含菌数，根据样品稀释倍数计算出活菌含量。该法常用于食品中微生物的检测，例如饮用水和牛奶的微生物限量检查。　　平板菌落计数法：　　这是一种最常用的活菌计数法。将待测菌液进行梯度稀释，取一定体积的稀释菌液与合适的固体培养基在凝固前均匀混合，或将菌液涂布于已凝固的固体培养基平板上。保温培养后，用平板上出现的菌落数乘以菌液稀释度，即可算出原菌液的含菌数。一般以直径9cm的平板上出现50-500个菌落为宜。但方法比较麻烦，操作者需有熟练的技术。平板菌落计数法不仅可以得出菌液中活菌的含菌数，而且同时将菌液中的细菌进行了一次分离培养，获得了单克隆。　　试剂纸法：　　在平板计数法的基础上，发展了小型商品化产品以供快速计数用。形式有小型厚滤纸片，琼脂片等。在滤纸和琼脂片中吸有合适的培养基，其中加入活性指示剂2，3，5-氯化三苯基四氮唑（TTC，无色）待蘸取测试菌液后置密封包装袋中培养。短期培养后在滤纸上出现一定密度的玫瑰色微小菌落与标准纸色板上图谱比较即可估算出样品的含菌量。试剂纸法计数快捷准确，相比而言避免了平板计数法的人为操作误差。　　膜过滤法：　　用特殊的滤膜过滤一定体积的含菌样品，经丫叮橙染色，在紫外显微镜下观察细胞的荧光，活细胞会发橙色荧光，而死细胞则发绿色荧光。　　生理指标法：　　微生物的生长伴随着一系列生理指标发生变化，例如酸碱度，发酵液中的含氮量，含糖量，产气量等，与生长量相平行的生理指标很多，它们可作为生长测定的相对值。测定含氮量：　　大多数细菌的含氮量为干重的12.5%，酵母为7.5%，霉菌为6.0%。根据含氮量×6.25，即可测定粗蛋白的含量。含氮量的测定方法有很多，如用硫酸，过氯酸，碘酸，磷酸等消化法和Dumas测N2气法。Dumas测N2气法是将样品与CuO混合，在CO2气流中加热后产生氮气，收集在呼吸计中，用KOH吸去CO2后即可测出N2的量。　　测定含碳量：　　将少量（干重0.2-2.0 mg）生物材料混入1毫升水或无机缓冲液中，用2毫升2%的K2Cr2O7溶液在100 0C下加热30分钟后冷却。加水稀释至5毫升，在580nm的波长下读取吸光光度值，即可推算出生长量。需用试剂做空白对照，用标准样品做标准曲线。　　还原糖测定法：[/si

(二)泌尿系统感染病原菌的快速检测　　因泌尿系统感染的中段尿样本中的细菌量相对很高, 中段尿样本也是MALDI-TOF MS直接检测的理想选择[30], 并且常常是单一菌种感染, 避免了MALDI-TOF MS在鉴定混合菌样本的不足[31]。泌尿系统感染是人类常见的感染性疾病, 临床泌尿系统感染最常见的病原菌为大肠埃希菌(70%~95%)、腐生葡萄球菌(5%~10%)以及其它肠杆菌科细菌, 如奇异变形杆菌和肺炎克雷伯菌。有研究表明MALDI-TOF MS对尿液样本中这些细菌的鉴定效率和准确率要优于传统鉴定方法和其他鉴定系统[7, 32, 33]。1.鉴定效能 FERREIRA等[7]选取尿液中细菌大于1× 105 cfu/mL的样本进行直接的MALDI-TOF MS鉴定, 结果显示尿液样本经过差速离心法处理后, 可将91.8%的菌株鉴定到种、92.7%的菌株鉴定到属的水平。　　杨溪等[33]使用MALDI-TOF MS技术对临床收集到的1 040份尿液样本进行直接快速检测, 共鉴定出含细菌的样本526份, 其中尿细菌培养菌落数≥ 1× 105 cfu/mL, 培养出1种/2种菌的尿液样本MALDI-TOF MS的直接鉴定率分别为92.7%(430/464)和75%(96/128)。MALDI-TOF MS直接检测法的鉴定结果与尿细菌培养法鉴定出的细菌菌种一致, 符合率为100%。2.与流式细胞术联用 怀疑泌尿系统感染的尿液样本一般经离心后取沉淀直接进行检测, 但考虑到临床上有60%~80%的尿液样本是阴性的, 为了减少分析的时间和人工的工作量, 有学者将MALDI-TOF MS与流式细胞术联用检测, 用流式细胞术筛除细菌数量不足的尿液样本, 而MALDI-TOF MS用来检测筛选结果为阳性的尿液样本, 取得了良好的鉴定效果[34, 35]。MARCH ROSSELLó 等[34]建立了这样一种微生物鉴定程序:先用流式细胞仪进行菌落计数筛查出单一细菌阳性的尿液样本, 然后再进行MALDI-TOF MS检测, 发现细菌数在1× 107 cfu/mL时是足够的细菌浓度, 有87.5%的敏感性, 而细菌数在(1× 105)~(1× 107)cfu/mL之间的样本经过4 h的预增菌, 得到用于分析的足够的细菌数量后, 可以达到91.7%的敏感性。3.细菌含量对鉴定结果的影响 由于中段尿中病原菌数 2.0), 而随着样本中细菌数的降低, 鉴定成功的比例和鉴定分数也在下降, 当菌落数 1× 104 cfu/mL的中段尿样本, 应用MALDI-TOF MS直接检测即可取得满意的鉴定效果。4.中段尿样本直接检测的新方法 DEMARCO等[31]近期描述了一种透析过滤的方法, 通过脱盐、分馏、富集等步骤对100例阳性尿液样本在MALDI-TOF MS分析前进行了预处理, 实验结果表明这种预处理方法能够正确地鉴定阳性尿液样本, 并且正确分类了所有临床相关菌尿症的阴性尿液样本, 包括一组污染的尿液样本和一组临床上无关紧要的定植菌。敏感性和特异性分别是67%和100%。5.中段尿样本直接检测的不足之处 与直接检测培养阳性的血样本一样, 对于含有2种或2种以上细菌感染的中段尿样本, MALDI-TOF MS常常表现为鉴定能力不足[33, 35] 尿液蛋白质如α -防御素[8]会造成鉴定结果不能正确匹配数据库 对酵母菌的鉴定能力也有待于进一步提高 对于核糖体蛋白序列差异很小的菌种也常常不能区分。(三)其它无菌体液　　MALDI-TOF MS直接检测和鉴定其它无菌体液样本如脑脊液、胸腹水和关节液等中细菌的报道尚不多。