铵校准蛋白定仪

请教各位大家谁有FOSS2300蛋白测定仪 自校准方法？检定校准机器测定蛋白质含量的准确性怎么样，用什么方法做？

影响凯氏定氮法测定粗蛋白准确性应注意的细节问题摘 要 阐述了影响凯氏定氮法测定粗蛋白准确性应注意的一些细节问题，并进行了相关分析，且提出了相应的解决办法。关键词 凯氏定氮法；粗蛋白；测定；准确性；问题随着饲料行业的飞速发展，饲料原料及其饲料产品的价格也居高不下。而粗蛋白的检测是评定饲料原料及其产品的重要指标之一，目前常用的为凯氏定氮法，即国家颁布的《饲料中粗蛋白的测定方法》(GB1996-6432)。但是该方法也存在着测定过成较复杂、费时等缺陷，测定时除严格按照规定程序操作外，还需要一定的实验技巧和实践经验。因此有很多饲料企业在实际操作过程中总是出现各种问题，导致检测结果异常而不知如何去分析。下面，笔者以GB/T6432—1994为准，针对影响凯氏定氮对测定结果标准性应注意的细节问题和大家共同探讨。1 试剂的配制粗蛋白测定中所用的化学药品如浓硫酸、盐酸、氢氧化钠、硼酸、硫酸铜、硫酸钾(硫酸钠)、硫酸铵、蔗糖等均为化学纯，标定盐酸标准溶液用的无水碳酸钠为基准试剂。在配制试剂前一定要用PH试纸或酸度计检测一下蒸馏水是否为中性，所用的烧杯、试剂瓶等配液设备清洗干净。1.1 盐酸标准溶液的配制配制的盐酸标准溶液尽量为低浓度，一般C(HCl)=0.02～0.05mol·L-1。低浓度虽然用量大，但可减少操作误差和读数误差。配制盐酸标准溶液一定要严格按照标准操作进行，基准无水碳酸钠已定于270～300℃灼烧至恒重，称准至0.0001g，做4～6个平行样，去掉最高值和最低值后取平均值，同时还要做空白试验。盐酸标准溶液的配制量尽量不要太多、使用时间太长，防止水分蒸发和盐酸挥发而影响其浓度的准确性。1.2 其他试剂的配制400g·L-1氢氧化钠溶液、20g·L-1硼酸溶液、混合指示剂(1g·L-1甲基红乙醇溶液与5g·L-1溴甲酚绿乙醇溶液等体积混合)等主要是在称量时要做到快、准、稳，再就是防止使用时间太长，特别是混合指示剂不要超过3个月。

“不同饱和度硫酸铵沉淀中的蛋白浓度测定结果表明血红蛋白主要集中于50％和60％饱和度的硫酸铵沉淀中，杂蛋白主要集中在10％～40％饱和度的硫酸铵沉淀中。”这是文献中的原话，我想知道怎么知道哪部分是杂蛋白呢？怎么分辨哪部分的沉淀是自己的目标蛋白，哪部分的沉淀是杂蛋白呀[img]https://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09509.gif[/img]

本文引用自cheney《蛋白胨和胰蛋白胨简介》蛋白胨是将肉、酪素或明胶用酸或蛋白酶水解后干燥而成的外观呈淡黄色的粉剂，具有肉香的特殊气息。蛋白质经酸、碱或蛋白酶分解后也可形成蛋白胨。蛋白胨富含有机氮化合物，也含有一些维生素和糖类。它可以作为微生物培养基的主要原料，在抗生素、医药工业、发酵工业、生化制品及微生物学科研等领域中的用量均很大。不同的生物体需要特定的氨基酸和多肽，因此存在着各种蛋白胨，一般来说，用于蛋白胨生产的蛋白包括动物蛋白（酪蛋白、肉类）和植物蛋白（豆类）等两种。能为微生物提供C源、N源、生长因子等营养物质。因此，蛋白胨从来源上可分为动物性蛋白胨和植物性蛋白胨。胰胨、肉胨、骨胨等都是动物性蛋白胨，而大豆蛋白胨等则是植物性蛋白胨。动物性来源的蛋白胨还有：蚕蛹蛋白胨、血液蛋白胨等。 　　不同来源的蛋白质和不同的水解条件，其水解物中组成可千差万别。所以胨往往是一个复杂的多肽混合物。可溶于水，过热不凝固，在饱和硫酸铵中不发生沉淀但可为蛋白质沉淀剂所沉淀。可用作微生物和动物细胞培养基、特种功能性食品和化妆品的配料，也有用作啤酒等产品的稳定剂。胰蛋白胨，又称胰酪蛋白胨（Casein Tryptone）、胰酶消化酪蛋白胨（Pancreatic digest of casein），是一种优质蛋白胨，是以新鲜牛肉和牛骨经胰酶消化，浓缩干燥而成的浅黄色粉末。具有色浅、易溶、透明、无沉淀等良好的物理性状。含有丰富的氮源、氨基酸等，可配制各种微生物培养基，用于细菌的培养、分离、增殖、鉴定，以及无菌试验培养基、厌氧菌培养基等细菌生化特性试验用培养基的配置。胰蛋白胨还广泛应用于高品质的抗生素、维生素、医药工业，氨基酸、有机酸、酶制剂、黄原胶等发酵工业，生化制品及微生物学科研等领域中的用量均很大，临床用于抗炎消肿，工业上用于皮革制造，生丝处理，食品加工。在国际市场上，胰蛋白胨也属于货紧价昂的短线品种之一。 　　胰酪蛋白胨质量标准及其检验标准： 　　常规各项理化指标： 　　1. 澄清度（磷酸盐、碱性沉淀）：无沉淀、澄清 　　2. 2%水溶液：透明 　　3. 酸碱度：6－7 　　4. 氨基氮：≥3% 　　5. 色氨酸：≥0.8% 　　6. 胨含量：≥80% 　　7. 总氮：≥13% 　　8. 水份：≤5% 　　9. 灰份：≤6% 　　10. 氯化钠：≤0.2%胰蛋白胨特指用胰蛋白酶酶解酪蛋白生成的蛋白胨产物，与一般蛋白胨的区别在于酶解工艺处理上，属于水解度更高、胨分子量更小更均衡的蛋白胨。

