色谱科米

为促进北京地区色谱技术的应用与交流，了解色谱技术的发展趋势，“2014年北京色谱年会”定于2014年12月12日在北京四川龙爪树宾馆召开。本届色谱年会的主题是“色谱技术在环境和食品安全分析中的应用”，年会上张玉奎院士、江桂斌院士等色谱相关研究领域著名的专家、学者做了大会报告，介绍色谱技术的最新成果与应用进展。会议共吸引了各个行业约400多位色谱工作者到场倾听、交流。 默克密理博作为厂商参加了此次会议，会议上展示了色谱柱、薄层板、色谱流动相、样品前处理小柱等色谱相关的产品，并与参会者就色谱技术及前处理方法做了深入交流，特别是Chromolith整体化色谱柱、ZIC-HILIC亲水作用色谱柱、EXtrelut® NT液液萃取小柱更是受到与会者的特别关注，普遍表示希望有机会能够体验一下或计划尝试一下。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/12/201412231148_528477_1342_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/12/201412231149_528478_1342_3.png

2014年9月19日至21日，第十五届全国离子色谱学术报告会在四川成都新华国际大酒店举行，来自高校、科研院所、石油化工等逾百位离子色谱专家学者参加了本届会议。 默克密理博作为实验室分析产品的专业供应商参加了此次会议，并展出离子色谱相关的仪器，试剂和耗材。报告会中，众多专家、学者对默克密理博的产品表现出了浓厚的兴趣，纷纷向技术人员询问产品信息，关注焦点主要集中于纯水机和标准品的选择上。会议期间，默克密理博重点展示了Milli-Q Integral 纯水/ 超纯水一体化系统，该系统集成以专利Elix技术为代表的多项先进的纯化模块及水质监控模块，有效减小离子、有机物、颗粒物及细菌等水中污染物对离子色谱的影响，从而为实验室提供亚ppt级别离子色谱专用水。现场的应用分析介绍及技术交流充分体现了默克密理博的专业性及行业领导地位并让许多客户对纯水机产生了浓厚的兴趣。部分客户反映，现有品牌或者自配的标准品，并无法满足他们的实验要求并达到可靠结果。基于这些反馈，来自默克密理博的专业人员，现场为客户讲解了标准品的选择对实验结果的巨大影响。 本次报告会为默克密理博离子色谱产品提供了良好平台，通过产品展示增进了专家和客户对默克密理博的了解。会后客户表示了极大的兴趣，希望默克密理博的产品能帮助其解决实验中遇到的问题，保证实验分析结果。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/09/201409221721_514900_2489055_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/09/201409221721_514901_2489055_3.jpg

作者：温预关， 王玲芝， 刘学军， 陆欣乔（广东省广州市脑科医院临床药理实验室， 广东 广州 ）摘要：目的:建立测定米氮平片中米氮平含量的反相高效液相色谱法。方法:以美国Dikma公司DiamonsilTMC18反相柱(250mm×4.6mm,5μm)为色谱柱,流动相为甲醇-超纯水(90∶10,V/V),流速为0.8mL/min,检测波长为294nm,柱温为30℃,进样量为5μL。考察了流动相不同配比对米氮平色谱行为的影响。结果:米氮平与片剂辅料及其杂质可完全分离;分析方法的定量测定下限为0.2μg/mL,线性范围:1.0～100.0μg/mL,回归方程为C=1.85×10-1F+9.65×10-1,r=0.999(n=9),平均回收率为95.15%,RSD=0.76%。结论:方法灵敏、准确、简单、快速,可用于米氮平片的含量测定。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/07/201207161639_377909_2379123_3.jpg

于近日收到月旭2.7um液相核壳色谱柱开始试用。1.两款色谱柱比较月旭2.7um 4.6*100mm Core-Shell BoltimateTM 另一款 5um 4.6*250mm C18http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/01/201701191700_667549_1643288_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/2016042900061565_01_1643288_3.jpg2. 柱效比较：以安赛蜜、糖精钠为指标进行比较安赛蜜、糖精钠是一个食品实验室必要开展的检测项目，目前的检测方法也比较的成熟。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/2016042900063264_01_1643288_3.png4.6*250mmC18http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/04/201604290006_591875_1643288_3.png月旭柱流动相B 0.02mol/L 乙酸铵+5%甲醇 A 甲醇 梯度洗脱 Time %A %B1 0.00 0.0 0.0 100.02 10.00 0.0 100.03 11.00 95.0 0.0 5.04 19.00 95.0 0.0 5.05 20.00 0.0 100.06 45.00 0.0 100.0两相比较1).