硅胶柱蛋白流器

蛋白柱常见问题和日常维护在蛋白分离时选择了合适的蛋白柱，有时往往不能成功地完成蛋白的分离，同一根蛋白分离柱在不同的使用者手中可能会有不同的柱寿命及分离效果，正确的使用蛋白柱和正确的日常维护是保证成功分离蛋白及延长柱寿命的关键。不论使用什么类型的蛋白柱，首先必须对其填料的性能有基本了解。如该柱适用什么样的溶剂，什么类型的样品，流速及耐压范围等，GAT提供的各种类型的蛋白柱，在柱箱内均有详细的说明书，使用柱子前，务必要仔细阅读，以保证正确使用这些柱子。下面就蛋白分离中常出现的问题进行讨论。①样品不保留：在用离子交换柱分离蛋白时，流动相的pH值对保留值影响很大，当选用阴离子型蛋白分析柱时，如#####若流动相的pH值小于蛋白的pI值时，蛋白分子阳离子状态，则在柱上没有保留，只有当流动相的pH值大于蛋白的pI值时，蛋白分子呈阴离子，才能在阴离子交换柱上得到保留。另外，当流动相或样品中的离子强度过大时，也会造成蛋白在离子交换柱上不保留。此外，上样量过大，亦会使蛋白样品保留变弱，一般样品的上样量不应超过该填料结合蛋白量的20%，在选用GPC柱时，应特别注意填料的孔径及相应的可分离蛋白的分子量范围，若蛋白的分子量超过填料的孔径极限则蛋白样品也不保留。在用反相色谱分离蛋白时，流动相中有机溶剂的比例会影响蛋白的保留值。有机溶剂比例过高，会使蛋白的样品与填料的作用变弱而过早地洗脱。流动相中的三氟乙酸可作为离子对试剂和pH调节剂，有利于蛋白的保留。②回收率（质量回收率）低蛋白质量回收率低往往发生在使用凝胶过滤柱时，特别是以硅胶为基质的凝胶蛋白分析柱时，尽管硅醇基已经过双醇封口，但残留的硅醇基仍会与蛋白的碱性基团发生非GFC效应，造成回收率低，分离度差等现象,解决这一现象的方法是在流动相（通常是水）中加入0。M-0。3M盐作为改性剂以减少这种非GFC效应。③柱压过高 柱压过高的原因在于柱入口的堵塞及填料间的缝隙的减小或堵死，这些原因有：非硅胶填料的颗粒膨胀（主要是由于使用过高比例有机溶剂引起）；来自样品，流动相的颗粒堵塞、细菌生长，流速过高等，为防止柱压过高，应使用符合要求的流动相组成。样品，流动相使用前严格过滤。为了保存时防止细菌生长。以硅胶为基质的柱子可使用20%有机水溶液保存。其它柱子在保存液中加入0。02%的叠氨钠。④性能改变蛋白柱在使用一段时间后，其性能会有所改变（保留值变化，柱效下降等）。原因之一是被分离样品中细胞碎片，类脂，酸等的污染，对聚合物基质的柱子可用0。1-1。0N NaOH溶液清洗，注意以硅胶为基质的柱子（如Protein Pak凝胶柱）不能用NaOH清洗。（转贴[em07] ）

蛋白柱常见问题和日常维护在蛋白分离时选择了合适的蛋白柱，有时往往不能成功地完成蛋白的分离，同一根蛋白分离柱在不同的使用者手中可能会有不同的柱寿命及分离效果，正确的使用蛋白柱和正确的日常维护是保证成功分离蛋白及延长柱寿命的关键 不论使用什么类型的蛋白柱，首先必须对其填料的性能有基本了解。如该柱适用什么样的溶剂，什么类型的样品，流速及耐压范围等，GAT提供的各种类型的蛋白柱，在柱箱内均有详细的说明书，使用柱子前，务必要仔细阅读，以保证正确使用这些柱子。下面就蛋白分离中常出现的问题进行讨论。 ①样品不保留： 在用离子交换柱分离蛋白时，流动相的pH值对保留值影响很大，当选用阴离子型蛋白分析柱时，如#####若流动相的pH值小于蛋白的pI值时，蛋白分子阳离子状态，则在柱上没有保留，只有当流动相的pH值大于蛋白的pI值时，蛋白分子呈阴离子，才能在阴离子交换柱上得到保留。另外，当流动相或样品中的离子强度过大时，也会造成蛋白在离子交换柱上不保留。 此外，上样量过大，亦会使蛋白样品保留变弱，一般样品的上样量不应超过该填料结合蛋白量的20%，在选用GPC柱时，应特别注意填料的孔径及相应的可分离蛋白的分子量范围，若蛋白的分子量超过填料的孔径极限则蛋白样品也不保留。 在用反相色谱分离蛋白时，流动相中有机溶剂的比例会影响蛋白的保留值。有机溶剂比例过高，会使蛋白的样品与填料的作用变弱而过早地洗脱。流动相中的三氟乙酸可作为离子对试剂和pH调节剂，有利于蛋白的保留。 ②回收率（质量回收率）低 蛋白质量回收率低往往发生在使用凝胶过滤柱时，特别是以硅胶为基质的凝胶蛋白分析柱时，尽管硅醇基已经过双醇封口，但残留的硅醇基仍会与蛋白的碱性基团发生非GFC效应，造成回收率低，分离度差等现象,解决这一现象的方法是在流动相（通常是水）中加入0。M-0。3M盐作为改性剂以减少这种非GFC效应。 ③柱压过高 柱压过高的原因在于柱入口的堵塞及填料间的缝隙的减小或堵死，这些原因有：非硅胶填料的颗粒膨胀（主要是由于使用过高比例有机溶剂引起）；来自样品，流动相的颗粒堵塞、细菌生长，流速过高等，为防止柱压过高，应使用符合要求的流动相组成。样品，流动相使用前严格过滤。为了保存时防止细菌生长。以硅胶为基质的柱子可使用20%有机水溶液保存。其它柱子在保存液中加入0。02%的叠氨钠。 ④性能改变 蛋白柱在使用一段时间后，其性能会有所改变（保留值变化，柱效下降等）。原因之一是被分离样品中细胞碎片，类脂，酸等的污染，对聚合物基质的柱子可用0。1-1。0N NaOH溶液清洗，注意以硅胶为基质的柱子（如Protein Pak凝胶柱）不能用NaOH清洗。