测定粗蛋白为什么要乘以硫酸铵的系数？

测蛋白时，是凯氏定氮法准确，还是杜马斯法准确？

蛋白质分析仪的校准

新技术有助于开发更好的药物2013年07月06日 来源： 中国科技网 作者： 陈丹 科技日报讯 据物理学家组织网7月5日（北京时间）报道，瑞典卡罗林斯卡医学院的研究人员开发出一种方法，首次能够直接测量药物抵达其位于细胞中的目标蛋白的效果。《科学》杂志上描述的这项新技术，对于开发新的、改良型的原料药将是一个重大贡献。 大多数药物都是通过与一种或多种蛋白质结合并影响其功能来发挥效力的，但药物开发也因此面临两个常见问题：认定正确的目标蛋白，并设计能够有效地找出和绑定它们的药物分子。此前没有任何一种手段可用于直接测量药物分子定位和绑定其靶蛋白的效率，这使得药物开发过程的很多阶段都存在一定程度的不确定性。在某些情况下，候选药物在人体临床试验中没有达到预期效果，经证实正是由于药物分子没有与正确的蛋白质结合造成的。 而卡罗林斯卡医学院研究人员利用靶蛋白与药物分子结合时通常会变得稳定的观念，开发出了这个被称为CETSA（细胞热转移分析）的新技术。他们认为，这项技术可作为药物开发过程中一个重要的控制阶段，也可作为对其他方法的一个补充。“我们已经证明，该方法适用于多种靶蛋白，使我们能够直接测量药物分子是否抵达了其位于细胞或动物模型中的目标。”该医学院医学生物化学与生物物理学系首席研究员帕尔·诺德隆德说，“我们相信，CETSA技术最终将帮助提高许多药物的效率，并有助于开发更好的药物分子和更有效的治疗方案。” 研究人员还对可能导致细胞耐药性的工序进行了仔细检查，并表示，这一技术能够确定现有药物是否适合个别患者，因此其具有应用于个性化治疗的潜在价值。 “我们认为，该方法可以为癌症治疗提供一个重要的诊断工具，比如，从原则上来说，CETSA技术让我们能够确定哪种药物针对肿瘤中的蛋白质最有效，临床医生也可以在早期治疗阶段确定肿瘤是否已经具备了某种抵抗力、哪种治疗方案对病人更合适。”诺德隆德的同事丹尼尔·马丁内兹·莫利纳说，他带领的团队正在开展一个旨在将CETSA技术用于病患研究的项目。（记者陈丹） 总编辑圈点 体温可以测量，骨密度可以测量，就连药物绑定靶蛋白的效果也可以直接测量，让人不得不慨叹医学技术发展的速度之快。文中提到的细胞热转移分析技术，就好比狙击手的瞄准镜，能帮助狙击手调整位置以便更准确地击中目标。这样一来，不仅可以更好地提高药效，还尽可能地减少副作用，其实际应用价值非同一般。那种“杀敌一千，自损八百”的诊疗方法或将成为过去，那些原本被认为的绝症或将“绝”处逢生。 《科技日报》（2013-07-06 一版）

