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畜禽肉中己烯雌酚的测定测量不确定度分析依据JJF1059-1999《测量不确定度评定与表示》、CNAL/AG06《测量不确定度政策实施指南》和CNAL/AR11《测量不确定度政策》分析1目的对畜禽肉中己烯雌酚的测定的不确定度进行分析,找出影响不确定度的因素,对不确定度进行评估,如实反应测量的置信度和准确性。2适用范围畜禽肉中己烯雌酚的测定。3 职责3.1检测人员负责按操作规程操作仪器,确保测量过程中仪器正常运转,消除各种可能影响实验结果的意外因素,了解影响不确定度的因素。3.2校核人员负责检查原始记录及不确定度的计算方法。3.3技术人员负责审核检测结果和不确定度分析结果。4不确定度分析4.1. 测定方法按照国家标准GB/T5009.108-2003《畜禽肉中己烯雌酚的测定》中规定进行测定。 检测过程为:1) 称取样品:用精度为0.1mg的精密电子天平称取50.0000g样品,称准至0.1mg。2) 样品前处理:把样品置于300mL烧杯中,加入50mL水和100mL丙酮,用组织捣碎机提取1~2分钟。匀浆液过滤后,取滤液100ml于500mL分液漏斗中。向滤液中加入10-15g无水硫酸钠,充分摇动,静置分层;取上层有机相。下层水相用50mL二氯甲烷再提取一次。合并提取液,经装有20g-30g无水硫酸钠的玻璃漏斗脱水后滤入250ml茄型瓶中,再以40mL二氯甲烷分数次洗涤容器和无水硫酸钠,洗涤液也并入茄型瓶中,用旋转蒸发器浓缩后用二氯甲烷定容到10mL。装样上机,进样1.0uL。3) 己烯雌酚标准原液:使用国家标准物质中心提供的100mg/L的标准溶液。4) 己烯雌酚标准曲线溶液:将己烯雌酚标准原液用1ml移液管和100ml容量瓶稀释成1mg/L ;再用1ml移液管和100ml容量瓶把1mg/L的标准稀释成0.01mg/L;用5ml移液管和10ml容量瓶把1mg/L的标准稀释成0.5mg/L;用1ml移液管和10ml容量瓶把1mg/L的标准稀释成0.1mg/L;用1ml移液管和50ml容量瓶把1mg/L的标准稀释成0.05mg/L。共得到1mg/L、 0.5mg/L、0.1mg/L、0.05mg/mL、0.01mg/L的标准系列溶液。5) 样品的上机分析后,在[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱仪[/url]上用5点校准曲线法进行定量。4.2. 测量流程方框示意图 4.3. 己烯雌酚含量的计算 式中:X——试样中己烯雌酚的含量,单位为毫克每千克(mg/kg);Aop——己烯雌酚的峰强度(峰面积);Aref——己烯雌酚标准的的峰强度(峰面积);Vop——最终定容体积,单位为毫升(mL);Vext——提取液总体积,单位为毫升(mL);Vclean——取用的提取液总体积,单位为毫升(mL);Msample——试样质量,单位为克(g);Rec——回收率。计算结果保留两位有效数字。 4.4 不确定度的来源本测试方法的不确定度来源主要来自如下几部分:4.4.1 测量重复性带来的不确定度分量 (含人员、环境、测量方法和仪器重复性等其他分量的贡献)。样品反复进行10次分析,见表1。表1 10.2050.00636×10-620.2110030.2040.00749×10-640.2300.019361×10-650.2240.013169×10-660.2130.0024×10-670.1990.011121×10-680.2130.0024×10-690.2010.010100×10-6100.2090.0024×10-6 0.211 (A类不确定度)4.4.2 样品测试全过程中引入的不确定度分量 。(B类不确定度)4.4.2.1 样品称取和前处理过程中天平准确度和容量瓶准确度引起的不确定度分量 。a 天平准确度引起的不确定度分量 天平的准确度为σ=0.1mg,采用矩型分布计算标准不确定度。 b 100ml容量瓶准确度引起的标准不确定度分量 。允差值为±0.1ml,按矩形分布。 C. 10ml容量瓶准确度引起的标准不确定度分量 允差值为±0.02ml,按矩形分布。 , 4.4.2.2标准溶液配制过程和GC/FPD制定校准曲线时引入的不确定度分量 。a). 己烯雌酚标准溶液引入的不确定度分量 。己烯雌酚标准溶液的浓度值为100mg/L±0.11mg/L,采用矩形分布。 b). 稀释过程中的移液管引起的不确定度分量 。1ml移液管的允差值为±0.008ml,5ml移液管的允差值为±0.025ml,都是矩形分布。1ml的移液管: , 5ml的移液管: , C). 容量瓶的准确度引起的不确定度分量 。10ml的容量瓶的允差值为±0.02ml,50ml的容量瓶的允差值为±0.05ml,100ml的容量瓶的允差值为±0.1ml,都是矩形分布。10ml的容量瓶: , 50ml的容量瓶: , 100ml的容量瓶: , d). 10μl进样针准确度引起的不确定度分量 。