色谱筛板

柱压问题在我们所熟悉的基本色谱分离方程式中，分离度R和柱效（N）、选择因子（a）以及容量因子k' 相关，和柱压无关。 但柱压（P）仍是HPLC方法中的最重要参数之一，因为柱压反映了色谱柱的内部状况。——色谱分离基本方程 现今能承受400 bar压力的HPLC泵很常见，色谱柱如在远低于上限的压力下正常运行，不需要我们重点关注；当柱压升高接近上限或者柱压有异常升高，往往意味着色谱柱出状况了，需及时进行维护和补救，严重时色谱柱就已报废了。本节将详细考察柱压问题并提出可行的解决方案。 柱压方程不难看出，对填充色谱柱，柱压与黏度 (η)、柱长 (L)和流速 (F)成正比，与填料粒径（d p）以及柱管半径（r）的平方成反比。K0是比渗透性系数，对填充床，其值约为0.001。（通过此公式可近似计算出给定色谱条件下的理论柱压。只有当新柱实际测得的柱压和理论柱压相差很大，才能说柱压存在问题。）黏度 (η)取决于流动相溶剂的选择，为降低柱压，反相色谱中倾向于选择低黏度的乙腈，而不是高黏度的异丙醇。当然选择时还需考虑溶剂强度、极性、分析物的溶解度以及和分析物兼容性等。柱长（L）增加可以提高分离度（R），流速（F）提高能加快分离，但都会导致柱压上升，选择确定这些运行参数时，需综合平衡和折中。填料粒径对柱压影响极大，dp降低一倍，柱压将增加4倍。UHPLC中采用的sub-2 μm填料，柱压超过普通HPLC泵的400Bar上限很多。提高柱温可降低黏度η，相应降低柱压。在梯度洗脱时，黏度随流动相组成的变化而改变，柱压也会处在不断变化中。对水/甲醇流动相体系，在55：45时，黏度和柱压有个极大值。内径的影响同样很大，根据线流速相同柱压相同的原则，4.6mm内径的色谱柱流速为1ml/min，约相当于在2.1mm内径色谱柱上的0.2ml/min流速，在10mm半制备色谱柱上的5ml/min，计算公式为v＝1.0ml/min x（内径r/4.6）2。所以在换不同内径色谱柱时，请及时调整流速，以免因高柱压损伤色谱系统。Tips柱压下降的原因一般是仪器系统的连接有泄漏，柱压不稳定一般认为是流路中有气泡或空穴，和色谱柱相关的柱压问题是一般都是柱压上升。色谱柱构造图1 Compress型不锈钢色谱柱的基本构造 图2 Modular Column基本构造通过观察色谱柱基本构造，不难想象，和柱压相关最大的是进口端筛板（inlet frit）以及其后面1-2cm长度的柱头填料。筛板上有比填料粒径小的小孔，筛板上的小孔或柱头填料的间隙被部分堵塞，是柱压上升的主要原因。有以下几类情况可能导致这种情况：1填料破碎和使用后有填料粉末生成填料破碎一般在装柱过程中发生，装柱压力过大或所选硅胶机械强度过低所至，设定柱压出厂标准可解决。而流动相中高pH值缓冲盐使硅胶溶解并重新形成填料粉末，则会堵塞出口端筛板。这种情况下反冲不起作用，只有更换后筛板，不过打开承压的后筛板，对柱床会有不好影响。2颗粒物堵塞引起柱压上升和对策可能堵塞进口端筛板（前筛板）和柱头填料间隙的颗粒物来源有：样品（制样时灰尘和滤纸等带入）；进样阀密封圈磨损；流动相（溶剂本身含有和配制过程进入）；液相仪器中泵阀密封圈的磨损；缓冲盐析出（一般在梯度运行和进样时盐的溶剂环境改变导致）；水和缓冲盐流动相内生长的细菌，也是颗粒物来源的一种，可堵塞筛板和填料间隙。应避免将这类流动相在室温下久放，可放入冰箱存放。对此，我们能做的预防措施和解决办法有：1) 预防措施过滤：样品（甚至标准品）和流动相过滤，既预防了筛板、柱头和毛细管堵塞，又能减少进样阀、活塞杆和截止阀等仪器关键部件的磨损。普通用0.45um孔径滤膜过滤样品和流动相，对使用2um以下填料的超高压柱的，可用0.20um滤膜。滤膜材质有再生纤维素、聚四氟乙烯、尼龙、硝酸纤维和醋酸纤维等，须根据和样品溶剂及分析物的适应性慎重选择。使用在线过滤器：在线过滤器内装有可更换的滤片，滤片孔径一般有2um和0.5um两种。安装位置有两个可选择：在进样器和色谱柱之间时，对样品和流动相中的颗粒物都有效；在泵和进样器之间，则只对流动相有过滤作用。使用保护柱：保护柱是缩小版的色谱柱，内含带填料的可更换的柱芯，安装在进样阀和色谱柱之间，用于防止色谱柱的化学污染为主，也有过滤颗粒物的作用。2) 故障排除反冲色谱柱：不连接检测器，直接将堵在前筛板上的颗粒物冲出排到废液瓶中。开始时反冲压力可低于正常使用压力，待颗粒物有冲出后，逐步提高冲洗压力。有时颗粒物已非常牢固嵌入到筛板内部，反冲不一定凑效，早反冲、勤反冲相对效果更好。有的厂商为避免堵塞，使用了较大孔径（2-5um）的前筛板，这种情况反冲会将填料冲出。换筛板：一般不建议这样做，因为换筛板会带走粘在筛板上的部分填料，使柱床的均一性受影响，导致柱效下降。不过如果反冲不能解决问题，也只能不得已而为之，要不然就要把色谱柱报废了。如果系统中不接色谱柱，柱压仍然高，说明泵出口到色谱柱之间的其它部位，包括进样器、在线过滤器和保护柱等有堵塞，可逐一排查。为了减少死体积，毛细管都做得尽可能的细，也可能被堵。3化学污染物引起柱压上升和对策来源同样是样品、流动相和系统，不过来源于样品的污染最普遍，特别是对复杂基体样品未经前处理或前处理不够的时候。化学污染物主要有：分子量很大的化合物、盐类、脂质、蜡类、油脂、腐殖酸、蛋白质等其它生物来源的物质。像盐类这样的保留能力极小的污染物会在死体积处很快从柱中洗脱出去，检测器一般对此类物质响应不大，有时表现为干扰峰、基线波动、斑点甚至负峰。保留能力中等的污染物，会被慢慢洗出色谱柱，表现为宽峰、基线馒头形波动和基线缓慢漂移。对强保留的污染物，一般流动相强度不足以将其从柱中洗出，会逐步在柱头累积。有时，累积在柱头的污染物可作为新固定相对分析物起作用，引起保留时间改变、峰拖尾和峰分叉等。污染物在柱头累积到一定程度，如果不采取措施，会堵塞填料间隙，引起柱压上升。最好的办法是选用合适的溶剂冲洗溶解这些物质，同时又不对填料本身有损害。如聚合物柱中累积的蛋白类污染物可用pH13-14的强碱溶液洗掉，但这种方法不适合硅胶基质色谱柱。1） 预防措施1. 制样时采用SPE固相萃取等方法，预先将色谱柱杀手类的污染物质清除掉；2. 连接保护柱:保护柱是分析柱的延伸，在填料类型和粒径上应于分析柱一致，才能最大限度起保护作用，又不影响色谱性能。一个设计和装填良好的保护柱，还可增加分析柱的分离效率。如果因某种原因需在保护柱中用不同的填料，也应选择比其所保护的分析柱保留能力弱的固定相，这时的保护柱完全用于截住强保留物质，类似于SPE小柱的功效。当保护柱柱芯保护功能用尽时，也不能说不可再清洗后复用，但价格低不值得去花这个时间。3. 经常对分析柱进行冲洗维护：流动相中不含缓冲盐:分析完成后，用甲醇（或乙腈）：水＝90：10反向冲洗色谱柱45min 流动相中含有缓冲盐:分析完成后，先用甲醇（或乙腈）：水＝10：90反向冲洗45min，然后再用甲醇（或乙腈）：水＝90：10反向冲洗色谱柱45min；（注意：甲醇（或乙腈）：水＝10：90容易长菌，使用时间不可超过3天）；2） 故障排除已经累积很多污染物，用甲醇或乙腈简单冲洗不奏效，推荐使用下面方法清洗反相柱100％甲醇---100％乙晴---75％乙晴/25％异丙醇---100％异丙醇---100％二氯甲烷---100％正己烷用每种溶剂冲洗至少10个柱体积，对于250mm×4.6mm的分析柱，合适的冲洗流速是1～2ml/min。最后用10柱体积的异丙醇过渡，然后回到原来的流动相体系。对受蛋白类污染的硅胶基质反相柱，纯有机溶剂如乙腈或甲醇不能溶解多肽和蛋白质。由有机溶剂、缓冲液和酸,有时还加上离子对试剂等组成的配方清洗效果极佳，譬如用三氟乙酸水溶液和三氟乙酸/丙醇溶液对柱子重复进行梯度洗来再生；Bhadwaj和Day试验了在250mm×46mm的柱子中注入100μL的三氟乙醇，再生效果良好。清洗硅胶、CN和Diol等正相柱建议方法：先用20柱体积50：50正己烷/氯仿冲洗，然后用甲醇、二氯甲烷或者100%醋酸乙酯冲洗。对油脂类物质，可用异丙醇清洗。

当您的色谱柱出现异常，您知道其中的原因和预防方案吗？今天小编就为您带来一份色谱柱的维修报告，让我们一起来看看反相液相色谱柱的常见污染现象，查找其中的原由，并学习多种可行的预防方案。01 填料污染异常表现：柱压变高，柱效变低，出峰峰形异常等。原因分析：1、中药类样品成分复杂，如前处理方式不当，则容易引起强保留成分积留在色谱柱入口端，导致色谱柱压力升高，柱效下降，峰形异常，或在色谱图中出现“鬼峰”。2、蛋白类样品积累：生物类样品易在柱头累积，导致柱压升高，柱效下降。3、其他：如胶状、絮状等样品通过过滤无法去除，也会积压在筛板和柱头端，引起柱压升高。4、流动相一次配置使用超过12小时变质，生成的絮状物导致色谱柱的污染。预防方案：1、中药等成分复杂的样品：开发合适的前处理方法，采用SPE小柱、萃取等方法，减少样品溶液中的易污染成分。2、蛋白类样品的积累：定期进行色谱柱的冲洗维护，推荐使用乙腈-水-三氟乙酸（50:50:0.1）作为洗脱试剂，低流速过夜冲洗。3、其他：如胶状、絮状等样品无法通过过滤去除，从而污染柱筛板和柱头的情况，建议最好在样品处理或方法工艺上去优化解决。4、使用保护柱，且在保护柱能力下降后，要及时地更换新的保护柱芯。柱压升高10%；柱效下降10%；分离度下降10%，均是需要更换保护柱芯的信号。5、对于检测复杂样品的色谱柱，建议定期按色谱柱说明书的异常再生方法进行色谱柱的再生维护，目的是定期去除柱头的强保留污染物质。6、12小时最长不超过24小时更换流动相以及储液瓶。02 填料板结异常表现：1、柱压升高，柱效低，峰形拖尾或前延等现象。2、色谱柱填料板结，打开色谱柱后，会发现，填料颜色不变，但填料成片状、块状、结晶等结块现象。原因分析：1、流动相配置时间过长，流动相长菌，或乙腈等有机相长时间放置产生絮状沉淀。2、如上述填料污染的原因中，样品成分复杂，容易被柱头端填料吸附，特别如样品中含有蛋白类物质，在柱头端填料进行富集，则易导致填料污染板结。3、其他：如胶状、絮状等样品通过过滤无法去除，样品进入色谱柱后积压在筛板和柱头端。预防方案：1、流动相按需配置，纯水流动相一次配置使用不超过24小时，其他含有有机相流动相一次使用不超过3天。2、检测复杂样品的色谱柱污染预防方案，可参见上文一中的填料污染预防。03 填料塌陷异常表现：一般会出现柱压高，柱效低，峰形拖尾或前延，出峰漂移等。此类损伤的色谱柱，异常再生或维修一般无法改善。原因分析：1、除了特殊说明，硅胶基质的色谱柱的长期使用pH范围是2-8，流动相或样品溶液的pH较高或较低，均会加快键合相的脱落和硅胶的破碎。2、柱温较高，加快了缓冲盐对硅胶基质的攻击，导致键合相脱落和填料塌陷。3、小基团键合相，本身的性质较易脱落，是属于正常的填料性质表现的现象。4、长期在高压条件下使用色谱柱等。预防方案：填料塌陷有两种填料异常的形式：键合相脱落和基质破碎。● 避免键合相脱落1、样品溶液和流动相的pH控制在长期适宜的使用范围内，样品溶液pH异常，使用保护柱，或者更换月旭LP（耐受pH≤2）系列或Xtimate 系列（耐受pH≥8）。2、根据色谱柱的键合相性质，选择合适的试剂作为流动相。如非极性键合相，避免使用非极性溶剂；中级性键合相，避免使用中等极性溶剂；极性键合相，避免使用极性溶剂。3、参考月旭液相色谱柱说明书中的存储条件。● 避免基质破碎1、除特殊说明，硅胶基质色谱柱使用的流动相和样品溶液pH不超过8。2、按照色谱柱说明书，选择适宜的柱温，避免高温。3、避免压力脉冲，高压等。需要注意，月旭的反相液相色谱柱一般建议正向使用，反接冲洗。但对于已经存在填料塌陷的色谱柱，不建议反接冲洗色谱柱，以免对色谱柱造成进一步的损伤。04 筛板堵塞异常表现：一般会出现柱压高，柱效低，峰形拖尾等。原因分析：1、使用的过滤膜材质不对或质量不好，引入了新的物质到流动相或样品中，导致筛板和填料污染。2、仪器系统长时间未经过彻底清洗。3、流动相中的缓冲盐和离子对试剂使用前后没有过渡和有效的冲洗，析出，堵塞筛板和填料。4、在梯度使用的过程中，有机相比例高于60%，变换速率过快，有缓冲盐析出。5、不当的运输引起的颗粒物脱落等堵塞筛板。预防方案：1、更换更加耐受、质量更好的过滤器材（请参考月旭微信公众号中关于过滤材质选择的文章）。2、泵后清洗溶剂和洗针溶剂定期更换，建议一周更换一次，仪器系统定期使用40度温水，有机溶剂等彻底清洗。3、色谱柱使用前后用过渡流动相过渡掉系统中高有机溶剂或者高盐相（参考月旭液相色谱柱说明书中新柱活化项下方法）。4、减缓流动相的变化速率，降低最高有机相的比例。5、新柱子严格按照说明书活化后使用，如活化时发现压力偏高，说明运输及保存过程中色谱柱保存溶液有损失，此时宜选用低流速过夜的方式活化色谱柱。如低流速过夜活化色谱柱后，压力依然偏高，则可能是不当运输引起了筛板堵塞，需要联系厂家寄回维修排查。

p　　液相色谱中的许多问题都能在谱图上反映出来，其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决 而其他的问题必须通过修改操作程序来解决。对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键。/pp　　一、拖尾峰/pp　　1. 筛板阻塞，柱子两头的过滤筛板如果堵塞，样品就会在筛板部分受阻而形成时间延迟，使得样品在柱后流出时峰型形成拖尾。需要通过反冲色谱柱，或者更换筛板。/pp　　2. 色谱柱塌陷，是指色谱柱由于其它原因引起了柱效率丧失，不能对物质形成保留，使得物质不在固定相上保留而随流动相流出，但是又还有一点柱效，因此形成拖尾。需要重新填充色谱柱或者更换色谱柱。/pp　　3. 有污染，即样品不在同一起跑线起跑，从后面开始跑得到达终点稍晚，表现出拖尾。更换色谱柱或者采用有机溶剂梯度洗脱1h以上，以冲洗柱子。/pp　　4. 流动相PH值选择错误，如某PH下有的样品存在分子型和离子型的动态平衡，离子型的陆续向分子型转化就会表现出拖尾。调节PH值可抑制分子解离，改善拖尾，对于碱性化合物，相对较低的PH值更有利于得到对称峰。/pp　　二、前沿峰/pp　　1. 样品过载，被保留的样品在正常出峰时间前陆续出来，形成前沿峰。降低样品含量。/pp　　2. 样品溶剂选择不恰当，当样品溶剂的洗脱能力大大强于流动相时会出现前沿峰，例如，在反相色谱中用已腈做样品溶剂，而流动相的洗脱力较弱时会出现前沿峰。选择流动相或者接近流动相的比例作为样品溶剂。/pp　　3. 色谱柱损坏，色谱柱柱效损失，不能对物质形成保留。更换色谱柱。/pp　　4. 在大峰前有小峰出现，假象前沿峰，即大峰前包埋了没有分开的小峰。调整流动相洗脱梯度。/pp　　三、基线漂移/pp　　1. 柱温波动，即使是很小的温度变化都会引起基线的波动，通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。使用柱温箱，控制好柱子和流动相的温度，在检测器之前使用热交换器。/pp　　2. 流动相不均匀，流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。使用HPLC级的溶剂，流动相在使用前进行脱气处理。/pp　　3. 流通池被污染或有气体。用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸(不要用盐酸)。/pp　　4. 流动相配比不当或流速变化。更改配比或流速，为避免这个问题可定期检查流动相组成及流速。/pp　　5. 样品中有强保留的物质，以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线。使用保护柱，如有必要，在进样之间或在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子。/pp　　四、出现宽峰/pp　　1. 色谱柱污染或失效，造成塔板数降低。更换同样类型的色谱柱，如果新柱子可以提供对称的色谱峰，则用强溶剂冲洗旧柱子。/pp　　2. 柱子与检测器之间的管路太长或管路内径太大。更换内径较小的短管路。/pp　　3. 检测器对反应时间或池体积响应过大。减少响应时间或使用更小的流通池。/pp　　五、基线噪音/pp　　1. 在流动相、检测器或泵中有空气(尖锐峰)。流动相脱气，冲洗系统以除去检测器或泵中的空气。/pp　　2. 漏液。检查管路接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要，更换泵密封。/pp　　3. 流动相混合不完全。用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂。/pp　　4. 温度影响(柱温过高，检测器未加热)。使用柱温箱，减少温度差异或加上热交换器。/pp　　5. 在同一条线上有其他电子设备(偶然噪声)。断开LC、检测器和记录仪，检查干扰是否来自于外部，加以更正。 采用精密级稳压电源。/pp　　六、分离度不够/pp　　1.流动相梯度洗脱设置不合理。优化梯度洗脱程序。/pp　　2.流动相污染或变质(引起保留时间变化)。重新配置流动相。/pp　　3. 保护柱或分析柱阻塞。去掉保护柱进行分析，如果必要则更换保护柱 如果分析柱阻塞，可进行反冲 如果问题仍然存在色谱柱可能被强保留的污染物损坏，建议使用恰当的再生程序 如果问题仍然存在，进口可能阻塞了，更换入口处的筛板或更换色谱柱。/p