[b][font=宋体]前言[/font][/b][font=宋体]在蛋白质研究领域，稳定细胞系的应用已成为生产高质量结构生物学蛋白质的关键手段。随着技术的不断进步，稳定细胞系的生成与筛选方法得到了显著改进，从而推动了蛋白质生产的高效化与精准化。[/font][font=Calibri] [/font][b][font=宋体]细胞系的建立和应用[/font][font=宋体][font=Calibri]HEK293[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]CHO[/font][font=宋体]细胞系[/font][/font][/b][font=宋体]因其稳定的蛋白表达和适当的翻译后修饰而被广泛用于结构生物学研究。这些细胞系能有效地生产具有复杂糖基化模式的蛋白质，这对于确保蛋白质的功能和稳定性至关重要。糖基化缺陷细胞系通过特定的基因改造，能够分泌脱糖基化糖蛋白，为蛋白质生产提供了更加纯净的原料。[/font][font=Calibri] [/font][b][font=宋体]稳定细胞系的生成[/font][/b][font=宋体][font=宋体]传统的稳定细胞系生成技术如瞬时转染，虽然方法简便，但存在整合频率低、转基因沉默等问题。为了克服这些困难，研究者们开发出了一系列新技术，如细胞分选技术、位点特异性重组（如[/font][font=Calibri]FLP/FRT[/font][font=宋体]系统）、转座子系统（如[/font][font=Calibri]piggyBac[/font][font=宋体]）、慢病毒系统以及噬菌体整合酶等，提高了稳定细胞系的生成效率和稳定性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]序列特异性基因组工程也为稳定细胞系的生成提供了新的思路。通过敲除或修饰特定的基因，研究者们能够实现对细胞功能的精准调控，从而优化蛋白质生产的效率和纯度。例如，一种同时缺乏[/font][font=Calibri]GnTI[/font][font=宋体]和谷氨酰胺合成酶（[/font][font=Calibri]GS[/font][font=宋体]）活性的[/font][font=Calibri]CHO[/font][font=宋体]细胞系被成功开发出来，为高效筛选具有[/font][font=Calibri]GS[/font][font=宋体]标记的稳定细胞系提供了有力工具。[/font][/font][font=Calibri] [/font][b][font=宋体]稳定细胞系与瞬时转染的比较[/font][/b][font=宋体]稳定细胞系相较于瞬时转染具有多个优点，包括能够进行大规模生产和保持高水平的蛋白表达稳定性。尽管瞬时转染在某些情况下能快速产生大量蛋白，但其表达水平和重复性通常不如稳定细胞系。[/font][font=Calibri] [/font][b][font=宋体]展望[/font][/b][font=宋体]近年来，利用稳定细胞系高效生产结构生物学蛋白质已成为研究的热点和趋势。通过引入新技术、优化筛选方法和改进整合系统，不仅能够提高蛋白质生产的效率和纯度，还能够为结构生物学研究提供更加精准、可靠的实验工具。随着基因编辑和细胞工程技术的进步，预计在未来，通过精确的基因操作能够更有效地创建和利用稳定细胞系。这些技术的进步将促进结构生物学和药物开发中蛋白质的高效和可持续生产。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]本文由义翘神州进行整理，同时提供[/font][url=https://cn.sinobiological.com/services/stable-cell-line-development-service][u][font=宋体][color=#0000ff]稳定细胞系构建服务[/color][/font][/u][/url][font=宋体]，详情可点击了解！[/font][font=Calibri] [/font][font=宋体]参考文献：[/font][font=Calibri]Büssow K. Stable mammalian producer cell lines for structural biology. [/font][i][font=Calibri]Curr Opin Struct Biol[/font][/i][font=Calibri]. 2015 32:81-90. doi:10.1016/j.sbi.2015.03.002[/font]

