各位达人,做制备色谱时,如果分析色谱由梯度流动相,那制备色谱怎么解决梯度流动相这个问题呢,我们的制备色谱仪是国产的,梯度流动相很难操作,大家有什么好的主意,谢谢
看到一个资料说,梯度中初始变化的速率可以按以下公式计算:[img=,116,45]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/06/201906271059588667_5863_3116636_3.png!w116x45.jpg[/img]其中F 为流速ml/min,Vm为色谱柱死体积ml,k为期望的平均保留因子,△%B为强洗脱溶剂的变动值,tG为梯度时间min。对于150*4.6mm的色谱柱,Vm约为1.2ml,流速通常设定为1.0ml/min,如果k为5,因此[color=#000000]△%B[/color]/tG为3.3,也就是B的改变速率设定为3.3%是适宜的,当梯度变化范围为5%-100%,梯度时间可以设置为29min。——————一直到“[color=#000000]如果k为5,因此[/color][color=#000000]△%B[/color][color=#000000]/tG为3.3”,这一段为止,我都是能理解的也能算出来。[/color][color=#000000]但是”[color=#000000]也就是B的改变速率设定为3.3%是适宜的,[/color]“这一段是怎么得出来的结论……[/color][color=#000000]还有“[color=#000000]当梯度变化范围为5%-100%,梯度时间可以设置为29min。[/color]”如何理解。[/color]————梯度时间tG是指比例变化的那一段时间吗?换言之就是斜率变化的那段时间吗?比如我从0分钟5%到10min95%。那么0-10min这一段就是指梯度tG吗,还是说我整个方法包含的时间称为梯度时间tG。求解答。
[align=center][size=29px][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]与[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]中的梯度淋洗[/size][/align][align=center][/align]1 等度淋洗与梯度淋洗进行高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]与[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]分析时,常用两种洗脱方式,即等度淋洗与梯度淋洗。其中等度淋洗在分析全过程中流动相的组成不变。而梯度淋洗中流动相组成随运行过程是变化的(例如氢氧根体系中氢氧化钾浓度由15mM增至50mM)。下图为几种不同的梯度形状。其中曲线梯度较为不常见。[img=,690,396]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/09/202209270935486413_397_1809927_3.jpg!w690x396.jpg[/img]目前许多实验室对梯度淋洗有很大偏见。他们偏爱等度淋洗的原因有以下几点:①一些实验室尚不具备支持梯度淋洗的色谱仪(只有一个泵且没比例阀)。②梯度淋洗更复杂,似乎更难建立新方法。③某些HPLC检测器(如示差折光检测器)不能使用梯度淋洗。④每次运行梯度淋洗后需重新平衡色谱柱,耗时较长。⑤不同设备的分离结果可能不同,所以梯度淋洗法移植时会出现保留时间差异。⑥梯度淋洗中的基线噪声和基线漂移更大,更容易受到试剂纯度的影响。⑦某些色谱柱或流动相不适于梯度淋洗。实际上,梯度淋洗分离方法的建立和日常操作与等度淋洗相比并不太难。而且很多分离只适于使用梯度淋洗。2 梯度淋洗的优势用等度淋洗时,由于流动相全程保持不变,如果待分析物,的保留差异很大,则会出现弱保留组分扎堆洗脱且强保留组分很晚才洗脱,从而无法获得满意的分离。[font='times new roman']为了比较等度淋洗与梯度淋洗的不同,我们使用同一根色谱柱分离相同的样品,下图是等度淋洗与梯度淋洗的对比谱图,上半部分为等度[/font][font='times new roman']淋洗曲线,下半部分为梯度淋洗曲线。通[/font][font='times new roman']过对比我们可以发现,等度淋洗时[/font][font='times new roman']1~6[/font][font='times new roman']号峰分离度不太理想,[/font][font='times new roman']13[/font][font='times new roman']号峰保留时间过长,而在梯度淋洗时,为了改善[/font][font='times new roman']1~6[/font][font='times new roman']号峰的分离,我们采用较低的淋洗液浓度,为了快速洗脱强保留的[/font][font='times new roman']13[/font][font='times new roman']号峰,我们在[/font][font='times new roman']6[/font][font='times new roman']号峰后提高了淋洗液浓度,使得[/font][font='times new roman']13[/font][font='times new roman']号峰由原来的[/font][font='times new roman']80[/font][font='times new roman']分钟提前到[/font][font='times new roman']40[/font][font='times new roman']分钟。