液相固相

大家好，我准备用液相做阿维菌素，sn/t2114-2008，里面用到了固相萃取柱：SPE C18，60mg/3ml的，我们的样品有点多（40），这个柱子有点贵（500/个）。以前我也没弄过，我想请教的是：C18固相萃取柱能重复使用吗？还是一个样品就得用一根柱子？还有就是60mg/3ml是什么意思？60mg是说填充物的质量，3ml是说流速？

液相微萃取与固相微萃取的异同属于现代分离计术范围,小妹在此先谢过了哈！

高效液相色谱手性固定相研究进展摘要：对近年来高效液相色谱手性固定相的研究进行了综述。重点介绍了手性固定相的分类、拆分机理和应用的新进展。讨论了各类手性固定相优缺点，提出了目前存在的问题、今后的研究方向和重点。 关键词：高效液相色谱；手性固定相；拆分机理

最经在做细胞内辅酶Ⅰ提取研究，想通过制备型液相来纯化经高压均质机破壁和粗提取的辅酶。但是不知道该制备型液相固定相怎么选择，选择哪种填料好

最经在做细胞内辅酶提取研究，想通过制备型液相来纯化经破壁和粗提取的辅酶。但是不知道该制备型液相固定相怎么选择，选择哪种填料好

请问有人用过在线固相萃取液相色谱仪吗？上面用的固相萃取柱是不是就是截短的普通色谱柱？能不能用保护柱来代替？还是说对填料粒径有要求，太小容易堵，一般在10-20um？一般用什么品牌的SPE柱比较多？Waters的一根HLB材质的Online-SPE柱好贵，要五六千，用不起，有便宜点的SPE柱品牌推荐吗？

目标物分子从[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]流动相转移进入固定相或从固定相移出重新进入流动相过程，会引起色谱峰形的明显扩散。流动相中目标物分子的迁移速度依赖于它在液固色谱的固相上的吸附和解吸，当分子被吸附在吸附剂活性作用点上时，它再从表面解吸会有较大阻力，当它最后解吸时必然会落在已随载液前行的大部分分子之后。

谁有关于[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]或是液相色谱固定相制备方面的文献或是综述啊？可否给小弟一份，邮箱：phnayitian@163.com谢谢了！！！

[color=#444444]谁有液相色谱固相萃取柱相关资来，对于3ml.0.5g 的柱子可以和1g 6ml 互用吗，可以用60mg ,3ml 的代替吗[/color]

想问一下各位关于液相出峰时间的估计问题``~~~~~~~~~~比如`我用反相色谱` 流动相乙腈：水50：50，15分钟出峰，现在想推后到20分钟出峰`怎么估算大概需要加入的水量，（样品易溶于乙腈）`望赐教``谢谢！！各位大侠`这只是个例子`我就是想知道下怎么去估计这个东西`只需要知道一个大概的东西`一点一点试太痛苦了`：（ 指教一下我吧：（

本人做人工湿地实验，现想测下里面灰岩和钢渣的一些离子成分和物质含量，钢渣测Ca2+,Fe2+,Al3+,NH4+，Mn2+,Na+,K+,NO2-,NO3-,HPO42-离子的含量，灰岩测Ca2+,PO43-，NH4+,NO2-,NO3-,离子的含量并测其中差劲基磷酸钙和磷酸氮盐含量哪位知道样品怎么处理和先取什么样的柱子和柱温，流动相成分，流速等的麻烦告诉下，固体样品我不知道怎么处理才能用液相色谱测，是消解还是提取？对液相色谱不太懂，拿别人那去测，得告诉别人怎么处理样品和测试方法。[em09505]

最近想要用高效液相色谱-固相微萃取做点东西，可是没有什么进展，麻烦各位老师指点迷津！谢谢！ 我尝试了做不同的样品，可基本上是没检出什么东西来。 1.黄胺类药物残留，用的是PA和PDMS纤维头，萃取30分钟，静态解吸3min，基本只有比燥声大一点的峰。 2.三聚氰胺 3.黄曲霉毒素 都以失败告终。 最后我就直接按人家发表的文献重做了一下氨基甲酸酯农药，结果还是很不如人意啊！ 请问用高效液相色谱-固相微萃取是不是所有用液相能检测的物质都能用固相微萃取来检测吗？特别是残留，还有做的时候在最要注意的是什么？

