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色谱反相

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色谱反相相关的论坛

  • 关于反相气相色谱

    [color=#444444]我想用反相[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]测溶剂与溶质的相互作用参数。[/color][color=#444444]如果我的溶剂沸点大于250度,那么进样温度是不是要大于250度 但是我色谱柱种的溶质在250就热解了, 那还能用反相[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]吗??[/color]

  • 正相色谱柱与反相色谱柱的区别

    正相色谱柱与反相色谱柱的区别本质上是填料(固定相)的不同,正相色谱柱填料极性强,洗脱顺序由弱到强;反相色谱柱填料极性弱,洗脱顺序由强到弱。以下是详细说明: 1、正相色谱 正相色谱用的固定相通常为硅胶(Silica)以及其他具有极性官能团胺基团,如(NH2,APS)和氰基团(CN,CPS)的键合相填料。由于硅胶表面的硅羟基(SiOH)或其他极性基团极性较强,因此,分离的次序是依据样品中各组分的极性大小,即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低,如正已烷(Hexane),氯仿(Chloroform),二氯甲烷(Methylene Chloride)等。 2、反向色谱 反向色谱用的填料常是以硅胶为基质,表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。反向色谱所使用的流动相极性较强,通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出,而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。常用的反向填料有:C18(ODS)、C8(MOS)、C4(Butyl)、C6H5(Phenyl)等。

  • 正相和反相色谱柱的区别

    在正相色谱中,一般采用极性键合固定相,硅胶表面键合的是极性的有机基团,键合相的名称由键合上去的基团而定。最常用的有氰基(-CN)、氨基(-NH2)、二醇基(DIOL)键合相。流动相一般用比键合相极性小的非极性或弱极性有机溶剂,如烃类溶剂,或其中加入一定量的极性溶剂(如氯仿、醇、乙腈等),以调节流动相的洗脱强度。通常用于分离极性化合物。一般认为正相色谱的分离机制属于分配色谱。组分的分配比K值,随其极性的增加而增大,但随流动相中极性调节剂的极性增大(或浓度增大)而降低。同时,极性键合相的极性越大,组分的保留值越大。该法主要用于分离异构体,极性不同的化合物,特别是用来分离不同类型的化合物。  在反相色谱中,一般采用非极性键合固定相,如硅胶-C18H37(简称ODS或C18)硅胶-苯基等,用强极性的溶剂为流动相,如甲醇/水,乙腈/水,水和无机盐的缓冲液等。  正相色谱和反相色谱的区别:  本质上是填料(固定相)的不同,正相色谱柱填料极性强,洗脱顺序由弱到强 反相色谱柱填料极性弱,洗脱顺序由强到弱。  1、正相色谱  正相色谱用的固定相通常为硅胶(Silica)以及其他具有极性官能团胺基团,如(NH2,APS)和氰基团(CN,CPS)的键合相填料。由于硅胶表面的硅羟基(SiOH)或其他极性基团极性较强,因此,分离的次序是依据样品中各组分的极性大小,即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低,如正已烷(Hexane),氯仿(Chloroform),二氯甲烷(Methylene Chloride)等。  2、反相色谱  反相色谱用的填料常是以硅胶为基质,表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。反相色谱所使用的流动相极性较强,通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出,而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。  常用的反相填料有:C18(ODS)、C8(MOS)、C4(Butyl)、C6H5(Phenyl)等。

  • 关于反相色谱原理

    用反相色谱分离无机物时,在流动相中加入极性大的无机盐使流动相极性增大,会对样品中的无机物的保留行为有什么影响呢?