由此可见,梯度淋洗可有效改善弱保留组份分离度,快速洗脱强保留组份。此外,等度淋洗时,弱保留组份峰形比较窄而强保留组份峰形较宽,梯度淋洗时增强洗脱能力可以使强保留组份也获得尖锐的峰形。[/font][align=center][img=,690,390]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/09/202209270936062924_2978_1809927_3.jpg!w690x390.jpg[/img][/align]3 使用梯度淋洗时的注意点3.1 基线漂移[align=left]在[font='times new roman']HPLC[/font]中,不同流动相(水、甲醇、乙腈)对于紫外吸收的程度不同,导致梯度淋洗时产生基线漂移,且不可避免。[/align][align=left]在碳酸盐体系[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]中,抑制产物是碳酸,碳酸浓度不同其电导也不同。故梯度淋洗会产生基线漂移,且不可避免。[/align][align=left]对于氢氧根淋洗液和甲烷磺酸淋洗液,抑制产物是水,理论上在梯度淋洗时不会产生基线漂移;而实际上由于试剂纯度以及抑制不完全等原因,也是存在基线漂移的。[/align]3.2 流动相平衡每次梯度淋洗结束时,流动相的组成已经与分析开始时大不相同了。为了下一次的梯度淋洗,必须用初始浓度的流动相对色谱柱进行彻底平衡后,再进行梯度淋洗。色谱柱平衡时间不足时,色谱图早期被洗脱的峰的保留时间会发生改变,而后期被洗脱的峰通常不受影响。3.3 流动相浓度的滞后现象当确定了梯度淋洗程序后,开始梯度淋洗,但由于实现梯度淋洗的仪器设备结构或电子控制系统等多种原因,使得我们实际观测到底梯度淋洗向后平移了一段时间,此现象称为梯度系统的滞后时间。使用相同的梯度淋洗程序,对于同一个样品,在不同的色谱仪上进行梯度淋洗,由于仪器结构、电路控制以及管线长度的差异,表现出的滞后时间往往不同。4 梯度淋洗的类型传统上,梯度淋洗分为高压梯度(也叫内梯度)和低压梯度(也叫外梯度)。另外,在[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]领域提出淋洗液发生器的概念后,使用淋洗液发生器时也可以进行梯度淋洗。4.1 高压梯度(内梯度)高压梯度又称内梯度,采用多个高压泵将不同的流动相增压后送入混合室混合后送入色谱柱。流动相中有几种变化组分就称为几元梯度。二元梯度淋洗需要两台高压输液泵;三元梯度淋洗需要三台高压输液泵;每台高压输液泵的输出量由程序控制,按照设定程序将不同量的溶剂送到混合室混合,产生任意形式的梯度淋洗曲线。高压梯度通常以二元高压梯度最为常见。下图为二元高压输液系统示意图。[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/09/202209270931283755_4332_1809927_3.jpeg[/img]泵A和泵B出来的流动相在混合器里面混合的时候,都是处于高压状态,这时候,流动相对气体溶解度较高,流动相中不容易析出气泡,从而避免导致[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]压力波动、流速不准、基线波动等种种问题。4.2 低压梯度(外梯度)低压梯度又称外梯度,是在常压下将流动相的不同组分混合后再用高压输液泵送入色谱柱的方法,利用电磁比例阀控制不同溶剂的流量变化,使溶剂按不同比例被输送入到混合室中混合,然后用一台高压输液泵将混合好的流动相输送到色谱柱中。低压梯度通常以四元低压梯度最为常见。流动相对气体的溶解度较低,如果流动相中溶解的气体比较多的话,在混合时就可能有小气泡形成,导致压力波动等种种问题。气泡永远是[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]的天敌。下图为四元低压输液系统示意图。[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/09/202209270931284761_9930_1809927_3.jpeg[/img]低压梯度一定要配脱气机,先对流动相进行在线脱气,才能用电磁比例阀进行混合,要不然很容易产生气泡。而高压梯度一般情况下可以不用配在线脱气机就能在线混合,运行梯度方法。高压梯度的优势:优势1:混合精确性高从上面的介绍可以看到,两种梯度体系的混合方式完全不同。高压梯度相当直观,通过分别控制两个泵的流速,就能够准确控制两种流动相的比例。比如在1ml/min的流速下,要达到A:B两种流动相70:30的混合比例,那就设置A泵流速0.7ml/min,B泵流速0.3ml/min就可以了。当然这些都是系统和软件自动完成的。只要做到泵流速准确,比例就能准确。而低压梯度则通过电磁比例阀来控制混合比例,那比例阀又是如何工作的呢?一般来说,比例阀是通过控制入口通道分别打开时间的长短来控制混合比例的。举个例子可能更容易理解,仍然是A:B两种流动相70:30的混合比例。为了达到这个效果,B、C、D三个通道都关闭,A通道打开7ms,这时候进入系统的都是A;然后,A、C、D关闭,B通道打开3ms,这时候进入系统的都是B。这样就得到了70/30的流动相的比例。大家能感觉出来,进入系统的流动相其实是一段A、一段B这样的。如果两种流动相比例比较悬殊(比如某组分只占有1%),这种混合方式的误差相对比较大。