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核酸电泳分析仪

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核酸电泳分析仪相关的论坛

  • 【每周读报】基于核酸适配子毛细管电泳分析技术的肝癌诊断新方法

    以下转自http://gi.cmt.com.cn/detail/253665.html基于核酸适配子毛细管电泳分析技术的肝癌诊断新方法 目的 在前期工作中我们筛选出一批针对肝癌血清特异的核酸适配子。毛细管电泳是一种微量分析技术。本研究旨在建立一种基于毛细管电泳技术的核酸适配子与血清结合程度的分析方法,为适配子在肝癌诊断中的应用提供一种简便有效的新方法。  方法 人工合成5’端FAM标记的核酸适配子;将等差梯度浓度的适配子溶液进行毛细管电泳,以确定适配子的合适用量;将合适用量的适配子与等差梯度体积的肝癌混合血清孵育后进行毛细管电泳,以确定血清标本的合适用量;以适配子的合适用量为中心,将梯度浓度的适配子分别与合适用量的肝癌混合血清和正常混合血清孵育及检测,确定最佳的适配子用量;重复性试验分析毛细管电泳检测适配子与血清结合程度的精确性;以最佳的适配子用量与血清用量为条件进行临床标本检测,评价其对肝癌的诊断价值。  结果 本研究以适配子AP-HCS-9-90为模型,确定的最佳适配子用量为0.9pmol,合适的血清标本用量为1ml,毛细管电泳检测适配子与血清结合程度的重复性良好。以上述优化条件检测了41例肝癌血清标本和34例正常血清标本。适配子与血清孵育后毛细管电泳可显示A、B、C三个峰。肝癌血清标本的A、B、C峰面积分别为77949±158035、1328940±1882435、49909±9481,正常血清标本的A、B、C峰面积分别为15273±21043、377308±680039、50178±6868,两组间以B峰面积差异具有极显著性意义(t=3.009, P=0.004),A峰面差异有显著性意义(t=2.513, P=0.016),C峰面积差异无统计学意义(t=0.138, P=0.891)。B峰的受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)为0.869,诊断肝癌的敏感度为82.9%,特异度为79.4%,准确度分别为81.3%。多因素Logistic回归分析建立诊断模型,诊断价值可进一步提高,AUC为0.885,诊断肝癌的敏感度为90.2%,特异度为82.4%,准确度为86.7%。  结论 成功创建起基于毛细管电泳技术的核酸适配子与血清结合程度的检测方法,并在基于核酸适配子的肝癌诊断中具有良好的价值。

  • 【求助】有谁用毛细管电泳分析了无机离子?

    我准备用毛细管电泳分析重要中的无机阴离子和阳离子但是许多都是用电化学检测的有没有谁用紫外检测的?分析了那些离子?用的什么缓冲液?那种进样方式?谢谢了哈请各位老大帮个忙!

  • [课件]高效毛细管电泳分析法

    第1节 概述.ppt 第2节 高效毛细管电泳的理论基础.ppt 第3节 高效毛细管电泳仪.ppt 第4节 高效毛细管电泳分离模式.ppt 第5节 应用与进展.ppt[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=23629]高效毛细管电泳分析法[/url]