液相色谱常见问题及处理方法 HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法 1、样品量不足，解决办法为增加样品量 2、样品未从柱子中流出。可根据样品的化学性质改变流动相或柱子 3、样品与检测器不匹配。根据样品化学性质调整波长或改换检测器 4、检测器衰减太多。调整衰减即可。 5、检测器时间常数太大。解决办法为降低时间参数 6、检测器池窗污染。解决办法为清洗池窗。 7、检测池中有气泡。解决办法为排气。 8、记录仪测压范围不当。调整电压范围即可。 9、流动相流量不合适。调整流速即可。 10、检测器与记录仪超出校正曲线。解决办法为检查记录仪与检测器，重作校正曲线。 为什么HPLC柱柱压过高 柱压过高是HPLC柱用户最常碰到的问题。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的问题，您可按下面步骤检查问题的起因。 1、拆去保护预柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压仍高，再检查； 2、把色谱柱从仪器上取下，看压力是否下降，否则是管路堵塞，需清洗，若压力下降，再检查； 3、将柱子的进出口反过来接在仪器上，用10倍柱体积的流动相冲洗柱子，（此时不要连接检测器，以防固体颗粒进入流动池）。这时，如果柱压仍不下降，再检查； 4、更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质，正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。若柱压还高，请与厂商联系。 一般情况下，在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高的问题，SGE提供的Rheodyne 7315型过滤器就是解决这一问题的最佳选择。 液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么？ 1、筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子。 2、存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子 如何解决HPLC进行分析时保留时间发生漂移或急速变化 漂移现象 1、温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定 2、流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等 3、柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡 快速变化现象 1. 流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定 2、泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。 3、流动相不合适，解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合 HPLC 仪器问题 1、 我的HPLC泵压明显的偏高，请问可能的原因？ 答：流速设定过高；流动相或进样中有机械杂质，造成保护柱、柱前筛板或在线过滤器阻塞；流动相粘度过大；柱温过低；缓冲盐结晶；压力传感器故障。 2、 基线不稳，上下波动或漂移的原因是什么，如何解决？ 答：a.流动相有溶解气体；用超声波脱气15-30分钟或用充氦气脱气 　　b.单向阀堵塞；取下单向阀，用超声波在纯水中超20分钟左右，去处堵塞物 　　c.泵密封损坏，造成压力波动；更换泵密封 　　d.系统存在漏液点；确定漏液位置并维修 　　f.柱后产生气泡；流通池出液口加负压调整器 　　g.检测器没有设定在最大吸收波长处；将波长调整至最大吸收波长处 　　h.柱平衡慢，特别是流动相发生变化时；用中等强度的溶剂进行冲洗，更改流动相时，在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。 3、 接头处为何经常漏液，如何处理？ 答：接头没有拧紧；拧松后再紧，手紧接头以手劲为限，不要使用工具，不锈钢接头先用手拧紧，再用专用扳手紧1/4-1/2圈，注意接头中的管路一定要通到底，否则会留下死体积。接头被污染或磨损；建议更换接头。接头不匹配，建议使用同一品牌的配件。 4、 进样阀漏液是如何造成的？ 答：a.转子密封损坏；更换转子密封 　　b.定量环阻塞；清洗或更换定量环 　　c.进样口密封松动；调整松紧度 　　d.进样针头尺寸不合适，一般是过短；使用恰当的进样针（注意针头形状） 　　e.废液管中产生虹吸；清空废液管 谱图问题 1、 问：造成峰拖尾的原因是什么，如何消除？ 答：a.筛板阻塞；反冲色谱柱、更换进口筛板 　　b.色谱柱塌陷；填充色谱柱 　　c.有干扰物质的存在；使用更长的色谱柱、改变流动相或更换色谱柱 　　e.流动相PH值不合适；调整PH值，对于碱性化合物，低PH值更有利于得到对称峰 　　f.样品与填料表面的溶化点发生反应；加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂或更改色谱柱 2、 问：造成峰分叉的原因是什么，如何消除？ 答：保护柱或分析柱污染；取下保护柱再进行分析。如果必要更换保护柱。如果分析柱阻塞，拆下来清洗。如果问题仍然存在，可能是柱子被强保留物质污染，运用适当的再生措施。如果问题仍然存在，入口可能被阻塞，更换筛板或更换色谱柱。样品溶剂不溶于流动相；改变样品溶剂，如果可能采取流动相作为样品溶剂。 3、 问：K值增加时，拖尾更严重，这是为什么？ 答：反相模式，二级保留效应； 　　a.加入三乙胺（或碱性样品） 　　b.加入乙酸（或酸性样品） 　　c.加入盐或缓冲剂（或离子化样品） 　　d.更换一支柱子 4、 问：保留时间的波动有几种可能的原因？ 答：温控不当；调节好柱温。流动相组分变化；防止流动相蒸发、反应等，做梯度时尤其要注意流动相混合的均匀。色谱柱没有平衡；在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱。 液相色谱常用符号与术语表 ACN 乙腈 Acetonitrile AUFS 满量程的吸光度单位 Absorbance units, full scale As 峰不对称因子 B 二元流动相中的强溶剂；例如：反相HPLC的甲醇/水混合液中的甲醇 BSA 牛血清白蛋白（一种蛋白质） Bovine serum albumin CAF 咖啡因（中性溶质） Caffeine CRF 色谱响应因子 Chromatographic response function；色谱图总分离度的定量指标 dc 色谱柱内径（cm） DMOA 二甲基辛胺 Dimethyloctylamine DNB 2,4-二硝基甲酰（基） 2，4-Dinitrobenzoyl dp 色谱柱填料的粒度（cm） DRYLAB 液相资源公司（LC Resources INC.)的计算机模拟软件。DRYLAB I用于等度预测，DRYLAB G用于梯度预测 F 流动相的流速（ml/min） FC-113 1，1，2-三氟-1，2，2-三氯乙烷 GPC 凝胶渗透色谱法 Gel-permeation chromatography HA 酸性溶质，能电离出A- Hex 己烷 Hexane hr 二相邻谱带之间的谷高 HVA 高香草酸 Homovanillic acid h&rsquo 峰高 h1,h2 相邻谱峰1和谱峰2的峰高 IEC 离子交换色谱法 Ion-exchange chromatography IP 离子对 Ion-pair IPC 离子对色谱法 Ion-pair chromatography J 色谱峰强度参数 K&rsquo 所给谱峰的容量因子，k&rsquo =(tR-t0)/t0=tR&rsquo /t0，tR=t0(1+k&rsquo ) k 梯度洗脱过程中，某溶质的k&rsquo 的平均值或有效值 kw 以水做流动相k&rsquo 的外推值 k1,k2 相邻谱峰1和谱峰2的容量因子 L 色谱柱长度（cm） Lc 检测器流动池光路的长度（cm） M 溶质的分子量 MC 二氯甲烷 Methylene chloride MDST 混合设计统计技术 Mixture-design statistical technique；一种优化流动相的软件 MeOH 甲醇 Methanol MTBE 甲基叔丁醚 Methyl-t-butyl ether MW 溶质的分子量 N 色谱柱塔板数 NAPA N-乙酰普鲁卡因胺 N-Acetylprocainamide（碱性溶质） N0 检测器的基线噪音 ODS 十八烷基硅烷 Octadecylsilyl P 色谱柱的压力降[通常以巴（bar）表示，也用psi；另外，也用作柱极性参数 PA 普鲁卡因胺 Procainamide（碱性物质） PAH 聚芳香烃 Polyaromatic Hydrocarbon PESOS 优化流动相的计算机软件（美国Perkin-Elmer产品） pKa 溶质酸性常数的负对数；当pH=pKa时，溶质中有一半是电离的 Rk 保留值范围，Rk=（最末谱峰k&rsquo ）/（最初谱峰k&rsquo ） RRM 相对分离度图（通常N=10000） Rs 相邻二谱峰的分离度 S 当流动相中的%B改变时，测量溶质保留值的变化速率的参数 SAL 水杨酸 Salicylic Acid SEC 尺寸排阻色谱法 Size-exclusion chromatography S/N 信噪比 Signal to noise ratio t 分离时间（min）（样品进样时t=0） tp 梯度系统的滞后时间（min） TBA 四丁基铵离子 Tetrabutylammonium ion TEA 三乙胺 Triethylamine THF 四氢呋喃 Tetrahydrofuran tk 在用于校正等度洗脱溶剂强度的流动相离开梯度混合器时，梯度洗脱的时间 TLC 薄层色谱法 Thin-layer chromatography TMA 四甲基铵 Tetramethylammonium（盐） TMS 三甲基硅烷 Trimethylsilyl t0 色谱柱的死时间（min） tR 溶质的保留时间（min） tG 梯度时间（min），即梯度开始至结束的时间 t1,t2 相邻谱峰1和谱峰2的保留时间（min） ti 色谱图中第一峰的保留时间（min） tf 色谱图中最末峰的保留时间（min） △tg tf-ti tx (tf-ti)/2 UV 紫外光 Vm 色谱柱的死体积（mL），Vm=t0F VMA 香草扁桃酸 Vanillymandelic acid wm 化合物的进样量 w1,w2 相邻谱峰1和谱峰2于半峰高处（W1/2）的宽度（min） W1,W2 相邻谱峰1和谱峰2的基线宽度（min） W1/2 半峰高处的谱带宽度 xd,xe,xn 溶剂选择参数，分别用于测定溶剂的酸度、碱度和偶极性的程度 ? 分离因子，?=k2/k1 △? 梯度洗脱期间流动相成分的变化 ?o 溶剂强度参数 ? 化合物的克分子吸收系数 ? 流动相的粘度（Pa?s) ? 流动相中强溶剂的体积份数%B 二元流动相中强溶剂的体积百分比（%v） 液相色谱法简介 气相色谱不能由色谱图直接给出未知物的定性结果，而必须由已知标准作对照定性。当无纯物质对照时，定性鉴定就很困难，这时需借助质谱、红外和化学法等配合。另外大多数金属盐类和热稳定性差的物质还不能分析。此缺点可高效液相色谱法来克服。在经典液相色谱的基础上，引入了气相色谱的理论与技术，在70年代初建立了高效液相色谱分析法（以HPLC表示）。在常压下操作的液相色谱，分离一个样品往往长达几小时至几十小时，因此工作效率很低。人们曾对这种经典液相色谱法试用了柱前加压或柱后减压的办法来提高流速，以缩短分离时间，但是结果失败了。根据液相色谱理论，因为随着载液（流动相）流速的提高，板高则增大，所以柱效会显着降低。随着生产技术的提高，人们制成了细小（10?m）而高效的填充物，从而使柱效大大提高。但是随着填充物粒度的减小，柱压降显着增大，为了得到合理的载液流速，使用了高压；输液泵，使流速达到1~10mL/min。从而使分析一个多组分样品只需几分钟到几十分钟时间。随着高效固定相、高压泵和高灵敏度检测器以及电子技术和计算机技术的应用，70年代以业逐步实现了液相色谱分析的高效、高速、高灵敏和自动化操作。因此人们常称它为高效液相色谱或现代液相色谱，以区别于经典液相色谱。高效液相色谱法的分类与经典液相色谱法一致。按固定相的聚集状态不同分为液固色谱法和液液色谱法。按分离原理不同分为吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱和凝胶色谱法四类。 高效液相色谱所用基本概念： 保留值等色谱分析有关术语，以及分配系数、分配比、塔板高度、分离度、选择性等方面均与气相色谱相一致；高效液相色谱所用基本理论：塔板理论与速率理论也与气相色谱一致。因液相色谱以液体代替气相色谱中的气体作流动相，则速率议程H=A+B/?+C?。式中：纵向扩散项（分子扩散项）B/?对板高的影响与气相色谱不同，由于液相色谱中组分分子在流动相中的扩散系数Dm仅为气相色谱中的万分之一，因此纵向扩散项对板高的影响可以忽略不计。于是影响液相色谱的主要因素是传质项Cu。由图14&mdash 可知，气相色谱（GC）的流动相流速u增大时，板高H显着增大（即柱效显着降低），而液相色谱（LC）的流速增大时，板高增大不显着（即柱效降低不显着）。这说明高效液相色谱也有很高的分离效能，此外，气相色谱的载气权数种，其性质差别也不大，对分离效果影响也不大。而液相色谱的载液种类多，性质差别也大，对分离效果影响显着。因此流动相的选择很重要，并且在选择流动相对应注意以下几点：流动相对样品有适当的溶解度，但不与样品发生化学反应，也不与固定液互溶；流动相的纯度要高（至少分析纯）、粘度要小，以免带进杂质和组分在流动相中扩散系数下降；流动相应与所用检测器相匹配，不应对组分检测产生干扰作用。高效液相色谱不但具有高效、高速、高灵敏度的特点，还由于它的流动相（载液）种类比气相色谱的流动相（载气）多，因此可选用两种或多种不同比例的液体作流动相，从机时可提高选择性。此外，液相色谱的馏分比气相色谱易于收集。便于为红外、核磁等方法确定化合物结构提供纯样品。由于高效液相色谱法具有以上特点，它适于分离、分析沸点高、热稳定性差、分子量大（大于400）的气相色谱法不能或不易分析的许多有机物和一些无机物，而这些物质占化合物总数的75~80%。因此它已广泛用于核酸、蛋白质、氨基酸、维生素、糖类、脂类、甾类化合物、激素、生物碱、稠环芳烃、高聚物、金属螯合物、金属有机化合物以及多种无机盐类的分离和分析。但是，高效液相色谱的固定相的分离效率、检测器的检测范围以及灵敏度等方面，目前还不如气相色谱法。此外对于气体和易挥发物质的分析方面也远不如气相色谱法，因此高效液相色谱法和气相色谱法配合使用可互相取长补短，相辅相成。 1.分离原理 凝胶色谱，又称空间排阻色谱。它是利用某些凝胶对混合物各组分因分子量不同，其阻滞作用也不同而进行分离、分析的方法。凝胶色谱的分离要理和其它色谱法不同，它类似于分子筛的作用，但凝胶的孔径要比分子筛大得多，一般为几百至几千埃。色谱柱内填充具有一定大小孔穴的凝胶。当样品进入色谱柱后，不同大小的样品分子（图14&mdash 2中以黑点表示）随流动相沿凝胶颗粒（图14&mdash 2中以空心圈表示）外部间隙和凝胶孔穴旁流过，体积在的分子因不能渗透到凝胶孔穴里而得到排阻，因此较为顺利地通过凝胶柱而较早地被流动相冲洗出来。中等体积的分子产生部分渗透作用，小分子可渗透到凝胶孔穴里去而受阻滞，因有一个平衡过程而较晚地被流动相冲洗出来。这样，试样组分基本上按分子大小受到不同阻滞而先后流出色谱柱，从而实现分离目的。光凝胶色谱采用水溶液作流动相进，称为过滤凝胶色谱（HFC），而用有机溶剂为流动相时，称为凝胶渗透色谱（GPC）。 2．固定相 凝胶色谱的固定相凝胶，是含有大量液体（一般是水）的柔软而富于弹性的物质，是一种经过交联而具有立柱网状结构的多聚体。根据凝胶的交联程度和含水量的不同，分了软质、半硬质和硬质三种。软质凝胶（如葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶等）交联度低，膨胀度大，容量大，可压宿，不能用于高压（使用压力低于3.5kg/㎝2或更低），主要用于含水体系的常压凝胶色谱，半硬质凝胶（如苯乙烯一二乙烯基苯交联共聚凝胶），容量中等，渗透性较高，压力可用到70kg/㎝2。适用于非水溶剂流动相；硬质凝胶（如多孔硅胶、多也玻球等），膨胀度小，不可压缩，渗透性好，可耐高压，适于高流速下操作。 3．流动相 在凝胶色谱中，为提高分率效率，多采用低粘度、与样品折光指数相差大的流动相。常用的流动相有苯、甲苯、邻二氯苯、二氯甲烷、1，2一二氯乙烷、氯仿、水等。 高效液相色谱仪操作步骤： 1)、过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。 2)、对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。 3)、打开HPLC工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。 4)、进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。 5)、有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10 ml/min。 6)、调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。 7)、设计走样方法。点击file，选取select users and methods，可以选取现有的各种走样方法。若需建立一个新的方法，点击new method。选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。选完后，点击protocol。一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2-5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading-inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。 8)、进样和进样后操作。选定走样方法，点击start。进样，所有的样品均需过滤。方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。 9)、关机时，先关计算机，再关液相色谱。 10)、填写登记本，由负责人签字。 注意事项： 1)、流动相均需色谱纯度，水用20M的去离子水。脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。 2)、柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要让液体过柱子。 3)、所有过柱子的液体均需严格的过滤。 4)、压力不能太大，最好不要超过2000 psi。

什么是色谱1903年，俄国植物学家茨维特 ( Tswett )在波兰的华沙大学研究植物叶片的组成时，用白垩土(碳酸钙)作吸附剂，分离植物绿叶的石油醚萃取物得到黄色、绿色和灰黄色彼此分离的六个色带。茨维特把这样形成的色带叫做“色谱” ( Chromatographie )，1906年，茨维特以此名称在德国植物学杂志上发表，英译名为 ( Chromatography )。在这一方法中把玻璃管叫做“色谱柱”，碳酸钙叫做“固定相”，纯净的石油醚叫做“流动相”。现在把茨维特开创的方法叫液—固色谱法 ( Liquid-Solid Chromatography )。什么是色谱技术虽然在1906年，茨维特就在植物杂志上将色谱带入了人们的视野，但是，很遗憾，在此后的将近30年的时间里，这项重要的发明无人问津，直到1931年德国的Kuhn和Lederer才重复了茨维特的某些实验，用氧化铝和碳酸钙分离了α、β、γ－胡萝卜素，色谱技术这才迎来了生机。色谱技术又称层析分离技术或色层分离技术，是一种分离复杂混合物中各个组分的有效方法。它是利用不同物质在由固定相和流动相构成的体系中具有不同的分配系数，当两相作相对运动时，这些物质随流动相一起运动，并在两相间进行反复多次的分配，从而使各物质达到分离。如今，色谱技术广泛应用于工业中尤其是食品药品行业，高效液相色谱也逐渐成为了食品药品实验室检测部门的标配。在制药行业，色谱层析制备柱也成了抗体、糖蛋白、抗生素等产品最主要的生产设备。色谱技术的核心是什么色谱技术的快速进步给各行各业都带来了井喷式地发展，然而它的核心又是什么呢？首先，我们通过一张图，来了解一下色谱技术的发展史。1970年代以来硅胶填料发展史由上图可见，每一次色谱技术的发展，都是建立在层析材料发展的基础上的，自1903年茨维特 ( Tswett )用碳酸钙作为吸附剂分离了植物色素，色谱填料经历了纤维素 → 葡聚糖凝胶 → 硅胶的不断变化。虽然硅胶填料上世纪60年代就已经如今出现了，但是，由于硅胶的特殊性质，使其一直是主流填料，变化的只是形状和大小。为什么硅胶的粒径和大小的变化会左右色谱技术的发展呢，首先我们通过下面一张表来了解一下每种粒径的硅胶适用的范围：硅胶粒径大小直接影响到色谱分析效果, 粒径越小分离效果越好，反压也越大。色谱分离从常压到高压再到超高压使得样品分析时间从一个多小时缩短到几十分钟再到几分钟是由于色谱填料越来越小的结果。理想的硅胶微球应该是什么样子的经历了由无定形到多分散球形的变化之后，上世纪90年代，单分散小粒径大孔聚合物色谱填料出现了并在的商品化给色谱填料带来了革命性变化，从此，单分散微球进入了人们的视野，自此精确控制硅胶色谱填料粒径大小和粒径分布及调节孔道结构和机械强度即单分散硅胶成为了硅胶色谱填料的研究重点。 所谓单分散，通常指微球的粒径或直径大小呈均一分布，单分散微球在直径、孔道、表面性质及色谱峰形上具有一致性。目前市场上的填料，虽然称为单分散，但是在电镜下的差距很大，我们以10微米100埃口径硅胶为例，在电镜下比较各家厂家的产品。 由上图可见，虽然各家公司都宣称自己的产品是单分散，但是在电镜下，产品的优劣还是一览无余。除了苏州纳微科技有限公司的微球，日本和瑞典公司的微球粒径大小差异很大，表面也比较粗糙，相比之下，纳微微球的大小比较均一。单分散微球的优点单分散硅胶之所以是目前硅胶色谱填料研究的重点，是因为它有一下几个优点： 1. 装柱容易、反压低、流速快、柱效高、不易堵筛板2. 线性流速均匀、洗脱集中、洗脱体积少3. 柱床稳定，使用寿命长4. 重复性好 首先在工业生产中，生产效率一直是工厂的重中之重，所以流速高，柱效高，不容易堵塞筛板就减少了出现故障的频次和几率，极大地提高了生产效率； 其次，集中洗脱，大大降低了洗脱次数和时间，同时也降低了时间和耗材成本；花费了同样地成本，但是使用寿命却更长，对企业来说，减少了不必要的支出；当今工业生产中，产量已经不是唯一重要地数据了，企业对质量地重视程度也越来越高，因此，重复性好地填料产出的产品质量也比较稳定，能够减少企业很多不必要的麻烦。

固体颗粒污染，pH超标，强保留物质污染是色谱柱使用过程中最常遇到的影响色谱柱寿命的三大“杀手”。固体颗粒物质固体颗粒物质——空气中的粉尘、流动相中的固体颗粒、样品中的固体颗粒、泵和密封圈的磨损以及管路老化等都是固体颗粒物质的来源，众多来源让人防不胜防，特别是泵和密封圈的磨损更是让人无处可逃，液相厂家也莫可奈何。使用保护柱和在线过滤器是可以防止此等固体颗粒物质的有效途径，能保色谱柱无忧，毕竟保护柱可以反向高流速将固体颗粒物质冲下，而色谱柱不行。单纯的固体颗粒污染采用在线过滤器更好，简单的计算一下成本就明白，一个筛板总比保护柱芯便宜吧。而对于复杂样品和多源头污染，保护柱芯则更能否发挥其优势，大大提高色谱柱的使用寿命。pH超标目前硅胶基质的色谱柱是主流，在市面上买到的98%以上都是硅胶基质的色谱柱，因为硅胶基质的色谱柱柱效高、质量稳定性好，以硅胶基质为主流确实无可厚非。但是，硅胶基质的色谱柱也有其脆弱之处，首先，硅胶在碱性条件下是容易被侵蚀、溶解的，所以pH应在7.0以内使用，此外，C18色谱柱的填料是在硅胶颗粒上键合上了C18长链，C18长链与硅胶颗粒是以Si-O-Si键的形式连接的，Si-O-Si键容易在pH2的条件下断裂。因此硅胶基质的色谱柱通常须在PH在2-7的范围内使用，虽然有些厂家的色谱柱经过在硅胶颗粒表面上的杂化后再接C18长链，可使色谱柱在此范围之外具有较好的使用寿命，但只是延缓侵蚀和溶解，而不是拒止，因此仍会缩短色谱柱的使用寿命。如果只是样品溶液的pH超标，那么用保护柱可以有效的保护色谱柱（保护柱填料和色谱柱填料要相同保护效果最好），毕竟进样的量大多是1～20ul，量很小，损坏填料的物质可以被保护柱提前消耗掉，等样品溶液到达柱子的时候破坏威力已是强弩之末，因此保护柱对此类样品溶液pH超标是能有效延长色谱柱的使用寿命的。但是，如果是流动相的pH超标，就请换pH范围更广的柱子吧，此类流动相pH超标的情况保护柱是没法保护你的柱子的。强保留物质成份复杂的样品比如中药，做中药样品的时候色谱柱使用寿命通常不会太长，缩短使用寿命的最大元凶就要数强保留物质了。每一次做中药样品的客户发回色谱柱维护的时候，通常都会发现柱压高的状况，而且打开柱头几乎都会发现柱前端填料颜色或黑或黄，有时候深挖5mm也仍见颜色异常。对于色谱柱的维护而言5mm的深度已经是非常忌讳的了，需特别经验丰富的人才敢挖这么深，一般不会超过2mm的。强保留物质也是防不胜防，因为这是样品中自带的成份，我们要么就在前处理上加上诸多耗钱耗力的程序，否则你毫无办法，即使再号称超长使用寿命的色谱柱也无法抵挡它的攻势，毕竟强保留物质对所有品牌柱子的污染都是平等的。其实此类杀手是最适合的做法还是使用保护柱，一般的保护柱填料都有10mm长，比深挖5mm的办法来处理色谱柱而言，换个保护柱芯则要简单省力得多。

