色谱验证

色谱验证方案,原始纪录,验证报告及色谱方法验证实验数据分析[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=112402]色谱验证方案,原始纪录,验证报告及色谱方法验证[/url][img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=112404]数据的统计与分析（培训）[/url]

公司要验证新买的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]柱，由于柱子较多，如果按照每个柱子给的检测报告来验证的话，需要的溶剂太多，有没有一个色谱柱通用的验证方案？求助！

色谱纯如何验证？进色谱看出不出杂峰来验证吗？

现在色谱柱厂家很多,有些色谱柱的厂家生产的色谱柱,里面的填料和他们说的不符合,请问,色谱柱有验证方案吗?具体举个例子,C18的柱子,如何确认是用C18装填而不是用C8 装填

请问大家都是怎么做性能验证的？参考GBT3030433-2013？另外也想问问大家怎么定义色谱柱报废？

色谱方法验证审评指南

色谱方法验证审评指南

有没有自己做过液相色谱仪的3Q验证的呀？我想请教一下，在GLP实验室中液相色谱仪的3Q验证是不是必须是供应商提供，自己能做吗？液相色谱仪的控制软件怎么验证？

色谱方法验证审评指南绪言本技术指南的目的是给审评人员审评验证色谱方法的， 该文件讨论色谱方法的要点和不足， 以便CDER的审评人员能够保证方法的良好性能，也使化学工作者了解为通过审评应给出的足够的信息。国际协调会议（ICH）1993年定义的分析术语，已在这一指南中运用。色谱方法通常用于原料、药物、药物制剂和生物体液中化合物的定性和定量。涉及的成分包括手性的或非手性的药物、过程杂质、残留溶媒、附加剂如防腐剂、分解产物、从容器和密闭包装或制造过程中带入的可提取和可过滤的杂质、植物药中的农药和代谢物等。试验方法的目的是得到可信赖的和准确的数据，无论是用于验收、出厂、稳定性或药物动力学研究。得到的数据用于药品开发或批准后的定性和定量，试验包括原料的验收、药物和药物制剂的出厂、过程检验(In- process testing)的质量保证和失效期的建立。方法的验证是由药品的开发者或使用者来检验其方法是否达到预期的可靠性、准确度和精密度的过程。得到的数据成为方法的验证资料的一部分交给CDER.。方法的验证对于完成机构满足档案要求不是一次性的，开发者和使用者都应验证其方法的耐用度或耐久性（ruggedness or robustness.），其他的分析者、用其它相当的仪器，在其它的日期或地点，在药品生产期限(有效期)全过程，方法都应能够重现。如果产生数据的方法是可靠的，那么所得到的验收、出厂、稳定性或药物动力学的数据就是可信赖的。验证的过程和方法的设计应在开发过程中重要的数据产生之前，如果方法改变了，还应该再验证。----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------这一指南由FDA-CDER化学制造控制协调委员会(CMCCC)的分析方法技术委员会制作。虽然这一指南不创造或给予任何个人权力，也不与FDA和业界操作结合在一起，但确实表达了本机构对色谱方法验证的当前思想。需要指南的文本，请与通讯管理部联系， HFD-210，CDER，FDA，，5600 Fishers Lane，Rockville，MD20857(电话301-594-1012)请寄一份贴好地址的标签，以帮助该办公室处理你的要求。这一指南的电子版本可通过因特网WWW获得。. 色谱类型色谱是一种技术，通过该技术，样品中的组分载入液相或气相中，通过在固定相上由吸附—解吸附来完成。A. 高效液相色谱 (HPLC) HPLC分离是基于在样品在流动相液体和固定相之间的不同分配。一般地说[font=Ti

我们公司是做环境监测的，需要经过质监局的验证，想问一下气象色谱验证基本验证哪些项目？我们的项目有六六六滴滴涕、TVOC、乐果、敌敌畏、甲醇、氯苯、环境空气苯系物、硝基苯等，常规验证项目有哪些？这些标样我能从网上买到吗？什么网/?谢谢大家，我今年刚毕业，不大懂都？

