1 引言南瓜食品是世界上公认的特效保健食品。由于原料来源广泛便宜，生产投资少、见效快，市场前景广阔，具有巨大的经济效益。南瓜粉是一种高钙、高锌、高钾、低钠食品, 特别适合于中老年人、糖尿病和高血压患者食用。南瓜粉防治糖尿病已被国内外所公认。研究证实，绝大部分Ⅱ型糖尿病患者服用南瓜粉后，可以使血糖降低，说明南瓜粉具有降血糖和升胰岛素的作用。南瓜防治糖尿病是在环丙基氨酸、果胶及几种微量元素和维生素等成分共同作用下实现的。因为南瓜粉是一种高钾低钠食品，而钾在人体内起着调节渗透与平衡的作用，高钾低钠饮食对预防心血管疾病、治疗浮肿有明显效果，所以南瓜粉适合于高血压和肾病患者食用。采用酶法水解南瓜中的可溶性糖，可使其降解为寡糖。为了进一步增加产率，提高成本，酶固定化技术应用到了南瓜食品加工工业中。酶的固定化可回收及重复利用。因而固定化酶一般可以被认为是不溶性酶。与水溶性酶相比，固定化酶易于将固定化酶与底物、产物分开, 方便后续的分离和纯化；可以在较长时间内连续生产；酶的稳定性和最适温度提高, 最适pH值改变, 对温度和pH值适应范围增大, 对抑制剂和蛋白酶敏感性降低；酶反应条件容易控制；较水溶性酶更适合于多酶反应；可以增加产物的收率, 提高产物质量；酶的使用效率高,使用成本低；适于产业化、连续化、自动化生产。本文采用3种不同的固定化酶法对α-淀粉酶和低聚糖酶进行固定化，选择最佳固定化方法。2 材料与方法2.1 主要材料南瓜，市售日本南瓜；α-淀粉酶3700U/mL，北京奥博星生物技术有限责任公司；低聚糖酶20000CU/g，武汉鑫华远科技有限公司；海藻酸钠，AR，天津市光复精细化工研究所；3- 氨基丙基三乙氧基硅烷，AR，佛山市道宁化工有限公司。2.2酶的固定化方法的选择本试验首先选用3种固定化酶法，即海藻酸钠包埋法、共价交联法和大孔硅球吸附法对α- 淀粉酶进行固定，通过单因素试验得到了3种固定化方法的最佳方案和最大固定化率，之后选用最佳方法对低聚糖酶进行固定，并通过试验得到低聚糖酶的最佳固定条件。2.2.1包埋法固定α- 淀粉酶的单因素试验包埋法包埋固定化法是把酶定位于聚合物材料的格子结构或微胶囊结构中这样可以防止酶蛋白释放, 但是底物仍能渗人格子内与酶相接触。包埋材料主要有琼脂、琼脂糖、卡拉胶、海藻酸钠、聚丙烯酞胺、纤维素等。因为海藻酸钠具有无毒、安全、价格低廉、材料易得的特点,故本试验采用海藻酸钠作为包埋材料。2.2.1.1 海藻酸钠的浓度的选择分别配制浓度为3%、4%、5%、6%、7%的海藻酸钠溶液，使之在沸水浴中搅拌溶解，加入等体积酶含量为0.45 mg/mL的α-淀粉酶液，搅拌均匀。静置1 h后，滴入至2%的CaCl2溶液中，形成直径为5 mm左右的海藻酸钙凝胶珠，在4℃下静置固化1 h[
固定化酶的性质受酶自身性质和载体材料共同影响。这两者之间的相互作用决定了固定化酶的物理化学和动力学特性。因此，载体材料的选择在整个酶的固定化过程举足轻重。尽管大家都意识到载体的重要性，但是迄今为止，仍然没有一种载体材料是通用的。想成为酶的通用性载体材料，必须拥有一系列的优秀特性：对蛋白质具有高的亲和力，和酶分子有直接可进行反应的功能团，可以进行化学修饰，具有亲水性，化学稳定性，一定的机械强度，比较容易形成不同的几何结构以提供相应的渗透性，其表面对于生物转移合适等等。毋庸置疑的，在药学，医学，食品业以及农业应用中，载体材料还须是无毒的，并且具有生物相容性。考虑到对公共健康和环境的友好性，载体材料还应该可以生物降解，更经济。综合考虑到现在已经被人们用来做固定化的载体材料，包括无机材料和有机材料，天然的和人工合成的，几丁质是众多材料中性质非常优良的载体材料。几丁质是天然的聚多糖，几丁质是世界上数量最多的一类可再生有机资源。几丁质是甲壳类动物的壳以及昆虫的外骨骼的主要成分，在生物圈中，每年都有大量的几丁质被合成和降解。几丁质(chitin)是N-乙酰氨基葡萄糖以β-1,4糖苷键所连接而成的直链多糖，在许多溶剂中都是不溶解的。