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集思宝测亩仪

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  • 【资料】穆斯堡尔谱仪的应用

    附件中是有关穆斯堡尔谱学的原理及应用,是我总结的一些,大家有什么问题提出来讨论一下.[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=7621]相关附件[/url]

  • 牛奶体细胞测定与牧场管理

    [b]奶牛体细胞测定与牧场管理[/b]是DHI(Dairy Herd Improvement)的必修课题。DHI即奶牛生产性能测定也称牛群改良,是一套完整的奶牛生产性能记录和管理体系,是一个实实在在通过度量和分析解决奶牛生产实际问题的方法,其目的是提高牛群的整体素质和生产水平,使用方法是从群体着眼,针对个体解决存在的问题。DHI检测的项目:一是牛群的产奶性能,包括每头牛的产奶量、乳脂率、乳蛋白率等;二是收集牛群饲养管理与经营方面的资料,如系谱资料、产犊日期、干奶日期、淘汰日期和牛群的年龄结构等,并将这些资料信息进行系统加工处理,所得结果再返回牛场指导牛场的经营管理,帮助提高牛场经济效益。DHI的用途具体体现为追踪个体牛表现、观察牛群表现、开发新目标、乳房炎管理、选种等方面的。  针对于[b]奶牛体细胞测定与牧场管理[/b]课题,最关键是乳脂率、乳蛋白率、体细胞数,其中体细胞直接影响产奶量、乳脂率、乳蛋白率和其它乳成分。通过体细胞数的变化,可反映牧场管理水平及牧场经营状况。DHI检测设备推荐本特利NexGen系列新一代牛奶成分+体细胞检测,检测速度400-600/小时,可以根据牧场需要进行配置,同时检测模块有丙酮和乳铁蛋白,对于预防奶牛酮病和乳房炎有提前预警作用。 [b]体细胞数(SCC)[/b]是指每毫升牛奶中所含的体细胞量,它反映牛场奶牛乳房健康状况,几乎参加DHI项目的每头泌乳牛都进行体细胞检测。它包括多种类型的细胞如白细胞和脱落的上皮细胞等,高SCC记录预示着大量的白细胞的存在和乳房感染几率较大。DHI报告可提供全群奶牛各胎次每月体细胞数值,可按照不同胎次统计出不同SCC水平的牛头数及所占百分比。  个体[b]奶牛体细胞数(SCC)[/b]直接反映了奶牛乳房健康状况,并能反映防治措施是否有效,需要说明一点,SCC的高低反映了乳房受感染的程度,而并非超过某一特定值就表示该牛一定有乳房炎而需要治疗。 牛群[b]体细胞数(SCC)[/b]是整个牛群乳房健康程度的标志。体细胞数、体细胞评分反映了该牛群的健康状况。对于体细胞高的牛群,应从挤奶设备的消毒效果,挤奶设备真空度及真空稳定性,奶衬性能及使用时间,牛床、运动场等卫生环境等方面找问题。 在DHI报告中提供了因[b]奶牛体细胞数(SCC)[/b]太高而造成奶牛产奶量的损失,应用该数据可以计算出奶牛场全年产奶量损失及直接经济损失。[b]奶牛体细胞数(SCC)[/b]与奶量损失的关系  DHI报告分析:脂肪蛋白比。一个牛群正常的脂肪和蛋白比例在1.1-1.2的范围内,或蛋脂比在0.8—0.85如果变化范围超过上限或下限,说明奶牛饲养管理方面有问题。  当脂蛋比低于1.1时表明  A、奶牛粗饲料在瘤胃中的发酵率降低  B、粗饲料的质量差  C、精料比例过大  D、瘤胃亚临床或临床型酸中毒  E、奶牛反刍减少,日粮中缺乏缓冲物质  当脂蛋比高于1.2时表明:  A、奶牛日粮中蛋白质不平衡,品质差,缺乏必需氨基酸,如蛋氨酸和赖氨酸。  B、日粮中能量不足,瘤胃微生物蛋白合成不足  C、奶牛干物质采食量不足  D、夏天热应激  E、饲料中添加了大量的油脂类脂肪  F、可发酵碳水化合物含量不足DHI报告中奶牛繁殖状况分析:平均泌乳天数。如果一个牛群具有正常的牛群结构,且常年均衡配种,那么该牛群的平均泌乳天数应改为150-170天。如果超过上限则表明:  A、所提供的产犊日的准确性  B、奶牛产后繁殖问题严重  C、配种技术员水平不高 D、存在严重的饲养管理问题  DHI报告在生产实践中的重要意义:DHI分析报告是奶牛场改进饲养方法、提高管理水平的基础。如根据奶牛泌乳曲线的变化、乳成分和奶牛体细胞和尿素氮测定结果,分析各类营养的平衡关系,以调整饲料配方和优化饲喂程序,保证牛群的正常管理,而使牛群发挥最大的生产潜力,提高生产水平。

  • 慕思床垫有多少人在用

    一个酷似乔布斯的神秘洋老头,带着“法国皇家设计师”、“源自1868年”等字眼,和一张看起来很舒服的床垫站在一起。?慕思以前的宣传资料中,曾宣称这位洋老头是来自法国的睡眠专家,慕思公司的官方英文名DeRucci,也是以创立慕思的这位法国设计师命名的。用洋人的脸在中国打广告,很多国人肯定不爽。不爽归不爽,但这种行为毕竟没有罪。这要是都算有罪,那99.9%的淘宝商家都有罪,尤其是服装类目。所以慕思这么干了十几年,也没人管。但最近,慕思床垫打算IPO了,给证监会递交了招股书。床垫属于普通消费品,低技术低门槛,让这种企业上市和国家集中资金发展高科技的意愿并不相符。所以,证监会对慕思床垫连发59问。招股书上说,在2009年8月15日,慕斯与一个名为Timothy James Kingman的洋老头签订协议,这个洋老头授权慕斯永久使用带有其肖像的照片及其底片。证监会要求慕思说一下,这个洋老头和慕思的产品到底有什么关系,第三方是否也可以使用这个老头的照片从而导致消费者对慕思产品的混淆并引发潜在纠纷,另外慕思对这个洋老头的宣传是否符合产品实际,是否存在虚假宣传。看似简简单单的询问,却一击致命,慕思傻眼了,不知道该咋回答。瞎编答案,慕思没那个胆子。至于据实回答。真相如何大家心里都清楚,你说这问题慕思怎么据实回答,真据实回答了还怎么和消费者交代。根据招股书,慕思是一家位于广东东莞的本土企业,品牌创立于2004年,实际控股人是土生土长的中国人。

  • 【原创大赛】Determination of emulsion explosives with Span-80 as emulsifier by gas

    Determination of emulsion explosives with Span-80 as emulsifier by gas chromatography–mass spectrometryFei-Fei Tian, Jing Yu, Jia-Hong Hua, Yong Zhangb, Meng-Xia XieaAnalytical & Testing Center of Beijing Normal University, Beijing 100875, China Institute of Beijing Criminal Science and Technology, Beijing 100054, Chinaa b s t r a c tA novel approach for identification and determination of emulsion explosives with Span-80 (sorbitol mono-oleate) as the emulsifier and their postblast residues by gas chromatography–mass spectrometry (GC–MS) has been developed. 24 kinds of emulsion explosives collected have been processed by transesterification reaction with metholic KOH solution and the emulsifier has turned into methyl esters of fatty acids. From the peak area ratios of their methyl esters, most of these emulsion explosives can be differentiated. In order to detect the postblast residues of emulsion explosives, the sorbitols in the emulsifier Span-80 obtained after transesterification reaction have been further derivatized by silylation reaction with N,O-bis-(trimethylsilyl)trifluoroacetamide (BSTFA) containing 1% trimethylchlorosilane (TMCS) as the derivatizing reagent. The derivatization conditions were optimized and the derivatives were determined by GC–MS. The results showed that the silylation derivatives of sorbitol and it isomers, combined with hydrocarbon compounds and methyl esters of fatty acids, were the characteristic components for identification of the emulsion explosives. The established approach was applied to analyze the postblast residues of emulsion explosives. It has been found that the method was sensitive and specific, especially when detecting the derivatives of sorbitol and its isomers by GC–MS in selecting ion mode. The information of the characteristic components can help probe the origin of the emulsion explosives and providing scientific evidences and clues for solving the crimes of the emulsion explosive explosion. Keywords: Emulsion explosives Span-80 Postblast residues Derivatization GC–MS概述:建立一种采用GC-MS法对乳化炸药(乳化剂为Span-80)及其爆炸残留物鉴定和识别的分析方法。本文收集到的24类乳化炸药,在氢氧化钾的甲醇溶液中进行酯交换反应生成脂肪酸甲酯,根据得到的脂肪酸甲酯峰面积相对比值的差异,实现24类乳化炸药种类识别。为了检测乳化炸药的爆炸残留物,对乳化炸药的另一酯交换产物山梨醇进行硅烷化衍生处理。实验对衍生化条件进行优化并且利用GC-MS法对衍生产物进行分析,结果表明:山梨醇及其同分异构体的硅烷化衍生产物,脂肪酸甲酯和碳氢组分是鉴定乳化炸药及其爆炸残留物的特征成分;利用GC-MS-SIM法来测定乳化炸药爆炸残留物中的山梨醇及同分异构体具有更好的专属性和更高的灵敏度。乳化炸药及其爆炸残留物的特征成分可以为探索乳化炸药的来源和抓捕乳化炸药爆炸犯罪嫌疑人提供科学的线索和依据。1.IntroductionIdentification and determination of explosives, especially their post blast residues, was an important topic in forensic science. Determining the chemical compositions of explosives and their post blast residues can provide scientific information for differentiation of these explosives and probing their origins, and offer important clues and evidences for solving the crimes of the explosion. The analysis of explosives and explosive residues has attracted the attention of the scientific community in recent decade, and various methods have been developed. Ion chromatography[/size

  • 吐司酵母检测

    吐司生产中配料添加了酵母 那我出厂检验微生物的判定标准还是按GB7099执行吗 这样的话老是检测不合格,是不是要去除酵母的数量再计数?求各位大神指导一下,谢谢!