什么是粗蛋白， 粗蛋白跟蛋白质又有什么区别，如何测量饲料中粗蛋白的含量，粗蛋白的含量高是不是一定代表着蛋白质的含量高。我想，当你看到这个题目时，肯定会联想到这一连串的问题中的其中几个。那么接下来，我就来详细介绍下粗蛋白的概念、粗蛋白测量和其他关于饲料中粗蛋白含量的问题。粗蛋白概念：粗蛋白不仅包括蛋白质这一物质，它涵盖的范围更广，包括含氮的全部物质。粗蛋白含量：下面我介绍几种常见物质的粗蛋白含量，仅供大家参考。薏苡仁 粗蛋白含量：13%-14%棉粕 粗蛋白含量：可达40%以上农大白早糯玉米 粗蛋白含量：3.41%蠡玉168 粗蛋白含量：9.63％台湾大青枣 粗蛋白含量：0.86%上文介绍了几种农产品或水果的粗蛋白含量情况，如果需要更多的资料，大家可自己查阅。粗蛋白测定：方法一：最简便也是最快键的方法，就是用蛋白质测定仪（参见www.top17.net/product/993.html）来测量。本标准参照采用ISO 5983—1979 《动物饲料──氮含量的测定和粗蛋白含量计算》。 1 主题内容与适用范围　　本标准规定了饲料中粗蛋白含量的测定方法。　　本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和单一饲料。2 引用标准　　GB 601　化学试剂　滴定分析（容量分析）用标准溶液的制备3 原理　　凯氏法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数6.25，计算出粗蛋白含量。4 试剂4.1 硫酸（GB 625）：化学纯，含量为98％，无氮。4.2 混合催化剂：0.4g硫酸铜，5个结晶水（GB 665），6g硫酸钾（HG 3—920）或硫酸钠（HG 3—908），均为化学纯，磨碎混匀。4.3 氢氧化钠（GB 629）：化学纯，40％水溶液（m/V）。4.4 硼酸（GB 628）：化学纯，2％水溶液（m/V）。4.5 混合指示剂：甲基红（HG 3—958）0.1％乙醇溶液，溴甲酚绿（HG 3—1220）0.5％乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存期为三个月。4.6 盐酸标准溶液：邻苯二甲酸氢钾法标定，按GB 601制备。4.6.1 盐酸标准溶液：c（HCl）=0.1mol/L。8.3mL盐酸（GB 622，分析纯），注入 1 000mL蒸馏水中。4.6.2 盐酸标准溶液：c（HCl）=0.02mol/L。1.67mL盐酸（GB 622，分析纯），注入1 000mL蒸馏水中。4.7 蔗糖（HG 3—1001）：分析纯。4.8 硫酸铵（GB 1396）：分析纯，干燥。4.9 硼酸吸收液：1％硼酸水溶液1 000mL，加入0.1％溴甲酚绿乙醇溶液10mL，0.1％甲基红乙醇溶液7mL，4％氢氧化钠水溶液0.5mL，混合，置阴凉处保存期为一个月（全自动程序用）。5 仪器设备5.1 实验室用样品粉碎机或研钵。5.2 分样筛：孔径0.45mm（40目）。5.3 分析天平：感量0.0001g。5.4 消煮炉或电炉。5.5 滴定管：酸式，10、25mL。5.6 凯氏烧瓶：250mL。5.7 凯氏蒸馏装置：常量直接蒸馏式或半微量水蒸气蒸馏式。5.8 锥形瓶：150、250mL。5.9 容量瓶：100mL。5.10 消煮管：250mL。5.11 定氮仪：以凯氏原理制造的各类型半自动，全自动蛋白质测定仪。6 试样的选取和制备　　选取具有代表性的试样用四分法缩减至200g，粉碎后全部通过40目筛，装于密封容器中，防止试样成分的变化。7 分析步骤7.1 仲裁法7.1.1 试样的消煮　　称取试样0.5～1g（含氮量5～80mg）准确至0.0002g，放入凯氏烧瓶（5.6）中，加入6.4g混合催化剂（4.2），与试样混合均匀，再加入12mL硫酸（4.1）和2粒玻璃珠，将 凯氏烧瓶（5.6）置于电炉（5.4）上加热，开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力 （360～410℃）直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加热，至少2h。7.1.2 氨的蒸馏（蒸馏步骤的检验见附录A）7.1.2.1 常量蒸馏法　　将试样消煮液（7.1.1）冷却，加入60～100mL蒸馏水，摇匀，冷却。将蒸馏装置（5.7）的冷凝管末端浸入装有25mL硼酸（4.4）吸收液和2滴混合指示剂（4.5）的锥形瓶内。然后小心地向凯氏烧瓶（5.6）中加入50mL氢氧化钠溶液（4.3），轻轻摇动凯氏烧瓶（5.6），使溶液混匀后再加热蒸馏，直至流出液体积为100mL。降下锥形瓶，使冷凝管末端离开液面，继续蒸馏1～2min，并用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均需流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。7.1.2.2 半微量蒸馏法　　将试样消煮液（7.1.1）冷却，加入20mL蒸馏水，转入100mL容量瓶中，冷却后用水稀释至刻度，摇匀，做为试样分解液。将半微量蒸馏装置（5.7）的冷凝管末端浸入装有20mL硼酸（4.4）吸收液和2滴混合指示剂（4.5）的锥形瓶（5.8）内。蒸汽发生器 （5.7）的水中应加入甲基红指示剂数滴，硫酸数滴，在蒸馏过程中保持此液为橙红色，否则需补加硫酸。准确移取试样分解液10～20mL注入蒸馏装置（5.7）的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞好入口玻璃塞，再加10mL氢氧化钠溶液（4.3），小心提起玻璃塞使之流入反应室，将玻璃塞塞好，且在入口处加水密封，防止漏气。蒸馏4min降下锥形瓶（5.8）使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸馏1min，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。　　注：7.1.2.1和7.1.2.2蒸馏法测定结果相近，可任选一种。7.1.2.3 蒸馏步骤的检验　　精确称取0.2g硫酸铵（4.8），代替试样，按7.1.2或7.2.2步骤进行操作，测得硫酸铵含氮量为21.19±0.2％，否则应检查加碱、蒸馏和滴定各步骤是否正确。 7.1.3 滴定　　用7.1.2.1或7.1.2.2法蒸馏后的吸收液立即用0.1mol/L（4.6.1）或0.02mol/L（4.6.2）盐酸标准溶液滴定，溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。7.2 推荐法7.2.1 试样的消煮　　称取0.5～1g试样（含氮量5～80mg）准确至0.0002g，放入消化管中，加2片消化片（仪器自备）或6.4g混合催化剂（4.2），12mL硫酸（4.1），于420 ℃下在消煮炉上消化1h。取出放凉后加入30mL蒸馏水。7.2.2 氨的蒸馏　　采用全自动定氮仪（5.11）时，按仪器本身常量程序进行测定。　　采用半自动定氮仪（5.11）时，将带消化液的管子插在蒸馏装置上，以25mL硼酸（4.4）为吸收液，加入2滴混合指示剂（4.5），蒸馏装置（5.7）的冷凝管末端要浸入装有吸收液的锥形瓶内，然后向消煮管中加入50mL氢氧化钠溶液（4.3）进行蒸馏。蒸馏时间以吸收液体积达到100mL时为宜。降下锥形瓶，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均需流入锥形瓶内。7.2.3 滴定　　用0.1mol/L的标准盐酸溶液（4.6.1）滴定吸收液，溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。8 空白测定　　称取蔗糖0.5g，代替试样，按第7章进行空白测定，消耗0.1mol/L盐酸标准溶液（4.6.1）的体积不得超过0.2mL。消耗0.02mol/L盐酸标准溶液（4.6.2）体积不得超过0.3mL。9 分析结果的表述9.1 计算见下式：粗蛋白质（％）=（V2-V1）• c×0.0140×6.25/（m×V＇/V） ×100 式中：V2── 滴定试样时所需标准酸溶液体积，mL； V1── 滴定空白时所需标准酸溶液体积，mL； c── 盐酸标准溶液浓度，mol/L； m── 试样质量，g； V── 试样分解液总体积，mL； V── 试样分解液蒸馏用体积，mL； 0.0140── 与1.00mL盐酸标准溶液〔c（HCl）=1.000mol/L〕相当的、以克表示的氮的质量。 6.25── 氮换算成蛋白质的平均系数。 9.2 重复性　　每个试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。　　当粗蛋白质含量在25％以上时，允许相对偏差为1％。　　当粗蛋白含量在10％～25％之间时，允许相对偏差为2％。　　当粗蛋白质含量在10％以下时，允许相对偏差为3％。