几丁质的结构与植物纤维素的结构非常相似，只是2号位碳原子上的羟基被乙酰氨基和氨基所取代，因此又称作动物纤维素。值得一提的是，几丁质不是简单的化学物质，在最初以及制造的过程中可呈现出多样化的结构。实验部分实验试剂和仪器实验试剂：猪胰脂肪酶Lipase from porcine pancreas，Type Ⅱ（sigma）；牛血清蛋白（BSA，成都飞克生物试剂有限公司，分析纯）；考马斯亮蓝G-250(沃宏化学品有限公司)；聚乙二醇1500（PEG1500，成都市科龙化工试剂厂，分析纯）；几丁质（sigma);25%戊二醛（成都市科龙化工试剂厂）； 三丁酸甘油酯； 考马斯亮蓝G-250（国产）；分析天平（万分之一级，Sartorius BS 124 S）。其他无机盐试剂均为分析纯。实验仪器：紫外分光光度计（Hitachi,U-1900);恒温振荡器（上海智城科学仪器有限公司 ZHWY-2102-C）；低温冷冻离心机（日立CF15RX）；涡旋混合仪（国产）； pH计（雷磁科学仪器有限公司）双水相纯化PPL 将猪胰脂肪酶400毫克溶解于10毫升1M pH=7.0的磷酸钠缓冲溶液中，4℃搅拌溶解4h，在低温离心机中以8000rpm离心10min
在下新手，做的固定化酶的毛细管电色谱。做了好久都没有出现好的结果，用固定化酶修饰过的柱子和裸柱子比较在分析蛋白质的时候没什么差别。然后分析了一下，应该是酶还没有固定到毛细管内壁上，或者酶失活，或者其他什么原因。。。主要的是求助下如何确定在将酶固定化到内壁的每一个阶段，如何判定你所修饰的基团有没有结合到内壁？！
[size=4][B]农药残留检测生物传感器酶固定技术研究进展[/B][/size][I]罗启枚[/I]摘要：酶生物传感器在农药残留检测方面具有传统检测方法不可比拟的优势，而酶的固定技术将直接影响酶生物传感器的性能。该文就酶的不同固定方法和使用的不同载体材料，对近二十年来农药残留检测生物传感器酶的固定技术的研究进展进行综述，并就不同固定方法，不同固定方法的特点和不同载体材料对生物传感器性能的影响作了简单介绍。关键词：酶生物传感器；酶的固定；酶的固定载体材料[B]0 引言[/B]近几十年来，各种农药相继大量的生产和使用，极大促进了农业、林业的生产和发展。在目前世界范围内大量使用的农药中，大部分是毒性高、残留量大的有机磷农药，对环境和人们的身体健康构成了极大的威胁，对农林业的可持续发展也很不利。为了保护环境，保护人们的身体健康，对农林、水产品实时、快速、成本低廉的农药残留检测方法和技术一直是人类十分关注的焦点。当前，高效液相色谱法（HPLC）与[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]X质谱联用方法（GCMS）是实验室常用的农药残留检测方法。虽然这些方法具有高的选择性和灵敏度，但是存在以下缺点：（1）因仪器体积庞大、结构复杂、价格昂贵；（2）农药残留检测时存在过程复杂、费时、费用高；（3）需要熟练的专业技术人员，无法做到实时连续检测。随着人们对环境、食品安全的要求越来越高，同时，世界发达国家对农药残留标准也越来越高，因此，发展新的快速、自动、价廉、方便、实时在线、大批量的检测农药残留的方法和技术，无论是在促进农业、林业的生产和发展，还是对环境和人们的身体健康都有极其重要意义。酶生物传感器自发现以来，因具有高度的选择性、结构简单、自动、价廉而备受研究者的关注。特别是微电子技术、纳米材料制备技术、生物技术的发展为扩展生物传感器的应用范围、批量生产、集成化、微型化打下了坚实的基础，极大地促进了酶生物传感器的研究与应用。农药残留检测生物传感器的原理主要是利用农药（如有机农药等）与酶（如乙酰胆碱酯酶等）结合来抑制酶的活性，农药的浓度与酶被抑制的活性成一定的数学关系，从而实现对农药残留量的检测。作为生物传感器关键组成物! 活性酶在水溶液中一般不太稳定，且酶只能和底物作用一次。因此，使用起来极不方便，最有效的途径是将酶固定制备成生物敏感膜使用。