1、网上对柱子是否可以反冲一直有争论，那什么样的柱子可以反冲，什么不可以?反冲后是正着用，还是反着用?具体到各型号柱子不仅是ODS柱，其他如正向柱、氨基柱、离子交换柱等，最好都有解释。　　答：一般的正相、反相柱应该都能反冲，只有两端筛板孔径不对称的柱子不能反冲，不过目前这样的柱子已经比较少见了。反冲是为了把柱头的污染物冲洗掉，反冲后还是正着用比较好，以免柱子的两头都被污染。我们一直提倡的是：正向使用，反向冲洗。　　2、我在做方法开发的时候，用乙腈和水作为流动相，在调整梯度的时候发现，刚开始用60%乙腈，RT为2.5分钟，调到40%乙腈，RT没有变化，30%也没有变化，一直调到20%的时候，RT突然变到了约13分钟，请问这是什么原因?我用的是离子交换柱。　　答：离子交换柱的保留时间主要由洗脱液的离子强度和pH决定，你现在讲的比较简单，需要把你的方法说的详细一点才能做具体的分析。譬如分析物是什么情况，其含有极性电离基团和非极性基团是什么性质?离子交换柱是聚合物基质还是硅胶基质?水相是什么缓冲盐?对于一根常用的c18柱，拿到一根新柱的时候应该怎样进行活化及维护?为什么要这样做?　　3、对于一根常用的c18柱，拿到一根新柱的时候应该怎样进行活化及维护?为什么要这样做?　　答：新柱活化，实际上是一个平衡的过程，除了用流动相平衡外，有时候还必须用所测样品对新柱进行平衡，特别是测定分子量比较高的多肽，尤其重要。因为分子量高的物质分子，扩散速度慢，平衡所需时间也相应较长。具体平衡方式也很简单，多进几次样品，直到峰面积和保留时间稳定，再进行正式进样测定。如果要加快平衡时间，把前面用来平衡的进样样品浓度加大，或者不等洗脱完成，连续进样多针。用待测物对新柱平衡，目的是将硅胶基质填料表面具有非特异性吸附的位点的吸附能力饱和掉。　　4、测定多肽，一般采用什么柱子?流动相是乙腈和水，还有微量的TFA。特别是像类似三肽的短肽，应该怎么选择柱子?　　答：分子量不高的多肽一般选用常规C18柱就能测定，也有用离子交换柱、水性C18柱和Hilic亲水作用柱的。　　5、氨基柱在进酸性样品时，很伤柱子，如使用一段时间后，柱效降低，峰形改变，如何恢复?　　答：氨基柱测酸性样品，应该是用氨基柱的HILIC模式。酸的存在可能会使略带负电荷的氨基官能团质子化，导致使用一段时间后对于某些类的分析物保留性质有所改变或表现在柱效下降。建议：用5-10倍的柱体积的含0.5-1.0%NH3的乙腈-水(50:50)溶液冲洗该柱(冲洗后当然要再用不含碱的流动相洗去多余氨)，之后再进行分析这类酸性分析物时建议在流动相中略微添加少许氨如0.1%。　　6、色谱柱的技术都有哪些?比如封尾等，这些技术在应用时都体现在哪里?　　答：色谱柱技术包括填料技术和装柱技术，填料技术自不待言，填料的好坏对色谱柱分离性能和选择性有决定性影响。装柱技术也没有想象中的这么简单，不同固定相、不同粒径、不同柱管内径和长度，装柱工艺都有所不同，要装出紧密、稳定、均一的柱床，更多是一门艺术，需要经验积累。国内和国外想比，我认为色谱柱的差距在于：国内公司以前都不会自己开发填料，一般买国外现成填料装柱，买到的填料质量控制权不在自己手里。另外因为装柱历史短，经验积累少，装柱工艺也没有完全达到国外水平。另外，对色谱柱性能很关键的基础材料-----裸硅胶，国产的还不过关，在纯度、粒径和孔径的均一性方面和国外产品相比，差距很大。　　7、色谱柱技术的差距在哪里?　　答：液相色谱柱装填实际上是有一定技巧和程序，可能还有一些运气。一般使用高压匀浆方法装填。也就是能让填料在溶剂内均匀地悬浮。然后用瞬间高压压实，这实际上用到了不同比例的匀浆液体，和合适的压力。压力太大，颗粒破碎，压力太小，塔板数少。同时压力需要稳定，不然分布不均，拖尾严重。同时还有头上平整程度。套上套，就可以用了。　　8、柱子在什么情况下可以清洗一下筛板呢?原来也讨论过这个问题，我也拆下来清洗过，但我看到柱前段的污染更甚，于是就用刀片刮了刮，然后把清洗好的筛板安装上去。问题解决了，但使用寿命会不会减少呢?　　答：柱头污染了，就取出污染的，再装一些填料。因为加入你刮了些填料，那么微观的塔板数就少了。假入你刮得不多，仅表面，可能就是一些脏物，所以，问题解决。但是今后还会有同样问题，再挂，那么不小心刮，影响柱效。建议还是装一个预柱。　　9、如果柱子取下来放置一段时间，需要做什么保护吗?　　答：对一般的反相柱，也就是洗干净后放到纯甲醇(乙腈)或者是80%左右的甲醇(乙腈)水中，然后用堵头塞紧柱两头，以免保存溶剂挥发，应该不需要做特殊的保护。　　10、流动相中加入适量的四氢呋喃可以改善峰形的机理是什么?　　答：《高效液相色谱方法及应用》于世林编著的上面说：甲醇为质子给予体、乙腈为质子接受体、四氢呋喃是偶极溶剂，应该除了极性影响，还有另外的影响因素，至于分离机理，还是比较复杂的，不能看成是个万能方法。　　11、关于色谱柱的填装问题!我个人认为现在色谱柱的填装一般有3种情况：1.国外生产填料并填装完成成品卖到国内 2.国外生产填料，国内填装销售 3.国内生产填料，国内填装销售。一般情况下，第1种情况卖的最贵，也质量最好!可是我就不明白了：如果是填料的生产很复杂的话，那么填装上国内也跟不上去吗?为什么换在国内填装就会出现或多或少的一些小问题呢?　　答：国内填装会出现质量小问题，和国内目前普遍做事没有国外严谨有关吧。如果工艺技术上没有问题，又能制订并切实执行一整套严格的生产质量管理措施，国内填装和国外填装并无区别。　　12、什么原因导致峰比原来大，而且出现的早?　　答：过快、过大的峰通常是由于从分流口和隔垫吹扫口排出的载气减少，而更多的进入色谱柱 因此增加柱头压力，可降低分流比。检查分流出品的气体流量，如需调整分流比则对调整此流量。如果问题依然存在，可卸下并清洁分流口。这个问题也可能由于柱头压调节阀有问题而引起。　　13、预柱或保护柱用还是不用的问题!原来分析中药品种时，我一直都是用保护柱。但来到新公司后，发现大家都没有使用，几个实验室连保护柱都没找到一个，也就是说大家从来都没有用过。后来问一个老员工，说是有可能影响药品分析。我就想问：安装保护柱后会影响样品分析吗?我们做的大多是头孢类的抗生素。　　答：应该这样说，加上保护柱，肯定有利于保护色谱柱不受一些颗粒物质的堵塞，肯定有害于分离度和柱效，因为保护柱中间有着死体积的存在，但是如果保护柱接得好，并且尽量控制其匹配性和经常更换，分离度和柱效应该影响并不大。头孢类的抗生素也要看到底是原料药还是制剂喽，有些原料药，可以根据色谱柱的损耗选择添加预柱(中间是个筛板)，制剂的话，如果有辅料严重干扰或者流动相盐分比较大，那还是最好配个保护柱。　　14、用的是四元梯度泵A50%甲醇B50%水，经常出现停或进气泡这是什么原因?　　答：水/甲醇比例在55：45时，黏度和柱压有个极大值。50：50接近了这个极值，柱压是比较高的，但影响柱压最大的还是填料粒径和色谱柱内径，你这个实例中不知用的什么规格的色谱柱?系统压力高，可能会因溶剂泵中的过滤头供液速度跟不上而导致气泡进入系统，停机也应该是因为气泡进入压力下降的原因，可考虑更换液体通量更大的过滤头。　　15、何时需更换隔垫或衬管?　　答：通常比较好的隔垫至少能保证100次进样不发生问题。当色谱特征说明衬管有问题时，需要更换衬管。影响隔垫寿命的因素有注射器尺寸、进样口温度和压力，当然受压力影响的程度比较小。影响衬管寿命的因素通常是样品的清洁度。应该根据仪器维护历史记录来选择色谱需要的特定程序。　　16、想请您具体说明一下反冲色谱柱的方法，是不连检测器吗?　　答：反冲就是将柱子反向连到系统中。因为有污染物反冲出来，当然不连检测器，出液端直接接到废液瓶就可以。　　17、如果不使用不锈钢接头，而改用PEEK头，是否可以完全解决接头匹配问题?　　答：色谱柱接头其实大都不是色谱柱厂商自己生产的，供货商有多个，VICI，Upchurch，Parker等，他们的标准相互之间不统一，那色谱柱接头的标准就统一不起来。不过一般这个问题也不难解决的，换个接头就可以了，而且现在有了万用接头，可以配所有不同类型的柱头，不泄露，连接死体积又很小。　　18、有的厂商为避免堵塞，使用了较大孔径(2-5um)的前筛板，这种情况反冲会将填料冲出。厂商一般在使用说明书中会说明前后筛板的孔径吗?　　答：厂商如果前后筛板孔径不对称，肯定会在说明书里特别提到的。　　19、我在做多肽药物时遇到下列问题：1).基线不稳定波动大，流动相A：1%TFA水溶液，B:1%TFA乙腈溶液，检测波长210nm流速1.0ml/ml，什么原因?怎么解决?TFA有什么作用?流动相中不加TFA见不到主峰，基线良好。2)做完肽类样品时怎么冲洗C18比较好 3)药典上介绍测定分子量大于2000的样品，选择柱子填料的孔径为30nm，30nm与10nm对结果有什么区别?　　答：应该是起&ldquo 离子对&rdquo 的作用吧。在做多肽类样品的时候，300A孔径的填料相对100A孔径肯定要选择性好点，也就是分离度相对比较好点。流动相加入TFA，在反相色谱分离多肽和蛋白质的实验中，使用三氟乙酸(TFA)作为离子对试剂是常见的手段。流动相中的三氟乙酸通过与疏水键合相和残留的极性表面以多种模式相互作用，来改善峰形、克服峰展宽和拖尾问题。三氟乙酸优于其他离子修饰剂的原因是它容易挥发，可以方便地从制备样品中除去。另一方面，三氟乙酸的紫外最大吸收峰低于200nm，对多肽在低波长处的检测干扰很小。　　20、watersAtlantisC18柱可以用较高比例的流动相，那麽用完后应该怎麽清洗?在什麽体系中保存比教合适?　　答：反相柱都可以用下面通用的方法清洗维护：流动相中不含缓冲盐分析完成后，用甲醇(或乙腈)：水=90：10反向冲洗色谱柱45min流动相中含有缓冲盐，分析完成后，先用甲醇(或乙腈)：水=10：90反向冲洗45min，然后再用甲醇(或乙腈)：水=90：10反向冲洗色谱柱45min (注意：甲醇(或乙腈)：水=10：90容易长菌，使用时间不可超过3天) 水性柱保存体系也不特别：短期保存在所用的流动相中(不含缓冲盐)，中长期保存在纯甲醇(乙腈)或80%的甲醇(乙腈)/水中。　　21、正相硅胶柱一般保存在什么溶剂里面比较合适?　　答：短期和长期都建议保存在正相测定所用的流动相中，一般是正己烷和极少量的异丙醇。　　22、磷酸盐缓冲盐渗透力强，为什么，是因为与醋酸盐，枸椽酸盐相比，基团小吗，使用磷酸盐缓冲液与其它缓冲液相比，会使色谱柱寿命缩短多少?　　答：经常用磷酸盐，在其它条件差不多一样的情况下，柱子寿命肯定比不用磷酸缓冲盐相对短一些。但用磷酸盐也有不可取代的优点吧，否则不可能现在大部分人还在用。　　23、反相离子对色谱法中，离子对是如何起作用的，是离子对试剂的非极性端溶解在填料的非极性端里，解离端伸向流动相，对含胺化合起离子交换作用，还是样品与离子对生成紧密的结合物，离子对试剂掩藏化合物中的极性基团，还是这种结合物是在解离与结合的动态平衡之中?　　答：首先离子对试剂的解离端和目标离子形成离子缔合物，降低其极性，这样就能较好的在柱子上保留。再者，根据疏水效应理论，离子对试剂的疏水端是很容易和C18链相互作用的，这样更容易在柱子上保留，所以我认为离子对试剂作用是混合保留机制，即纯粹的反相保留和离子对保留机制共同作用。　　24、四烷基季铵盐(如四丁基硫酸氢铵、四丁基溴化铵、四丁基氢氧化铵等)在水中电离后，也形成了类似N+H(CH2CH3)3的结构N+(CH2CH2CH2CH3)4，这种结构也能有效的与Si-O-产生较强的静电作用，此类离子对用的比较少，但它的作用仅是掩藏Si-O-吗，它对物质的保留性能有何影响，实验中发现检测胺化物时，流动相中加入磷酸缓冲盐有增加物质保留的趋势，而加入三乙胺则会降低物质的保留能力?　　答：前面提到的四丁基氢氧化铵等离子对试剂确实不如辛磺酸钠等极性基是阴离子的离子对试剂用得普遍，原因是酸类极性物质很容易通过降低pH值的方法提高在反相色谱中的保留能力，降低pH可抑制酸的电离，使酸处于中性状态而与疏水碳链的作用力增强。而碱类分析物则受硅胶基质pH上限的严重影响(以前上限是8，后来抬到10，直到最近杂化硅胶才将pH上限提到12左右)。铵盐类离子对试剂确实有辛磺酸钠等所不具有的屏蔽硅醇基作用，但其主要作用还是疏水端和疏水固定相结合，外露的阳离子亲水端和酸阴离子作用，从而提高其保留能力。当然同样还有第二种解释机理，离子对试剂先和分析物结合，掩藏极性基，从而提高极性分析物在反相色谱中的保留能力。而且丁基比辛基疏水性差，这种情况下，认为后面的结合机理占上风的可能性更大。检测胺类化合物，加入三乙胺预先和硅醇基结合，胺和硅醇基作用被三乙胺取代，保留下降是肯定的。　　25、同一根色谱柱在分析完三聚氰胺后，再分析苯甲酸、山梨酸、糖精钠时为什么保留时间会提前?　　答：色谱柱被强保留物质污染后，保留时间提前和滞后的情况都有，具体要看污染物的性质，还要看分析物、固定相和污染物三者共同作用的情况，情况比较复杂，有时候比较难预测是提前还是滞后。不过你平时维护的时候，注意在测定后将污染物用有机溶剂反冲清洗，就可以减轻或避免这种情况的出现。建议每个分析方法用专门的色谱柱，长远看，这样更节省色谱柱的费用。　　26、HPLC柱前衍生和柱后衍生的相关问题?1)为什么要衍生?2)衍生化的分类?3)进行衍生，适用的化合物有哪些?4)进行衍生化的要求有哪些?5)柱前衍生和柱后衍生的优缺点?　　答：色谱技术中的化学衍生法系指在色谱过程中用特殊的化学试剂(一般称为衍生化试剂或标记试剂)使样品成分转变相应的衍生物之后进行分离检测或进行检测的方法。目的为：1.将紫外&mdash 可见强吸收功能基团引入被检测对象或将其转变为荧光衍生物，以提高检测灵敏度 2.提高对分析样品的分离和选择性。从是否与HPLC系统联机的角度，化学衍生法分为在线online)与离线∣Offline)两种。从发生衍生化的场合，分为柱前衍生法pre-columnderivatization)与柱后衍生法(post-columnderivatization)两种。目前，在HPLC中，以离线的柱前衍生法(简称柱前衍生法)与在线的柱后衍生法(简称柱后衍生法)使用居多。　　27、多个样品不好不离的时候，请问该怎么通过选择合适的柱子来提高分离度?　　答：提高分离度可从三个主要影响因素来考虑，柱效、选择性和保留因子。可通过减小填料粒径和增加柱长提高柱效 选择性和固定相选择以及pH条件有关，通过选择合适的色谱柱和合适的pH，可以提高选择性 有时候适当延长出峰时间增加保留因子，也可提高分离度。　　28、苯基柱，氰基柱该什么时候考虑用?　　答：苯基柱用于含苯环的芳香族化合物的测定时，具有较高的选择性。CN柱可作为一个保留能力最弱的反相柱使用，也可作为一个活性降低的正相柱使用(保留时间比硅胶柱和氨基柱低很多)。　　29、同样类型柱子还有长度，粒径等差异，这些该怎么去选择?　　答：长度和粒径都是用来改变柱效的，选择原则是够用就好。　　30、我前几天刚刚装上一个新的C18柱，在进样之前我用100%的甲醇冲了半个多小时。刚才看到上面写的要活化什么的?不知道我只冲洗半小时就开始用对柱子有没有影响?对出峰什么的有没有影响呢?　　答：不是所有的测定，都需要对新柱子用所测样品老化。但先按方法程序进样几针，观察到峰面积保留时间不再有明显变化，再开始正式测定，这是一个好习惯。按你现在的做法，如果第一针和第二针的峰面积、保留时间没有变化，就继续做没影响吧。　　31、现在色谱柱和仪器的接口还没有标准化吗，除了检测池的出入管较小外，色谱柱的接口与PEEK头不匹配的有哪个型号的色谱柱，以后使用的时候需要注意一点。同时发现使用过金属接头的色谱柱再换成PEEK头，常易漏液，这是因为金属头易使色谱柱接口变形吗?　　答：色谱柱接头其实大都不是色谱柱厂商自己生产的，供货商有多个，VICI，Upchurch，Parker等，他们的标准相互之间不统一，那色谱柱接头的标准就统一不起来。不过一般这个问题也不难解决的，换个接头就可以了，而且现在有了万用接头，可以配所有不同类型的柱头，不泄露，连接死体积又很小。　　32、普通的C18柱能作为正相色谱柱使用吗?正相色谱体系中最常用也最普通的是那种色谱柱。正相柱在使用过程中与反向柱相比有什么需要注意的地方?　　答：普通C18柱作为正相柱使用，我还没听说过。正相色谱分离模式是指固定相的极性比流动相的极性大，反过来，流动相极性大就是反相。C18固定相属于疏水性相对比较强的，疏水性强就是极性很弱，应该找不出极性比它更弱的流动相了。正相体系常见的柱子有：硅胶柱、氨基柱、CN基柱和Diol二醇基柱，最普通的应该就是硅胶柱。正相柱和反相柱比，最需要注意的是水分，正相柱对水分非常敏感，流动相中水分含量的些微变化对保留时间影响很大，因此正相柱测定前平衡时间需要几个小时甚至更长。　　33、色谱柱的柱头类型与不锈钢毛细管接头有6种连接方式(在讲义里面提到)，那么我们用户一般是液相色谱仪是固定某一个厂家，而是根据样品检测需要更换不同类型的色谱柱，那么怎么判断我所购买的色谱柱是否与不锈钢毛细管是否匹配呢，我之前只是知道安捷伦和waters都有规定他们自己家的柱子与自己家的仪器配套是最合适的，而其他厂家的色谱柱都很少提及，在不知道的情况下，我们该怎么选择?　　答：不锈钢毛细管接头有个缺点，用过一次后卡匝位置和距离毛细管末端的长度就固定死了。如果下次用的色谱柱的柱头接口深度和原来的不同，就容易产生死体积和泄漏。产生的死体积一般不大，如果只引起柱效的稍微下降而没引起拖尾，这个问题就容易被忽略。引起大家关注的是泄漏，如果用了新柱子，发现和毛细管的接口处有泄漏，就可以判断是接头的匹配问题。最好的判断方法还是：询问一下厂商色谱柱柱头的类型和柱头接口的深度，然后和毛细管接头的规格比较。如果用PEEK接头，发生问题的情况就大大减少，因为PEEK接头卡匝位置是不固定的。接头与色谱柱的匹配，并没有在实际色谱应用中造成很大的问题，有很多人都没有关注到这个问题。一方面原因是使用PEEK接头的情况很普遍，另外如果发现不匹配，换个毛细管接头还是非常方便的。　　34、相对于气相色谱，液相的优势在哪里?做防腐剂分析时，流动相加入乙酸铵才可以出峰，原理是什么?　　答：液相和气相相比的优势有很多，我认为主要在于应用范围更广。气相只限于容易气化的低分子量物质的分析测定，对象大部分是基础化工原材料 而任何能溶解于某溶剂的物质都能用液相分析，适用对象是分子量从几十到几万的广大范围。在制药、化工、环保、食品和刑侦等诸多重要领域，液相都已成为主导的分析分离工具。也有两者都能应用的交叉情况，但液相的制样更简单。液相色谱的出现克服了气相色谱不能直接用于难挥发、热不稳定及高分子化合物的弱点。　　35、您提到&ldquo 磷酸盐缓冲盐渗透力强，有加快硅胶溶解的副作用，它的存在会降低pH使用范围。&rdquo ，既然这样，经常使用，柱子寿命是否也下降的快呀?　　答：经常用磷酸盐，在其它条件差不多一样的情况下，柱子寿命肯定比不用磷酸缓冲盐相对短一些。但用磷酸盐也有不可取代的优点吧，否则不可能现在大部分人还在用。　　36、CN柱的保存需要在低温条件，但是又不能太低，使固定相冻结，怎么控制这个温度?怎么判断固定相是否被冻结?固定相冻结后会是什么样的现象?　　答：所谓低温储存，就是放到阴凉处或者放到冰箱的冷藏室。储存液只要不是纯水，冰点都比较低，纯甲醇的冰点是零下90度以下了。　　37、我们测试样品时，经常会关心柱压是否太高，但是在购买色谱柱时，并没有说每一根色谱柱的最大使用压力是多少?针对这样的情况，用户怎么判断柱压是否超过该柱的极限?　　答：装柱时的压力比使用时高很多，所以柱压对色谱柱本身在使用时没有极限问题存在，倒是一般仪器有个40Mpa的上限。如果色谱分离度还能满足分析方法要求，柱压只要仪器能承受就OK吧。　　38、使用缓冲液不当，使硅胶溶解并重新形成粉末后，会出现什么样的异常情况?怎么处理?　　答：出现异常就是柱压升高。小粉末在流动相不断冲洗带动下，最后会聚集在柱子出口端，沉积在后筛板。处理方法只有拆下后筛板进行清洗或更换，但这样做会影响到柱床，处理后柱效会下降。　　39、今天才知道滤膜的材质分了这么几种：再生纤维素、聚四氟乙烯、硝酸纤维和醋酸纤维等，之前只知道有有机系和水系之分?各种不同材质的滤膜适合于什么样的样品?　　答：再生纤维素膜：具有蛋白质吸收低，适用于水溶性样品和有机溶剂 聚四氟乙烯：适用于所有有机溶剂，酸和盐 尼龙66：适用于绝大多数有机溶剂和水溶液，可用于强酸，70%的乙醇，二氯甲烷，不适用与二甲基甲酰胺 醋酸纤维：不适用有机溶剂，特别适用水基溶液。　　40、我原来遇到个这样的问题，一直不知道原因。刚拿柱子做，色谱条件是成熟的，绝对没问题，但是该条件下保留的物质变的不被保留，比如本来保留时间15分钟却怎么调比例都是2-3分钟就出峰了，维护后，下次再使用又正常了，什么样原因啊?　　答：最大可能是发生相塌陷了。C18柱和高密键合封尾的C8柱，在高含水流动相下会发生相塌陷，后果就是保留能力大幅下降。用有机相比例较高的流动相冲洗后，又可恢复正常性能。　　41、UPLC色谱柱可以反冲吗?HPLC的色谱柱可以简单反冲，但是，UPLC的色谱柱.也是一样的吗?如果压力偏高，该怎么办?　　答：如果两端筛板孔径对称，UPLC柱应该也是可以反冲的。发现压力偏高，当然也可以用反冲清洗的方法维护，UPLC柱和普通色谱柱比，只是压力高一点，不应该有什么特殊吧。　　42、常规LC的柱子粒度小，柱效高，现在有3.5um的常规柱，不知道用3.5um*250的压力与4.6um的压力相差多少?　　答：一般柱子4.6mmx250mm指的是其内径和长度。粒径才用um的单位，但一般标的是5um，也有3.5um的。其它条件一样，光粒径是3.5um和5um的柱压差别，理论上3.5um柱子的柱压是5um柱子的(5/3.5)平方倍数，即2.04倍，简单说就是2倍。　　43、因为不知道流动相已走完，液相色谱柱空走了大概一晚上，请问这种情况下柱子还能用吗?如果可以应该如何再生?　　答：能用的!可能柱子里会有气泡进去，但之后多用流动相冲冲，看到基线稳定，就没问题了。用色谱柱的保存液低流速长时间冲洗，然后再检测一下柱效，看柱子是否恢复，液相最好设置一下最低压限，这样就不怕流动相走光而会损伤色谱柱。　　44、在梯度洗脱的时候，如果整个时间程序越长，保留时间的重现性越差，尤其是后出的峰重现性差更明显，我猜估计是流量本身的误差引起的，但是怎么尽量避免这种情况的出现，使保留时间重现性更好?　　答：这个要控制好环境温度和柱温，易挥发的流动相要适当密封，同时保留时间的漂移与仪器的精度也有关系。　　45、我对聚苯乙烯-二乙烯苯柱很有兴趣，主要是它耐高温、耐酸碱、但有关这方面的文献很少，但对于他的分离效能我一直心里没底，我的问题有三：1、分离效果与ODS比较，是相当呢，还是更胜一筹，或是更差?2、我原以为它是整体住，但看过资料后发现也是颗粒的比如5u，请问该类型的柱是否符合速率理论、是不是粒径越小分离效果会几何级的增加?3、问什么没有1.7u的这种柱出现呢?　　答：聚合物基质色谱柱的优点你已经提到了，它的缺点有：对小分子分离的柱效相对硅胶基质色谱柱要低，表面衍生化修饰也没有在硅胶表面丰富，机械强度低耐压性不好，还有碰到某些有机溶剂会溶胀等。聚合物基质柱当然也符合速率理论!它柱效低主要是因为分析物在聚合物固定相中的传质速度比在硅胶表面固定相中慢很多。不过粒径越小柱效几何级增加的规律还是有的。1.7um的硅胶基质填料也是最近几年才商品化，1.7um的聚合物基质没出来也正常，或许永远都不出来了，因为聚合物耐压差，粒径做这么小，它根本承受不了这个高压吧，但愿以后会有能抗高压的聚合物填料研究出来。　　46、如何改善峰形?(前伸峰、拖尾峰)　　答：前伸峰是由于色谱柱过载。当一种或多种化合物的进样量超过色谱柱固定相容量时，可能发生这种情况。液相膜越薄，色谱柱中保留的每种化合物就越少。这涉及到进样体积和进样中每个峰的化合物浓度。通过减少进样量、分流样品或进样浓度较低的样品，可减小进样体积。　　47、&ldquo 样品与离子对生成紧密的结合物，离子对试剂掩藏化合物中的极性基团&rdquo 这句话是什么意思?离子对怎么样掩蔽化合物中极性基团?不就是通过静电引力的作用形成离子缔合物，来降低其极性的吗?　　答：离子对色谱是解决强极性物质在反相色谱中保留能力不足的一个有效的途径。有些碱性极性物质，即使用100%水相做流动相，且无论在色谱柱能承受的pH范围内怎么去调节pH，保留能力都不够。如果需要分离的组分中全是可以离子态存在的，那还可以选择离子交换色谱进行分离。不然的话，就只有选择离子对色谱方法了，尽管它有流传的那么多副作用存在。离子对试剂含亲水基和疏水基，很像表面活性剂，所以一开始离子对色谱也称为&ldquo 皂色谱&rdquo 。离子对作用的机理有两种解释，你上面都已经提到了。到底是哪种解释对，尚无定论，实际上也没必要去定论，反正两种解释都通就可以了。　　我个人认为，两种机理都可能存在，要看离子对试剂、固定相和分析物这三者本身情况而定。如果离子对试剂的疏水端和固定相之间的结合力相对更强，示意图的作用机理会占上风。反之，离子对试剂亲水端和分析物导致掩藏极性端的作用力更强，你后面提到的机理更可能。总之，要看你用的什么离子对试剂，是何种的分析物等具体情况不同而不同吧。　　48、我们在用的氨基柱时，有时候峰型突然变宽，有拖尾，用一段时间就又好了，不明白是什么原因造成的，如果要再生氨基柱的时候应该怎么做呢?是像您先前回答的问题中提到的，用一定比例的氨水冲洗吗?氨基柱可以直接用纯水冲洗吗?记得当时买的氨基柱那个使用说明书上说不能用纯水冲?是这样的吗?如果可以冲的话，一般冲多久?　　答：氨基柱的硅胶孔内的氨基浓度非常高(大约有1mol/L)，在有水存在的时候，在孔内形成一个pH10左右甚至超过10的很强的碱性小环境，并会导致硅胶基体慢慢溶解。不过硅胶基体的溶解会生成酸性的硅醇基，又会降低孔内的pH值，延缓硅胶基体的溶解进程。一段时间后，两个相反的过程会达成一个动态平衡，从而稳定下来。对你问题提到的这个现象，我想到的是这个原因。　　氨基柱，要看氨基柱的应用模式，是正相还是HILIC?这两种模式的情况是大不相同的。正相使用，一般很怕有水。但HILIC模式应用，一般流动相是乙腈/水，是不怕水的。不过键合氨丙基基团非常容易水解，所以一般氨基柱不适宜保存有水的溶剂中。作为正相应用时，流动相中要求一点都不能含水，但清洗柱子上的污染物质，是可以含水的，因为水有强极性，在正相色谱上洗脱能力极强，当然不必用100%纯水。氨基柱具体冲洗方法，正相条件按照正相硅胶柱的清洗方法，HILIC模式按C18柱的清洗方法。　　49、采用国标用C18柱测定辣椒精辣度，将辣椒精中添加吐温系列乳化剂做成水溶辣椒精，请问乳化剂对C18柱是否有影响?　　答：乳化剂和离子对试剂类似，有极性端和非极性端，肯定会对C18柱有影响。不过如果辣椒精是极性物质，乳化剂的存在到可以提高其在C18柱上的保留能力。　　50、公司按照国标测定辣椒红色素中苏丹红含量，标品分离很好，峰也不错，但是辣椒红色素由于跟苏丹红性质很相似，且颜色较深，分离效果很差，收得率很低，测定结果偏差很大。该如何处理样品?色素是否会降低柱效?　　答：色素不会降低柱效，但辣椒红色素主峰浓度过大，会影响与临近杂质峰的分离。可考虑稀释样品，或试试用柱效更高的柱子。　　51、通常我们在分析天然药物成分的时候结构复杂，无法考察组分的PKa值，哪我们如何去选择最合适的流动相或者是拖尾该怎么改善呢?　　答：如果天然产物中没有易电离的极性基团，就不需要用缓冲盐调节pH。如果天然产物中既有酸性基团，也有碱性基团，譬如有pKa=6.2的羧基和pKa=9.0的氨基的两性物质，建议将pH用磷酸盐缓冲盐控制在2.4。如果pH控制在6.2-9.0之间，两个基团都处于离子态，保留能力最差，是最不可取的。如果不清楚复杂物质中含有什么基团，也请将pH调到2.4或更低。因为pH调低，起码抑制了酸性基团的电离而处于中性分子状态，而增加酸性基团这个部分在反相色谱中的保留能力 另外低pH还抑制了硅醇基的活性，有利于获取对称的峰形。情况不明时候，为什么不建议调高pH呢?一方面一般色谱柱都不能承受pH9以上的条件 调高pH和调低pH相比，还有一个硅醇基活性大的劣势。　　52、记得以前拿到C18柱，会用甲醇从小流量到大流量慢慢活化，这样做的目的是什么呢?是先用溶剂活化吗?然后再用样品?还有测定短肽总是冲出来，该怎么解决呢?就是和溶剂峰出在一起，或者出在溶剂峰之前。　　答：C18柱，会用甲醇从小流量到大流量慢慢活化，因为色谱柱到达用户手中时，时间长短不一，在存储和运输的过程中，可能存储液有些挥发，低流速的甲醇可以很好的浸润固定相，使键合相很好的伸展，用溶剂平衡好系统后，可以采取多次进样或者加大进样量的方式以更快的获得重现的色谱图，这样用样品将色谱柱中的活化点饱和，就不会出现异常色谱现象的情况。　　53、C18柱如果之前曾有些天一直保存在酸性环境中，会对柱子有什么损坏吗?pH在2左右。　　答：pH2左右容易使键合在硅胶基质上的固定相水解流失，包括C18和封尾试剂的水解，封尾试剂相对更容易水解。不知道你保存的酸性环境是不是含有缓冲盐，如果不含缓冲盐，只是短期几天保存在酸性流动相中，也不必过份担心，最多相当于这几天一直在使用这根色谱柱，因此减少几天的使用寿命吧 有缓冲盐就麻烦一点，保存期间水分挥发可能会导致缓冲盐结晶在柱内析出，对柱子损伤很大。　　54、色谱柱的安装有什么技巧吗?只要保证不漏就行了吗?还有所谓的死体积怎么测定呢?　　答：色谱柱安装技巧不多，只要接头和柱头匹配，确实拧紧不漏就可以了，但也要注意不要拧得太紧以至于损伤螺纹。所谓死体积就是完全不保留的物质出峰时从进样到流过色谱柱的总体积，一般用极性非常强的尿嘧啶的出峰来测定。死体积包括柱体积(色谱柱内溶剂能占据的空腔体积)和柱外体积两部分。你从厂商这里买到色谱柱，柱体积已经是固定了，你能尽量避免减少的是柱外体积。进样器内死体积、毛细管长度、毛细管和色谱柱连接紧凑与否，保护柱或在线滤器产生的死体积大小，都对这个有影响。样品在柱内，除扩散外，还有和填料作用引起的组分分离 但样品在柱外，那就只有扩散这个使柱效下降的因素了。　　所以，要取得好的分离效率，柱外体积应该是越小越好。峰有时候前延，有时候拖尾，一般不是色谱柱的问题，应该是样品和色谱柱填料的作用问题，可以说如果色谱柱类型选择没问题，关键就是色谱条件的选择。包括进样量、样品溶剂、流动相组成(包括添加剂)、流动相pH以及柱温，都对峰形有影响。另外测定分子量较大的多肽，用样品老化平衡色谱柱很重要，分子量越大的物质，需要平衡时间越长。如果柱子没平衡好，峰形也可能会不正常。所以最好把你具体的测定条件也列一下，也便于有针对性的分析原因。　　55、测定多肽样品时，十几肽或者二十几肽时，有时峰前延的比较厉害，有时峰拖尾比较厉害，这是什么原因呢?是样品的问题还是柱子的问题?　　答：峰有时候前延，有时候拖尾，一般不是色谱柱的问题，应该是样品和色谱柱填料的作用问题，可以说如果色谱柱类型选择没问题，关键就是色谱条件的选择。包括进样量、样品溶剂、流动相组成(包括添加剂)、流动相pH以及柱温，都对峰形有影响。另外测定分子量较大的多肽，用样品老化平衡色谱柱很重要，分子量越大的物质，需要平衡时间越长。如果柱子没平衡好，峰形也可能会不正常。所以最好把你具体的测定条件也列一下，也便于有针对性的分析原因。　　56、关于配置流动相，有机相我们可以甲醇乙腈同时用，这个是基于什么考虑的?是不是根据甲醇乙腈选择性不同、样品在这个两者的溶解度的差异以及调节洗流动相脱能力来考虑的?　　答：甲醇和乙腈同时用，可以获得单纯的甲醇或者乙腈不一样的选择性，而且洗脱能力也会改变，根据多元流动相的强度因素Sab.....=Sa&psi a+Sb&psi b=...Sa和Sb纯溶剂，a和b的溶剂强度因素 &psi a、&psi b分别为a和b的体积分数，所以在药典中有很多体系都使用甲醇乙腈体系。　　57、三乙胺磷酸盐缓冲液作流动相，柱压一天比一天高，该怎么样解决?　　答：把柱子再生下，再生的方法搜一下有很多，反冲对绝大部分色谱柱都是可行的，效果不错。　　58、新出厂液相色谱柱，保护溶剂一般是什么?怎样进行平衡清洗比较好，一般要平衡多长时间比较好?　　答：柱子类型不同，保存溶剂也会不一样吧，具体要看说明书的说明。对于反相柱，一般用甲醇(乙腈)保存，也有用80%左右甲醇浓度的甲醇/水保存的。一般用流动相平衡冲洗10-20个柱体积即可(注意：柱体积不等于空柱管体积，4.6x250mm的色谱柱空柱管体积是4.15ml，而柱体积只有约2.5ml)。　　59、据说液相色谱柱柱压达到一定高度就不能使用了，请问一般达到多高，用甲醇和乙腈是不是不一样?　　答：柱压不是色谱柱不能使用的唯一因素，分离度才是最重要的。柱压只要没高到仪器不能承受的地步，例如超过300bar，就可以一直使用。甲醇的粘度比乙腈高，同样状况的柱子，如果用甲醇做流动相，柱压可能超了，换用乙腈会使柱压下降不少，仪器还能承受。不过尽管柱压还没上升到接近400Bar的限定，如果发现柱压上升速度较快，也需要及早对柱子进行清洗维护，从根本上排除导致柱压上升的源头。　　60、柱塞板可不可拆下用超声波清洗，会有什么不良后果?　　答：不建议将柱筛板拆下清洗，因为拆下承压的柱筛板会导致柱床发生变化，影响色谱性能。应该对污染的色谱柱先进行清洗维护，维护没有效果，再把拆洗柱筛板作为最后的手段。　　61、一般正常使用一个C18柱能用多长时间?　　答：柱寿命一般不按时间计算，按持续进样针数比较科学。一般正常使用维护，不超过pH和温度等范围，C18柱能达到500-2000针进样的寿命，视样品干净程度的不同而不同。　　62、超高压快速高分离度色谱柱是不是未来液相色谱柱普及应用的一个发展趋势?　　答：这是个大话题，今后使用会越来越多是肯定的，但是否会替代普通压力的液相还有争议。超高压也有使用上的不便，譬如容易堵，对设备硬件要求高等。　　63、如果液相色谱谱图基线漂移很大是不是柱子的问题?波长越小的越大，270nm的还不怎么能看出来，230nm的就非常厉害了，有可能是什么原因造成的?　　答：有可能是你的流动相的问题，230可能已经快到你流动相的截止波长了，当然紫外吸收强，基线漂移厉害。　　64、我们有一台waters1525色谱仪，最近基线总是呈现波浪形很有规律，波长越小越明显，梯度洗脱时向上飘逸而且后一段时间呈现波浪形，很影响分析，我想问一下，是不是柱子的原因?　　答：应该是流动相组成变引起吸收本底变化造成的，特别是在波长小的时候，乙腈的截止波长低于200nm，但甲醇和水相对比较高，在低波长时，甲醇和水有一定的本底吸收。梯度进行时，随着不同本底的组分含量的变化，基线也会有相应的波动。　　65、我是做农药残留分析的，用的是UV2487检测器，想问一下，C18色谱柱用什么缓冲液比较好，我以前做三聚氰胺是用柠檬酸，辛烷磺酸钠，也用农药检测行不行?还有用HLB柱能不能去除蔬菜和水果中的杂质?　　答：C18色谱柱用用磷酸盐，醋酸盐就比较好啊，离子对试剂不是个好东东，你要慎用。我们做三聚氰胺用三氯乙酸。　　66、液相色谱柱一般使用寿命多长?不同类型的色谱柱是否寿命也不一样?液相色谱柱与气相的柱子有何区别呢?　　答：液相色谱柱一般使用寿命多长!我有一根柱子，用了大约1年半左右，发现同样浓度的样品它的峰展宽了。说明柱效下降。但是不影响结果。因为峰面积还是接近。所以做色谱之前先做下柱子性能测试。第一次的图谱要保留。测试C18RP柱，一般用到萘作为柱子的柱效判断。一般是18000片，对称性(usp)0.95-1.05间。液相色谱柱与气相的柱子有何区别呢?HPLC是走液体的。分正相，反相。反相为例。Si接着C18(键和相)，电镜下看起来像绒毛一样的。所以一般用甲醇，乙腈保护RP柱。这样它的绒毛呈舒展状。GC走气体的。固定相涂布固定液。　　67、&ldquo 水相&rdquo 指的是什么?纯水?我们实验室的CN基柱保存在40%的乙腈里面，这个有不良后果吗?　　答：水相就是纯水。CN基不适合保存在中等极性的溶剂中，除了可以低温保存在极性较大的纯水中外，还有可以保存在非极性溶剂如正己烷中。40%乙腈水，属于中等极性溶剂，短期过夜保存可能问题不大，长期保存不太好，后果就是可能会发生柱床坍塌。　　68、CN基柱应该怎样维护才好呢?比如做完实验用什么流动相冲柱子、短期用什么溶剂保存、长期用什么溶剂保存等等。　　答：CN可作正相柱，也可作反相柱用，除了保存溶剂有特殊要求外，其它维护办法和一般正相和反相柱没有多大区别。　　69、色谱分析运行时，标样和样品的峰均随时间加宽　　答：如果保留时间没有很大区别，只是加宽的峰拖尾，可能表明有活化点。如果加宽的峰是对称的，可能是由于正常的色谱柱&ldquo 损耗和流失&rdquo 。如果峰前伸，说明色谱柱过载。　　70、色谱柱的接头，出口处用的是peek接头，请问都用peek接头不行么，为什么?　　答：都用PEEK接头我认为都可以的，当然PEEK接头的质量要过关。有人认为PEEK接头不耐压，估计是针对品质不好的产品说的。　　71、排除色谱柱流失问题的最佳方法是什么?　　答：诊断色谱柱是否存在流失问题的最佳方法是第一次在方法条件下安装色谱柱时，做一次空白色谱图，然后将最近的运行和空白运行色谱图对比。如果在空白运行中产生了很多峰，则色谱柱性能改变，这可能是由于载气中含有氧气，也可能是由于样品残留。如果有GC-MS，则低极性色谱柱的典型流失离子(例如DB/HP-1或5)质/荷比m/z将为207、73、281、355等，大多数为环硅氧烷。　　72、我们的液相，为了节约成本我们自己填保护柱，用废的同型号柱子填。但填完以后做标样定量分析有所改变。请问其原因。　　答：不建议自己填保护柱柱芯，填得不好的柱芯会影响分离效果，也会影响定量分析结果。你不知道废柱子里的填料是不是受了污染，另外你填的柱芯肯定没有厂商填得好，如果影响到峰形，峰面积积分结果有所改变是可能的。　　73、请问怎么测柱效?柱子填料是SinoChromODS-BP5um，规格4.6mm*200mm。　　答：测定柱效不同公司不一样，一般柱子里面有检测报告，你按照报告里的方法做一遍就可以。　　74、我用苯试了一下，峰性大大好，但是不知道理论塔板数，不知道怎么评价，感觉不大好，对称性不好，有点前延，柱子才用了四个月，是什么原因呢?是不是塌陷了呢?有什么补救的办法吗?　　答：用了四个月峰形拖尾是很正常的，需要维护清洗一下色谱柱以清除引起拖尾的柱头污染。如果柱头塌陷，则不好办，从其它废柱子里取点填料填补塌陷，可以一试，但效果不一定好。色谱柱是耗材，测定进样针数如果达到500以上了，也算是物有所值，物尽其用了，报废了也不可惜。　　75、流动相里之前有酸的，做完后单纯用乙腈冲洗，能把酸冲洗干净吗?之前他们是这样冲的，现在怀疑柱子塌陷了，会不会是长时间在酸性环境中造成的呢?　　答：流动相里有酸，应该先用纯水或80：20的水/乙腈溶剂冲洗吧。如果一直在酸性环境，固定相容易流失，造成保留时间前移和其它色谱性能下降。　　76、我前一段时间做三聚氰胺用C18色谱响应值很小，几乎无法检测，可是检测标准就是用的C18，后来我用RP18结果响应值很好，不知道什么原因，请问这两个柱子不都是反相色谱柱么?他俩之间有什么不同?　　答：RP18就是C18吧，不过C18柱之间也有区别，测定三聚氰胺一般要用极性比较大的水性C18柱。　　77、磺化交联的苯乙烯-二乙烯基共聚物为填充剂的色谱柱在储存过程未注意放在冰箱中，导致发霉后，柱效急剧下降，能何种方法将此色谱柱修复好?　　答：聚合物柱子因为不怕酸碱，就直接用强酸强碱清洗。如果是H型，用1M硫酸冲洗 如果是Ca型，可以先用1M硫酸冲洗，再用EDTA钙盐转换回Ca型柱 如果是中性的聚合物反相柱，直接用1M的NaOH冲洗。　　78、我有一个标准的稳定性检测分析方法，它是建立在某一供应商的碳18柱上，我知道有另一个厂家生产同样的碳18柱，但价钱是它的一半，如果我更换柱子会不会影响到分析方法?　　答：要看这一分析方法的具体要求。如果方法中有说明&ldquo 使用某一色谱柱或与其同样的柱子，&rdquo 那么，就可以使用别的柱子来替换。但要注意，不能光看一个柱子标为碳18柱，或是其宣传等价于某某柱，就认为该柱适用于所有方法。必须要验证色谱柱的等价性。我们需要考查使用新柱子时，系统适应性是否可以通过验证。如果可以获得系统适用性测试中所要求的保留值，分离度以及其它参数等，就可以使用该柱。推荐使用系统适用性测试样品以及其它的典型样品来进行考查，以保证杂质和降解物在正确的保留时间出峰并给出正确的浓度响应 并且在新柱子上获得的分析结果要等价于在原柱子上的结果。　　79、请问我做一种药的分析，查美国药典规定使用100mm× 40mm8&mu m色谱柱，流速3mLmin。可现在市场上已不容易找到这种规格的产品，于是我按USP中色谱柱比较的数据库的指引，选了一款选择性一致的等价色谱柱，其规格是100mm× 46mm3&mu m的色谱柱，当选用3mLmin的流速时发现柱压超高，请问我如何对方法进行调整以满足USP的要求?　　答：流速调整原则是流动相通过柱子的线速度一致，等价柱的截面积大了，流速也应增加才能保持相同的线速度。新流速计算结果是：(4.6/4.0)2x3.0=4.0ml/min。但3ml/min流速都已导致柱压太高，4.0ml/min明显不行。好在USP还有个允许± 50%的流速调整指导原则，这样将流速调至2.0ml/min既符合USP规定，又能使柱压降到可接受的范围，但这种改变不能引起其它不好后果。这个例子中，等度分析中，流速改变会引起塔板数和峰宽的改变，但不会影响峰的选择性。3um粒径色谱柱柱效比8um的高很多，可考虑缩短柱长以补偿或部分补偿流速降低造成的测定时间增加。所以，更佳选择是50mm× 4.6mm，3&mu m的柱子，2.0ml/min的流速运行，可以在符合USP规定的情况下，又得到更快速的测定分离。　　80、最近我非常的沮丧，按照药典上的色谱条件和方法做某药物的分析，却始终得不到满意的结果。有人建议我对色谱条件，如进样量、流动相pH和温度等，进行微调以得到良好的峰形和分离效果，可按公司规定我不能这样做，怎么办?　　答：如果你心里老有这个思维定势&ldquo 按规定，我不能......&rdquo ，然后什么也不敢做，那真是不好办!只有去做了，去试着改变条件看看得到什么结果，你才能发现问题所在。如果改变条件后，仍得不到好结果，就要去找色谱条件以外的原因，如色谱柱、色谱仪器以及样品和制样过程中的是否存在问题?不管通过微调你是否取得了好结果，你也有了向领导汇报问题和解决方案的依据。而且，绝对不能调整药典规定色谱条件的说法通常是不对的。美国药典USP说的是如果改变药典方法需要重新做方法验证，但方法调整或者称微调以符合系统适应性的要求是允许的，是不需要重新做方法验证的。USP列了调整的几条指导原则，如± 50%的流速调整，± 10℃的温度调节等等(详见"Chapter621，Chromatography，"UnitedStatesPharmacopeiaNo.31-NF26，(2008).)。当然既然是指导原则，这些规定都不是绝对的，如温度调整± 10℃，对有些方法适用，对另外的方法则± 5° C的调整都会有问题，我们应该依据具体情况作出明智的科学判断。　　81、请问下HibarRT250-4这个柱子很特殊么?为什么很多药典中的药物分离都用它做柱子，因为才开始做药，不知道hibar的柱子特点是什么?　　答：HibarRT250-4是Merk的一个品牌，不是很了解。大概是共用柱头，可更换的柱管。　　82、在碱性条件下硅胶溶解，又生成硅羟基的机理是什么?反应方程式如何写?　　答：二氧化硅溶解的反应式是：SiO2+2OH-=Si032-+H2O或者表示成水解的形式：SiO2+H2O=Si032-+2H+这说明硅胶会在碱性条件下溶解而生成硅酸根。但我们这里说的是硅胶颗粒表面的部分溶解，含有键合固定相的硅胶原表面溶解脱落后，自然会生成新鲜的硅胶表面，而新鲜的硅胶表面结构一般都是含有硅羟基的。硅胶基本结构单元是Si-O-Si键，在OH-离子的作用下，Si-O键断裂，在表面形成Si-O-H硅羟基的结构单元。必须指出的是，在氨基柱的孔内，并没有单独加入OH-离子，偏碱小环境的形成是由于氨基易和水电离生成的氢阳离子结合造成的游离OH-离子的过剩。从第一个方程式角度解释，游离的OH-离子用完，硅胶就不再继续溶解 从第二个水解形式方程式角度解释：当硅胶水解生成的H+离子足够用来和氨基结合时，水解过程就会变慢或停止。　　83、同样都是C18柱子，液相色谱柱和SPE他们之间有什么区别，能具体讲一下么?　　答：HPLC柱子和SPE小柱的对比：　　对于C18固定相，为了提高回收率，SPE里用的C18填料一般载碳量相对更高。　　84、我从上面了解到RP18和C18的区别是极性强一些，能问一下他们在分析农药是可不可以通用?C18适用于那些农药的分析?我查材料看到苯醚甲环唑都是用C18分析的，可我用C18分析发现响应值很小，没法分析能帮忙分析一下原因么?　　答：RP18和普通C18，肯定有其不同的适应性，农药种类这么多，可能大部分农药两者都能用，有些就不一定。你问的C18适用于哪些农药，应该从相关农药分析方面的书籍手册中可以查到具体什么农药用什么色谱条件合适，其中里面肯定有选择什么类型柱子，我这边没办法一一列举。液相色谱中，60%以上的分析物可以用C18柱，我想也应该有60%以上的农药可以用C18柱。如果手册或文献中查不到，你把农药作为普通分析物来对待，然后按照一般的色谱柱选择和方法建立原则来做就可以，选择决定因素应该也是农药分子的结构。苯醚甲环唑，应该含有极性基团，可以试试极性强的C18柱。　　85、我在用乙腈作流动相时，只要那个乙腈比例稍高一点，比如20%，即使测量波长高于乙腈截止波长比较多，也会产生比较大的溶剂峰，这怎么回事?　　答：如果出现溶剂峰，对你的分析结果没任何影响，那就让溶剂峰在那儿好了。或者你用规定的溶剂溶解提取样品后，再用流动相稀释一下样品，如果稀释后检测限能达到的话。　　86、我在做一个模拟胃内容物中药物反应试验，需要动态测定某药品含量变化。分析时碰到一个棘手问题，进样量同样用20ul，用对照品进样时色谱峰形不错，进样品时却一直不能得到好的峰形。后来分析是模拟胃内容物样品的酸度过高的因素，可我通过稀释的方法让样品酸度和流动相接近，虽然峰形没问题了，却发现因稀释导致分析物在样品中含量下降，低于最低检测限了，如何是好呢?　　答：稀释很方便，但灵敏度更高的检测器不容易找，不过还是有个简单的解决方案。当用流动相稀释样品时，只要稀释后样品中有机相含量比流动相中的有机相比例低10个百分点以上(如流动相中甲醇含量是40%，则样品中甲醇含量一定要低于30%)，样品流动会被色谱柱进口端延缓或阻挡，称为&ldquo 柱上富集&rdquo 。由于&ldquo 柱上富集&rdquo 作用的存在，这种情况下进行大体积样品进样，可避免样品溶剂组成和流动相一样时进样量过大产生的&ldquo 峰展宽&rdquo 。针对你提的这个实例，可用稀的NaOH溶液调节样品pH和流动相匹配，并将样品最终稀释一倍。将进样量提高一倍到40ul，就可达到最低检测限的要求。　　87、峰形后拖尾是什么原因造成的?　　答：[柱物理损坏]色谱柱有物理损坏是造成峰形拖尾的根源。唯一的解决方法就是更换新柱。　　[柱内填料污染]流动相和样品中的杂质是色谱柱主要污染源。流动相所用的各种溶剂至少是分析纯，尽量使用色谱纯试剂。流动相所用的水最好是超纯水或全玻璃器皿双蒸水。用前先用0.45um溶剂微孔过滤(器)过滤，除去可能存在的微粒。流动相建议现用现配，对于含盐的溶液尤其注意长置会产生细菌或出现沉淀。此外还得保证储存流动相的容器清洁。　　复杂样品可选用0.45um溶剂微孔过滤(器)或样品预处理柱对样品进行预处理，确保样品中不含微粒杂质。若样品不便处理，要使用保护柱。柱内填料污染时，可将柱头螺丝卸下，用专用工具挖出柱内前段被污染填料，再以相同的填料重新填入，修复。或以能溶解污染物的流动相按色谱柱使用的相反方向，冲洗色谱柱(约20至30倍柱体积，或视具体情况而定 另外，此时不能接检测器)，将污染物冲出色谱柱，再按色谱柱标明的使用方向使用。　　[柱进口处有异物]当断定是柱进口处有异物时，可将柱头螺丝卸下，取出滤帽并将其置于20%硝酸溶液中，用超声波清洗约20分钟，再置于超纯水中，并用超声波清洗约10分钟，重新装入色谱柱内即可。　　[样品浓度过高致使柱超载]样品在柱上超载能引起峰展宽，拖尾(或伸舌)。适当减小进样量或样品浓度(需要时，可提高检测器灵敏度)直至峰形和保留时间不再改变，便可消除这种不良影响。减小进样量还能改善其分离度。正常情况下，样品中每种化合物在150× 4.6mm柱中进样量保持在3～50ug范围内，不会引起明显超载。　　[样品溶剂不对]选择合适的样品溶剂，以排除不必要的干扰。最好选用流动相溶解样品。　　[柱外效应]即进样阀、色谱柱及检测器间的管路过长、直径过粗、管路接头不匹配、有死体积，是影响色谱柱柱效的主要因素之一。所以在可能的条件下，色谱柱的两端连接管路要尽可能短，连接管内径尽可能细小，切口务必平整光滑，尽可能的减小死体积，以防止因样品扩散造成不能反映色谱柱真实柱效等情况发生。　　[缓冲不足或不合适]在缓冲不好或离子强度过低的分离中，也会出现保留时间重现性差和峰形拖尾。增加缓冲浓度(与样品大小相匹配)能改善此情况。　　[硅醇基团作用]仔细分析色谱柱内填料表面性质可知：反相色谱柱填料的表面大约被键合相覆盖了一半，其余的就是未被键合的硅醇基团。所谓的保留是指样品分子与键合相相互作用的结果。但是，酸性或碱性化合物与硅胶表面残存的硅醇基团或金属杂质之间相互作用而引起双重保留机理，因此，发生了峰形拖尾。为了减小峰形拖尾，通常可在流动相加入25mM三乙胺(抑制剂)。三乙胺能与硅醇基团发生强烈的相互作用，从而降低或阻断样品分子与硅醇基团的作用，以保证保留机理正常进行，并大大缓解了峰形拖尾。使用长链的硅醇基抑制剂，虽起效较慢，但持续力较三乙胺长。因为抑制剂分子中除了胺基与硅醇基团发生极性作用外，大分子中非极性部分与固定相也会发生反相作用而产生保留现象。如果将抑制剂加至样品中，效果会显著。　　[柱内金属污染]柱内金属污染(Fe，Ni等)可引起某引些化合物峰形拖尾。金属可由填料本身带进，也可由腐蚀性流动相缓慢溶解柱进口的金属滤片，随流动相沉积到柱填料中。例如C18柱填料被金属污染后，造成酸性/碱性样品拖尾，可用碱洗/酸洗后再键合的填料，得到的峰是尖锐且对称的。　　88、流动相与柱子如何才能做到匹配，达到最好的分离效果。目前我们实验室有购买好的色谱柱，可是对样品的分离效果不是很好。　　答：不同填料的色谱柱都有自己的选择性，相同填料不同厂家以及相同厂家不同品牌之间的选择性都是不一样的，一般情况下根据物质的性质将分离的大方向如：正相分析或者反相分析，确定后，一般可以根据调节色谱条件能得到好的色谱峰形，这方面的资料论坛当中很多，但是也有些色谱柱不管怎么调整色谱条件都不行，表面这款色谱柱的选择性不适合该样品的选择。　　89、我用的是C18柱，后面黑色的是我以前跑的图，前面是我现在跑的图形，完全一样的东西，只是流动相不是一批配的(流动相的成分没变)，中间柱子别人用过了，峰型怎么发生了这么大的变化啊?可能的原因是什么啊?是不是柱子出了问题啊?　　答：从两个图对比很明显可以看出是柱效严重下降，且伴有肩峰。不同时间配的流动相，如果成分和pH没变的话，肯定不会造成这个结果。估计是别人用柱子过程中，造成了柱头塌陷、柱头污染以及固定相流失等严重问题，如样品太脏，流动相或样品pH太高或太低，都会造成这个结果。你可以试着用色谱柱清洗和再生的方法反冲维护一下，但不能保证一定能回到原来的效果。再生如果不行，考虑挖补柱头填料，实在不行，柱子也只能报废。建议柱子最好还是专门用于一种方法比较好，像你这种情况，都搞不清别人怎么用柱子的，分析解决问题就相当难。　　90、柱子的柱效影响大吗?一般柱子的柱效规定是多少的呀!理论塔板数一般要达到多少呢?主要有那些因素影响它。　　答：柱效是柱子性能好坏的一个重要体现指标。柱效会影响分离度，当然是峰形越尖锐，柱效越高，和其它峰越容易分开。另外，柱效高峰形尖锐，对峰面积的积分误差就小，甚至可以用峰高来定量。一般C18柱，在测定甲苯等不易拖尾的小分子中性不电离物质时，5um的填料，每米的柱效能达到80000以上的塔板数，就算合格吧。在实际分析物的测定时，一般药典有规定最低柱效是2000-3000，一般新柱子的柱效都高于这个数。但柱子在使用后，由于固定相流失等原因，柱效会逐步下降，当下降到不符合药典最低柱效要求，或者导致分离度不够时，色谱柱就算寿命到了。单从柱效逐步下降这个角度看，柱效高的色谱柱相对使用寿命更长。影响柱效的因素有粒径、粒径和孔径分布、固定相键合密度、柱外体积和温度等，柱子装填紧密、柱床均匀一致也对提高柱效有好处。这些影响因素中，很多是和生产厂商有关，你这边能做的是尽量减少柱外连接体积。　　91、流动相中加入四氢呋喃对柱子有损害吗?我现在分析一样品流动相中用到20%的四氢呋喃才能把峰分到基线。但柱子只能用一个星期分离效果就不好了。请问是四氢呋喃损坏了柱子吗?　　答：四氢呋喃(THF)是反相色谱中洗脱能力极强的溶剂，比甲醇和乙腈都强很多。在流动相中加入THF能改善某些难分离的物质对的分离度。但THF不稳定，容易降解生成具有很强反应活性的过氧化物，能与分析物反应生成新化合物，导致拖尾、峰分裂和鬼峰产生。高反应活性的过氧化物还可以和填料固定相发生化学作用，THF对柱子有损伤这点是无疑的，而且这种损伤是随时间累积的。THF保质期一般规定是6个月，放得越久，里面产生的过氧化物含量越大，你应该避免使用生产日期已很久的THF溶剂，而且最好将THF冷藏、干燥和避光保存，使用前最好能检测一下过氧化物的含量。　　92、在用液相色谱同时分离多种组分时，怎么通过条件色谱条件使各个峰达到比较理想的分离效果!　　答：这是方法开发的大问题。方法开发建立，要做的就是：针对分析物和基体的情况不同，选择色谱柱类型和分析条件，包括流动相溶剂类型、组成比例、pH值、温度和流速等参数的确定。　　93、样品过载问题，按药典检测方法检验一些药品有关物质时，都要注入高浓度的供试液，这样往往使得柱过载而峰变形，按老师的方法减小浓度和注入量均是不允许的，怎么处理这问题?　　答：药典方法中注入高浓度供试液测定有关物质，提高注入浓度是为了把杂质峰的信号增强。有时候为了把杂质峰显现出来，主峰因过载有所变形，如在允许范围内，也能接受。但前提是杂质峰和样品主峰分开，如果因过载而使两峰没有得到需要的分离度，杂质峰信号再强也失去了意义。我认为药典规定的条件是允许在一定范围内进行调节的，因为药典没有规定具体使用色谱柱的品牌，而不同品牌的柱子，上样量是有差异的。对色谱条件微调，并取得到了很好的分析结果，如果规定不允许，那你首先要怀疑这个规定是否合理，或者是否对规定的理解有问题。　　94、哪些原因会造成色谱峰变宽、峰高变低，有哪些解决办法?　　答：确实是这样，如果其它色谱条件没有改变，柱效下降是导致峰变宽的主要原因。对于易电离的极性物质，如果流动相pH选择不合适，分析物既有中性分子态存在，又有离子态存在，峰也会变宽变矮。色谱柱使用后柱效逐步下降是正常现象，如突然降低则属异常。柱效下降原因有很多，但柱效快速下降则多半是使用不当，造成填料特性或柱床结构改变所致。如超过使用pH范围造成的固定相和硅胶基体的流失、柱床塌陷等 还有强保留物质吸附在填料表面，形成非特异性吸附层，完全改变了原有固定相的表面活性和分离性能，使柱效下降 另外进样时的压力脉冲，也会破坏柱床结构影响柱效。　　95、我以前做苏丹红用的是安捷伦的SB-C18柱，峰形什么都很好，最近发现4个标样峰后都带有一个小峰，一开始以为是标样问题，后来换XDB-C18后标样又正常了。可是用SB-C18柱做其他用正常，不知怎么回事?还有，像这种C18柱如果压力过高能不能反冲，该如何冲洗?一般做兽残、农残什么的，而且感觉三聚氰胺做后压力更易增高，且容易引发进样器漏等问题，请问做完三聚氰胺需对系统做特殊清洗吗?　　答：用SB柱，标样后带一小峰，而且是只对苏丹红标样测定时有，估计和苏丹红标样的测定方法和其它样品测定方法不同有关。最好能把谱图贴上来看看，是什么样的小峰?才能判断是溶剂峰还是杂质峰。XDB柱和SB柱是有区别的，XDB键合度高，封尾良好，反相保留能力强 而SB柱，未进行封尾，对极性物质选择性好。有可能你的苏丹红标样分解了，有极性杂质生成，SB柱能把杂质分开，而XDB柱不能。这两款柱子压力大了，可以反冲。有正常维护时的反冲冲洗和再生时的强溶剂冲洗两种，冲洗方法在在线讲座里也写了，你再回到本贴的前面看看就可以了。三聚氰胺和三乙胺类似，本身容易和硅醇基作用而吸附在填料表面，另外三聚氰胺测定的样品基体含蛋白类的强保留物质较多，容易污染色谱柱柱头引起填料间隙堵塞柱压升高，最好每次做完样后，都用甲醇或乙腈反向清洗维护一下。如有蛋白类的污染，也定时用本讲座中提到的清洗方法做一下维护。　　96、我是做农药残留分析的，不同的基质杂质含海量是不同的，我用C18分析时有可能一次就污染了，我用高流速，和反向冲洗都解决不了，是不是这根柱子就废了，有没有其他的办法?　　答：高流速反向冲洗是对的，关键你用了什么溶剂冲洗呢?用原来的流动相冲洗肯定不管用，要不然就不会累积在柱子上了。你应该用流动相中的强溶剂B冲洗，如果不行，就需要启用再生的程序，当然再生时用的溶剂更强。100%甲醇---100%乙晴---75%乙晴/25%异丙醇---100%异丙醇---100%二氯甲烷---100%正己烷用每种溶剂冲洗至少10个柱体积，对于250mm× 4.6mm的分析柱，合适的冲洗流速是1～2ml/min。最后用10柱体积的异丙醇过渡，然后回到原来的流动相体系。再生还不解决问题，最后一招就是挖补柱头填料，把柱头污染的填料挖掉，用干净填料填补进去。挖补填料，破坏原有柱床结构，挖补后柱效也不可能有新柱水平，或许能再维持一段时间，但不会长久。　　97、还有溶剂中的金属过滤头生锈了，会有什么影响?会不会影响到柱子的寿命，金属离子和柱子有没有什么反应?　　答：我觉得你就把锈当成颗粒物污染的一种，会导致拖尾、柱压上升等。溶解的金属离子一般在反相柱上没有什么保留能力，马上就会被冲出柱子，不会和固定相或者和硅胶基质反应。　　98、保护柱和预柱的作用是不是一样的，如果不一样有什么区别么?保留时间漂移多少为可以接受的范围?　　答：保护柱一般带填料，相当于一根缩短了的色谱柱(一般是1-2cm长度)，卡套里可更换的柱芯，柱管、筛板和填料都有。保护柱里的柱芯好像是在前面开路的扫雷部队，流动相和样品里如有什么损害柱子的污染物，保护柱就自己承受了下来。而预柱，现在一般指的就是接在进样器和色谱柱之前的在线过滤器。在线过滤器和保护柱的最大区别是不带填料，只有可更换的筛板。预柱只能保护色谱柱免受颗粒物质的污染，而不能阻挡溶解在流动相中的强保留物质。保留时间是液相色谱中一个很有用的诊断分离问题的工具。保留时间受流动相组成、温度、pH、流速、固定相流失和柱老化等很多因素的影响，如果所有这些参数保持不变，保留时间也保持恒定。但在实际操作中，不可能对每个色谱参数进行很完美的控制，如即便加了柱温箱，温度还是会有波动 流动相组成会因组分挥发性不同而改变。所以保留时间有上下0.02-0.05min的变动是非常正常的，对某些方法有0.1min上下变动也属正常。保留时间有大的变化，预示着系统和方法存在问题。流路里有气泡存在，泵阀有泄漏，会因流量降低而导致保留时间增加。梯度混合比例阀故障也是保留时间变化原因之一。　　99、随着进样室温度升高，对分析物分解有影响吗?　　答：如果化合物热稳定性差，分析物分解可能会带来一些问题。这在制药工业中比较常见。如果药物或中间体热分解温度低于进样口温度，则分析结果中将出现特殊的峰或与目标分析物发生反应。　　100、四氢呋喃对柱子有损伤吗?我有一流动相四氢呋喃要用20%才能使峰分离到基线。可是每根柱子只用一个星期后分离效果就不好了，请问是四氢呋喃的原因吗?　　答：四氢呋喃(THF)是反相色谱中洗脱能力极强的溶剂，比甲醇和乙腈都强很多。在流动相中加入THF能改善某些难分离的物质对的分离度。但THF不稳定，容易降解生成具有很强反应活性的过氧化物，能与分析物反应生成新化合物，导致拖尾、峰分裂和鬼峰产生。高反应活性的过氧化物还可以和填料固定相发生化学作用，THF对柱子有损伤这点是无疑的，而且这种损伤是随时间累积的。THF保质期一般规定是6个月，放得越久，里面产生的过氧化物含量越大，你应该避免使用生产日期已很久的THF溶剂，而且最好将THF冷藏、干燥和避光保存，使用前最好能检测一下过氧化物的含量。