在蛋白分离时选择了合适的蛋白柱，有时往往不能成功地完成蛋白的分离，同一根蛋白分离柱在不同的使用者手中可能会有不同的柱寿命及分离效果，正确的使用蛋白柱和正确的日常维护是保证成功分离蛋白及延长柱寿命的关键。 　　不论使用什么类型的蛋白柱，首先必须对其填料的性能有基本了解。如该柱适用什么样的溶剂，什么类型的样品，流速及耐压范围等，GAT提供的各种类型的蛋白柱，在柱箱内均有详细的说明书，使用柱子前，务必要仔细阅读，以保证正确使用这些柱子。下面就蛋白分离中常出现的问题进行讨论。 　 ①样品不保留： 　　在用离子交换柱分离蛋白时，流动相的pH值对保留值影响很大，当选用阴离子型蛋白分析柱时，如#####若流动相的pH值小于蛋白的pI值时，蛋白分子阳离子状态，则在柱上没有保留，只有当流动相的pH值大于蛋白的pI值时，蛋白分子呈阴离子，才能在阴离子交换柱上得到保留。另外，当流动相或样品中的离子强度过大时，也会造成蛋白在离子交换柱上不保留。 　　此外，上样量过大，亦会使蛋白样品保留变弱，一般样品的上样量不应超过该填料结合蛋白量的20%，在选用GPC柱时，应特别注意填料的孔径及相应的可分离蛋白的分子量范围，若蛋白的分子量超过填料的孔径极限则蛋白样品也不保留。 　　在用反相色谱分离蛋白时，流动相中有机溶剂的比例会影响蛋白的保留值。有机溶剂比例过高，会使蛋白的样品与填料的作用变弱而过早地洗脱。流动相中的三氟乙酸可作为离子对试剂和pH调节剂，有利于蛋白的保留。 　　②回收率（质量回收率）低 　　蛋白质量回收率低往往发生在使用凝胶过滤柱时，特别是以硅胶为基质的凝胶蛋白分析柱时，尽管硅醇基已经过双醇封口，但残留的硅醇基仍会与蛋白的碱性基团发生非GFC效应，造成回收率低，分离度差等现象,解决这一现象的方法是在流动相（通常是水）中加入0。M-0。3M盐作为改性剂以减少这种非GFC效应。 　　③柱压过高 　　柱压过高的原因在于柱入口的堵塞及填料间的缝隙的减小或堵死，这些原因有：非硅胶填料的颗粒膨胀（主要是由于使用过高比例有机溶剂引起）；来自样品，流动相的颗粒堵塞、细菌生长，流速过高等，为防止柱压过高，应使用符合要求的流动相组成。样品，流动相使用前严格过滤。为了保存时防止细菌生长。以硅胶为基质的柱子可使用20%有机水溶液保存。其它柱子在保存液中加入0。02%的叠氨钠。 　　④性能改变 　　蛋白柱在使用一段时间后，其性能会有所改变（保留值变化，柱效下降等）。原因之一是被分离样品中细胞碎片，类脂，酸等的污染，对聚合物基质的柱子可用0。1-1。0N NaOH溶液清洗，注意以硅胶为基质的柱子（如Protein Pak凝胶柱）不能用NaOH清洗。

在蛋白分离时选择了合适的蛋白柱，有时往往不能成功地完成蛋白的分离，同一根蛋白分离柱在不同的使用者手中可能会有不同的柱寿命及分离效果，正确的使用蛋白柱和正确的日常维护是保证成功分离蛋白及延长柱寿命的关键。 　　不论使用什么类型的蛋白柱，首先必须对其填料的性能有基本了解。如该柱适用什么样的溶剂，什么类型的样品，流速及耐压范围等，GAT提供的各种类型的蛋白柱，在柱箱内均有详细的说明书，使用柱子前，务必要仔细阅读，以保证正确使用这些柱子。下面就蛋白分离中常出现的问题进行讨论。 　 ①样品不保留： 　　在用离子交换柱分离蛋白时，流动相的pH值对保留值影响很大，当选用阴离子型蛋白分析柱时，如#####若流动相的pH值小于蛋白的pI值时，蛋白分子阳离子状态，则在柱上没有保留，只有当流动相的pH值大于蛋白的pI值时，蛋白分子呈阴离子，才能在阴离子交换柱上得到保留。另外，当流动相或样品中的离子强度过大时，也会造成蛋白在离子交换柱上不保留。 　　此外，上样量过大，亦会使蛋白样品保留变弱，一般样品的上样量不应超过该填料结合蛋白量的20%，在选用GPC柱时，应特别注意填料的孔径及相应的可分离蛋白的分子量范围，若蛋白的分子量超过填料的孔径极限则蛋白样品也不保留。 　　在用反相色谱分离蛋白时，流动相中有机溶剂的比例会影响蛋白的保留值。有机溶剂比例过高，会使蛋白的样品与填料的作用变弱而过早地洗脱。流动相中的三氟乙酸可作为离子对试剂和pH调节剂，有利于蛋白的保留。 　　②回收率（质量回收率）低 　　蛋白质量回收率低往往发生在使用凝胶过滤柱时，特别是以硅胶为基质的凝胶蛋白分析柱时，尽管硅醇基已经过双醇封口，但残留的硅醇基仍会与蛋白的碱性基团发生非GFC效应，造成回收率低，分离度差等现象,解决这一现象的方法是在流动相（通常是水）中加入0。M-0。3M盐作为改性剂以减少这种非GFC效应。 　　③柱压过高 　　柱压过高的原因在于柱入口的堵塞及填料间的缝隙的减小或堵死，这些原因有：非硅胶填料的颗粒膨胀（主要是由于使用过高比例有机溶剂引起）；来自样品，流动相的颗粒堵塞、细菌生长，流速过高等，为防止柱压过高，应使用符合要求的流动相组成。样品，流动相使用前严格过滤。为了保存时防止细菌生长。以硅胶为基质的柱子可使用20%有机水溶液保存。其它柱子在保存液中加入0。02%的叠氨钠。 　　④性能改变 　　蛋白柱在使用一段时间后，其性能会有所改变（保留值变化，柱效下降等）。原因之一是被分离样品中细胞碎片，类脂，酸等的污染，对聚合物基质的柱子可用0。1-1。0N NaOH溶液清洗，注意以硅胶为基质的柱子（如Protein Pak凝胶柱）不能用NaOH清洗。