[align=left][font='宋体'][size=16px]导读： 日前，国家工业和信息化部发布2023第38号公告，由中国饮料工业协会牵头起草的《复合蛋白饮料》（QB/T 4222-2023）行业标准获得批准，将于2024年7月1日正式实施。[/size][/font][/align][font='宋体'][size=16px]近年来我国消费者对食品安全的关注度持续提升，国务院及有关部门陆续颁布了一系列涉及食品、乳品的法律法规及标准，形成了完善的法规标准体系，对于规范蛋白饮料企业生产经营、保障产品质量安全、维护消费者利益发挥着重要作用。[/size][/font][size=16px][/size][size=16px][font='宋体'] [/font][font='宋体']日前，国家工业和信息化部发布2023第38号公告，由中国饮料工业协会牵头起草的《复合蛋白饮料》（QB/T 4222-2023）行业标准获得批准，将于2024年7月1日正式实施。[/font][font='宋体'][color=#c00000]复合蛋白饮料是指以乳或乳制品，和不同的植物蛋白为主要原料，经加工或发酵制成的饮料。 [/color][/font][/size][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/01/202401101157586438_1004_5874949_3.jpeg[/img][font='宋体'][size=16px]行业标准《复合蛋白饮料》（QB/T 4222-2023）由中国饮料工业协会组织国内多家复合蛋白饮料生产企业修订完成。在该标准修订过程中，进行了深入的行业调研、专家审定等相关工作。[/size][/font][size=16px][font='宋体'] [/font][font='宋体']该标准规定了复合蛋白饮料的原辅料、感官、理化、食品安全等要求，描述了相应的试验方法，规定了检验规则、标签、包装、运输和贮存的内容，在修订时充分考虑了目前蛋白饮料产品在原辅料等方面的创新需求，兼顾了产品质量分级的市场需求。[/font][/size][size=16px][/size][size=16px][font='宋体'] [/font][font='宋体']与2011版相比，[/font][font='宋体'][color=#c00000]该标准对复合蛋白饮料的定义、蛋白质贡献率进行了修改完善，提高了蛋白质含量，并且根据产品质量分级，新增了浓型复合蛋白饮料、特浓型复合蛋白饮料，为复合蛋白饮料产品质量升级奠定了基础，满足了消费者对不同蛋白质含量的消费选择。同时对复合蛋白饮料产品的标签标示进行了完善，更有利于向消费者明示产品信息。[/color][/font][font='宋体'] [/font][/size][size=16px][/size][size=16px][font='宋体']复合蛋白饮料是我国蛋白饮料的主要品类之一，近年来，随着人们健康意识的不断加强，复合蛋白饮料迎来新的发展机遇。根据行业对主要生产企业的统计，复合蛋白饮料年产量达到60万吨以上。行业标准《复合蛋白饮料》（QB/T 4222-2023）的实施将在饮料健康产品的丰富度方面[/font][font='宋体']起到促进作用。[/font][/size][size=16px][/size][size=16px][font='宋体'][color=#c00000] [/color][/font][font='宋体'][color=#c00000]2021年国家“十四五”规划和2035年远景规划中明确“碳达峰、碳中和”为国家整体规划布局的重要组成部分，鼓励“绿色、健康、可持续发展”，《国民营养计划》明确“植物蛋白”为主要的营养基料，植物基产品发展前景广阔。[/color][/font][/size]