  • 【第三届原创参赛】糖类的毛细管电泳分析

    11),使糖基上的羟基去质子而带负电(因此糖类的分析一般是由负极进样的),直接进行电泳分离,用紫外(195 nm)检测,但这样检测限很高。为降低检测限,可以选用硼酸盐缓冲液,加入硼酸盐不仅会生成络合阴离子,而且会导致195 nm处的吸光度增加2~20倍,但这时,糖分子的吸光度还是很低,检出限只能限制在nmol水平。为进一步降低检测限,可采用间接紫外法,即在缓冲液中加入强紫外吸收物质,形成背景电解质,使无吸收的物质产生负吸收而进行检测的一种方法。但更多的是采用紫外或荧光衍生试剂,如2-氨基吡啶、2-氨基喹啉、8-氨基萘-1,3,6-三磺酸(ANTS)等对单糖进行标记,既可以使糖带上一定的电荷,也可以增加检测的灵敏度。或是采用质谱检测。聚糖包括寡糖和多糖。简单单糖的分析方法也适于简单寡糖的分析。多糖一般利用酸解或酶解的方法将其转化为寡糖后进行分析。多糖也可以直接在合适的条件下进行电泳,但这方面的报道不多。3 糖类化合物的毛细管电泳分析最新进展进行阐述3.1 多糖的直接测定一般而言毛细管常用的检测器是UV、荧光(包括激光诱导荧光)或是MS。但也有其他检测器的报道,如Mikus et al. 使用电导检测器测定了肝素原料中的肝素含量。文中肝素样品未经前处理,并且样品中含有等渗的生理盐水,通过一根300μm i.d. (650μm o.d.) 由乙烯丙烯氟化物制成的长21cm的毛细管作为分离毛细管,通过在运行电解质的添加高聚物(如右旋糖酐)改善分离的选择性,整个分析过程灵敏、快速、简单、并具有良好的重现性。比以往利用凝胶色谱法控制肝素质量有了很大的进步。另一种我们在药学工作中常见的多糖类物质就是淀粉。不同来源的淀粉如玉米淀粉、马铃薯淀粉中支链和直链淀粉的比例不同,造成其制剂学上性质的不同,而建立简便、快速、准确测定二者的含量的方法一直是分析工作者研究的方向。Herrero-Martinez 报道了使用毛细管电泳检测直链淀粉与支链淀粉比例的方法,原理是在缓冲液中加入碘,毛细管电泳作为分离手段,由于淀粉与碘具有亲和作用,可形成复合物并在560nm有吸收而被检测。整个分离过程仅用时7min,该研究中还使用到了气泡形的检测池,使其检测线达到了0.1mg/ml同样是利用亲和作用的原理,Anikó利用脂多糖与蛋白质具有强烈的亲和作用的特性。开发了一种新的检测内毒素的方法,原理是血红素与内毒素形成复合物并在415nm有吸收而被检测,与前述的实验方法不同,血

  • 用毛细管电泳分析甲酸(盐)

    主要分析甲酸或者甲酸根:但是浓度比较低,(10umol/L)左右,但是体系中含有较大浓度三乙醇胺(10%, v/v)或者乳酸(10%, v/v).尝试用离子色谱分析过,发现三乙醇胺或者乳酸干扰太大(出峰重叠)。看见有人在相似条件下用毛细管电泳的方法分析过。想问下1、该方法是否可以?2、如果买一台能满足要求的该仪器,最便宜多少钱?

  • 毛细管电泳分析系统

    1990年瑞士Ciba-Geigy公司的Manz和Widmer首次提出微全分析系统(Miniaturized total chemical analysis system,a-TAS)的概念和设计,把微全分析系统的主要构型定位为一般厚度不超过5 mm,面积为数平方厘米至十几平方厘米的平板芯片(包括微阵列生物芯片和微流控分析芯片)。1994年始,美国橡树岭国家实验室Ramsey等在Manz的工作基础上发表了一系列论文,微流控分析芯片获得了重要发展。微流控分析系统是将常规CE的原理和技术与流动注射进样技术相结合,借助微机电加工技术的手段,在平方厘米级大小的芯片上刻蚀出矩形或梯形管道和具有其它功能的单元,通过不同的管道网路、反应器、检测单元等的设计和布局,实现样品的采集、预处理、反应、分离和检测,是一种多功能化的快速、高效、高灵敏度和低消耗的微型装置;是一个跨学科的新领域,其核心是将所有化学分析过程中的各种功能及步骤微型化,包括:泵、阀、流动通道、混合反应器、相分离和试样分离、检测器、电子控制及转换点等。 微流控分析系统可大大提高分析速度和极大地降低分析费用,微流控CE分析系统通常也被称为集成毛细管电泳(Integrated capillaryelectrophoresis,ICE)。微流控分析系统开创了分析科学历史的新篇章,使分析科学进入了一个微型化、集成化和自动化的崭新世界。