我听说可以在流动相添加一种物质，它可以和硅胶结合，以避免蛋白质的吸附求这种物质的名称，谢谢如果有一两篇文章就更好了

受蛋白类污染的硅胶基质反相柱，纯有机溶剂如乙腈或甲醇不能溶解多肽和蛋白质，所以清洗能力是不强的。那么其他的方法呢？

胶原蛋白在被大众知晓的短短几年间，就以其与美丽、健康的密切关系，迅速蹿红起来，成为尽人皆知的美容圣品。但是，胶原蛋白到底应该怎么补，你又知道吗? 　　20岁开始补充胶原蛋白 胶原蛋白(collagen)是人体内含量最多的一种蛋白质，约占人体蛋白质总量的25%~33%，它遍及全身的各个组织器官，如：肌肤、骨骼、软骨、韧带、角膜、各种内膜、筋膜等，是维持肌肤与组织器官形态、结构的主要成分。因此，胶原蛋白对人体的健康和美丽扮演着举足轻重的角色，有紧肤平皱、保湿滋润、恢复弹性、乳房挺拔、关节灵活、防止妊娠纹等作用。 女性在20岁时胶原蛋白已经开始流失，含量逐年下降，25岁后进入流失的高峰期，40岁时含量不到18岁时的一半。在肌肤当中，胶原蛋白负责为肌肤提供弹性和紧致度，并扮演着“深层水库”的角色为表皮提供水分。胶原蛋白的流失，导致肌肤出现干燥、粗糙、松弛、皱纹、毛孔粗大、暗淡、色斑等衰老现象。可以说肌肤衰老的过程，就是胶原蛋白流失的过程。因此，女性20岁以后就要注意胶原蛋白的补充了。 补充胶原蛋白，你选哪样？ 目前，补充胶原蛋白的方式主要有3种：1.添加在护肤品中：含胶原蛋白的化妆品有一定保湿、抗皱效果，但仅作用于表皮，很难进入真皮层。2.外部注射：直接皮下注射胶原蛋白，有立竿见影的效果，但存在肌肤排斥、过敏的风险，并且价格昂贵，维持的时间也较短暂。3.口服食用：口服胶原蛋白是最直接有效的补充方式，但要坚持2个月的周期，因为长时间流失掉的胶原蛋白，没有一定时间是难以补回来的。 从饮食上摄取胶原蛋白，如猪蹄、肉皮、牛蹄筋、鱼皮、软骨等可以在一定程度上补充胶原蛋白。但是，这些食物中的胶原蛋白由于是大分子蛋白质，很难被人体直接消化吸收，并且这类食物大多脂肪含量较高，不适合爱苗条的女性经常食用。因此，选择服用提炼加工后的胶原蛋白饮料是补充胶原蛋白最好的方式。刘纳老师还提醒，晚上睡前是服用胶原蛋白饮料的最佳时间，因为夜间10点到凌晨2点是肌肤修复和更新的最佳时段。 选择胶原蛋白的三个重要标准 标准一 胶原蛋白的分子量越小越好 人体在吸收胶原蛋白时，分子量是非常关键的因素，分子量越小越易被人体吸收。刘纳老师指出，胶原蛋白的分子量要在3000道尔顿以下，才适宜被人体吸收。 标准二 胶原蛋白的数量越多越好 人体在每天的自我更新中会不断流失胶原蛋白，女性从20岁开始每天要流失5000mg的胶原蛋白，随着年龄的增长，这一数值还在不断增加。因此，刘纳老师提醒，每天服用的胶原蛋白饮料中胶原蛋白的含量不应少于5000mg。 标准三 胶原蛋白不可缺少的搭档 刘纳老师告诉记者，胶原蛋白饮料中只含有胶原蛋白其效果不会长久，只有在胶原蛋白饮料中同时添加了透明质酸和弹性蛋白这两种物质，才能保证胶原蛋白的效果被完全发挥出来。 　　胶原蛋白产品推荐 1、FANCL胶原蛋白果味饮料?? 容量：50ml×10瓶/盒 价格：298元 自我介绍：特有的HTC胶原蛋白含大量三肽氨基蛋白，无需消化肌肤能直接吸收，有效促进皮肤胶原蛋白的新生。 2、Fine胶原蛋白饮料?? 容量：500ml/瓶 价格：1680元 自我介绍：以日本本地猪胎盘和鱼的胶原蛋白为主要原料，再加以DNA、弹性蛋白、透明质酸、维生素等成分制成。 3、Lumi(康魄)胶原蛋白液态饮料? 容量：50ml×8瓶/盒 价格：216元 自我介绍：胶原蛋白源自日本深海无污染鱼类的鱼皮，并且提取的是分子量为1000道尔顿以下的超细肽分子。 4、海姿丽海洋胶原蛋白果汁饮料? 容量：50ml×10瓶/盒 价格： 258元（基础型） 498元（加强型） 自我介绍：胶原蛋白源自无污染的深海三文鱼鱼皮，有基础型和加强型两种规格可以选择

10月8日，有媒体报道称，经过第三方机构检测，市售的Fancl、Lumi、丸美、汤臣倍健、颜如玉、无限极、安婕妤等七款胶原蛋白产品均出现胶原蛋白含量不足的问题，其中汤臣倍健、颜如玉、无限极的三款产品甚至未能检出胶原蛋白的特征物“羟脯氨酸”。由此，业内再一次掀起有关胶原蛋白产品的讨论。由此，业内再一次掀起有关胶原蛋白产品的讨论，频频陷入舆论危机。同时还了解到目前胶原蛋白产品始终未有统一标准,特异性指标也未能明确。不过多方认可，目前胶原蛋白的检测标准主要是测羟脯氨酸的含量。琳琅满目的胶原蛋白产品中胶原蛋白的含量是否合格？如何检测？国家相关的标准状况怎样？

当你看见婴儿柔滑细腻的肌肤，你是否除了羡慕外还从心底发出一声感叹？感叹岁月的流逝，使你的肌肤水嫩不再！感叹镜中自己的脸已被浅浅的细纹爬满！你可知道，这都是胶原蛋白缺失惹的祸！　　知道吗，胶原蛋白在滋润着你的皮肤，增加着皮肤弹性的同时，还增加着你头发、指甲的光泽，改善着你的关节和骨骼的健康，这个干燥风大的春天，如果你的皮肤感到了不适，也许应该在胶原蛋白上做点文章了。　　胶原蛋白Q&A 　　每次在外边吃饭时，都会有人指着那盘猪蹄殷勤地对同桌的女士说：“女孩子多吃点好，能美容。”相信不少女性都听到过类似的话。为什么猪蹄能美容？原来是猪蹄里含有一种叫胶原蛋白的物质，这种物质可以增强肌肤的弹性，延缓肌肤的衰老。可什么是胶原蛋白，它真像人们说的那样，吃了它，就能让皮肤水嫩光滑、结实有弹性吗？　　带着问题，我们咨询了美容营养专家段建华。　　Q：胶原蛋白在人体有什么用？　　A：胶原蛋白存在于人体皮肤、骨骼、牙齿、肌腱等部位，主要生理机能是做结缔组织的粘合物质。胶原蛋白能撑起皮肤。在皮肤方面，它与弹力纤维合力构成网状支撑体，提供给真皮层安定有力的支撑。　　Q：为什么随年龄的增长皮肤会呈现出老态？　　A：随年龄增长，人体胶原蛋白含量会逐渐流失，网状支撑体亦会变厚变硬、失去弹性，当真皮层的弹性与保水度降低，表皮即形成松垮的皱纹。　　Q：维持胶原蛋白含量，真能保持年轻？　　A：对，虽然胶原蛋白仅占总人体3-5%，但它是一个人身体外观是否呈现老态、肌肤样态是否有弹性的关键性因素，一旦身体获得足够胶原蛋白，即能迅速修复受伤的组织，提升细胞新陈代谢。因此只要护住这个关键，想保持年轻就简单多了。

我想从猪肝中分离纯化金属硫蛋白,样品经过Sephadex G-75凝胶柱后,提出其中MT二聚体的蛋白峰,分子量14000左右,经过浓缩后上弱阴离子交换柱,采用0.01-1.0M醋酸铵缓冲液线性梯度洗脱,PH8.3,但是经过一次实验后溶液的PH降低,大量洗脱平衡后仍不能达到8.3,现在我该怎么办?请赐教.

1.原理等电聚焦凝胶电泳是依据蛋白质分子的静电荷或等电点进行分离的技术，等电聚焦中，蛋白质分子在含有载体两性电解质形成的一个连续而稳定的线性pH梯度中电泳。载体两性电解质是脂肪族多氨基多羧酸，在电场中形成正极为酸性，负极为碱性的连续的pH梯度。蛋白质分子在偏离其等电点的pH条件下带有电荷，因此可以在电场中移动；当蛋白质迁移至其等电点位置时，其静电荷数为零，在电场中不再移动，据此将蛋白质分离。 等电聚焦中，只有在凝胶两端给以高电压时，才能获得较好的蛋白质条带分辨率，这就需要非常有效的凝胶冷却系统（否则会导致烧胶），即凝胶同期周围液体之间的热传递效率要高。由于平板胶热传递能力高，并可方便的同时比较多种蛋白质样品，所以平板胶用在等电聚焦上的居多。由于等电聚焦对蛋白质的电荷差异非常敏感，若要好的重复性，制备蛋白样品时一定要小心，要避免任何对蛋白质化学组成和结构的修饰。另外，蛋白质－脂类、蛋白质－蛋白质相互作用可引起电荷改变，进而导致等电点迁移或纹理现象。除非特殊需要研究蛋白质－蛋白质相互作用或者必须保持蛋白质的生物学功能，等电聚焦通常在含有尿素的变性凝胶系统中进行。使用非离子去垢剂也可以提高分辨率。 2.主要仪器、试剂仪器：微型电泳系统、电源、注射器、固定和染色用容器 试剂：丙稀酰胺、双－丙稀酰胺、载体两性电解质、尿素、过硫酸胺、TEMED、TritonX－100、2－巯基乙醇、溴酚蓝、磷酸、氢氧化钠、氯化钾、三氯乙酸、考马斯亮蓝、甲醇、乙酸。 储存液：1）30%（w/v）丙稀酰胺，1%（w/v）双－丙稀酰胺；2）20%Triton X100；3）10%三氯乙酸；4）1%三氯乙酸；5）1%溴酚蓝；6）考马斯亮蓝染色液；7）考马斯亮蓝脱色液；