这就须采用合适的固定技术将酶固定在合适的载体上，因此酶的固定技术是制备生物传感器的关键步骤，这将直接影响传感器的稳定性、灵敏度、检测下限、响应时间和酶的活性、存活时间等。酶的固定技术主要包括酶的固定方法和固定酶的载体材料的选择，当前国内外对农药残留检测生物传感器中酶的固定技术进行了广泛的研究，并取得了许多重要进展。该文就农药残留检测生物传感器中酶的各种固定技术和研究应用进展进行了较全面系统的介绍，并对一些影响传感器性能的因素进行了分析讨论。[B]! 酶的固定方法[/B]酶在基体电极上的固定是酶生物传感器制备中的重要环节，它直接影响传感器的检测性能。酶的固定化技术是指通过某些方式将酶和载体相结合，使酶被集中或限制，使之在一定空间范围内进行催化反应。要想使酶作为生物敏感物质使用，就必须研究如何将酶固定在各种载体上。酶的固定方法主要有吸附法、共价键合法、凝胶% 溶胶法、聚合物包埋修饰法、交联法等方法。[color=#DC143C][B]全文附件在3楼[/B][/color]
在下新手，做的是固定化酶毛细管柱，样品是一种小蛋白，能够在柱上分解同时分离，可是分的峰形不是很理想。想请教下大虾们：1.样品溶液的配置（用缓冲，水。其他）注意什么？2.在电泳的时候遇到过一种情况，条件都相同，可能过了半天样品峰会多出个肩峰，这是为什么？老师说是操作的问题，不是很懂。。。3.如何将两个结构很相似的物质分的开点？谢谢！！！
几种常用的固定剂固定剂最先应用在光学显微技术中，但光学显微镜中使用的沉淀凝集蛋白性的固定剂对电镜并不特别适用。于是人们引入四氧化锇和中性甲醛进行固定。早期的电镜生物样品化学固定法都采用四氧化锇单一固定，但四氧化锇不能很好地保存糖原和其它碳水化合物，而且四氧化锇在组织中的渗透速度比较慢（约2mm/h）。而早期使用的中性甲醛也令人很不满意，因为早期使用的甲醛很不纯，含有甲酸和甲醇的残留（一般有10-15％），甲醇的存在对样品的保存很不利，于是后来人们改进了甲醛的制备方法，使用多聚甲醛新鲜配制甲醛，提高了它的纯度。1963年Sabatini、Bensch和Barrnett推荐使用醛类（特别是戊二醛）作为初级固定剂。使用戊二醛或戊二醛-多聚甲醛初步固定后再使用四氧化锇后固定的双重化学固定对大多数动物和植物组织都十分有效，因而成为目前大多数实验室常规的固定方法。 电镜中使用的固定剂都有毒性，操作时都要很小心，尽可能在通风橱中完成操作。如果实验室中发生固定剂泄漏，必须立即用大量奶粉覆盖泄漏出来的溶液，待反应充分后收集处理。 四氧化锇（Osmium tetroxide） 四氧化锇是一种很强的氧化剂，呈浅黄色结晶，分子量254，饱和水溶液的浓度为7.24％，它的水溶液为中性，有极大毒性。市售有密封的四氧化锇晶体和四氧化锇水溶液两种。四氧化锇晶体溶于水的速度很慢，必要时可以使用超声波设备来加速溶解。市面上也有已经配制好的2％四氧化锇水溶液出售，使用相当方便。但要特别注意的是无论是四氧化锇晶体还是水溶液都会挥发出四氧化锇气体，因此应将四氧化锇置于密闭容器（玻璃容器）中保存。四氧化锇气体对呼吸系统有刺激，对眼睛有严重的破坏作用，因此在使用时应特别小心，尽可能在通风橱中进行，并且严格控制用量。废弃的四氧化锇溶液应加入酒精水溶液或硫酸亚铁溶液，使四氧化锇转化为黑色沉淀，以降低毒性方便收集处理。 四氧化锇作为固定剂有如下优点： 1,四氧化锇可以与脂类、糖类和蛋白质反应。其对脂类的固定作用可以补充醛类固定剂对脂类固定不足的缺点。其反应方程式如下： [img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2006/12/200612021950_34195_1634962_3.jpg[/img][img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2006/12/200612021950_34196_1634962_3.jpg[/img]2,能增加膜的反差，起到"电子染色"作用。