  • MPI-A型毛细管电泳电化学发光检测仪

    技术参数 1.MPI-A型毛细管电泳电化学发光检测仪—多功能化学发光检测仪: * 测量动态范围:大于5个数量级 * 测量精度优于0.05% 2.MPI-A/B型多功能化学发光检测器: * 波长范围:300—650nm * 灵敏度:SP1000A/Lm 3.MPI-A型毛细管电泳电化学发光检测仪—电化学分析仪: * 电位范围:-10V—10V * 电流范围:±250 mA * 参比电极输入阻抗:10E12Ω * 灵敏度:1x10E-12—0.1A 共16个量程 * 输入偏置电流:50pA * 电位增量:1mV * 扫描速率:0.0001—200V/S * 测试方法:循环伏安法(CV),线性扫描伏安法(LSV),计时电流法(CA) 计时电量法(CC),控制电位电解库伦法(BE),开路电压—时间曲线(OCPT) 4.MPI-A型毛细管电泳电化学发光检测仪—毛细管电泳高压电源: * 输出电压:0—20KV * 输出电流:0—300uA 技术文章 1.毛细管电泳电化学发光检测技术及其在生命科学中的应用2.Analytical applications of the electrochemiluminescence of tris(2,2''-bipyridyl) ruthenium and its derivatives 主要特点 1.用于药物、氨基酸、多肽、蛋白质及核酸检测分析 2.用于蛋白质与药物、核酸相互作用研究。 仪器介绍 电化学发光检测是近几年发展迅速的毛细管电泳分析中的一种新型检测方法,它将毛细管的分离技术与电化学发光检测相结合,可在临床分析及医药、病毒、免疫等科学试验中大大简化分析的技术难度,提高分析结果的准确性。   MPI-A型毛细管电泳电化学发光检测仪系结合毛细管电泳分离和电化学发光检测于一体的多测试界面、多分析参数、多控制部件系统集成仪器。它可同时对被测样品实现毛细管电泳在线分离、电化学发光实时检测,并同步显示化学发光信号、电化学电位扫描信号、电化学电极电流信号及毛细管电泳电流信号并对其进行详细分析。

  • 【求助】求 2D电泳分析软件,万分感激.

    做了一年多的双向电泳,却一直苦于找不到软件分析.曾经联系了一家仪器公司,等了一年多,差点花两万元买回一个用不了的水货软件.在一些网上下载的破解版又安装不了.请哪位好心人帮帮忙,鄙人将感激涕零.

  • 毛细管电泳分析DNA

    求教:我用毛细管电泳跑DNA,为什么随着时间的增加,DNA的响应却越来越小,重新冲洗毛细管没有用,做药物样品就不会这样。DNA怎么处理才能保证信号变化不会这么快?

  • 【转帖】核酸电泳的指示剂与染色剂

    指示剂 核酸电泳常用的指示剂有溴酚兰和二甲苯青及银染色.溴酚兰在碱性液体中 呈紫兰色,在0.6%、1%、1.4%和2%琼脂糖凝胶电泳中,溴酚兰的迁移率分别与1Kb、 0.6Kb、0.2Kb和0.15Kb的双链线性DNA片段大致相同.二甲苯青的水溶液呈兰色,它在 1%和1.4%琼脂糖中电泳时,其迁移速率分别与2Kb和1.6Kb的双链线性DNA大致相似.  指示剂一般与蔗糖、甘油或聚蔗糖400组成载样缓冲液.载样缓冲液的作用有①增加样 品密度,使其比重增加,以确保DNA均匀沉入加样孔内.②在电泳中形成肉眼可见的指 示带,可预测核酸电泳的速度和位置.③使样品呈色,使加样操作更方便.染色剂 核酸电泳后,需经染色后才能显现出带型,最常用的是溴化乙锭染色法,其 次是银染色.  溴化乙锭(ethidium bromide,EB)是一种荧光染料,EB分子可嵌入核酸双链的碱基对 之间,在紫外线激发下,发出红色荧光.根据情况可在凝胶电泳液中加入终浓度为 0.5ug/ml的EB,有时亦可在电泳后,将凝胶浸入该浓度的溶液中染色10~15min.琼脂 糖凝胶EB染色,肉眼可见核酸电泳带,其DNA量一般5ng,当溴化乙锭太多,凝胶染 色过深,核酸电泳带看不清时,可将凝胶放入蒸馏水浸泡30min后再观察.  银染色液中的银离子(Ag+)可与核酸形成稳定的复合物,然后用还原剂如甲醛 使Ag+还原成银颗粒,可把核酸电泳带染色黑褐色.主要用于聚丙烯酰胺凝胶电泳染色. 也用于琼脂糖凝胶染色.其灵敏度比EB高200倍.但银染色后,DNA不宜回收.来源:生命经纬