允差值为±0.02μl,矩形分布。 5. 合成标准不确定度计算标准不确定度一览表标准不确定度分量u(xi)不确定度来源标准相对不确定度 样品测量重复性0.0460 样品测试全过程( )0.0111 样品称取和前处理( )1.28×10-3 标准溶液配制过程和GC/FPD制定校准曲线( )0.0110 天平的准确度1.15×10-3 100ml容量瓶准确度5.77×10-4 10 ml容量瓶准确度1.15×10-3 己烯雌酚标准原液浓度5.77×10-4 标准稀释过程中移液管的准确度0.0107 标准稀释过程中容量瓶的准确度1.91×10-3 10μl进样针1.15×10-3合成相对不确定度: 6. 扩展不确定度的评定扩展不确定度通过使用包含因子k=2计算得出: 7.不确定度报告按照国家标准GB/T5009.108-2003规定的检测程序进行,最后测量出本次蔬菜水果中己烯雌酚含量为:0.21(2)mg/kg。[img]http://bbs.instrument.com.cn//images/affix.gif[/img][url=http://bbs.instrument.com.cn/download.asp?ID=194104]畜禽肉中己烯雌酚的测定测量不确定度分析.doc[/url] [color=#DC143C][size=4][font=黑体]应疯子哥的要求,把公式及图片贴上来,在9楼-13楼有版主ROGERSW的完整佳作。[/font][/size][/color]
水产品中己烯雌酚残留量的测定 气相色谱-质谱法 1、安全要求操作时穿工作服、戴口罩和手套,提取、净化和浓缩时在通风橱中进行,避免溶液、气体吸入和皮肤接触,废液和废渣分别倒入专用容器中,按要求处理。2、急救措施皮肤接触到有机溶剂或酸、碱溶液后用清水清洗,有机溶剂或酸、碱溅入眼中用清水冲洗。3、适用范围该标准操作规程适用于鱼、虾可食部分中己烯雌酚残留量的测定。4、检测原理以乙酸乙酯提取样品中的己烯雌酚,固相萃取柱净化,硅烷化试剂衍生化后,用气相色谱-质谱仪测定,外标法定量。5、仪器设备5.1 气相色谱质谱联用仪:配备电子电离(EI)离子源。5.2 分析天平:感量0.000 01 g。5.3 旋涡混合器。5.4 高速冷冻离心机。5.5 氮吹仪。5.6 旋转蒸发仪。5.7 固相萃取装置。5.8 具塞玻璃离心管:10 mL。5.9 SLH固相萃取柱:500 mg,6 mL。5.10 样品反应瓶:2 mL,去活,螺纹口。6、试剂和溶液6.1 试验用水应符合GB/T 6682中一级水的规定。6.2 己烯雌酚标准品:纯度≥ 99%。 6.3 乙酸乙酯:色谱纯。6.4 甲醇:色谱纯。6.5 正己烷:色谱纯。6.6 无水碳酸钠:分析纯。6.7 碳酸钠溶液:10%(W/V),称取10 g无水碳酸钠,溶于100 mL水中。6.8 己烯雌酚标准贮备液:准确称取己烯雌酚标准品0.010 g,用甲醇溶解,定容于100 mL容量瓶中,即浓度为100 μg/mL的标准贮备液,置于-18℃冰箱中保存,有效期为6个月。6.9 己烯雌酚标准工作液:临用前,准确吸取己烯雌酚标准贮备液,用甲醇稀释成浓度为0.0
酶联免疫法 1 范围本标准规定了水产品中己烯雌酚残留量的酶联免疫测定方法。本标准适用于水产品肌肉中己烯雌酚的测定。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。3 原理测定的基础是竞争性酶联免疫抗原抗体反应,所有的免疫反应都在微孔中进行,加入己烯雌酚标准或样品溶液、己烯雌酚酶标记物、己烯雌酚抗体后,己烯雌酚与己烯雌酚酶标记物相互竞争己烯雌酚抗体的结合位点。结合的己烯雌酚酶标记物可以将无色的发色剂转化为蓝色的产物,在450nm处检测,吸收光强度与样品中的己烯雌酚浓度成反比,按校正曲线定量。4 试剂和材料本标准所用试剂除标明外,其它均为分析纯及其更高纯度,试验用水符合GB/T 6682一级水标准。4.1 叔丁基甲基醚,色谱纯。4.2 石油醚。4.3 二氯甲烷。4.4 甲醇,色谱纯。4.5 氢氧化钠,1 mol/L。4.6 磷酸,6 mol/L。4.7 百分之20甲醇的20mmol/L三羟基甲基氨基甲烷(Tris)缓冲液(pH 8.5), 百分之40、百分之70、 百分之80的甲醇溶液,此溶液现用现配。4.8 67 mmol/L 磷酸盐缓冲液(pH 7.2) : 9.61g磷酸氢二钠,1.79g 磷酸二氢钠溶解于蒸溜水,定容至1000mL,此溶液现用现配。4.9 己烯雌酚酶联免疫定量测定试剂盒, 参见附录A。5 仪器与设备5.1 酶标仪,波长450nm。5.2 离心机,转速4000r/min。5.3 氮吹仪。5.4 电热恒温水浴锅。5.5 高速匀浆机。5.6 C18 固相提取柱,长6.5cm,内径0.7cm。5.7 固相萃取器。5.8 微型漩涡混合仪。5.9 振荡器。5.10 微量加样器:20uL, 50uL, 100uL, 250uL,1000uL。 5.11 微量多通道加样器:50uL, 100uL。