色谱类方法验证时，方法给出的检出限高于标准判定值，这个方法的检出限要怎么验证呢？我们色谱类方法验证采用信噪比方式验证的不是标准偏差。

在过去15年中液相色谱的快速发展已经使得薄层色谱(TLC)和高效薄层色谱(HPTLC),过压力薄层色谱(OPLC)在一定程度上趋向于成为一个背景.但是,对于药物组分的鉴别,平面色谱依然是一个必须的测试. 在它的半定量方式中,基于外观的估计,平面色谱对于组分的限度测试依然是一个很重要的方法,特别是当组分不是只能被高效液相色谱进行测试时.另外,在吸附层和仪器方面的发展也提高了定量平面色谱的可靠性, 使的这种技术相对于液相色谱而言成为一种经济的办法.运用扫描密度定量平面色谱已经包含在欧洲药典中,并用于分辨率与检出限.对于意图中的使用,在药物分析中的每一个分析步骤的适应性必须基于目标验证数据.分析步骤的验证中,两个指导方针的设置是要准备的,并且要基于相应的规章.第一个方针定义和列举了验证的特性.第二个给出了更多的细节框架在协议上和怎么样去实施验证实验.

绪言本技术指南的目的是给审评人员审评验证色谱方法的， 该文件讨论色谱方法的要点和不足， 以便CDER的审评人员能够保证方法的良好性能，也使化学工作者了解为通过审评应给出的足够的信息。国际协调会议（ICH）1993年定义的分析术语，已在这一指南中运用。色谱方法通常用于原料、药物、药物制剂和生物体液中化合物的定性和定量。涉及的成分包括手性的或非手性的药物、过程杂质、残留溶媒、附加剂如防腐剂、分解产物、从容器和密闭包装或制造过程中带入的可提取和可过滤的杂质、植物药中的农药和代谢物等。试验方法的目的是得到可信赖的和准确的数据，无论是用于验收、出厂、稳定性或药物动力学研究。得到的数据用于药品开发或批准后的定性和定量，试验包括原料的验收、药物和药物制剂的出厂、过程检验(In- process testing)的质量保证和失效期的建立。方法的验证是由药品的开发者或使用者来检验其方法是否达到预期的可靠性、准确度和精密度的过程。得到的数据成为方法的验证资料的一部分交给CDER.。方法的验证对于完成机构满足档案要求不是一次性的，开发者和使用者都应验证其方法的耐用度或耐久性（ruggedness or robustness.），其他的分析者、用其它相当的仪器，在其它的日期或地点，在药品生产期限(有效期)全过程，方法都应能够重现。如果产生数据的方法是可靠的，那么所得到的验收、出厂、稳定性或药物动力学的数据就是可信赖的。验证的过程和方法的设计应在开发过程中重要的数据产生之前，如果方法改变了，还应该再验证。----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------这一指南由FDA-CDER化学制造控制协调委员会(CMCCC)的分析方法技术委员会制作。虽然这一指南不创造或给予任何个人权力，也不与FDA和业界操作结合在一起，但确实表达了本机构对色谱方法验证的当前思想。需要指南的文本，请与通讯管理部联系， HFD-210，CDER，FDA，，5600 Fishers Lane，Rockville，MD20857(电话301-594-1012)请寄一份贴好地址的标签，以帮助该办公室处理你的要求。这一指南的电子版本可通过因特网WWW获得[在WWW.fda.gov/cder主页，进入“Regulation Guideline”(规则指南) 部分]。. 色谱类型色谱是一种技术，通过该技术，样品中的组分载入液相或[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]中，通过在固定相上由吸附—解吸附来完成。A. 高效液相色谱 (HPLC) HPLC分离是基于在样品在流动相液体和固定相之间的不同分配。一般地说HPLC大体分为以下几种(未考虑其重要性顺序)1. 手性液相色谱2. 离子交换色谱3. 离子对/亲和色谱4. 正相色谱5. 反相色谱6. 分子排阻色谱1. 手性液相色谱分离光学异构体可在手性固定相上，用衍生化试剂或在非手性固定相上用流动相添加剂形成非对对映体来实现。用作杂质试验方法时，如果光学异构体杂质在光学异构体药物之前洗脱，要增加灵敏度。2. 离子交换色谱分离基于荷电功能团，样品负离子(X - )为阴离子，样品正离子((X + )为阳离子，一般用pH程序洗脱。　 3. 离子对/亲和色谱分离基于与目标样品的专一的化学相互作用。更普遍的反相型用缓冲液和加入的对离子(与被分离的样品荷相反电荷)分离。分离受pH、离子强度、温度、浓度和共存的有机溶剂类型的影响。亲和色谱，一般用于大分子，使用配合体（共价结合在固体基质上的生物活性分子)，与其同类的抗原(分析介质)反应，生成可逆转的复合物，通过改变缓冲条件洗脱。4. 正相色谱正相色谱为用有机溶剂为流动相和极性的固定相。此时较小极性的组分比较大极性组分更快地洗脱。5. 反相色谱报给CDER的最通常的实验方法是反相HPLC方法， 最通常用紫外检测器。反相色谱，一种键合相的色谱技术，用水作基本溶剂，选择性也受溶剂强度、柱温和pH的影响，一般来说较大极性比较小极性组分洗脱更快。紫外检测器可以用于所有色谱，这类检测器要注意的是灯老化后的灵敏度降低，其灵敏度因(仪器)的设计和/或者制造厂家的不同有小的变异。需要指出，用紫外检检测器和反相HPLC组合得到的色谱图不一定能真实的反映事实，原因是：• 极性比目标化合物大得多的化合物可能被掩盖(在溶剂前沿或死体积时同时洗脱)。