  • 【分享】紫外分析仪的分类及用途介绍

    紫外分析仪按照用途不同可以分为三大类,有三用紫外分析仪、暗箱式紫外分析仪、可照相紫外分析仪等系列,他们之间有区别,也有不同的用途。 三用紫外分析仪具有消耗功率小、热量低、可以长时间连续使用等特征,三用紫外分析仪可应用在科学实验工作、药物生产和研究、染料涂料橡胶、石油等化学行业、纺织化学纤维、粮油、蔬菜、食品部门、地质、考古等行业。 暗箱式紫外分析仪是提供白光和紫外光照射的装置,具有重量轻、灯管启辉快、无频闪的优点。暗箱式紫外分析仪主要用于蛋白质电泳观察和照相。 可照相紫外分析仪是提供紫外光照射的装置,该仪器选用电子镇流器,具有重量轻、灯管启辉快、无频闪的特点。可照相紫外分析仪可用于核酸电泳凝胶样品的观察、照相等方面。

  • 【专家讲座】:9月8日 第一讲:神奇的毛细管电泳

    【专家讲座】:第一讲:神奇的毛细管电泳【讲座时间】:2016年09月08日 10:00【主讲人】:屈锋,北京理工大学生命学院教授/博士生导师。1985年西南大学本科毕业;1994年中国科学院生态环境研究中心硕士毕业;1997年北京大学博士毕业;1998至2000香港中文大学化学系和美国Southern Methodist University(SMU)生命科学系博士后。屈锋教授2001年开始毛细管电泳的应用基础研究、技术方法开发及在生物医药领域的分析应用。研究方向: 生物医学分析检测 1)毛细管电泳的生物分析方法学;2)核酸适配体筛选机理; 3)蛋白质分析检测新技术与新方法;4)核酸与蛋白质的相互作用研究近5年,发表科研论文40余篇,授权发明专利8项。出版《生物分析中的核酸适配体》、《核酸适配体手册》译著。【会议简介】毛细管电泳是微量、高效分析技术,其分析模式多样,分析成本低,应用领域广泛。近年来,毛细管电泳在生物、医药、食品、环境、材料、农残等领域的生物大分子、药物分子,手性分子及细胞、微生物和纳米材料分析的应用越来越多,受到广泛关注。本讲将介绍毛细管电泳的发展背景,技术原理,分析仪器;影响毛细管电泳的关键因素;毛细管电泳的特点和优势;毛细管电泳的生物分析研究应用。-------------------------------------------------------------------------------1、报名条件:只要您是仪器网注册用户均可报名参加。2、报名截止时间:2016年09月08日 9:304、报名参会:http://www.instrument.com.cn/webinar/meeting/meetingInsidePage/21135、报名及参会咨询:QQ群—290101720,扫码入群“色谱”http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/01/201701191701_669030_2507958_3.gif