NYVANG HARTMEYER等[37]首次报道了通过直接将脑脊液样本离心取上清直接进行MALDI-TOF MS分析, 肺炎链球菌性脑膜炎可以在30 min内做出诊断, 为后续治疗方案的选择和结果的解释提供了重要的参考依据。SEGAWA等[38]也用同样的方法对一例肺炎克雷伯菌引起的脑膜炎做出了诊断, 但同时也指出在实际应用中能获得的样本量少, 细菌数少可能会限制它的应用。另外, 还可将无菌体液样本转移到血培养瓶中进行孵育, 待报阳后进行检测也是可行的。有研究应用MALDI-TOF MS检测了46份液体, 包括移植养护液、关节液、深部脓疱样本、骨小孔样本用血培养基孵育, 发现44/46(96%)能鉴定到种的水平, 余下的2份被鉴定到属的水平[18]。四、总结与展望　　MALDI-TOF MS是一种简单、快速、高通量和高效的微生物鉴定手段, 在临床样本直接检测方面较传统的鉴定方法具有更大的优势, 能显著降低样本检测的周转时间和成本, 但尚存在着一些不足之处, 主要表现在:(1)MALDI-TOF MS在检测和鉴定细菌方面的敏感性还不高, 不能直接鉴定患者血样本中的病原菌(细菌数量太少) (2)对于一些核糖体蛋白差异较小的细菌用其辨别有较大的困难 (3)目前的研究都有各自不同的操作过程, 在样本处理、质谱图采集和分析等方面没有统一的标准, 可能会影响分析结果在实验室内和实验室间的可重复性 (4)标准的鉴定参考图谱数据库尚不够完善, 需要进一步拓展 (5)对一些细胞壁难以破坏的细菌(如革兰阳性菌、酵母菌)和混合菌等的鉴定能力还不够高。但是相信随着更加有效的样本预处理方法、更加严格的检测过程控制和更高分辨率的图像处理技术的实现, MALDI-TOF MS用于直接检测临床样本中的微生物会有更广阔的前景。

[align=left]文/姜文生（华测检测 食药农化事业部）[/align][align=left] 食品微生物检测是运用微生物学的理论与方法，检验食品中微生物的种类、数量、性质及其对人的健康的影响，以判别食品是否符合质量标准的检测方法。食品微生物检验是贯彻"预防为主"的方针，可以有效地防止或者减少食物人畜共患病的发生，保障人民的身体健康。食品微生物检验是衡量食品安全的重要指标之一，也是判定被检食品是否食用的科学依据之一。为了提高微生物检测的工作质量，保证检测结果的真实、准确，实验室需要加强微生物检测的质量控制工作。[/align] 为了保证微生物检验结果的准确性和可靠性，微生物实验室必须建立完整的质量控制体系，充分考虑到影响检验结果的因素并加以控制，提高微生物检验工作的质量。影响检测结果的主要因素包括如下部分：[b]1 人员[/b]与理化领域检测相比较，微生物检测更依赖工作人员的认知能力，因此，微生物检测人员应具有相应的微生物专业教育或培训经历，具备相应的资质和能力，能够正确理解标准并正确的实施检验，掌握实验室生物[s]检验[/s]安全操作知识和消毒知识；在检验过程中能遵守相关安全措施的规定，确保自身安全；有颜色视觉障碍的人员是不能参与涉及辨色的实验的；微生物检测人员要求数量要充足，要有一定的学习能力，正确的工作态度和强的责任心。人员管理上首先要识别岗位的需求，招聘合适的人员，对人员进行管理要求和相应专业知识的培训及考核评价，对其能力进行确认后，进行授权及上岗，工作期间，要对其的专业知识和技术的持续能力进行确认，所有记录均需要归入人员的技术档案中。[b]2 设备[/b]实验设备应满足检测工作的需要。设备所处环境适宜，便于维护、清洁、消毒与校准，并保持整洁与良好的工作状态；定期进行检查、检定（加贴标识）、维护和保养，以确保工作性能和操作安全。日常的监控和使用要有记录。避免起因于仪器的交叉污染，适当的时候对所使用的仪器设备和重复使用的玻璃器具进行清洁和灭菌。设备管理除上述要求外，还要求设备有相应的管理制度和操作的作业指导书，授权操作，并建立设备档案。2.1 常用主要设备日常管理中注意的事项如下：l 高压灭菌锅：要定期校准，关注时间和温度是否满足要求；[s]按照规定期限[/s]进行灭菌效果的验证，验证的方式有生物指示剂和化学指示剂两种。l 超净工作台：要定期进行校准，关注气流，紫外强度是否满足要求；按照规定的期限采用平板沉降法等方式进行微生物的检测，采用紫外辐照计对紫外灯辐照强度是否满足要求进行检测。l 生物安全柜：要定期进行校准，关注气流，紫外强度是否满足要求；除按照超净台的要求进行日常的监控外，还要定期更换滤网，确保设备运行的有效。2.2 标准菌株管理标准菌株作为微生物检测特殊的一类设备，需要进行严格的管控，双人双锁进行管理，确保可溯源，应有文件化的程序管理标准菌种（原始标准菌种、标准储备菌株和工作菌株），涵盖菌种申购、保管、领用、使用、传代、存储等诸方面，确保溯源性和稳定性。每一支标准菌种都应以适当的标签、标记或其它标识方式来表示其名称、菌种号、接种日期和所传代数，要定期进行期间核查，核查的指标包括：存活性、纯度、检验关键诊断指标等。根据标准菌株的危害级别，分别于相应级别的生物安全实验室进行操作，废弃时需要进行灭活处理。标准菌株的基本作用如下：a)用于实验室的内部质量控制，证明结果的准确性；b)证实方法的有效性，评价检测方法的准确度；c)用于培养基及试剂的验收；d）制备实验室的内部质控样品。[b]3 培养基和试剂耗材[/b]实验室要有培养基和试剂耗材进行验收、接受/拒收和贮存的程序和标准，对每一批新购入的培养基和试剂耗材进行验收，确保其在检测过程中满足检验的要求。具体的验收方法依据GB 4789.28-2013《食品安全国家标准 食品微生物学检验 培养基和试剂的质量要求》进行；对于检测过程中所使用的培养基及相关试剂、质控材料等要建立相应的台账，记录批号、实验室接收日期及投入使用的日期等，确保试剂耗材的先进先出。