水质中叶绿定仪

根据《中华人民共和做国家环境保护标准》对水质中叶绿色a的测定，采用高通量研磨机进行研磨，可达到最精细的研磨。研磨特点：[b][color=red]直接用离心管研磨，少一次样品转移，少一次损失。[/color][color=red][b][color=red]实验步骤：[/color][/b]1. 将滤膜放置在连有真空泵的玻璃抽滤器上，根据水体营养状态，准确量取定量体积的混匀水样进行抽滤，在水样刚刚完全通过过滤模时进行抽滤，用镊子将滤膜取出，将有样品的一面对折，用滤纸吸干滤膜水分。2. 将抽滤后的样品滤膜放置于高通量适配器中的离心管内，加入0.01g~0.02g碳酸镁及丙酮溶液，充分研磨至糊状，补加3~4ml丙酮溶液继续研磨，并重复1~2次，保证研磨时间5-10min。[/color][color=red]3. 将离心管中的研磨提取液充分振荡混匀后，放置于4[color=#333333]℃[/color]暗处浸泡提取2h以上，不超过24h。在浸泡过程中要颠倒摇匀2~3次。4. 将离心管放入离心机中，以相对离心力1000*g离心10min（转速3000-4000r/min）。取上清液用0.45um有机相针式滤器过滤，收集滤液待测。[/color][color=red][b]设备介绍 分体式仪器优点：[/b]机械部分与电子控制部分分开，航空插头设计，延长电子元器件寿命，减少损坏；简单，实用。[b]——[/b]这也是一体机致命缺点。[b]一体式仪器优点：[/b]结构紧凑，美观简洁，占地小，噪音低[b]原理：[/b]高通量混合研磨仪具有对称的一对高速大振幅的摇臂，通过玛瑙小球或不锈钢小珠等在样品管内来回不规则撞击及摩擦，在几秒到几分钟内轻松实现样品的研磨、粉碎、混合及细胞破壁。精细的研磨，可以达到5微米。[b]5. 配置：[/b]材质：PTFE、1010尼龙规格：6孔10ml、12孔5ml用途：将4.1中滤膜吸干水的样品粉碎。[b]总结：[/b]高通量混合研磨仪用于***标准实验时，研磨2min和3min，均可成功将物料打成浆糊状，达到测定水中叶绿素的研磨标准。其粉碎粒径测定如下（所用仪器为丹东百特公司（BT-9300S,BT-800）：[/color][color=red][color=#B10D14]TJ-2011[/color][color=#B10D14]高通量混合研磨仪技术指标[/color][/color][color=red][color=#B10D14]应用：粉碎、混合、均相化以及细胞破碎、冷冻研磨[/color][/color][color=red][color=#B10D14]应用领域：农业、生物、化学、塑料、建筑材料、电子、环境、食物、玻璃、陶瓷、医药、矿物冶金[/color][/color][color=red][color=#B10D14]样品特征：硬的、中硬性、软性的、脆性的、弹性的、含纤维的[/color][/color][color=red][color=#B10D14]粉碎原理：撞击力、摩擦力[/color][/color][color=red][color=#B10D14]最大进样尺寸：≤8mm[/color][/color][color=red][color=#B10D14]最终出料粒度：～3μm（不同材料研磨细度有差异）[/color][/color][color=red][color=#B10D14]振动频率设置：10-1500次/分钟[/color][/color][color=red][color=#B10D14]典型粉碎时间：2min[/color][/color][color=red][color=#B10D14]干磨：是[/color][/color][color=red][color=#B10D14]湿磨：是[/color][/color][color=red][color=#B10D14]低温研磨：是[/color][/color][color=red][color=#B10D14]带自动中心定位的紧固装置：是[/color][/color][color=red][color=#B10D14]研磨平台数：2[/color][/color][color=red][color=#B10D14]研磨罐种类：旋盖型研磨罐[/color][/color][color=red][color=#B10D14]研磨套件材料：硬质钢、特氟龙尼龙 0.5/1.5mL/2mL/5ml/10ml（离心管/PCR管）[/color][/color][color=red][color=#B10D14]研磨适配器：24孔板×2 96孔板×2[/color][/color][color=red][color=#B10D14]研磨套件尺寸：25mL/50mL（研磨罐）[/color][/color][color=red][color=#B10D14]研磨球材质：玛瑙、不锈钢、氧化锆、碳化钨、陶瓷[/color][/color][color=red][color=#B10D14]粉碎时间设定：数字显示 1秒-99分59秒[/color][/color][color=red][color=#B10D14]驱动：无刷电机[/color][/color][color=red][color=#B10D14]功率：150W[/color][/color][color=red][color=#B10D14]机体尺寸（宽*高*纵深）：300*180*420[/color][/color][/b]

[em0808] 各位大虾,请问有没有国产的便携式叶绿素测定仪,可以测定水中叶绿素含量的,谢谢了!!

任何用荧光分光光度计测绿叶中叶绿素的含量？

各位大神，我想问下，测定水质中叶绿素时，吸光度出现负值是什么问题造成的，不同组样品，测出四个波长都一样负值，是操作问题还是仪器问题呢？

水中叶绿A的测量方法中需真空泵、抽滤器、离心机、组织研磨器，请问：这些设备有什么要求？常用型号？

叶绿素测定仪是一种用于测量植物或其他生物样品中叶绿素含量的仪器。叶绿素是植物中的关键色素之一，它在光合作用中扮演着重要的角色，将光能转化为化学能。测定叶绿素含量可以用来评估植物的生长状况、健康状态以及光合作用效率。　　叶绿素测定仪在许多领域都有广泛的应用，主要涉及到植物生长、生态系统研究、环境监测和农业等。以下是叶绿素测定仪的一些主要应用范围：　　植物生长与健康评估： 叶绿素测定仪可以用于评估植物的健康状况和生长状态。通过测量叶绿素含量，可以推断出植物的光合作用活性、养分吸收能力以及受到的环境影响。　　农业领域： 叶绿素测定仪在农业中被用来监测作物的生长情况和健康状态。这有助于决定适宜的施肥、灌溉和其他农业管理措施，以提高农作物产量和质量。　　生态学研究： 叶绿素测定仪在生态系统研究中非常有用。通过对植物叶片和水体中叶绿素的测量，可以了解生态系统的光合作用活动、能量流动和生态链的结构。　　水质监测： 叶绿素测定仪可用于评估水体中的藻类和蓝藻数量，从而判断水体的富营养化程度和水质。这对于保护水体生态平衡和提供饮用水质量至关重要。　　环境污染监测： 叶绿素测定仪可以用于检测污染物对植物生长和光合作用的影响。它们可以帮助监测工业排放、空气污染和土壤污染等对环境的影响。　　生物学研究： 叶绿素测定仪在生物学领域中用于研究不同生物体中叶绿素的含量和分布，如藻类、植物、海洋生物等。　　教育与科普： 叶绿素测定仪也可用于教育和科普活动，帮助人们理解光合作用的基本原理以及叶绿素在生态系统中的作用。　　总之，叶绿素测定仪在植物学、生态学、环境科学、农业和生物学等多个领域中都发挥着重要作用，帮助人们更好地了解和评估生态系统、植物健康和环境状况。