  • 【转】毛细管电泳原理及分析策略

    【转】毛细管电泳原理及分析策略

    毛细管电泳原理及分析策略一、毛细管电泳的基本原理电泳是指电解质中带电粒子在电场力作用下,以不同的速度向电荷相反方向迁移的现象。高效毛细管电泳(HPCE),是指离子或带电粒子以毛细管为分离室,以高压直流电场为驱动力,依据样品中各组分之间迁移速度和分配行为上的差异而实现分离的液相分离分析技术。由于毛细管内径小,表面积和体积的比值大,易于散热,因此毛细管电泳可以减少焦耳热的产生,这是与传统电泳技术的根本区别。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/05/201205142034_366964_2019107_3.jpgHPCE实际上包含电泳、色谱及其相互交叉的内容,是分析科学中继高效液相色谱之后的又一重大进展,它使得分离分析科学从微升级水平进入到纳升级水平,并使得细胞的分析,乃至单分子的分析成为可能。尤其是对样品珍贵,取样极少的生物大分子,毛细管电泳具有绝对的优势。其突出特点是:(1)所需样品量少;(2)分析速度快,分离效率高,分辨率高,灵敏度高;(3)分离模式多,开发分析方法容易;(4)溶剂用量少,经济、环保;(5)应用范围极广。毛细管电泳技术可用于分离分析多种组分,如核酸/核苷酸、蛋白质/多肽/氨基酸、糖类/糖蛋白、酶、碱氨基酸、微量元素、小的生物活性分子等的快速分析,以及DNA序列分析和DNA合成中产物纯度测定等,还可用于碱性药物分子及其代谢产物、无机及有机离子/有机酸、手性化合物、单细胞分析、药物与细胞的相互作用和病毒的分析。毛细管电泳依分离模式不同,可分为:毛细管区带电泳(CZE)、毛细管胶束电动色谱(MECC/MCKC)、毛细管凝胶电泳(CGE)、毛细管等电聚焦(cIEF)、亲和毛细管电泳(ACE)、毛细管电色谱(CEC)。下面以最常用的毛细管区带电泳(CZE)为例,探讨毛细管电泳原理及分析策略。

  • 【讨论】毛细管电色谱仪与毛细管电泳的区别,哪个更好(讨论中)

    打算购买一台毛细管电色谱仪,由于我以前从事毛细管电泳分析,看到商家的介绍,觉得毛细管电色谱仪更好一些,但由于从来没有使用过,所以有点担心,有哪位使用过毛细管电色谱仪,请给予具体的参考信息,和毛细管电泳仪相比,毛细管电色谱仪有哪些优点与不足,谢谢!