  • 发酵过程中细胞浓度在线检测系统-在线活细胞浓度分析仪

    发酵过程中,细胞浓度是一个非常重要的生理参数,不但可以计算比生长速率,底物消耗速率、生物量产率和维持系数等参数,还可以及时判断是否有染菌等异常情况发生。目前测量细胞浓度的方法主要有化学法(DNA/RNA分析)和物理法(干重、光密度、呼吸商等)两大类。一般来说,与物理法相比,化学法能较准确的测量有代谢活性的生物量,缺点是花费时间长,而利用物理法测量,无法区分区分处于悬浮状态的颗粒和微生物,也无法分别活死细胞。 实现在线活细胞浓度一直是发酵领域的热门话题,仅些年来出现了不少的测量方法,依据的工作原理也是五花八门,其中最具代表性的有声学,激光散色、荧光、核磁、量热或电容。 其中法国fogale公司的测量仪器,以电容法为工作原理,直接将传感器安装与发酵罐上,可承受121℃高温灭菌,理论技术也比较成熟,是目前最为理想的适合工业级别的在线活细胞传感器。工作原理:电容传感器采用活细胞的介电特性,实时连续测量活细胞的生物体积,可应用于实验室桌面型的反应器或者是工业规模的大型反应器两对对电极位于传感器的顶部,一对用于在培养基中产生交变的电场,在电场范围内,带有完整细胞膜的细胞会在培养基中发生极化现象,发生极化的细胞可以认为是极小的电容,死细胞或者其他粒子没有完整的细胞膜,所以不能形成电容型号。另一对电极用于检测培养基中的介电信号,培养基中的介电信号和细胞的浓度是精确关联的。细胞的极化率和电场的频率纯在函数关系,当频率增加时,培养基中细胞的介电常数由低频峰(最大极化)降低到高频峰(最小极化)。这种随频率增加极化率降低的现象称为β-散射。传感器采用双频测量模式:培养基的基线在10MHz左右得到,细胞的信号在临界频率区域获得,在曲线的拐点,(动物细胞和细菌在1MHz,酵母在2MHz)我们获得了最佳的信号线性。应用:这项技术可广泛应用于各种细胞培养,生物发酵过程。已被文献证实可应用的细胞如下:动物细胞:CHO, BHK, MDCK, PERC6, NSO, HEK, Hela,Hybridoma, Vero细 菌:E.Coli, Bacillus Thuringensis, Salmonella,Streptomyces, Lactic Bacteria酵 母:Pichia Pastoris, Saccharomyces Cervisiae, PolymorphaHasenula昆虫细胞:sf9, Hi-5真 菌:Absidia

  • 重大专项又开始申报了,申报黑幕无法避免?

    国家重大专项今年的申报开始了,今年有了新政策,进行了新整合~ 2013年曾经爆出了企业进行申报专项资金,先给20%的回扣~http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09512.gif 版友们今年有接触重大专项的么?有没有黑幕!! 或者。。。。。你认为会有啥样的黑幕?http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09510.gif

  • 【第三届原创参赛】啤酒酵母细胞自溶技术破壁研究

    【第三届原创参赛】啤酒酵母细胞自溶技术破壁研究

    维权声明:本文为gl19860312原创作品,本作者与仪器信息网是该作品合法使用者,该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现均属侵权违法行为,我们将追究法律责任。 本实验室主要工作就是:微生物发酵与代谢调控 、蛋白的分离纯化 、生物材料的研发与生产( 化妆品 、面膜、人工血管 、人工骨................)http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/12/201012061858_264950_2019107_3.jpg啤酒酵母细胞自溶技术破壁研究摘要:研究了PH、温度、食盐浓度三个因素对啤酒酵母细胞破壁的影响,确定出最佳的自溶法破壁条件 。进而为分离啤酒废酵母中的有效活性成分奠定了基础。关键词:啤酒酵母;破壁;自溶The Research of Autolysis on the Beer Yeast Cells wallAbstract:This paper researched the condition of autolysis on the waste yeast cells wall with three factors (pH 、Temperature 、Salt density) and determined the best condition based on autolysis. And build basis for separating the activity forms from beer waste yeasts.Key words: The beer yeast; Breaking Cells wall; Autolysis引言啤酒酵母(S.csrsviside)属于真菌门酵母属,多数为单细胞微生物,细胞呈圆形或卵圆形,革兰氏染色呈阳性G+。啤酒酵母细胞是由细胞壁、细胞膜、液泡、颗粒和线粒体等部分组成,细胞年幼的时候细胞壁很薄,所以不明显;细胞年老时,细胞壁较厚。啤酒酵母细胞内不但含有丰富的蛋白质、维生素、葡聚糖及甘露聚糖等营养及保健成分,可作为食用单细胞蛋白,此外还含有辅酶I、细胞色素,卵磷脂、RNA,,这些物质或其降解产物及衍生物如氨基酸制剂和核苷酸及核酸制剂等在生物化学、医药及保健食品中最有重要的作用。由于啤酒废酵母价格便宜,因此可利用啤酒废酵母来提取、制备这些物质。啤酒废酵母(waste brewer's yeast)是啤酒生产的副产物,是指啤酒酿造后沉降的酵母泥,主要是由大量的弱细胞和死细胞组成。在啤酒生产过程中,每生产 100吨啤酒大约有1-1.5吨废酵母 (以干重计)产生。传统的处理方法,是弃置不用或作为饲料处理,直接排放到河流湖泊中,将造成环境污染,同时也是对财富的浪费;因其具有坚韧的细胞壁和特有的酵母臭,适口性差,不易消化和吸收,故烘干作为饲料用的经济效益不高。充分利用啤酒废酵母可以有效地减轻污染,实现资源的二次转化,也可产生巨大的经济效益,如开发酵母抽提物。 为了增加酵母抽提物产量国内外同行做出不同努力,开展了有些研究。目前关于啤酒酵母破壁的研究很多,大体可归纳为:化学破壁(酸解、碱解)、物理破壁(液体剪 切、固体剪切等)、生物破壁(酶解、自溶)。其中,化学破壁不仅会造成一些营养成分的破坏,而且为有效成分的提取增加困难;物理破壁虽然方法简单、成本低,能完好保存营养成分,但其破壁效果较差;生物破壁中的酶解法会增加提取成本,故均不能大规模广泛的应用。而采用自溶法进行细胞破壁是一种简便易行的操作过程,通过确定啤酒酵母细胞最适合的自溶条件,可以建立一套利用酵母细胞生产酵母抽提物的工艺和方法,旨在为啤酒酵母的综合利用寻求一种新的方法,为工业化生产提供理论基础和实践指导。1.4实验方法 工艺流程 啤酒废酵母(保藏)—— 活化、两次斜面培养—— 接种、平板划线——摇瓶培养——取对数期的酵母细胞——做稀释梯度——做影响因素(温度、食盐浓度、pH并固定时间60分钟)的实验-——做正交试验——镜检(血球计数法)——计算啤酒酵母细胞的破碎率——得到自溶的最佳工艺参数1.5啤酒废酵母自溶条件的确定酵母自溶的实质是酵母细胞内的蛋白质在自身蛋白酶的作用下,降解为游离的氨基酸,那么,一切影响酶促反应的因素均影响酵母细胞的自溶,如自溶温度、食盐浓度、pH值、自溶时间等。自溶法是以存在酶活性的新鲜活酵母为原料,利用酵母细胞本身的酶系,在一定条件下,将酵母体内的糖类物质、蛋白质和核酸分解为还原糖、氨基酸、肤类、核昔酸等小分子物质并从酵母细胞内抽提出来的一种方法。利用自溶法生产的酵母抽提物,蛋白质分解率高,游离氨基酸含量高,风味好,成本较低,但呈味核昔酸含量低.目前,欧美及我国所生产的酵母抽提物绝大部分都是采用这种方法。[font=仿宋_GB2

  • 【转帖】伊内兹特纳鲍姆:中美聚焦六类产品安全

    10月23日,美国消费品安全委员会主席伊内兹特纳鲍姆在上海接受本报专访时透露,从今年1月开始在美国出现的中国产石膏板安全事件,将从下周开始陆续公布调查报告。“下周我们将发布2个技术调查报告,11月中旬发布第三次技术调查报告。此后我们会继续与中国质检总局对话,来讨论我们应该如何来处理这些向美国出口石膏板的厂家,看他们能够如何来帮助受害的美国消费者。”  10月21日,特纳鲍姆在无锡出席第三届中美消费品安全峰会,并于23日随该峰会一起移师上海,此后她还将访问北京。  从今年1月开始,美国多个州的数百业主发现住宅内中国产石膏板散发异味,部分房主将他们出现的鼻子流血、鼻窦问题和头痛等问题归咎于中国产石膏板。今年3月,美国佛罗里达州民主党参议员尼尔森(Bill Nelson)和路易斯安那州民主党参议员兰德里欧(Mary Landrieu)联手提交一项议案,要求对某些中国产石膏板实施临时禁令。  特纳鲍姆向本报表示,该事件已经在美国形成一起大规模集体诉讼,目前已上诉至联盟法庭,一些石膏板进口商已经被要求接受调查。“仅2006年就有700万块石膏板在美国销售,所以非常难确定责任人,非常难追踪最初的制造商,但我们至少知道进口商是谁。当然我们也会回溯整个供应链上的制造商、进口商、建筑商等各个环节。”  特纳鲍姆表示:在石膏板问题调查方面,美国消费品安全委员会已经和中国质检总局合作了几个月。“在技术层面,我们要设法找出石膏板中到底是哪一种物质对住户的健康造成威胁。质检总局已经派了2名科学家到美国,到佛罗里达和路易斯安娜州的住户家进行调查。我们也派了5名技术人员来到中国,他们进入了一些制造商的工厂,并进行了采样,带回美国进行检测。”  特纳鲍姆对本报表示,这起事件暴露的最核心问题是美国对于石膏板至今没有一个安全标准,美国将着手制定石膏板安全标准。“这需要几年的时间,因为首先需要获得一些技术上的标准,然后再进行公开听证等立法程序。”  特纳鲍姆透露,美国也可能会参照儿童玩具、儿童营养品方面的安全认证制度,今后在石膏板进入美国市场之前,中国制造商或者美国进口商必须提交安全证书。  佛罗里达州参议员尼尔森甚至建议奥巴马总统将石膏板问题列入他11月的访华议题之中。特纳鲍姆告诉本报,这也是因为76%的石膏板问题事件发生在佛罗里达州。特纳鲍姆并不确信这一话题会出现在奥巴马总统与胡锦涛主席11月的直接对话中,她强调美国将通过与中国质检总局的对话机制来解决这个问题。“我们将继续与质检总局合作,我们之前几个月的合作非常顺利,我们会看他们将继续为我们提供哪些新的支持。”  特纳鲍姆在接受本报专访时,也对其此次访华目的进行了澄清:“最主要的目的是与中方讨论如何建立对所有产品的安全保障体系,讨论制造商应该如何采取最佳实践以确保产品安全。”  而在她启程之前,美国媒体将其访华主旨定义为:“要求中国分担美国家庭因为中国产石膏板造成的数十亿美元损失”。  特纳鲍姆向本报指出,在她此次与中国国家质量监督检验检疫总局的对话中,石膏板并不是唯一议题。“我们主要围绕儿童用品、烟花、电子产品、打火机、石膏板、全地形车(ATV)六大产品领域的安全问题进行讨论。”