[b]4 检测标准和方法[/b]微生物检测选择方法的优先顺序为：a)客户指定的方法；b)法律法规规定的标准方法；c)国家标准、国际标准；d)行业标准、地方标准、标准化主管部门备案的企业标准；e)非标方法、允许偏离的标准方法。无论选择那种方法进行检测，在使用前均需要进行方法验证和确认，通过人员培训和能力确认、设备配备、培养基、环境条件等方面的确认，阳性对照等模拟样品的检测，确保采用的方法能够正确的在实验室得以实施。[b]5 环境要求[/b]实验室的工作面积和总体布局应能满足从事检验工作的需要，实验区域应与办公区域明显分开，布局应采用单方向工作流程，避免交叉污染和影响检验结果的准确性；实验室内环境的温度、湿度、照度、噪声和洁净室等应符合工作要求；食品样品检验应在洁净区域进行，洁净区域应有明显的标识，洁净室的评价可参考GB 50333-2002《医院洁净手术室建筑技术规范》和GB 50687-2011《食品工业洁净用房建筑技术规范》的要求。病原微生物分离鉴定工作应在二级以上生物安全实验室（Biosafety level 2,BSL-2）进行，避免对人员造成的伤害；生物安全二级实验室的评价可依据GB 50346-2004《生物安全实验室建筑技术规范》要求进行；要定期通过空气沉降和表面擦拭等方法，对洁净室和生物安全实验室的洁净度进行监控并记录。[b]6 测试过程的要求[/b]6.1 样品采集和交接样品采集时必须无菌操作，避免杂菌污染。盛装检样的容器要确保洁净无菌，避免破碎，确保安全。采集完毕后需对样品进行标识，注明样品信息，编号等关键信息；并在规定的时间内（一般不超过3～4h）送达实验室，有特殊运输要求的样品需按照要求进行运送。样品交接时，样品接收人员要核对样品的数量和状态是否满足要求，[s]样品[/s]满足要求的，样品接收人员方可在样品交接单上签字，同时进行[s]检样[/s]登记。不满足要求的样品必须拒收并予以记录。6.2 检测过程的控制微生物检测过程开始前，要对洁净区进行消毒灭菌，培养基要进行充分的灭菌，所用的器材，必须清洁无菌。进入无菌室前所有的准备工作要充分，避免因物品准备不足而反复进出洁净室。检测过程要依据客户及标准要求的方法进行，注意操作的规范性，整个检测过程的时间不宜过长，同时要避免交叉污染。检测过程中的日常质量控制方式包括：阴性对照、空白对照、阳性对照。检测工作结束后，要及时清理洁净室和生物安全实验室，对检测剩余的样品进行单独的存放，待报告出具后，再进行相应的处理。若有阳性检出的样品，需进行无害化处理；检测过程用到的器具需进行灭菌后再清洗，检测过程中产生的增菌液等需进行灭菌后处理。6.3 报告出具通过空白等质控方式严谨地分析实验结果，真实准确的记录实验数据，判定检测结果的合理性，出具准确可靠的报告。除了上述各要素的控制外，实验室还可以通过实验室内部质量控制和实验室外部质量控制对微生物的检测过程进行控制。实验室内部的质量控制手段要依据微生物检测的项目类别、检测频次，人员能力等编制实验室内部质量控制计划，内容包括项目、频次、评价方式和评价依据等，微生物检测的主要质控方式有空白试验、质控样品、实操考核、比对实验等方式。常用的质控手段的评价方式如下：空白试验用来监测环境和操作过程的规范性，如空白试验有生长，则证明检测环境或检测过程不满足要求，实验失败。质控样品是由质控样品提供者给予参照值，实验室进行检测后，与参照值进行比较，评价是否在质控样品参照值允许的范围内，如在允许的范围内即为合格，如超出允许的范围，则证明检测过程不合格，检测过程异常。实操考核是指由质量监督员等对检验员针对考核的项目制定考核评价表，对操作过程进行打分，最终依据总得分判定被考核人员的能力是否满足要求。比对实验一般是指用同一方法检测同一样品、由相同或不同的操作者使用相同或者不同设备所得到的两个单次实验结果进行比较，来评价人员操作的重复性和复现性是否满足要求，比对的评价可参考ISO 4833-1:-2013或SN/T 1800-2006，即：重复性：使用相同方法，在同一实验室检测同一种物质，由同一操作者使用同一操作者使用同一设备在短时间内的两次独立的单次结果（以10为底的每毫升中微生物计数的对数）的绝对差值，不应大于重复性限，r=0.25（概率为95%的重复性临界差），复现性：用同一方法检测同一样品、在不同实验室由不同操作者使用不同设备所得到的两个单次实验结果（以10为底的每毫升中微生物计数的对数）之间的绝对差值，不应大于复现性限，R=0.45（概率为95%的再现性临界差）。例如：A=3*10[sup]5[/sup]CFU/g； B=7*10[sup]5[/sup]CFU/g如A和B的检测结果为同一人，则A与B两次检测结果是否有差异？如A和B的检测结果非同一人，则A与B两次检测结果是否有差异？评价结果如下：Log[sub]10[/sub]A ≈ 5.47，Log[sub]10[/sub]B ≈ 5.85， Log[sub]10[/sub]A -Log[sub]10[/sub]B ≈ 0.37如A和B的检测结果为同一人，则依据重复性测试要求A与B两次重复检测结果计算所得0.370.25,两次测试的结果存在有差异；如A和B的检测结果非同一人，则依据复现性测试要求A与B两次检测结果计算所得0.371时，结果不满意。总之，完善的实验室管理体系，良好的质量控制，才能保证检测结果的准确行和可靠性。

如果你是实验室的领导，怎样平衡检测质量与数量？从利益出发，好像是数量重要；从个人角度，质量重要，没有质量再多的数量也没用。所以讨论一下检测工作是不是必须按标准执行，不得简化。