胶原蛋白是生物高分子，动物结缔组织中的主要成分，也是哺乳动物体内含量最多、分布最广的功能性蛋白，占蛋白质总量的25%~30%，某些生物体甚至高达80%以上。1、银耳银耳富有天然特性胶质，加上它的滋阴作用，长期服用可以润肤，并有祛除脸部黄褐斑、雀斑的功效!煮银耳一定要把根部剪掉，这样才容易煮烂，而且一定要小火慢煮，直到煮烂为止，这样胶质才会全部被煮出来，现在有卖活银耳的只需要10分钟就可以煮出胶原哦。2、鱼类其实鱼类中的胶原蛋白成分的结构与人体最接近，也是最容易为身体组织吸收的胶原蛋白，吸收率也最高。煮鱼汤是一种能够较完全获得鱼类胶原的办法。3、牛蹄筋牛蹄筋不含胆固醇，能增强细胞生理代谢，具有强筋壮骨之功效，对腰膝酸软、身体瘦弱者有很好的食疗作用。如果你还在节食，不妨吃一些牛蹄筋，有补钙的效果哦。4、猪皮中医认为猪皮味甘、性凉、有滋阴补虚，清热利咽的功效。经常食用猪皮还能减慢机体细胞老化，尤其对阴虚内热的症状有很大改善。100g猪皮的热量不低，大约350卡路里，不过做成肉皮冻，热量不高，也能够加入蔬菜同食，给大家介绍一种豆浆机猪皮冻的做法：材料：猪皮150克、水煮好的猪皮切细丝猪皮倒入豆浆机里、水倒入豆浆机里、水量在最低水位线的位置选择米糊功能！开始工作！放入冰箱冷藏几个小时就可以吃了！是不是太简单了呢？5、猪蹄作为美容圣品，猪蹄含有丰富的胶原蛋白质，但是脂肪含量却比肥肉低。中医认为猪蹄性平，味甘咸，营养堪比熊掌 猪蹄胶原蛋白还可促进毛发、指甲生长，保持皮肤柔软、细腻，改善全身的微循环。当然猪蹄的热量也不低，小编建议水煮后沥去油脂再食用，热量要低一些哦!6、鸡爪鸡爪能够降压降脂，提高人体免疫力，有益心血管，养颜护肤，很适合平时食用的食物。但是鸡爪的热量不算低，100g就有250卡路里，平时不宜多吃，可以做成卤鸡爪，当做零食吃，每次吃1到2个即可。

本文引用自发酵《在发酵工艺角度看蛋白表达》引用发酵 的 在发酵工艺角度看蛋白表达在分子生物学角度讲，找到或合成外源蛋白基因，构建质粒，并导入细胞以表达具有生物活性的折叠正确的蛋白，是一种成熟的常规技术。目前，包括酶，抗原，抗体，激素，其他小分子调节蛋白在内的很多蛋白，都已经用这种技术实现了工业化生产。在具体的工艺选择上，历史沿袭习惯和表达体系的选择，对工艺稳定性，成本，有巨大的影响。 目前，常用的蛋白表达系，有3个类别：1，大肠杆菌表达系。大肠杆菌的遗传背景十分清楚，代谢相对简单，发酵副产物少，在不是很严格的情况下，是表达蛋白的首选。通过按经验选择合适的菌株及合适的质粒，既可以以包涵体的形式得到大量的目标蛋白，又可以在细胞外得到可溶性蛋白，是常见的一种表达系。2，酵母菌表达系。用酵母做表达系，理由之一，也是遗传背景清楚，而且，当蛋白分子量过小，不能形成包涵体时，或蛋白的二硫键过多，不易体外复性时，酵母菌就成了合适的选择。另外，酵母对蛋白也会有一个简单的修饰，近似于高等动物的蛋白糖基化过程。这样，在合成在体液中发挥作用的蛋白，而且，又不能（技术水平限制）用动物细胞时，就可以退而求其次的选用酵母菌表达。一般是用信号肽把蛋白导出细胞，在发酵液中以可溶性蛋白的形式存在。这也是一个常见的表达系。3，动物（或说，人的）细胞表达系。这种情况，在纯度或毒性方面有较高要求的产品应用。一般国外产品应用较多，国内还没有用动物细胞表达蛋白实现商业化生产的报道。由于技术限制，国内工业化生产用这个方法目前还有较大难度。这3种表达系，各自有自己的优缺点。首先，在潜在的毒性影像方面讲，由于和真核生物亲缘关系太远，大肠杆菌就最不合适。其次是酵母菌。而在表达量和代谢控制成本上来讲，酵母菌和动物细胞又是差强人意的。现在，很多蛋白习惯性的选用酵母菌做表达系，就是因为早期提取蛋白技术低下，而动物细胞培养技术又不过关的原因所致。目前，虽然提取工艺提高了，但作为蛋白这种高附加值产品，运作成本集中在销售而不是生产，所以，降低生产成本的诉求很低。站在降低开发难度的角度讲，一方面，质粒构建和质粒与菌株的匹配方面依赖大量经验，另一方面，发酵工艺策略选择与发酵工艺优化又需要很大的投入，所以，技术开发部门沿用自己熟悉的，已经积累了大量经验的表达系，是合理的。不过，随着分子技术进一步的发展，分子技术进入低附加值的产品领域又是必然的，降低生产成本就变的越来越必要了。 大肠杆菌表达系有两种得到外源蛋白的方法：1，缓慢的表达，得到可溶性蛋白，这种方法产量和酵母菌表达类似，与酵母菌比，不具有明显的优势，一般是有做大肠杆菌传统的研究机构生产小分子蛋白的一种沿袭性做法。2，使用T7启动子表达蛋白，这样，高速的蛋白表达速率使蛋白来不及折叠，在细胞内形成非水溶性的包涵体。最后目标蛋白可以达到总细胞质量的15%-25%，这样，就为降低成本提供了一种可能。