  • 宝付揭开招聘骗局的序幕,你被欺骗了吗

    [align=center]宝付揭开招聘骗局的序幕,你被欺骗了吗,进入到七八月份,今年要毕业的大学生们更着急了,为什么?今年毕业的大学生将近1000万人,工作好不好找呢?很多大学生现在就要奔波于各个公司之间展开频繁的面试。每年到这个时候,我们都想特别善意的提醒我们大学生朋友,求职的时候一定要擦亮眼睛,一定要小心各种各样的黑心公司。而且随着时间地推移,各种黑心公司也进化了。和大家分享一个故事:5月中旬,小美在58同城网上看到某科技有限公司上海分公司在招聘人员,就投了简历过去。大概过了3、4 天,该公司的人员打电话叫小美去面试。[/align]宝付揭开招聘骗局的序幕,你被欺骗了吗,到了该公司后,接待小美的是一个叫王珊的人,自称是公司的经理。王珊把小美带到一个办公室面试。过程中,王珊说小美没有相关的工作经验,需要培训才能上岗,培训之后可以留在他们公司上班,也可以帮小美介绍到和他们公司有合作的单位上班。不仅如此,王珊还告诉小美,如果在他们公司培训,可以保证以后就业工资在6000元以上,但培训需要23800元费用,为期四个月。宝付揭开招聘骗局的序幕,你被欺骗了吗,此外,还有一些不法分子冒充企业或中介进行招工,以优厚待遇为诱饵进行现场招聘,收取应聘者缴纳的报名费等各种费用后,让其回家等消息,随后携款跑路。等所有这些钱都交了之后呢?人家才跟你讲:对不起,你不符合我们公司要求,所以我们不能录用你,或者顶天录用你让你干了一两天,试用期就跟你说:你试用期表现不好我得给你开除,而我们之前交的各种各样的费用就被人家赚走了,少则几百多则上千呢。宝付揭开招聘骗局的序幕,你被欺骗了吗,对于那些高薪招聘的, 其实全部都是骗局,很多时候出去工作都是以为外面的世界都很真诚,其实多是套路,都是以赚钱为目的的,就连朋友之间都看中利益更何况是企业了。

  • 【讨论】酵母检测仪器

    生产过程中,酵母浓度的控制是产品质量的一个关键因素,为了控制酵母浓度,最好的方式就是在线快速测定。目前国内外有哪些公司生产或代理酵母在线活性检测仪,就是那种生产发酵过程中能在线快速准确测定酵母活细胞数的仪器。在网上查了一下美国Aber公司有酵母监测仪,法国FOGALE公司有活细胞浓度在线检测议,请问各位有用过吗?哪家好用一些呢?

  • 美国这两款配方奶粉检测铅超标,宝爸宝妈们注意了

    奶粉安全是非常重要的。婴幼儿奶粉品牌多、种类杂。宝爸宝妈们在选择奶粉上也是眼花缭乱,现在国外奶粉受父母欢迎,国外奶[color=#000000]粉其实也不一定是安全健康的。近日国联质检食品检测机构了解到美国加州有两家企业生产的婴儿配方奶粉铅含量超标。铅属于重金属,食品检测中重金属超标长期食用会对人的肝脏造成影响,婴幼儿身体发育尚不健全,食用铅含量超标的奶粉对婴幼儿身体会造成一定的影响。因此奶粉检测中铅含量超标是非常威胁婴幼儿健康的[color=#000000]。[/color] [/color][align=center][color=#000000][img=奶粉成分检测,400,246]http://www.unqdfenxi.com/js/kindeditor/attached/image/20180609/20180609094505_27957.jpg[/img][/color] [/align][color=#000000] [color=#000000] 两家奶粉铅含量超标企业分别是保健食品集团生产“和平星球”牌、格雷斯利公司生产的“萨米牛奶”牌两款婴儿配方奶粉,经检验发现其中铅含量分别超标13倍和15倍。这既严重威胁到食用婴儿的健康,也违反了加州有关公平竞争、禁止虚假广告,以及在饮用品成分表中必须标明有害化学物质等相关法律。目前这两家企业已被起诉。[/color][/color] [color=#000000] 国内父母需要警惕了,对于自家宝宝选用的奶粉质量一定要非常注意。最好选用大品牌的奶粉,也不要轻信国外代购的奶粉,去正规渠道购买奶粉。奶粉成分检测主要是对奶粉中的营养成分以及重金属含量等方面进行检测,奶粉检成分测结果能够清晰判别奶粉中的各种成分以及检测出有害物质等。[/color]

  • 【新闻聚焦】昆明市区一药厂发生爆炸 已致5死8伤(触目惊心,已添加现场视频~)

    2010年12月30日9时50分许,位于昆明官渡区东郊金马寺的昆明全新生物制药公司发生爆炸并引发大火,随后官渡区政府通告称,爆炸时该公司正进行生产,爆炸造成5人死亡,8人受伤,其中5人重度烧伤。http://player.youku.com/player.php/sid/XMjMzMzc0NjM2/v.swfhttp://img1.gtimg.com/news/pics/hv1/43/107/696/45284728.jpghttp://img1.gtimg.com/news/pics/hv1/48/107/696/45284733.jpg转自云南网 据现场记者发回的最新报道,发生爆炸的金新制药有限公司周围已经拉起警戒线,附近金马学校学生已经疏散。记者在现场看到:已有三人在爆炸中遇难,三条警犬进入爆炸现场进行搜救。目前,第一批次四名伤者被送往昆明市延安医院,均为爆炸烧伤。药厂未悬挂任何企业标志爆炸发生在昆明市全新生物制药有限公司,该公司坐落在一片住宅小区的居民楼之间,没有悬挂任何企业标志。大门内有两幢四层楼,发生爆炸的是四楼的生产车间。救援人员表示,爆炸位于车间一角,几乎摧毁了整个车间,吊顶隔板、空调、通风设备全部被震落,爆炸点最近的墙体也都破损,窗户飞出楼外。全新生物制药公司生产车间的三、四层楼均被大火熏黑,铝合金的玻璃门窗被爆炸的冲力撞飞,楼下地面被玻璃碴覆盖,偶尔可见血迹。据现场目击者称,血迹为爆炸时有人从楼上跳下摔伤导致。爆炸起火后,10点06分,官渡区消防一中队最先赶到了现场,4分钟后,7名受伤工人就被救出。10时40分,大火被控制,3名遇难工人被陆续找到。10时56分,现场明火全部被扑灭。12时10分,昆明市消防救援人员从着火大楼内抬出了最后一具尸体,掩盖在尸体上的白布掀开的瞬间,是一具已经被烧焦的尸体,面目全非。调查1 紧邻小区学校 药厂变“炸药包”全新制药厂与官渡区第二中学仅有一墙之隔,昆明市食品集团职工住宅小区的金宅小区则将药厂包围其中,金宅小区居民李学民同样是全新药厂的退休职工,他称,这个厂(全新)就是个随时可能被点燃的炸药包。李学民称,金宅小区是2000年建的,是昆明市政府安置市食品集团员工的集资代建房,“政府指定在药厂这块地上建房,我们就很有意见,药厂的大烟囱天天大股地冒黑烟,刺激性的药味都熏得人睁不开眼,哪有药厂建在居民区的,药厂里有大量的易燃易爆物品,这和在我们身边埋个炸弹有啥区别。”多名金宅小区居民证实,自2000年以来,该社区居民曾向昆明市政府多次提出将药厂搬迁,均无回音,2009年时曾组织数十名代表到市政府门前交涉。2 药厂大批招临时工埋安全隐患全新制药厂退休的员工陈秀红(化名)对记者称,全新制药厂前身是昆明市生物制药厂,是昆明市食品集团的下属企业,有20多年历史,以生产安乃进等感冒发烧药为主,生产原料中含有乙醚、甲苯等多种易燃易爆的化学药剂。曾在该厂从事30多年的易燃易爆品储存工作的陈秀红称,这些危险药剂都是存储在全新制药厂大楼地下的防空洞中,该防空洞为60年代政府建的民防设施,“用一点拿出来一点,不管是储存还是搬运、使用都有很高的技术要求,要经过专业培训的,这次爆炸可能就是这些药剂引发的”。陈秀红称,该药厂为了节省成本曾大量裁减老员工,招用大批临时工,“都是外来务工的,每个月都在招,工资也就880块,工人流动性大且缺乏专业培训,所以可能是因为新工人操作不当引发爆炸。”该药厂的多名员工证实了此点。3 药厂层层转手 法人变更“混乱”在全新药厂工作三十多年的陈秀红称,目前的全新药厂已经不是国有性质,已层层转手成为私营企业。记者在全新药厂办公楼的一间办公室搜集到的工商资料显示,全新生物制药厂成立于1986年,为国有性质,为昆明市食品集团下属企业,原称昆明市生物制药厂,法人为王维生,而到1993年11月,法人代表变更为董开禄,企业性质变为集体所有,2002年该企业法人变更为胡嘉,企业性质为非自然人出资有限公司。工商资料显示,全新制药厂的实际负责人仍是董开禄,董开禄在2000年创办云南天然药物制药实业公司,注册资金142万,任法人代表,该药厂地址与全新制药厂的地址一致。记者从昆明市工商部门得知,与这两家公司注册同一地址的还有云南省医药医疗机械工业公司,该公司法人正是全新制药厂最早的法人代表王维生。全新制药厂一位不愿意透露姓名的职员对记者称,三家公司其实是一套人马,公司股权构成相当混乱。记者就全新药厂法人变更情况向昆明市食品集团询问,该集团办公室负责人称集团与全新药厂基本上没有关系,但是药厂的地是租用该集团的