  • 正相色谱柱与反相色谱柱的区别,分享给像我这样的新手,呵呵

    正相色谱柱与反相色谱柱的区别本质上是填料(固定相)的不同,正相色谱柱填料极性强,洗脱顺序由弱到强;反相色谱柱填料极性弱,洗脱顺序由强到弱。以下是详细说明:1、正相色谱正相色谱用的固定相通常为硅胶(Silica)以及其他具有极性官能团胺基团,如(NH2,APS)和氰基团(CN,CPS)的键合相填料。由于硅胶表面的硅羟基(SiOH)或其他极性基团极性较强,因此,分离的次序是依据样品中各组分的极性大小,即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低,如正已烷(Hexane),氯仿(Chloroform),二氯甲烷(Methylene Chloride)等。2、反向色谱反向色谱用的填料常是以硅胶为基质,表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。反向色谱所使用的流动相极性较强,通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出,而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。常用的反向填料有:C18(ODS)、C8(MOS)、C4(Butyl)、C6H5(Phenyl)等

  • 【转帖】反相色谱柱的维护

    反相色谱分离原理及适用对象 反相色谱是依据因溶质疏水性的不同而产生的溶质在流动相与固定相之间分配系数的差异而分离的。它主要适用于分析大多数的有机化合物,如多肽、蛋白质、核酸、糖缀合物。样品一般应溶于水相体系中在反相色谱中使用的柱填料主要是键合相硅胶,含有不同的有机覆盖层,如烷基(C18、C8)、苯基、氰基等。