1.原理叶酸是酪乳酸杆菌（Lactobacillus casei, L. C, ATCC 7469）生长所必需的营养素。在一定条件下，L.C的生长繁殖与培养基中叶酸含量呈正比关系，细菌增殖的量以光密度值计，通过与标准曲线相比较，计算出样品中叶酸的含量。2.适用范围参考《Methods of Vitamin Assay》，第4版。本方法适用于各类食物中叶酸的测定。检测限为0.1ng。3.仪器与设备（1） 恒温培养箱（2） 离心机（3） 高压消毒锅（4） 震荡器（5） 接种针和接种环（6） 分光光度计4.试剂除特殊说明外，本实验中所有试剂均为分析纯，水为蒸馏水。（1） 菌种：酪乳酸杆菌（Lactobacillus casei, L.C, ATCC 7469）（2） 磷酸缓冲液(0.05mol/L, pH6.8):称取4.35g Na3PO412H2O,10.39g Na2HPO47H2O溶解于800ml水中。临用前用约5g抗坏血酸调节pH至6.8。（注：叶酸对光、热敏感，易被氧化破坏，抗坏血酸有助于保护叶酸被氧化。）（3） 鸡胰酶溶液： 称取100mg干燥的鸡胰酶（Difco公司）（注：含有叶酸轭合酶，用于水解叶酸多谷氨酸盐）， 加入20ml磷酸缓冲液制成匀浆，3000rpm离心10min,取上清液备用。临用前现配。（4） 蛋白酶-淀粉酶溶液：分别称取200mg蛋白酶（Sigma公司）和淀粉酶（Sigma公司），加入20ml磷酸缓冲液制成匀浆，离心3000rpm 10min,取上清液备用。临用前配制。（5） 2+8乙醇溶液：量取20ml无水乙醇溶液，加入80ml水混匀。（6） 01mol/L NaOH: 称取0.4g氢氧化钠，加2+8乙醇溶液溶解并稀释至1L。（7） 10mol/L NaOH。称取400g氢氧化钠，加水溶解并稀释至1L。（8） 叶酸标准储备液（200mg/ml）：准确称取200mg叶酸标准品（Sigma公司，纯度大于98%），用0.01mol/L NaOH溶解并定容至1L。储存于棕色瓶中。（9） 叶酸标准中间液（200ng/ml）：准确吸取1.0ml叶酸标准储备液，用0.01mol/L NaOH 溶解并定容至1L。储存于棕色瓶中。待标定。标定：准确吸取1ml叶酸标准中间液，用0.1mol/L NaOH定容至10ml。以0.1mol/L NaOH调零点，比色杯厚度1cm，波长256nm，测定3次紫外吸光度值，取平均值，按下式计算标准中间液浓度。X1 =A/E×M ×10×10E6 …………………(1) ` 式中：X1 -- 叶酸标准中间液浓度，ng/ml；A -- 标准中间液平均紫外吸光度值；E -- 摩尔消光系数24,500；M -- 叶酸分子量441.42；10-- 测定紫外吸光度值时的稀释倍数；106 -- 由g/L换算成ng/ml的换算系数。（10） 叶酸标准工作液（0.2ng/ml）:准确吸取1.0ml叶酸标准中间液，用磷酸缓冲液稀释定容至1L。（11） 2.4mol/L HCl：量取20ml浓盐酸，加水稀释至100ml。（12） 酶解酪蛋白溶液：将8g碳酸氢钠溶解于1L水中，加入60g去维生素酪蛋白（Sigma 公司），用10mol/L NaOH调节pH至 8.0（调pH时应小心，不要过碱后再加酸反复调节，避免酪蛋白结块）。加入300mg胰酶，搅拌20min，使胰酶混匀充分。再加入2.5ml甲苯，置37℃恒温箱酶解48～72h（此步骤是将酪蛋白酶解为L.C可以利用的小分子肽。酶解时间不易超过72h，如时间过长，配成的培养基不利于细菌生长）。将酪蛋白液从恒温箱中取出，121℃高压30min以终止反应并去除甲苯。冷却，加10g硅藻土搅拌，用垫有滤纸的布氏漏斗过滤。向滤液中加入约60ml冰乙酸调节pH至3.7。称取活性炭12g，加入滤液中搅拌10min，用布氏漏斗过滤，重复三次。每次过滤时，布氏漏斗内加有10g硅藻土协助过滤。最后滤液用水稀释至1200ml，4℃冰箱保存1年（活性碳可吸附酪蛋白中的叶酸以减少试剂空白，同时也可吸附肽及氨基酸，应注意控制搅拌时间）。取10ml酶解后的酪蛋白溶液加入已称重的蒸发皿中，沸水浴蒸发至干。将蒸发皿置于100℃恒温烤箱内干燥至恒重，在干燥器中冷却至室温。称量蒸发皿的重量，蒸发皿内固体重量，如固体重量小于400mg，即每毫升酪蛋白溶液中固体含量40mg，则弃除酪蛋白液，重新制备。（13） 黄嘌呤溶液：取0.4g黄嘌呤，加入10ml氨水，加热溶解，用水稀释至100ml。冰箱保存。

我们是水库水质化验室的，最近要增加叶绿素a的检测，请问要用什么仪器做，请大家给点建议

急用水果中叶酸的测定方法！请各位高手赐教！万分感谢！

请问哪位老师做过乳粉中叶酸的检测，用液相色谱或液质的方法，希望可以分享一下。

最近公司在做扩项，叶绿素用的是SL88-2012这个水质标准，但是一直没搞懂标准上叶绿素a、b、c的计算公司。同事做出来全程序空白值大于检出限，总之abc三者只中总有一个大于检出限，但方法要求空白值小于检出限。后来我发现根据公式结果单位是ug/L，但我一步步推导怎么都得不出单位为ug/L，很费解，求高手指教。

有用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]或液相做奶粉中叶酸含量测定的吗？怎么前处理的? 我参照药典，用水提取样品，不能得到澄清溶液，混悬液，该怎么解决才能澄清上机呢？