柱压的问题：月旭LP-C18 4.6*100mm 2.7μ 这款柱子在1mL/min、乙酸铵-甲醇流动相体系压力表现为170bar ，0.6 mL/min时是135bar，两者峰宽没有明显区别，因此采用0.6 mL/min。2）保留时间 月旭中 安赛蜜在3.4分钟左右出峰 山梨酸7.4分钟普通 苯甲酸在7.6分钟左右出峰 山梨酸18.4分钟3）峰宽 月旭中 0.2分钟左右普通 0.6 分钟左右糕点样品图http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/04/201604290006_591875_1643288_3.png蓝色标准品、红色是糕点样品 样品在安赛蜜处有出峰，但该处属于样品的极性杂质流出区域，很可能是杂质引起误判，因此应当延后保留时间。但这需要将流动相变为纯乙酸铵应可以解决。总结特点：节约仪器时间、节约流动相、改善了分离。

[align=center][b][color=#333333]色谱柱的“维密秀”[/color][/b][/align]HPLC（高效液相色谱）是实验室重要的 “分离”手段，而色谱柱则堪称分离的心脏。日常使用HPLC不免会遇到由色谱柱引起的各种故障，因此提前做好维护保养色谱柱的工作十分重要。今天小编就送大家一套色谱柱维护保养的小秘密，简称“维密”。一、试验样品需过滤若试验样品中的不溶物进入色谱柱，则会引起入口过滤器及填料堵塞，柱压上升，从而破坏分离，因此样品应尽可能以清洁的状态注入。不论在什么情况下，建议用0.5μm左右的过滤器过滤一下样品。二、谨防色谱柱污染有时样品经过过滤，仍会发生色谱柱堵塞、污染等情况，这可能是由于样品中存在的夹杂物使溶解性差的成分向流动相析离、被填料牢固保持的夹杂成分的吸附、微型注射器污染等原因引起的。所以最好在分析前使用过滤器和防护柱，将这些污染尽可能地除去，过滤器中通常装有孔径为 1μm 左右的滤网，可有效除去引起堵塞的物质；防护柱是安装在分析柱前面的短柱，起到捕捉牢固吸附于填料上夹杂成分的作用。三、保证色谱柱洁净上面提到的防护柱其清除污染的作用有限，因此色谱柱在使用之后，当根据样品的不同，在每数次分析样品之后进行一次清洗。四、色谱柱轻拿轻放色谱柱中填满了数微米大小的细小粒子，应避免冲击和外部压力的急剧变化，防止损伤柱子。五、确认流动相的制约有时色谱柱会因流动相的pH、有机溶剂量等受到制约，因此需充分确认之后再使用。六、按需要使用不同的色谱柱若一支色谱柱用于各种分析，则前面的测试数据有时不会重现。此外，如果重复进行流动相条件差别较大的分析，也会加速色谱柱的劣化。因此请务必做好各个色谱柱的使用记录。常见色谱柱故障现象图[img=,656,421]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808281231463580_88_2428063_3.jpg!w656x421.jpg[/img]现象：①为新柱时的色谱图，随后在使用过程中色谱图在峰根部出现拖尾（如②所示），再继续使用下去，便像③所示，最后变成④所示的两个峰。判断：这时可注入其它成分观察一下，确认是否出现同样的现象。如果出现同样的现象，则考虑是柱入口过滤器或填料被污染，或者是填料入口有间隙。操作：可小心地卸下入口的端盖查一下入口处有无出现间隙。如果有间隙出现，请填放同样的填料，如果一时没有相同的填料，也可用硅石棉作为应急措施。如果没有间隙的话，请用超声波清洗器仔细洗净入口过滤器。 转自微信公众号《津津贫道》

[align=center]固相萃取-高效液相色谱法测定蜂蜜中克伦特罗残留量及条件优化[/align][align=left]1、前言 克伦特罗（Clenbuterol）既不是兽药，也不属于添加剂，而是一种激素类物质，俗称“瘦肉精”，该物质能促进动物体内脂肪分解代谢，增加蛋白质合成，提高瘦肉率，然而人体食用高残留量的内脏组织或者累计摄入量超过一定值时便可能引发食物中毒事件。1997 年我国明令禁止在畜牧行业生产、销售和使用克伦特罗，但是非法使用克伦特罗的事件仍时有发生。 目前，现行有效的标准中测定克伦特罗的方法有酶联免疫法、胶体金免疫层析法、液相色谱法和质谱法，针对不同的样品基质和实验室条件可以选择合适的测定方法。国家标准GB/T 22944-2008中采用液相色谱-串联质谱法测定蜂蜜中克伦特罗的残留量，但是实验室没有[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]，关于高效液相色谱法测定蜂蜜中克伦特罗的文献也不多，于是尝试建立固相萃取-高效液相色谱法测定蜂蜜中克伦特罗的方法并对测试条件进行优化。2、实验方法2.1 仪器和试剂 Waters e2695液相色谱仪（主要包括2998光电二极管矩阵检测器，柱温箱，自动进样器，自动脱气四元梯度泵等）；微型漩涡混合仪；12位固相萃取真空装置；12位干浴氮吹仪； Millpore超纯水系统。 甲醇中盐酸克伦特罗标准溶液（250μg/mL，坛墨质检）；甲醇、乙酸乙酯和乙酸为色谱纯；乙酸钠、乙酸铵、磷酸二氢钠、氨水和磷酸为分析纯；实验用水为Millpore超纯水系统制得，18MΩ• cm，25 ℃。2.2色谱条件 色谱柱：CNW Athena C18-WP(250mm×4.6mm ,5μm) 流动相：甲醇：磷酸二氢钠（0.02mol/L）=40：60 流速：1.0mL/min 进样体积：20μL 柱温：30℃ 检测波长：210nm3 结果与讨论3.1 检测波长的确定 采用Waters 2998二级管阵列检测器的3D扫描功能，在波长190~400nm范围内对高浓度的克伦特罗标准工作溶液进行测定，并在克伦特罗出峰位置提取光谱图，见下图，从图中可以看出，克伦特罗的最大吸收波长在210nm附近，因此选择210nm作为检测波长，此时克伦特罗的响应值最大。