液相色谱测法莫替丁有关物质，头一针走溶剂30分钟正常，第二针进样30分钟出现鼓包，以后各针都有什么原因，求助

[color=#444444]最近液相色谱，有时会有鼓包（峰宽较宽的小峰），但是时间不确定，不知道是什么原因[/color]

蛋白质类高效液相色谱手性固定相[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=95569]蛋白质类高效液相色谱手性固定相[/url]

T_T有没有大虾在啊，我想问下，谁晓得安捷伦液相色谱实用工具里的固件更新是怎么回事啊？第一次自己装工作站，找不到四元泵，安装补丁时用错了盘，安装成了实用工具，在实用工具里，把四元泵给固件更新了一下，更新之后好像配不上套了，这个要怎么恢复到原来的啊……谁晓得诶，恳请各位大虾帮忙，虾米先谢过……

本人做人工湿地实验，现想测下里面灰岩和钢渣的一些离子成分和物质含量，钢渣测Ca2+,Fe2+,Al3+,NH4+，Mn2+,Na+,K+,NO2-,NO3-,HPO42-离子的含量，灰岩测Ca2+,PO43-，NH4+,NO2-,NO3-,离子的含量并测其中差劲基磷酸钙和磷酸氮盐含量哪位知道样品怎么处理和先取什么样的柱子和柱温，流动相成分，流速等的麻烦告诉下，固体样品我不知道怎么处理才能用液相色谱测，是消解还是提取？对液相色谱不太懂，拿别人那去测，得告诉别人怎么处理样品和测试方法。

液相测法莫替丁有关物质，头一针溶剂正常，第二针进样30分′钟出现鼓包，以后针针都有，影响检测什么原因

请问有用固相微萃取液相色谱法检测磺胺类抗生素的啊

如题,液相在线脱气机(DGU)漏液,请问该如何解决?