• 极性比目标化合物小得多的化合物洗脱出来晚，甚至保留在柱上。• 紫外吸收系数较低和最大吸收不同的化合物在检测相对较低浓度的目标分析物时不能被检出，因为通常只有一个检测波长。6. 排阻色谱也叫凝胶渗漉(permeation)或滤过，分离基于化合物分子大小或水动力学(hydrodynamic)容积。比多孔柱填料孔径大得多的分子最先洗脱，小分子进入孔隙洗脱晚，其余的洗脱速率取决于其分子的相对大小。B. [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]（GC）[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]基于挥发性样品由作为流动相的载气运载，通过色谱柱内的固定相时发生吸附和解吸附过程进行分离。通常[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]分析的样品是低分子量化合物，这些化合物是易挥发的和高温时稳定的。在这一方面，药物和药物制剂中的残留溶剂适于[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]分析。生成化学衍生物可达到易挥发和热稳定的目的。常用的检测器是用于含碳化合物的火焰离子化检测器（FID），用于卤代化合物的电子捕获式检测器（ECD），用于含硫和含磷化合物的火焰光度检测器（FPD），以及用于含氮或磷化合物的氮磷检测器（NPD）。[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]也能实现手性分离。填充柱迅速被毛细管取代来改进分离度和分析时间，在[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]上分析物位置与HPLC一样，用保留时间（Rt）表示。C. 薄层色谱（TLC）薄层色谱是一种最简便普通的色谱技术，分离基于在一端浸于溶剂混合物（流动相）中的薄层板（固定相）上点的样品移动进行分离，整个系统在密封的缸中进行。对于本身没有颜色的化合物，检出技术包括荧光、紫外和喷雾显色剂（通用的和专一的）。 分析物在薄层板上的位置用Rf值来表示，Rf值为化合物的移动距离与溶剂前沿的比值。三种方法，[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]、液相和薄层中，薄层色谱是最普通的试验方法，因为薄层板上所有的组分都可用适宜的检测技术检出。然而通常不如HPLC那么准确和灵敏。虽然选用适宜的检测技术，TLC法能见到分析的“全图”(whole picture) ，但比HPLC分析变异较大。. 参考标准品（对照品）参考标准品为经充分鉴定的高纯度化合物，色谱方法更大程度上依赖参考标准品来提供准确的数据。因而参考标准品的质量和纯度是很重要的，有二类参考标准品，化学的和放射性的。后者应考虑放射标记纯度和化学纯度。按照提交方法验证的样品和分析数据，指南中的二类化学参考标准品如下：• USP / NF参考标准品，不需要鉴定。• 非总目录标准品，应用合理方法制备，并经充分鉴定，以保证其鉴别、含量、质量和纯度达到最高。应该指出• 大多数USP / NF参考标准品未标示化合物纯度。• 对非USP参考标准品，提出纯度的校正数应包括在试验方法的计算中。• 提供的参考标准品中没有以下杂质，诸如合成过程的结构相似的杂质和其它的过程杂质，如重金属、残留溶剂、水分（结合的和非结合的）、植物来源制剂中的农药和分解产物等。• 如果在方法中规定，用前参考标准品要干燥除去残留溶剂、非结合水分和有时是结合水（取决于干燥条件），对易潮解的化合物总是包括干燥步骤的。但另一方面干燥可能导致结晶水的损失或引起热敏感化合物的降解。色谱方法用外标法和内标法进行定量。A. 外标法当参考标准品与样品在不同的色谱图上进行分析时，用外标法。定量基于样品的峰面积/高（HPLC或GC）或强度（TLC）与分析对象、参考标准品的比值。更适合用外标法的样品如下： 1.样品具有单一的目标浓度和狭窄的浓度范围 ，例如验收和出厂检验。2.简便的样品制备操作。3. 增加走基线的时间，为检测可能的额外峰，如杂质试验。B. 内标法加入一种已知纯度并且在分析中不产生干扰的化合物至样品混合液中，定量基于被分析的化合物与内标的响应比值与参考标准品得到的比值进行比较。这一方法很少用于TLC。更适合用内标法的样品如下：1.复杂的样品制备过程，如多次提取。2.低浓度的样品（灵敏度是确定的），如药代动力学的研究。3.在样品分析中预计是很宽的浓度范围，如药物动力学研究。虽然CDER不规定方法应该用内标或外标法用于定量，但一般的看法是用于验收、稳定性和TLC用外标法，对生物体液和GC用内标法。工作浓度为方法中规定的被分析对象的目标浓度。保持样品浓度与标准的浓度相近可以改善方法的准确性。建议1.如果参考标准品的纯度校正因子已知，那么在计算中应该包括。2.在方法中要规定标准品和样品的工作浓度。. 药物和药物制剂HPLC验证的参数虽然许多种HPLC都可采用，但最普遍上报的方法都是用紫外检测器的反相HPLC法，以此作为验证参数的例子。这一方法验证的规定可以扩展到其它检测器和其它色谱。对于验收、出厂或稳定性试验，准确性应最佳化，因为要表明实测值和真值的差异是最为关注的。A. 准确性准确性是衡量测量实验值