[/align][align=center][img=,690,345]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709301354_01_1669358_3.jpg[/img][/align][align=left]3.2 流动相的选择3.2.1甲醇-水为流动相3.2.1.1 流动相pH值对测定结果的影响 首先参考GB/T 5009.192-2003第二法中的色谱条件，以甲醇-水为流动相进行测试，然而结果并不理想，克伦特罗标准溶液在此流动相下并未出峰，几番尝试后决定更换流动相。看到几个采用质谱测定的标准方法均在流动相中加入了酸，于是仍然以甲醇-水为流动相，往水中加入不同体积的磷酸溶液，考察pH值对克伦特罗测定结果的影响（甲醇：水=30:70），测定结果见下图。[/align][align=center][img=,583,845]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709301356_01_1669358_3.jpg[/img][/align][align=left] 从上述测定结果中可以发现，未调pH时色谱图中并没有明显的色谱峰，流动相中加入磷酸后克伦特罗在8min左右出峰；随着磷酸加入量的增加，其出峰时间提前并且峰高与峰面积也随着增加；当进一步提高流动相中磷酸含量时，克伦特罗的出峰时间逐渐延长，但是峰面积保持不变。这可能是由于克伦特罗呈弱酸性，在水溶液中以离子形态存在，降低了在C18色谱柱上的保留行为，而磷酸的加入能够抑制克伦特罗的电离，使其以分子的形态存在，增加克伦特罗在C18色谱柱上的保留，并改善峰形。当pH=3.5时，克伦特罗呈部分解离的状态，因此虽然能够出峰，但是峰面积偏小，而当pH=3.0时，克伦特罗则全部以分子形态存在，峰面积保持不变。随着磷酸加入量的增加，克伦特罗的出峰时间延长，峰展宽变大，峰高变小，方法的灵敏度也随着降低。3.2.1.2 流动相比例对测定结果的影响 流动相中有机相比例对高效液相色谱的分离行为有很大影响，调节流动相比例可以改善待测组分的峰形、出峰时间以及与杂质组分的分离度，因此实验中考察了有机相比例对克伦特罗测定结果的影响（pH=2.8），测定结果见下图。从图中可以看出，提高流动相中甲醇含量对克伦特罗的出峰时间有很大的影响，当流动相中甲醇含量为20%时，克伦特罗的出峰时间为17min左右，而当流动相中甲醇含量为45%时，克伦特罗的出峰时间提前到3min左右，而且与溶剂峰重叠，不利于定性和定量分析。[/align][align=center][img=,578,826]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709301359_02_1669358_3.jpg[/img][/align][align=left]3.2.1.3 方法重复性测试 根据上述测试结果，初步决定采用甲醇：水（pH=2.8）=30:70的流动相条件进行测试，然而在测试过程中发现，此流动相条件下克伦特罗的保留时间不稳定，随着进样次数的增加，保留时间不断前移，6针进样后克伦特罗保留时间的相对标准偏差（RSD）值为1.3%。产生保留时间漂移的原因可能有两种（1）色谱柱的性能下降，流动相中加了磷酸，色谱柱平衡所需的时间比较长（这是一根服役了很久的色谱柱）；（2）此流动相条件的缓冲能力弱，在线混合以及样品的加入导致流动相的pH值发生变化，从而保留时间不稳定。于是修改流动相条件，pH值保持不变，将流动相中甲醇的比例由30%提高至40%，重新考察方法的重复性，实验结果见下图。实验表明，甲醇：水（pH=2.8）=40:60时方法具有较好的重复性，连续6针进样，克伦特罗保留时间的RSD值为0.1%。[/align][align=center][img=,589,419]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709301401_01_1669358_3.jpg[/img][/align][align=left]3.2.2甲醇-磷酸盐为流动相 通过上述实验，初步确立了以甲醇-水为流动相测定克伦特罗的高效液相色谱条件，并对部分实验参数进行了优化，然而上述实验结果均是针对克伦特罗标准工作溶液进行的测定，样品成分单一，没有杂质干扰，因此不用考虑杂质与克伦特罗之间的分离度。色谱条件为甲醇：水（pH=2.8）=40:60时虽然解决了方法重复性的问题，但是从色谱图中可以看到，此时克伦特罗的出峰时间较早，仅需3.5min左右就能出峰，而且出峰时间早于溶剂峰，在实际样品分析中很容易受到杂质峰的影响，此方法是否适合测定蜂蜜中的克伦特罗残留量还需进一步验证。 在对蜂蜜样品测定验证之前，先尝试寻找是否有更合适的流动相。以甲醇-水为流动相进行测试时，磷酸的加入对克伦特罗的出峰影响较大，于是尝试改用甲醇-磷酸盐为流动相进行下一步测试。从流动相pH值、流动相比例和方法重复性3个方面对方法进行考察，磷酸盐选用0.02mol/L的磷酸二氢钠，通过磷酸调节流动相的pH值，实验结果见下图。实验表明，以甲醇-磷酸二氢钠（0.02mol/L）为流动相时，有机相比例对克伦特罗出峰时间也有很大的影响，pH值的影响较小，因此后续的实验中直接采用甲醇-磷酸二氢钠（0.02mol/L）为流动相，未对流动相的pH值进行调节。