有谁用液相做过 胡萝卜素，用的什么固相萃取柱，看标准上是 三氧化二铝，但是没有注明是什么性质的？中性的行不行？

我的1260安捷伦液相色谱仪，扎针位置不固定，进样器老是出错，怎么修？

高效液相色谱常见问题与解答1 何谓反相柱、正相柱？答：“反相”和“正相”的概念是液相色谱法早期提出的概念，当时键合相色谱柱尚未出现，固定相被涂覆在载体表面，极易流失，为此科学家对流动相使用给出了合理的建议：流动相极性与固定液极性应具有较大差别，以减少固定液流失。固定相极性弱于流动相时的液相色谱法被称为反相色谱法，固定相极性强于流动相时的液相色谱法被称为正相色谱法。尽管目前键合相色谱柱已成为主流，但这一概念在色谱方法开发、预测出峰顺序等方面具有重要意义。由上面的介绍可知具体的色谱方法、色谱柱属于正相还是反相不仅取决于固定相极性，同时还取决于流动相极性。C18(硅胶键合十八烷基硅烷)、C8(硅胶键合辛基硅烷)、PH(硅胶键合苯基硅烷)等色谱柱，由于固定相极性极低，比目前已知的任何流动相的极性都要低，因而是标准的反相柱；Silica(硅胶)、NH2(硅胶键合氨丙基硅烷)具有较高的极性，主要用于分离带有极性基团的化合物，所用流动相的极性通常低于这些固定相，因而是标准的正相柱。CN(硅胶键合腈丙基)的极性适中，当流动相极性超过CN时，它属于反相柱，反之则是正相柱。2 色谱柱规格对分析结果会产生何种影响？答：色谱柱内径决定载样量，载样量与内径的平方成正比；色谱柱长度与塔板数成正比，与柱压成正比；粒径影响涡流扩散相，粒径越小涡流扩散相越小，柱效越高，粒径与柱效近似成反比；粒径越小，压力也越大，压力与粒径的平方成反比。填料孔径对分析对象的分子量有限制，当孔径为分析物尺寸的5倍以上时，分析物才能顺利通过孔隙，孔径处于60~120 Å的色谱柱适用于相对分子量小于10000的分析物，孔径为300 Å的色谱柱可以满足分子量处于10000以上的大分子化合物分析。3 液相色谱分析中如何才能提高分离度？答：下式为分离度计算公式http://www.dikma.com.cn/Public/Uploads/images/R.JPGN：柱效(Efficiency)反映色谱柱性能，柱效越高，分离度越好。在其他条件恒定的情况下，塔板数增加一倍，分离度仅提高40%。操作中，可通过下面两种方式增加塔板数进而提高分离度：其一，使用长柱或双柱串联，但也会使分离时间大大延长；其二，使用细粒径填料的色谱柱，但这需要耐更高压力的液相色谱系统。相比之下后者更为可取。α：选择性(selectivity)是指色谱柱-流动相体系分离两个化合物的能力。选择性主要与固定相、流动相组成以及柱温等因素有关，与保留值也密切相关，其中固定相和流动相组成影响较大。以最常见的反相模式为例，反相柱(包括C18、C8、PH等)是以分配作用对化合物进行保留的，不同化合物的分离是基于它们在键合相与流动相中分配系数的差异，如果两种化合物的水溶性、在烷烃-水体系的分配系数等方面存在明显差异，那么这些化合物通常是能够利用反相柱达到分离；PH柱对具有苯环的化合物具有特殊保留。正相模式下，硅胶柱、胺基柱、氰基柱与带有极性基团的化合物之间存在极性相互作用，对化合物的基团具有选择性，常常用于结构类似物、异构体化合物的分离。流动相方面，降低流动相的洗脱强度通常可以增大分离度；而有机溶剂类型也会影响分离，比如反相条件下，乙腈和甲醇的选择性就存在很大差异，这种差异需要在实践中摸索，但无论如何，多种溶剂类型带给我们更多的实现分离的可能。k：随着容量因子k的增大，分离度也随之增加，这种影响在k值较低时非常明显，当k值大于10时，k值增加对分离度的影响就不再显著，这就告诫无原则地提高k值以增大分离度是没有意义的。增加键合相密度能够提高k值；另外改变键合基团类型也能改变k值，比如在反相色谱中，随着键合相碳链长度的增加，k值逐渐增大。4 色谱峰的峰形是怎样衡量的？有何规定？