色谱测试

有时候接到客户电话咨询，我现在分离某某化合物分离效果不好了，原来分得挺好的，现在咋就分不了了，是色谱柱污染还是仪器问题呢？遇到这种情况，我们首先对色谱柱进行柱效测试，不同品牌色谱柱对柱效测试的方面略有不同，下面以Dikma色谱柱测柱效为例来说明如何测柱效：分别精密称取下列标准品，溶解在15ml乙腈：水=65：35的溶液中。1、尿嘧啶：0.0015g2、苯甲酸甲酯：30ul3、甲苯：200ul4、萘：0.025g然后，按照以下色谱条件进行HPLC分析色谱柱如图所示规格250 × 4.6 mm流动相乙腈: 水 = 65:35流速1.0 mL/min柱温30 oC检测器UV 254 nm进样量2.0 μL样品1. 尿嘧啶2. 苯甲酸甲酯3. 甲苯4. 萘http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/05/201505211453_546927_2452211_3.png

高效液相色谱仪及色谱柱测试 仪器信息网论坛不缺液相色谱方面的高手，不管是维修方面研发方面还是检测方面的。其中仪器及色谱柱检测，大家都有独到之处，科学之举。 在这我介绍种方法，可能也有很多同仁们用过。在这方法能同时检测液相色谱仪和色谱柱，但检测的只是众多检测项目中比较简单的几种。仪器主要检测检出限、线性、重复性等，色谱柱主要检测分离度、理论塔板数、重复性（和仪器检测相同）等。 下面我们就来具体介绍下。用苯、甲苯、萘测试下高效液相色谱仪及C18色谱柱。实验部分【仪器】高效液相色谱仪（紫外检测器+等度泵+柱温箱+自动进样器+在线脱气机等）超声波振动仪溶剂过滤器【试剂】甲醇：色谱纯超纯水苯、甲苯、萘标准品溶液【色谱条件】检测器：紫外检测器色谱柱：Promosil C18 ( 250 mm X 4.6mm，5μm )流动相：甲醇：水=80:20（V:V）检测波长：254nm流速：1.0mL/min柱温：30℃进样量：20ul【色谱图】 先来张浓度大的，苯、甲苯、萘含量均为1.0 × 10-4g/ml的色谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/09/201509121050_565838_2536753_3.png 效果不错吧，各指标一看就应该能看个差不多吧。浓度大如果看不出好坏，那简单，咱们换个浓度小的，这样各种效果一目了然了。 下面这个是苯、甲苯、萘含量均为5.0 × 10-7g/ml的色谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/09/201509121050_565839_2536753_3.png 再来张重复性（重叠模式）对比的色谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/09/201509121050_565840_2536753_3.png 再来张上下交错模式重复性对比色谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/09/201509121050_565841_2536753_3.png 再来张上下左右交错模式重复性对比色谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/09/201509121051_565842_2536753_3.png 当然浓度大的，重复性色谱图看着效果更好，不信您就来看，这张就是苯、甲苯、萘含量均为1.0 × 10-4g/ml的重复性色谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/09/201509121058_565843_2536753_3.png 这下看明白了吧，效果确实不错吧，各项指标都较理想吧。 下面再来张检出限的色谱图，这个各成分的浓度分别是5.0 × 10-8g/ml：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/09/201509121050_565837_2536753_3.png【结论】 经计算以上各成分的检出限（按2倍噪声计算）大约分别是7.0× 10-9g/ml、4.5× 10-9g/ml、2.5 × 10-9g/ml，线性系数均在0.9999以上，定性重复性均小于0.3%，定量重复性均小于0.5%，分离度也均大于5，色谱柱理论塔板数也均在1万以上，色谱峰较对称，峰形较好。 这就说明该色谱条件适合高效液相色谱仪及常规C18( 250 mm X 4.6mm，5μm )色谱柱测试，测试效果较好。另外可以确定该仪器和该色谱柱测试的这几项内容都没问题，指标都不错。 国标中单用萘标液测试仪器或色谱柱，这样一般也基本能测出仪器及色谱柱的基本性能指标，但却测不出液相重要指标分离度。以上这种方法在国标的基础上又增加了两种成分，分离度指标也可以一块测试。当然也可能有人还会选萘、蒽、茵、菲、芘、苯、甲苯、二甲苯等标准品测试以上项目，也可能会有不错的效果。 以上测试方法我们经常用，效果不错，大家如有这方面测试不防试试。

[img=,690,920]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/08/201908081027400556_1946_2650137_3.jpg!w690x920.jpg[/img]凡请问一下：1、waters色谱柱测试报告里的USP Tangent Efficiency和理论塔板数是一回事吗？2、报告里的结果拖尾因子等结果 是丙酮峰还是苊峰？ 3、报告里没有塔板数限度的要求，通过测试结果如何评价柱效？如何判断该色谱柱是要继续使用还是报废？

不同的色谱柱有着不同的柱效测试报告，这是一份安捷伦色谱柱性能测试报告，在这个报告中明确的表明了测试条件和柱效参数。有几个问题需要讨论一下，请各位盆友给予更多的关注：1：不同的色谱柱性能测试有什么不同，其他的色谱柱性能测试条件怎样？2：性能测试报告的意义何在？3：色谱柱性能测试都需要做哪几部分的内容？具体的试剂都是什么4：新启用的色谱柱，为了延长它的使用寿命，在使用之前该怎样进行预处理？5：对于色谱柱的使用与保养未免也给一些好的建议，谢谢！ http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/04/201504051843_540773_2960432_3.png翻译成中文意思大概是这样的：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/04/201504051843_540774_2960432_3.pngAgilent TC-C18(2)Agilent TC-C18(2)详细介绍对于复杂的天然产物提取物、中药或环境样品，或者任何您需要分析的极性和非极性化合物混合样品，包括强碱性化合物，安捷伦TC-C18(2)都是理想的选择。• 碳载量较低-12%• 适用于极性化合物及以低比例的有机相开始或有机相变化范围大的梯度分离• 适用于多数常用的流动相，包括甲酸、乙酸、三氟乙酸和磷酸盐缓冲液，以及作为有机改性剂的乙腈和甲醇• 在pH 2-8 范围内分离性能优异附：柱效的测试方法http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/04/201504061800_540798_2960432_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/04/201504061800_540799_2960432_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/04/201504061810_540800_2960432_3.png