当甲醇：磷酸二氢钠（0.02mol/L）=40:60时，连续6针进样，克伦特罗保留时间的RSD值为0.1%，测试方法具有较好的重复性，同时，克伦特罗的出峰时间远离溶剂峰，可以减小样品中杂质组分对待测物质测定的干扰。[/align][align=center][img=,597,550]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709301403_01_1669358_3.jpg[/img][/align][align=left]3.2.3甲醇-乙酸盐为流动相 在查阅文献的过程中发现，也有老师采用乙酸盐缓冲溶液对克伦特罗进行测定，于是决定试一下效果。同样，从流动相pH值、流动相比例和方法重复性3个方面对方法进行考察，乙酸盐选用0.02mol/L的乙酸铵，通过乙酸调节流动相的pH值，实验结果见下图。实验表明，采用甲醇-乙酸铵（0.02mol/L）为流动相时，有机相比例对克伦特罗出峰时间有很大的影响，pH值的影响较小，方法的重复性较好，但是此时基线噪音较大，峰高变小，影响方法的检出限。[/align][align=center][img=,581,588]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709301405_01_1669358_3.jpg[/img][/align][align=left] 通过上述实验，分别以甲醇-水、甲醇-磷酸盐和甲醇-乙酸盐为流动相，建立了高效液相色谱法测定克伦特罗的方法，并对部分实验条件进行了优化，在实验中发现了各自方法的优缺点，哪种方法更适合蜂蜜中克伦特罗的测定，还需用蜂蜜样品进行验证。3.3 样品前处理 蜂蜜中通常不含有克伦特罗，即使有，其残留值也很小，而且蜂蜜为半固态粘稠样品，无法直接进样测定，因此需要对蜂蜜样品进行前处理。前处理过程主要包含提取、富集、净化和浓缩4个步骤，此次实验蜂蜜中克伦特罗的提取方法参考GB/T 22944-2008：称取约2g蜂蜜样品于50mL离心管中，加入20mL乙酸钠缓冲溶液（0.2mol/L，pH=5.0），漩涡混匀，蜂蜜完全溶解后备用。 样品中克伦特罗残留量富集、净化的方法有很多种，本次实验分别参照标准GB/T5009.192-2003、SN/T1924-2007、SN/T1924-2011以及GB/T22944-2008，采用CNWBONDWCX(500mg，6mL)、CNWBOND SCX(500mg，6mL)、CNW Poly-Sery MCX(60mg，3mL)和CNW Poly-SeryHLB(500mg，6mL)固相萃取柱对蜂蜜中的克伦特罗残留量进行富集、净化，其中SN/T1924-2007标准已作废，但是标准中所涉及的富集净化方法也曾出现在上海安谱实验科技股份有限公司(以下简称上海安谱）的技术应用文章中，因此对此方法也做了尝试。同时，采用Oasis MCX(60mg，3mL)和OasisHLB(200mg，6mL)固相萃取柱对蜂蜜中的克伦特罗残留量进行富集、净化，简单比较了不同品牌固相萃取柱在净化效果、回收率等性能方面的差异。[/align][align=center][img=,578,358]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709301407_01_1669358_3.jpg[/img][/align][align=left] 固相萃取柱所用的填料不同，活化和净化方法也有所区别，具体实验方法如下： （1）WCX固相萃取柱 依次用5mL乙醇和5mL水活化固相萃取柱，将上述蜂蜜提取液全部转移至活化后的固相萃取柱中，分别用5mL水和5mL 乙醇淋洗固相萃取柱，弃去淋洗液，真空抽干2min，最后用10mL氨水-乙醇溶液（体积比2：98）进行洗脱，收集洗脱液。洗脱液在50℃下氮气吹干，准确加入1mL水溶解残渣，过0.22μm滤膜后，进样测定。 （2）SCX固相萃取柱 依次用5mL甲醇、5mL水和5mL0.03mol/L盐酸溶液活化固相萃取柱，将上述蜂蜜提取液全部转移至活化后的固相萃取柱中，分别用5mL水和5mL甲醇淋洗固相萃取柱，弃去淋洗液，真空抽干2min，最后用10mL氨水-甲醇溶液（体积比5：95）进行洗脱，收集洗脱液。洗脱液在50℃下氮气吹干，准确加入1mL水溶解残渣，过0.22μm滤膜后，进样测定。 （3）MCX固相萃取柱 依次用3mL甲醇、3mL水和3mL 0.1mol/L盐酸溶液活化固相萃取柱，将上述蜂蜜提取液全部转移至活化后的固相萃取柱中，分别用3mL 0.1mol/L盐酸溶液、3mL水和3mL50%甲醇淋洗固相萃取柱，弃去淋洗液，真空抽干2min，最后用5mL氨水-甲醇-乙酸乙酯溶液（体积比5：45：50）进行洗脱，收集洗脱液。洗脱液在50℃下氮气吹干，准确加入1mL水溶解残渣，过0.22μm滤膜后，进样测定。 （4）HLB固相萃取柱 依次用5mL甲醇和5mL水活化固相萃取柱，将上述蜂蜜提取液全部转移至活化后的固相萃取柱中，分别用5mL水和5mL甲醇淋洗固相萃取柱，弃去淋洗液，真空抽干2min，最后用10mL氨水-甲醇溶液（体积比5：95）进行洗脱，收集洗脱液。洗脱液在50℃下氮气吹干，准确加入1mL流动相溶解残渣，过0.22μm滤膜后，进样测定。