[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]所用的标线是如何验证的？

[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]方法验证都要做些什么，刚毕业不太懂要做什么

[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]的方法验证表怎么设计都不对劲，求大神指导！

那位朋友做过液相色谱用样品小瓶清洁效果的验证？欢迎讨论大家的样品瓶是怎么样清洗的？清洁效果是怎么样验证的。

[size=3][b]如题，大家为了仪器验证资料，都会特意的去购买进口色谱仪器，难道国产仪器不提供验证服务吗？[/b][/size]

如题，您参加过液相色谱能力验证吗？色谱柱对测试结果有影响吗？能力验证需要使用专用色谱柱吗？

各位老师：[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]法方法验证 检出限 精密度 回收率都做多少个？？检出限20个？？？精密度，回收率3加标6平行？？？

本人正在做气相色谱的验证（GC-2014的），不知道基线的噪声和漂移这项咋做，我只知道是不进样的情况下让它走一针，但我的图走出来不是像液相那样是很明显的毛刺样的，是那种小波纹样的，不知是什么原因，那我怎么算信噪比呢，各位，请教了啊有没有谁有这方面的资料，可不可以共享一下，不胜感谢！

[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]做方法验证每个离子都需要做一遍吗？哪位老师做过的，求教！

[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=20633]薄层色谱验证[/url]

我们公司用的是安捷伦6820的色谱，现在想知道氢气发生器产生氢气的纯度，自己用色谱可以验证码？？

10版药典中95%乙醇有个项目“挥发性杂质”，需要用气相色谱仪进行检测，是否需要检测方法适用性验证，该如何验证？

申请新的检测项目扩项前，各位老师在用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]做方法验证的时候准确度是如何做的？是做加标回收呢还是做有证质控样看是不是在范围内？多种阴离子的话是不是每种都得做？期待老师们的回答~