[font=宋体, SimSun][size=15px]蛋白质按来源可以分为动物蛋白和植物蛋白，两者所含的氨基酸是不同的。[/size][/font][font=宋体, SimSun][size=15px][/size][/font][font=宋体, SimSun][size=15px]一般说，植物蛋白和动物蛋白从本质上没有太大的区别，但是在氨基酸组成和数量上有一定的不同。[/size][/font][font=宋体, SimSun][size=15px][/size][/font][font=宋体, SimSun][size=15px]尽管植物蛋白取材来源广泛，但其蛋白的种类和相对数量与人体的要求有一定差距。[/size][/font][font=宋体, SimSun][size=15px][/size][/font][font=宋体, SimSun][size=15px]例如，植物蛋白中缺乏免疫球蛋白[i][/i]，谷类中则相对缺乏赖氨酸等。植物蛋白的消化、吸收要比动物蛋白差，但是植物蛋白的优势是不含有胆固醇。动物蛋白相对与人类的营养结构比较吻合，其蛋白质的种类和结构更加接近人体的蛋白结构和数量，而且一般都含有人体必需的8种氨基酸(特别是蛋制品和奶制品)，所以动物蛋白质比植物蛋白质营养价值高。[/size][/font]

材料琼脂糖凝胶介质镍亲和柱紫外检测仪蛋白电泳装置及夹子、玻璃板、灌胶支架、缓冲液槽等附件5 ml 注射器0.45 μm 滤器超声破碎仪试剂1. 结合缓冲液：20 mM Tris-HCl，150 mM NaCl，10 mM 咪唑，pH=8.02. 洗脱缓冲液：20 mM Tris-HCl，150 mM NaCl，不同梯度浓度的咪唑，pH=8.03. 20%乙醇4. 三蒸水5. 透析液：20 mM Tris-HCl，1 mM EDTA，pH=8.0注：纯化所用所有试剂均用三蒸水进行定容，溶液配完后均用0.22 μm 滤膜经滤器过滤，4℃保存。在实验中，可以先配制相应pH值的高浓度母液，在使用时进行稀释。如：（1）1 M Tris-HCl，pH=8.0称取60.57 g Tris溶于400 mL 三蒸水中，充分溶解，调pH至8.0，补加三蒸水定容至500 mL。用0.22 μm 滤膜过滤，置于玻璃瓶中4℃保存。（2）2.5 M NaCl，pH=8.0称取36.53 g NaCl溶于200 ml 三蒸水中，充分溶解，调pH至8.0，补加三蒸水定容至250 mL。用0.22 μm 滤膜过滤，置于玻璃瓶中4℃保存。（3）1 M 咪唑，pH=8.0称取17.02 g 咪唑溶于200 mL 三蒸水中，充分溶解，调pH至8.0，补加三蒸水定容至250 mL。用0.22 μm 滤膜过滤，置于玻璃瓶中4℃保存。步骤样品制备将经过IPTG诱导的菌液离心，7000 rpm，10 min。收集菌体细胞，用PBS漂洗两遍，再用纯化所用的平衡液漂洗一遍，最后用平衡液重悬（35 mL/g 菌体沉淀），将收集好的菌液超声破碎，直至澄清，13000 rpm，离心10 min，取上清，用0.45 μm 滤器过滤。纯化过程1. 准备将保存于4℃的试剂开盖超声脱气40 min，平衡到纯化的温度。2. 装柱装柱前先在柱子内加满三蒸水，打开开关至最大流速，使三蒸水快速流过柱子以去除柱子中的气泡。将凝胶填料从4℃冰箱内取出，用吸管将上层20%乙醇吸走，加入三蒸水轻轻重悬，缓缓加入柱内，加满三蒸水，打开开关至最大流速，保持柱子垂直，使凝胶压紧，必要时可以用注射器从出口轻吸，给凝胶一定负压，使凝胶压的更紧密。3. 平衡提前打开紫外检测仪，调节波长至280 nm，灵敏度为100%，预热。向柱内加满结合缓冲液，打开开关，使液体匀速向下流（3 mL/min）。此时，调节光量，使吸光值保持100稳定，此时为调满。待吸光值稳定后，调节灵敏度为0.5 A/0.2 A，使吸光值保持0稳定，此时为调基线。4. 上样将提前处理好的样品加入20 mM 咪唑，有时可根据不同蛋白特性适当提高上样咪唑浓度，以减少非特异性结合。沿壁缓缓加入柱内，尽量避免气泡的产生。打开开关，保持尽量较低的流速（1 mL/min），待吸光值大于20时，用50 ml 离心管接流出的蛋白溶液，称流穿。流穿内的蛋白应为未与凝胶结合的菌体蛋白。5. 洗涤沿壁缓缓加入结合缓冲液，打开开关，走大于10柱体积的结合缓冲液，流速3 mL/min。使吸光值恢复到基线或接近于基线水平。6. 洗脱初次纯化一个新的重组蛋白一般选择40 mM、60 mM、80 mM 咪唑作为流洗浓度，主要洗脱非特异结合在凝胶中的菌体蛋白，100 mM、200 mM、300 mM 咪唑作为洗脱浓度，主要洗脱目的蛋白，500 mM 咪唑洗脱与凝胶结合较顽固的蛋白。将每个洗脱浓度的蛋白进行SDS电泳检测，确定洗脱杂蛋白以及目的蛋白的最佳浓度，作为以后洗脱条件。每个浓度洗涤（脱）时，都要使吸光值达到一个稳定的最低值。一般作为流洗的洗涤液尽量多一些。7. 平衡最后洗脱结束后，加入结合缓冲液，直至吸光值平衡基线或接近于基线水平。8. 保存向柱内缓缓加入5倍凝胶体积的20%乙醇，使凝胶充分浸在乙醇中。最后，用乙醇慢慢重悬凝胶，取出置于干净的离心管中，用乙醇冲洗柱子几次，使凝胶的损失达到最小。做好使用记录，4℃保存凝胶。9. 透析（1）将存放于4℃的透析袋从水中（用于煮透析袋的去离子水）取出，戴一次性手套，去掉水，将一头折起，用封闭夹封闭。透析液试漏。（2）倒掉透析液，将不同梯度洗脱的蛋白加入透析袋内，上口折起，用封闭夹封闭。检查不漏后放入2 L 透析液中。（3）用玻璃棒将透析袋固定在烧杯内，以防止透析袋随透析液转动，影响透析效果，4℃透析，两小时后更换透析液，然后透析过夜。10. 电泳检测上样、流穿、洗涤、各个梯度洗脱的蛋白，每个样品取20 μL，加入等量2×SDS-buffer，沸水煮样8 min，进行SDS-PAGE电泳检测。常温染色过夜，为避免染色时污染，染色液仅回收一次。蛋白浓度测定每纯化出的蛋白在保存之前都要进行蛋白浓度测定方法如下：取5 mL 考马斯亮蓝G-250置于干净试管中，空白对照加入100 μL 0.9%NaCl，测定组加入适量（考马斯亮蓝G-250由棕红色变为蓝色为止）未知蛋白，用0.9%NaCl补齐到100 μL，混匀，放置5 min。用721型分光光度计（需提前预热20 min）测定其595 nm的吸光值（玻璃比色皿，用空白对照调0），带入标准曲线，得出蛋白浓度。做好标记，保存于-20℃。蛋白浓缩若纯化出的蛋白浓度过低，在浓度测定之前要使用超滤杯或硫酸铵沉淀的方法对其进行浓缩。1. 超滤杯使用使用前先将超滤杯用三蒸水涮洗三遍，然后在超滤杯内加入三蒸水，3000 rpm，离心10 min，目的将滤膜彻底清洗干净。倒掉三蒸水，加入待浓缩的蛋白样品，3000 rpm，离心，直至达到所需体积后停止离心，将浓缩后的蛋白样品取出，进行电泳检测和蛋白浓度测定。超滤杯如同使用前用三蒸水涮洗三遍，加入三蒸水，3000 rpm，离心10 min。最后加入20%乙醇，是滤膜浸泡在乙醇中，4℃保存。2. 硫酸铵沉淀法蛋白溶液与饱和硫酸铵按1：1比例混合，4℃放置30 min，13000 rpm离心10 min，弃掉上清，沉淀的蛋白用500 μL PBS溶解（可根据沉淀的量适当增加PBS用量），溶解后用透析液透析。