各位老师，关于水质叶绿素a检测有些问题想请教大家。根据HJ 897-2017S水质叶绿素a的测定 -分光光度法，在实际操作中发现，加标回收率超级高，高达300%多，我的加标操作过程为：1、将标品（sigma,C6144)用90%丙酮溶解，定容100mL棕色容量瓶，即为10mg/mL；2、取200mL水样过滤，滤膜吸干水分于-20℃保存；3、隔天取200ul标品溶液，滴加到样品滤膜上，分两次加入3ml地90%丙酮，研磨5min,将研磨液置于试管中，并用90%丙酮冲洗研磨器，定容至10ml；4、试管置于4℃避光静置4h,期间震荡3次；5、离心，取上清液过膜，以90%丙酮为参比，测定样品吸光度。 后期又用空白膜实验一次，发现回收率也超过300%，自己实在想不出哪里出了问题，请各位老师指教，谢谢大家

各位老师，关于水质叶绿素a检测有些问题想请教大家。根据HJ 897-2017S水质叶绿素a的测定 -分光光度法，在实际操作中发现，加标回收率超级高，高达300%多，我的加标操作过程为：1、将标品（sigma,C6144)用90%丙酮溶解，定容100mL棕色容量瓶，即为10mg/mL；2、取200mL水样过滤，滤膜吸干水分于-20℃保存；3、隔天取200ul标品溶液，滴加到样品滤膜上，分两次加入3ml地90%丙酮，研磨5min,将研磨液置于试管中，并用90%丙酮冲洗研磨器，定容至10ml；4、试管置于4℃避光静置4h,期间震荡3次；5、离心，取上清液过膜，以90%丙酮为参比，测定样品吸光度。 后期又用空白膜实验一次，发现回收率也超过300%，自己实在想不出哪里出了问题，请各位老师指教，谢谢大家

最近我单位要采购叶绿素测定仪，用于水库和湖泊中叶绿素测定，那位兄弟提供点资料

[color=#444444]定量蔬菜中叶绿素ab和脱镁叶绿素ab。查了资料想用[/color][u]分光光度法[/u][color=#444444]或者[/color][u]高效液相色谱法[/u][color=#444444]来做，但是发现了几个问题，[/color][color=#444444]1：用高效液相色谱法的定量一般是需要做标准曲线的吧？ 阿拉丁里关于叶绿素AB的纯品1mg 1000+ 而脱镁叶绿素阿拉丁里没有需要到别的公司定，并且价格很高 4、5千的样子，所以我想问 如果要定量测一定需要做标准曲线吗，或者使用别人做出的，可以拷到软件里计算吗？[/color][color=#444444]2： 关于定量叶绿素ab和脱镁叶绿素ab还有其他好用的方法吗？ 谢谢各位的指导[/color]

HJ897-2017规定测定丙酮提取液中叶绿素a的检出限为0.04mg/L，当取样体积为200ml，丙酮提取液体积为10ml时，本方法的检出限为2ug/l，测定下限为8ug/L。样品测定时取样体积根据水体富营养化程度进行取样。问题：当我取样体积不是200ml时，如我取500ml水样，那么检出限怎么确定？是按照0.04mg/L？还是换算成取样体积为500ml的检出限0.8ug/L？在线等，清各位老师指点下