不过，在使用T7启动子表达时，也存在两个难点：1，蛋白的复性技术，如果形成可溶性蛋白，那利用（使用分子技术加载在目标蛋白上）信号肽，只要过一遍柱子就能分离得到纯度非常高的，具有生物活性的产品，而形成包涵体，对提取，复性就有较高的要求，特别是二硫键的存在，会对复性产生很大的影响。在目前国内和国际流行技术看，并不是所有的蛋白都能在预定成本下复性的。2，任何情况下，高产都是代谢网络互相依赖与作用的结果。在如此高的表达量下，甚至细胞的形态都已经发生很大变化，正常代谢受到严重干扰，以至于放大时，摇瓶工艺对发酵工艺几乎没有任何参考价值。发酵工艺策略的选择将直接依赖于工程人员在生化，生理水平对菌株的理解，而匮乏可资参考的数据资料。发酵工艺的优化要离开摇瓶经验在发酵罐上逐步进行，这样，整个发酵工艺的确立就需要比想象中要大得多的人员与时间的投入。另外，再说一下糖基化的问题。在动物细胞内合成的折叠正确的蛋白，在分泌入体液前会有一个糖基化的过程，加上一个糖链就不会很快被蛋白酶当做折叠错误的蛋白水解掉。但是以微生物为表达系表达的蛋白，不具有动物细胞的修饰过程，用大肠杆菌表达的目标蛋白，很快会在血液中被降解。解决或回避这个问题，有两种方法：1，用动物细胞表达，一般，是用癌化的人类细胞。由于动物细胞培养技术要求过高，在国外比较昂贵的医药中有应用，国内不常见。2，由于酵母菌也有一个对蛋白的粗略的修饰过程，可以用酵母菌表达目标蛋白。这个技术，国内国外都在用，可以是一个权宜之计。主要难点集中在对合适菌株的分子水平的改造，以达到尽可能接近满意的修饰效果。这样，就可以在不同目标蛋白上表达系和发酵工艺上做出选择。如果是小分子，无糖基化修饰或不在体液中发挥作用的蛋白，可以选择大肠杆菌和酵母菌表达系，得到可溶性蛋白，然后提取。如果分子量合适，并对生产成本有诉求，而且可以比较方便的复性，则选用大肠杆菌表达系，得到包涵体，然后复性。如果是需要在体液中发挥活性并有糖基化要求的 蛋白，则选用经过分子生物学改造的酵母菌表达系。当然，并不是任何一个实验室都同时拥有或擅长所有的方向的。而难点，往往集中在以下3个方面：1，大肠杆菌蛋白包涵体复性。2，糖基化修饰。3，发酵工艺（工程菌株的工业水平）的确定。做工程一般是理科实验室的弱项，而工科实验室做基础又很少，在把工科和理科结合方面，我们实验室还是有经验和成功先例的。下面，以溶菌酶为例，阐述一下蛋白表达系的选择和工艺的确定。溶菌酶是一类具有种属差异的非特异性免疫物质，在动物界中普遍存在，种类繁多，其实，在植物和微生物中也有发现。但研究最多的还是动物。开发兽用溶菌酶，主要是想作为抗生素的替代物，作为添加剂使用。因此是一个低附加值的产品。下面一切的工作，都会围绕“兽用”和“低附加值”展开。首先，比较几种常见和认为有效的溶菌酶，杀菌效果最好的是人的溶菌酶，但考虑到潜在的危险（具有对人溶菌酶产生抗性，并使抗性基因扩散），舍尔求其次，用了鸟类蛋清溶菌酶，作为表达对象。然后，在得到溶菌酶蛋白的一级结构后，对此进行了分析。此蛋白不会用于体液内，故没有糖链修饰的问题。分子量不是很大，但也不太小，130左右的氨基酸构成，足以形成包涵体，这就为用大肠杆菌表达系高效表达提供了可能。讨厌的是有4个二硫键，其中有两个在结构复杂区域，折叠正确有一定的困难。但是，如果用酵母菌做，可能没法解决成本问题，即便优化工艺现在过去了，也不会是最终版本----肯定会有人用大肠杆菌做。所以，结论就是必须知难而进，拿下复性工艺。另外，由于是低附加值产品，发酵吨位就不能太小。以往分子生物学流行的50升，100升小罐发酵，肯定是不行的。发酵罐的放大，除了溶氧，剪切力发生变化，更重要的是搅拌线速度改变了胞外酶以及包括细胞本身的代谢方式和速度。在胞内体现就是氧化还原电势的改变，这在工艺上会带来很多麻烦。虽然说，一般是放大后产量往往提高，但放大过程中，小罐的经验就不能照搬了。同时，也因为是低附加值产品，发酵过程中诸如质粒丢失等稳定性要求，就很高了，应为只有稳定，才能控制成本。这样，工艺就成了第二个难点。明白这些之后，按照大肠杆菌的喜好，合成了溶菌酶的基因。然后构建质粒，导入细胞。在摇瓶水平表达溶菌酶。在筛选复性条件的同时，就同时在发酵罐水平对工艺稳定性进行了优化。首先，为了进一步提高质粒稳定性，对初始培养基进行了重新设计。并改动发酵工艺策略，由于是胞内产物，我们应用高细胞密度发酵控制法延长限制性生长时间（不能用经典发酵的延长对数期生长时间的办法，对工程菌不适合，会造成质粒丢失，代谢紊乱等一系列问题），提高细胞量，并改变了诱导时机，得到了稳定的高产，具体数据比较枯燥，就不在此展开了。提取方面，经过不懈的努力，我们也掌握了比较成功的复性条件（具体由另外人员负责，也不做详细介绍了）。这样，工艺才基本拼凑好。进一步优化，在试生产多次重复时在进行。以上，是外源蛋白表达的粗略的技术和工艺的过程。