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization-time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF MS)是20世纪80年代发展起来的一种新型软电离有机质谱, 作为一种新兴的蛋白质组学检测技术, 现已广泛应用于生命科学及相关领域。同时作为一项新兴的微生物鉴定技术, 受到了国内外的广泛关注。与传统的生化表型鉴定方法和分子生物学方法相比, MALDI-TOF MS具有操作简单、快速、准确和经济的特点。早在1975年, ANHALT等[1]利用质谱仪结合高温裂解技术第1次完成了细菌的鉴定, 从此拉开了质谱鉴定细菌的“ 序幕” 。随着质谱检测技术的不断完善和发展, 近年来, MALDI-TOF MS已经成功应用于微生物的鉴定, 显示了其在细菌、酵母菌等鉴定方面均具有良好的应用价值。众多的研究表明, MALDI-TOF MS技术对培养出的纯菌落进行菌种鉴定具有很高的稳定性及准确性, 对常见细菌和酵母菌的属的鉴定率能达到97%~99%, 种的鉴定率也能达到85%~97% 另外, MALDI-TOF MS大大缩短了细菌鉴定的时间, 而且其成本也较常规鉴定方法低[2, 3]。除此之外, MALDI-TOF MS已经能够成功地用于部分微生物亚种水平的鉴定和细菌耐药性的检测, 但这种方法在大多数情况下是应用于培养出的纯菌落的鉴定[3]。　　如果能够从临床样本中直接检测细菌/真菌, 突破细菌/真菌培养阳性率低、培养时间长的瓶颈, 为细菌/真菌感染性疾病的诊疗提供更快、更准确的病原学依据, 将对临床及时控制细菌/真菌感染性疾病起到更大的作用。国内外学者已尝试将质谱技术应用于临床样本的直接检测, 并取得了显著的进展。本文就MALDI-TOF MS技术在临床样本的直接检测应用作一综述。一、MALDI-TOF MS检测原理　　MALDI-TOF MS技术用于微生物鉴定的实质就是检测具有属、种或亚型特异性的生物标志的质量信号, 主要是微生物菌体内高丰度、表达稳定和进化保守的核糖体蛋白。MALDI-TOF MS 仪器主要由基质辅助激光解吸离子源(MALDI)和飞行时间质量检测器(TOF)两部分组成。MALDI的原理是用一定强度的激光照射样本与基质形成的共结晶薄膜, 基质从激光中吸收能量而汽化, 并迅速降解, 使样本分解吸附, 基质和样本之间发生电荷转移从而使样本分子发生电离 TOF的原理是带有电荷的样本分子在电场作用下加速飞过飞行管道, 因为离子的质荷比与离子的飞行时间呈正比, 所以不同质量的离子因达到检测器的飞行时间不同而被检测, 以离子峰为纵坐标、离子质荷比为横坐标形成特征性的质量图谱。将不同种属微生物经MALDI-TOF分析所形成的质量图谱与数据库中的参考图谱进行比较, 从而实现对目标微生物种或菌株的区分和鉴定[2]。二、MALDI-TOF MS直接检测临床样本的流程　　临床样本直接检测的流程主要包括3个部分:临床样本的预处理、样本上机检测和对比蛋白质指纹图谱数据库得出鉴定结果。由于目前报道最多的临床样本是阳性血培养瓶和中段尿样本, 下面将以这二者为例介绍其直接检测的流程, 其它临床样本的检测流程与之类似。(一)临床样本预处理　　MALDI-TOF MS直接用于临床样本的检测有2个基本的要求:(1)临床样本中细菌的量。为了得到准确的鉴定图谱, MALDI-TOF MS技术对置于靶板上的细菌的最低检测限约为(1× 104)~(1× 106)cfu/mL。若要直接检测拟似血流感染的血液样本以及拟似泌尿系统感染的中段尿等临床样本中的病原菌, 首先必须富集细菌 (2)临床样本的质。由于血液和血培养瓶中的大分子成分如血红蛋白和其它蛋白成分、尿液中的白细胞等有机成分会干扰细菌的谱峰, 所以直接检测前需要采取预处理措施去除这些干扰因素。1.阳性血培养瓶直接检测 直接检测阳性血培养瓶的细菌浓度常常需要1× 107 cfu/mL[2, 4]。由于在血流感染患者血液中的细菌量常常很低(最低可 1~10 cfu/mL), 因此对血样本的直接检测需要一个增菌的过程, 即采用血培养瓶增菌。目前已报道的阳性血培养病原菌预处理程序各不相同, 但预处理过程主要包含了以下2个步骤:(1)将细菌从血细胞中分离出来。先应用温和去污剂(如吐温-80、十二磺基硫酸钠、皂素等)将血液中的血细胞溶解, 然后通过不同的流程(离心、洗涤)去除其它的干扰因素, 纯化要鉴定的细菌样本 (2)将菌体中的蛋白质抽提出来。最常用的是混合溶剂处理法, 使用甲酸/乙腈溶液对样本进行处理来抽提蛋白, 利用2种溶剂的混合作用将菌体表面的蛋白和存在于细胞内的低相对分子质量的高丰度蛋白提取出来, 实现对菌株的鉴定。虽然至今尚没有规范化的处理程序, 不过目前市场上已有商品化的阳性血培养瓶预处理试剂盒Sepsityper kit(Bruker)可以提高鉴定分数和鉴定准确率, 但是花费比较高, 处理程序也费时较长[5]。另外, HAMMARSTR? M等[6]建立了一种基于声学捕捉和集成选择性富集目标(integrated selective enrichment target, ISET)的新方法用于富集样本中的细菌, 快速、准确并且简化了人工操作, 有望替代传统的以离心为基础的分离方法。2.中段尿样本 要取得一个较高的鉴定成功率, 直接检测中段尿样本中病原菌至少需要的细菌数量是1× 105 cfu/mL[7, 8]。对尿样本的预处理程序较为简单, 主要有下面几个步骤:低速离心去除白细胞, 高速离心收集细菌, 沉淀, 经过洗涤、离心之后进行蛋白质的提取(常用的是甲酸、乙腈), 经高速离心后取1 μ L上清涂布到MALDI的靶板上, 在室温下干燥后即可进行检测。

化妆品制备ok还没出料之前的检测和出料之后检测分别是检测什么？我个人的认为是出料前是检测产品的粘度和酸碱度出料后是检测微生物大家的意见呢？