[align=center][b]HPLC法测定果冻类样品中叶酸含量的方法学建立[/b][/align][align=center]顾琛 [/align][align=left][b]摘要：目的：[/b]本文采用反相高效液相色谱法建立测定果冻类食品叶酸（folic acid）含量的分析的方法。[b]方法：[/b]使用C[sub]18[/sub]柱作为分析柱，磷酸缓冲液和甲醇作为流动相，紫外检测器作为检测器，叶酸（Pteroylmonoglutamic acid）作为对照品，果冻食品作为样品。[b]结论：[/b]该法在50ng/mL-1000ng/mL之间呈良好的线性，重现性好RSD＜2%，回收率在107±2%，稳定性良好，最小检测限20ng/mL。样品测试结果与微生物检测结果相符。本法可以作为测定食品中叶酸含量的一个方法。[/align][b]关键词：[/b]叶酸，HPLC， 果冻样品[b]Abstracts ：Aim:[/b] A simple method for the determination offolic acid in gel sample by high-performance liquid chromatography withUV-detection is reported. [b]Methods: [/b]The method was simple by using RP-column (C[sub]18[/sub])with phosphorate -methanol as mobile phase and UV as a detector. [b]Conclusion: [/b]The calibration graph was linear from 50 to1000ng/mL for folic acid with a correlation coefficient of 0.999(n=5). Thedetection limit is 20ng/mL. The method was successfully applied fordetermination of folic acid in the gel sample. The recovery was 107±1.5% and the reletive standard deviation was no morethan 2%. Compared with microbiology method, the results of the samples are same.This method can be used for content determination of the folic acid in gelsample.[b]Key Words:[/b] folic acid, HPLC, gel sample [b]1.前言与文献综述1.1叶酸的理化性质，生物学功能[/b] 叶酸(folic acid)是一组含有碟酰谷氨酸结构的一类化合物统称。食物中的叶酸绝大多数是以喋酰多谷氨酸(或称多谷氨酸叶酸)的形式存在的。叶酸为淡黄色结晶粉末，微溶于水，不溶于乙醇、乙醚及其它有机溶剂；叶酸的钠盐易溶于水，但在水溶液中易被光解破坏，分解成碟啶和氨基苯甲酰谷氨酸盐。在酸性溶液中对热不稳定，而在中性和碱性溶液中却十分稳定。食品中叶酸经受热易损失。 食物叶酸经小肠粘膜细胞内特异叶酰多谷氨酸水解酶的作用，水解为喋酰单谷氨酸(或称单谷氨酸叶酸，PteGlu①)后吸收。吸收后的单谷氨酸叶酸一部分又转变为多谷氨酸叶酸，在肝脏、红细胞及其他组织细胞内贮存，其余部分则以单谷氨酸叶酸的形式分布于血浆、组织液、胆汁及尿液中。肝脏的叶酸浓度是血浆的几百倍，但其单谷氨酸叶酸浓度与血浆相近。叶酸以8种辅酶形式存在于生物体内，为一碳单位的载体参与嘌呤、嘧啶等重要物质的合成。[sup] [/sup]因此叶酸在DNA、RNA、核酸和蛋白质的生物合成中起着重要作用，是细胞增殖和机体发育的物质基础。叶酸在体内的含量直接影响到多种物质如核苷酸的代谢，进而影响血细胞的形成。[b]1.2目前测定叶酸的一些主要方法以及对各个方法的评价1.2.1微生物法[/b] 微生物法是检测生物体内叶酸的经典方法。[color=black]它最根本的原理在于利用了微生物对于某些营养物质的特异性。大量的研究发现，某种微生物会对某种维生素具有极强的特异性，是其正常生长所必需的维生素，并且在一定条件下，其生长与繁殖速度与溶液中该维生素的含量成一定的对应关系，含量高则生长快，反之则慢，微生物法便利用了这种对应关系间接地测定出样品中该维生素的含量。[/color]通常所用的微生物有干酪样乳酸杆菌（L.casei）、粪链球菌和啤酒小球菌属。此3种微生物对不同形式叶酸的敏感度不同。粪链球菌只对非甲基化叶酸敏感，如PteGlu、二氢叶酸(DHF)和四氢叶酸(THF)。 微生物分析叶酸[color=black]具有极高的灵敏度准确度高、先期投入少，见效快、测定结果反映了样品中具有生物活性的被测物含量等优点。许多国际标准方法机构仍旧将微生物法作为叶酸分析的标准方法或第一方法。[/color] 但是微生物法也有许多局限性，如整个实验周期长，批间检测结果重复性差，检测结果受样品中所含抗叶酸药物或抗生素成分的影响，[color=black]只能反映维生素的总含量，不能测定维生素各种异构体的组成和含量[/color]等。[b]1.2.2同位素放射免疫法[/b] 同位素放射免疫法检测血清叶酸始于70年代初。该方法具有快速、简便的特点，同时由于叶酸放射免疫试剂盒的出现，很快得到普及，尤其广泛应用于临床实验室。放射免疫法与微生物法检测叶酸，除原理不同外，检测结果的意义也有所不同。对大量标本总体而言，两种方法结果相关性较好，但对个体标本，两种方法结果的差异较大。微生物法对多谷氨酸叶酸响应值低，不能直接用于检测叶酸含量。但微生物法对所有单谷氨酸叶酸及其衍生物的反应灵敏度相同，故在用叶酸水解酶处理样品使所有叶酸形式转变为单谷氨酸叶酸后进行检测，可得到准确的叶酸值。同位素放射免疫法对多谷氨酸叶酸反应的相对灵敏度有较大的差别，随着叶酸浓度增加，反应的相对灵敏度增加，但多谷氨酸叶酸的反应曲线不可能与单谷氨酸叶酸的反应曲线重合；另一方面，多谷氨酸叶酸与结合蛋白的亲合性与单谷氨酸叶酸相比较高，不同的单谷氨酸叶酸衍生物反应灵敏度不同，放射免疫法也不适用于检测单谷氨酸叶酸衍生混合物。由于上述原因，尽管放射免疫法可用于检测和评价叶酸的营养状况，但从定量检测的角度来讲，难以得到准确的叶酸含量值。[b]1.2.3离子捕获法[/b] Wilson等提出离子 捕获法检测叶酸，该技术可谓叶酸检测技术中的最新方法，即在实验中，样品加入变性剂后叶酸与内源性结合蛋白分离，释放后的叶酸再与带有大量阴离子的亲合试剂结合，合成产物经过离子捕获池而与阳离子纤维结合，最后通过碱性磷酸酶与喋酸(叶酸的类似物)结合物对叶酸结合蛋白上游离结合位点的探查，定量分析样品的叶酸含量。该研究证实，离子捕获法测定血清或红细胞叶酸，其结果与同位素放射免疫法的结果具有良好的相关性，相关系数分别为0.96 和0.93。[b]1.3色谱法和HPLC法在测定食品中叶酸含量的现状[/b][align=left] 色谱法也称层析法，是一种分配平衡为基础的分离分析技术。色谱分离体系包含两相：固定相和流动相。由流动相带领的[color=black]物质分子在固定相间分配达到“平衡”的过程。通过不同物质分配平衡性质的差异达到彼此分离。[/color][/align][align=left][color=black] 20[/color][color=black]世纪[/color][color=black]70[/color][color=black]年代初发展起来的高效液相色谱（[/color][color=black]High performance liquidchromatography, HPLC[/color][color=black]）吸收了普通液相层析和[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]的优点，经过适当改进发展起来的。它既有普通液相层析的功能（可在常温下分离制备水溶性物质），又有[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]诸多优点（高速、高分辨率和高灵敏度）。适用于很多不易挥发、受热易分解的物质定性定量分析。[/color][sup][/sup][color=black][/color][/align][align=left] 运用高效液相色谱（HPLC）方法来定量食品中叶酸含量在近年来得到了普及。借助于色谱柱的高分离效果和灵敏的检测器，有能力来分离检测不同形式叶酸。中国药典方法使用高效液相色谱－紫外检测器检测叶酸。由于有些叶酸具有荧光特性，D.MP.Johan等[sup][/sup]使用高效液相色谱－荧光－紫外检测器的串连（HPLC-FD-UV）分析面包酵母中叶酸含量。R.Stefania[sup][/sup]等同样使用HPLC-FD-UV分析意大利食品中叶酸含量。由于食品中的干扰物质多，且叶酸含量较少，E.J.M.Konings[sup][/sup] 使用固相萃取法（SPE）对样品进行纯化和富集，然后使用HPLC-FD-UV检测牛奶，肝脏，蔬菜，面粉中的叶酸。L.H Douglas[sup][/sup] 等用HPLC-柱前衍生和HPLC-电化学检测器分别检测牛奶和其它食品中叶酸含量。随着技术的进步，高效液相色谱和质谱联用（HP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]）提供了专一性好，灵敏的方法。A.Freisleben[sup][/sup]使用LC-FD-MS联用检测食品中叶酸含量。[/align][align=center][b]表一：几种液相色谱联用的检测器方法的比较：[/b][/align][align=center][b]Table 1. Comparison of some detectors of HPLC [/b][/align] [table=649][tr][td=1,1,61] [align=center]检测器[/align] [/td][td=1,1,192] [align=center]原理[/align] [/td][td=1,1,72] [align=center]灵敏度[/align] [/td][td=1,1,84] [align=center]专一性[/align] [/td][td=1,1,108] [align=center]检测限②[/align] [/td][td=1,1,132] [align=center]评注[/align] [/td][td=1,1,0] [/td][/tr][tr][td=1,2,61] [align=center]紫外[/align] [align=center](UV)[/align] [/td][td=1,2,192] 物质在紫外光谱有吸收[/td][td=1,2,72] [align=center]较高[/align] [/td][td=1,2,84] [align=center]稍强[/align] [/td][td=1,2,108] [align=center]2μg/100mL[/align] [/td][td=1,2,132] 受到食品中其它物质干扰较大。