很多女性都将胶原蛋白奉为美容至宝，认为它有保湿、紧肤、延缓衰老的作用。但近段时间，这一“红遍天下”的产品却引来包括烧伤科、营养科、皮肤科等诸多专业医学人士的集体网络炮轰，甚至有专家怀疑，有部分胶原蛋白产品是其中添加的雌激素在发挥作用，长期食用可能引发囊肿、乳腺等疾病。5月19日，微博认证为北京积水潭医院烧伤科主治医师的“烧伤超人阿宝”发微博称，“所有口服胶原蛋白保健品全是骗人的”，随即引发消费者热议，微博发布短短几天时间转发上万次，并且在新浪微博上得到多位医生的认同。大家觉得如何？

很多朋友问这样一个问题：为什么毕赤酵母表达困难?他们自己也很纳闷，重组酵母pcr检测也证明目的基因重组了，但是诱导之后就是在表达上清中检测不到目的蛋白，仔细研究操作手册后仍然不知道原因。本人，根据自己的经验，采用倒推的方法，按实验过程从后向前分析，供大家参考：1、诱导之后表达上清中检测不到目的蛋白：分析1：检测的方法是否有问题，要考虑是不是蛋白表达量低而没有检测到? 如果是蛋白表达低，可以选择浓缩蛋白，具体的方法很多，有TCA、丙酮、浓缩柱等等方法，之前在本版已经发过帖，在此不赘述。 2、如果蛋白浓缩N倍之后仍然检测不到，那基本可以确证蛋白并不在上清中。那么蛋白到哪里去了，考虑是否没有分泌出来，而是在胞内，那就需要通过裂解酵母来检 测胞内蛋白，具体的方法很多，在此也不赘述，曾整理过相关破碎的帖子。 3、如果胞内也没有目的蛋白表达，那么基本可以确定蛋白并没有表达。 4、为什么没有表达呢?倒推回来就是诱导的过程了，诱导体系是什么?甲醇浓度是多少?培养问题是多少，转速是多少?这些都要注意。甲醇一般是0.5%-1.0%，本人用的 是0.5%，也有很多人也用1.0%，曾见过一个帖子，说超过1.5%反而会抑制表达，没有验证过，供大家参考。培养问题28-30度比较合适，转速250rpm比较合适，诱导 体系没有固定的体系，说明书上推荐的是BMGY到OD600 2~6，换到BMMY中OD600 为1左右。 5、如果诱导的过程也没有问题，那问题就复杂了，特别是重组酵母PCR检测证明目的基因确实已经发生了重组。这个时候是最郁闷的了，但是郁闷怎么办，还是要找原 因，在此我给的建议是先做RT-PCR证明mRNA水平的情况，也就是说有没有转录。如果转录了，后续的操作也没有问题(本帖的1、2、3、4项)，那么只有重新设计实 验，比如换酵母株，有文章上说：用GS115表达不出蛋白，换KM71H后，大部分克隆能表达。 6、有个帖子说的很好，在此和大家分享一下。 1、 菌株：用GS115表达不出蛋白，换KM71H后，大部分克隆能表达。 2、温度：　在28度和室温下诱导表达，表达水平可能都不低。 3、pH：手册上用6.0，pH提高到6.8，不表达的蛋白可能就表达出来。BMMY的pH7.0-7.5比较合适。国内外做的最好的rHSA，最适pH大概5-6左右。pH3的时 候yeast和peptone好像会沉淀的，可以用磷酸和磷酸二氢钾调，具体比例自己去试试。 4、偏爱密码子： codon bias一般不是主要的问题，你要表达的蛋白特性才是主要问题，酵母对分子量大(30KD以上)，结构复杂(如一些蛋白酶)，二硫键含量多的 蛋白往往不能有效表达，尤其是分泌表达。密码子改造对一些较小的而且结构简单的蛋白表达量的提高可能有一些作用。比如一位战友用Pichia酵母表达一个单链 抗体，29KD，含有2对二硫键，表达量约几毫克每升，选用酵母偏好密码子全基因合成后，表达量没有什么提高。 5、表达时间与空质粒转化对照：诱导时间长了以后，是会有很多蛋白分泌出来的，时间越长杂蛋白就越多，且分子量都比较大。最好做一个空质粒转化的对照， 这样就会比较肯定到底是不是自身的蛋白分泌的结果。 6、污染：每个样品从G418板上挑10个左右单克隆于2ml BMGY摇菌(30ml玻璃管，比LB管大一点)，纱布一般用8层，一天左右看着比较浑离心，留样1ml，余 1ml换2ml BMMY诱导表达，3,4层纱布足够了。 污染一般都是跟瓶口覆盖有关的原因造成的，只盖纱布肯定会污染。加盖报纸后，就再没遇到过污染。如果只用6层纱布，污染的可能当然很大，100ml三角瓶， 装量10ml培养液，用橡筋把8层纱布和2层报纸拴紧封口，空气浴摇床。 7、不表达：蛋白有没有表达就要看你的运气了，一般重复2-3次实验都没有表达菌株，这个蛋白就放弃表达了。 8、表达量： 30KD,10mg/L表达量已经很高，最直接的方法是发酵，一般提高5-10倍。大肠杆菌一样出现大团的超表达蛋白。 9、糖基化：酵母分泌表达的N糖基化是可以预测的，有如下序列：N X S/T就是潜在的糖基化位点，X为任意氨基酸，1个糖基化位点会加上1-3KD左右的糖基。另外可 能还有O糖基化话，但是无法预测其位点，不过很少听说表达蛋白有O糖基化的。如果胞内表达，不存在糖基化的问题。 10、表型与表达：重组SalI和BglII酶切产生单交换和双交换，结果就是产生Mut+和Muts表型的菌株;前者在甲醇诱导表达时生长快，消耗的甲醇多，后者生长慢，消耗 的甲醇少，所以诱导表达时Muts表型要求更高的菌体浓度。一般用Mut+表型的较多，但是对某些蛋白Muts菌株可能表达的更好，只有试试才知道你的蛋白用那种菌 株表达较好。 11、培养基 YPD：最基本的培养用;BMGY：诱导表达前培养用;BMMY：诱导表达用;MD：电转化后筛选his+用。 YEPD是不能代替BMGY的，因为有葡萄糖，这样残留的葡萄糖会影响下一步的诱导表达。不过有一种方法是可行的，就是用YPG培养基代替，只是把YEPD中的葡萄糖 用3%的甘油代替，也可以降低成本。摇瓶毕竟不能和发酵罐比，甘油残余会抑制甲醇利用。 BMGY、BMMY灭菌后才能加甲醇、磷酸钾、生物素。配制BMMY时也没必要用5%过滤除菌的甲醇，在灭菌后使用前加100%甲醇至你要的浓度。 YNB可以高压灭菌，没问题的，也可以0.22um过滤处理，天冬氨酸和苏氨酸要待培养基高压灭菌后加入;配YPD时可以加入YPD一起灭菌，但时间不能太长，温度不能 太高，一般121-125度12-15分钟足够了。若时间过长，温度过高，可能导致YPD焦化。glucose和含氮化合物在一起容易产生美拉德反应，这是配制培养基中的禁忌。 颜色很深的话，基本不能使用了。或者含有葡萄糖和/或YNB的培养基108度35min高压灭菌。 小量发酵其实可以把培养基成分中的YNB和生物素去除，培养基价格便宜，操作又方便，可以直接灭菌，效果也很好(效果不比含YNB的差)。 如果是用自己配置的培养基，如玉米浸提液、麦芽浸提液、麦麸浸提液等等，可以不用换液，采取添料来维持酵母对培养基的营养需要。 用无机盐进行大规模发酵，更省钱。更多有关蛋白表达纯化的相关资料，请点击：资料专区

刚接触蛋白分离纯化，现在在过柱子分离纯化蛋白。现在过的是sephadex G50设备是 凝胶柱 紫外检测仪 部分收集器 不能在电脑上显示峰图。我一直有个困惑，紫外检测器检测到蛋白时显示屏上数值会上升，上升反应的是蛋白浓度逐渐升高吗？随着数值升高 我该如何收集峰值处的蛋白呢 ，我是5ml/管收集。 举例子：数值从1到30一个试管 5ml过去了 第二个试管中数值45（峰值），正常我应该收集第二试管的对吧？ 那第一个试管里有我要的蛋白吗？ 到底怎么收集？求大家帮我解答一下 真的不明白 搞不懂！