优势2:延迟体积小使用高压梯度时,流动相混合后,经过混合器、压力传感器、阻尼器,放空阀,然后进入进样器。反观低压梯度,流动相混合后要经过整个泵头(包括主动入口阀、两个泵腔、出口阀、管路等等),才能到达进样器。一般来说,我们把流动相从混合开始,最后到达柱头这段体积叫延迟体积。流动相梯度的变化要到色谱柱头,才能够对分离产生影响,所以有一定的延迟。延迟体积越大,梯度的变化到达柱头的时间越长,导致分析时间越长。我们可以看到,高压梯度先天地决定了其延迟体积远小于低压梯度。这就决定了在色谱分析时间要求很短的梯度方法中,比如各种小粒径的色谱柱的快速分析方法,都采用高压梯度方法。不同品牌、类型的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]之间的延迟体积差异,是方法转移后出现结果跟以前不一样了的最大的原因之一。低压梯度的优势:高压梯度这么多优势,但在实际上,还是低压梯度用得更多一些。低压梯度的优势是:便宜。低压梯度只需要一个输液泵就能运行梯度条件,,高压梯度最低需要两个泵才能运行梯度。在运行方法条件不是很苛刻的时候,低压梯度能达到跟高压梯度一样的分析效果,而价格可能要便宜得多。而且只有一个泵,后期保养成本也低。因为便宜,所以市场保有量更大,很多标准方法都是在低压梯度下开发的。用高压梯度需要进行方法移植。如果用一些三元甚至更高元梯度的方法,四元低压梯度可以直接拿来用,高压梯度需要购置三个甚至四个泵,成本进一步提高。四元低压梯度可以在进样程序中直接设置走完序列后冲洗瓶子;而高压梯度要达成这样的方法,需要购置阀控或者更多的泵。4.3 [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]淋洗液发生器产生的梯度淋洗[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]使用的流动相以酸碱盐的水溶液为主,传统的配制方法是称量试剂并溶解定容。淋洗液发生器通过电解在线产生高纯度淋洗液,并支持梯度程序,是[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]发展中的重大跨越。此处以[font='times new roman']KOH[/font]淋洗液发生器为例介绍淋洗液发生器的原理。淋洗液发生器通电时,阳极电解产生氢离子及氧气,氢离子和罐中的氢氧根离子反应生成水,导致罐中钾离子(阳离子)比氢氧根离子(阴离子)数量多。多出来的钾离子在电场及渗析作用的驱动下通过阳离子膜到达氢氧化钾发生室。阴极在氢氧化钾发生室的底部,电解产生氢氧根离子和氢气。[align=center][img=,591,290]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/09/202209270936253224_254_1809927_3.jpg!w591x290.jpg[/img][/align]随着超纯水不断流入氢氧化钾发生室,钾离子和氢氧根离子以及氢气随着水流入[font='times new roman']CR-ATC[/font][font='times new roman'](主要作用是去除杂质阴离子)[/font]和脱气盒,在脱气盒中氢气被去除。所产生的KOH溶液的浓度由施加电流与去离子水的流速决定。根据法拉第电解定律,在恒定流速下,施加电流和所产生的KOH浓度之间呈正比,可通过控制所加的电流得到准确浓度的KOH淋洗液,因此也可以实现梯度淋洗。操作鼠标即可设置淋洗液的浓度梯度,有效地简化了操作和缩短了运行时间,使其与等度淋洗一样方便,此项技术被称为“只加水”[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]技术。5 总结进行梯度淋洗可以达到以下目的:缩短分析周期;提高分离能力;峰型得到改善;增加灵敏度,但通常会引起基线漂移。在[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]中,使用淋洗液发生器产生的梯度淋洗精度通常高于高压及低压梯度,推荐使用。在[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]中,高压梯度及低压梯度各有优势,可根据实验室条件及预算进行选配。6 参考文献牟世芬,朱岩,刘克纳.《[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]方法及应用》(第三版)化学工业出版社于世林.《图解高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]技术与应用》科学出版社R.施奈德,J.L.格莱吉克 著 王杰 赵岚峰 王树力 丁洁 译 《实用高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法的建立》(第二版)科学出版社青岛睿谱分析仪器有限公司 《[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]实用手册》张新庆 “二元泵和四元泵哪个好”gz号
离子色谱使用KOH 梯度淋洗,15mM/40m,1.0mL/min,15mM/40m表示什么意思?谢谢
怎样提高液相色谱的分离度(梯度)
各位大侠:请教一个问题,液相色谱仪梯度有高压和低压的区分,我一直弄不明白这两种梯度方式那种更具优势,梯度混合效果更好,请给一个好的答案!!!!!!!!!!!!!中国心中国心中国心
能得出梯度曲线是否证明液相色谱仪能做梯度洗脱!!我很想知道!!请知道的朋友尽快和我联系!!谢谢!!