[/align][align=center][img=,578,190]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709301408_01_1669358_3.jpg[/img][/align][align=left]3.4 蜂蜜样品的测定3.4.1甲醇-水为流动相 以甲醇-水（pH=2.8）为流动相，测定固相萃取柱净化后的蜂蜜及蜂蜜加标样品，考察该色谱条件对蜂蜜中克伦特罗残留量测定的影响。 当甲醇：水（pH=2.8）=40：60时，测定结果见下图。从图中可以看出，蜂蜜样品提取后直接进样测定色谱图中，在克伦特罗保留时间处有一个很大的杂质峰，虽然该杂质峰经HLB固相萃取柱净化后消失，但是实际检测时该杂质峰对克伦特罗仍然存在隐患，如果净化不干净，就可能出现假阳性的结果，同时，在该流动相条件下，样品在2~6min内有许多杂质峰，影响克伦特罗与杂质组分之间的分离度。对比HLB与MCX固相萃取柱净化后测定的色谱图，在此色谱条件下，HLB的净化效果要优于MCX固相萃取柱，蜂蜜样品经HLB固相萃取柱净化后杂质峰明显减少，MCX固相萃取柱净化后仍有杂质组分会对克伦特罗的测定产生干扰。[/align][align=center][img=,581,863]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709301411_01_1669358_3.jpg[/img][/align][align=left] 改变流动相比例，测定蜂蜜加标样品经MCX固相萃取柱净化后的样品，改善克伦特罗与杂质间的分离度，实验结果见下图。从图中可以看出，当甲醇：水（pH2.8）=30：70时克伦特罗与杂质组分的分离度较差，不能实现基线分离；当甲醇：水（pH2.8）=20：80时，克伦特罗与杂质组分虽然能实现基线分离，而且附近没有杂峰干扰，但是此时克伦特罗的峰高变小，灵敏度变低，不利于低浓度克伦特罗残留量的检查。[/align][align=center][img=,584,295]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709301413_02_1669358_3.jpg[/img][/align][align=left]3.4.2甲醇-乙酸铵为流动相 以甲醇-乙酸铵（0.02mol/L）为流动相，测定MCX固相萃取柱净化后的蜂蜜加标样品，考察该色谱条件对蜂蜜中克伦特罗残留量测定的影响，实验结果见下图。从图中可以看出，当流动相为甲醇：乙酸铵（0.02mol/L）=60：40时，克伦特罗的测定受到杂质组分的影响很大，克伦特罗出峰时基线较高，而且与杂质组分不能基线分离；当流动相为甲醇：乙酸铵（0.02mol/L）=40：60时，样品中克伦特罗的灵敏度明显降低。[/align][align=center][img=,586,354]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709301414_01_1669358_3.jpg[/img][/align][align=left]3.4.3甲醇-磷酸二氢钠为流动相 以甲醇-磷酸二氢钠（0.02mol/L）为流动相，当甲醇：磷酸二氢钠（0.02mol/L）=40：60时，测定固相萃取柱净化后的蜂蜜及蜂蜜加标样品，考察该色谱条件对蜂蜜中克伦特罗残留量测定的影响，实验结果见下图。从图中可以看出，当甲醇：磷酸二氢钠（0.02mol/L）=40：60时，克伦特罗与样品中的杂质实现基线分离，其保留时间附近的干扰组分较少，灵敏度能够满足残留量检测的要求。同时，在此色谱条件下，蜂蜜加标样品只需经过简单的提取便能直接测定，给高残留值蜂蜜样品的测定提供了便捷的方法(直接提取进样时的加标量远高于采用固相萃取柱净化时的加标量)。结合上述实验，最终本实验选择采用甲醇-磷酸二氢钠（0.02mol/L）为流动相对蜂蜜中克伦特罗残留量进行测定。[/align][align=center][img=,578,594]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709301416_01_1669358_3.jpg[/img][/align][align=center][img=,580,634]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709301417_01_1669358_3.jpg[/img][/align][align=left] 找到合适的流动相后，在该色谱条件下对固相萃取柱的净化效果进行考察。从上图可以看出，乙酸钠缓冲溶液提取后直接进样的色谱图中虽然也能检出克伦特罗，但是其加标量较大（约为固相萃取柱方法的20倍，该实验主要是为了考察杂质对待测物质的干扰），实际样品中克伦特罗的残留值远小于此次的加标量，因此实际样品测定时需要采用固相萃取柱对克伦特罗残留量进行富集、净化和浓缩。对比不同填料固相萃取柱对蜂蜜加标样品净化后测定的色谱图可以发现，以甲醇-磷酸二氢钠（0.02mol/L）为流动相时，CNWBOND SCX固相萃取柱净化后杂质组分的响应值依然很大，SN/T 1924-2007中采用了C18和SCX固相萃取柱串联的方法进行净化，而本实验仅采用了SCX固相萃取柱进行净化，这可能是导致杂质去除不完全的原因之一；采用其他几种固相萃取柱净化后，色谱图中杂质峰的响应值明显降低，其中采用WCX固相萃取柱净化后的色谱图中杂质少，基线比较平整。对比相同填料不同品牌固相萃取柱净化后的色谱图可以发现，两种品牌的固相萃取柱对杂质去除能力难分伯仲。3.5 标准曲线的绘制 准确吸取1.0mL盐酸克伦特罗标准溶液于25mL容量瓶中，用水稀释成浓度为10.0μg/mL的标准储备溶液。