各位网友，在下想征集真蛋白的检测技术。80年代，曾有2种蛋白检测技术的诞生（可能不止两种，请大家集思广益），一种是凯氏定氮法，一种是杜马斯燃烧法。目前我们用的最多的是凯氏定氮法。 大家都知道，这两种方法都是以氮元素的量乘以相应的系数，得出蛋白的含量，是粗蛋白的含量。2008年的三鹿奶粉事件，就是因为不能检测真蛋白而发生的。 现在小弟在这个帖子中，征集各位大侠的检测方案。要求： 原理： 使用仪器： 检一个样的时长： 注意：每发一种新的检测帖，奖励30分，与楼上重复的不得分。各位先到先得了！http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09502.gif==============================================非常感谢：hhciq对本帖的大力支持！送http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em23.gifhttp://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em23.gifhttp://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em23.gifhttp://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em23.gifhttp://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em23.gifhttp://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em23.gif，感谢xujing0202520的补充。现将hhciq及xujing0202520的回帖整理如下：请hhciq把把关，看有没有什么重复的。1、采用化学发光方法, 结合有效氮吸收装置,测定饲料中的粗蛋白质。静态注射化学发光法选用2.0×10-4mol/L的Luminol溶液,用量为2.00ml,待测液的用量为2.00ml。静态注射化学发光法简化了测试方法,缩短了时间,加标回收率为86.91%～104.60%,RSD5%(n=5),适用于饲料生产部门的质量控制。 2、反相高效液相色谱法 反相高效液相色谱法通常采用低离子强度酸性有机冲洗液和烷基硅胶键合固定相， 影响分离的因素主要有流动相组成、洗脱湿度、洗脱液p H值、离子对试剂和流速等； 有利于分离的条件是低 p H值、流动相、室温或较高的温度及使用乙腈或异丙醇作为有 机部分，三氟乙酸 ( T F A)对于蛋白质及气相色谱公认是一种较好的流动相添加剂。 蛋白质的保留性质和选择性还与键合固定相的性质有关， 采用大孔硅胶和短链烷基 键合固定相在蛋白质分离中具有优势。3、正交轴逆流色谱法是新近发展起来的一种方法。 具体是：以n l ( 质量分数为 1 2 ． 5 ％ 的P E G 8 0 o 0 ) ：n l( 质量分数为2 5 ％的磷酸氢二钾)=1 ：1 或i n( 质量分数为 1 2 ． 5 ％的 P E G 8 0 0 0 ) ： m ( 质量分数为3 0 ％ 磷酸氢二钾) =1 ：1 为溶剂系统，以下相作流动相，上相 作固定相，操作时采用5 0 0 r ／ m i n的转速和6 0 0 ml ／ h的流动相流速。该方法在分离度不大 的基础上提高了进样量，适用于分离天然生物大分子。4、微乳液毛细管电动色谱分离法 ( ME E K c) 微乳液毛细管电动色谱分离法是在胶束电动色谱 ( ME K c)基础上发展起来的，在E K C中，分离载体为离子胶束，它由表面活性剂组成，不同的表面活性剂构成不同的胶束，因而具有不同选择性，若以水包油微乳液作为分离载体，则称之为ME E K C法， 该法是一种新型的分离技术，目前多用于小分子中性物质的分离。5、毛细管电泳法 电泳一直是研究蛋白质的重要方法。毛细管电泳除了具备凝胶电泳的高分辨力以 外，以其快速、定量、重复性好。灵敏度高及自动化程度高等诸多优点在近几年内成为 蛋白质分离分析一项崭新且重要的技术。 其分离机理是根据被分离物质的泳动率不同而 将其分开，毛细管电泳仪就是基于这个原理而设计的自动化分离分析样品的仪器，由于 毛细管电泳刚兴起，目前主要应用的模式仍是自由溶液毛细管电泳，虽然此法具备多项 优点，但仍有不足之处。首先它不能用于制备分离，再者当样品较稀时不能象H P L C那 样进样较多体积，使样品吸附在柱上，然后洗脱下来。 6、毛细管导电聚焦法 ( C mF ) C l E F法可用于分离等电点 ( P I )相差0 ． 1 2 p H单位的蛋白质，其基本步骤是：先在 毛细管内对蛋白质进行等电聚焦，然后对分离的蛋白质区带进行检测，按照迁移技术的 不同，分离方法可分为两步法、一步法、固定区带法。C l E F分离蛋白质应先解决基本 问题：消除或减少电渗的涂层方法、检测方法和条件，蛋白质区带的迁移及 P I测定方法，影响C I E F分离效能的因素，两性电解质的组成和浓度、毛细管长度、聚焦电压等。 7、反胶团萃取法 反胶团萃取分离蛋白质是一种新型的有发展前途的生物产品的分离技术。 它是利用 表面活性剂在有机溶剂中形成反向胶团，从而实施了对蛋白质的有效萃取，是表面活性 剂在生物工程中的一种成功应用。8、累加进样分离法 它是指导蛋白质在梯度开始后的一段时间内可以多次重复进样而其保留值无可觉 察的变化的方法。实验证明：在洗脱液远离突跃点时，蛋白质可以多次重复进样而其保 留值与常规分离无明显的变化。 这种累加进样分离法在蛋白质的制各纯化中有重要的应 用价值，它可以提高有效柱容器，节省大量时间和消耗，在一次色谱分离中完成聚集和 分离两步操作，可用分析型仪器制各数量较大的样品。9、凯氏( K j e l d a h 1 ) 定氮法 将被测试的样品与浓硫酸在硫酸铜和硫酸钾存在下共热消化， 含氮有机物即分解产生氨、二氧化碳和水， 氨与硫酸反应变成硫酸铵。消化后向消化液中加入强碱碱化使之分解放出氨，用水蒸气将氨蒸至硼酸液中， 用标准强酸溶液滴定收集氨的硼酸溶液， 即可计算出样品的氮含量， 从而折算出样品的蛋白质含量( 通常由含氮量乘以系数 6 ． 2 5计算出( 该系数为蛋白质平均含氮量的倒数) ， 乳制品通过乘以系数 6 ． 3 8计算出( 该系数为乳制品中蛋白质含氮量的倒 数) ) 。这种方法是K j e l d a h l 在 1 8 8 3年发明的， 当时他只使用硫酸分解试样， 测定谷物中的蛋白含量， 需要较长的反应时间。后来 G u n n i n g 搞清楚了消化机理， 在消化时加入 K s O 使反应温度由原来的3 8 0 ~ C( 硫酸沸点) 上升到4 0 0 ~ C， 并加入硫酸铜为催化剂， 提高了消化速度， 改进了凯氏定氮法。该方法的缺点是耗时长， 灵敏度低， 样品中的含氮化合物会影响蛋白含量的测定。要想准确测定出蛋白含量， 可以先测定出总含氮量。再用三氯乙酸将样品溶液中的蛋白沉淀除去， 然后测定溶液的非蛋白含氮量， 最后从总含氮量中扣除非蛋白含氮量就可以比较准确地测定出样品的真正蛋白含量。10、

凝胶柱分离蛋白,中午刚开机的时候,进了一针标准品,是7.27,一直做到晚上样品做完后,又进了一针标准品,变到了6.8多,正常吗. 流动相tris-HCl. 感觉后来环境温度很高,是不是温度的原因啊?? 这样算正常吗?

人血白蛋白多聚体测定法本法系用分子排阻色谱法测定人血白蛋白多聚体含量。照分子排阻色谱法（附录Ⅲ D）测定。色谱条件与系统适用性试验 用亲水硅胶高效体积排阻色谱柱（SEC，排阻极限300kD，粒度10μm），柱直径7.5mm,长60cm；以含1％异丙醇的pH7.0 0.2mol/L磷酸盐缓冲液为流动相；检测波长为280nm ；流速为每分钟0.6ml。取每1ml含蛋白质为12mg 的人血白蛋白溶液20μl，注入色谱柱，记录色谱图,人血白蛋白单体峰与二聚体峰间的分离度应大于1.5，拖尾因子按人血白蛋白单体峰计算应为0.95～1.40。测定法 取供试品适量，用流动相稀释成每1ml约含蛋白质12mg的溶液,取20μl，注入色谱柱，记录色谱图60分钟（色谱柱长60cm）。按面积归一法计算，色谱图中未保留（全排阻）峰的含量(%)除以2，即为人血白蛋白多聚体含量请教：为何除以2呢？很奇怪呀

奶粉蛋白质中乳清蛋白含量的测定 十二烷基硫酸钠-毛细管凝胶电泳法该标准还未正式发布

1．聚丙烯酰胺的30%母液会降解，要4度避光保存。 2．APS会失效，10%APS一般保质期才一个月左右。-20度分装长期保存。 3．注意Tris buff的PH值，以及平时所用的水的PH值。PH值改变会使带型非常怪异，所有蛋白和溴酚蓝压成一条细线（即便在分离胶中），如果溴酚蓝前有红色染料，那么此染料彗星式拖尾从溴酚蓝一直延伸到胶底部（溴酚蓝此时涌动极缓慢，位于胶中上部） 4．上下层式电泳装置若漏液，哪边漏液，电泳条带往哪边倾斜。内外式电泳装置漏液，则装置处于短路状态，液体会过热。SDS-PAGE胶可能局部自溶，条带扭曲、变形。