用四氧化锇固定的材料，往往细胞膜结构比较清晰。这是由于被还原的锇沉积在细胞膜结构上，而锇是一种原子序数较高的元素，能加强它们的电子散射（质量密度大），所以四氧化锇作为固定剂的同时，又可作为电子染料，使被固定的样品图像有较好的反差。 3,四氧化锇会破坏大部分细胞膜的半透膜特性，配制四氧化锇固定液不用考虑渗透压。四氧化锇虽然具有以上优点，但它也存在不少缺点： 四氧化锇渗透力弱，所以组织块要小。否则，将从组织块表面到中间形成一个固定梯度，致使内部自溶过程继续进行引起组织块内部固定不好。 不能保存糖原也不能有效固定核酸，而且对微管固定效果也不理想。 固定的时间不宜太长。时间过长，会使组织变脆，给切片带来困难。此外四氧化锇与蛋白质、不饱和脂肪酸交联形成的复合体都是易溶于水的物质，特别是在长时间的固定后，更易溶解。因此，使用四氧化锇固定样品，时间控制在12小时较为适宜。 四氧化锇能与乙醇或醛类起氧化－还原反应，生成沉淀。所以，醛类处理过的样品转入四氧化锇固定之前或四氧化锇固定之后转入乙醇溶液脱水之前都必须用相应的缓冲液充分漂洗干净。 四氧化锇是酶的钝化剂，不能用于细胞化学的研究。醛类固定剂 甲醛（formaldehyde） 甲醛分子中只有一个碳原子，含有一个醛基，分子式为$CH_2O$，分子量为30。市面上虽然有多种形式的甲醛溶液出售，但它们含有少量的甲酸和甲醇，对被固定的样品产生不良影响，适合电镜固定使用的只有通过由多聚甲醛(paraformaldehyde)新鲜制备的甲醛溶液。甲醛溶液的毒性很大，即使是稀释液也要格外小心操作。甲醛溶液对皮肤有硬化作用，长时间接触可能导致皮肤破裂、皮炎或是过敏症状；甲醛极易挥发，它对呼吸道也有影响，长时间暴露在甲醛气体中会使嗅觉敏感度降低；此外甲醛对眼睛也有影响，而且还被认为是致癌物质。因此在操作甲醛粉末或溶液时都必须很小心，带上手套并在通风橱中进行。少量废弃的醛类试剂（甲醛、戊二醛和丙稀醛等）可以直接在大量流水冲稀的情况下倒进水池内（但要注意有关部门的有关规定），当然少量的醛类试剂与过量的1M甘氨酸混合后，再在大量流水冲稀的情况下倒进水池，会更安全。通常100ml的甲醛(1％)需要50ml的1M甘氨酸，100ml1％戊二醛则需要35ml，而丙稀醛需要40ml。大量的醛类试剂必须集中回收处理。 甲醛作为固定剂有如下特点： 由于甲醛的分子量小，它的穿透能力比戊二醛强，反应温和，可用于细胞组织化学研究的前固定。而且它不象戊二醛有两个醛基，引入较少的游离醛基到组织细胞中，因而在一些细胞组织化学研究中更有利。但它的反应是部分可逆的，对细胞基质保存差，脱水后大部分基质丢失，所以不少实验室不单独使用甲醛来固定样品，而将它与戊二醛配制成混合固定液使用。 甲醛对生物样品的作用与戊二醛相似，主要引起蛋白质交联。在水溶液中，单个的甲醛分子以HO − CH2 − OH的形式存在。反应如下： [img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2006/12/200612021952_34197_1634962_3.jpg[/img][img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2006/12/200612021953_34198_1634962_3.jpg[/img]与戊二醛不同，甲醛既与DNA又与核蛋白反应，但这些反应都是部分可逆的。另外，甲醛固定脂类的能力不强，可以与脂类相连的蛋白质作用。 戊二醛（glutaraldehyde） 戊二醛是一种五碳醛，含有两个醛基。分子式为$C_5H_8O_2$，分子量为100。电镜固定通常用市售的25％的戊二醛水溶液稀释成需要的浓度。其pH为4.0$\sim$5.0。氧气、高温、中性或碱性pH均能使戊二醛发生聚合失去醛基，并降低交联效力，所以平时这种原液应保存在低温处。