p style="text-indent: 2em "柱压升高/pp style="text-indent: 2em "原因：缓冲盐使用不当导致缓冲盐析出，堵塞塞板和键合相颗粒之间的孔隙，阻碍流动相传质，引起柱压升高；/pp/pp style="text-indent: 2em " /pp style="text-indent: 2em "相同化合物的保留时间发生变化/pp style="text-indent: 2em "原因：如果没有冲洗干净就进行进样，色谱柱内含有的盐会使化合物的保留时间发生变化；/pp/pp style="text-indent: 2em " /pp style="text-indent: 2em "柱效下降/pp style="text-indent: 2em "原因：/pp style="text-indent: 2em "i)有些缓冲盐会渗入到键合相的深处，损害硅胶基体，导致色谱柱键合相流失，柱床变松，柱效下降 /pp style="text-indent: 2em " /pp style="text-indent: 2em "ii)凝结在键合相表面，使C18碳链难以舒展，对物质的保留能力下降，导致柱效下降。因此用过缓冲盐后需要对色谱柱进行冲洗，水中缓冲盐浓度较大时应特别引起注意。/pp style="text-indent: 2em " /pp style="text-indent: 2em "流动相中缓冲盐的正确使用方法：/pp style="text-indent: 2em "1. 使用前的处理: 在使用缓冲盐作流动相之前需要用不含缓冲盐的流动相冲洗色谱柱，直至基线平稳。原则上，用于冲洗的流动相与分析时所用的流动相含水的比例相同(或含水更多)，不同的只是用于冲洗用的流动相中不含缓冲盐。理由：缓冲盐通常易溶于水，难溶于有机溶剂。用含缓冲盐的(特别是做流动相的水为饱和的缓冲盐溶液时)流动相进行分析时，如果分析前色谱柱中用于保存色谱柱的流动相中含水的比例相对较小，不先冲洗掉，接下来做样品的时候所用的流动相中如果有机溶剂含量大，而其比例中所含的水又不足以溶解该缓冲盐时，缓冲盐将会在色谱柱柱体上析出，沉积下来，这将可能导致上述对色谱柱的损害。/pp style="text-indent: 2em " /pp style="text-indent: 2em "2. 使用后的处理：用与分析时含水比例相同的流动相(与分析用流动相唯一的区别是，用于冲洗的流动相不含缓冲盐)进行冲洗约30min，直至基线平稳。如果该色谱柱在接下来很长的一段时间内不使用，要长期保存，则需再加上一步，即用纯的有机溶剂冲洗一遍，直至基线平稳。/pp style="text-indent: 2em " /pp style="text-indent: 2em "使用缓冲液要注意几点：/pp style="text-indent: 2em "1：避免使用盐酸盐，盐酸盐对钢质有腐蚀作用。br//pp style="text-indent: 2em " /pp style="text-indent: 2em "2：缓冲液最好要现配现用，往往缓冲液是良好的菌类培养液，隔天或放置长时间实验时会有很多怪现象发生。/pp style="text-indent: 2em " /pp style="text-indent: 2em "3：实验后不可用有机溶剂直接过度，有机溶剂会处使盐类析出，造成液路或色谱柱堵塞，可用95：5的水甲醇冲洗。/pp style="text-indent: 2em " /pp style="text-indent: 2em "4：使用缓冲液要及时掌握ph范围，做到胸中有数。/pp style="text-indent: 2em " /pp style="text-indent: 2em "5：清洗液路和柱子时，有温控可加热到30摄氏度易于冲洗。/pp style="text-indent: 2em " /pp style="text-indent: 2em "6：长时间用缓冲溶液要注意观察接头处有无析出，若有白色盐类析出，可考虑一定周期用10%硝酸冲洗一下液路(拆下柱子，走30ml,再用5倍水冲洗)可以避免液路的堵塞。/pp style="text-indent: 2em " /pp style="text-indent: 2em "7：选择缓冲液要用可靠的试剂，避免不纯的盐类造成不必要的麻烦。/pp style="text-indent: 2em " /pp style="text-indent: 2em "如果流动相中有机溶剂的比例很高是不能用来冲洗缓冲盐的，是洗不出来的。通常C18柱先用5%~10%的甲醇冲洗，是可以把缓冲盐冲洗出来的，然后用纯的有机溶剂来保护柱子。最好的方法是使用与流动相相同浓度不含盐的流动相进行清洗。但就是速度慢一些。用水是为了快速替换，一般在15分钟以内最好，且用0.8的流速较好. 如果用纯水冲，容易造成键合的碳链的流失，最好用5%~10%甲醇水溶液冲。可以用纯水代替流动相中的缓冲液，有机相不变。这样冲洗柱子比较稳妥。/pp style="text-indent: 2em " /pp style="text-indent: 2em "色谱柱异常及解决办法/pp style="text-indent: 2em "柱压与硅胶基质的形态(如无定形或球形硅胶)、颗粒大小、填料合成条件、装柱条件、所用流动相和分析时的温度有关。不同厂家的色谱柱柱压会有所差别，相同流动相和温度的条件下，不同厂家的新色谱柱有的柱压可能相差4、5个MPa，特别是低端和高端色谱柱之间，这一区别比较明显。这是由色谱柱厂家所选用的硅胶基质及其生产条件决定的，这种差异的存在是正常的。同时需要说明的一点是，柱压与柱效有一定的关系，通常柱效高的色谱柱柱压相对而言会高一点，但柱压高的色谱柱并不一定就具有高柱效。/pp style="text-indent: 2em " /pp style="text-indent: 2em "在色谱柱的使用过程中柱压通常会出现两种升高的形式：/pp style="text-indent: 2em " /pp style="text-indent: 2em "第一种是，随着使用时间的延长色谱柱柱压慢慢上升，这是正常的；/pp style="text-indent: 2em " /pp style="text-indent: 2em "第二种是，使用过程中(流动相和温度没有改变的条件下)色谱柱压力突然升高很多。这种压力突然升高的现象，通常是由工作人员操作不当引起的。/pp style="text-indent: 2em " /pp style="text-indent: 2em "原因：/pp style="text-indent: 2em "1)样品太脏，使用前没有过滤，导致柱筛板堵塞；/pp style="text-indent: 2em "2)样品含有的杂质在流动相中的溶解性不是很好，与流动相混合后析出，导致柱塞板堵塞； /pp style="text-indent: 2em "3)使用缓冲盐，处理错误，缓冲盐在色谱柱中析出，堵塞塞板和键合相颗粒之间的孔隙。/pp style="text-indent: 2em " /pp style="text-indent: 2em "解决办法对于第二种，即柱压突然升高的情况，通常有以下几种解决办法：/pp style="text-indent: 2em " /pp style="text-indent: 2em "1)将色谱柱反接，用含水比例较大的流动相进行冲洗。/pp style="text-indent: 2em "2)色谱柱进样一端的筛板取下，分别放在水中和甲醇中超声或更换新的柱筛板。如果柱效没变，但柱压仍然较高，则应考虑进样端填料受污染的问题，因此除了取下进样端筛板超声外，还需要挖掉进样端的部分填料，挖去填料之前先检查一下填料的颜色，如果填料的颜色发生了变化，则应该挖掉直到见到白色的填料为止。/pp style="text-indent: 2em " /pp style="text-indent: 2em "挖掉后色谱柱将出现一个缺口，填补缺口的填料可以从另一支相同品牌、相同型号的报废色谱柱的出口端获得，填料用有机溶剂如甲醇等调成糊状装入缺口处，压紧刮平，再装上筛板。/pp style="text-indent: 2em " /pp style="text-indent: 2em "柱子使用经验谈：/pp style="text-indent: 2em "色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同；另外，在做柱性能测试时是按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件)，只有这样，测得的结果才有可比性。br//pp style="text-indent: 2em " /pp style="text-indent: 2em "1、样品的前处理：/pp style="text-indent: 2em "a、最好使用流动相溶解样品。/pp style="text-indent: 2em "b、使用予处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质。 /pp style="text-indent: 2em "c、使用0.45µ m的过滤膜过滤除去微粒杂质。/pp style="text-indent: 2em " /pp style="text-indent: 2em "2、流动相的配制：/pp style="text-indent: 2em "液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的，因此要求流动相具备以下的特点：/pp style="text-indent: 2em "a、流动相对样品具有一定的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中(或长时间保留在柱中)。/pp style="text-indent: 2em "b、流动相具有一定惰性，与样品不产生化学反应(特殊情况除外)。/pp style="text-indent: 2em "c、流动相的黏度要尽量小，以便在使用较长的分析柱时能得到好的分离效果；同时降低柱压降，延长液体泵的使用寿命(可运用提高温度的方法降低流动相的黏度)。/pp style="text-indent: 2em "d、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。如使用UV检测器，最好使用对紫外吸收较低的溶剂配制。/pp style="text-indent: 2em "e、流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。/pp style="text-indent: 2em "f、在流动相配制好后，一定要进行脱气。除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测，还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。/pp style="text-indent: 2em " /pp style="text-indent: 2em "3、流动相流速的选择：/pp style="text-indent: 2em "因柱效是柱中流动相线性流速的函数，使用不同的流速可得到不同的柱效。对于一根特定的色谱柱，要追求最佳柱效，最好使用最佳流速。对内径为4.6mm的色谱柱，流速一般选择1ml/min，对于内径为4.0mm柱，流速0.8ml/min为佳。当选用最佳流速时，分析时间可能延长。可采用改变流动相的洗涤强度的方法以缩短分析时间(如使用反相柱时，可适当增加甲醇或乙腈的含量)。/pp style="text-indent: 2em " /pp style="text-indent: 2em "注意：/pp style="text-indent: 2em "a.由于甲醇廉价，对于反相柱推荐使用甲醇体系(必须使用乙腈的场合除外)。 /pp style="text-indent: 2em "b.对于正相柱推荐使用沸程为30-60℃的石油醚或提纯后的己烷作流动相，没有提纯的己烷不得使用。用水最好使用超纯水(电阻率大于18兆欧)，去离子水及双蒸水中含有酚类杂质，有可能影响分析结果。/pp style="text-indent: 2em "c.含水流动相最*在实验前配制，尤其是夏天使用缓冲溶液作为流动相不要过夜。最好加入叠氮化钠，防止细菌生长。/pp style="text-indent: 2em "d.流动相要求使用0.45 µ m滤膜过滤，除去微粒杂质。/pp style="text-indent: 2em "e.使用HPLC级溶剂配制流动相，使用合适的流动相可延长色谱柱的使用寿命，提高柱性能。/pp style="text-indent: 2em " /pp style="text-indent: 2em "冲柱子的目的：/pp style="text-indent: 2em "只要是有机溶剂就行，不过黏度不要太大，因为有机溶剂能够防止细菌生长，冲柱子的目的就是为了防止细菌生长堵塞仪器系统和柱子。一般甲醇和乙腈相互冲洗是没有问题的，但乙腈要比甲醇价格贵的 。/pp/pp style="text-indent: 2em " /pp style="text-indent: 2em "保留时间变化的原因：/pp style="text-indent: 2em "img style="max-width:100% max-height:100% " src="https://img1.17img.cn/17img/images/202012/uepic/2cd56489-c062-4aa1-be75-7281c5c04309.jpg" title="16-47-25-88-510998.png" alt="16-47-25-88-510998.png"/br/ 柱头塌陷/pp/pp style="text-indent: 2em "在使用过程中，填料下沉，在柱子进口处出现一个小空间，使得分离效果不良。br//pp style="text-indent: 2em " /pp style="text-indent: 2em "补救方法：卸开柱头螺丝，找一点同类填料，用甲醇湿润后，添在柱子上，反复几次。然后装上螺丝，用溶剂冲洗1-2小时，使之平衡。/pp style="text-indent: 2em " /pp style="text-indent: 2em "小结/pp/pp style="text-indent: 2em "正确使用缓冲盐很有必要，既可以防止缓冲盐析出，也可以达到提高色谱柱使用寿命的目的。我们不妨用一句话来总结它的使用方法：用前要过滤，用后需冲洗。/ppbr//p