[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/06/202406241026217075_8852_5604214_3.jpg!w690x690.jpg[/img]　　ATP荧光微生物检测仪以其独特的技术优势和出色的性能，在食品、医药、环保等领域得到了广泛的应用。其特点不仅在于检测速度快、灵敏度高，更在于其操作简便、结果准确可靠。　　首先，ATP荧光微生物检测仪采用先进的荧光检测技术，能够在短时间内快速检测样品中的微生物含量。这种技术避免了传统培养方法耗时长、易受干扰的缺点，大大提高了检测效率。　　其次，该检测仪的灵敏度高，能够检测出极微量的微生物污染。这对于一些对微生物污染要求极为严格的领域，如食品、医药等，具有非常重要的意义。通过使用该检测仪，可以及时发现并控制微生物污染，保障产品质量和消费者健康。　　此外，ATP荧光微生物检测仪的操作简便，无需专业人员即可操作。其操作界面清晰明了，用户可以轻松完成检测步骤。同时，该检测仪还具备自动校准、自动存储等功能，进一步降低了操作难度，提高了检测效率。　　最后，该检测仪的结果准确可靠，得到了广泛的认可和应用。其检测结果不受样品颜色、浊度等因素的影响，具有很高的准确性。同时，该检测仪还具备多种数据输出方式，如打印、传输等，方便用户进行数据分析和处理。　　综上所述，ATP荧光微生物检测仪以其独特的技术优势和出色的性能，在食品、医药、环保等领域发挥着重要作用。未来，随着技术的不断进步和应用领域的不断拓展，ATP荧光微生物检测仪将会更加完善和优化，为人类的健康和生活质量做出更大的贡献。

凯氏定氮法检测期间微生物负载情况研究1凯氏定氮法检测前后产品中微生物负载情况研究本部分主要是考察人血白蛋白原液蛋白质含量检测前后产品中微生物负载水平的变化情况。1.1 材料供试品：人血白蛋白原液蛋白质含量检测前后的制品；培养基：青岛日水生物技术有限公司生产的胰酪大豆胨营养琼脂培养基（成品），批号：20150825。30-35 ℃细菌培养箱；净化超净工作台；无菌试管等。1. 2方法（1）样品的采集采用无菌的塑料试管，对连续生产的201601批至201610批共10批人血白蛋白产品原液蛋白质含量检测前后的制品进行取样，共得到20个样品。（2）试验方法根据《中国药典》2015版三部1105通则“微生物计数法”要求，在超净工作台下，每个样品取样1 ml接种到无菌的胰酪大豆胨琼脂培养基（φ脂培培养基）上，轻轻摇动，待样品分布均匀涂布后，放置于30-35 ℃细菌培养箱中培养3天，进行细菌计数。每个样品至少接种2个平皿，同时做阴性对照。1.3实验结果经30-35 ℃培养3天后，观察平皿培养结果，发现阴性对照无细菌菌落生长，人血白蛋白原液201601批至201610批细菌含量较多，菌落数均在100 cfu/ml以上，且部分平皿无法进行细菌菌落的准确计数。结果表明，人血白蛋白产品原液蛋白质含量检测前后制品中微生物含量存在批间差异，但总体来看微生物含量较多，且检测前后明显增多。图1至8为部分批次产品凯氏定氮法检测前后微生物的负载情况,图1,3,5,7为检测前，图2,4,6,8为检测后。[align=center] [img=,250,163]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709151544_01_1626619_3.png[/img][/align][align=center]图1人血白蛋白201601批 [/align][align=center][img=,236,164]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709151545_01_1626619_3.png[/img][/align][align=center] 图2人血白蛋白201602批[/align][align=center][img=,251,175]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709151545_02_1626619_3.png[/img][/align][align=center]图3人血白蛋白201603批[/align][align=center][img=,234,174]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709151546_01_1626619_3.png[/img][/align][align=center] 图4人血白蛋白201605批[/align][align=center][img=,251,166]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709151546_02_1626619_3.png[/img][/align][align=center]图5人血白蛋白201606批[/align][align=center][img=,234,165]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709151546_03_1626619_3.png[/img][/align][align=center] 图6人血白蛋白201608批[/align][align=center][img=,256,156]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709151546_04_1626619_3.png[/img][/align][align=center]图7 人血白蛋白201609批 [/align][align=center][img=,256,156]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709151547_01_1626619_3.png[/img] [/align][align=center] 图8 人血白蛋白201610批[/align]2产品中微生物负载量变化情况研究本部分主要考察凯氏定氮法检测蛋白质含量期间，随时间的延长人血白蛋白原液中微生物负载量变化的情况。