  • 哪里可以做核酸测序和毛细管电泳

    大家好,现在北京有哪几家第三方检测机构能做核酸或者蛋白质测序的,和哪里能做毛细管电泳。拜托大家给我推荐几个,高校研究所都可以。

  • 【原创1+1系列活动】全自动核酸分析系统免费体验开始

    【原创1+1系列活动】全自动核酸分析系统免费体验开始

    您还在为做胶时小心翼翼对待如EB类的核酸染料而苦恼吗?还在为胶分辨率低,没办法获得差异结果而头疼吗?还在为同样的PCR产物用不同大小的Marker估算,但结果不同而纠结吗?还在为传统电泳繁杂的步骤耽误时间而痛苦吗?现在你可以对这一切说NO了,免费体验全自动核酸分析系统Qsep100(点击查看详情)开始了!这款分析系统,是利用微毛细管电泳技术检测双链DNA的新仪器,PCR后您不用再制胶,不用再接触EB,不用再浪费时间跑胶和花心思分析胶上的结果。全自动毛细管核酸分析系统(点击查看详情)Qsep100,承担您所有的实验步骤,节省您宝贵的时间,提高您实验结果的精确性。  全自动核酸分析系统Qsep100,采用毛细管电泳原理,对DNA 片段进行分离和检测。该系统包含检测模块、分析模块、样品进样器和可替换的Pen-shape 卡夹。最快3分钟完成一个样本检测,检测样本灵敏度低至0.1ng/ul,可分辨出1-4bp差异的DNA片段,可对结果进行定性和定量分析。电泳峰图、凝胶电泳图、DNA片段差异的分析都可以通过软件来完成。只需简单几个操作,您就可以获得直观、精准的检测结果,让您的实验标准、精准、自动、高效。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/01/201701191656_648236_1604352_3.gif  凡报名的网友在活动期间,昊诺斯科技将携带仪器上门免费为您做体验。  免费体验期,参加体验互动活动,将有精美礼品奉上哟\(^o^)/~  参加方式一:仪器信息网上注册,发帖并加入昊诺斯-鼎昊源真心英雄队(发帖时“选择主题”请选择“第五届原创”;“参加原创团队”点“是”,记得选择“昊诺斯-鼎昊源真心英雄队”哟),累积积分,还有机会获得仪器信息网的礼品呢O(∩_∩)O~http://bbs.instrument.com.cn/images/HomeFocus/2012081614290062.jpg点击加入我们,让我们成为朋友吧!  参加方式二:关注并发微博@昊诺斯生物(新浪微博)http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/09/201209141410_390911_2507958_3.gif  发帖内容可涉及以下3方面:(分享试用感受可同时参加原创大赛获得双重奖励!)  1、 使用全自动毛细管核酸分析系统Qsep100的体验照片和体验感觉,奖励礼品:计时器或手机座。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/10/201210251416_399232_2961690_3.jpg  2、 具体实验的数据和分析结果,奖励礼品:U盘。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/10/201210251419_399233_2961690_3.jpg  3、 使用全自动毛细管核酸分析系统Qsep100得到实验数据,并以此发表的文章,将有现金奖励。(SCI文章500元,核心期刊300元)  欢迎垂询北京昊诺斯科技有限公司市场部产品负责人曹迪 18601371910 caodi@herosbio.com,(因为区域划分,活动仅限北方区域,具体问题欢迎来电垂询)。  温馨提醒:您发帖后,请您发邮件到heros@herosbio.com或致电市场专员董丽芳座机010-64842431-315及时和我们联系,我们核实完后将尽快将送出礼品。

  • 厂商活动:真心英雄第二关全自动核酸分析系统免费体验风暴来袭

    厂商活动:真心英雄第二关全自动核酸分析系统免费体验风暴来袭

    您还在为做胶时小心翼翼对待如EB类的核酸染料而苦恼吗?还在为胶分辨率低,没办法获得差异结果而头疼吗?还在为同样的PCR产物用不同大小的Marker估算,但结果不同而纠结吗?还在为传统电泳繁杂的步骤耽误时间而痛苦吗?现在你可以对这一切说NO了,免费体验全自动核酸分析系统Qsep100开始了!这款分析系统,是利用微毛细管电泳技术检测双链DNA的新仪器,PCR后您不用再制胶,不用再接触EB,不用再浪费时间跑胶和花心思分析胶上的结果。全自动核酸分析系统,承担您所有的实验步骤,节省您宝贵的时间,提高您实验结果的精确性。 全自动核酸分析系统Qsep100,采用毛细管电泳原理,对DNA 片段进行分离和检测。该系统包含检测模块、分析模块、样品进样器和可替换的Pen-shape 卡夹。最快3分钟完成一个样本检测,检测样本灵敏度低至0.1ng/ul,可分辨出1-4bp差异的DNA片段,可对结果进行定性和定量分析。电泳峰图、凝胶电泳图、DNA片段差异的分析都可以通过软件来完成。只需简单几个操作,您就可以获得直观、精准的检测结果。此毛细管电泳技术让您的实验标准、精准、自动、高效。还等什么,快来参加体验吧,凡报名的老师在活动期间,我们将携带仪器上门免费为您做体验。免费体验期,参加体验互动活动,还可获得昊诺斯8GU盘或瑞士军刀背包一个(奖品以实物为准)。\(^o^)/~http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/01/201701191656_647449_1622715_3.jpg真心英雄活动第二关试用报名网址:http://www.instrument.com.cn/custom/SH100700/20130522/free.shtml另外,您也可以致电北京昊诺斯科技有限公司市场部产品负责人杜广红 13910514003 duguanghong@herosbio.com(因为区域划分,活动仅限北方区域,具体问题欢迎来电垂询)。