吸取适量体积克伦特罗标准储备溶液，用水稀释配成相应浓度的标准工作溶液，并按上述选定的色谱条件进行测定。以样品峰面积Y(mV)对质量浓度X（μg/mL）作图，得到线性回归方程Y=146893X+311，相关系数R2=0.9991，结果表明：克伦特罗含量在0.10~1.00μg/mL之间时，该方法呈现良好的线性关系。标准曲线见下图。[/align][align=center][img=,581,408]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709301418_01_1669358_3.jpg[/img][/align][align=left]3.6 回收率的测定 称取约2g蜂蜜样品，共12份，往每份样品中加入0.50mL浓度为1.0μg/mL的克伦特罗标准工作溶液，样品经乙酸钠缓冲溶液提取后，分别采用上述6种固相萃取柱对样品进行净化，每种固相萃取柱做2平行，并以甲醇-磷酸二氢钠（0.02mol/L）为流动相进行测定，考察固相萃取柱的回收率，实验结果见下表。测定结果表明，6种固相萃取柱均具有较好的回收率，回收率大于85%，其中MCX和HLB固相萃取柱的回收率明显高于其他两种填料的固相萃取柱；实验中所使用的相同填料不同品牌的固相萃取柱回收率结果相近。[/align][align=center][img=,690,126]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709301420_02_1669358_3.jpg[/img][/align][align=left]4、小结 （1）本实验建立了固相萃取-高效液相色谱法测定蜂蜜中克伦特罗的方法，分别以甲醇-水、甲醇-乙酸盐和甲醇-磷酸盐为流动相，考察了流动相对测定结果的影响。实验结果表明，以甲醇-水为流动相时，流动相对pH值的缓冲能力较弱，克伦特罗的保留时间发生漂移；以甲醇-乙酸盐为流动相时，基线噪音较大，方法灵敏度低；以甲醇-磷酸盐为流动相，方法重复性好，灵敏度较高。 （2）实验中参考不同的标准方法对蜂蜜样品进行前处理，考察了前处理方法对样品净化和回收率影响，同时比较了固相萃取柱性能和品牌对蜂蜜中克伦特罗残留量测定的影响。实验结果表明，固相萃取柱性能对蜂蜜中克伦特罗残留量的测定结果有很大的影响，4种不同填料的固相萃取柱中，MCX和HLB固相萃取柱的回收率较高，WCX和SCX固相萃取柱的回收率略低。 （3）实验中考察了WCX和SCX固相萃取柱的回收率较低的原因：WCX固相萃取柱在乙醇淋洗的过程中会有部分克伦特罗被淋洗下来，从而回收率降低；采用SCX固相萃取柱净化时，洗脱液的碱性需要足够强，否则洗脱不完全，但是提高洗脱液的碱性后，杂质也会一同被洗脱下来。 （4）通过此次实验可以发现，流动相条件和固相萃取柱的选择对样品测定具有很大的影响，不同的流动相其洗脱能力不一样，截止波长也会有差别，实验中以甲醇-乙酸铵为流动相时基线噪音明显大于其中两种流动相；同样是MCX净化后的样品，以甲醇-磷酸盐为流动相时测定得到的样品色谱图中杂质要少于其他两种流动相。 （5）液相色谱虽然对克伦特罗具有较高的响应，但是与质谱相比，质谱具有更高的响应，因此对于残留量很低的样品，还是需要用质谱进行验证，液相方法可以作为前期的筛查手段，[/align]

【生活中的仪器分析】食品安全——“菜”米油盐酱醋茶大检测气相色谱法检测大米中杀虫双残留量摘要：使用气相色谱仪检测大米中杀虫双农药残留量，添加浓度5mg/L，回收率为73.2%。样品中未检出杀虫双农药。关键词：大米；气相色谱；杀虫双；农药残留；杀虫双是一种高效、低毒、低残留的有机氮杀虫剂，剂型有25％、30％水剂。本药剂对潜叶蛾和风蝶等害虫有强烈的触杀和胃毒作用，并兼有一定的熏蒸作用和杀卵作用。对人畜毒性中等，对水生生物毒性很小，残毒期达2个月左右。（摘自百度百科）1试验材料、仪器及试剂1 样品：新疆阿克苏市温宿地区大米。2 仪器：气相色谱仪（带火焰光度检测器-硫滤光片），美国Thermo Finigan公司；旋转蒸发仪，EYELA SB-1100（上海爱郎仪器有限公司）；天平（0.01g）（AEL-160型,奥豪斯（上海）有限公司）；3试剂：三氯甲烷、丙酮（天津市化学试剂研究所-色谱淋洗液）；盐酸（北京化工厂-分析纯）；氢氧化钠（天津光复精细化学研究所）；无水硫酸钠（上海试四赫维化工有限公司-分析纯）2 农药标准品配制：农药标准溶液：用移液管准确取一定量杀虫双农药标准品（质量浓度为1000mg/L的供试农药单标），用溶剂稀释，配制20mg/L的标准储备液，贮存在-4℃以下冰箱中；继续稀释后浓度为5mg/L进样。3试样处理：称取大米样品约5.00g于锥形瓶中，加入15mL0.1mol/L的盐酸溶液，振荡提取30min，过滤到分液漏斗中，用0.1mol/L的氢氧化钠调节pH到9，分两次加入15mL的三氯甲烷萃取，剧烈振摇后静置分层（有乳化现象需要高速离心取下层有机相），取三氯甲烷层经无水硫酸钠过滤到浓缩瓶中，旋转蒸发仪浓缩近干，用丙酮定容2.5mL[/s