通过对比检测前后制品原液中微生物负载水平的变化情况，分析由于检测时间较长带来的微生物数量的变化情况。2.1材料2.1.1 试剂供试品：人血白蛋白原液蛋白质含量检测前的制品；培养基：青岛日水生物技术有限公司生产的胰酪大豆胨营养琼脂培养基（成品），批号：20150825。2.1.2 仪器和软件30-35 ℃细菌培养箱；净化超净工作台；无菌试管等。2.2方法2.2.1样品的采集采用无菌的塑料试管，对连续生产的201601批至201603批共3批人血白蛋白产品原液蛋白质含量检测前的制品进行取样，每批样品至少取样20 ml。2.2.2试验方法根据《中国药典》2015版三部1105通则“微生物计数法”要求，将每批样品分样到13个无菌无热源的试管中，1 ml/管。放置于10-20 ℃的条件下密封保存，在超净工作台下分别把0 min、1 min、2 min、3 min、5 min、10 min、15 min、30 min、1 h、2 h、3 h时的样品取0.1 ml接种到无菌的胰酪大豆胨琼脂培养基上，轻轻摇动，待样品分布均匀涂布后，放置于30-35 ℃细菌培养箱中培养3天，进行细菌计数。每个样品至少接种2个平皿，同时做阴性对照。2.3 实验结果经30-35 ℃培养3天后，观察平皿培养结果，发现阴性对照无细菌菌落生长，表1为人血白蛋白原液201601批至201603批样品不同时间段接种的平皿中菌落平均数，图9为201601批至201603批产品不同时间段微生物数量变化趋势。[align=center]表1 不同时间段接种的平皿中菌落平均数[/align][align=center][img=,583,142]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709151550_01_1626619_3.png[/img][/align][align=center][/align][align=center][img=,606,282]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709151551_01_1626619_3.png[/img][/align][align=center]图9 201601批至201603批产品不同时间段微生物数量变化趋势[/align]从培养结果看，人血白蛋白原液201601批至201603批样品0 min、1 min、2 min、3 min、5 min、10 min、15 min、30 min，样品中的菌落数几乎没有变化；1 h后样品中菌落数有增长趋势。本次试验结果表明，人血白蛋白产品原液在等待凯氏定氮法检测蛋白质含量期间，制品中微生物负载量有增长的趋势。根据试验结果推算，在2-3小时后每ml人血白蛋白原液中至少含100 CFU，那么批量1000L的制品中至少含有109 个微生物，如此数量的微生物肯定会对人血白蛋白的质量（如纯度、热源）有一定的影响。但具体使用凯氏定氮法检测人血白蛋白原液蛋白质含量前后产品质量指标（如纯度、热原质等）的变化情况还有待进一步研究。结合[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/1p][color=#3333ff]近红外光谱[/color][/url]检测技术快速检测（2-3分钟）的特点，如果在人血白蛋白实际生产中应用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/1p][color=#3333ff]近红外光谱[/color][/url]快速检测技术，除了能够快速准确的为人血白蛋白生产提供非常有意义的指导外，还能有效控制产品中的微生物负载量，大大降低人血白蛋白产品的质量风险。参考文献刘文芳. 人血白蛋白分离工艺的历史沿革及发展 . 中国输血杂志, 2008, 21（4）:323-326.倪道明.《血液制品》 . 北京:人民卫生出版社, 2003.03: 19.Quinlan GJ,Martin GS, Evans TW. Albumin: biochemical properties and therapeutic potential . Hepatology. 2005. 41(6):1211-9.杨阳, 刘玉红, 王凤山.《人血清白蛋白的制备与应用研究进展》 .《中国药学杂志》, 2011, 46(24):1857-1860.杨晓波, 王晓雷, 王峰.人血白蛋白提取工艺的对比分析与改进方案 . 生命科学仪器, 2010, 08(2):44-48.张建军, 高缘, 孙婉瑾. 白蛋白作为药物载体的研究 . 化学进展, 2011, 23(8): 1747-1754.郭宾,李川. 药物与血浆蛋白结合的药理学基础及其研究进展 . 中国临床药理学和治疗学, 2005, 10(3): 241-253.张敏. 人血浆白蛋白的生理功能及临床应用 . 四川生理科学杂志, 2011, 33(1):36-38.肖婷予, 王斌. 人血白蛋白临床应用调查与分析 . 药物与临床, 2010, 45(13)1036.