  • Nat Commun:新方法更高效地制造诱导性多能干细胞

    研究人员用来产生诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cells, iPSCs)的方法既花时间而且效率又低。按照当前的方法,当把四种转录因子导入成体细胞如皮肤细胞中时,利用上千个皮肤细胞最终只能获得几个iPSCs。为此,在这项新的研究中,来自美国桑福德-伯纳姆医学研究所(Sanford-Burnham Medical Research Institute)的研究人员寻求激酶抑制剂的帮助,其中这些抑制剂阻断激酶---一类在细胞通信、存活和生长等方面发挥着重要作用的酶---的活性。他们发现几个激酶抑制剂当加入到起始细胞(如皮肤细胞)时,有助于产生比标准方法还要多的iPSCs。这些发现将可能加快很多领域的研究,和更好地能够让全世界的科学家们研究人类疾病和开发出新的治疗方法。相关研究结果于9月25日刊登在Nature Communications期刊上。论文通信作者Tariq Rana博士解释道,“获得iPSCs依赖于调节细胞内的通信网络。因此,当开始操作细胞中哪些基因开启或关闭来产生多能性干细胞时,人们很可能激活了许多激酶。因为许多活性的激酶可能抑制iPSCs产生,所以对我们而言,加入激酶抑制剂来降低这种障碍可能就有意义。”

  • 【原创大赛】【流式细胞仪系列之四】光源介绍

    LASER是light amplification by stimulated emission ofradiation.的缩写。意为“受激发射的辐射光放大”。1964年按照我国著名科学家钱学森的建议将“光受激发射”改称“激光”。 本特利流式细胞仪中使用的氩离子激光器是一种固体激光器。这种激光器的特点是频率稳定性高,相干性好,寿命长。激光是这样产生的:当高压放电激发电子,电子吸收能量跃迁到高能级,然后在短时间内释放光子,回到基态。等离子管末端的光学系统来回反射光子。这些光子与其它受激电子相互作用,释放出更多与其波长、相位、方向相同的光子,随着光子数量的增加,光信号得到放大产生激光,并通过放电管尾部的布鲁斯特窗产生偏振,以最小损耗率传送。我们在等离子管周围加一磁场,对带电粒子起约束作用,以提高放电区中心的电子密度和离子密度,从而提高了输出功率。 目前台式机FCM,大多采用氩离子气体激光器。激光(laser)是—种相干光源,它能提供单波长、高强度及稳定性高的光照,是细胞微弱荧光快速分析的理想光源。由于细胞快速流动,每个细胞经过光照区的时间仅为1μs左右,每个细胞所携带荧光物质被激发出的荧光信号强弱,与被照射的时间和激发光的强度有关,因此细胞需要足够的光照强度。 激光光束在达到流动室前,先经过透镜将其聚焦,形成几何尺寸约为22μm×66μm,即短轴稍大于细胞直径的光斑。这种椭圆形光斑激光能量分布属正态分布,为保证样品中细胞受到的光照强度一致,须将样本流与激光束正交,且相交于激光能量分布峰值处。 激光光束在到达流动室前,先经过透镜,将其聚焦,形成短轴稍大于细胞直径的光斑。这种椭圆形光斑激光能量分布属正态分布,为保证样品中细胞是一个一个分别受到光照并且受照强度十分一致,须将样本流与激光束正交且相交于激光能量分布峰值处。光路调节通过仪器光学部分三个旋钮调节,对用户是相对封闭的,即安装时由工程师调试完毕后,不推荐用户作任何调节。

  • 【惊爆内幕】为什么仪器有问题不召回?

    不看不知道,一看吓一跳。岛津LC-10A的泵在旁边打手机泵就停止运转?而且很多都人都认为确有其事。[url]http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20100223/2410810/[/url]丰田汽车因油门踏板问题全球召回,这个LC虽然说不上赔上人命,可是耽误的工作,时间,又有谁来负责?[b][color=#d40a00][size=5]重奖惊爆内幕,别在让我们仪器使用者成为冤大头,[size=1][/size]说说你使用的仪器有哪些缺陷!!!!!![/size][/color][/b]

  • “橡皮鸡蛋” 是因母鸡进食油性饲料所致?

    “橡皮鸡蛋” 真是因母鸡进食油性饲料所致?新闻背景: 1月3日家住洛河小区的市民姜女士打来电话,说自己家里也买到了"橡皮鸡蛋",而且已经食用了1个多月。超市相关负责人说,"橡皮鸡蛋"形成的原因有三个。 "煮出来的鸡蛋蛋白泛红,蛋黄还挺筋道,嚼也嚼不动,没大有鸡蛋味儿。"姜女士说,虽然一开始就发现了这个问题,但并没放在心上。记者来到她家后,姜女士煮了十几个鸡蛋。剥开几个,确实如她描述的那样,蛋白微微泛出粉红色,蛋黄呈胶质状,很有弹性,掰开看,也没有粉末掉下来。 接着记者和姜女士来到出售鸡蛋的超市。因为小票丢失,经过协商,姜女士获得部分鸡蛋退款赔偿。 超市相关负责人说,"橡皮鸡蛋"形成的原因有三个。一是母鸡进食油性饲料,二是气温较低将鸡蛋冻坏,三是鸡蛋正处于孵化期。 目前,超市的鸡蛋供应商已将姜女士提供的问题鸡蛋送到畜牧单位检测。

  • 【分享】RoHS排外項目評估建議報告出爐!

    RoHS排外項目評估建議報告出爐) NO.10/2009 2009年3月23日,代表歐盟執行委員會的Okö Institute和Fraunhofer IZM公開發行了針對RoHS指令2002/95/EC的現行和新增申請排外條款的評估報告。內容共審視了29項排外,而建議下列7項應從排外條款中移除: 第16項 – 管狀白熾燈中的鉛Lead in linear incandescent lamps (2006/310/EC) 第18項 – 放電燈中螢光粉的鉛活化劑Lead as activator in the fluorescent power of discharge lamps (2006/310/EC) 第19項 – 含PbBiSn-Hg及PbInSn-Hg成分之主要汞齊Lead with PbBiSn-Hg and PbBiSn-Hg in specific compositions (2006/310/EC) 第20項 – 用於連結液晶顯示器中前後平版螢光燈基質的含氧化鉛玻璃Lead in oxide glass used for bonding front and rear substrates of flat fluorescent lamps used for Liquid Crystal Displays (LCD) (2006/310/EC) 第26項 – 藍黑燈管 (BLB)玻璃外罩所含的氧化鉛Lead oxide in the glass envelope of Black Light Blue (BLB) (2006/691/EC) 第27項 – 在大功率揚聲器中作為轉換器焊料的鉛合金Lead alloys as solder for tranducers used in high-powered loudspeakers (2006/691/EC) 第28項 – 防所含的六價鉻Hexavalent chromium in corrosion preventive coatings (2006/692/EC) 另外,報告內容中也評估了下列5項新增申請: 焊錫包線和接腳的鉛 用於彩繪或裝飾燈座或時鐘的玻璃和顏色所含的鉛和鎘 Cortex家族設備的第三零部件中焊錫的鉛 用於固態照明和顯示系統的鎘 用於銜接漆包線(鍍層100μm)及銅包鋁線(銅層小於20μm)的焊錫中的鉛含量 資料來源Okö Institute Recommendation Report