Pure 色谱纯化系统用户在使用设备过程中，有时候会出现溶剂压力高的的情况，这时候，我们需要排查背压阀是否被堵住了，视频中就是如何拆开设备后盖，取下背压阀并清洗的教程。背压阀被堵住的情况一般有几种： 1客户使用正向柱，走甲醇、二氯甲烷的时候，甲醇的比例高于 15%，会把正向柱的硅胶溶解下来，后面走到背压阀的时候造成堵塞。 2客户使用的色谱柱，是自己装填的，用的筛板可能会漏硅胶，导致的背压阀堵塞。 3客户使用的样品比较脏，溶解都比较差，长期在背压阀造成堆积导致堵塞。正常低压不接柱子走溶剂（石油醚）30mL/min 应低于 30psi。高压纯水 30ml/min 压力＜120psi。

今天，小编继续给大家带来液相色谱你问我答第五弹~1那怎么才能避免拖尾呢？答：首先我们需要找到产生拖尾的原因，拖尾通常由以下几个原因造成：柱外接口体积扩大、柱床污染以及被分析物与键合活性位点相互作用而产生的，这就需要根据不同原因来分别对待处理。2怎么检查拖尾的原因？答：首先要仔细观察色谱图，在不知道样品性质和色谱条件的情况下，色谱图可以提供很多线索，再借助其余的条件来验证基于色谱图的猜想。第yi检查峰高，观察色谱柱是不是在此色谱条件下过载了，为了确认是否真的过载，可以再进1/10 浓度的样品看看峰型是否有改善。如果低浓度下依然拖尾，再观察色谱图，如果色谱中有很多峰，看各个峰型是保持一定的拖尾程度还是随着时间推移峰型有一致的变化趋势，如果图谱中前边的峰比后边的峰拖尾的更厉害，可以考虑柱外效应的影响。如果色谱图中所有峰的拖尾程度一致，那么有两个可能：1）柱床损坏，2）是图谱中所有样品组分化学结构类似，拖尾是因化学效应产生的。3哪些物质会产生这些化学效应，能说明下吗？怎么解决？答：化学效应有好几种，最常见的就是分析物与不均一的活性表面的相互作用。典型的就是碱性化合物在反相柱中的拖尾，通常带有－COOH、－NH2、－NHR、－NR2等极性或碱性基团的化合物能与填料表面残留的硅羟基和键合相发生次级吸附作用，进而产生拖尾。解决途径： 1）分析碱性化合物可以在流动相中添加三乙胺(TEA)作为减尾剂，TEA与碱性化合物竞争结合硅羟基，用于消除分析物与残留硅羟基间的相互作用。2）酸性化合物拖尾则需要降低流动相的pH值，尽量使酸质子化，可以通过向流动相中加入竞争的有机酸，如使用0.1%三氟乙酸 (TFA) 得到了比较好的结果，并且这种添加剂具有比较低的紫外截止波长。3）提高流动相中缓冲盐的浓度，抑制离子作用。4）在流动相中添加离子对试剂，反相流动相中一般加入0.003-0.01mol/L的离子对试剂，改善峰型和增加化合物保留。5）选择高纯硅胶色谱柱和彻底封端柱，例如：月旭Ultimate Polar-RP，Xtimate C18 等。4但我在有些色谱图中，会看到色谱峰前沿，是什么会导致前沿呢？答：首先我们也需要找到前沿的原因，前沿通常有以下几个原因：柱外体积、柱床污染以及溶剂效应。这就需要我们通过观察色谱图来查找原因进而解决问题。当然过载的情况，我们也是通过降低样品浓度来验证，如果低浓度依然前沿，再观察色谱图，如果色谱中有很多峰，所有峰，看各个峰型是保持一定的前沿程度还是随时间前沿峰型有一致的变化趋势，如果图谱中前边的峰比后边的峰前沿更厉害，可以考虑柱外效应或溶剂效应的影响。如果色谱图中所有峰的前沿程度一致，那么可能是柱床损坏或图谱中的样品物质性质导致。5怎么解决峰前沿呢？答：1）溶剂效应导致的峰前沿，在反相LC中，如使用100%有机溶剂或100%强溶剂，大体积进样时，将使色谱峰过早洗脱出色谱柱，导致峰变形，可以用峰形前沿抑制器来避免这个问题。在液相色谱中用溶于流动相的小体积进样最为理想。或者用流动相或与流动相极性差不多的溶剂溶解样品，如果一定要使用强溶剂溶解，那需要减少进样体积。2）柱外效应导致的峰前沿，我们需要减少仪器系统的死体积，进而解决前沿现象。3）对于样品性质导致的峰前沿，可以考虑增加流动相中缓冲盐的浓度，而增加流动相中的离子强度，减少因静电的作用引起的前沿，或者在流动相中加适量的四氢呋喃（通常加入的量在5%内即可），当然升高柱温也是一个不错的选择。4）色谱柱涡流填料产生的空隙使流动相及溶质的流速比平均流速移动更快，从而导致峰拖尾或前伸。空隙产生的原因是填充不当，或填充柱床塌陷。5）假前沿两个物质未分离开，但出现一定的分离趋势。峰前沿案例分析：C18，流动相是水－甲醇（55：45），做出来的对照品和样品峰都前延?1）样品是否过载。降低进样浓度，看峰形是否有所改善。一般认为峰高在100mAU左右比较合适，不至于因过载影响峰形。2) 检查是否是用流动相溶解样品。溶解样品的溶剂（如纯甲醇）洗脱能力比流动相强会发生峰前延。具体机理是：正常的峰形应该是样品在色谱柱上均匀的前移的情况下得到的，浓度分布在整个通过色谱柱柱床的过程中任何时候都呈正态分布。样品溶液进样后到达色谱柱时间很短，应还未被流动相充分稀释，洗脱能力更强的样品溶剂的局部存在，将使部分样品被洗脱的速度加快，导致峰前延。3）增加流动相中缓冲盐的浓度。增加缓冲盐浓度可以增大流动相中的离子强度，减少因静电的作用（有可能存在于样品分子之间、也有可能存在于样品分子与填料表面之间）引起的前延。4）流动相中加入适量的四氢呋喃。往流动相中加入少量的四氢呋喃有时可以改善峰形、增大分离度，很多色谱工作者都知道和使用，但其机理似乎少人提及。通常所加入的量在5％以内即可，需要的时候可以加入更大的量。 6液相色谱柱应该如何活化?答：对于液相色谱柱而言，每根色谱柱在装运之前都经过了测试，并存放在测试洗脱液中进行运输。因此，在首次使用时，反相柱建议80%的甲醇使用检测样品1/2的流速冲洗4小时，再用流动相彻底地平衡色谱柱即可进样分析。如果使用流动相添加剂（如缓冲液或离子对试剂），建议使用含原有比例但不含这些添加剂的流动相进行中间过渡10至20个色谱柱体积再更换成分析样品流动相。对于具有较短化学链（例如C8、苯基、CN）键合相的色谱柱，应小心确保在使用色谱柱之前对其进行彻底的平衡。这样可确保重复性，并有助于防止保留时间的漂移。正相溶剂和反相溶剂是不互溶的，这一点不能忽略。对于新购柱子，首先请注意打开分析测试说明书，了解柱子的保存溶剂。如果保存溶剂与你将要使用的流动相不互溶，请先用异丙醇过渡。过渡过程中注意因异丙醇粘度较大，会导致柱压升高，适当调低流速。如果流动相中含有缓冲盐类，先用不含缓冲盐的同比例流动相过渡，避免缓冲盐的析出。7我在使用氨基柱分析糖类物质时，为什么目标物的保留时间会不稳定，逐渐前移呢？答：这是由氨基柱的特性造成的，因为氨基柱在分析糖类时，典型的流动相是60%~90%的乙腈水混合液，当在使用过程中，填料空隙处高浓度的氨基基团显碱性，导致硅胶和键合相缓慢的水解，随着时间的推移，脱落的键合相越来越多，就会导致目标物的保留时间发生变化，同时这也是氨基柱在反相条件下寿命变短的原因。8色谱柱压力高答：色谱柱压力升高是液相工作者们在实际应用过程中较为常见的问题，首先考虑“堵”。压力升高的主要原因总结为以下几点：1. 色谱柱入口筛板堵塞；2. 样品或流动相缓冲盐在色谱柱内析出；3. 色谱柱污染；4. 流动相粘度过高；5. 在线过滤器或者保护柱堵塞；6. 管线堵塞；7. 聚合物色谱柱：溶剂改变导致溶胀。解决途径：1．用标准流速的1/4流速反冲色谱柱，不接检测器，去除筛板堵塞物。（除1.8µm粒径色谱柱外）2．尽量选用流动相做样品溶剂，减少样品析出的可能。尽可能降低流动相中盐的浓度。使用带盐的流动相后，应使用与流动相中盐相等比例的超纯水和有机相冲洗色谱柱10到20柱体积，再保存在适宜的溶剂中。3．色谱柱污染，需要对色谱柱清洗再生。4．尽量选择粘度小的溶剂做流动相，或者升高柱温。5．检查在线过滤器滤头以及保护柱柱芯，必要时更换。6．拆卸管线以便确证，必要时更换。7．对于聚合物基质的色谱柱，需要了解溶剂兼容性信息。 9色谱柱压力低?答：色谱柱压力降低，首先考虑“漏”。压力升低的主要原因总结为以下几点：1. 溶剂进口过滤芯堵塞；2. 连接管路泄漏或其他备件（泵头密封垫）；3. 溶剂或流速改变；4. 泵入口阀失灵；5. 泵出口阀失灵；6. 色谱柱失效，固定相流失。解决途径：1、检查各管路及密封垫等备件；2、更换色谱柱；3、检查色谱条件是否改变；4、检查泵流量准确。10液相的死体积和延迟体积?答：1）死体积指的是有效进样点到有效检测点之间排除色谱柱中包含固定相部分的体积。包括4部分：进样器至色谱柱管路体积、柱内固定相颗粒间隙（被流动相占据，Vm）、柱出口管路体积、检测器流动池体积。其中只有Vm参与色谱平衡过程，其他 3部分只起峰扩展作用。为防止峰扩展，这3部分体积应尽量减小。2）延迟体积延迟体积指的是溶剂混合点（通常在液相色谱仪的混合腔内或比例阀中）与LC柱头之间的体积。