  • 【分享】反反相色谱与HILIC柱的比较 文章——两种分离模式的比较:亲水相互作用色谱HILIC 与反反相色谱ANP

    【分享】反反相色谱与HILIC柱的比较 文章——两种分离模式的比较:亲水相互作用色谱HILIC 与反反相色谱ANP

    好不容易翻译过来的,如果有错,请大家原谅。两种分离模式的比较:亲水相互作用色谱HILIC 与反反相色谱ANPJoseph Pesek,Maria T. MatyskaDepartment of Chemistry, San Jose State University, San Jose, CaliforniaPlease direct correspondence to Joseph Pesek at pesek@sjsu.eduhttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/04/201104121803_288425_1604317_3.jpg在文献(1)及其他很多文献中,经常可以看到两种相似的色谱分离机理的色谱柱,一种是亲水相互作用色谱(hyd rophilic interaction liquid chromatography,HILIC),另外一种是水相正相色谱(aqueous normal phase,ANP,也称反反相色谱)。但是,事实上这两种色谱柱在保留模式上是不一样的。 本文旨在对HILIC 和ANP 色谱机理做一个准确的定义并对何时使用哪种色谱柱做一个明确的指导。实验部分实验所使用的色谱柱为UDC Cholesterol(75mm×4.6mm)及Bidentate C18(BD C18,150mm×4.6 mm 或20 mm×2.0 mm)来自于MicroSolv Technology (Eatontown,New Jersey)。流动相中的乙腈来自于B&J(Muskegon,Michigan),水使用来自Milli-Q 仪器(Millipore,Bedford,Massachusetts)。甲酸购自Spectrum Chemical(Gardena,California)。HPLC为安捷伦1050 型,配有自动进样器和二极管阵列检测器(Wilmington,Delaware)。样品浓度范围为0.1-1mg/mL,进样量为1-5μL。反反相实验中的流动相含有0.1%甲酸。结果与讨论HILIC: 亲水色谱是专为保留和分离极性-离子型化合物所设计的一类色谱柱。 在反相色谱中极性-离子型化合物是在死体积附近被洗脱的,即不在反相柱上保留,所以对此类物质的分析是很困难的。在反相色谱上开发方法时,很重要的需求就是物质要在固定相上有保留,并且防止/减少硅胶表面硅羟基对化合物的吸附。为了使极性-离子型化合物能在反相柱上保留,我们经常会对化合物进行衍生(2)或使用离子对试剂(3)。在前一种方法中需要将极性-离子型化合物化学衍生为疏水性物质,而在后一种方法中则在流动相中加入带相反电荷的物质,使极性-离子型化合物变为中性物质。这两种技术不但比较繁琐和费时,特别是离子对技术会导致反相色谱不能与质谱(MS)及光散射检测联用,对实验造成很大限制。最近发展出来的硅胶制造技术可以使得固定相更适合极性化合物的保留(1)。硅羟基能在一定流动相条件下对极性化合物产生保留。另外一种方法就是对硅胶表面进行化学修饰,如图1 所示。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/04/201104121805_288426_1604317_3.jpg如果R 基团具有极性,如氰基(-CN),氨基(-NH2) 或二醇(-CH(OH)-CH2-OH),这样固定相就具有保留亲水化合物的能力。使用前一种典型的HILIC 柱对极性化合物的保留性质如图2a 所示。 在低有机相比例(高水相比例)时,亲水性化合物没有保留,因为亲水化合物更倾向于留在流动相中。当流动相的非极性最够强时(足够的有机相比例),极性化合物才会有保留。但是,典型的疏水化合物在HILIC 柱子上却没有保留。因此HILIC 柱可以分析一些极性化合物的混合样,但是当样品中既有极性化合物,又有非极性化合物时,极性化合物就会因没有保留而分不开。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/04/201104121806_288427_1604317_3.jpg一个用HILIC 柱子分离极性化合物的例子如图2c 所示(4)。显然这两种极性化合物在普通C18 柱上是没有保留的(Figure 2b)。如果分析对象只有极性化合物HILIC 柱子是很合适的选择,就像我们在图2b 和2c 中看到的一样。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/04/201104121807_288428_1604317_3.jpgANP,反反相: 尽管HILIC 柱通常能解决极性-离子型化合物的保留问题,但是却不能满足样品中同时有亲水和疏水物质存在的分析要求。事实上,反相柱也一样不能解决亲水、疏水同时存在的情况。但是,反反相(ANP)的柱子就可以解决亲水、疏水物质同时分离的难题,使色谱工作者不至于在反相与HILIC 柱之间做二选一的选择。“水相正相色谱,反反相”反映了这种柱子具有两种分离机制,这个名字说明反反相(ANP)具有流动相中含水的性质(反相分离机理),同时也具有正相色谱的保留机理(在流动相极性更弱情况下保留增加)。HILIC 柱只提供类似于正相的效果,单没有反相色谱的功能。事实上,ANP 的保留机理与反相与HILIC 有很大差异,接下来的章节就ANP 的分离效果进行论述。ANP 1: 图3a 展示了两种物质在ANP 柱上的保留图(一个在反相上有保留,一个在正相上有保留)。在此例中,两种保留机理显示的很清楚,并且区域是两种化合物都有保留的。在这种情况下,只要改变流动相就可以在反相色谱与正相色谱间进行转换。流动相中水的比例高,疏水物质被保留,而亲水物质不保留;流动相中有机溶剂比例高,亲水物质被保留,而疏水物质不保留。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/04/201104121808_288429_1604317_3.jpg图3b 显示了3 种化合物在高水相比例中的分离(反相机理)。在这个例子里,ANP 柱的分离行为就如同一根普通的反相柱。ANP 2: 图4a 显示了ANP 柱从两种物质得到的保留图的另外一种性质,在这种情况下,流动相的组成使得两类化合物都有很强的保留能力,这样极性和非极性化合物就可以同时在ANP 柱上实现分离。另外一种操作就是我们可以在分析亲水和疏水化合物时使用梯度洗脱的方法。与HILIC 柱相比(只有极性化合物在高有机相情况下保留)或者ANP1 情况(化合物的保留取决于有机相比例)ANP2 则提供了独特的分离能力,这种分离能力在商品化柱子中是很少见的。图4b 显示了在ANP2 洗脱模式下分离混合物的例子,两个化合物,一个是极性的(甲福明二甲双胍,Metformin),另外一个是非极性的(格列本脲,Glyburide)在Si-H 基础上的C18柱上的分离。在上图中流动相为50:50(乙腈:水),反相机理起主要作用,格列本脲的保留比极性化合物甲福明二甲双胍更强。中间的图是流动相比例为80:20(乙腈:水),正相机理强于反正机理,甲福明二甲双胍在格列本脲之后被洗脱(使用LCMS 确认)。当乙腈比例继续提高到85%,正相机理就会起主要作用,强极性的甲福明二甲双胍保留时间会比格列本脲长更多。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/04/201104121810_288430_1604317_3.jpgANP 3: 第三种分离模式如图5 所示,分析物为两性物质,这类物质多为大分子物质,而且同时含有一个/多个疏水及亲水基团,例如一些多肽或蛋白。在这种情况下,色谱工作者可以根据混合物中分析物的性质选择使用反相还是ANP 模式来进行分离。这一非同一般的能力为实验条件提供了很大的改变空间。图5b 提供的是一个化合物在不同流动相组成比例条件下按反相和正相机理进行保留的结果。这一系列色谱图的结果和图5a 中所预示的结果是一致的。与预期一致的是,当乙腈比例增加时,保留时间由一个最小值,这个最小值就是保留机理从反相变为ANP 的临近点。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/04/201104121811_288431_1604317_3.jpg具有ANP 保留性质的色谱柱: 最近,已经有使用Si-H 表面的固定相色谱柱开始使用(MicroSolv 公司的TYPE-C Silica 柱),这种色谱柱显示出具有我们之前所论述的ANP 性质和分离能力,如图3b,4b 和5b 所示,也同时被文献(5,6)所报道。TYPE-C Silica 色谱柱固定相表面的组成与普通色谱柱的差异如图6 所示(Si-H 键的覆盖率为95%)。目前,与HILIC 柱一样,反反相的机理还不是完全清楚。TYPE-C Silica 这种Si-H 型固定相还具有其他优异性质:可以不需要从流动相中完全去除水就可以进行正