色谱方法通常用于原料、药物、药物制剂和生物体液中化合物的定性和定量。涉及的成分包括手性的或非手性的药物、过程杂质、残留溶媒、附加剂如防腐剂、分解产物、从容器和密闭包装或制造过程中带入的可提取和可过滤的杂质、植物药中的农药和代谢物等。 试验方法的目的是得到可信赖的和准确的数据，无论是用于验收、出厂、稳定性或药物动力学研究。得到的数据用于药品开发或批准后的定性和定量，试验包括原料的验收、药物和药物制剂的出厂、过程检验(In- process testing)的质量保证和失效期的建立。 方法的验证是由药品的开发者或使用者来检验其方法是否达到预期的可靠性、准确度和精密度的过程。得到的数据成为方法的验证资料的一部分交给CDER.。 方法的验证对于完成机构满足档案要求不是一次性的，开发者和使用者都应验证其方法的耐用度或耐久性（ruggedness or robustness.），其他的分析者、用其它相当的仪器，在其它的日期或地点，在药品生产期限(有效期)全过程，方法都应能够重现。如果产生数据的方法是可靠的，那么所得到的验收、出厂、稳定性或药物动力学的数据就是可信赖的。验证的过程和方法的设计应在开发过程中重要的数据产生之前，如果方法改变了，还应该再验证。 . 色谱类型 色谱是一种技术，通过该技术，样品中的组分载入液相或[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]中，通过在固定相上由吸附—解吸附来完成。 A. 高效液相色谱 (HPLC) HPLC分离是基于在样品在流动相液体和固定相之间的不同分配。一般地说HPLC大体分为以下几种(未考虑其重要性顺序) 1. 手性液相色谱 2. 离子交换色谱 3. 离子对/亲和色谱 4. 正相色谱 5. 反相色谱 6. 分子排阻色谱 1. 手性液相色谱 分离光学异构体可在手性固定相上，用衍生化试剂或在非手性固定相上用流动相添加剂形成非对对映体来实现。用作杂质试验方法时，如果光学异构体杂质在光学异构体药物之前洗脱，要增加灵敏度。 2. 离子交换色谱 分离基于荷电功能团，样品负离子(X - )为阴离子，样品正离子((X + )为阳离子，一般用pH程序洗脱。 　 3. 离子对/亲和色谱 分离基于与目标样品的专一的化学相互作用。更普遍的反相型用缓冲液和加入的对离子(与被分离的样品荷相反电荷)分离。分离受pH、离子强度、温度、浓度和共存的有机溶剂类型的影响。亲和色谱，一般用于大分子，使用配合体（共价结合在固体基质上的生物活性分子)，与其同类的抗原(分析介质)反应，生成可逆转的复合物，通过改变缓冲条件洗脱。 4. 正相色谱 正相色谱为用有机溶剂为流动相和极性的固定相。此时较小极性的组分比较大极性组分更快地洗脱。 5. 反相色谱 报给CDER的最通常的实验方法是反相HPLC方法， 最通常用紫外检测器。 反相色谱，一种键合相的色谱技术，用水作基本溶剂，选择性也受溶剂强度、柱温和pH的影响，一般来说较大极性比较小极性组分洗脱更快。 紫外检测器可以用于所有色谱，这类检测器要注意的是灯老化后的灵敏度降低，其灵敏度因(仪器)的设计和/或者制造厂家的不同有小的变异。需要指出，用紫外检检测器和反相HPLC组合得到的色谱图不一定能真实的反映事实，原因是： 极性比目标化合物大得多的化合物可能被掩盖(在溶剂前沿或死体积时同时洗脱)。 极性比目标化合物小得多的化合物洗脱出来晚，甚至保留在柱上。 紫外吸收系数较低和最大吸收不同的化合物在检测相对较低浓度的目标分析物时不能被检出，因为通常只有一个检测波长。 6. 排阻色谱 也叫凝胶渗漉(permeation)或滤过，分离基于化合物分子大小或水动力学(hydrodynamic)容积。比多孔柱填料孔径大得多的分子最先洗脱，小分子进入孔隙洗脱晚，其余的洗脱速率取决于其分子的相对大小。 B. [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]（GC） [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]基于挥发性样品由作为流动相的载气运载，通过色谱柱内的固定相时发生吸附和解吸附过程进行分离。 通常[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]分析的样品是低分子量化合物，这些化合物是易挥发的和高温时稳定的。在这一方面，药物和药物制剂中的残留溶剂适于[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]分析。生成化学衍生物可达到易挥发和热稳定的目的。 常用的检测器是用于含碳化合物的火焰离子化检测器（FID），用于卤代化合物的电子捕获式检测器（ECD），用于含硫和含磷化合物的火焰光度检测器（FPD），以及用于含氮或磷化合物的氮磷检测器（NPD）。