国产与进口液相色谱仪测试比对报告1.比对目的 选取2010年药典二部及美国药典中典型方法及食品添加剂国标方法对某国产品牌上海伍丰EX1600高效液相色谱仪及其他品牌（以waters仪器为主）液相色谱仪的各项性能进行比较，明确国产仪器优化与改进方向。2.比对依据与原理1. JJG705-2002 液相色谱仪计量检定规程2. EX1600高效液相色谱仪及其他品牌高效液相色谱仪使用说明书3. EX1600高效液相色谱仪系统适用性测试方案及综合改善测试方案4. GB/T 19681—2005食品中苏丹红染料的检测方法--高效液相色谱法5. VensuilAA氨基酸分析方法6. 2010年药典二部及美国药典中双氢青蒿素、可可碱与茶碱、维生素A及阿托伐他汀钙等相关物质的测定方法。7. 需比对的性能指标选取原理：与《JJG705-2002 液相色谱仪计量检定规程》要求直接相关；与仪器关键部件的技术指标直接相关；与仪器测定结果重复性，即仪器稳定性直接相关。8. 样品选取原理：测定结果直接反应仪器的稳定性；属于常用或者经典方法，单标、混标体系均有所涉及；等度和梯度方法均有所涉及（反映梯度误差指标）；与检测器的基本波段（低、中、高波段）均相关的项目（反映全波段检测稳定性）。3.比对内容 高效液相色谱仪对样品的分离与测定结果好坏与仪器的稳定性及色谱柱的柱效相关，现使用同样的色谱柱进行EX1600高效液相色谱仪及其他品牌的色谱仪各项性能比对，就需要了解构成液相色谱的各个系统及整机的稳定性情况。就仪器各个系统的稳定性来讲，按照《液相色谱仪计量检定规程》测试方法，对流量准确度与重复性、噪声与漂移的测定结果能够从仪器方面直接反映输液系统及检测器的运行情况，明确指出这两个核心部件的优化与改进方向。而就整机稳定性来讲，还需要配合标准样品的测试，对其检出限、线性范围和梯度误差及定性定量重复性结果进行比较和评价，作为应用测试指标进一步反映仪器的稳定性好坏。将仪器性能指标与应用测试指标相结合，才能全面、客观地对仪器各项性能的稳定性进行评价与改进。现将主要测试内容列在下表：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/11/201311100229_476241_2369266_3.png 根据以上所列比对项目的比对内容，选择苏丹红ⅠⅡⅢⅣ、双氢青蒿素、阿托伐他汀钙、可可碱与茶碱、维生素A、氨基酸作为衡量输液系统、检测器、整机及软件性能综合指标优劣的标准测试样品，其特有的测定条件及测定结果可以综合反映色谱仪的稳定性，现将其优势测定条件与测定结果反映的综合指标列在下表并具体阐述如下：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/11/201311100231_476242_2369266_3.png 据食品国家标准、药典二部及美国药典中的典型方法，我们选取了近年来与食品、药品质量可控性、有效性及安全性密切相关的六类标准样品，依据其测试结果来衡量高效液相色谱仪各项性能稳定性。 苏丹红作为化工试剂，被不法商家非法添加入调味品中，是近年来食品安全领域的热点问题。苏丹红ⅠⅡⅢⅣ易致癌，是我国明文禁止的非食品添加剂。在相关食品国家标准中对其含量有具体的限量值，鉴于其实际测定中响应值低，我们对苏丹红的检测结果可直接体现高效液相色谱仪的噪声、漂移、检出限及线性范围（下限）等指标优劣。同时，苏丹红ⅠⅡⅢⅣ作为四元混标体系，国标方法规定苏丹红Ⅰ检测波长为478nm，苏丹红ⅡⅢⅣ检测波长为520nm，在检测过程中须转换波长，测定结果能够直接反映高波段、波长转换时的噪声与检出限；分离条件为梯度洗脱，可反映输液系统的梯度误差及双泵在梯度洗脱的稳定性。 双氢青蒿素作为单标体系，色谱测定条件为检测波长210nm，测定结果可直接反映检测器在低波段的稳定性及单泵运行情况。 阿伐他汀钙液相色谱检测波长为244nm，位于检测器优势波段的相对低波长处，流动相中含有高比例、洗脱能力较强的试剂四氢呋喃，可直接反映检测器优势波段噪声及单泵稳定性。 氨基酸混标体系共包含17种氨基酸组分，为复杂难分离体系，检测波长为254nm，测定时为梯度洗脱，测定结果可直接体现检测器优势波中段噪声及梯度洗脱时双泵运行稳定性。 可可碱与茶碱的二元混标体系，测定时检测波长为272nm，位于检测器优势波段的相对高波长处，可进行等度分离，测定结果直接反映了检测器优势波段稳定性及双泵在等度洗脱时的稳定性。 维生素A的高效液相色谱测定体系为正相色谱，流动相为正己烷：异丙醇[font=Tim