请教：双缩脲反应测定蛋白质含量时，绘制标准曲线时需要标准蛋白溶液，标准蛋白溶液要用什么蛋白质？我见有用酪蛋白的，可以用胶原蛋白吗？谢谢……

1.标准蛋白溶液的配置，一定要注意吸光度不要超出仪器的量程；2. 选择合适的点数及标准蛋白的浓度；3. 加样到96孔板一定不要有气泡，4.按照试剂盒说明控制孵育时间。

最近在做公司产品含药量的释放情况，释放液是加了牛血清白蛋白的PBS液，释放后产品从释放液中取出，注射用水洗净后晾干。产品上残留药品再用乙酸乙酯超声洗脱，用UV测定乙酸乙酯中的药品浓度。因最近新换了牛血清白蛋白，后来实验数据与前比似乎有点偏低，怀疑产品上牛血清白蛋白没洗干净，对UV吸收有影响？牛血清白蛋白对UV吸光度值有什么影响呢？哪里有供应质量稳定的牛血清白蛋白？

请教大虾们哪里有的卖蛋白标准物，我们实验室想要一份做标样，若是有的卖，是不是要证件或是证明之类的东东，谢谢

我现在要写关于 [凯式定氮法测定饲料中粗蛋白]的毕业论文,希望广大朋友兄弟能帮帮我,谢谢!