水污染生物监测和检测方法及其研究进展摘 要: 扼要介绍了生物监测的理论、方法和特点。综述了近年来水污染生物监测的发展趋势及其研究动态与方向。阐述了水污染生物监测近期研究方向。关键词：水污染 生物监测 研究进展1 引言生物监测是系统地利用生物反应来评价环境的变化，并将其信息应用于环境质量控制程序中的一门科学。生物监测的目的是希望在有害物质还未达到受纳系统之前，在工厂或现场就以最快的速度把它检测出来，以免破坏受纳系统的生态平衡；或是能侦察出潜在的毒性，以免酿成更大的公害[1]。生物监测是理化监测的重要补充，对于评价环境质量状况有着十分重要的作用。理化监测一般只考虑瞬时污染状况，要做到长期连续监测，在经济上往往是不合适的。要了解污染的累积效应，采用生物监测更合适。同时，仅利用污染物质的浓度值来反映污染程度及危害也是不全面的，因为某些污染物质在环境中的含量极微不等于毒性极微，反之亦然。用生物监测进行配合，充分利用指示生物对污染物毒性反应的敏感性，便能较准确地反映真实的污染状况。2 水污染的生物监测2.1 水污染生物监测的理论依据在一定条件下，水生生物群落和水环境之间互相联系、互相制约，保持着自然的、暂时的相对平衡关系。水环境中进入的污染物质，必然作用于生物个体、种群和群落，影响生态系统中固有生物种群的数量、物种组成及其多样性、稳定性、生产力以及生理状况，使得一些水生生物逐渐消亡，而另一些水生生物则能继续生存下去，个体和种群的数量逐渐增加。水污染生物监测就是利用这些变化来表征水环境质量的变化[2]。2.2 水污染生物监测的特点同理化监测相比，生物监测有自己的特点：生物监测能反映各种污染物的综合影响；理化监测是定期采样，结果不能反映采样前、后的情况，而水中生物，汇集了整个生长期环境因素改变的情况；有些水生生物对污染物很敏感，有些连精密仪器都测不出的微量元素的浓度，却能通过“生物放大”作用在生物体内积累而被测出[2]。生物监测也有自己的不足之处：生物监测不能定性和定量地测定水质污染；检测的灵敏性和专一性方面不如理化检测；某些生物检测需时较长。2.3 水污染生物监测的方法2.3.1利用指示生物在水体中的出现或消失、数量的多少来监测水质许木启 [3]利用白洋淀水体中浮游动物群落优势种的变化来判断水体的污染程度和自净程度。结果表明，府河—白洋淀水体从上游至下游，浮游动物耐污种类逐渐减少，广布型种类逐渐出现较多，在下游许多正常水体出现的种类均有分布；同时，原生动物由上游的鞭毛虫至中游出现纤毛虫，在下游则发现很多一般分布在清洁型水体的种类，表明府河—白洋淀水体从上游到下游水体的污染程度不断减轻，水体具有明显而稳定的自净功能。2.3.2利用水生生物群落结构的变化来监测水质蒋昭凤等 [4]用底栖动物的变化趋势评价湘江水质污染，结果发现湘江干流底栖大型无脊椎动物种类数和物种的多样性指数从上游到下游呈减少趋势，表明毒杀生物的有毒物质对湘江的污染较为明显，并且可根据湘江干流各断面种类数的减少程度判断出各断面的污染程度；同时也观察到，随着时间的推移，底栖大型无脊椎动物种类数和多样性指数也呈减少趋势，说明这种有毒污染仍在发展之中。2.3.3水污染的生物测试水污染的生物测试是利用水生生物受到污染物质的毒害所产生的生理机能的变化，测试水质污染状况。Belding [5]根据鱼的呼吸变化指示有毒环境，在有污染物存在的情况下，鱼腮呼吸加快且无规律。德国[6]从1977年开始研究利用鱼的正趋流性开展生物监测，在下游设强光区或适度电击，控制健康鱼向下游的活动；或间歇性提高水流速度，迫使鱼反应。如果鱼不能维持在上游的位置，则表明污染产生了危害。3 国内外水污染生物监测的研究进展近几年来，应用生物监测环境技术的研究广泛开展，出现了一些新方法、新材料和新的监测物，提高了生物检测的灵敏性。3.1 水污染生物监测及其检测的新方法3.1.1 利用遗传毒理学监测水体污染环境污染物质对人类及其它生物危害最为严重的问题是对细胞遗传物质造成的损害。因此，近20年来环境生物检测技术的研究和应用，尤其是细胞微核技术和四分体微核技术在动植物以及人类染色体受外界理化因子的损伤等方面的分析、诱变剂的测试筛选，以及应用于环境监测的研究得到了广泛的发展[7]。微核在生物细胞内的形成途径以及与染色体畸变的相关性早已被人们所认识，用微核测定法替代染色体畸变方法来监测环境污染物对生物遗传物质的损伤具有简便、快速、灵敏度高等优点。最常用的蚕豆根尖细胞微核试验技术是一种以染色体损伤及纺锤丝毒性等为测试终点的植物微核监测方法，该技术自1982年由Degrassi等建立以来，在环境诱变和致癌因子的检测研究中，特别是在水质污染和致突变剂检测研究中得到了广泛应用[8]。吴甘霖 [9]在利用水花生根尖微核技术（MCN）对马鞍山市废水的监测研究中，发现利用水花生根尖微核可作为监测水体污染的新材料。