[/td][td=1,1,0] [/td][/tr][tr][td=1,1,0] [/td][/tr][tr][td=1,2,61] [align=center]荧光[/align] [align=center](FD)[/align] [/td][td=1,2,192] 共轭结构在激发光下电子激发到高能态，退激回基态时能量以荧光形式释放，根据荧光强度得待测物浓度。[/td][td=1,2,72] [align=center]高[/align] [/td][td=1,2,84] [align=center]强[/align] [/td][td=1,2,108] [align=center]不能检测[/align] [/td][td=1,2,132] 能检测四氢叶酸和5－甲基四氢叶酸。而叶酸（Pt-Glu）③无荧光性质。[/td][td=1,1,0] [/td][/tr][tr][td=1,1,0] [/td][/tr][tr][td=1,2,61] [align=center]电化学(ECD)[/align] [/td][td=1,2,192] 外加电压使特征物质失去电子，根据失去电子形成电流大小得出待测物质的浓度。[/td][td=1,2,72] [align=center]高[/align] [/td][td=1,2,84] [align=center]强[/align] [/td][td=1,2,108] [align=center]0.32pmol[/align] [/td][td=1,2,132] 灵敏度高，专一性强。但是装备复杂。[/td][td=1,1,0] [/td][/tr][tr][td=1,1,0] [/td][/tr][tr][td=1,2,61] [align=center]质谱[/align] [align=center](MS)[/align] [/td][td=1,2,192] 特征碎片离子检测[/td][td=1,2,72] [align=center]较高[/align] [/td][td=1,2,84] [align=center]强[/align] [/td][td=1,2,108] [align=center]0.1μg/100mL[/align] [/td][td=1,2,132] 不普及，价格高。但是发展方向。[/td][td=1,1,0] [/td][/tr][tr][td=1,1,0] [/td][/tr][/table][b]1.4方法学建立的目的和意义以及技术路线1.4.1方法学建立的目的和意义[/b] 由于人体内的叶酸几乎完全依赖于食物的摄入，因此当摄入量不足或利用率低时，体内便会出现叶酸缺乏的状况。近年来的研究表明，叶酸缺乏会导致贫血、慢性下痢、食欲不振、发育迟缓等疾病，孕妇补充叶酸可防止因神经系统发育不全而形成的畸胎，儿童服用叶酸可提高智商，促进智力发展。所以，叶酸强化食品的摄取对人类健康具有重要意义。而叶酸强化食品的含量的科学性显得十分重要。 确实食品添加剂的质和量决定着加工类食品的营养和安全性。国外对于食品营养和安全十分关注，通过在加工食品的包装上注明的添加成分、营养物质的含量、适宜人群在产品包装，以利于不同需求的消费者选择。随着国内外交流的加强和HACCP认证的推进以及质量意识的增强，食品安全，食品营养受到了消费者和食品生产企业的关注。随着分析测试仪器的先进化和自动化给食品中各个成分的测定提供了强有力的“武器”，尤其是高效液相色谱的普及，它的高效性、准确性、方便、微量等优点是食品分析的一场“革命”。国内外HPLC法测定食品营养成份和食品添加剂方法发展得很快，相关报道较多。但是由于叶酸在食品中添加量甚微，食品中干扰物质较多，所以相应的文章报道相对较少。基于以上考虑设立本项目，具体目的有以下四点：[list=1][*]建立高效液相色谱方法分离分析果冻类样品中叶酸含量的方法学；[*]通过色谱条件的摸索和优化，获得叶酸分离的最佳条件；[*]对样品前处理条件的摸索和调整，得到简便、快速、有效的样品前处理方法；[*]通过对本套方法学的验证包括线性、精密度、回收率、稳定性等实验，建立可靠、完善、准确的测定果冻类样品中叶酸含量的方法学。本方法的建立，可为检测果冻类样品中叶酸含量提供可靠和准确的手段，也为检测其他食品中叶酸含量提供参考资料，所以本研究具有社会效益和经济价值。[/list][b]1.4.2技术路线[/b] 色谱条件的建立（流动相配比、色谱柱选取、检测波长、流速、柱温） [img=,51,13]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/03/202403181710139504_8563_1626663_3.png[/img] 积分条件的建立 [img=,51,14]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/03/202403181710137869_6909_1626663_3.png[/img] 确立标准品、样品配制方法 [img=,51,13]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/03/202403181710142106_9538_1626663_3.png[/img] 方法学验证（线性回归、精密度、回收率、稳定性、样品含量测定）[img=,40,14]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/03/202403181710143330_4024_1626663_3.png[/img] 方法学的改进 [b]2.实验部分2.1实验样品的描述2.1.1样品性质[/b] 无色或淡黄色果胶类样品。常温下为胶态和液态混合物。样品名称（AminoVital Supersports；AminoVital-1；AminoVital-2）。[b]2.1.2样品中添加的主要物质[/b] 添加氨基酸，维生素类，甜味剂，食用香精，食用色素，有机酸。[b]2.1.3可能的干扰因素[/b] 根据配料表信息，氨基酸、甜味剂、色素等物质在样品中较维生素几十倍量添加，而维生素中又以维生素C添加量最大，叶酸添加量相当少。所以上述物质对叶酸分析造成较大的干扰。[b] 2.1.4标准品和样品保存条件[/b] 标准品避光保存于冰箱冷冻柜中。样品置于-18℃冷藏库中保存。[b]2.2实验条件2.2.1仪器和试剂及标准品[/b]仪器配置：岛津LC-10A系列 泵：LC-10ADVP真空脱气机：DGU-12A控制器：SCL-10AVP紫外检测器：SPD-10AVP自动进样器：SIL-10ADVP柱温箱：CTO-10ASVP积分仪：CR-8A和LC-Solution积分工作站试剂：磷酸二氢钾（GR），氢氧化钾（GR），甲醇（HPLC），氨水（GR），纯水（HPLC）标准品：叶酸标准品（Pteroylglutamic Acid），纯度：98.0～102.0％ 和光特级[b]2.2.2HPLC方法条件建立[/b]2.2.2.1流动相配制 0.05mol/L磷酸二氢钾（pH=6.33）：甲醇＝92：8（体积比），作为流动相。 称取7.0g KH[sub]2[/sub]PO[sub]4[/sub]置于1000mL烧杯，加入800mL纯水，溶解。通过滴加0.1mol/L KOH溶液，调节缓冲液pH值为6.33，转移至1000mL容量瓶中，加入80mL甲醇，再用纯水定容至刻度，摇匀。用0.45μm微孔滤膜过滤。装瓶。2.2.2.2检测器和检测波长 使用紫外检测器。使用λ＝285nm作为检测波长。2.2.2.3色谱柱 ODS柱作为本次实验的分离分析柱。2.2.2.4流速和柱温选 流速设0.6mL/min；柱温选定为35.0℃2.2.2.5色谱条件： 色谱柱：Shim-pack VP-ODS 4.6mm×150mm 粒度：5μm (P/N 228-34937-91) 流速：0.6mL/min 检测器：紫外检测器 波长：λ＝285nm 进样量：100μL 分析时间：100分钟（对于标准品测试仅需40分钟） 柱温：35.0 ℃ [b]2.3标准品配制（线性浓度配制）[/b] 标准品在使用前先放置于五氧化二磷干燥器至室温，并且避光保存。称取5.1mg叶酸（Pteroylglutamic Acid, 纯度：98.0～102.0％ 和光特级）标准品，置于50mL棕色容量瓶中，用0.5％氨水溶液稀释，定容，摇匀。作为贮备液。用移液管吸取叶酸贮备液1mL，移入100mL棕色容量瓶中，用0.5％氨水溶液稀释，定容，摇匀。浓度为1020ng/mL.（STD 5）。分别吸取STD 5溶液1mL, 1mL, 5mL, 5mL, 置于20mL, 10mL, 25mL, 10mL容量瓶中，用0.5％氨水溶液稀释，定容，摇匀。浓度分别为 51ng/mL.（STD 1）；102ng/mL.（STD 2）；204ng/mL.（STD 3）；510ng/mL.（STD 4）。[align=center][b]表二：标准品及对应的浓度[/b][/align][align=center][b]Table 2．