液相色谱是世界各地实验室使用的流行纯化技术。如果系统设置和操作正确，它可以立即从混合物中分离出所需的化合物。学习如何使用和制备缓冲液和溶剂是能提高系统性能的重要技巧之一。准确制备和正确选择缓冲液对于在液相色谱中获得可重复的结果至关重要。 一、了解您的化合物 如果您正在寻找混合物中的特定化合物，您应该使用最能将您的分析物与其他分析物分开的缓冲液/溶剂组合。例如，了解极性和溶解度（极性或非极性）、电离、您正在寻找的紫外吸光度将有助于指导您使用特定的色谱柱和溶剂组。 二、纯度 使用较低等级且成本较低的试剂来制作缓冲液以节省一些钱是很诱人的，但从长远来看，它最终会变得更加昂贵。与含有稀少或不含杂质的 HPLC 级试剂相比，纯度较低的试剂会导致不需要的峰和嘈杂的基线。它们还会对您的系统造成严重破坏，造成阻塞，从而导致系统故障和更昂贵的维护费用。所有试剂和溶剂，包括您使用的水，都应该是高质量的 HPLC 级，以减少缓冲液中不需要的微粒。高级试剂的成本可能比低级试剂略高，但纯度的差异是值得的。HPLC 级试剂还有助于获得更一致的结果并保持系统平稳运行。 即使是使用高纯度实验级别的溶剂，也需要在进入色谱系统前进行过滤，采用恒谱生溶剂过滤器可以有效过滤化学污染等杂质进入系统，通用于流动相或输液泵，配套用于外径1/8英寸或1/16英寸的管子，放置于流动相溶剂瓶中，过滤杂质。过滤后，溶剂应储存在有盖的容器中，以防止被灰尘或其他不需要的材料污染。 四、避免气泡 在与您的系统一起使用之前对缓冲液进行脱气或真空过滤可以大限度地减少流动相中的空气和微粒。如果液相色谱系统中发生流动相脱气，主要会影响泵和检测器。为了解决这个问题，在将新制备的流动相泵入 HPLC 系统之前进行脱气，连同在线脱气器，应彻底脱气以去除所有溶解的气体。最有效的脱气形式是用氦气或其他低溶解度气体鼓泡。如果该方法可用，建议在整个分析过程中以非常低的水平持续对流动相进行脱气。 五、定期检查 细菌几乎可以在任何溶液中适应和生长，甚至是有机溶剂，具体取决于浓度。为防止细菌生长堵塞色谱柱筛板，每次制备新的缓冲液批次时更换缓冲液容器，检查缓冲液瓶/袋是否有细菌生长迹象。摇晃或搅拌时出现浑浊的溶液应丢弃。使用抑菌剂（例如 0.02% 叠氮化钠）处理会延长溶液的储存时间，尽管这些试剂可能会影响您的色谱图。 六、新鲜配置 恒谱生建议稀释缓冲液的有效期为一周。这种做法可确保缓冲液的 pH 值不受长期储存的影响，并且不会出现微生物生长。pH 值变化和微生物生长都会影响您的色谱运行并导致运行之间的不一致。虽然您可以添加稳定剂，例如焦亚硫酸钠，但这些试剂会影响光学和色谱结果。 液相色谱法可能是一项具有挑战性的技术。遵循上述关于如何准备和使用缓冲液进行纯化的提示，将有助于使每次运行的一致性和可重复性。

详细信息 湖南师范大学2022年第二十九批校内招标公告 湖南省-长沙市-岳麓区 状态：公告 更新时间： 2022-12-04 项目概况 湖南师范大学2022年第二十九批校内采购项目的潜在投标人应在长沙市雨花区黎锦苑商业广场（花侯路旁）达璇酒店五楼（天策致远工程咨询管理有限公司）获取招标文件，并于2022年12月16日10点00分（北京时间）前递交投标文件。 一、项目基本情况 项目名称：湖南师范大学2022年第二十九批校内采购项目 预算金额：418万元（人民币） 最高限价（如有）：418万元（人民币） 采购需求： 包号 品目号 货物名称 数量 预算（万元） 最高限价（万元） 包预算（万元） 第1包 品目1 高速冷冻离心机 1台 18.8 18.8 18.8 第2包 品目1 凝胶色谱仪GPC 1台 16 16 139.4 品目2 高效液相色谱仪 1台 66 66 品目3 半制备液相色谱系统 1台 20 20 品目4 分析型高效液相色谱 1台 37.4 37.4 第3包 品目1 气相色谱与质谱联用仪 1台 40 40 98 品目2 气相色谱质谱联用系统 1台 58 58 第4包 品目1 热释光光谱仪 1台 20 20 124.8 品目2 分子荧光光谱仪 2台 49 49 品目3 傅里叶变换红外光谱仪 2台 30 30 品目4 组装式教学拉曼光谱仪 1台 15.8 15.8 品目5 高精度智能旋光仪 1台 10 10 第5包 品目1 筛板精馏实验装置 1套 13 13 37 品目2 吸收与解吸实验装置 2套 24 24 注：本次采购活动将按包号划分来确定中标人。投标人可就上述采购内容的一个包或多个包进行投标，包为最小中标单位。投标人就多个包投标的，必须分包单独编制投标文件，并按本项目招标文件要求分包密封和标记，否则视为无效投标。 合同履行期限：详见本项目招标文件。 本项目(不接受)联合体投标。 二、投标人的资格要求： 1.满足《中华人民共和国政府采购法》第二十二条规定； 2.本项目的特定资格要求：（1）被“信用中国”网站列入失信被执行人和重大税收违法案件当事人名单的、被“中国政府采购网”网站列入政府采购严重违法失信行为记录名单（处罚期限尚未届满的），不得参与本项目的政府采购活动。 三、获取招标文件 时间：2022年12月05日至2022年12月09日，每天上午8:30至12:00，下午14:30至17:00。（北京时间，法定节假日除外） 地点：天策致远工程咨询管理有限公司（长沙市雨花区黎锦苑商业广场（花侯路旁）达璇酒店五楼）。 方式：现场领购。投标人在购买招标文件时须出具营业执照副本复印件、法定代表人身份证明（法定代表人报名提供）或法定代表人授权委托书（授权委托人报名提供，应附法人代表和被授权人的身份证复印件）、个人身份证现场购买招标文件，要求注明联系方式、邮箱号码及所投包号。 售价：￥400.0元，本公告包含的招标文件售价总和 四、提交投标文件截止时间、开标时间和地点 提交投标文件截止时间：2022年12月16日10点00分（北京时间） 开标时间：2022年12月16日10点00分（北京时间） 地点：天策致远工程咨询管理有限公司（长沙市雨花区黎锦苑商业广场（花侯路旁）达璇酒店五楼）。 五、公告期限 自本公告发布之日起5个工作日。 六、其他补充事宜 项目开评标期间，为做好新型冠状病毒感染肺炎疫情防控工作，防止交叉感染，本次开评标将采取全部人员防护上岗措施，并在开评标场所入口处进行体温检测和人员信息登记。温馨提示： （1）为避免交叉感染，本项目各投标人委派授权委托人最多1人携身份证原件及其他资料参加报名和开标会议。参加开标的投标人代表应确保开标当日居民健康码为绿色,方可参加投标活动。 （2）请各投标人员必须佩戴口罩，尽量提前到达开标现场，并积极配合工作人员进行现场体温检测并进行健康信息登记。 （3）进入开标活动现场的人员应无感冒、发烧、咳嗽等症状，并按疫情防护要求做好有效防护措施。 （4）近一个月内有与新冠肺炎病人有接触史的，必须向代理服务机构特别申报。如不申报，将负法律责任。 七、对本次招标提出询问，请按以下方式联系。 1.采购人信息 名 称：湖南师范大学 地址：长沙市岳麓区麓山路36号 联系方式：易老师 肖老师 0731-88872366 2.采购代理机构信息 名 称：天策致远工程咨询管理有限公司 地 址：长沙市雨花区黎锦苑商业广场（花侯路旁）达璇酒店五楼 联系方式：罗芳 李谦 唐玉琳 0731-89920116 3.项目联系方式 项目联系人：罗芳 李谦 唐玉琳 电 话：0731-89920116 × 扫码打开掌上仪信通App 查看联系方式 基本信息 关键内容：波散型XRF,红外光谱仪,气相色谱仪,旋光仪,制备液相色谱,离心机,凝胶色谱仪,液相色谱仪,激光拉曼光谱,分子荧光光谱 开标时间：2022-12-16 10:00 预算金额：418.00万元 采购单位：湖南师范大学 采购联系人：点击查看 采购联系方式：点击查看 招标代理机构：天策致远工程咨询管理有限公司 代理联系人：点击查看 代理联系方式：点击查看 详细信息 湖南师范大学2022年第二十九批校内招标公告 湖南省-长沙市-岳麓区 状态：公告 更新时间： 2022-12-04 项目概况 湖南师范大学2022年第二十九批校内采购项目的潜在投标人应在长沙市雨花区黎锦苑商业广场（花侯路旁）达璇酒店五楼（天策致远工程咨询管理有限公司）获取招标文件，并于2022年12月16日10点00分（北京时间）前递交投标文件。 一、项目基本情况 项目名称：湖南师范大学2022年第二十九批校内采购项目 预算金额：418万元（人民币） 最高限价（如有）：418万元（人民币） 采购需求： 包号 品目号 货物名称 数量 预算（万元） 最高限价（万元） 包预算（万元） 第1包 品目1 高速冷冻离心机 1台 18.8 18.8 18.8 第2包 品目1 凝胶色谱仪GPC 1台 16 16 139.4 品目2 高效液相色谱仪 1台 66 66 品目3 半制备液相色谱系统 1台 20 20 品目4 分析型高效液相色谱 1台 37.4 37.4 第3包 品目1 气相色谱与质谱联用仪 1台 40 40 98 品目2 气相色谱质谱联用系统 1台 58 58 第4包 品目1 热释光光谱仪 1台 20 20 124.8 品目2 分子荧光光谱仪 2台 49 49 品目3 傅里叶变换红外光谱仪 2台 30 30 品目4 组装式教学拉曼光谱仪 1台 15.8 15.8 品目5 高精度智能旋光仪 1台 10 10 第5包 品目1 筛板精馏实验装置 1套 13 13 37 品目2 吸收与解吸实验装置 2套 24 24 注：本次采购活动将按包号划分来确定中标人。投标人可就上述采购内容的一个包或多个包进行投标，包为最小中标单位。投标人就多个包投标的，必须分包单独编制投标文件，并按本项目招标文件要求分包密封和标记，否则视为无效投标。 合同履行期限：详见本项目招标文件。 本项目(不接受)联合体投标。 二、投标人的资格要求： 1.满足《中华人民共和国政府采购法》第二十二条规定； 2.本项目的特定资格要求：（1）被“信用中国”网站列入失信被执行人和重大税收违法案件当事人名单的、被“中国政府采购网”网站列入政府采购严重违法失信行为记录名单（处罚期限尚未届满的），不得参与本项目的政府采购活动。 三、获取招标文件 时间：2022年12月05日至2022年12月09日，每天上午8:30至12:00，下午14:30至17:00。（北京时间，法定节假日除外） 地点：天策致远工程咨询管理有限公司（长沙市雨花区黎锦苑商业广场（花侯路旁）达璇酒店五楼）。 方式：现场领购。投标人在购买招标文件时须出具营业执照副本复印件、法定代表人身份证明（法定代表人报名提供）或法定代表人授权委托书（授权委托人报名提供，应附法人代表和被授权人的身份证复印件）、个人身份证现场购买招标文件，要求注明联系方式、邮箱号码及所投包号。 售价：￥400.0元，本公告包含的招标文件售价总和 四、提交投标文件截止时间、开标时间和地点 提交投标文件截止时间：2022年12月16日10点00分（北京时间） 开标时间：2022年12月16日10点00分（北京时间） 地点：天策致远工程咨询管理有限公司（长沙市雨花区黎锦苑商业广场（花侯路旁）达璇酒店五楼）。 五、公告期限 自本公告发布之日起5个工作日。 六、其他补充事宜 项目开评标期间，为做好新型冠状病毒感染肺炎疫情防控工作，防止交叉感染，本次开评标将采取全部人员防护上岗措施，并在开评标场所入口处进行体温检测和人员信息登记。温馨提示： （1）为避免交叉感染，本项目各投标人委派授权委托人最多1人携身份证原件及其他资料参加报名和开标会议。参加开标的投标人代表应确保开标当日居民健康码为绿色,方可参加投标活动。 （2）请各投标人员必须佩戴口罩，尽量提前到达开标现场，并积极配合工作人员进行现场体温检测并进行健康信息登记。 （3）进入开标活动现场的人员应无感冒、发烧、咳嗽等症状，并按疫情防护要求做好有效防护措施。 （4）近一个月内有与新冠肺炎病人有接触史的，必须向代理服务机构特别申报。如不申报，将负法律责任。 七、对本次招标提出询问，请按以下方式联系。 1.采购人信息 名 称：湖南师范大学 地址：长沙市岳麓区麓山路36号 联系方式：易老师 肖老师 0731-88872366 2.采购代理机构信息 名 称：天策致远工程咨询管理有限公司 地 址：长沙市雨花区黎锦苑商业广场（花侯路旁）达璇酒店五楼 联系方式：罗芳 李谦 唐玉琳 0731-89920116 3.项目联系方式 项目联系人：罗芳 李谦 唐玉琳 电 话：0731-89920116

超高效液相色谱-质谱(UPLC-MS)是近十多年迅速发展起来的高通量分析技术，广泛应用于环境科学、医学、药物研发等领域，是检测极性和中等极性有机化学物的黄金法则。然而，该技术隐藏着一些缺陷。如，一些化合物能在电喷雾离子源(ESI)上发生氧化还原反应 又如UPLC柱能产生强大的剪切力导致大分子化合物(如聚合物)断链。　　近期，在中国科学院广州地球化学研究所研究员彭先芝的指导下，博士研究生唐才明与广州质量监督检测研究院的工程师谭建华开展一项研究，发现和确证了还原性分析物在UPLC柱上的氧化反应(图1)，并成功研发出一种解决这种柱上氧化反应问题的方法。　　该课题组在一项天然产物分析研究中意外发现，多酚类植物提取物可能会在UPLC-MS系统中发生氧化反应，造成分析物信号降低且不稳定，由此导致无法有效的定量分析，定性分析也存在误判的风险。对此，研究人员利用高分辨质谱技术，联合柱后泵入还原剂溶液和分析物溶液的方式，确证了多酚类等易氧化分析物能在UPLC柱上发生氧化反应，且氧化程度显著(图2)。通过分析色谱图，研究人员推测氧化反应发生的位置应该为UPLC的出口端筛板，因此设计一系列实验验证了这一推断。最后，研究人员通过柱后泵入还原剂溶液的方式解决了UPLC柱上的氧化反应问题，并认为其原理可能是还原剂在高温的ESI中与氧化产物反应，将其还原至原分析物形态(图3)。　　这项研究成果对天然产物研究具有重要意义，并预期可能会在药物分析和蛋白质分析中发挥积极作用。国家质检总局公益基金为该研究提供了部分资助。　　文章信息：Tang, Caiming Tan, Jianhua Jin, Jiabin Xi, Shaofeng Li, Huiyong Xie, Qilai Peng, Xianzhi. Observation and confirmation of oxidation reactions occurring on ultra-high-performance liquid chromatography columns. Rapid Communications in Mass Spectrometry, 2015, 29(20): 1863-1873. DOI: 10.1002/rcm.7291.　　图1. 发生在UPLC-ESI-MS系统中的氧化还原反应示意图　　图2. 分析物在UPLC柱上发生氧化反应　图3. 分析物在UPLC柱上发生氧化反应及在有还原剂的ESI源中发生还原反应