蜂蜜检测方案——2015版蜂蜜检测专用色谱柱 2015版新版药典的蜂蜜检测项目中，样品处理也是很重要和关键的一环。色谱柱的选择也十分讲究。以下是蜂蜜中寡糖检测的样品处理环节方法和相关仪器设备。（红字为所涉及的仪器） 2015版蜂蜜检测专用色谱柱-蜂蜜寡糖检测专用柱，固相萃取装置样品处理蜂蜜寡糖检测专用柱净化：活化：25mL水，过柱流速1滴/秒上样：2g样品溶于10mL水后，缓慢加到蜂蜜专用柱上淋洗：25mL7%乙醇水，不收集淋洗液洗脱：10mL50%乙醇水，收集洗脱液浓缩：洗脱液于65℃水浴减压浓缩至干复溶：残渣加入30%乙醇1mL，摇匀即得注：1）整个SPE前处理过程都需要用固相萃取装置，抽取真空度以确保流速；2）旋蒸浓缩时推荐用25mL鸡心瓶，防止损失样品；可少量多次添加溶剂复溶；3）活化过程中不能将液面抽干，否则会影响小柱对寡糖的保留效果。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/04/201604281525_591787_3073701_3.jpghttp://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gif

中国是全球第二大原料药生产基地，国内原料药生产企业都面临着许多发展契机，也为药品方法开发和验证带来新的需求，默克密理博作为实验室分析解决方案的领导者理能成为实验室客户最值得信赖的合作伙伴。 默克密理博实验室分析高品质的产品以及关于对药品方法开发和验证应用为相关客户带来新的选择。我们能提供的应用解决方案大大缩短了客户方法开发和验证的时间并不断更新的应用资源及默克化工中国应用实验室的建立为客户保驾护航。在默克密理博张江建立的实验室分析应用分析中心能及时帮助您解决一切分析问题。 现在就立即点击，发现您身边的色谱柱，挑战“柱子”的力量，积极参与色谱测试调查，大奖重磅出击，等您来拿！http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/04/201204231130_362822_2489055_3.gif 所有完整填写，并答对相应题目的用户将进入我们的随机抽奖环节，奖项分别为：一等奖：样品分析分析方法开发壹次 价值1500元 附赠论坛积分100分 1名 二等奖：默克密理博品牌无线鼠标 附赠论坛积分50分 3名三等奖：默克密理博4G超萌兔子移动U盘 附赠论坛积分20分 5名 活动时间：即日起至2012年5月30日2012年6月10日，将在默克分析中心和默克密理博博客上公布最终获奖名单。所有获奖者都会通过Email或电话通知。

【生活中的仪器分析】食品安全——“菜”米油盐酱醋茶大检测气相色谱法检测大米中有机磷农药残留量摘要：使用气相色谱仪检测大米中有机磷类农药残留量，在0.2mg/Kg的添加浓度下平均回收率为62.8-93.4%，变异系数（RSD）为2.3-7.9%。关键词：大米；气相色谱；有机磷；农药残留；1试验材料、仪器及试剂1 样品：新疆阿克苏市温宿地区大米。2 仪器：气相色谱仪（带火焰光度检测器），美国安捷伦科技有限公司；旋转蒸发仪，EYELA SB-1100（上海爱郎仪器有限公司）；天平（0.01g）（AEL-160型,奥豪斯（上海）有限公司）；超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）3试剂：丙酮、二氯甲烷（色谱级淋洗剂，天津光复精细化工研究所）；2 农药标准品配制：单一农药标准溶液：用移液管准确取一定量农药标准品（质量浓度为1000mg/L的供试农药单标），用溶剂稀释，逐一配制20mg/L的标准储备液，贮存在-4℃以下冰箱中；农药混合标准溶液：吸取一定体积的单个农药储备液分别注入同一容量瓶中，用丙酮稀释定容至刻度，浓度为1.0mg/L（添加回收备用）。继续稀释至0.1mg/L进样。3 提取与净化称取20.00g大米于锥形瓶中，加入20mL水和60mL丙酮，放入超声波清洗器中超声20min，取出过滤至分液漏斗中，分两次加入二氯甲烷各25mL萃取，振摇后静置分层，收集二氯甲烷层，加无水硫酸钠除水后旋转蒸发仪浓缩近干，将浓缩好的样品用5.0mL丙酮定容，旋涡振荡后，过0.45µm滤膜，收集滤液于自动进样瓶内，供FPD检测器分析。4 仪器条件PFD检测：进样口：220℃[size

样品名称:安赛蜜 苯甲酸 山梨酸 糖精钠 脱氢乙酸色谱条件：色谱柱：月旭Topsil ® C18，5um ，4.6×250mm月旭Boltimate TM C18 2.7um，4.6×100mm流动相：甲醇 / 20mM乙酸铵溶液=5 / 95，双泵混合柱温：30℃波长：220nm注意事项：不同柱子选择不同流速和不同的进样量http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/08/201608011642_602902_932_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/08/201608011642_602903_932_3.pngl 结论：核壳Boltimate TM C18 2.7um，4.6×100mm色谱柱分离度，峰型都优于普通TOP-C18，并且核壳色谱柱只需要4min就能检测完全，大大缩短了检测时间，对于检测量庞大的一些企业大大提高效率。