液相色谱在梯度测定的设置中对于梯度变换率的控制如何进行探索,曲线的参考值是怎样的一个区别?
最近购买了一台戴安的离子色谱,带有梯度淋洗功能。但是戴安的工程师说淋洗液需要全部购买他们的,一瓶淋洗液要近20000多啊,而且最多能用两个礼拜,我想问问各位大侠,你们的淋洗液是自己配制的还是直接购买的呢?谢谢!
刚接触液相色谱,请教下等度与梯度是什么意思,两者在仪器配置上有什么区别,做梯度是不是一定要两个泵
有什么参数可以预测等梯度或者梯度条件下的色谱保留时间呢?看到文献上有用 solute descriptors,比如 the excess molar refraction E (in cm3/10),the dipolarity/polarizability S, the solute’s effective hydrogen-bondacidity A and hydrogen-bond basicity B, and McGowan’s characteristicvolume V (in cm3 mol− 1/100).如果用这些参数来预测色谱保留时间的话,如何用软件计算得到这样的参数呢?或者还有没有其他的途径可以预测化合物的保留时间呢?
气相色谱测农残时混标的梯度浓度如何配?最低浓度设置为多少、最高呢?
[img=,624,780]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909091631034572_2547_3434948_3.png!w624x780.jpg[/img]有没有大神能够帮我解答一下,为什么文中叙述在18min结束梯度是最佳(18min结束的话,按照2%/min,梯度浓度应该是50%-86%),最后梯度浓度却是80%?(80%的浓度对应应该是15min的梯度时长),而且图b中15min峰都没出完,18min才出完的,这样不应该是梯度过早结束?(我这个是 《使用高效液相色谱法的建立 纠错版 第八章》),而且图d中70min根本没有出完峰,文中为什么说d运行需要70min?
液相色谱梯度方法开发的一些细节改进,仅供参考!!!
我利用梯度20%-100%的甲醇梯度跑液相时,到80%的甲醇开始就有两个大峰出来,试剂用的是色谱甲醇都用过滤膜过滤,出峰时压力有变动。能不能避免此类现象?
大家好!在[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]中,为了尽快把各成分都洗脱出来,我们会使用梯度洗脱的方式进行洗脱。然而,为了抑制基线受到梯度影响而漂移,也为了追求好的信噪比,我们会加一定抑制电流于抑制器。不过,抑制电流的大小选择是个技术活。太大,会损坏抑制器,仪器也会自动停止 报错。太小,就起不到很好的作用。尤其在梯度差距很大时,这种影响特别明显。大家在日常使用中,有什么好的方法来设置抑制电流呢?我用的ADES 600抑制器
跑梯度的时候造成基线飘移,请问我应该怎么办?我是新手,不太懂,希望大家多多指点。(付有色谱图)http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/06/201206051910_370564_2334277_3.jpg
请教各位大峡梯度洗脱是怎么回事,最近想买一台液相色谱,实验室本来只有[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url],所以对液相不太了解.如果想买一台液相色谱,能做梯度洗脱,对设备有什么要求,是不是一定需要两台泵.