李昌厚中国科学院上海生物工程研究中心 上海 200233)　　摘要　　本文重点介绍了HPLC色谱分离柱的柱填料发展现状(研发中的关键点、理论依据、国内外的发展梗概等等)和发展趋势、柱填发展料的最新进展(重点讨论最具代表性的核壳柱的问题) 同时，对与填料有关的问题进行了讨论。　　1、前言　　色谱柱是HPLC系统的心脏，而色谱填料是色谱柱的核心，因此色谱填料或色谱柱被誉为“色谱芯”。HPLC色谱技术的进步，往往取决于新型色谱填料的出现,可以说色谱填料的发展是研发具有高选择性、高灵敏度、高通量的色谱分离柱的关键之一。众所周知，HPLC分离柱的基本原理是：利用混合样品各组份在固定相(色谱填料)和流动相中的分配系数不同，当恒定的流动相推动样品中的各组份在色谱柱中迁移的时候，由于各组分在流动相和固定相两相中进行连续、反复、多次的分配，从而形成差速移动，因而出现从色谱柱中洗脱出的时间差异，从而达到色谱分离的目的。　　由于HPLC具有高速度、高分离效率、高灵敏度等优点，所以其仪器和应用发展很快[1]、[2]。从二十世纪60年代问世以来， HPLC已经成为分析化学领域发展最快的技术之一。经过几十年的发展和完善，HPLC现在已成为生物技术、生物化学、医学、药物临床、化学化工、食品、卫生、环保检测和商检等领域不可缺少的检测和分离手段之一。而色谱分离技术的重大进展，往往是随着新的色谱分离材料技术的突破而出现的。由此可见，色谱柱填料的重要性。　　为了弘扬民族色谱柱填料的发展，本文根据仪器学理论[6]、分析检测实践的要求[7]，和作者长期研发、使用HPLC仪器的经验和教训，重点介绍作者所了解到的部分国产色谱填料产品。同时讨论了HPLC分离柱填料的发展趋势，和色谱柱填料研发时应该特别重视的有关问题，供有关科技工作者参考。　　2 HPLC色谱分离柱填料的发展现状[3]和趋势　　1)色谱填料发展中值得特别重视的三个关键点问题　　(1)柱效(N)：一般由填料粒径、均匀性、孔道结构决定 　　(2)选择性(a)：分离选择性由填料表面功能基团，孔道结构，流动相和pH决定 方法开发的最终目标是如何使得a≠1 　　(3)保留因子(K):由填料功能基团及其密度，比表面积，孔道结构，流动相决定 保留因子的最佳值为K=5 　　2)研发、选择色谱填料的理论依据[3]　　研发、选择色谱填料，主要根据色谱分离方程式[3]　　3)应该重视色谱填料粒径决定柱效的问题[3]图1　　结论：柱效(N)、选择性(ɑ)、保留因子(K)，是色谱填料研发的关键点所在 也是使用者挑选、使用中必须高度重视的三个根本性的问题。　　色谱柱的柱效是最重要的关键指标，一般都取决于固定相(填料)的性能和装柱技术。而HPLC的色谱柱填料大致可以分为三种[1]：硅胶或以硅胶为基质的填料、聚合物填料和无机物填料。正相色谱柱大多采用硅胶类填料，反相色谱柱则多以硅胶为基质组成的官能团类的填料。以聚合物为填料的色谱柱最大的特点是PH值可在1-14之间都能使用，疏水性强。但无机填料色谱柱一般只是限于特殊用途，比较少用。　　目前绝大部分的HPLC分析和分离材料都是在几种主要基质材料上衍生而来的。按基质的不同，填料主要可分为三大类，即以二氧化硅为代表的无机基质填料、以交联聚苯乙烯和聚甲基丙烯酸酯为代表的合成高分子填料、以葡聚糖为代表的天然碳水高分子改性填料。在高效液相分析领域，二氧化硅(硅胶)及硅胶键合分离填料是应用历史最悠久、也是最为广泛的高效液相色谱柱填料，而合成高分子填料和天然高分子改性填料主要用于现代生物制药工业色谱分离纯化。　　4)发展简况　　据统计，硅质填料在色谱分析填料家族的应用方面占80%左右。硅胶除了具有良好的机械强度、容易控制的孔结构和比表面外，一个突出的优点就是其表面含有丰富的硅羟基，这是硅胶可以进行表面化学键合和改性的基础, 因此硅胶填料装填的色谱柱柱效高,分辨率高,可用于高效液相色谱分离。早期的硅胶是无定型的二氧化硅颗粒(图2)，主要是通过碾磨块状硅胶, 然后通过筛分制备而成。这种色谱填料装成的柱子柱效低，稳定性和重复性，适用于较粗分析和分离。HPLC技术取得极大的进步是得益于球形硅胶的出现(图3), 尤其是小粒径的球形硅胶(粒径10微米)的出现(图4)，极大地改善了色谱填料的性能, 大幅度增大高效色谱的分离和分析能力, 才使得HPLC成为生化、医学、药物临床、化学化工、食品、卫生、环保检测和商检等领域不可缺少的检测和分离手段。图2 无定型硅胶(早期) 图3 球形硅胶 (现在) 图4 单分散球形硅胶(将来)　　在采用多孔二氧化硅微球作为色谱分离和分析材料的性能时，一般由其粒径大小、粒径分布、孔径，以及表面功能基团等决定。一般来说,粒径越小, 柱效越高, 分辨率也越高，但反压也越高.因此用于工业制备的色谱填料颗粒往往在10微米以上, 常规HPLC色谱柱硅胶填料粒径在3-5微米之间, 而用于UHPLC 的色谱填料在2微米以下。在其它条件相同的情况下, 粒径分布越窄, 柱效越高, 反压也越低, 重复性越好，粒径越小的色谱填料对粒径的均匀性要求越高。目前工业球形多孔氧化硅微球主要用溶胶一凝胶法 (So-Gel)和喷雾干燥法制得。这两种方法适合于大工业制备各种尺寸大小的球形硅胶, 但制备的粒径分布宽, 不能直接满足色谱填料的需求，产品需要进行复杂的分级工艺去除大小不合格的硅胶。　　国外大规模生产硅胶色谱填料的主要厂家是瑞典的Kromasil、日本大曹(Daisol)和富士公司 (Fuji)。近几年硅胶色谱填料的研制及产业化在国内进展也非常快,下面介绍一下作者经过调查所了解的、值得读者们高兴和骄傲的，部分国产色谱柱填料的研发情况，供大家参考。　　我国月旭科技(上海)股份有限公司正在大力发展色谱柱和色谱填料研究和生产，年销售各种色谱柱达到4万根以上。月旭科技2005年开始从事色谱相关的业务，14年来在色谱领域坚持自主研发和自主生产自己的品牌，先后推出了包括Ultimate、Xtimate、Welchrom、Topsil和Boltimate等多个品牌的色谱柱及色谱填料产品，为广大客户提供色谱分离分析技术、产品和整体解决方案。　　特别值得一提的是,月旭科技打破进口品牌的壁垒，在色谱填料的研发和色谱分离分析方法开发已经达到国内领先、国际先进的水平。据悉，目前月旭开发的色谱柱填料超过百余种，在医药、食品和环境检测方面的应用超过5000个，并且已经有19款被列入美国USP-PQRI数据库。　　苏州纳微科技股份有限公司利用独有的专利技术制备出均粒、高纯、全孔硅胶色谱填料(UniSil™ 系列)，突破了单分散二氧化硅制备技术难题。该填料具有精确的粒径尺寸和高度均匀的粒径分布，是目前色谱技术应用的理想填料之一。纳微科技生产的高质量，高性能，种类齐全的硅胶基质色谱填料(图5)。常规硅胶色谱填料粒径大小分别有2、3、5、8、 10、 15、 20、 30、40、 50μm 常规孔径可选择0.1nm,、0.12nm 、 0.17nm 、 0.3nm 、0.5nm。该填料具有机械强度高、柱效高、分辨率高和反压低等特点，并已广泛应用于有机化合物及中性分子的分析和大规模生产制备。图5 纳微系列单分散多孔超纯硅胶色谱填料扫描电镜图　　纳微科技的UniSil™ 硅胶介质的特点如下：　　(1)球形粒径高度均一：这一特点，会带来装柱容易、装好的色谱柱高分辨率 　　(2)优化的孔径结构：可以带来高载量，高选择性 　　(3)良好的封尾 这是一个很重要的特点，它可以使色谱柱耐碱性好，使用寿命长 　　(4)无泄漏、无碎片 产品洁净，甚至可以延长色谱柱的寿命等等 　　纳微科技研发的色谱填料，突破了很多难关，取得了具有完美的球形和高度的粒径均一性，相对市场上粒径分布较宽的填料而言，具有装柱容易、反压低、柱效高、柱床稳定、分辨率高、流速均匀、柱通透性好等优点。同时，无碎片、无小颗粒的纳微填料也可避免筛板堵塞等问题。纳微UniSil硅胶填料与国外进口产品的扫描电镜对比如图6所示。图6 纳微UniSil硅胶填料与国外进口产品的扫描电镜对比图　　纳微科技公司生产的色谱填料与国内外生产的一般色谱柱填料相比较，具有粒度均匀等优点。其粒径分布与流速特征关系图如图7所示：图7 国内外一般的色谱填料 纳微科技优质色谱填料　　如图7所示：由于纳微科技色谱填料具有完美的球形和高度的粒径均一性(右图)，所以，具有装柱容易、反压低、柱效高、柱床稳定、分辨率高、流速均匀、柱通透性好等优点。同时，无碎片、无小颗粒的纳微填料也可避免筛板堵塞等问题。　　国内外开展色谱填料研发的企业还有很多，有的公司已经达到了很高的水平。但是因为篇幅所限，作者不可能在一篇文章中一一介绍，恳求广大读者谅解。　　5)硅胶色谱填料的发展趋势　　第一代，无定型硅胶色谱填料：1960年前后，国内大规模生产,但是形态不规则、粒径大小不可控、粒径分布宽、孔径分布宽、容易破碎、柱效低、金属杂质高、柱床不稳定、重复性差、使用寿命短、线性流速不均、适用于粗慥的分析工作。　　第二代，多分散球形硅胶色谱柱填料：1980前后，国外垄断、国内空白、形态(球型)粒径大小不精确、粒径分布较宽、孔径分布窄、柱床较稳定、不容易破碎、重现性较好、金属杂质低、产品使用寿命长、线性流速较均、可以满足各种高效分离要求。　　第三代，单分散球形硅胶色谱柱填料：2010以后，中国纳微独家生产、形态(完美球型)粒径精确可控、粒径分布极窄、孔径分布窄、柱床极稳定、不容易破碎、柱效高、重现性好、金属杂质低、产品使用寿命长、线性流速非常均匀、分离效率更好。　　目前中国纳微公司的色谱柱填料总体上可以说国际领先水平。　　3、色谱分离柱填料的最新进展　　目前，色谱分离柱还是以硅胶填料为，但是各种新型的填料也在不断涌现。因篇幅所限，本文重点简介具有代表性的核壳柱的进展情况：　　3.1、核壳HALO色谱填料问世　　新型的核壳型(core-shell)色谱填料是Jack Kirkland 于2006年研制成功。它将多孔硅壳熔融到实心的硅核表面。它的多孔的环状颗粒具有极窄的粒径分布和扩散路径，能同时减小轴向和纵向扩散，可以允许使用更短的色谱柱和较高的流速以达到快速、高分辨率分离。核壳HALO色谱填料的问世，是近50年来色谱填料进展的重大突破，对液相色谱仪器及其应用将产生巨大影响。　　3.1.1、核壳HALO填料的结构　　实心球：无孔硅胶，粒径大小1.7 µm左右 　　壳层：纳米级硅胶颗粒，厚度为0.5 µm 外表层可键合不同功能基团，以满足不同分离模式的分离要求。　　3.1.2、HALO柱填料的端基封口[3]、[4]　　端基封口非常重要，要求封口残余硅羟基，防止柱内不要的化学反应发生，减少不可逆吸附或防止峰拖尾，增加碳含量(0.1-1.0%)，提高柱性能。　　常用封尾试剂：三甲基氯硅烷　　由于空间位阻的存在，键合反应最多只能覆盖50%的硅羟基， 超过一半硅羟基是活性硅羟基，与碱性基团会发生离子交换作用，增加了保留，导致峰形拖尾，用短链氯硅烷(如三甲 基氯硅烷)键合活性的硅羟基，可以减小拖尾，增加硅胶的化学稳定性，延长使用寿命。但不是所有的分离纯化都需要完全封端，在一些场合未封端的硅胶填料由于有硅羟基的存在，反而增强选择性和分离度。反应条件及硅胶表面性能是影响封端的重要因素。　　3.1.3、核壳结构色谱填料的特点　　核壳型(core-shell)色谱填料是将多孔硅壳熔融到实心的硅核表面而制备的，这些多孔的“光环”状颗粒具有极窄的粒径分布和扩散路径，可以同时减小轴向和纵向扩散，允许使用更短的色谱柱和较高的流速以达到快速、高分辨率分离。　　国产Boltimate核壳色谱柱的硅胶颗粒粒径是2.7μm，它是由1.7μm直径的实心核与0.5μm厚的多孔层所构成的[3]。这种核壳型的硅胶颗粒提供了较短的传质路径，减少了轴向扩散，而实心核硅胶提供坚固的支撑结构，可以承受高压，具有与1.8 μm填料相似的分离效率，且柱反压只有sub-2μm色谱柱的50%和明显的抗污染性能。由于实心核的存在，以及薄的多孔层，使得样品分子的扩散距离减小，即可以使用更高的流动相流速，极大的提高了分析速度。　　3.1.4 关于核壳柱的指标等有关问题，作者已经在仪器信息网(2020-08-21)上讨论过了。此不赘述，请读者自己查阅。　　3.2. 体积排阻色谱填料　　体积排阻色谱填料的推出，是色谱填料的重要进展之一。体积排阻色谱(Size exclusion chromatography，SEC)是一种完全按照溶质分子在流动相溶剂中的分子尺寸大小分离的色谱法，是一种非常重要的分离分析生物大分子如蛋白质、多肽、生物酶的工具。其分离原理如下：体积排阻填料具有一定孔径分布，当具有不同尺寸的目标物分子进入体积排阻色谱柱时，分子量很大的分子无法进入填料内部孔中，因此最先被洗脱下来 分子量相对较小的分子能够进入一部分填料内部孔中，因此随后被洗脱下来 分子量很小的分子则能够进入到填料的所有内部微孔中，因而其洗脱体积接近色谱柱的柱体积。根据洗脱体积的不同，可实现各组分之间的有效分离。体积排阻色谱填料通常是具有适合一定孔径的球形硅胶基质填料，由于它具有良好的机械强度及具有极高的分离纯化效率，在生物大分子的分离分析领域广泛使用。　　国产的Xtimate SEC填料是在超高纯全多孔硅胶表面包覆一层具有良好稳定性的亲水性聚合物的体积排阻色谱填料，其填料的作用基团为二醇基，填料表面因受二醇基官能团保护而不与蛋白质相互作用，使得蛋白、生物酶、多肽等样品的非特异性吸附极小，因而广泛应用于生物大分子的分离。　　3.3 改进型的3微米新型核壳型HALO色谱柱填料　　福立仪器利用公司的专利技术，采用改进的3微米的新型核壳型色谱柱填料，使HPLC系统压力降低到常规HPLC范围，解决了亚2微米分析柱的不足，保证了UPLC超高效的分离分析结果的同时，降低了柱压，仪器的理论塔板数与采用亚2微米的全多孔型柱效相同，但是压力只有其1/2左右。这种改进对HPLC分离柱的发展及应用，将起到重要作用。　　3..4 稀有填料(如微米球形金颗粒)的出现，也是色谱柱发展中值得注意的问题，可能会对色谱柱的发展带来新机。　　下图是一种微米球形金颗粒填料：(摘自：J. Chromatogr. A, 1198-1199, (2008), 95-100.)　　随着以人类健康、生物工程为核心的生命科学、环境科学及制药、合成化学的迅猛发展，人们对HPLC也将不断提出更高、更新、更多的要求。各种色谱柱及其填料将会有更大的发展、各种新型的色谱柱也将不断涌现。有关HPLC色谱分离柱及其填料的发展非常快，开展研发HPLC色谱分离柱及其填料研究与开发的单位很多，例如迪马公司等等，因篇幅所限，本文不能一一列举，希望大家谅解。　　4、讨论　　从仪器学理论[5]和实际情况来看，HPLC系统是一个比较复杂的、高科技系统，由高压恒流泵、色谱柱、检测器三大部分组成。还有数据处理、智能化等部分，都涉及到很多学科。本文只是讨论了色谱柱的填料，但是建议读者们一定要将色谱填料和色谱柱联合起来考虑。建议有关企业应该引起重视，若要真正研发出优质色谱填料和色谱柱，还必须把它们与HPLC系统联合起来考虑。从整体来看，作者认为如果全世界的科技工作者能将泵、柱、检测器、应用联合起来考虑(研发)，则还可以大大加快HPLC仪器及其应用的发展的速度。所以，作者建议我国的有关科技人员联合起来，为发展我国的民族分析仪器、发展国产品牌的HPLC系统、提高有关的应用水平、赶超HPLC领域仪器和应用的国际先进水平共同努力奋斗。　　5、主要参考文献　　[1]李昌厚，高效液相色谱仪器及其应用，北京：科学出版社，2014.　　[2]李昌厚，高效液相色谱仪器及其最新进展和有关问题，2019年，仪器信息网.，2019-11-07　　[3]江必旺，硅胶色谱填料制备技术最新进展，2020年7月14日，仪器信息网第五届色谱网络会议(iCC2020)　　[4]闫超，液相色谱及其应用的最新进展，“我国科学器自主创新发展”论坛，2012年8月23日，上海。　　[5]李昌厚，仪器学理论与实践，北京：科学出版社，2008　　[6]李昌厚，用好HPLC的九大关键问题，仪器信息网，2020/2/26　　[7]李昌厚，色谱分离柱主要技术指标及有关问题的探讨，仪器信息网，2020/8/21　　作者简介　　李昌厚，男，中国科学院上海生物工程研究中心原仪器分析室主任、兼生命科学仪器及其应用研究室主任、教授、博士生导师、华东理工大学兼职教授，终身享受国务院政府特殊津贴。　　主要研究方向：长期从事分析仪器研究开发和分析仪器应用研究。主要从事光谱仪器(紫外吸收光谱、原子吸收光谱、旋光光谱、分子荧光光谱、原子荧光、拉曼光谱等)、色谱仪器(液相色谱、气相色谱等)及其应用研究 特别对《仪器学理论》和分析仪器招标检测等有精深研究；以第一完成者身份，完成科研成果15项。由中科院组织专家鉴定，其中13项达到鉴定时国际上同类仪器的先进水平，2项填补国内空白；以第一完成者身份获得国家级和省部级科技成果奖5项(含国家发明奖1项)；发表论文183篇，出版专著5本；现任中国仪器仪表学会理事、《生命科学仪器》副主编 曾任中国仪器仪表学会分析仪器分会第五届、第六届副理事长 国家认监委计量认证/审查认可国家级常任评审员、国家科技部“十五”、“十一五”、“十二五”和“十三五”重大仪器及其应用专项的技术专家组成员或组长、上海市科学仪器专家组成员、《光学仪器》副主编、《光谱仪器与分析》副主编、上海化工研院院士专家工作站成员等十多个学术团体和专家委员会成员等职务。

p　　提起北美华人色谱学会(CACA)这个名字，可能国内真正了解它的人并不多，但自2008年成立至今，这个位于美国的即将“十岁”的华人组织已经拥有了超过1000名来自世界各地的色谱专业成员，而且队伍仍在继续扩大之中。这是一个什么样的组织?成立的初衷与目标为何?现任主席骆初平博士有哪些色谱领域的经历?近期CACA还将有哪些发展目标?与国内色谱学界之间合作如何?带着这些问题，仪器信息网编辑于近日采访了2016年7月上任的新一届CACA主席骆初平博士。/pp style="text-align: center"img src="http://img1.17img.cn/17img/images/201704/insimg/4a71b25c-c39f-4237-a5a6-35ebc8cd54e3.jpg" title="DSC00615_副本.jpg"//pp style="text-align: center "span style="color: rgb(0, 112, 192) "strong北美华人色谱学会(CACA)主席骆初平博士/strong/span/pp　　span style="COLOR: rgb(0,112,192)"strong仪器信息网：首先能否请您介绍一下您在色谱方面的职业经历?/strong/span/pp　　strong骆初平：/strong简单来说，这是一个从“使用者”到“制造者”的发展历程，也是一个“边学边干”的历程。/pp　　色谱科学是分析化学的一个分支，却是一个很广泛的领域， 具体来说包括高效液相色谱、气相色谱、柱色谱、纸色谱和薄层色谱、超临界色谱等等。高效液相色谱如果依据固定相分类可分为反相色谱和正相色谱等 而根据分离原理又可分为离子交换色谱、体积排除色谱、分配色谱、吸附色谱和亲和色谱等等。/pp　　如同所有化学专业的同仁和学生一样，我最初接触色谱技术是在大学本科时期。而第一次将色谱应用于科研是上世纪80年代在南京大学就读硕士期间，当时的指导老师陈汉文教授从加拿大寄回了一些纸色谱，用于有机膦化合物的分离。第一次从事高效液相色谱和柱色谱方面的研究工作则是在北京大学工作期间，当时黄春晖院士课题组开始关于富勒烯的研究工作，而我则负责富勒烯的合成、分离及分析方面的工作。当时曾经装置了约1.5米高的柱色谱用于富勒烯的分离，同时与孙亦梁教授合作，采用高效液相色谱对于富勒烯及其衍生物进行分析研究。之后在乔治城大学期间，我开始独自操作色谱仪器并开始“介质对化学反应产物的影响”的研究。当时需要合成一系列有机化合物并进行分离分析工作，几乎每天都会使用气相色谱仪、气质联用仪和高效液相色谱仪等，这些都为我后来成为色谱技术“制造者”这一转变打下了坚实的基础。/pp　　在加入赛分(美国)公司后，我开始从事并主管色谱填料的研发与生产工作，涉及到了离子交换色谱柱、体积排除色谱柱、反相色谱柱、正相色谱柱以及固相萃取等的研发。而期间参加的会议、展会以及对用户的走访则进一步拓宽了我的视野和知识。嗣后在Waters公司工作的五年期间，我又对超临界色谱及萃取技术、薄层色谱与柱色谱等进行了深入研究。目前在Advanced Materials Technology公司则主要负责基于核壳硅胶(core-shell)的新型色谱填料的研发工作。/pp　　span style="COLOR: rgb(0,112,192)"strong仪器信息网：北美华人色谱学会是一个什么样的组织?能否请您介绍一下这个学会成立的背景与目的?目前规模如何?成员都来自哪些应用领域?/strong/span/pp　　strong骆初平：/strong北美华人色谱学会(CACA)是一个成立于2008年的非营利学术组织，学会的所有成员均为无报酬的志愿者。日常管理由现任主席、前任主席、候任主席、秘书、财务及网络管理等人员主持。下设八个委员会，包括会员管理、视频讲座及会议、评奖、公共关系等。每个委员会的工作均向管理团队汇报，管理团队则向由18名成员组成的执委会汇报。执委会目前有大学教授4人、自主创业的4人、来自美国FDA和自然科学基金(NSF)各1人，其余则均为各大制药企业、色谱仪器与产品公司的资深研究人员。活动经费来源于企业的赞助。/pp　　如前所述，CACA成立的初衷是希望为在美从事色谱分析工作的华人学者、留学生提供一个联系交流的平台，也为在美创业的华人公司提供一个产品展示的平台。成立九年来，经过第一任主席杨彦博博士(2008 -2012， BioPharmaDev公司创办人)、第二任主席叶茂春博士(2012-2014，MilliporeSigma公司色谱产品研发主管)和第三任主席江涛博士(2014-2016，马林克罗特院士)三人卓有成效的努力，CACA创会的宗旨更为具体地落到实处：我们为CACA会员提供了一个职业培训和社交机会的平台 以评奖方式奖励了从事色谱科研工作的年轻科学家及青年学生 以视频讲座和视频会议的方式促进了色谱科学技术的交流与发展 另外还为CACA会员提供了一个在全球范围内能够相互之间及与企业之间进行交流合作的平台。/pp　　目前，北美华人色谱学会拥有1100余名会员，工作领域涵盖食品、制药、环境检测、体育等多个行业。CACA会员也已经不再局限于北美地区。由于会员所在地域较为分散，北美华人色谱学会主要通过一年一度的Pittcon会议和两年一度的HPLC会议组织相关活动。/pp　　span style="COLOR: rgb(0,112,192)"strong仪器信息网：您是从什么时间，基于什么原因出任CACA主席的? 北美华人色谱学会都会举办哪些学术活动?在您任CACA主席的这几年时间，有哪些工作设想与计划?/strong/span/pp　　strong骆初平：/strong我的任期是从2016年7月开始的。自2008年北美华人色谱学会成立伊始，我就一直在为学会的发展壮大而努力，能够有机会为自己的同胞服务可以说是我出任学会主席的原因。目前学会的学术活动主要是通过视频讲座和视频会议进行的。视频会议主要以各类色谱的应用为主题，例如亲水作用色谱(HILIC)的发展史及其在药物分析中的应用等。/pp　　本界学会的工作目标包括加强视频讲座和系列视频讲座的开展 加强职业培训和帮助会员特别是留学生的就业 促进会员间的合作 尽量促进与中国大陆从事色谱工作的学者、团体及公司的合作 并通过以上工作来吸纳新会员。/pp　　span style="COLOR: rgb(0,112,192)"strong仪器信息网：当前在北美，色谱学研究的热点是什么?国内色谱学的研究水平与西方相比是否有差距?/strong/span/pp　　strong骆初平：/strong色谱科学是一门应用性很强的分析化学学科，其研究热点与不同行业对分析和分离的需求密切相关。以制药产业为例，制药产业可以说是目前推动色谱技术发展的最大的原动力之一。制药产业对降低成本、高速高效分析的要求促进了UHPLC仪器的发展，也促进了Core-Shell固定相的发展，同时还促进了超临界色谱技术的更新换代 而更小粒径的次微米固定相的研究也有了很大进展，但仍受制于仪器及装柱设备及筛板等硬件方面的不足。另一方面，分析对象的变化，例如愈来愈多的极性化合物和生物大分子等，要求色谱固定相从以往的反相为主向越来越多地倾向于向亲水性色谱、离子交换色谱等方面转化。而对微量样品进行分析的需求则促进了毛细管色谱技术和微流控技术的发展。目前，应用色谱技术捕获各种疾病标志物也得到了广泛的研究。/pp　　对于国内与西方的色谱学的研究方面，我个人认为不是“差距”而是“差别”。我曾经走访过北京大学、南京大学、苏州大学、复旦大学等十多所大学的实验室，以及上海、北京、杭州、苏州、无锡、常州、南京、天津、石家庄等十几所政府食品药品检测实验室。印象最深的是国内实验室的仪器设备并不比国外的差，一些实力强的实验室的仪器甚至要好于很多国外实验室。而另一方面，大量的海归及本土培养的色谱技术专家也弥补了曾经的断层。但是，如前所述，色谱科学是一门“应用型”学科，如果制药产业还是以小分子药物为主，很难想象有多少动力去发展生物大分子分析分离的技术。/pp　　如果说有差距，根据我个人走访国内30多家制药企业实验室的经历，就是制药产业色谱仪器操作人员的平均专业水平上的差别。但这些是可以通过培训进行弥补的，例如仪器信息网等组织的各类培训及讲座就是很好的方式。/pp　　span style="COLOR: rgb(0,112,192)"strong仪器信息网：北美华人色谱学会与中国国内的色谱学术界有哪些交流与合作?这些是出于什么目的?未来的合作会有哪些重点方向?/strong/span/pp　　strong骆初平：/strong北美华人色谱学会自成立伊始，除了得到了北美色谱界的大力支持外，就已经得到了国内分析化学，特别是色谱科学方面的著名教授们的大力支持。张玉奎院士一直是我们学会的执委会成员之一，江桂斌院士、陈洪渊院士、许国旺教授、关亚风教授、储晓刚教授、邹汉法教授、邓玉林教授、张丽华教授和刘虎威教授等都从不同方面给予了支持。/pp　　同时北美华人色谱学会还与业界的仪器信息网等进行了一系列合作,例如去年就与仪器信息网共同举办了a href="http://www.instrument.com.cn/webinar/icc2016/" target="_self" title="" style="text-decoration: underline "strongspan style="color: rgb(112, 48, 160) "第一届色谱网络会议iCC 2016 (iConference on Chromatography)/span/strong/a。/pp　　此外，北美华人色谱学会还得到了国内企业的赞助，包括北京的莱伯泰克和迪马, 天津的博纳艾杰尔，苏州的纳微和赛分, 上海的安谱和月旭等等。特别是北京的莱伯泰克公司和天津的博纳艾杰尔公司多年来一直都在支持学会的发展。/pp　　可以说，没有国内色谱界专家学者的热心支持、没有国内企业的慷慨解囊，北美华人色谱学会就不可能有今天的成就。作为回报，我们希望继续与国内学术界和业界加强合作，能够把我们在国外学到的知识、经验和技能与国内的同仁分享，共同促进色谱技术的发展。/pp　　span style="COLOR: rgb(0,112,192)"strong仪器信息网：据悉CACA每年都会评选的“青年科学家”也面向国内的色谱学者开放，这样做的目的是什么?/strong/span/pp　　strong骆初平：/strong北美华人色谱学会的宗旨之一是促进色谱科学技术的发展，这就要求我们打破地域的限制。另一方面，与成立伊始相比，北美华人色谱学会的会员组成已经发生了很大变化，不再局限于地处北美的华人，而是包括了国内、香港、台湾、日本、新加坡、欧洲等地的华人，更有一些非华人的成员，例如著名的亲水性色谱专家安迪· 阿尔伯特博士就一直是北美华人色谱学会的执委会成员之一。所以，“CACA青年科学家奖”也向国内的色谱学者开放。目前我们正在接受2018年度“CACA青年科学家奖”的申请，请符合条件的青年科学家可尽早报名(http://www.ca-ca.org/index.php/award)。除“CACA青年科学家奖”外，“CACA优秀学生奖”也面向国内的研究生开放，今年的获奖者之一就是南京大学的别子俊女士。该奖项目前也正在接受2018年度候选人申请，请符合条件的研究生也可尽早报名(http://www.ca-ca.org/index.php/award)。/pp　　strong采访后记：/strong/pp　　早年出国深造的骆初平，虽然工作单位换了几次，身份也由色谱“使用者”转换为色谱“制造者”，但从北美华人色谱学会成立至今，他却从没有改变“服务同胞、壮大学会”的初衷。无论是线上的技术交流讲座、还是线下的“职业发展论坛”、“交流晚宴”，包括每年“青年科学家奖”及“优秀学生奖”的设立与评选，这些对于需要同时兼顾工作与家庭的人来说，付出的时间与心血都不言而喻，但骆初平博士却已经坚持了近十年。学术交流、促进就业，北美华人色谱学会影响的不仅仅是留美学者和学生，还通过实地走访、网络会议等多种交流形式积极参与到国内“色谱圈”内。相信在北美华人色谱学会众多成员坚持不懈的努力之下，CACA还将继续发展壮大，海内外色谱学者日益深入的交流也将在未来继续推动色谱技术的发展。/pp style="text-align: right "（编辑：王明煜）/p