Standard and their concentrations[/b][/align][align=center] [table=307][tr][td=1,1,72] [align=center]标准品[/align] [/td][td=1,1,72] [align=center]　[/align] [/td][td=1,1,72] [/td][td=1,1,91] 浓度(ng/mL)[/td][/tr][tr][td] [align=center]STD1[/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]51[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]STD2[/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]102[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]STD3[/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]204[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]STD4[/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]510[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]STD5[/align] [/td][td] [align=center]　[/align] [/td][td] [align=center]　[/align] [/td][td] [align=center]1020[/align] [/td][/tr][/table][/align][b]2.4精密度重复性[/b] 5个标准均连续进样6次，测试标准品相对标准偏差。[b]2.5标准品稳定性[/b] 5℃保存的半个月的叶酸标准品贮备液，放至室温。用移液管吸取1mL移入100mL棕色容量瓶中，用0.5％氨水定容，摇匀。再用移液管吸取上述溶液，移入10mL棕色容量瓶中。用0.5％氨水定容，摇匀。连同新试验配制的同浓度标准品一起测试。观察叶酸标准品在0.5％氨水溶液中的稳定性。 [b]2.6样品前处理步骤[/b] 精密称取样品5.00g置于25mL棕色容量瓶中，用0.5%氨水溶解，定容，摇匀。超声波超声10分钟。10000rpm离心10分钟。取上清液，用0.45μm微孔滤膜过滤。作为检液。[b]2.7样品配制[/b] 每个样品测试3次，样品分析后，在各样品中添加1mL STD5标准品，来确定样品溶液中叶酸的保留时间。样品分析时间100分钟。[b]2.8样品回收率[/b] 样品名称：Amino Vital ATP 19582 精密称取样品5.00g，置于25mL棕色容量瓶中，用0.5％氨水溶解，定容，摇匀。10000rpm离心10分钟。吸取上清液，用0.45μm微孔滤膜过滤。作为空白检液。 精密称取10.00g样品，置于50mL棕色容量瓶中，用移液管吸取5mLSTD 5 溶液，移入同一容量瓶中， 用0.5％氨水溶解，定容，摇匀。10000rpm离心10分钟。吸取上清液，用0.45μm微孔滤膜过滤。作为回收率试验检液。[b]2.9确定最小检测浓度[/b] 用移液管吸取STD3标准品1mL置于10mL棕色容量瓶中，用0.5％氨水溶解，定容，摇匀。浓度为20ng/mL.[b]3.结论3.1标准曲线[/b][align=center][b]表三：标准品浓度和峰面积[/b][/align][align=center][b]Table 3.Standard concentration with their peak area[/b][/align][align=center] [table=288][tr][td=1,1,72] [align=center]C(ng/mL)[/align] [/td][td=1,1,72] [align=center]　[/align] [/td][td=1,1,72] [align=center]　[/align] [/td][td=1,1,72] [align=center]平均面积[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]51[/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]16661[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]102[/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]33061[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]204[/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]66948[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]510[/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]168852[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]1020[/align] [/td][td] [align=center]　[/align] [/td][td] [align=center]　[/align] [/td][td] [align=center]331618[/align] [/td][/tr][/table][/align][align=center][img=,547,246]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/03/202403181710144650_39_1626663_3.png[/img][/align][align=center][b]图一：叶酸标准品浓度和面积线性关系图[/b][/align][align=center][b]Fig1.Linearity of HPLC method[/b][/align]叶酸标准品线性回归方程： Y＝325.58x+555.10 R=0.9999 式中Y是面积；x是浓度；R是相关系数。[img=,553,174]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/03/202403181710143198_4423_1626663_3.png[/img][align=center][b]图二：204ng/mL叶酸标准品色谱图[/b][/align][align=center][b]Fig 2.Chromatogram of folic acid standard (204g/mL)[/b][/align][b]3.2精密度[/b]每个标准品重复测试6次，各相对标准偏差见表四：[align=center][b] [/b][/align][align=center][b]表四：叶酸标准品精密度测试数据[/b][/align][align=center][b]Table4.Percise of standards[/b][/align][align=center] [table=288][tr][td=1,1,72] [align=center]C(ng/mL)[/align] [/td][td=1,1,72] [align=center]　[/align] [/td][td=1,1,72] [align=center]　[/align] [/td][td=1,1,72] [align=center]RSD%[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]51[/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]1.13%[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]102[/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]1.20%[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]204[/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]1.53%[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]510[/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][td] [align=center]0.22%[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]1020[/align] [/td][td] [align=center]　[/align] [/td][td] [align=center]　[/align] [/td][td] [align=center]0.34%[/align] [/td][/tr][/table][/align][b]3.3样品测试结果表五：HPLC方法测定的果冻类样品中叶酸含量Table 5. Folic acid content in gel samples(μg/100g) by HPLC[/b] [table][tr][td=1,1,516] 样品名 HPLC测定量(μg/100g)[/td][/tr][/table]1.Amino Vital 31.7Supersports 2. Amino Vital-1 17.63.Amino Vital-2　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 17.9 [table][tr][td=1,1,516] [/td][/tr][/table][b]3.4 回收率[/b]样品名：Amino Vital 　ATP 19582[b] 表六：添加回收率测定Table 6. Recoveries of folic acid to sample[/b] [table][tr][td=1,1,504] Amino Vital 回收率[/td][/tr][/table]1． 106％2 107%3． 