Boltimate这个名字取自牙买加百米飞人尤塞恩·博尔特（Usain Bolt）, 这位人类速度极限的象征。而月旭的核壳色谱柱正是在普通的液相色谱仪上实现了到目前为止最快的分离速度。 月旭科技的Boltimate核壳色谱柱的颗粒粒径是2.7μm，它是由1.7μm直径的实心核与0.5μm厚的多孔层所构成的。这种核壳型的颗粒可以提供和sub-2μm颗粒类似的高柱效～200000 p/m和高分离效率，且柱反压只有sub-2μm色谱柱的50%。这样的高柱效、低柱压使得其可以更方便的兼容现有的液相设备，您只需要优化液相仪器的流通管路与流通池，即可使核壳色谱柱在您现有的实验条件下发挥优秀的性能，而无需再购买昂贵的设备。产品亮点：1、快速分离，大幅减少HPLC分析时间并降低溶剂用量；2、可在常规液相色谱仪上使用，不需要超高压液相色谱仪3、已经有6个键合相可供选择, C18、LP-C18、Hilic-SiO2、Phenyl-Hexyl、EXT-C18、EXT-PFP。4、主流色谱填料技术的世界前沿, 国内首家自主研发、自主生产的核壳色谱柱品牌。特点：➢具有亚2μm色谱柱的超高分辨率、高分离度、高柱效的优势，而柱反压只有亚2μm色谱柱的50%不到➢ 超快速分离，极大的减少分析时间，提高分离效率➢与现有任何HPLC/UHPLC液相设备完美兼容➢ 更窄的颗粒分布，色谱柱使用2μm筛板，避免了亚2μm色谱柱极易柱压升高的缺点，对复杂基质的样品仍具有稳定、可靠的高性能，更加耐用➢ 多个键合相可供选择，提供优秀的峰形和优异的重现性➢支持600bar的高压条件下使用file:///C:\Users\Administrator\AppData\Roaming\Tencent\Users\923499426\QQ\WinTemp\RichOle\041HIFR~5`B`4GPR5CF7X`Y.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/05/201605161552_593551_1863087_3.png 由于实心核的存在，以及薄的多孔层，使得样品分子的扩散距离减小，即可以使用更高的流动相流速，极大的提高了分析速度。而相比传统化的全多孔颗粒，Boltimate核壳颗粒具有更窄的粒径分布，从而提供了高柱效、高分离度及低柱压。下图是以检测萘乙酰胺样品为例，对比不同规格普通色谱柱、核壳柱、超高压色谱柱各自的分离效率。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/05/201605161554_593554_1863087_3.png以Naphthalene为结果的理论塔板数和柱压：色谱柱（按照谱图从上至下） 理论塔板数 柱压(bar) 分析时间 Ultimate® XB-C18, 3μm, 2.1×50mm 5600 85 2.0min Ultimate® UHPLC XB-C18, 1.8μm, 2.1×50mm 10500 260 1.8min BoltimateC18, 2.7μm, 2.1×50mm 10100 108 1.5min Boltimate C18, 2.7μm, 2.1×50mm 9500 190 0.8min 从柱效来看，Boltimate C18色谱柱具有和1.8μm 全多孔C18色谱柱相当的柱效，几乎拥有3μm全多孔C18色谱柱的2倍柱效。 从柱压来看，Boltimate C18色谱柱具有相当低的柱压，在使用近2倍流速时，柱压依然低于1.8μm色谱柱的柱压，同时柱效损失不大。所以Boltimate核壳色谱柱可以更好的实现超快速分析，且较低的压力使其可以和大多数色谱仪很好的兼容。Boltmate 系列核壳柱目前已开发出6种不同的键合相:C18 适合一般性的中等极性到弱极性化和物的快速分离。LP-C18 适合极性大的样品，尤其是流动相PH小于2，柱温偏高的色谱条件。Phenyl-Hexyl 适合带苯环的中等极性到弱极性化合物分离。EXT-C18 适合碱性流动相条件。EXT-PFP 适合结构带苯环、极性大的化合物分离。Hilic 正相硅胶柱，可用于含水的反相流动相体系。

作者：温预关 ,王玲芝 ,刘学军 ,陆欣乔 　(广州市脑科医院国家临床药理研究基地 ,广东 广州 510370)摘要：目的 :建立测定人血浆中米氮平浓度的高效液相色谱法。方法 :以美国迪马公司钻石C1 8反相柱 (2 50mm×4 .6mm ,5μm)为色谱柱 ,流动相为甲醇 水 (90∶1 0 ) ,流速为 0 .8mL·min- 1 ,检测波长 2 94nm ,以乙酸乙酯为提取剂。结果 :米氮平高、中、低 (50 0 .0 ,2 50 .0 ,50 .0 μg·L- 1 ) 3个浓度的平均回收率分别为 1 0 0 .2 1 % ,98.47% ,97.0 0 % ,日内、日间差RSD均低于 6 % ;分析方法的定量测定下限为 1 5 .0 μg·L- 1 。线性范围为 2 5 .0～ 1 0 0 0 .0 μg·L- 1 。结论 :该方法灵敏、准确、简单、快速 ,可用于临床血浓监测和药动学研究。谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/07/201207161022_377771_1606903_3.jpg

http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/12/201512181318_578589_2489055_3.png为了更好的服务和支持用户，默克现举行有奖收集色谱柱应用谱图活动，欢迎大家踊跃参与！活动截止时间：2016年3月31日活动细则：此次活动涉及默克所有色谱柱，如Purospher STAR 系列,Chromolith 系列, ZIC HILIC 系列, Lichrospher 系列等， 所提供的色谱图中，需标注各组分名称，并提供相应的数据，如分离度、塔板数、保留时间等。活动参与者，请将您的应用谱图、联系方式同时发送至 sherwin.zhang@merckgroup.com和 dean.duan@merckgroup.com活动奖品：所有提供应用谱图的默克色谱柱的用户，将获得精美礼品一份。在所有提供Purospher STAR系列色谱柱应用的参与者中抽取5名幸运参与者，将获赠默克全球限量珍藏版虚拟实验室乐高玩具一套！