引领行业标准建立，规范行业健康发展。近日，由广西神冠胶原生物集团有限公司提出、中国食品药品企业质量安全促进会主导，国联质检参与制定的《口服胶原蛋白生物利用度测定方法》团体标准经过专家审查正式通过，并于今年3月 6日起正式实施！[align=center][img=喜报.jpg,600,1299]https://img1.17img.cn/17img/images/202404/wycimg/683bab4e-ff0d-4e86-bb53-14615ec96135.jpg[/img][/align]　　该标准制定了关于口服胶原蛋白利用度在使用范围、规范性引用文件、术语和定义、原理、试剂、仪器和用品、试验方法、结果计算等方面的统一性规范和标准要求，为引导生产企业规范、有序发展提供了全面的科学支撑，对规范消费市场和行业健康发展具有重要意义。　　值得一提的是，基于在该领域的丰富实践，国联质检全程参与该标准的验证工作。在参与制定标准期间，国联质检以检验检测为基础，全面梳理胶原蛋白利用度需要测定的检测指标，为后续相关企业研发生产提供了科学有效的标准和依据，有效确保了相关企业在后续生产研发阶段产品质量的准确性和可靠性，同时也为消费者提供了更加科学的选择依据。　　国联质检作为一家第三方检验检测认证机构，近些年来，凭借专业的检测技术和丰富的经验，已参与制定《药食同源类食品质量要求》等多项团体标准，在规范企业科学生产，高效管理方面具有一定的专业性和指导性。未来，国联质检也将继续以检验检测技术为核心支撑，以建立完善产品质量标准体系为导向，全面协助生产企业实现产品质量优化升级，助力企业成为行业质量新标杆，加速推动全行业迈向规范化发展!欲了解更多，点击进入[url=https://www.woyaoce.cn/member/T130554/][color=red] 西安国联质量检测技术股份有限公司 [/color][/url][size=14px][color=#707d8a][ 来源：国联质检 ][/color][/size][size=14px][color=#707d8a][i]编辑：张圣斌[/i][/color][/size]

检测蛋白回收率为啥要用硫酸铵？因其含氮量接近乳粉含氮量？做空白时是用水代替样品还是其它物质？网上有说用对氨基苯磺酸或者蔗糖，能否解释原因？还有硫酸铵用分析纯的是否可以？干燥时温度有要求吗？问题比较多，感谢各位高手帮忙解答！

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现在人们是越来越注重食品健康了，于是任何关于某种食品不健康的说法都能吸引一堆眼球。有人说自己买的乳清蛋白粉不容易溶在水中，立刻有人跳出来说千万不能用热水，蛋白质会变性。于是有一堆看起来对蛋白质有一点了解的人纷纷附和，大谈如何保持蛋白不变性。 很多人看到“蛋白变性”这个词，就望文生义地想到“变质”“变坏”，仿佛“变性”了就有害健康了。最常见的还有一个例子，反对微波炉的人总是说微波炉会导致蛋白质的变性。 蛋白质通常是由20种不同的氨基酸组成的，不同的蛋白质只是各种氨基酸的组成和连结方式不同。因为各种氨基酸的理化特性不同，它们会互相影响，最后会像积木一样形成一定的空间结构。通常也就说是蛋白质的天然构象。如果因为某种原因，蛋白质分子失去了它的天然构象，被称为变性。而蛋白质被吃到肚子里，首先要被水解（消化）成一个个的氨基酸分子，才能被吸收。而在多数情况下，变性的蛋白更容易被水解。可见，蛋白质变性对于食物来说，不仅不是“变质”，而且是好事。 我们所吃的所有蛋白，比如肉、鱼、鸡蛋、牛奶、豆浆、豆腐，作熟的过程就是蛋白质变性的过程。豆浆中的蛋白质不变性是变不成豆腐的。而作为商品出售的各种蛋白粉，多数都经过了高温灭菌和干燥处理，早已经变性了。对于某些产品而言，适当的工业处理甚至能够提高蛋白质的品质。比如大豆中的蛋白，其蛋白质质量指数（蛋白质消化校正计分）是0.91 ，但是经过分离纯化高温干燥等处理之后，就能达到1了。还有相当多的蛋白质产品甚至经过了酶解处理，以获得更好的理化特性。那些蛋白质，不仅是空间构象，连化学结构都变了，更是“变性”得深入。

1.蒸馏步骤的回收率，我们这里用硫酸铵做。请问：硫酸铵需要105度烘后干燥塔冷却，再称重吗？烘干结果能达到98.6%，不烘的结果能达到99.9%2.消化蒸馏全过程的回收率，我们开始用乙酰替苯胺+蔗糖做，方法上说是真空中80度烘干，可我们没有这种设备，在普通环境下烘干，结果偏差很大，只有91.2%。我们后来用甘氨酸（不经过烘干处理）+蔗糖做，能达到99.8%，但问题是和其他公司对标样品总是偏低。请问：我们后边的方法，甘氨酸是否需要烘干处理？有别的测蛋白回收率的方法吗？======================注：经验证，盐酸标准溶液浓度没有问题。

各位大神，最近在册牛血清蛋白标准曲线，资料上显示说，牛血清蛋白与考马斯亮蓝结合之后在595 nm处显示最大吸收，可是为什么我用紫外扫谱发现在578 nm处才是最大吸收，但是测出来的不同浓度的吸光度线性关系也不好，排出紫外检测器的问题，到底是什么原因呢？？？？

分离蛋白样品，用的裸管，磷酸缓冲液PH值2.5，重复性非常不稳定，每天连续进样时出峰时间一直前移，每次进样用氢氧化钠冲洗2min。请大家帮帮忙，急！谢谢！

本家用的是一个牛白蛋白，氮含量大于等于13.5%，乘以6.25等于84.375%，这样的标准蛋白可用吗？计算正确吗？

我们在制造过程中需要用lowry法检测蛋白质含量，有的专家说标准品用牛白，有的说标准品用人白？到底用什么，我们也糊涂了，看看大家都用什么？