109％ [table][tr][td=1,1,504] 平均回收率为107±1.5％[/td][/tr][/table][b] [/b][img=,528,162]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/03/202403181710147516_2748_1626663_3.png[/img][align=center][b]图三：回收率测试空白图谱（Amino Vital ATP 19582）[/b][/align][align=center][b]Fig 3.Recovery test chromatogram Blank(Amino Vital )[/b][/align][img=,528,164]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/03/202403181710146335_2905_1626663_3.png[/img][align=center][b]图四：回收率测试添加叶酸标准溶液图谱（Amino Vital ）[/b][/align][align=center][b]Fig 4.Recovery test chromatogram by adding folic acid standardsolution(Amino Vital )[/b][/align][b] 3.5 HPLC法与微生物法测试结果比较[/b]日本的国家标准是使用微生物方法测定叶酸的含量。微生物方法测定的是食品中总的叶酸含量，应该比HPLC方法测的的值要大些。为了比较HPLC方法的准确性，通过对应样品比较得知。[b]表七：微生物测定值与HPLC测定值比较Table 7. Comparison of the result of mircobiology method and HPLC method[/b] [table][tr][td=1,1,516] 样品名 微生物测定值(μg/100g) HPLC测定值(μg/100g)[/td][/tr][/table]1.Amino Vital 44 31.7Super sports 2. Amino Vital 18 17.6 3.Amino Vital　　　　　　　　　20　　　　　　　　 　17.9 [table][tr][td=1,1,516] [/td][/tr][/table][b]3.6总体评价及方法适应性[/b] 通过以上实验以及对实验数据的分析和比较，得出本方法线性拟合良好， 精密度高，最小检测限低。样品添加回收率在107±2％内，并且样品测试结果与微生物方法测试结果作比较，两者数据相近。本方法简便，前处理相对简便，可以为检测果冻类样品中叶酸含量提供可靠和准确的分析手段，同时也为其它食品中叶酸含量的检测提供参考。[b]4.讨论4.1分析条件选取 4.1.1流动相 [/b]流动相在HPLC分离分析中起着至关重要的作用。 过实验确定了本次实验的流动相。原因如下：[list=1][*]叶酸在碱性水溶液中溶解且稳定性较好，而大多数ODS柱在pH=2.0～7.0范围内使用，所以本文使用的流动相pH值在6.3比较适合[*]通过实验发现水相和甲醇的配比为92：8（v/v）分离效果最好。样品中叶酸和前面的杂质完全分离。[*]使用磷酸二氢钾和氢氧化钾来调节离子浓度和pH值。这时色谱峰形呈正态曲线，柱效最高。[/list][b]4.1.2检测器和检测波长[/b] 叶酸中有苯环和碟酰结构，图五。所以可以用紫外检测器来检测。虽然叶酸中有共轭结构，但是通过实验发现Pteroylglutamic Acid 无荧光吸收。所以不能使用荧光检测器。 由于条件限制，无全波长扫描的紫外光度计和二极管阵列检测器。所以通过文献和实验来找最佳波长。根据报道[sup][/sup]，叶酸在265nm，285nm至290nm以及365nm处有极大吸收。在265nm，285nm，290nm，365nm分析同一叶酸标准品，发现λ＝285nm处峰形最高。[b] [/b][align=center][img=,363,124]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/03/202403181710151110_6182_1626663_3.png[/img][/align][align=center][b]图五：叶酸的分子结构[/b][/align][align=center][b]Fig 5. Molecular structure of folicacid (Pteroylglutamic Acid)[/b][/align][b]4.1.3 进样量[/b] 所以根据本实验室条件，100μL的进样量适合并且满足实验要求。[b] 4.1.4分析时间[/b] 由于标准品在30分钟内就已出来，所以标准品采集时间仅需30分钟。但是样品中成分复杂，一定把样品中组分全部出尽才能进下一个样品。通过实验样品的采集时间为100分钟。[b]4.2试样标准的配制讨论 4.2.1样品试液选取[/b] 原则：确保叶酸在溶液中溶解且不被破坏。 实验证明：叶酸不溶解于纯水中，在酸性溶液中不稳定。而使用0.5％氨水溶液较好地溶解叶酸，而且通过稳定性实验，叶酸在该试液中稳定，峰面积无显著变化。[b] 4.2.2标准品浓度选取[/b] 本实验样品的浓度恰好在线性范围内，而且标准品浓度与响应值呈一元线性关系。[b] 4.2.3样品前处理[/b] 样品使用0.5％氨水溶液溶解。由于样品呈液胶状，超声波超声可以击碎胶状物质，使其分散。通过实验发现10分钟超声可以使之形成均一、稳定的溶液。[b]5.后续工作及前景[/b] 由于条件的限制和目的要求的局限，本文只对一种叶酸化合物进行分析测试，而食品中的叶酸形式有五种之多。通过流动相摸索和梯度洗脱完全能够使不同形式的叶酸得到分离，以此扩大分析的范围。同时叶酸分析也可以通过色谱条件的摸索与其它物质（尤其是水溶性维生素）一起分析，达到提高效率的目的。为了使灵敏度提高，高效能的检测器的选择有着可观的前景。现在困扰我们分析叶酸含量的主要问题是样品中叶酸含量甚微，仅仅是ng级。紫外检测器最小检测限也就是这个级别。本文也指出：一味地扩大样品称样量或增加样品进样量会导致噪音增大，同样不能提高灵敏度。所以象一些专属性较强的检测器如荧光检测器，电化学检测器是考虑的一个方向。荧光检测器的灵敏度可以达到pg级。对于荧光检测器不能检测Pteroylglutamic Acid，是由于该物质没有荧光发色基团。我们可以通过柱前或柱后衍生的方法让其接上荧光发色基团，或者是柱前分离柱后通过反应液改变它的结构，提高检测的灵敏度。而使用电化学检测器需要摸索诸如电离电压，流动相等等条件。由于电化学检测器它的专属性很高，不容易受到干扰物质的影响。它应该是一个发展方向。从样品前处理的角度考虑，前处理步骤越少，分析时间更短，目标物在处理时损失越少，相对实验成本越低是改进原有实验方法的目标。一般对于含有复杂成分且目标分析物含量甚微的样品要去除干扰物质然后富集待测组分。固相萃取技术（solidphase extraction, SPE）应当是一个比较好的样品前处理方法。但是固相萃取技术的一个弱点是样品容易损失，回收率不高引起准确性不高。荷兰的Knoing教授使用亲和层析（affinity chromatography）的方法来提高待测物富集和纯化的效率。可见食品中叶酸分析应该还是一个难点，同时又是一个热点。快速高效准确的方法会随着仪器性能的进步和方法的进一步完善成熟而成熟。[b]6.参考文献[/b][list=1][*]中国药典编委会．中国药典（2000）二部，北京：化学工业出版社，2000.[*]Johan D.M. P. Jelena A. J. Sofia B.H., Development of aSimplified Method for the Determination of Folates in Baker’s Yeast by HPLCwith Ultraviolet and Fluorescence Detection. J.Agric. Food Chem. 2005,53:2406-2411.[*]Douglas L.H. RandyL.W. Michael G.Z., Determination ofnative folates in milk and other dairy products by high-performance liquidchromatography. J.Chrom. 1988, 449 : 271-279.[*]Stefania R. Liisa T.V. AlteroA., Determination of folate vitamersin food and in Italian reference diet by high-performance liquidchromatography.J.Chrom A . 1999, 855: 237-245.[*]Konings EJM，A validated LC method for the determinationof folates in vegetables, milk powder, liver and flour.J AOAC Int. 1999, 82: 119-127.[*]Eduward Chu. James C.Drake. Donna Boarman, Mechanism of Thymidylate Synthase Inhibition by Methotrexate inHuman Neoplastic Cell Lines and Normal Human Myeloid Progenitor, J. Biochem.1990,265: 8470-8473.[*]Pamela J.Bagley Jacob selhub,Analysis of Folate Form Distribution by Affinity Followed by Reversed-PhaseChromatography with Electrochemical Detection, Clin. Chem. 2000, 46: 404.[*] FreislebenA. Schieberle P. Rychlik M., Comparison of folate quantification in foods byhight-performance liquid chromatography-fluorescence detection to that bystable isotope dilution assays using high-performance liquid chromatography-tandemmass spectrometry. Anal. Biochem. 2003, 315: 247-255.[*] 赵永芳.生物化学技术原理及应用(第三版)．北京：科学出版社，2003.10[*] 吴坤等.营养与食品卫生学（第五版）．北京：人民卫生出版社，2005.[/list][hr/] ①PteroylglutamicAcid②检测限是以叶酸（Pt-Glu）来计算。③微生物测定值是日本食品研究所用微生物法测定。