理论上讲，色谱峰应符合高斯曲线分布，然而实际上任何色谱峰都对高斯曲线分布存在一定的偏离，亦即不对称。峰拖尾可以用不对称因子(As)或USP拖尾因子(Tf)来衡量，显然不对称因子的说法更准确，因为色谱峰存在前延、完美对称、拖尾三种形态。一般来说，制药行业以USP拖尾因子作为评测标准，而其他行业则多采用As来测定峰形。http://www.dikma.com.cn/Public/Uploads/images/tuoweiyinzi.JPG对于药物分析，通常有明确的规定，Tf应处于某一范围之间，比如我国药典规定某些药物的拖尾因子应处于0.95~1.05之间。其他行业尚无较为明确的规定。5 什么是梯度洗脱？什么情况下使用梯度洗脱？答：为了改善分析结果，某些操作需要连续改变流动相中各溶剂组分的比例以连续改变流动相的极性，使每个分析组分都有合适的容量因子k，并使样品种的所有组分可在最短时间内实现最佳分离，这种洗脱方式称为梯度洗脱。梯度洗脱可在下列情形中发挥重要作用：A 在等度下具有较宽k值的多种样品分析。B 大分子样品分析。C 样品含有强保留的干扰物，在目标化合物出峰后设置梯度洗脱，将干扰物洗脱出来，以免其影响下一次数据采集。D 分析方法建立时，不知道其洗脱情况，使用梯度洗脱，找出其较优的洗脱条件。6 何谓封端？封端的意义是什么？硅胶表面的硅羟基(Si-OH)密度为8 μmol/m2，由于空间位阻的存在，硅烷化键合反应最多只能覆盖50%的硅羟基，超过一半的硅羟基是活性硅羟基。这些硅羟基与化合物的极性基团存在极性相互作用和离子交换作用，为化合物的保留增加了不被期望的作用力，往往会影响峰形。用短链氯硅烷（如三甲基氯硅烷）键合活性的硅羟基，可以减小甚至消除这种影响，这种操作被称为封端(Endcap)。封端处理的意义：抑制了特异性吸附，提高了色谱峰的对称性，并改善了分离效果；在一定程度上掩蔽了硅胶表面，使其对碱性环境的耐受性增强；通过空间位阻掩盖了键合反应形成的Si-O-Si键，使其对酸性环境的耐受性增强；可能会影响对极性样品的选择性。7 柱床塌陷和键合相塌陷柱床塌陷是指色谱柱使用一段时间后色谱柱入口处的柱床产生可见的空隙。该空隙的存在增大了死体积，会导致色谱柱柱效下降。造成柱床塌陷的原因如下：其一，色谱柱填装时的压力过低，填装不紧密，在高压下使用一段时间，开始出现空隙；其二，操作压力超出色谱柱填料的耐压值，导致填料颗粒破碎产生空隙；其三，流动相溶解填料导致空隙出现。键合相塌陷是指由于流动相极性与键合相极性相差太大，键合相无法在流动相中充分伸展而倒伏、缠结在一起，比如普通C18在纯水相条件下。相塌陷会导致色谱柱对化合物的保留不足。8 系统压力升高的原因及排除使用者通过观察仪器的系统监测掌握系统的压力，如果发现压力偏高，不要立即认为“柱压高了”，因为系统压力通常由柱前压力、色谱柱压力和流通池压力加合而成。此时正确的做法是：在操作条件下，测定系统压力，得到p总；卸下色谱柱，在相同条件下，测定柱前压力，得到p前；用两通将泵流出管路与流通池连接，在操作条件下，测定压力，得到p(前+后)。通过计算找出压力高是来自柱前、色谱柱还是柱后。http://www.dikma.com.cn/Public/Uploads/images/press%20increase.bmp以上情形假设没有安装保护柱，如果安装了保护柱，压力升高时应先测试保护柱的压力，以便确认问题是否来自保护柱。9 系统压力不稳定通常情况下，泵压的变动值超过了0.5 Mpa，系统压力就属于不稳定的范畴。导致系统压力不稳定的最直接原因为流动相流量和组成输出的不稳定，而导致流动相输出不稳定的原因通常包括溶剂互容性较差、系统漏液、系统存在气泡以及输液系统部件工作失效等等。下面将介绍排除“系统压力不稳”的方法。http://www.dikma.com.cn/Public/Uploads/images/yalibuwen1.bmphttp:

为什么使用安捷伦1200液相40分钟后股包（流动相、柱子都重新换过)进样是异丙吡唑酮反应液

高效液相色谱手性固定相研究进展 作者:寿崇琦，张志良，赵春宾，邢希学，李关宾，陈立仁摘要：对近年来高效液相色谱手性固定相的研究进行了综述。重点介绍了手性固定相的分类、拆分机理和应用的新进展。讨论了各类手性固定相优缺点，提出了目前存在的问题、今后的研究方向和重点。 关键词：高效液相色谱；手性固定相；拆分机理 随着生物工程和生物科学的发展，手性拆分和测定引起了人们的普遍关注。尽管对映体间物理化学性质几乎完全相同，但它们的生化和药理作用却往往不同。这是因为生物本身内部的核酸、蛋白质及多糖都具有与其功能相适应的结构，它们常常对扬长避短一化合物的两种对映体表现出不同的响应。例如具有镇静作用的反应停(thalidomide，酞胺哌啶酮)，其有效成分是R构型，而S构型则具有致畸作用⋯ 。据统计，常用的2OO种药物中，大约有120种至少含有一个手性中心。而这些手性药物中有80％～90％以外消旋体形式在市场销售，存在巨大的潜在危险性。因此，对映体的拆分与识别对于生命科学和药物化学研究以及人类的健康具有十分重要的意义。 目前用于手性分离的方法主要有毛细管电泳法、薄层色谱法、亚临界及超临界流体色谱法、[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]法和液相色谱法。近年来，高效液相色谱法取得了令人瞩目的进展，已成为对映体拆分强有力的手段之一。而其中所用的手性固定相的是能否进行手性分离的关键。 l 手性固定相的分类 虽然液相色谱常被分为不同的分离模式，但实质上所有的分离模式都基于两个最基本的因素：即固定相的结构和组成，以及决定分离机理的固定相与流动相相互作用的性质。因而手性固定相(CSP)的制备则是手性分离的关键。目前所研究的HPLC-CSP主要可分为下列几类： 1．1 蛋白质手性亲和固定相 多数蛋白质CSP的分离机理目前尚不十分清楚，但是蛋白质CSP的手性识别能力可以归结为它们独特的空间立体结构特征。尤其是在对映体的手性识别过程中，三级结构所造成的疏水性口袋、沟槽或通道对手性拆分具有十分重要的意义。 七十年代初已有人将牛血清白蛋白键合在琼脂糖上，制成液相色谱用手性填料，拆分了DL-色胺酸。八十年代初，Alhnmark和Hellnanssor分别将BSA和a-酸性糖蛋(a-AGP)键合到微粒硅胶上制成HPLC用的CSP，商品名为Resolvosil和Enantio Pac。Hermanssor和Schill等以Enantio Pac柱拆分了酸、胺和β-氨基醇类药物如萘普生、双异丙吡胺、麻黄素、可卡因、阿托平等几十种药物，拆分效果良好，分离系数(a)可达1.1～4.0，柱的稳定性好，对温度和有机溶剂有较好的耐受性，长期保存在异丙醇中(12个月)，对拆分效果无明显影响。Resolvosil柱可用于拆分氨基及其衍生物、芳香亚砜、二苯乙醇及多种药如安定、华法林等。在国内，张鹏等用万古霉素制备的手性固定相用于对布洛芬手性对映体的拆分，也取得了不错的效果。周华等用L-脯氨酸衍生的衍生物作为高效液相色谱手性固定相，用于对4种N-3，5-二硝基苯甲酰-DL-氨基酸甲酯对映体色谱拆分，结果显示对映体选择性在1.04一1.18之间。兰州化学物理研究所的候经国在这一方面也做了深入研究。 1．2 环糊精型手性固定相 手性固定相拆分对映体的另一途径是将手性空穴键合到固定相表面，由此产生的客体-受体间的相互作用决定对映体的拆分效果。最常用的是环糊精手性固定相，环糊精手性固定相的分离机理主要基于包含型络合过程，这一机理表示分子的非极性部分被吸引到非极性空穴中，当被分离的分子存在芳香基团时，由于芳香基团与糖苷键上氧原子的作用产生立体选择的趋向，而线性或无环的烷烃以随机方式占据环糊精的空穴。 Ward将β-CD通过6～10碳的间隔基键合到微粒硅胶上，商品名Cyclobond I。这种CSP象切去顶端的锥形圆筒，边缘有羟基，内部为疏水性的内腔，只有当分子的大小正好使非极性部分进入腔内，极性基团与边缘的羟基产生较强的作用才能拆分。某些具有萘环和双环化合物可得到良好的拆分，如丹酰氨基酸、巴比妥类、乙内酰脲、金属茂等。单环化合物如扁桃酸、酪氨酸、麻黄素等也可拆分，使用范围广，仅次于Pirkle型GSP。流动相为甲醇-水或乙睛-水，γ-CD无拆分作用，a-CD仅对小分子有拆分作用。唐课文等合成了一种烷基化和硅烷化β-环糊糖手性固定相，用其分离了醇、酮、烯烃等一些对映体，取得了很好的效果。辛梅华等人将β-环糊精进行了乙酰化用于对肾上腺素类对映体的测定，也得到了不错的结果。 1．3 配体交换型固定相 这类手性固定相拆分对映体与手性配体流动相的拆分机理相同，只是手性配体键合到固定相基质成为手性固定相而已。其配体分子亦为具有手性活性的氨基酸如脯氨酸，金属离子多用Cu2+。Davank0v将L-脯氨酸键合到树脂上，经吸附CU(Ⅱ)、Ni(Ⅱ)或Zn(Ⅱ)后，可拆分氨基酸对映体。Gubity将L-脯氨酸和L-缬氨酸通过间隔基键合到硅胶上，制成HPLC用CSP，以CuSO4水溶液处理后即可用于氨基酸和二肽类的拆分。此类CSP已有四种商品：Chiracel WH，WM和Chiral hypro-Cu，Val-Cu。除上述氨基酸外，用为CSP键合基的尚有：L-l，2-二氨丙烷、β-羟基氨基酸、l-麻黄素、L-组氨酸、L-苯丙氨酸、L-氮杂-2-环丁烷羧酸、L-酒石酸、L-2-哌啶酸、及(一)-反-1，2-环已二胺。拆分化合物包括氨基酸、二肽、a-羟基酸及有关药物如a-甲基多巴、甲状腺激素等，a值1.10—8.0，配位基交换色谱的流动相多为水或磷酸、乙酸氨缓冲液，有时加入一定量的有机溶剂(乙腈)。为防止铜离子的流失，在流动相中加入适当的CuSO4，此类CSP亦可用于制备性分离。