  • 【原创大赛】【第十四届原创】流式细胞仪监测适配体与靶细胞的结合

    [align=center][size=24px]流式细胞仪监测适配体与靶细胞的结合[/size][/align][align=center]肖书棋 18122884967[/align][align=center][/align]本次说明是基于核酸适配体能与靶标进行特异性结合的原理,利用流式细胞仪监测适配体与靶细胞的结合状况,还能比较不同适配体与靶细胞之间的结合强度的比较;本次所使用的流式分析仪是BD FACSAria III。[font='times new roman'][size=16px]1.原理介绍:[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1.1核酸适配体:[/size][/font]核酸适配体(Aptamer,Apt):是一段寡核苷酸序列(ssDNA或RNA),是利用指数富集的系统进化技术(the Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment,SELEX)在多样寡核苷酸序列的文库中,进行体外筛选得到。[align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/11/202111301026239049_1528_5413603_3.jpeg[/img][/align][align=center][size=13px]Aptamer结合靶标原理[/size][size=13px]图[/size][/align]如图所示,在合适的缓冲液环境下,单链寡核苷酸序列具有弯曲以及折叠成特定的三级空间结构的能力,该结构可以与靶分子特异性结合,SELEX技术就是应用该原理来进行选择的。将信息量巨大且随机的的寡核苷酸文库与靶标孵育,经过多轮的优胜劣汰和PCR扩增,最后得到能与靶标高亲和力性结合的寡核苷酸序列,即核酸适配体(Aptamer)。由于核酸适配体具有靶向特异性的特点,因此应用广泛;那么如何监测适配体靶向细胞亲和力的方法,就需要用到流式细胞术进行表征。[font='times new roman'][size=16px]1.2流式细胞仪原理:[/size][/font]流式细胞术能够快速检测细胞或者生物颗粒的特征,其检测灵敏,能够定性或者定量分析颗粒的参数,还具有细胞分选的功能,功能强大,分析参数多,实用性较强。流式细胞仪(flow cytometer,FCM)的设计应用了光学、细胞化学、电子学等技术,拥有较强大的细胞及微粒分析功能,在临床医学、免疫学、微生物学等等研究领域发挥着巨大的作用。流式分析可以检测细胞表面颗粒复杂程度、核酸以及蛋白质的含量、细胞表面积或者细胞表面的抗体、细胞受体等等,在多种研究领域起到重要作用。在本研究中应用流式分析细胞荧光强度的基本步骤原理是:(1)制备成单细胞悬液:将待测细胞预处理进行荧光标记后制成单细胞悬液,通过气压将流式管中的细胞悬液通过管道压进流动室,同时喷出的鞘液将细胞包裹,形成圆形的鞘流,细胞在鞘液的包被下单行排列,依次通过流动室检测区域。(2)形成光散射:激发光源侧向垂直射向单个细胞,含有荧光的细胞形成两种光:①前向散射光(forward scatter, FSC):激光束照射细胞时,光束偏移量较小(10°以内),散射至前方,可用于检测细胞等粒子的表面信息,颗粒体积越大,信号越强。②侧向散射光(side scatter,SSC)激光束照射颗粒,产生偏移角度为直角的散射光,可反应细胞内含物的信息。(3)光信号转化成电信号:光信号导入到计算机中,依次形成电信号,再转化为数字信息。应用FlowJo软件处理数据,可以获得相应的散点图、直方图等形式,便于直观分析。[align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/11/202111301026241158_6946_5413603_3.jpeg[/img][/align][align=center][font='times new roman'][size=13px]流式分析基本原理图[/size][/font][/align][font='times new roman'][size=16px]2.分析步骤:[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2.1细胞预处理:[/size][/font]通过流式分析预处理,可以使细胞在特定的环境,与带有FAM荧光的适配体进行特异性结合,通过平行实验使细胞与不同的适配体文库进行标记,最终表征其荧光强度,进行亲和力的分析与比较。如表所示,流式分析条件为:[align=center][size=13px]流式细胞分析条件探寻[/size][/align][table][tr][td][align=center][size=13px][color=#000000]孵育时条件[/color][/size][/align][/td][td][size=13px][color=#000000]孵育时体积[/color][/size][/td][td=2,1][align=center][size=13px][color=#000000]孵育时浓度[/color][/size][/align][align=center][size=13px][color=#000000]细胞浓[/color][/size][size=13px][color=#000000]度 [/color][/size][size=13px][color=#000000]单链DNA浓度[/color][/size][/align][/td][td][align=center][size=13px][color=#000000]第二次洗涤用液[/color][/size][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][size=13px][color=#000000]4 ℃,30 min,BB,摇晃[/color][/size][/align][/td][td][align=center][size=13px][color=#000000]500 μL[/color][/size][/align][/td][td][size=13px][color=#000000]2.5×10^6个/mL[/color][/size][/td][td][align=center][size=13px][color=#000000]125 nM[/color][/size][/align][/td][td][align=center][size=13px][color=#000000]PBS x 2[/color][/size][/align][/td][/tr][/table]流式分析的大致步骤为:消化细胞、细胞与文库孵育、润洗重悬、上样分析。最终确定,初始的细胞悬液浓度为5×10[font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font] 个/mL,初始文库的浓度为250 nM;孵育时体系的总体积为250 L,细胞浓度为2.5×10[font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font]个/mL,适配体浓度为125 nM,环境为4 ℃、30 min,震荡。最后上样的细胞悬液体积为500 L,细胞浓度为2.5×10[font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font]个/mL。[align=left][font='times new roman'][size=16px]2.1.1材料准备:[/size][/font][/align][align=center][size=13px] 流式分析主要仪器与试剂[/size][/align][table][tr][td][align=center]名称[/align][/td][td][align=center]规格/型号[/align][/td][td][align=center]作用[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]流式细胞仪[/align][/td][td][align=center]FACSAria III[/align][/td][td][align=center]对细胞进行流式分析[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]可调式混匀仪[/align][/td][td][align=center]MX-S[/align][/td][td][align=center]混悬适配体悬液[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]震荡仪[/align][/td][td][align=center]MX-M[/align][/td][td][align=center]震荡孵育体系,防止细胞贴壁[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]制冷恒温金属浴[/align][/td][td][align=center]HX-20L[/align][/td][td][align=center]热击适配体,使核酸变性恢复到自由的无规则卷曲状态[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]显微镜[/align][/td][td][align=center]DMI1[/align][/td][td][align=center]观察细胞[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]水浴氮吹仪[/align][/td][td][align=center]FY-DCY12S[/align][/td][td][align=center]加热试剂[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]电子天平[/align][/td][td][align=center]JA2003[/align][/td][td][align=center]称量药品[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]离心管[/align][/td][td][align=center]15 mL×10、50mL×10[/align][/td][td][align=center]分装试剂,装载需离心的细胞[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]低吸附离心管[/align][/td][td][align=center]2 mL×20[/align][/td][td][align=center]装适配体悬液,减少适配体与细胞在管壁上的吸附[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]一次性使用吸管[/align][/td][td][align=center]3 mL×20[/align][/td][td][align=center]方便地吸取PBS[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]细胞刮刀[/align][/td][td][align=center]3010×1[/align][/td][td][align=center]刮下贴壁生长的细胞[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]PBS[/align][/td][td][align=center]50 mL×2[/align][/td][td][align=center]ScienCell[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]Cell Dissociation Solution[/align][/td][td][align=center]100 mL[/align][/td][td][align=center]消化细胞[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]0.25%Trypsin-EDTA[/align][/td][td][align=center]100 mL[/align][/td][td][align=center]Gibco[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]1×PBS缓冲液[/align][/td][td][align=center]500 mL[/align][/td][td][align=center]润洗细胞,重悬细胞[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]Cell Dissociation Solution[/align][/td][td][align=center]100 mL[/align][/td][td][align=center]消化细胞[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]0.25%Trypsin-EDTA[/align][/td][td][align=center]100 mL[/align][/td][td][align=center]Gibco[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]1×PBS缓冲液[/align][/td][td][align=center]500 mL[/align][/td][td][align=center]润洗细胞,重悬细胞[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]无酶无菌水[/align][/td][td][align=center]500 mL[/align][/td][td][align=center]溶解适配体文库[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]DMEM高糖培养基[/align][/td][td][align=center]50 mL[/align][/td][td][align=center]停止消化[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]细胞[/align][/td][td][align=center]>5×10[font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font]个[/align][/td][td][align=center]作为目的细胞进行流式表征[/align][/td][/tr][/table]①配置Binding buffer(结合缓冲液BB):配置10 g/L BSA:称量0.1g BSA,溶于10 mL Washing Buffer,过膜;取上述溶液5 mL,加入到445 mL Washing Buffer中;再加入500 L鲑精DNA,混匀。