[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=150169]GBT 23209-2008 奶粉中叶黄素的测定 液相色谱-紫外检测法[/url]

各位老师，最近我们实验室要扩项，BOSS让加上叶绿素这一个项目。我的问题是，叶绿素属于哪个评价标准里规定的范畴呢？ 我查到相关资料，现行的地表水质量标准GB3838-2002的上一版本，99年的那版里有湖泊水库特定项目里，包括了叶绿素，并对其进行限值规定。现行版本里给删除了，那我要做叶绿素，我得用什么标准给他评价呢？限值又是多少呢？

分享标准，均自网络收集，上传者不保证资料完整性以及版权。下载仅供研究，请勿用于其他用途。研究完毕请及时删除，若有正版需求，请联系出版单位。GB 5413.16-2010 婴幼儿食品和乳品中叶酸(叶酸盐活

[size=16px]　　叶绿素测定仪是一种用于测量植物叶片中叶绿素含量的设备。叶绿素是植物中进行光合作用的关键色素，它们吸收光能并将其转化为化学能以支持植物的生长和发展。以下是一般情况下使用叶绿素测定仪测量植物叶绿素相对含量的步骤：　　样本准备： 从要测量的植物中选取代表性的叶片样本。这些叶片应该是健康的、没有损伤的，并且尽可能避免太老或太嫩的叶片。　　叶片处理： 如果需要，将叶片处理成较小的块状或碎片，以确保测量时样本的均匀性。同时，避免过度损伤叶片，因为这可能会影响叶绿素的测量结果。　　提取叶绿素： 使用适当的提取液(比如乙醇、乙醚等)将叶片中的叶绿素提取出来。提取的过程通常需要在低温下进行，以防止叶绿素的降解。　　测量光吸收： 将提取液中的叶绿素溶液置于叶绿素测定仪中。这种仪器通过照射样本并测量样本对不同波长光的吸收来确定叶绿素的含量。最常见的方法是使用分光光度计，它可以测量不同波长下样本吸收的光强度。　　建立标准曲线： 使用已知浓度的叶绿素标准溶液，进行一系列测量以建立标准曲线。标准曲线可以用来将样本吸收的光强度值转换为叶绿素浓度值。　　测量样本： 使用同样的方法测量你的样本，获取其吸收的光强度值。　　计算叶绿素含量： 根据标准曲线，将样本的光吸收值转化为叶绿素浓度。如果你感兴趣的是叶绿素的相对含量，可以将不同样本的叶绿素浓度与标准样本进行比较。　　请注意，使用叶绿素测定仪需要一定的实验操作技能和基本的化学常识。在操作之前，云唐建议仔细阅读仪器的操作手册，并根据实际情况调整实验步骤。另外，确保在实验过程中遵循安全操作规范，使用适当的防护措施。[/size]

有做农产品中阿维菌素液相法检测的同仁吗？GB23200.19中用丙酮提取，C18净化柱净化后，感觉还是很脏，上机十分钟后都回不到基线附近高度，而且基质干扰太大，严重影响判断，请问大家是怎么消除基质中叶绿素等的干扰呢？

[size=16px]　　叶绿素测定仪是一种用于测量植物叶片中叶绿素含量的设备。它在植物生理学、生态学和农业研究中非常有用。然而，是否认为叶绿素测定仪好用取决于具体的使用情境和需求。　　以下是一些使用叶绿素测定仪的优点和考虑因素：　　优点：　　快速准确： 叶绿素测定仪能够快速测量叶片中的叶绿素含量，提供准确的结果，节省时间和人力成本。　　非破坏性： 使用叶绿素测定仪通常不需要摘取植物叶片，因此不会对植物造成破坏，可以进行长期监测。　　数据量大： 叶绿素测定仪能够高通量地收集数据，适用于大规模实验和研究。　　定量分析： 通过叶绿素测定仪，您可以获取叶绿素含量的定量数据，有助于更深入地理解植物生长和环境因素之间的关系。　　考虑因素：　　成本： 叶绿素测定仪可能需要较高的投资成本，包括设备购买和维护费用。　　操作复杂性： 操作叶绿素测定仪可能需要一定的技术培训，特别是对于没有相关经验的人员。　　适用范围： 叶绿素测定仪主要用于叶绿素含量的测量，如果您需要其他植物参数的数据，可能需要其他类型的设备或方法。　　样本处理： 样本的准备和处理可能会影响测量结果的准确性，需要注意标准化的操作步骤。　　综合考虑以上因素，如果您在植物研究、农业实验或环境监测等领域需要准确测量叶绿素含量，叶绿素测定仪可能会非常有用。然而，在购买之前，云唐建议您仔细评估您的研究需求、预算以及操作和维护的可行性。[/size]

今天从植物叶子中用甲醇提取了马兜铃酸成分，通过过滤，微孔滤膜过滤的方法处理，得到5ml左右黑乎乎的溶液（但是逆光看是澄清的），请这样可以直接进hplc么？我们老师说可以，但是我有点担心。希望大虾们给点建议，谢谢了！我用的是安捷伦1100。

按照《水和废水监测分析方法》（第四版）中叶绿素a的测定时要用到组织研磨器，以前没有接触过此类小设备，什么样的组织研磨器适合做叶绿素a！