其根尖细胞微核率 MCN（‰），不仅可用于监测不同废水的污染程度，而且由于该植物长期生活在污染水体中，还能反映不同废水的污染物富集程度及现状。当外界环境中存在一定浓度的致突变物时，可使细胞发生损伤，从而使微核细胞率上升。另外微核细胞率的上升，提示环境中存在有致突变物，即受试水样中含有能打断DNA分子的诱变剂或能打断纺锤丝的纺锤丝毒剂，从而表现出遗传毒性。单细胞凝胶电泳（SCGE），即彗星试验也是一种通过检测DNA链损伤来判别遗传毒性的技术。它比微核试验更有益，因为环境中的遗传毒物浓度一般很低，而彗星试验检测低浓度遗传毒物具有高度灵敏性，所研究的细胞不需要处于有丝分裂期。同时，这种技术只需要少量细胞。目前它已经被用于检测哺乳动物、蚯蚓、一些高等植物、鱼类、两栖动物以及海洋无脊椎动物的细胞[11]。Mirjana Pavlica等 [10]用暴露在五氯苯酚（PCP）中的淡水蚌类（Dreissena polymorpha Pallas）血细胞进行彗星试验，观察血细胞中DNA损伤程度。在进行实验室实验和原位实验后，发现高浓度的PCP(80g/L)会引起血细胞中DNA断裂，表明用彗星试验检测DNA损伤能够监测水体中PCP污染。SOS显色法[12]是国内在20世纪80年代发展起来的一种遗传毒性检测新方法，具有快速、准确、灵敏及假阳性率低的特点，被广泛用于遗传毒性的测定中。其原理是：在DNA分子受到外因引起的大范围损伤、其复制又受到抑制的情况下，会导致一种容易发生错误的修复。所有这些在遗传毒物处理后大肠杆菌中出现的一系列反应统称为SOS应答。SOS显色法有许多优于Ames的特点：（1）快速、简便，测定过程只需7ｈ；（2）灵敏，被处理的细胞全产生或不产生SOS反应，用分光光度法测定β-ONPG(邻硝基苯β-Ｄ-半乳糖苷)分解产物非常灵敏；（3）准确，SOS显色法测定的是遗传毒物对细胞原发的直接反应，其阳性结果十分可信，而Ames试验的假阳性率较高。因此，SOS显色法已引起人们的密切关注，成为一种值得推广的水质监测评价方法。

[size=16px][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][color=#05073b]食品微生物检测仪检测精度精确吗[/color][/font]食品微生物检测仪的检测精度是否精确，取决于多种因素，包括仪器的品质、型号、生产厂家以及使用条件等。一些高品质的食品微生物检测仪，如山东天研生产的高智能食品微生物综合分析仪，其检测精度可以达到1×10-18mol，并且在15秒内就能完成检测。这样的精度和速度可以确保对食品安全项目的快速和准确检测。然而，即使是高品质的仪器，如果在使用过程中操作不当或者环境条件不符合要求，也可能会影响其检测精度。因此，在使用食品微生物检测仪时，需要遵循正确的操作步骤，并在适当的环境条件下进行检测。总的来说，食品微生物检测仪的检测精度是可以通过选择高品质的仪器和正确的操作来保证的。然而，为了确保检测结果的准确性，还需要结合其他因素进行综合判断，比如检测样本的代表性、检测方法的可靠性等。[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/03/202403271109020442_6381_6098850_3.jpg!w690x690.jpg[/img][/size]

点击链接查看更多[color=#009900]：[url]https://www.woyaoce.cn/service/info-3130.html[/url]产品介绍：[/color]微生物是包括：细菌、病毒、真菌以及一些小型的原生生物、显微藻类等在内的一大类生物群体，它个体微小，与人类关系密切。涵盖了有益跟有害的众多种类，广泛涉及食品、医药、工农业、环保等诸多领域。[color=#009900]检测产品：[/color][list][*][*]农产品[*][*]水产品[*][*]畜产品[*][*]各类食品等[/list][color=#009900]检测项目：[/color]致泻大肠埃希氏菌、大肠杆菌计数、大肠埃希氏菌、大肠菌群、粪大肠菌群、菌落总数、霉菌和酵母、志贺氏菌、阪崎肠杆菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌、溶血性链球菌、乳酸菌、沙门氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌罐头食品的商业无菌[hr/][color=#009900]科仪阳光检测服务：[/color][back=#fafafa][/back]如果您有农药残留检测分析方面的需求，请联系我们，科仪阳光检测依据各国标准及企业标准，为您提供专业的农药残留检测分析服务。更多农药残留检测分析服务咨询 请联系我们！