②将U盘格式化,提前打开制冰机和金属浴(95℃);③37℃水浴:将无酶消化液、ECM、PBS(1)放入37℃水浴。④4℃冰敷:向泡沫盒中加碎冰,离心管架、温度计,准备4℃孵育环境,放入PBS和BB预冷。⑤打开显微镜(酒精擦拭载物台)。⑥打开离心机:120 g,1 min,25℃。[align=left][font='times new roman'][size=16px]2.1.2[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]计数和文库预处理[/size][/font][/align](1)细胞计数(20倍或者40倍显微镜):①采用直接计数法,在显微镜中随机选择五个点进行计数取平均值,根据视野的面积以及T75培养瓶面积计算细胞总数,推出公式:Y为总细胞数;X为视野中细胞平均数;Y=27886.12X(20倍镜下)/Y=111111.11X(40倍镜下)。为了保证流式有足够的细胞,需要保证细胞总数>5×10[font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font]个/mL。②计算BB体积:V=Y/(2×10[font='times new roman'][size=16px]7[/size][/font])mL,用V体积的BB重悬细胞沉淀,可获得细胞浓度为5×10[font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font]个/mL的初始细胞悬液。(2)文库预处理:①将粉末状适配体文库进行离心:4000 r,5 min,4℃;使适配体粉末聚集在离心管底部,防止打开离心管时干粉状适配体飞出。②按照说明用一定体积的无酶无菌水溶解适配体,使适配体母液浓度在5 M。③取100 L母液,并加入900 LBB,使适配体浓度在500 nM。④再去上述液体500 L,并用BB稀释至浓度为250 nM,最终得到250 nM的适配体文库悬液。⑤95℃热击3 min,热击后放在泡沫盒中冰敷。[align=left][font='times new roman'][size=16px]2.1.3[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]细胞处理[/size][/font][/align](1)消化:①PBS(37℃)润洗3次。②无酶消化液3 mL,消化9 min(等待期间准备好孵育用离心管;确认离心机参数为:120 rcf,1 min,25 ℃),吹打细胞使其从培养瓶表面脱落。直接转移至15mL离心管中,吹打混匀约20次(吹散细胞团,分离成单个细胞)。③显微镜观察确认细胞均从培养瓶上脱落,加入2-3 mL ECM至培养瓶中润洗,然后转移至上述离心管中,吹打终止消化。④离心:120 rcf,1 min,25℃。(等待期间各加入250 L待测文库至低吸附离心管中,注意要快速,吸取之前需要先混悬文库)。⑤离心之后小心倒出,用枪吸出剩下的ECM,加入2V L BB,重悬吸打混匀,获得5×10[font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font]个/mL的细胞悬液。[align=left][font='times new roman'][size=16px]2.1.4[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]细胞与文库结合[/size][/font][/align]①孵育:分别加入250 μL上述细胞悬液至250 μL ssDNA文库中,进行孵育:4℃,30 min,打开摇床第二格。②等待期间离心机调至4℃;用密封袋装好洁净的1000 L枪头准备流式上样用;2.2.2.5 润洗重悬细胞①取出孵育好的体系,进行离心:4℃,120 g,1 min(等待期间准备好4℃ PBS)。②倒掉上清液,用枪头小心吸出管口残留的上清液,每管加500 L PBS(4℃)用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液枪[/color][/url][/color][/url]吸打重悬约20次。③再次离心4℃,120 g,1 min。④第二次重悬:重复①-③步骤。⑤每管加入500 L PBS重悬,忽略实验损失,最后得到理论细胞浓度为2.5×10[font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font]个/mL的细胞悬液。[font='times new roman'][size=16px]2.2[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]送样分析[/size][/font]FAM荧光染色较弱,在预处理之后应尽快进行流式分析,流式分析上样程序复杂,需要正确进行开机,测样,关机的步骤,才能够得到准确的数据。[align=left](1)准备工作:[/align][align=left]准备1000 mL[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液枪[/color][/url][/color][/url],1000 mL 洁净枪头,流式管,质控微球。[/align][align=left]①开启液流系统:由上至下打开流式细胞仪开关;再开启计算机,打开FACSDiva软件,在“Cytometer仪器框”中确认流式细胞仪已与电脑连接,启动液流之前,确认液流系统水平,进行补充鞘液、去离子水、乙醇以及漂水,并清空废液。[/align][align=left]在“Cytometer”菜单中,点击“Fluidics Startup(启动液流系统)”,按照提示进行操作:确定气路和液路是从乙醇桶连接到了鞘液桶上:将蓝色液路管接到过滤器下方,透明气路管接到鞘液桶上;确定闭合的喷嘴是在流动检测池上。[/align][align=left]②将70 m的喷嘴放入装有超纯水的烧杯中,超声30 s,用无尘纸蘸干;抽出闭合的喷嘴;插入70 m的喷嘴(红圈朝上)。[/align][align=left]③点击“×steam”,开启液流,出现水滴状,调整使上端横线位于第二个或者第三个水滴的尾部,下端横线位于第三个或者第四个液滴的中部,调整好后关闭液流。[/align][align=left](2)做质控:[/align][align=left]①用CS&T微球,用之前一定将微球甩匀(保证取出的微球呈均匀体系)用涡旋震荡;取一支洁净的流式管加入333 L的鞘液,再加一滴微球(用之前用混悬仪混匀,正常的微球为浑浊状)。[/align][align=left]②打开液流系统,在“Cytometer”菜单下点击“CST”;展开Setup Control窗口:在Characterize菜单中中选择“Check Performence”;在Configuration流式设置中:喷嘴的大小:选择70m,点击左下角“set configuration”,再点击“OK”。[/align][align=left]③选择微球的Lot ID:与微球瓶身上编号对应:10549。[/align][align=left]④敲弹准备好的微球悬液使其混匀,进行上样,打开液流;确认激发光源没问题即可关掉页面并关掉液流。[/align][align=left](3)上样:[/align][align=left]①新建样品,并勾选FITC、SSC、FSC的H、A、W、log数据项。[/align][align=left]②作图:建立散点图,横坐标为FSC-H,纵坐标为SSC-H;再建立一个图:横坐标:FITC-H,纵坐标为:Count。[/align][align=left]③打开液流至3,选择对应样品;吹打混匀并放置样品,点击“LOAD”上样。调整FSC和SSC的电压,使散点图的中的点都集中在所圈的门中。(若散点偏右,则FSC电压过大,调整FSC电压使其变小,若散点偏上,则调整SSC使其变小。)当调整合适时点击“RECORD”记录数据。[/align][align=left]④计数完毕,调低流速,点击“unload”,选择第二个样品并重复第③步。[/align][align=left]⑤上样完毕之后,保存数据。[/align][align=left](4)关机步骤:[/align][align=left]①上一管clean液,高速冲2 min;再上一管去离子水,高速冲5 min;关闭液流,检查液路系统。[/align][align=left]②在“Cytometer”菜单中,选择“shutdown”,根据指示操作:取下70 m的喷嘴,超声清洗,安装闭合喷嘴(红色点朝上)。[/align][align=left]③把液路和气路连接到乙醇桶上,用乙醇冲洗(先拔气路再拔液路)。[/align][align=left]④装一管clean液,清洗上样针和流动池。[/align][align=left]完成上述步骤之后即可关闭界面。[/align][align=left][/align][font='times new roman'][size=16px]2.3数据处理:[/size][/font]将原始数据用Flowjo软件进行处理,得到散点图以及荧光强度直方图,接下来通过举例来说明数据如何分析:(1) 散点图分析:[align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/11/202111301026242555_5228_5413603_3.jpeg[/img][size=13px]数据处理分析散点图[/size][/align]该图为散点图,可以看出大体分为两个集团,散点图有两个集团说明体系中有两种细胞粒子,并且在该图片的左下角粒子较少,说明细胞碎片较少,在预处理时较好地保护了细胞的完整性。散点图中可以区分出整个上样的体系中主要含有两种大小的细胞颗粒,在预处理的过程中,无酶消化液的消化能力较弱,并且细胞团密度较大,细胞间黏连较多,在最后孵育结束用PBS进行重悬的时候仍然能够肉眼可见有白色细微絮状物。FSC值越大,代表颗粒的体积越大;SSC值越大,代表颗粒内部的复杂程度越高。故可初步判断,G1门中的颗粒为未消化完全的细胞团,而G2门中的颗粒为分散的单个细胞。(2) 直方图分析:[align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/11/202111301026243736_5071_5413603_3.jpeg[/img][size=13px]数据处理分析直方图[/size][/align]图中为G2门选中的样品的荧光强度,该图中有两个峰,横坐标10[font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font]附近所产生的荧光峰可以判定是残留的细胞碎片,可视为背景值,横坐标10[font='times new roman'][size=16px]4[/size][/font]~10[font='times new roman'][size=16px]5[/size][/font]附近的峰代表四个适配体分别与细胞结合所产生的荧光强度,SYL3C-Aptamer结合偏移量最大,荧光较强,且高荧光事件次数较多,说明SYL3C-Aptamer与单个细胞的结合能力最强,并且G2门中的颗粒大多数为消化完全的单个细胞,呈现出较好的特异性。总之,该组结果对比体现出,单个细胞靶点较多,适配体与单个细胞结合能力较高,通过荧光强度波峰的偏移所反映的适配体与细胞特异性结合能力的大小依次为SYL3C-Aptamer>EP166-Aptamer>CA2-Aptamer>ARC1172-Aptamer。同时,由图中可以看出:10th-ssDNA pool与SYL3C-Aptamer在10[font='times new roman'][size=16px]4[/size][/font]~10[font='times new roman'][size=16px]5[/size][/font]荧光强度波峰较高,说明二者与单个细胞的结合能力较好,结合位点较多,呈现良好的特异性和亲和性。SYL3-Aptamer荧光波峰明显右移,与单个细胞的结合位点较多。[font='times new roman'][size=16px]三、总结[/size][/font]本次说明旨在利用带荧光的适配体靶向特异性结合目的细胞的原理,利用流式细胞仪监测适配体结合靶细胞能力的强弱,同时还可以应用于不同适配体靶向同一种细胞的结合能力强弱的比较。进一步利用流式细胞仪,还可以测定适配体的Kd值;还可以根据预处理的条件不同,与对照组比较,来测定适配体靶向细胞的受体是位于细胞膜表面还是细胞内,从而进一步测定适配体的生物学稳定性。同时,流式细胞仪还有很多方面的应用,例如鉴定细菌、检测细胞凋亡等,一些抗体-细胞复合物的结合情况也能够由流式细胞仪来进行监测。 在进行流式上样的过程中,预处理、上样以及数据处理阶段都有需要注意的细节,例如:本次所使用的细胞为贴壁生长的内皮细胞,故在细胞预处理时需要先消化细胞;在进行上样前,需要将样品进行吸打混匀,以免细胞沉积在流式管底部,导致未吸取到样品;在应用流式细胞仪的过程中,使用前的维护、质控流程十分重要,该流程会直接影响所得数据的稳定性;不同的流式细胞仪的维护程序稍有不同,本次说明中的使用方法只适用于BD FACSAria III,流式细胞仪具有强大的分析功能,其在细胞研究中具有重要的作用。[align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align][align=left][/align]