  • 【原创大赛】用全自动核酸分析系统Qsep100检测比较实验样本

    【原创大赛】用全自动核酸分析系统Qsep100检测比较实验样本

    Qsep100全自动核酸分析系统,基于毛细管电泳原理。毛细管电泳(capillary electrophoresis, CE),又叫高效毛细管电泳(HPCE)是利用带电性不同的粒子在电场中迁移,在泳动过程中物质的各组分被分离。被分离物质的迁移率取决于分子的结构、形状和电荷数量等因素,同时受溶液pH值、离子强度、粘度和两性电解质因素的影响。是近年来发展最快的分析方法之一。Qsep100全自动核酸分析系统,能代替传统的凝胶电泳,无需制胶,无需接触到核酸染料,无需照胶,PCR产物直接上样,全自动;仪器会自动生成电泳峰图,和凝胶电泳图。很大节省了我们实验室的工作量,并且提高了我们对PCR产物研究的精度,以及提高了我们检测PCR的标准化。 这个仪器的使用很简单,只需简单几个步骤即可完成设置,进行检测。我今天检测两个样本的扩增相同引物,目的是首先检验PCR体系中有无,有效的扩增;在有扩增的基础巡航比较两个样本的大小,下面为大家介绍下机器的使用和分析流程。第1步,打开机器电源,通过数据线与电脑连接,在电脑上插入机器密钥(一个类似U盘的东西,为了保证使用者的数据不被他人随意乱动,设计了密钥,不使用密钥无法打开程序),打开程序,进行设置;http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/09/201209120921_390351_1908808_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/09/201209120922_390352_1908808_3.jpg第2步,设置新的检测Project(此步骤的目的类似建立一个文件夹将本次所做的DATA存储在这里),将机器与电脑连接,这是仪器画面呈现彩色,将待检样本和Buffer放入指定位置;http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/09/201209120923_390353_1908808_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/09/201209120923_390354_1908808_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/09/201209120924_390355_1908808_3.jpg 第3步,插入卡夹(内含一个毛细管,产物都在卡夹中进行电泳并检测),卡夹与机器连接,卡夹图片呈现彩色,这是我们可以看到机器和卡夹的图片都变成彩色,这也就说明机器是正常待机状态,可以正常使用;http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/09/201209120925_390356_1908808_3.jpg第4步,选择检测的方式(一个类似检测程序一样)和我的2个检测样品的位置(给检测样本定位,这样才好确认吸取检测样本进行检测),点击RUN;http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/09/201209120926_390357_1908808_3.jpg第5步,点击RUN后,机器为您自动检测,所选位置的样本,并把相应样本的数据(电泳峰图和模拟的凝胶电泳图),保存到你选择的路径;http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/09/201209120926_390358_1908808_3.jpg第6步,对所得的2个样本的数据进行分析,包括用自建的Maker对所得样本进行大小计算,或者对几个样本之间进行比较;http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/09/201209120930_390359_1908808_3.jpgSample A计算得出273bp,从峰看此体系扩增产物比较特异,20bp前面那个峰通过判断是杂峰,不计算如内。