[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]也能实现手性分离。填充柱迅速被毛细管取代来改进分离度和分析时间，在[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]上分析物位置与HPLC一样，用保留时间（Rt）表示。 C. 薄层色谱（TLC） 薄层色谱是一种最简便普通的色谱技术，分离基于在一端浸于溶剂混合物（流动相）中的薄层板（固定相）上点的样品移动进行分离，整个系统在密封的缸中进行。 对于本身没有颜色的化合物，检出技术包括荧光、紫外和喷雾显色剂（通用的和专一的）。 分析物在薄层板上的位置用Rf值来表示，Rf值为化合物的移动距离与溶剂前沿的比值。 三种方法，[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]、液相和薄层中，薄层色谱是最普通的试验方法，因为薄层板上所有的组分都可用适宜的检测技术检出。然而通常不如HPLC那么准确和灵敏。虽然选用适宜的检测技术，TLC法能见到分析的“全图”(whole picture) ，但比HPLC分析变异较大。 . 参考标准品（对照品） 参考标准品为经充分鉴定的高纯度化合物，色谱方法更大程度上依赖参考标准品来提供准确的数据。因而参考标准品的质量和纯度是很重要的，有二类参考标准品，化学的和放射性的。后者应考虑放射标记纯度和化学纯度。 按照提交方法验证的样品和分析数据，指南中的二类化学参考标准品如下： USP / NF参考标准品，不需要鉴定。 非总目录标准品，应用合理方法制备，并经充分鉴定，以保证其鉴别、含量、质量和纯度达到最高。 应该指出 大多数USP / NF参考标准品未标示化合物纯度。 对非USP参考标准品，提出纯度的校正数应包括在试验方法的计算中。 提供的参考标准品中没有以下杂质，诸如合成过程的结构相似的杂质和其它的过程杂质，如重金属、残留溶剂、水分（结合的和非结合的）、植物来源制剂中的农药和分解产物等。 如果在方法中规定，用前参考标准品要干燥除去残留溶剂、非结合水分和有时是结合水（取决于干燥条件），对易潮解的化合物总是包括干燥步骤的。但另一方面干燥可能导致结晶水的损失或引起热敏感化合物的降解。 色谱方法用外标法和内标法进行定量。 A. 外标法 当参考标准品与样品在不同的色谱图上进行分析时，用外标法。定量基于样品的峰面积/高（HPLC或GC）或强度（TLC）与分析对象、参考标准品的比值。 更适合用外标法的样品如下： 1.样品具有单一的目标浓度和狭窄的浓度范围 ，例如验收和出厂检验。 2.简便的样品制备操作。 3. 增加走基线的时间，为检测可能的额外峰，如杂质试验。 B. 内标法 加入一种已知纯度并且在分析中不产生干扰的化合物至样品混合液中，定量基于被分析的化合物与内标的响应比值与参考标准品得到的比值进行比较。这一方法很少用于TLC。 更适合用内标法的样品如下： 1.复杂的样品制备过程，如多次提取。 2.低浓度的样品（灵敏度是确定的），如药代动力学的研究。 3.在样品分析中预计是很宽的浓度范围，如药物动力学研究。 虽然CDER不规定方法应该用内标或外标法用于定量，但一般的看法是用于验收、稳定性和TLC用外标法，对生物体液和GC用内标法。 工作浓度为方法中规定的被分析对象的目标浓度。保持样品浓度与标准的浓度相近可以改善方法的准确性。 建议 1.如果参考标准品的纯度校正因子已知，那么在计算中应该包括。 2.在方法中要规定标准品和样品的工作浓度。 . 药物和药物制剂HPLC验证的参数 虽然许多种HPLC都可采用，但最普遍上报的方法都是用紫外检测器的反相HPLC法，以此作为验证参数的例子。这一方法验证的规定可以扩展到其它检测器和其它色谱。对于验收、出厂或稳定性试验，准确性应最佳化，因为要表明实测值和真值的差异是最为关注的。 A. 准确性 准确性是衡量测量实验值和真值的接近程度。推荐药物和药物制剂的准确性研究在标示量的80%、100%和120%的水平上来进行的，这与“The Guideline for Submitting Samples and Analytical Data for method Validation”的规定是一致的。 对于药物制剂，准确性试验通常是将已知量的药物 [按重量或体积（溶于稀释剂）] 以分析对象检测浓度的线性范围量加到空白处方内来完成的。对于液体制剂，这是真实的回收率；而对于诸如片剂、栓剂、透皮吸收制剂等，这不能检测稀释剂中的赋形剂与活性成分间可能产生的作用。实际上要做一个已知活性药物量的单个剂量单位（single unit）来进行回收试验是困难的。准确性试验评价在赋形剂存在时，在分析药物制剂的色谱条件下，试验方法的专属性。但这只是样品制备过程和色谱过程中的回收率，而不是制造过程的影响。 在每个推荐检测浓度重复进样，其重复进样的RSD提供了分析方法的变动性，或是试验方法的精密程度。重复性的均值以标示量的%来表示，这表明