此外戊二醛存放时间过长时，pH值会降低，颜色变黄，固定效力也大大降低，若戊二醛pH值降至3.5以下或含有其它杂质时，必须纯化后才能使用。戊二醛对皮肤有硬化作用，但它的挥发性较甲醛弱，最好能在通风橱中操作。 戊二醛作为固定剂有如下特点： 它的反应速度快，是优良的前固定剂。但它的渗透速度较慢，必要时配合甲醛使用效果更佳。 它是蛋白质的强固定剂。它能快速而不可逆地与氨基反应，和甲醛相似，戊二醛的一个醛基与氨基反应，脱水后生成不稳定的Schiff键化合物。其反应的可能途径如下： [img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2006/12/200612021954_34199_1634962_3.jpg[/img]
各位大侠，我现在在做将胰蛋白酶固定在毛细管内壁形成一个酶解微反应器，先是用NaOH将毛细管内壁活化，带上负电荷，然后让带正电荷的胰蛋白酶溶液（将酶配在Tris-HCl，同时含有20mM CaCl2 ,pH 8.0，低于酶的等电点）进入毛细管，通过静电吸引固定上酶，发现在做电泳时候酶的活性损失厉害，估计是酶慢慢的都掉下来了，于是我又在上述步骤后再加上进一定浓度的海藻酸钠，想形成海藻酸钙凝胶加固酶在毛细管内壁上的稳定性，但是发现酶的起始活性比不用海藻酸钠时候还要低很多，请问哪位大侠能帮忙给我建议一个好的方法，将酶稳定的固定在毛细管内壁上且活性能够损失比较少。谢谢了！
[font=宋体, SimSun][size=18px]各会员单位、相关单位：[/size][/font][font=宋体, SimSun][size=18px]根据《上海市环境科学学会团体标准管理办法》的要求，《固定污染源废气 氨的测定 便携式抽取激光法》（T/SSESB 10-2024）团体标准按照规定程序编制，经专家组审查通过，现批准发布，发布日期为2024年6月12日，自2024年7月1日起实施。[/size][/font][font=宋体, SimSun][size=18px]本标准由上海市环境科学学会解释。如需标准文本，请与我会联系。[/size][/font][font=宋体, SimSun][size=18px] [/size][/font][font=宋体, SimSun][size=18px]联系电话：021-64756391[/size][/font][font=宋体, SimSun][size=18px]电子邮箱：shsseshjjc@126.com[/size][/font][font=宋体, SimSun][size=18px]特此公告。[/size][/font][img]https://www.ttbz.org.cn/ueditor/dialogs/attachment/fileTypeImages/icon_pdf.gif[/img][url=https://www.ttbz.org.cn/upload/file/20240612/6385379031646808914907728.pdf]关于批准发布《固定污染源废气 氨的测定 便携式抽取激光法》团体标准的公告.pdf[/url]
http://www.stdaily.com/stdaily/pic/attachement/jpg/site2/20120115/00241dd2ff15107c86711e.jpg 国家海洋环境预报中心极地预报室主任张林1月12日在与澳大利亚戴维斯站来中山站参观考察人员交流时说，根据中国的“十二五”规划，中国正计划购置自己的固定翼飞机。一旦飞机配置到位，中国也将重点开始进行航空保障方面的气象预报，届时中山站的气象观测设备也将升级，配置激光雷达等观测设备。 1月12日下午，澳大利亚南极戴维斯站(Davis Station)派三名科学考察人员赴中山站进行科考交流。中山站组织气象组和高空物理组的相关科研人员带领戴维斯站客人参观了气象栋、高空物理栋和臭氧观测栋，并向澳方考察人员介绍了中山站的气象观测与高空物理观测项目进展情况和相关仪器设备。 