  • 第一届Cell Death and Disease研讨会暨第四届中英"细胞死亡、干细胞与癌症"国际研讨会召开

    第一届Cell Death and Disease研讨会暨第四届中英"细胞死亡、干细胞与癌症"国际研讨会将于2013年5月8日-9日在上海召开。  本次会议主题为:细胞死亡、干细胞与免疫,将邀请海内外相关领域卓有建树的科学家,采用大会报告及专题讨论的形式,结合国际上癌症生物学研究领域的前沿发展趋势,从细胞死亡、干细胞和免疫学等领域的研究,及其与癌症的关系等方面进行深入探讨。此次会议旨在加强领域前沿科学家之间、科学家与青年研究人员及国际权威科学期刊与我国科研人员的互动与交流,并提高我国癌症与干细胞生物学等领域的研究水平。希望可以通过互通有无,共同提高,尽快攻克癌症难题。

  • MSI1在人小细胞肺癌细胞系中的表达及MSI1低表达

    MSI1在人小细胞肺癌细胞系中的表达及MSI1低表达

    MSI1在人小细胞肺癌细胞系中的表达及MSI1低表达细胞模型的构建实验方法与步骤 细胞的复苏 1.复苏前的准备:打开水浴锅,设置温度37℃;紫外线将超净台消毒30 min;配置完全培养基。 2.将要复苏的H69、H446细胞从液氮取出,用一次性PE手套包裹冻存管,迅速放入水浴锅中震荡,使其快速融化。 3.在15 mL离心管中加入5 mL完全培养基及融化的细胞悬液,900 r/min离心8分钟,弃去上清,得到细胞沉淀。 4.在25 cm2的培养瓶中加入5 mL完全培养基,并用1 mL培养基将沉淀的细胞重悬并加入准备好的培养瓶中,放入CO2恒温培养箱中继续培养。 细胞的传代 1.选取在悬浮培养瓶中生长至90%的H69细胞,用移液枪将细胞悬液移入15 mL离心管中,选取在贴壁培养瓶中生长至90%的H446细胞,用PBS溶液将细胞吹至漂浮,并移入15 mL离心管中,两种细胞均900 r/min离心8分钟,弃掉上清。 2.分别在3个25 cm2培养瓶中加入5 mL完全培养基,在细胞沉淀中加入3 mL培养基并充分吹打混匀,将3 mL细胞悬液平均放入3个培养瓶中并混匀,放入培养箱中继续培养。 MSI1低表达细胞模型的构建1.从-80℃冰箱取出慢病毒载体冰上融化,将慢病毒用空白培养基稀释为滴度2×108,充分混匀,准备好病毒感染增强液。2.将25 cm2悬浮培养瓶中H69细胞移入15 mL离心管中并用移液枪充分吹打混匀,取其中500 μL放入细胞计数仪中计数,取出1.2×106个细胞置入新的离心管中,加入空白培养基至6 mL。3.在12孔板中以MOI=10的病毒滴度进行感染,培养16 h。4.16 h后将细胞悬液离心,换成不加双抗的完全培养基继续培养,72 h后观察荧光。5.待细胞生长至状态良好,加入1 μg/mL嘌呤霉素筛选至90%以上细胞均产生荧光。荧光实时定量PCR(Q-PCR)检测MSI1在mRNA水平的表达 总RNA的提取分别将细胞离心,PBS缓冲液清洗2次,900 r/min离心8 min,得到细胞沉淀。分别加入1 mL Trizol,用移液枪吸打至细胞完全破裂,加入200 μL氯仿,震荡30 s,室温静置10 min,以有效分离无机相和有机相,随后4℃,12,000 g/min离心15 min。将上清移至高压过的1.5 mL离心管中,加入与上清等体积的异丙醇,轻柔颠倒震荡数次,室温静置10 min,随后4℃,12,000 g/min离心10 min。弃去上清,加入75%无水乙醇,4℃,12,000 g/min离心5 min。弃去上清,沉淀置于冰上自然干燥,但不可完全干燥。用30 μL DEPC水溶解总RNA。用NanoDrop One超微量分光光度计进行定量和纯度检测,用1%琼脂糖凝胶电泳进行完整性检测。 cDNA的合成逆转录体系试剂名称使用量模板RNAMonScriptTM 5*RT111 All-in-One MixMonScriptTM dsDNaseNuclease-Free Water1 μg4 μL1 μLup to 20 μL将混合液轻柔吹打混匀,瞬时离心,37℃ 2 min,55℃ 15 min,85℃ 5 min,得到cDNA。 Q-PCR检测MSI1 mRNA的表达GAPDH引物序列:Forward primer:Reverse primer:5’-GGTCGGAGTCAACGGATTTG-3’5’-ATGAGCCCCAGCCTTCTCCAT-3’MSI1引物序列:Forward primer:Reverse primer:5’-GAACCATCCCGTCCTGTATCA-3’5’-GAAACCATGAAGCCCCAACC-3’Q- PCR反应体系:Q-PCR反应体系试剂名称使用量cDNAForward primerReverse primerMonAmpTM Chemhs qPCR MixLow ROXNuclease-Free Water50 ng0.2 μL0.2 μL5 μL0.1μLup to 10 μLQ-PCR反应程序: Q-PCR反应程序反应步骤反应温度反应时间循环次数预变性95℃10 min1变性95℃10 s40退火55-65℃10 s延伸72℃30 s溶解曲线溶解曲线按仪器默认溶解曲线 结果采用t检验,用Graphpad prism5计算MSI1在mRNA水平的表达量。 Western blot检测MSI1在蛋白水平的表达总蛋白的提取将对数生长期的H69-NC、H69-shMSI1细胞移入15 mL离心管中,900 r/min离心8 min,并用PBS溶液洗涤2次,以去除培养基中血清影响。分别加入含PMSF的蛋白裂解液100 μL,与细胞充分混匀。4℃裂解1小时后,4℃,12000 g/min离心15 min,将上清移至新的离心管中,得到细胞总蛋白。 BCA法测定蛋白浓度 将Solution A和Solution B以50:1的体积比配置BCA工作液,充分混匀。将2 mg/mL蛋白标准品等比稀释,最小浓度为125 μg/mL,并分别与配置好的200 μL BCA工作液混匀,铺入96孔板中。37℃孵育30 min,测定波长562 nm处OD(光密度值)值,并绘制蛋白标准曲线。取适量H69-NC、H69-shMSI1细胞总蛋白,20:1稀释后,与200 μL BCA工作液混合均匀。37℃孵育30 min,用酶标仪测定波长562 nm处OD值,根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。Western blot检测MSI1蛋白的表达 分别收集对数生长期的H69-NC、H69-shMSI1细胞总蛋白,加入相应体积4×SDS Loading Buffer,沸水浴煮5 min,分别取40 μg细胞总蛋白,在提前配制的10% SDS-PAGE分离胶电泳。电泳结束后,将蛋白转至PVDF膜上。用含5%脱脂牛奶的封闭液 37℃封闭1.5 h。弃去封闭液,用TBST缓冲液洗3次,每次10 min,加入MSI1兔单克隆抗体(1:1000),并以GAPDH为内参,加入GAPDH鼠单克隆抗体(1:5000);4℃孵育过夜,次日用TBST缓冲液洗膜3次,每次10 min。在敷有MSI1抗体的膜上加入辣根酶标记山羊抗兔IgG(1:5000),在敷有GAPDH抗体的膜上加入辣根酶标记山羊抗鼠IgG(1:5000),37℃敷育1 h,TBST 缓冲液洗膜3次,每次10 min。用增敏化学发光底物试剂检测,暗室曝光显影。在GAPDH表达量相同的情况下比较MSI1的表达情况。多次重复,应用ImageJ计算出各个蛋白条带的灰度对比,结果采用t检验,并应用Graphpad prism5作出柱状图。 MSI1在人小细胞肺癌细胞系中高表达 提取人正常肺上皮细胞BEAS-2B、小细胞肺癌细胞H446、H69的RNA,利用Q-PCR检测MSI1在正常肺上皮及小细胞肺癌细胞系中的表达情况,结果如图2-1显示,MSI1在小细胞肺癌细胞系H446、H69中的表达远远高于正常肺上皮细胞。https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210102201428158_6718_5389809_3.png1 MSI1 mRNA在小细胞肺癌细胞系中的表达(**代表与正常肺上皮细胞相比,小细胞肺癌细胞MSI1表达量增高具有统计学意义,P0.01)。 MSI1低表达细胞模型的构建本实验选取人小细胞肺癌细胞系H69细胞,使用慢病毒感染技术敲低MSI1的表达,同时设置对照组除外病毒本身对细胞产生的影响,待细胞状态良好使用嘌呤霉素筛选,然后在荧光显微镜下观察如图2-2,可见H69-NC、H69-shMSI1细胞均产生绿色荧光,表明人小细胞肺癌H69细胞慢病毒感染成功。https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210102201428036_9359_5389809_3.png MSI1低表达细胞模型的构建。应用shMSI1慢病毒载体感染H69细胞,利用嘌呤霉素筛选,并在荧光显微镜下观察。 荧光实时定量PCR(Q-PCR)检测MSI1的mRNA表达水平提取对数生长期的H69-NC、H69-shMSI1细胞的RNA,并测量RNA浓度及完整性,用1%琼脂糖凝胶电泳检测完整性可见,RNA有三条带,从上到下依次为28S rRNA、18S rRNA和5S rRNA,且28S rRNA的亮度是18S rRNA的两倍。用NanoDrop One超微量分光光度计测定人总RNA的A260/A280的值为2.00左右,A260/A230的值为2.30左右,说明提取的RNA质量和完整性很好,可以用于后续试验。利用Q-PCR技术检测各细胞内MSI1 mRNA相对表达量,结果如图2-3所示,与对照组相比,H69-shMSI1组MSI1 mRNA表达量明显降低(P0.01),抑制率约为75%。https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210102201434330_8277_5389809_3.png MSI1在RNA水平的表达(***代表与对照组相比,H69-shMSI1组MSI1 mRNA表达量下降具有统计学意义,P0.001)。 Western blot检测MSI1蛋白表达水平将BSA标准品(2 mg/mL)进行等比稀释,最低浓度为125 ug/mL,并应用BCA蛋白质浓度测定试剂盒测定在波长562 nm下的OD值,以OD值为纵坐标,对应蛋白质浓度(μg/mL)为横坐标,绘制标准蛋白曲线如图2-4所示。https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210102201435248_4142_5389809_3.png图2-4 标准蛋白曲线分别提取H69-NC、H69-shMSI1细胞的总蛋白质,利用Western blot技术检测各细胞内MSI1蛋白的表达情况。结果如图2-5所示,与对照组相比,MSI1蛋白表达在H69-shMSI1细胞中明显降低。表明MSI1低表达细胞模型构建成功。ahttps://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210102201437240_855_5389809_3.pngbhttps://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210102201434999_3303_5389809_3.png图2-5 MSI1蛋白水平表达:(a)MSI1蛋白表达条带;(b)MSI1蛋白的相对表达量。(*表示与对照组相比,H69-shMSI1组MSI1蛋白表达下降具有统计学意义,P0.05)。首先验证MSI1在小细胞肺癌细胞系中的表达情况,利用Q-PCR技术检测在RNA水平,MSI1在肺正常上皮细胞及小细胞肺癌细胞系中的表达,结果显示,MSI1在小细胞肺癌细胞中的表达明显高于正常肺上皮细胞。随后以人经典型小细胞肺癌细胞系H69细胞为研究对象,构建MSI1低表达细胞模型,应用shMSI1慢病毒载体感染H69亲本细胞,同时设置对照组除外病毒本身对细胞产生的影响,利用Q-PCR及Western blot验证MSI1在RNA及蛋白水平的表达,结果显示,H69-shMSI1组MSI1的mRNA及蛋白的表达明显降低。表明MSI1低表达细胞模型构建成功,可以用于后续实验。