  • 【转帖】反相色谱应用

    一篇反相色谱应用文献[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=57692]反相色谱应用[/url]

  • 【求助】色谱柱反相能力的判断

    总是听人说,一个色谱柱的反相能力很强,或不强。但是如何判断色谱柱反相能力的强弱呢?有什么标准吗?[em0804]差别肯定是有的,比如采用不同的有机溶剂的比例来进行冲洗的时候,可以看出来。但是有什么[color=#DC143C][size=4][font=黑体]标准[/font][/size][/color]吗?

  • 【转帖】反相色谱法简介

    反相液相色谱柱效高、分离能力强、保留机理清楚,是液相色谱分离模式中使用最为广泛的一种,对于生物大分子、蛋白质及酶的分离分析,反相液相色谱正受到越来越多的关.反相色语法是以表面非极性载体为固定相,面以比固定相极性强的溶剂为流动相的—种液相色谱分离模式.反相色谱固定相大多是硅胶表面键合疏水基团,基于样品中的不同组分和疏水基团之间疏水作用的不同而分离.在生物大分子分离中,多采用离子强度较低的酸件水溶液,添加一定量乙腈、异内醇或甲醇等与水互溶的有机溶剂作流动相.普通的反相色谱固定相和孔径大于300Å 的硅胶键合烷基固定相应用较为普遍,聚合物基质的反相色谱固定相也有较多应用. 反相色谱中样品的保留值主要由固定相比表面积、键合相种类和浓度决定,保留值通常随链长增长或键合相的疏水性增强而增大,对于非极性化合物通常遵循以下规则:(弱)非键合硅胶 氰基 C1(TMS) C3 C4 苯基 C8 ≈ C18(强).溶质保留值与固定相表面积成正比,普通载体(80Å )的表面积约为250m2/g,而300Å 孔径载体的比表面积约为60m2/g。当其他条件相同时,溶质在300Å 孔径(低表面积)色谱柱上的保留值大约为80Å 孔径色谱柱上保留值的1/4(60:250),小孔隙柱如高保留的C18柱或石墨碳柱有利于强亲水性样品洗脱.样品的保留值也可以通过改变流动相组成或溶剂强度来调整,溶剂强度取决于有机溶剂的性质和其在流动相中的浓度.在反相色谱中,采用高溶剂强度、低极性的流动相时可获得较低保留值.固定相的不同也可以导致选择性发生变化,氰基、苯基、C8、C18等柱的选择性有很大差异,一般应优先考虑C8、C18柱,然后是氰基柱,再次是苯基柱. 反相条件下,大多数蛋白质由于低PH、有机溶剂存在、温度高于室温和疏水键合相等综合原因发生变性,这些化合物可能以两种或两种以上独立或动态平衡的形式存在,它们通过色谱柱的保留速度不同,导致谱峰展宽、变形、甚至出现单一蛋白有多个峰的现象,部分变性也易使蛋白在柱上聚集,造成被洗脱蛋白的回收率低和鬼峰.反相色谱固定相表面烷基链长度对蛋白质的反相保留和蛋白质的活性回收有很大差异,烷基链越长(C8、C22、C30),固定相疏水性越强,为使蛋白质等生物分子洗脱,流动相合机溶剂的含量较高,疏水性过强,会导致生物分子的不可逆吸附和生物活性损失,因此短链烷基固定相(C4、C8、苯基等)在生物大分子分离中表现出优势。对多数小蛋白,在低pH乙腈/水梯度下,用C3~C8色谱柱分离,使蛋白完全展开并避免聚集或沉淀,能够得到理想的分离结果. 在低pH流动相条件下进行分离,如(0.1% TFA适合于大多数样品,10~25mmol/L磷酸对疏水性强的蛋白质更有利;以乙腈作有机溶剂,丙醇可能对疏水性强的蛋白质有利;柱温50~80℃;将样品溶于6mol/L尿素或盐酸胍中(只可在室温)进行预处理;用疏水性更强的键合相(长链与短链烷基键合相);加两性表面活件剂分离大分子和疏水性强的蛋白质等实验条件有利于蛋白质样品完全变性或尽可能降低变性。