[size=16px][font=Times New Roman][b]摘　要:[/b] 采用基质固相分散(MSPD)代替液液分配和固相萃取, 从蔬菜水果中提取、净化10种常用杀菌剂农药残留, 用C18硅胶交联剂作为固相吸附剂, 乙酸乙酯作为洗脱液, 用HPLC /PDA和LC - MS进行分析检测。10种杀菌剂在015～5 mg/kg含量的添加回收率在65%～110%之间, 相对标准偏差小于10% , 使用HPLC、PDA和LC - MS的检出限分别在0102～012 mg/kg和01002～0101mg/kg之间。该方法节省溶剂, 提取和净化一步完成, 适用于新鲜水果和蔬菜中10种杀菌剂的残留分析。[/font][/size][size=16px][font=Times New Roman][b]关键词:[/b] 基质固相分散(MSPD) 杀菌剂 蔬菜 水果 高效液相色谱 液相色谱- 质谱[/font][/size]

相对成熟的液相检测方法，之前检验没有问题，这两次的检验突然在主峰最后的位置鼓起一个小包，换了色谱柱、流动相都没有用，换了仪器就好了，想知道仪器哪方面出问题了可能会引起这个问题呢

液相色谱看似是常见仪器，单套进口价格在20万元左右，然而其技术含量并不亚于生产1台小汽车，液相色谱完全是典型的高技术密集产业，其核心部件涉及几十家下游产业，基本被外资企业垄断，如检测器所用的氘灯，光栅，六通进样阀，泵的宝石柱塞杆，自动进样器等等。中国应该是世界上液相色谱最大进口国，具有广阔的市场，但是国内大连伊力特，上海五丰与外资在技术，品牌，资金差距巨大，并非短期弥补，我认为当务之急，就是需要政府出面，鼓励中国企业走出国门，去收购。如戴安液相收购的是德国企业，检测器收购了美国ESA，安捷伦收购了瓦利安部分业务，由此可见，自己从头开始研发，已经跟不上时代发展，必须利用资本运作手段去收购国际企业，个人认为欧洲的企业，如德国都有很强的实力，只是市场小，所以发展空间极其有限，中国政府应该重视高端仪器自主化研发生产，但是一起从头开始是不现实的。