  • 【转帖】曝光一次性筷子生产内幕

    [table=96%][tr][td=2,1][color=#4fa502][/color] [/td][/tr][tr][td=1,1,50%][/td][td=1,1,50%][/td][/tr][tr][td=2,1][size=2][color=#444444][b]一次性筷子:化学原料蒸煮 消毒用脚踩[/b][/color][/size][color=#444444][size=2]  央视315晚会今晚曝光一次性筷子的过程,经过多道化工原料的加工处理,一次性筷子上产生多种化学残留。国家对具体残留量有着严格的限制,但这一标准早已经被厂家抛在脑后。[/size][/color][color=#444444][size=2]  据央视曝光,一次性筷子在生产过程中经历了熏硫黄、石蜡、双氧水等多种化学药品的加工,生产过程触目惊心。[/size][/color][color=#444444][size=2]  更令人意想不到的是,在筷子加工过程中,工人还要用脚把筷子“翻一下”,而脚与筷子紧密接触,在筷子厂随处可见,在有的厂筷子上看到脚印就不足为奇了。[/size][/color][color=#444444][size=2]  经过加工处理一次性开子会产生多种化学残留,而在一次性筷子生产厂记者却没有看到消毒环节。筷子就这样从厂家到批发商手里,有的被批发到加工厂做成一次性餐具。[/size][/color][color=#444444][size=2]  湖南省怀化市是一次性筷子的主要产地之一,这里大大小小的一次性筷子厂有40多家,年产量达到10亿双以上。在会同县肖家乡一家筷子厂,我们见识了一次性筷子的整个生产过程。[/size][/color][color=#444444][size=2]  工人们先将竹子截成段、再用机器打成毛坯,然后放在烤房烘干。[/size][/color][color=#444444][size=2]  烘干之后的筷子毛坯,被一层塑料布盖得严严实实,底下不时冒出阵阵白烟,发出刺鼻的味道。该厂工人告诉我们,他们正在用硫黄熏筷子以便让筷子更白,并防止它发霉。记者发现,他们使用的硫黄是工业硫黄,属化工原料,在熏蒸过程中会产生二氧化硫残留。[/size][/color][color=#444444][size=2]  为了使筷子手感更光滑,还得进行抛光,记者看到,在抛光机里的不光是筷子,还有一块块白色的东西。工人告诉我们,这是石蜡。石蜡,含有多环芳烃,是石油冶炼过程中的低端产物。就这样,用石蜡抛光之后,再经过简单包装,筷子就被放进一个个装过化肥的袋子里等待出厂。在整个生产过程中,记者没有见到厂家对筷子经过任何消毒处理。[/size][/color][color=#444444][size=2]  在湖南怀化西冲村,记者看到一些已经发霉变质的黑筷子被煮白的一幕。而这家厂的老板说,他们使用的漂白剂就是双氧水,一锅要倒上20公斤。记者了解到,用工业双氧水将发霉变质的筷子煮白了再卖,已经成了行业内公开的秘密。[/size][/color][color=#444444][size=2]  连厂家自己也承认,“现在的一次性筷子大多数都会有残留物超标的情况”,而这样的“卫生筷子其实是很不卫生的”。[/size][/color][/td][/tr][/table]

  • 流式细胞仪检测细胞增殖方法有哪些?

    [font=宋体][font=宋体]在生物学和医学研究中,细胞增殖是一个关键过程,对于理解生命活动的基本规律以及疾病的发病机理具有重要意义。随着科技的发展,流式细胞仪作为一种高效、灵敏的分析工具,广泛应用于细胞增殖的检测。流式细胞仪通过快速分析单个细胞,可以对细胞周期、细胞增殖活性、细胞凋亡等多个方面进行研究。本文将探讨流式细胞仪在检测细胞增殖方面的主要方法,包括但不限于溴脱氧尿苷([/font][font=Calibri]BrdU[/font][font=宋体])掺入法、细胞周期蛋白检测法以及细胞大小分析法等,以期为读者提供全面的技术应用概览。流式细胞仪检测细胞增殖方法:[/font][/font][b][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]3H[/font][font=宋体](氚离子)掺入法[/font][/font][/b][font=宋体][font=宋体]原理:是在细胞[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成时,用[/font][font=Calibri]3H[/font][font=宋体]脱氧胸腺嘧啶核苷代替普通的脱氧胸腺嘧啶核苷掺入新合成的[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]中,增殖的细胞因为掺入[/font][font=Calibri]3H[/font][font=宋体]而具有放射性,通过定量检测样品细胞的放射性大小而反映细胞的增值活性[/font][/font][font=宋体][font=宋体]缺点:[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体])使用的是具有放射性的同位素,操作较为复杂,同时需要采取放射性保护措施 [/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体])低比例高活跃增殖和高比例低活跃增殖可能得到的是相同的结果,用此方法无法进行鉴别 [/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体])此方法无法进一步得到具有活性的增值细胞用于下一步的研究 [/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]) 此方法时间较短,无法检测加入前细胞的增殖情况,而且检测到放射性只能说明细胞[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成,而不能提供合成[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]的细胞是否进入增殖阶段的信息[/font][/font][b][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、相对计数法[/font][/font][/b][font=宋体]原理:将对照组和各实验组控制在相同条件下直接计数然后比较计数结果得到增殖结论[/font][font=宋体]注意点:[/font][font=宋体][font=宋体]对照组与实验组每种细胞所加浓度必须相同,每组至少设置[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]个复孔,这样每个孔可以得到[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]个细胞数,将[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]个复孔取平均值后就是这个组的结果。如果同时需要得到每孔目标细胞增殖后的绝对参数,在每孔细胞中加入[/font][font=Calibri]1*105PE[/font][font=宋体]标记的人工微球作为内参[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]收集各组的细胞于[/font][font=Calibri]EP[/font][font=宋体]管中,注意必须尽量将各组的所有细胞都收集起来。标记需要计数细胞的标志表型的荧光素偶联抗体,[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]℃静置[/font][font=Calibri]30min[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]PBS[/font][font=宋体]洗涤一次,洗去游离的抗体[/font][/font][b][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、示踪染料标记法[/font][/font][/b][font=宋体][font=宋体]示踪染料与细胞结合的方式:[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体])能够与细胞内的蛋白质上的氨基发生非特异性的共价结合 [/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体])能够非特异性地嵌入细胞膜的脂质双分子层中与细胞发生非共价性结合[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]原理:示踪染料的荧光信号都很强,当细胞分裂时,母细胞内的染料会被平均分配到子细胞中,细胞荧光信号会被减弱一半,所以通过检测减弱的、发射示踪染料荧光信号的细胞比例就可以判断细胞增殖的强弱。当荧光强度减弱到标记时的[/font][font=Calibri]1/2[/font][font=宋体]以及以下的细胞都是增殖后的细胞,这些细胞所占比例越高则代表细胞增殖越活跃[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]标记方法:[/font][font=宋体][font=宋体]①纯化增殖反应的目标细胞,将细胞的浓度调整为[/font][font=Calibri]1*106/ml[/font][font=宋体],加入[/font][font=Calibri]CFSE[/font][font=宋体],其标记浓度为[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]微摩尔[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]升。置于[/font][font=Calibri]37[/font][font=宋体]℃水浴中标记[/font][font=Calibri]15min[/font][font=宋体],在标记过程中每隔一段时间混匀细胞一次[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]②加入预冷、含有血清的培养基终止标记,在[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]℃冰箱中静置[/font][font=Calibri]5min[/font][font=宋体],离心沉淀[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]③用培养基再洗涤一次,尽量洗净未结合的游离的[/font][font=Calibri]CFSE[/font][font=宋体],然后将目标细胞静置在增殖体系中[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]BrdU[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]EdU[/font][font=宋体]掺入法[/font][/font][/b][font=宋体][font=Calibri]BrdU[/font][font=宋体]:[/font][font=Calibri]5-[/font][font=宋体]溴脱氧尿嘧啶核苷是胸腺嘧啶核苷的类似物,其特点是胸腺嘧啶环上[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]位[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]连接的甲基被溴取代,在细胞增殖[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成时可以与内源性的胸腺嘧啶核苷竞争掺入到新合成的[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]中,而[/font][font=Calibri]BrdU[/font][font=宋体]抗体可以特异性的识别[/font][font=Calibri]BrdU[/font][font=宋体],不与胸腺嘧啶核苷结合,所以可以用于检测细胞增殖[/font][/font][font=宋体][font=宋体]适用范围:适用于体内检测目标细胞的增殖,一般将[/font][font=Calibri]BrdU[/font][font=宋体]掺入小鼠的应用水中或经腹腔注射,经过一段时间后,取出目标细胞制成单细胞悬液然后用多聚甲醛固定细胞,后用打孔剂皂苷在细胞膜上打孔,最后标记荧光素偶联抗[/font][font=Calibri]BrdU[/font][font=宋体]抗体,目标细胞的[/font][font=Calibri]BrdU[/font][font=宋体]阳性细胞就是增殖的细胞,阳性比例越高,增殖越活跃。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]5[/font][font=宋体]、其他方法[/font][/font][/b][font=宋体][font=宋体]细胞周期法检测细胞增殖:流式细胞术能够检测细胞内[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]的含量,所以可以检测细胞周期。处于[/font][font=Calibri]S[/font][font=宋体]期的细胞,[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]的量处于二倍体和四倍体之间[/font][font=Calibri] [/font][font=宋体]处于[/font][font=Calibri]G2/M[/font][font=宋体]期时,[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]量为四倍体。处于[/font][font=Calibri]S[/font][font=宋体]期和[/font][font=Calibri]G2/M[/font][font=宋体]期的细胞比例越高说明细胞增殖越活跃[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]PCNA[/font][font=宋体]检测细胞增殖:[/font][font=Calibri]PCNA[/font][font=宋体](增殖细胞核抗原),在细胞核合成且只存在于细胞核内,是[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]聚合酶的辅助蛋白,所以与细胞[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]的合成关系密切,是反映细胞增殖状态的良好指标[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Ki-67[/font][font=宋体]检测细胞增殖:是一种与细胞增殖特异相关的核抗原[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]CD71[/font][font=宋体]检测细胞增殖:是转铁蛋白受体,表达于细胞的表面,该受体广泛表达于各种恶性肿瘤细胞表面,正常细胞表达较少,与肿瘤细胞的增殖密切相关[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/flow-cytometry-service][b]流式细胞检测技术服务[/b][/url],更多关于流式细胞仪检测细胞增殖详情欢迎咨询,详情可以关注:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/flow-cytometry-service[/font][/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州:蛋白与抗体的专业引领者,欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

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