前一段时间单位接到一个定制加工业务，客户提供了其分析方法，由于涉及客户的产品信息保密需要，故在以下条件验证中省略了产品名称。首先接到客户的分析方法后检查目前现有的仪器是否齐全、试剂是否齐全。还好条件比较普通，没有特殊的仪器要求和试剂要求。以下是分析条件：流动相：甲醇：水=60：40（V/V）色谱柱：C18（没有其他详细资料）流速：0.7ml/min检测波长：254nm进样量：20ul运行时间：30min样品处理：称取0.05g样品溶解于100ml甲醇中。（客户没有提供谱图）有一个注意点就是样品未溶解时性质比较稳定，但溶解后产品长时间放置会不稳定。原来以为根据这个现有条件，又没有特殊要求，条件验证应该比较简单，谁知在后来的验证过程中发生意想不到的问题，也走了不少的弯路，请听我慢慢道来： 首先安排人员按照客户的条件进行检测，以下是相关仪器信息：仪器条件：Agilent1200液相色谱仪环境条件：室温色谱柱：Agilent Extend C18 150mm*4.6mm*5um其他条件：与客户相同。这是当时分析的谱图，从分析谱图上看，样品的保留时间及峰型都比较理想，认为通过进一步的微调应该能够达到与客户的统一。当时没有将操作过程进行记录。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/03/201003260823_208297_1613599_3.gif

液相色谱分析如何做方法学验证？

[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=15852]色谱方法验证审评指南[/url]