与中山站全年进行气象预报不同，戴维斯站的气象预报主要是为飞机提供气象保障，只在度夏期间进行气象预报，越冬期间只有常规气象观测项目，没有气象预报人员在站。 根据世界气象组织的要求，在南极普里兹湾地区，中山站和俄罗斯进步站每天都要将气象观测数据发送给戴维斯站，由戴维斯站汇总后，发给世界气象组织，供全世界使用。戴维斯站的凯西•杨(Cathie Young)女士半开玩笑半认真地说，“我们的气象观测工作是为全世界服务。” 在高空大气观测方面，戴维斯站使用探空气球探测30公里以下区域的大气情况。同时，澳大利亚和德国合作，可以使用激光雷达观测高达80-100公里区域内的大气情况。 张林向澳方介绍说，中山站和戴维斯站在气象合作方面存在很大空间。根据“十二五”规划，中国正计划购置固定翼飞机。一旦飞机配置到位，将重点开始进行航空保障方面的气象预报，届时中山站的气象观测设备也将升级，配置激光雷达等观测设备。澳大利亚在航空保障预报和高空大气观测方面拥有丰富的经验，双方可以就此进行进一步交流合作。
很多水质检测项目对水样保存有作出要求，比如COD加入硫酸固定，石油类加入盐酸固定，但是没有阐明固定剂浓度，一般理解肯定是浓溶液对结果影响较小，但是如果用弄溶液的话，一个是现场操作和运输的安全性，一个是现场固定如果用到浓盐酸、浓硝酸这类液体的话那肯定是有烟而且又呛，所以我们现在都是配置50%浓度的溶液，但是感觉这样子对结果还是有一点点影响，虽然很小，不知道有没更好的解决办法，想请问各位同行是怎么做的
[size=16px][font=微软雅黑]在测试过程中通常用[b]遮光率[/b]这个相对值来表征悬浮液的浓度的。[/font][/size][size=16px][font=微软雅黑][b]遮光率[/b]的大小是由悬浮液中的颗粒个数决定的——悬浮液中颗粒数越多，散射光越强，遮光率越高；悬浮液中的颗粒数越少，散射光越弱，遮光率越低。[/font][/size][size=16px][font=微软雅黑]为了达到一定的[b]遮光率[/b]，对粒度越粗的样品所需的颗粒数量就多；对粒度越细的样品，只要很少一点样品颗粒数就很多，因此所需的试样量就很少。[/font][/size][size=16px][font=微软雅黑]可见样品越粗悬浮液的百分比浓度就越大；样品越细悬浮液的百分不浓度就越小。[/font][/size][font=微软雅黑][size=16px]此外，即使粒度相同，不同样品的密度又不相同，百分比浓度也不同。[/size][/font][font=微软雅黑][size=16px]所以激光粒度测试时悬浮液的浓度值不能规定一个固定的百分比浓度，而只能用遮光率这个相对量来表示。如果非要知道激光粒度测试悬浮液的百分比浓度，那只能是一个范围，大约在 0.01％ -0.1％之间。[/size][/font]
请教各位大神，关于水质采样添加保护剂的问题，同样是分析金属元素，为什么汞锑铋加的固定剂是盐酸，而钾钙钠镁铁锰镍加的是硝酸，同样是去除残余氯，分析挥发性有机物加的是抗坏血酸，分析甲醛加的是5水硫代硫酸钠，还有就是为什么要加这种保护剂，有没有相关标准或帖子有详细说明。
http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/06/201206061004_370636_1740894_3.jpg这个探头我们准备用来测不同配比制备的某材料的光谱变化。发现探头没固定，没发评价。所以来讨教一下如何固定这个探头。请海洋专家支招！！！紧急