http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/10/A1380442300png_small.jpg蛋白浓缩在 免疫学 中应用广泛，蛋白浓缩的方法数数还不少：聚乙二醇沉淀法、冷冻干燥浓缩法、超滤膜浓缩法、有机溶剂沉淀法……那么，这些方法用的时候该注意哪些问题呢？1、丙酮沉淀法：三氯醋酸沉淀法试验要求的仪器简单，但是常常导致蛋白质变性。2、免疫沉淀法：得有特异性抗体3、硫酸铵沉淀法：利用高浓度盐将蛋白质析出(盐析)， 选择硫酸按是因为：盐析有效性，pH范围广，溶解度高，溶液散热少，经济，大多数的蛋白都可以用资格方法4、聚乙二醇沉淀法：使用PEG时旨在个别情况下才会是蛋白质稍有变性!他溶解是散热低，形成沉淀的平衡时间短，通常达到30%时蛋白质就会达到最大量的沉淀!5、离子交换层析：可用阴离子交换树脂进行浓缩。6、透析袋浓缩法：利用透析袋浓缩蛋白质溶液是应用最广的一种。将要浓缩的蛋白溶液放入透析袋(无透析袋可用玻璃纸代替)，结扎，把高分子(6 000-12 000)聚合物如聚乙二醇(碳蜡)、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可。也可将吸水剂配成30%-40%浓度的溶液，将装有蛋白液的透析袋放入即可。吸水剂用过后，可放入温箱中烘干或自然干燥后，仍可再用。主要用于更换蛋白质的缓冲液，得有透析袋。不需要特殊的仪器 。一般用得是PEG20000进行实验，简单，快速，对蛋白没什么影响7、冷冻干燥浓缩法：这是浓缩蛋白质的一种较好的办法，它既使蛋白质不易变性，又保持蛋白质中固有的成分。它是在冰冻状态下直接升华去除水分。具体做法是将蛋白液在低温下冰冻，然后移置干燥器内(干燥器内装有干燥剂，如NaOH、CaCl2和硅胶等)。密闭，迅速抽空，并维持在抽空状态。数小时后即可获得含有蛋白的干燥粉末。干燥后的蛋白质保存方便，应用时可配成任意浓度使用。也可采用冻干机进行冷冻干燥。8、吹干浓缩法：将蛋白溶液装入透析袋内，放在电风扇下吹。此法简单，但速度慢，且温度不能过高，最好不要超过15 ℃。9、超滤膜浓缩法：此法是利用微孔纤维素膜通过高压将水分滤出，而蛋白质存留于膜上达到浓缩目的。有两种方法进行浓缩：一种是用醋酸纤维素膜装入高压过滤器内，在不断搅拌之下过滤;另一种是将蛋白液装入透析袋内置于真空干燥器的通风口上，负压抽气，而使袋内液体渗出。10、凝胶浓缩法：选用孔径较小的凝胶，如SephadexG25或G50，将凝胶直接加入蛋白溶液中。根据干胶的吸水量和蛋白液需浓缩的倍数而称取所需的干胶量。放入冰箱内，凝胶粒子吸水后，通过离心除去。11、浓缩胶浓缩法：浓缩胶是一种高分子网状结构的有机聚合物，具有很强的吸水性能。每克干胶可吸水120 ml～150 ml。它能吸收低分子量的物质，如水、葡萄糖、蔗糖、无机盐等，适宜浓缩10 000分子量以上的生物大分子物质。浓缩后，蛋白质的回收率可达80%～90%。比浓缩胶应用方便，直接加入被浓缩的溶液中即可。必须注意，浓缩溶液的pH值应大于被浓缩物质的等电点，否则在浓缩胶表面产生阳离子交换，影响浓缩物质的回收率。12、盐析法：多用于各种蛋白质和酶的分离纯化。一般来说，所有固体溶质都可以在溶液中加入中性盐而沉淀析出，这一过程叫盐析。如硫酸铵沉淀法。13、有机溶剂沉淀法：有机溶剂的沉淀机理是降低水的介电常数，导致具有表面水层的生物大分子脱水，相互聚集，最后析出。该法优点在于： （1）分辨能力比盐析法高，即蛋白质或其它溶剂只在一个比较窄的有机溶剂浓度下沉淀;（2）沉淀不用脱盐，过滤较为容易;（3）在生化制备中应用比盐析法广泛。其缺点是对具有生物活性的大分子容易引起变性失活，操作要求在低温下进行。总体来说，蛋白质和酶的有机溶剂沉淀法不如盐析法普遍。有机溶剂的选择首先是能和水混溶，使用较多的有机溶剂是乙醇、甲醇、丙酮，还有二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、乙腈和2-甲基-2,4戊二醇等。有多种因素影响有机溶剂的沉淀效果： （1）温度：低温可保持生物大分子活性，同时降低其溶解度，提高提取效率;

胶原蛋白是结缔组织的主要成分，也是哺乳动物体内含量最多、分布最广的功能性蛋白，占蛋白质总量的[font='Times New Roman',serif]25%~30%[/font]，作为一种生物高分子，胶原蛋白具有良好的生物相容性、可生物降解性及生物活性，在食品、医药、组织工程、化妆品等领域应用广泛。 胶原蛋白作为医美产品植入剂，能够增加皮肤的紧缩性、弹性和保湿度，使肌肤更显亮丽，有效改善肌肤纹理，使松弛的肌肤恢复年轻状态。补充胶原蛋白后，外来信号刺激细胞记忆功能可使缺损、凹陷、松弛的肌肤组织复原，对痤疮疤痕、表皮或真皮组织受损、上皮紧缩、深度细纹或其他软组织的缺损，均能明显改善。还能够帮助提升皮肤的机能，平衡干性及油性肌肤的油脂分泌，增强免疫保护能力。 胶原蛋白的质量控制是其流向市场的重要一环，首先要鉴别胶原蛋白，方法是取该产品[font='Times New Roman',serif]1g[/font]，加[font='Times New Roman',serif]3mL[/font]纯化水溶解后，制成[font='Times New Roman',serif]1:4[/font]的供试液，按[font='Times New Roman',serif]SDS-[/font]聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测[font='Times New Roman',serif]97000Da[/font]处有条带，相对偏差不超过[font='Times New Roman',serif]5%[/font]。 然后对产品中的胶原蛋白含量进行测定，原理是在强碱性溶液中，蛋白质与双缩脉试剂形成紫色络合物，紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比利用标准蛋白质溶液作对照，采用紫外可见分光光度法测定样品中重组胶原蛋白含量。操作过程如下：[font='Times New Roman',serif]1.[/font]精密取牛血清白蛋白[font='Times New Roman',serif] (BSA)[/font]标准品适量，用纯化水作溶剂，稀释成每[font='Times New Roman',serif]1mL[/font]含[font='Times New Roman',serif]10mg[/font]的溶液，再用纯化水作溶剂准确配制成[font='Times New Roman',serif]0mg/mL.2mg/mL[/font]，[font='Times New Roman',serif]4mgmL[/font]，[font='Times New Roman',serif]6mgmL[/font]，[font='Times New Roman',serif]8mg/mL[/font]，[font='Times New Roman',serif]10mg/mL[/font]的标准蛋白溶液备用。[font='Times New Roman',serif]2.[/font]双缩脉试剂：准确称取[font='Times New Roman',serif]15g[/font]硫酸铜、[font='Times New Roman',serif]6.0g[/font]酒石酸钾钠和[font='Times New Roman',serif]5.0g[/font]碘化钾，用[font='Times New Roman',serif]500ml[/font]纯化水溶解，在搅拌下加入[font='Times New Roman',serif]300mL10%[/font]氢氧化钠溶液，用水稀释到[font='Times New Roman',serif]1000mL[/font]，摇匀，即得。[font='Times New Roman',serif]3.[/font]分别取不同浓度标准蛋白质溶液各[font='Times New Roman',serif]1mL[/font]，然后加入[font='Times New Roman',serif]4mL[/font]双缩脲试剂。用漩涡式混合器允分摇匀后，室温放置[font='Times New Roman',serif]30[/font]分钟，于[font='Times New Roman',serif]540nm[/font]处进行比色测定。用未加蛋白质溶液的第一支试管作为空白对照液。以蛋白质的浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标椎曲线。[font='Times New Roman',serif]4.[/font]取重组胶原蛋白植入剂中溶液[font='Times New Roman',serif]1mL[/font]，操作同上，平行做两份。 在标准曲线中求出待测样品中重组胶原蛋白的含量，重组胶原蛋白含量应符合：[font='Times New Roman',serif]3.5mg/mL≤[/font]含量[font='Times New Roman',serif]≤5.5mg/mL[/font]。

有哪个老师做过胶原蛋白肽 GB31645-2008的标准吗？又没有资料分享一下，多谢多谢

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