验证液相色谱仪器梯度,AC泵水,BD泵0.4ACE+水,结果走出图谱整体型对(如图),但是不直,跟标准图谱有一定的差距,请教大神这是为什么啊?[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/05/202105192136203450_935_5186246_3.jpg[/img]
色谱图前面的峰不稳定,每次梯度保留值都不一样。这种情况主要是柱子冲洗不彻底和进样前未充分平衡。建议每次梯度之后加长冲洗时间以及在进下一个样品前,用初始流动相充分平衡(打入15倍柱体积的初始流动相即可)。
请教各路大神,高效液相色谱梯度优化有什么技巧吗?
[color=#444444]我利用梯度20%-100%的甲醇梯度跑液相时,到80%的甲醇开始就有两个大峰出来,试剂用的是色谱甲醇都用过滤膜过滤,出峰时压力有变动。能不能避免此类现象?[/color]
主题:液相色谱进阶讲座之梯度洗脱简介:通过实例详细介绍“梯度洗脱”的意义、应用领域、操作方法以及优化,相信能够使广大网友的液相色谱技术有一些崭新的提高讲座办法:在讲座时间内,由主讲人上传资料;讲座时间结束,网友可以参与讨论提问等;讲座内容长期保存,网友可在任何时间进行浏览或下载讲座时间:2010-7-8,14:30~16:00主讲人:Godblesschina欢迎各位朋友届时参与!
没用过液相色谱,也没培训过,自己在摸索。梯度洗脱怎么设置?如图,在41分钟时候溶剂从A65%B35%逐步达到A 100% B0%?还是在41分钟时候才转换成a100% b0%[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/04/202104131001220789_9197_4020217_3.png[/img]
本人现在在做液相色谱的计量检定相关实验,按照国标,已经完成一部分了,可是现在碰到一些问题,希望做过这方面的有经验的人士给予提点和帮助,先谢谢各位了!首先是关于梯度误差,按照国标要求,已经执行了梯度程序,也得到了比较好的梯度图,可是至于数据,不知道该怎么处理,Lm说是各段输出信号值平均值的平均值,按照国标中的公式算,不对啊,梯度误差都在百分之几十???希望做过这方面的给予提点。下图附件就是梯度图。然后就是关于波长示值误差和线性范围这两块,不知道怎么做,如果按照国标那么做,根本就做不出来啊················差点忘了说,我所检定的液相是岛津LC20的。。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/09/201109161352_317068_2271280_3.jpg
[color=#444444]请教一个HPLC的梯度洗脱问题:缓冲盐是20mmol/L的醋酸铵-醋酸缓冲盐溶液,pH=4.90。[/color][color=#444444]原来的方法[/color][color=#444444]0 min 100% 醋酸铵缓冲盐[/color][color=#444444]2.5 min 100% 醋酸铵缓冲盐[/color][color=#444444]10 min 36% 甲醇 64% 醋酸铵缓冲盐[/color][color=#444444]12.5 min 100% 醋酸铵缓冲盐[/color][color=#444444]15 min 100% 醋酸铵缓冲盐[/color][color=#444444]原来可以检测出五种物质,出峰时间分别是2.33 2.67 5.46 6.45 10.88 min[/color][color=#444444]但是现在我只想检测两种物质(2.67 和5.46两个峰),虽然可以直接跑完这个梯度,但是比较费时间,希望调整后可以节省点分析时间。另外峰谱图后半部分基线漂移比较严重,所以想着调整本方法~[/color][color=#444444]请教一下梯度洗脱的方法应该怎么修改呢?有一个不明白的问题是怎么调整有机相比例可以避免后面不需要的几种物质残留在色谱柱中?[/color]
高效液相色谱梯度洗脱时应该注意的问题?
安捷伦1260液相色谱从哪设梯度洗脱
我是使用液相色谱的菜鸟,现在遇到了一点点问题,请各位前辈解答。两个样品用高效液相色谱测定,一个的条件是:甲醇:ph3缓冲液=75:25,在10分钟左右出峰,流速1ml/min;另一个的条件是:甲醇:ph3缓冲液=5:95,在6分钟左右出峰,流速0.5ml/min,如果我想同时测定,可以用梯度洗脱吗?如果可以的话,流动相比例过程中的变化改怎么设置,请各位大神赐教,谢谢。
[color=#444444]同样的色谱条件,同样的洗脱梯度,做同一个物质时,原来25-30min之间没有大包,现在出现大包,洗脱流动相,A,B均为不同比例的盐和乙腈,前25分钟完全由A相转换为B相,25-26min完全由B相转换为A相,此时出现大包。以前也是这个梯度,但是没有大包,求大家帮忙分析一下原因。[/color]