  • 【求助】请教:反相色谱法分离?

    我在看《天然药物化学》吴立军主编的第五版时出现如下疑问:蒽醌苷类使用硅胶反相色谱法分离,为什么?蒽醌苷类本身极性就比较大,为什么还要用反相?黄酮类中异黄酮、二氢黄酮醇、二氢黄酮以及高度甲基化的黄酮及黄酮醇类用硅胶分离,这个没问题,但它接着说加水使硅胶去活化去用于分离极性较大的化合物,难道直接用硅胶吸附色谱就不行吗?

  • 【求助】反相色谱条件

    分析复杂组分中的酸性成分,和酯类物质,能否在反相液相色谱里一次都出来??有什么要注意的??

  • 有用过反相薄层色谱的么?

    我们的两个样品在反相柱上可以分开。但用普通板点板时却在同一点分不开,已经试过很多种溶剂配比了。请问各位大侠有用过反相薄层色谱的么?(可能是个很蠢的问题,大家别见怪!)

  • 反相离子对色谱

    指用适当的反离子与被测离子形成具有一定疏水性的离子对化合物后,采用反相高效液相色谱体系分离所形成的离子对化合物的方法。

  • 【原创】液相色谱之反相色谱之偶理解

    【原创】液相色谱之反相色谱之偶理解

    下面讲下本人对反相色谱分离过程的理解,thanks,刚画的图,粗糙点,将就用,哈哈。有看法的朋友请多反馈哦内容主要讲了几个过程:1,流动相流过色谱柱 2,样品被吸附分离 3,用强溶剂冲洗色谱柱再生过程[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/06/201006120932_223922_1635365_3.jpg[/img]

  • 【求助】反相色谱柱流动相的问题!

    1、反相色谱柱的流动相,可以是正己烷/异丙醇吗?流动相的比例组成中,异丙醇的比例可以高于正己烷吗?2、高效液相手性色谱柱的流动相,可以用异丙醇/正己烷吗?或者甲醇/正己烷吗?或者是其他的醇/正己烷吗?

  • 丙酮能否作为反相色谱的流动相?

    反相色谱常用的有机相是甲醇和乙腈,最近看到一个标准,色谱柱:C18,流动相:乙腈:丙酮=80:20%,有点担心色谱柱。大家讨论下丙酮能不能用到反相色谱呢?

  • 【我们不一YOUNG】+什么是反相色谱?