  • 【资料】电泳技术

    电泳技术发展简史 1809年俄国物理学家Рейсе首次发现电泳现象。他在湿粘土中插上带玻璃管的正负两个电极,加电压后发现正极玻璃管中原有的水层变混浊,即带负电荷的粘土颗粒向正极移动,这就是电泳现象。 1909年Michaelis首次将胶体离子在电场中的移动称为电泳。他用不同pH的溶液在U形管中测定了转化酶和过氧化氢酶的电泳移动和等电点。 1937年瑞典Uppsala大学的Tiselius对电泳仪器作了改进,创造了Tiselius电泳仪,建立了研究蛋白质的移动界面电泳方法,并首次证明了血清是由白蛋白及α、β、γ球蛋白组成的,由于Tiselius在电泳技术方面作出的开拓性贡献而获得了1948年的诺贝尔化学奖。 1948年Wieland和Fischer重新发展了以滤纸作为支持介质的电泳方法,对氨基酸的分离进行过研究。 从本世纪50年代起,特别是1950年Durrum用纸电泳进行了各种蛋白质的分离以后,开创了利用各种固体物质(如各种滤纸、醋酸纤维素薄膜、琼脂凝胶、淀粉凝胶等)作为支持介质的区带电泳方法。 1959年Raymond和Weintraub利用人工合成的凝胶作为支持介质,创建了聚丙烯酰胺凝胶电泳,极大地提高了电泳技术的分辨率,开创了近代电泳的新时代。30多年来,聚丙烯酰胺凝胶电泳仍是生物化学和分子生物学中对蛋白质、多肽、核酸等生物大分子使用最普遍,分辨率最高的分析鉴定技术,是检验生化物质的最高纯度:即“电泳纯”(一维电泳一条带或二维电泳一个点)的标准分析鉴定方法,至今仍被人们称为是对生物大分子进行分析鉴定的最后、最准确的手段,即“Last Check”。 由80年代发展起来的新的毛细管电泳技术,是化学和生化分析鉴定技术的重要新发展,己受到人们的充分重视。4.2 电泳的基本原理 电泳是指带电颗粒在电场的作用下发生迁移的过程。许多重要的生物分子,如氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等都具有可电离基团,它们在某个特定的pH值下可以带正电或负电,在电场的作用下,这些带电分子会向着与其所带电荷极性相反的电极方向移动。电泳技术就是利用在电场的作用下,由于待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小、形状等性质的差异,使带电分子产生不同的迁移速度,从而对样品进行分离、鉴定或提纯的技术。 电泳过程必须在一种支持介质中进行。Tiselius等在1937年进行的自由界面电泳没有固定支持介质,所以扩散和对流都比较强,影响分离效果。于是出现了固定支持介质的电泳,样品在固定的介质中进行电泳过程,减少了扩散和对流等干扰作用。最初的支持介质是滤纸和醋酸纤维素膜,目前这些介质在实验室已经应用得较少。在很长一段时间里,小分子物质如氨基酸、多肽、糖等通常用滤纸或纤维素、硅胶薄层平板为介质的电泳进行分离、分析,但目前则一般使用更灵敏的技术如HPLC等来进行分析。这些介质适合于分离小分子物质,操作简单、方便。但对于复杂的生物大分子则分离效果较差。凝胶作为支持介质的引入大大促进了电泳技术的发展,使电泳技术成为分析蛋白质、核酸等生物大分子的重要手段之一。最初使用的凝胶是淀粉凝胶,但目前使用得最多的是琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶。蛋白质电泳主要使用聚丙烯酰胺凝胶。 电泳装置主要包括两个部分:电源和电泳槽。电源提供直流电,在电泳槽中产生电场,驱动带电分子的迁移。电泳槽可以分为水平式和垂直式两类。垂直板式电泳是较为常见的一种,常用于聚丙烯酰胺凝胶电泳中蛋白质的分离。电泳槽中间是夹在一起的两块玻璃板,玻璃板两边由塑料条隔开,在玻璃平板中间制备电泳凝胶,凝胶的大小通常是12cm ? 14 cm,厚度为1mm~2 mm,近年来新研制的电泳槽,胶面更小、更薄,以节省试剂和缩短电泳时间。制胶时在凝胶溶液中放一个塑料梳子,在胶聚合后移去,形成上样品的凹槽。水平式电泳,凝胶铺在水平的玻璃或塑料板上,用一薄层湿滤纸连接凝胶和电泳缓冲液,或将凝胶直接浸入缓冲液中。由于pH值的改变会引起带电分子电荷的改变,进而影响其电泳迁移的速度,所以电泳过程应在适当的缓冲液中进行的,缓冲液可以保持待分离物的带电性质的稳定。

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