之前，小编采用几丁质作为载体固定化PPL，但是固定化后的PPL没有活性，这次换了一种类似的载体，而这次奇迹粗线了，终于测出了酶活，特此在这里跟大家一起分享。1.实验部分壳聚糖可溶于稀的盐酸，稀的醋酸等，实验选用稀的醋酸来溶解壳聚糖。壳聚糖小球的制备称取不同质量的壳聚糖粉末，加入到一定体积的含1.5%（V/V)醋酸溶液中，在40℃下搅拌2小时，使壳聚糖粉末完全溶解，得到澄清透明的像胶水一样的粘稠液体。配制1mol/L的NaOH溶液，其中含30%的甲醇。待壳聚糖溶液冷却至室温时，用注射器吸取壳聚糖溶液，逐滴加入氢氧化钠-甲醇溶液中，同时轻轻搅拌，使壳聚糖小球析出，形成白色半透明的壳聚糖小球。滴完后，倒掉碱液，将壳聚糖小球用大量纯水冲洗，直至洗液呈中性。再将壳聚糖小球浸泡在纯水中，于冰箱上层保存。壳聚糖小球的活化称取1g壳聚糖小球（湿重），用4ml含不同质量浓度的戊二醛，0.02mol/L的pH=8.0的磷酸钾缓冲溶液，在25℃下，于恒温摇床中以200rpm的转速活化4h。将活化好的壳聚糖小球用大量的纯水进行冲洗，直至没有戊二醛残留。洗好后，将小球浸泡在纯水中，置于冰箱上层保存。PPL的固定化 称取1g活化的壳聚糖小球（湿重）于10ml的烧瓶中，加入2ml通过双水相纯化过的PEG层的PPL，于摇床中4℃,200rpm进行固定化。将PPL固定化一定时间后，取出小球，用适量pH=7.0的0.1mol/L磷酸钠缓冲溶液洗去其表面残留的蛋白质，测试洗液的蛋白含量，以及固定化PPL的酶活。2.结果与讨论2.1 壳聚糖浓度的选择通过大量查阅文献以后，决定用1.5%的醋酸溶解壳聚糖。实验考察了不同壳聚糖浓度，对壳聚糖小球成球的影响，以及制作出的小球经过不同戊二醛浓度活化以后固定PPL的能力。壳聚糖含量NaOH-CH3OH成球情况1.0%1M是1.5%1M是2.0%[font='Ti
在水质采样时，各种固定剂需要现场加入呢，还是可以回到实验室后，再往水里加固定剂？
标准里面不同项目固定剂基本上不一样，但是大批量检测的话，不可能分出十几瓶吧，我看有点地方就固定了两瓶（酸固和碱固），这样的话，酸固里面多少ml水样需要加多少什么酸，还有碱固？哪些项目需要碱固，哪些需要酸固？哪些不需要固定？
固定剂与保存剂的区别是什么？
水样加酸，PH＜2，浓硫酸做固定剂，可以加1.1硫酸使ph＜2吗？
请问用溶胶-凝胶法固定酶来做电极,一定要凝胶干了才能做实验吗?这样子对酶活性的影响大吗?
固定源黑碳：是煤炭不完全燃烧的颗粒物。测试总碳、有机碳、元素态碳。
我想问一下各位老师，如果我采的水样到实验室的时间在2~3个小时内的话，那我是否一定需要添加固定剂，我看那个HJ/T 91的标准，如果按照项目添加 固定剂的话，有时候采集的样品项目总类在20~30总，每个固定剂会不一样啊，所以样品会特别多，所以我想问一下在短时间的话，我可以不加固定剂，不加的话是否会被认定为违规操作呢
答：根据被分离组分和固定液分子间的相互作用关系，固定液的选择一般根据所谓的相似相溶原理，即固定液的性质与被分离组分之间的某些相似性，如官能团、化学键、极性、某些化学性质等，性质相似时，两种分子间的作用力就强，被分离组分在固定液中的溶解度就大，分配系数大，因而保留时间就长；反之溶解度小，分配系数小，因而能很快速流出色谱柱。下面就不同情况进行讨论：a、分离极性化合物，采用极性固定液。这时样品各组分与固定液分子间作用力主要是定向力和诱导力，各组分出峰次序按极性顺序，极性小的先出峰，极性越大，山峰越慢；b、分离非极性化合物，应用非极性固定液，样品各组分与固定液分子间作用力是色散力，没有特殊选择性，这时各组分按沸点顺序出峰，沸点低的先出峰。对于沸点相近的异构物的分离，效率很低；c、分离非极性和极性化合物的混合物时，可用极性固定液，这时非极性组分先馏出，固定液极性越强，非极性组分越易流出；d、对于能形成氢键的样品，如醇、酚、胺和水的分离，一般选择极性或氢键型的固定液，这时依组分和固定液分子间形成氢键能力大小进行分离。相似相溶是选择固定液的一般原则，有时利用现有的固定液不能达到满意的分离结果时，往往采用“混合固定液"，应用两种或两种以上性质各不相同的，按适合比例混合的固定液，使分离有比较满意的选择性，又不致使分析时间延长。然而，在实际工作中选择固定液往往是参考资料或文献介绍的实例来选用固定液的。
各位请教一下，水样的现场空白需要加固定剂吗？