    [color=#333333][font=宋体][back=white]反相高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]是由非极性固定相和极性流动相所组成的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]体系,它正好与由极性固定相和弱极性流动相所组成的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]体系(正相色谱)相反。[/back][/font][font='Times New Roman',serif][back=white]RP-HPLC[/back][/font][font=宋体][back=white]的典型的固定相是十八烷基键合硅胶,典型的流动相是甲醇和乙腈。[/back][/font][font='Times New Roman',serif][back=white]RP-HPLC[/back][/font][font=宋体][back=white]是当今[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]的最主要的分离模式,几乎可用于所有能溶于极性或弱极性溶剂中的有机物的分离。[/back][/font][font=宋体][back=white]反相色谱法适于分离非极性、极性或离子型化合物,大部分的分析任务皆由反相色谱法完成。[/back][/font][font=宋体][back=white]反相高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]是化学键合相色谱法的一种。化学键合相色谱法是由液液色谱法发展起来的,是为了解决在分离过程中,机械吸附在载体上的固体液的流失问题而发展出来的一种新方法。键合相色谱法通过将不同的有机官能团通过化学反应共价键合到硅胶载体表面的游离烃基上,而生成化学键合固定相,化学键合固定相对各种极性溶剂都有良好的化学稳定性和热稳定性。由它制备的色谱主柱效高、使用寿命长、重现性好,几乎对各种类型的有机化合物都呈现良好的选择性,并可用于梯度洗脱操作,消除了分配色谱法的缺点。[/back][/font][font=宋体][back=white]在反相键合相色谱法中使用的是非极性键合固定相。它是将全多孔(或薄壳)微粒硅胶载体,经酸活化处理后与含烃基链[/back][/font][font='Times New Roman',serif][back=white](C4[/back][/font][font=宋体][back=white]、[/back][/font][font='Times New Roman',serif][back=white]C8[/back][/font][font=宋体][back=white]、[/back][/font][font='Times New Roman',serif][back=white]C18)[/back][/font][font=宋体][back=white]或苯基的硅烷化试剂反应,生成表面具有烷基或苯基的非极性固定相。如共价结合到载体上的直链碳氢化合物正辛基等。关于反相色谱的分离机理,吸附色谱的作用机制认为溶质在固定相上的保留主要是疏水作用,在高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]中又被称为疏溶剂作用。根据疏溶剂理论,当溶质分子进入极性流动相后,即占据流动相中相应的空间,而排挤一部分溶剂分子。当溶质分子被流动相推动与固定相接触时,溶质分子的非极性部分或非极性因子会将非极性固定相上附着的溶剂膜排挤开,而直接与非极性固定相上的烷基官能团相结合(吸附)形成缔合络合物,构成单分子吸附层。这种疏溶剂的吸附作用是可逆的,当流动相极性减少时,这种疏溶剂斥力下降,会发生解缔,并将溶质分子解放而被洗脱下来。[/back][/font][/color]

  • 如何选择一款适合自己需要的反相色谱柱

    反相色谱柱采用全覆盖的键合硅胶填料,因此具有优异的稳定性,均匀的涂层确保了固定相具有高选择性和高效率的分离特点。下面分享两点如何选择反相色谱柱的方法:  1.反相色谱柱的柱子的PH值使用范围  反相色谱柱优点是固定相稳定,应用广泛,可使用溶剂。但硅胶为基质的填料,使用时一定要注意流动相的PH范围。一般的C18柱PH值范围都在2-8,流动相的PH值小于2时,会导致键合相的水解;当PH值于7时硅胶易溶解;经常使用缓冲液固定相要降解。一旦发生上述情况,色谱柱人口处会塌陷。同样填料各种不同牌号的色谱柱不尽相同。如果流动相PH较高或经常使用缓冲液时,建议选择PH范围大的柱子,例如戴安公司的Acclaim柱PH2-9或Zorbax的PH2-11.5的柱子。  2.反相色谱柱填料的端基封尾(或称封口)  把填料的残余硅羟基采用封口技术进行端基封尾,可改善对极性化合物的吸附或拖尾;含碳量增高了,有利于不易保留化合物的分离;填料稳定性好了,组分的保留时间重现性就好。如果待分析的样品属酸性或碱性的化合物,最好选用填料经端基封尾的色谱柱。

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