甲基硅油I硅酮 OV-17硅酮 OV-101硅酮 DC-550硅酮 OV-1SE31SE52还有一瓶很神秘的固定液，是上海试剂一厂生产的，叫硅油（V）,批号居然是76-06-01，好久远的年代啊！这么长时间了，不知道这些固定液还能不能用呢?上面有些固定液可能是不含苯基的，如果是这种情况，麻烦告诉我所含成分的含量是多少？我已经尽量查了，但是这些查不到，希望知道的高人能给点指点，感激不尽！！！[em0910]
填充柱里面会用到各种固定液，有的固定液也有试剂级的，比如四乙烯五胺呀，固定液也会用到，但是也有试剂级的，还有像聚乙二醇等搞不清楚固定液的和试剂级的有什么区别呢？仅是纯度不一样？
对于组分已知的样品，如果难分离物质对已初步确定，那么选择固定液的指标就是使难分离物质对达到定量分离。1. 按相似性原则选择 按被分离组分的极性或官能团与固定液相似的原则来选择，这是因为相似相溶的缘故。这样，组分在固定液中溶解度最大，分配系数大，保留时间长，分开的可能性就大。（1）按极性相似选择①非极性化合物应首先选择非极性固定液，这时组分与固定液分子间的作用力主要是色散力，组分基本上以沸点顺序出柱，低沸点的先出柱。若样品中有极性组分，相同沸点的极性组分先出柱。②中等极性化合物首选中等极性固定液。分子间作用力为色散力和诱导力。基本上仍按沸点顺序出柱。但对沸点相同的极性与非极性组分，诱导力起主导作用，极性成分后出柱。③强极性化合物，首选极性固定液。分子间主要作用力为定向力。组分按极性顺序出柱，极性强的组分后出柱。（2）按化学官能团相似选择 当固定液与组分的化学官能团相似时，相互作用力最强，选择性最高。例如，被分离的化合物为酯可选择酯和聚酯固定液；化合物为醇可选醇类或聚乙二醇等。2. 按主要差别选择 若组分的沸点差别是主要矛盾，可选非极性固定液；若极性差别为主要矛盾，则选极性固定液。现举例说明：苯与环己烷沸点相差0.6℃（苯沸点80.1℃，环己烷沸点80.7℃），而苯为弱极性化合物，环己烷为非极性化合物，二者极性差别虽然不大，但相对而言比沸点差别大，极性差别是主要矛盾。用非极性固定液很难将苯与环己烷分开。若改用中等极性的固定液，如用邻苯二甲酸二壬酯，则苯的保留时间是环己烷的1.5倍。若再改用聚乙二醇-400，则苯的保留时间是环己烷的3.9倍。3. 按麦氏相常数选择 由于麦氏常数比较全面地描述了固定液的分离特征，因此根据麦氏常数可较快的选择适合于分离对象的固定液。例如，要分离正丁基乙基醚和正丙醇，且正丙醇是杂质，应让它先出峰，因此所选择的固定液应与正丁基乙基醚的作用力强而与正丙醇的作用力弱。Z′值越大的固定液对质子受体的作用力越强；Y′值越大的固定液对质子给体的作用力越大。醚是质子受体，醇是质子给体，因此只有选择具有高Z′/ Y′值的固定液，才能使正丙醇先于正丁基乙基醚之前流出。从下表查得QF-1的Z′/ Y′=355/233=1.52，此值较大，可选作固定液。查得OV-210的Z′/ Y′=358/238=1.50，此值略小于QF-1，但OV-210的最高使用温度为275℃，而QF-1只有250℃。若采用较高柱温，OV-210更合适。
水质固定剂包括了盐酸和硝酸，特别是盐酸，因挥发性太强，导致外包的封口带（玻璃试剂瓶用封口带封装）内滞留了一些黄色冷凝液，味道特别呛。放这些固定剂的整理箱，每次开盖后，味道也很难受。大家是怎么处理的？
昨天给监察分局的部分人作了上岗培训，课后他们问了这个问题，即如果在规范里面要求现场单独取样、和/或需要添加固定剂，却现场未单独采样、未加固定剂，万一企业追究起来，他们能站稳脚跟吗？
水质采样时,带去现场的固定剂怎么保存?用玻璃滴定管容易碎!!!用塑料滴定管容易腐蚀!!!!??????
很多环境水样采集的时候需要加固定剂让ph≤2，比如盐酸，硫酸这种，你们是怎么操作的，直接带浓硫酸出去吗？这样是不是又会涉及到易制毒易制爆的问题？
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