长期以来，某些样品致使柱压过高的问题一直深深困扰着我们广大的实验和检测人员，柱压高一方面不能达到很好的样品分离效果，另一方面也会对仪器造成损害。为了切实解决大家的问题，大连思谱研发团队经过不断地探索和钻研，终于研发成功一款新型的液相色谱柱HPLC-C18L，该款柱子最大的特点就是柱压低，比同等条件下，即同一个样品，同一台仪器操作产生的柱压仅是常规柱压的一半。大大减小了损坏仪器的风险，让您可以放心的进样。及其适用于某些容易使柱压升高的样品检测和分离，起到保护色谱仪的作用。 若不是样品本身的原因，导致柱压过高还有可能是如下几个原因，可按以下步骤进行检测： 1． 拆去保护预柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压仍高，再检查； 2． 把色谱柱从仪器上取下，看压力是否下降，否则是管路堵塞，需清洗，若压力下降，再检查； 3． 将柱子的进出口反过来接在仪器上，用10倍柱体积的流动相冲洗柱子，（此时不要连接检测器，以防固体颗粒进入流动池）。这时，如果柱压仍不下降，再检查； 4． 更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质，正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。 我公司长期以来，以客户为先，坚持承诺为客户提供优质的售后服务，免除您的后顾之忧。我公司郑重承诺： 一、所有产品，用户购买并收到货品之后，若发现订购错误或与原购买意图不符，在未启封包装的情况下，可无条件退货或换购其它 产品。 　二、气、液相色谱柱，用户在收到产品两周内，若不满意色谱柱的应用效果，只需提供合理的理由(附色谱条件和色谱图)，思谱精工承诺退还全款，或调换其它型号、款式色谱柱。 　三、气、液相色谱柱，即使由于用户使用不当造成柱头堵塞、污染或其它损坏(色谱柱到了自然使用寿命或用户使用不当使色谱柱产生不可逆损坏此两种情况除外)，思谱精工都承诺免费维修，以解除用户后顾之忧。 　四、用户工作中遇到的应用问题，思谱精工的应用实验室承诺提供技术支持 对于特别疑难问题，可为用户联系色谱专家学者及权威机构协同处理，尽力解决。 为答谢新老客户长期以来对我公司的关注和支持，从即日起至9月30日，我公司全部常规液相色谱柱和固相萃取柱产品，全部六折优惠，更高的质量，更低的价格，更专业的服务，欢迎惠顾！ 垂询电话：0411-84820111 E-mail: sales@sipore.com

pbr//pp style="text-align: center"img src="http://img1.17img.cn/17img/images/201710/insimg/d3fd87a0-4f18-44d6-b148-a5a36db84f37.jpg" title="1.jpg" style="width: 600px height: 400px " width="600" vspace="0" hspace="0" height="400" border="0"//pp style="text-align: center "span style="color: rgb(0, 112, 192) "strongBCEIA2017 岛津技迩展台/strong/span/ppstrong仪器信息网讯/strong 2017年10月10日，第十七届北京分析测试学术报告会暨展览会(BCEIA 2017)在北京国家会议中心开幕。岛津技迩在展会上推出众多色谱耗材特色新品。仪器信息网编辑借此机会对岛津技迩销售主管李忠铭进行了采访。/pp style="text-align: center"img src="http://img1.17img.cn/17img/images/201710/insimg/d4708b90-dcc0-4c1f-b89e-009939208ca8.jpg" title="2.jpg" style="width: 600px height: 900px " width="600" vspace="0" hspace="0" height="900" border="0"//pp style="text-align: center "span style="color: rgb(0, 112, 192) "strong岛津技迩销售主管 李忠铭/strong/span/ppspan style="color: rgb(0, 112, 192) "span style="color: rgb(0, 0, 0) "　　李主管对岛津技迩不同展台上的特色新品进行了一一介绍，以便广大用户选择！/spanstrongbr//strong/span/pp style="text-align: center"img src="http://img1.17img.cn/17img/images/201710/insimg/63efa153-da1b-4db1-b8ca-85efc61b7f3f.jpg" title="3.jpg"//pp style="text-align: center "span style="color: rgb(0, 112, 192) "strong岛津技迩 食品安全展台/strong/span/pp　　今年新出台的农残新国标推荐1701气相毛细管柱，它主要用在GCMS上。岛津技迩有对应的产品InertCap 1701MS气相毛细管柱，InertCap 1701MS是键合了14%氰丙级苯基-86%二甲基聚硅氧烷的超惰性毛细管柱，因其极性，耐高温，高惰性特点的结合使其非常适合多农残分析。/pp　　食品安全展台左上角是固相萃取小柱，有一款做兽药残留前处理的经典InertSep HLB特色柱，它装载最新研发的亲水亲脂共平衡的聚合物反相填料，比表面积高、pH耐受范围宽、通用型强，更高回收率，更强重现性，超高性价比。食品安全展台中间的新品是为针对行业检测的难点专门开发的草甘膦固相萃取小柱。右侧产品为WondaPak QuEChERS多兽残提取/净化包，它的特点是：使用简便，处理速度快，能达到4 倍的加速，可参考 AOAC、EN 等相关标准。整个处理过程不需要固相萃取装置或玻璃器皿等，仅需要离心机、移液枪。溶剂消耗量更少，能节约6-9 倍溶剂量，无含氯废弃物，相比于常规的固相萃取小柱成本更低。/pp style="text-align: center"img src="http://img1.17img.cn/17img/images/201710/insimg/93c39832-9756-4a3c-a4db-dc6c5a15970a.jpg" title="4.jpg" width="600" height="400" border="0" hspace="0" vspace="0" style="width: 600px height: 400px "//pp style="text-align: center "span style="color: rgb(0, 112, 192) "strong岛津技迩 环境汽车展台/strong/span/pp　　环境汽车展台左上角是实验室大气采样泵，使用SP208 系列大气采样泵，将大气中的化学物质吸引捕集至采样管(填充了捕集剂填料的玻璃管)等捕集容器中，并通过热脱附、洗脱等方法将捕集的样品注入分析仪器进行分析。新品标牌后是便携的采样泵，使用搭配比较灵活。这个展台还展出了醛酮类化合物捕集专用小柱InertSep DNPH，它广泛用于环境气体以及汽车内饰材料中醛酮类物质的捕集。/pp　　醛酮类化合物捕集专用小柱InertSep DNPH的捕集填料是比较新颖的材料，它包含一个硅胶骨架，比表面积大，吸附能力强。当捕集填料捕集完了之后，可以采用溶剂把它洗下来进气相分析，这种方法的进样效率比较高。/pp style="text-align: center"img src="http://img1.17img.cn/17img/images/201710/insimg/7908ecef-243a-4620-b08c-edaa69a8d2fc.jpg" title="5.jpg"//pp style="text-align: center "span style="color: rgb(0, 112, 192) "strong岛津技迩 药物分析展台/strong/span/pp　　药物分析展台的色谱柱包括：分析药物含量、有关物质、溶出、极性化合物等柱子，岛津技迩的产品总体上可以涵盖90%以上的化药和中药产品，报价在3000~4000左右。/pp　　在制药行业要做溶剂残留分析，溶剂残留中氨类的化合物难以分析，如果使用一般的毛细管柱，吸附非常严重，结果做出来的峰型特别差。岛津技迩有一款气相色谱柱，它能很好地解决这种问题，很多药厂会用这款柱子做氨类化合物的检测。/pp style="text-align: center"img src="http://img1.17img.cn/17img/images/201710/insimg/399305f1-a11e-45f4-8ed7-b25c681a7b64.jpg" title="6.jpg" style="width: 600px height: 400px " width="600" vspace="0" hspace="0" height="400" border="0"//pp style="text-align: center "span style="color: rgb(0, 112, 192) "strong岛津技迩 生物分析展台/strong/span/pp　　生物分析展台展出的柱子比较小，因为生物分析地样品量比较小。MonoSpin™ 系列 / 生物样品前处理离心小柱主要用于血样分析，它使用的是硅酸乙酯合成的整体型硅胶，具有均匀一致的三维立体结构，批次与批次之间表现出比较优异的重现性。/pp　　它的整体型硅胶结构坚实，而且填料是一体的，因此柱端头无需使用筛板或者滤网，减小了死体积，相对传统的微粒型硅胶小柱而言，显著降低了由于死体积引起的谱带展宽，从而大幅提升样品回收率。例如，用离心小柱，上样量10uL,经过洗净，最后只需用10uL缓冲液洗脱，而且表现出优异的重现性。/p

近两年贸易摩擦日益加重，由此引发的中美科技之争给世界分工带来了巨大冲击。宏观来看，“十四五”规划文件牵引、地方政策支持、国产采购倾斜，支持国产仪器发展似乎已经成为政府、市场以及公众的共识。巨浪之下，国产仪器企业的春天是否已经到来?　　基于此，仪器信息网特别策划“国产仪器发展正当时”活动，邀请华谱科仪(北京)科技有限公司，这家液相色谱“新秀”的掌门人王利春谈谈他的看法。华谱科仪(北京)科技有限公司总经理王利春　　仪器信息网：在贵公司所涉及的产品品类中，您认为目前国内被“卡脖子”的产品、关键核心部件、关键技术有哪些?　　王利春：在液相色谱领域，国内产品“卡脖子”现象尤其严重，从高效液相色谱仪、色谱信息管理系统再到色谱柱，目前几乎均处于被进口产品垄断的局面，尤其是符合法规、功能齐全，并且能网络化部署的色谱软件，国内基本为空白，与色谱柱相关的柱管和筛板，特别是适合小粒径装填的大多也都是进口的。高效液相色谱仪作为一种高精密仪器，其各模块涉及的多项关键技术国内虽已有所突破，但所使用的部分核心部件仍需从国外进口，如高压泵单元中的高压密封圈、高精度和高稳定性压力传感器、高精度滚珠丝杠 自动进样器单元中的超高压六通阀、采样针、超细毛细管 检测器单元中的平面场光栅、二极管阵列光电传感器、光纤流通池等，这些核心部件的技术是国内企业仍需努力攻克的难关。　　仪器信息网：除了产品和技术之外，您认为国产仪器发展还面临哪些“卡脖子”的问题?　　王利春：由于国外厂商多年的品牌口碑积淀，客户对于进口液相色谱产品已经形成了产品依赖，不愿改变现有的使用习惯，加之过去国产液相普遍性能不稳定且服务体验不佳，客户渐渐对国产产品失去了信任。因此，国产液相色谱仪器要获得良好发展，除了需要攻克产品和技术方面的难关，还需要改变用户使用习惯、消除用户对国产仪器的不信任感，这是国产企业在产品推广过程中面临的首要问题。　　此外，行业标准和方法上的“卡脖子”问题也不可忽略。国外企业由于用户覆盖广泛，技术实力雄厚，已经在已有的基础上积累了充足的经验，因此能够更早的介入国标方法的制订以及行业共性问题的研究，比起国内厂商忽视这一方面的投入，国外厂商在解决问题这一方面就具有了先天更大的优势。　　仪器信息网：您认为该如何解决这些“卡脖子”问题?　　王利春：想要有效解决这些“卡脖子”问题，离不开国家相关政策的支撑、企业自身的努力和国内用户的支持这三个层面。　　国家政策层面，首先要推进采购政策支持，继续鼓励政府、高校、示范型企业等支持并优先选用国产品牌仪器。其次要重视并投入关键部件的研发支持，需要国家集中优质资源联合国内企业重点推进。再者要增加研发资金的投入，针对重点科技攻关项目，通过设立重点专项，给予国内企业一定的资金支持。最后制订国家标准和方法，鼓励多采用国产仪器进行验评。　　企业自身层面，以向市场提供稳定优质产品为前提，围绕客户需求，持续进行自主研发投入。另外，由于色谱具有专业性强、应用复杂、对使用者知识背景要求高等特点，其服务质量的重要性丝毫不亚于产品性能，这就要求国内企业重视技术服务体系搭建，同时在体系搭建完成后配套增加色谱方法研究，改善客户使用体验，增强客户对国内品牌的认可感。　　国内用户层面，希望用户可以兼具包容性，多给国产仪器使用机会，任何一款好的仪器和软件，都是在客户的使用要求中迭代升级发展而来的，没有使用场景，就没有持续不断的更新，国产仪器就无法找到发展的“突破口”。　　值得一提的是，解决国产仪器“卡脖子”问题的主体不仅仅局限在国家政策、企业、用户层面，资本的进入也是至关重要的一环，鼓励资本进入科学仪器行业支持国产仪器发展，从资金上消减国内厂商的顾虑和困难，同时，引导产业资本进入国产科学仪器行业支持国产仪器发展，使国产仪器能够引入一流的人才，保证持续的研发投入，尽早具备和国际一流公司竞争的能力。　　仪器信息网：在贵公司所涉及的产品品类中，有哪些产品、技术或应用很好地打破了垄断、解决了“卡脖子”问题?它们有哪些值得借鉴的方法或经验?其中，贵公司的产品、技术或应用是否有相关案例可以分享?　　王利春：华谱科仪(北京)科技有限公司(简称华谱科仪)自2015年创立至今，立足自身技术优势，深耕液相色谱领域，采取“市场先行，服务引领，技术驱动”的发展思路，在深刻理解客户需求的基础上消化吸收先进技术，利用“产品+技术服务”特色商业模式，通过技术服务为客户提供个性化解决方案并改善用户体验，在获得客户认可的基础上持续收集客户需求反馈，进行自主产品迭代创新，最终实现核心技术自主研发，华谱科仪品牌的建立。公司在一些产品中已打破了技术壁垒，在此分享两个案例：　　第一是公司自主开发的色谱信息管理系统，不仅功能齐全，符合法规要求，完全对标国际主流厂商色谱软件，同时采用先进的技术架构(双数据库结构)以及最新的编程语言技术(CS/BS结合)，不仅能实现网络化的部署，同时还可以满足未来万物互联的发展趋势，轻松实现云端部署。另外软件还融入特色知识库、方法库以及智能诊断、智能专家系统的设计，不仅满足用户对知识的累积复用，还具备了大量智能化功能，大大提升用户体验。附图1：Chromloong色谱软件　　华谱科仪软件研发部早在2016年已开始对国外主流软件进行全面分析，结合客户实际需求，对软件业务需求、算法解析、架构设计等基础功能进行研究。经过多轮专家论证，于2018年底完成第一版的业务流程需求、功能设计以及交互使用设计。自2019年开始，由公司软件研发部，协同应用部、售后部等多名骨干人员组成项目管理团队，对软件代码进行集成开发、测试等。最终于2021年9月第一版Chromloong软件正式上市,并取得软件著作权、双软认证等相关资质。历经5年的时间，基于双数据库架构、可网络化部署国产液相色谱软件Chromloong的推出，标志着华谱科仪已初步打破液相色谱软件的“卡脖子”现状。　　第二是华谱科仪应用研发中心始终坚持在解决用户应用痛点和难点的基础之上，充分发挥公司特色，提升客户满意度。目前公司兼具标准SOP方案开发和定制化技术服务能力，既能提供行业热点解决方案和应用谱图集，又能提供公司特色的定制化方法开发服务、驻场支持服务，如“在线二维液相色谱法快速测定乳品中的维生素 A、维生素D 和四种维生素E”整体解决方案的推出。在维生素 A、D、E 的现行标准 GB 5009.82-2016中，维生素D采用液质联用或半制备正相净化的方式对其进行检测，但液质联用维护成本较高，半制备正相处理过程繁琐，大大影响了样品分离效率，而多维色谱分离模式，可以扩大分离空间，增强分离效率。应用研发中心利用技术能力优势，开发的二维分离方案一次进样即可实现维生素 A、D、四种 E的分析测定，且灵敏度高，重现性好，该方案获得了众多客户的高度认可与肯定。附图2：应用研发中心附图3：中心切割法分析过程　　仪器信息网：最近几年，科学仪器已成为科技界关注的焦点之一，国产科学仪器发展也受到了广泛重视。您认为当下以及未来对于国产仪器发展有哪些“利好”政策与机遇?还需要得到哪些支持?　　王利春：在2021年5月召开的两院院士大会上，国家主席习近平倡议科研工作者全力攻坚科学仪器、化学试剂等关键核心技术难题，使国内企业备受鼓舞。各地政府出台的采购政策特别要求国产仪器配比，为国产仪器推进到政府单位打开了“突破口”。国家立项“基础科研条件与重大科学仪器设备研发”重点专项，从科研经费上支持科学仪器及关键核心部件的国产化。　　以上已有的优惠政策给国产仪器企业带来了新的展望，同时我们还有以下几点期许：第一，希望相关政策能够尽快落地执行，鼓励政府支持国产品牌仪器采购，对优先使用国产品牌的企业用户实施奖励措施，或在财税方面给予优惠补偿，让企业用户有足够的动力和保障，购买和使用国产仪器。第二，在标准制订层面给予便利条件，鼓励标准制订单位优先采用国产品牌仪器进行方法开发和验评，从而引导用户选择国产仪器。　　仪器信息网：在当今的大环境下，贵公司未来产品技术发展规划是怎样的?您认为国产仪器企业应该采取怎样的发展路径?　　王利春：未来华谱科仪将继续围绕液相色谱仪及其相关产品进行深入研发，不仅要做到在关键技术上的突破，还要实现各单元技术的集成。仪器硬件上持续投入关键部件研发、关键技术整合 软件上根据用户个性化需求，开展特色功能更新 消耗品上进一步丰富材料产品线，为用户提供更多性能稳定优异的产品。另外，公司仍将继续加大对客户服务的投入，如推进应用实验室、客户体验中心的建设，不断提升客户体验，提高国产品牌产品满意度。　　我司认为国产仪器企业需首先重视专业人才的自主培养，人才队伍的搭建是一个企业生存发展的核心要素 其次要立足于自身优势，专注品质产品研发，为市场增添优质产品 再要摈弃价格战，走过去“低质低价老路”是行不远的，避免不良竞争 还要重视软实力作用的发挥，从客户体验角度出发进行技术创新、服务创新。

感谢您选用本公司的保护柱，保护柱对色谱柱具有保护作用，能有效的延长色谱柱的使用寿命，保护柱对色谱柱的保护作用通过以下两种方式来实现。首先，保护柱柱芯的两端各有一个筛板，这两个筛板对流动相具有一定的过滤作用，可以滤去流动相和样品中的微粒污染物，以免其进入色谱柱堵塞筛板和污染柱床。其次，当保护柱的填料与色谱柱填料相同时，保护柱可以除去那些与填料造成强吸附或不可逆吸附的化合物，这也是保护柱所用填料应与色谱柱相同的原因。通过这两种途径，保护柱可极大的提高色谱柱的使用寿命。 本公司推出的YunboTM保护柱，柱芯更换方便快捷，易与色谱柱连接，采用手紧式柱套，拧紧后用扳手稍紧柱套即可达到良好的密封效果，并能耐高达340bar的压力。保护柱柱芯的填料与我公司色谱柱的填料相同，因此能对我公司的色谱柱提供很好的保护。保护柱套件 YunboTM保护柱套件包括1个手紧式柱套、2个1cm长的柱芯、保护柱连接件（含一根peek连接管和两个peek接头，直连式保护柱不需要）。 保护柱的安装1. 将柱芯（柱芯的液路方向没有正反之分）放入保护柱柱套，用手拧紧柱套，然后再用扳手稍稍拧紧；2. 用所配的peek连接管将保护柱与色谱柱相连，连接时应确保保护柱在色谱柱的进样端（与色谱柱上箭头所指的反方向一端）；3. 将peek管尽量的往里伸，直至顶到接口底部，在拧紧peek接头将peek管位置固定前应持续保持peek管与接口底部的紧密接触，然后再拧紧peek接头；4. 将连接好的保护柱和色谱柱视为整体的一支色谱柱，保护柱一端为液路入口端，接入色谱系统。操作指导为了保证最佳的柱效和获得较长的色谱柱使用寿命，请注意以下的操作指导：l 保护柱柱芯的填料应尽量与色谱柱内填料类型相同（可以从产品列表中根据您的需要来选择）；l 用手拧紧保护柱套后，应用扳手稍稍拧紧；l 不要使用超出色谱柱pH值范围的流动相；l 使用新的保护柱柱芯时，与色谱柱接好后，应通过20ml流动相以使其平衡；保护柱和在线过滤器的维护方法 1. 保护柱的更换时机：通常柱压太高、柱效下降或分离度下降等影响分离的因素出现时就应该考虑更换保护柱。 2. 保护柱的使用和维护： I）一个新的保护柱芯是没有方向的，但是从第一次使用时开始保护柱芯就赋予了方向，因为固体颗粒物质和强保留物质总是从入口端到达保护柱，并在这一端开始累积。所以柱芯在开始使用后应确认好方向。 II）当发现分析过程出现柱压太高、柱效下降或分离度下降等影响分离的因素的时候，需要对保护柱进行一下维护。维护的方法如下： a）在柱套上做好标记，确认保护柱芯的正反方向；取下保护柱，在不打开卡套的前提下将保护柱反接（注意此时不能接色谱柱），用甲醇：水＝20：80 以3ml/min流速冲洗10min，然后再用纯甲醇以3ml/min流速冲洗10min； b）冲洗好后将保护柱正接，打开泵除去保护柱和连接管内的空气，再连接好色谱柱，象往常一样使用。 3. 在线过滤器的使用和维护：如果出现柱压高的情况，有可能是固体颗粒物质堵塞了在线过滤器的筛板，需要清洗筛板。具体如下：打开在线过滤器卡套，取下筛板，分别用水和甲醇各超声10min，然后放回卡套，如往常一样使用。产品信息YBFH001 Guard Column Holder柱套YBFH002 Guard Column 柱芯C18 5um 4.6X10，2个/包YBFH004 Guard Column 柱芯C18 5um 4.6X10，4个/包YBFH010 Ghost-Capturer4.6*50如需其他规格保护柱和在线过滤器，欢迎咨询本公司。

赛多利斯近日宣布，在获得美国联邦贸易委员会的批准后，已通过子公司赛多利斯斯泰帝生物技术公司于2022年2月7日完成了对Novasep（诺华赛）色谱板块的收购。相关方已于2021年初就该交易达成一致。所收购的业务在2020年创造了约4000万欧元的销售额，利润率达两位数；2021年的最终数据尚未公布。约100名员工中的大部分人在法国东部的庞贝基地工作，另有一些则在美国、中国和印度。收购的产品组合包括主要适用于生物小分子（例如寡核苷酸、多肽和胰岛素）的色谱系统，以及用于生物制剂连续制造的创新系统。自2018年以来，诺华赛和赛多利斯还致力于联合开发面向膜基色谱技术的优化系统。赛多利斯生物工艺解决方板块负责人兼执行董事Rene Faber博士说道：“诺华赛产品组合将填补我们现有色谱产品的空白领域，为我们客户的制造工艺提供更多选择。多年以来，高效的下游生物工艺一直是横亘于行业的一大棘手挑战，赛多利斯始终致力于加速和简化这一关键步骤，继而更高效地制造新药。”由于此次收购预计将在2022年带来约1个百分点的额外非有机销售收入增长，赛多利斯更新了本年度的销售收入预测，详情如下：目前预计综合销售收入将增长约15%-19%（之前预计约为14%-18%），而收购带来的非有机增长预计将贡献约2个百分点（之前预计约为1个百分点）。预计公司今年的基本息税折旧及摊销前利润率仍为34%左右。赛多利斯现预计，生物工艺解决方案板块在2022年的销售收入增长率将达到17%-21%（之前预计约为16%-20%），其中收购带来的非有机增长将贡献约2个百分点（之前预计约为1个百分点）。此板块的基本息税折旧及摊销前利润率仍预计为36%左右。对实验室产品与服务板块在2022年的增长预测将保持不变：因此，公司仍然预计销售收入增长率将达到约6%-10%，其中收购带来的非有机增长将贡献约1个百分点，并且该板块的基本息税折旧及摊销前利润率约为26%。

2014年5月27日，上海——科学服务领域的世界领导者赛默飞世尔科技（以下简称：赛默飞）继去年发布新一代Thermo Scientific SOLA? 固相萃取 (SPE) 小柱和提取板产品后，今年再推出SOLAμ生物样品提取板，满足500μL以下体积的样品处理的需求。SOLA?对筛板设计和制造工艺做了革命性的改变，将聚乙烯筛板材料和基质融为一体式柱床。与传统的固相萃取小柱形式相比，具有巨大的优势。传统固相萃取小柱在两层筛板之间装填松散的填料，在生产和运输过程中容易沉降或流失。SOLA新的设计避免了传统小柱通常存在的空洞、涡流和装填不一致而导致重现性变差的问题。 SOLA 产品有小柱和96孔板两种形式，有反相和离子交换等多种键合相。新推出的SOLAμ微量生物样品提取板独特的设计可将洗脱体积降低到25μL，免除长时间吹干浓缩步骤，在节省大量时间的同时，还大大改善了同类产品常见的样品堵塞柱孔问题，在高通量生物分析和临床分析中能够发挥巨大的应用优势。 SOLAμ两大显著优势：一、更高灵敏度SOLAμ可达到20倍富集，检测灵敏度大大提高。 二、更好重现性SOLAμ独特的设计很大程度上改善了样品堵塞柱孔的问题，从而保证每个样品有一致的柱流速，提高重现性，降低失败数量。 下载应用文章请点击：SOLAμ用于血浆中布洛芬和右旋酮洛芬富集分析http://www.thermo.com.cn/Resources/201405/2313177609.pdf SOLAμ在微量生物样品分析前处理应用中的优势http://www.thermo.com.cn/Resources/201405/23172518156.pdf 更多有关 Thermo Scientific SOLA SPE 产品的信息，请访问： www.thermoscientific.com/sola-spe . 关于赛默飞世尔科技赛默飞世尔科技（纽约证交所代码：TMO）是科学服务领域的世界领导者。公司年销售额170亿美元，在50个国家拥有员工约50,000人。我们的使命是帮助客户使世界更健康、更清洁、更安全。我们的产品和服务帮助客户加速生命科学领域的研究、解决在分析领域所遇到的复杂问题与挑战，促进医疗诊断发展、提高实验室生产力。借助于Thermo Scientific、Life Technologies、Fisher Scientific和Unity? Lab Services四个首要品牌，我们将创新技术、便捷采购方案和实验室运营管理的整体解决方案相结合，为客户、股东和员工创造价值。欲了解更多信息，请浏览公司网站：www.thermofisher.com 赛默飞世尔科技中国赛默飞世尔科技进入中国发展已有30多年，在中国的总部设于上海，并在北京、广州、香港、台湾、成都、沈阳、西安、南京、武汉等地设立了分公司，员工人数超过3800名。我们的产品主要包括分析仪器、实验室设备、试剂、耗材和软件等，提供实验室综合解决方案，为各行各业的客户服务。为了满足中国市场的需求，现有8家工厂分别在上海、北京和苏州运营。我们在全国共设立了6个应用开发中心，将世界级的前沿技术和产品带给国内客户，并提供应用开发与培训等多项服务；位于上海的中国创新中心结合国内市场的需求和国外先进技术，研发适合中国的技术和产品；我们拥有遍布全国的维修服务网点和特别成立的中国技术培训团队，在全国有超过2000名专业人员直接为客户提供服务。我们致力于帮助客户使世界更健康、更清洁、更安全。欲了解更多信息，请登录网站www.thermofisher.cn

上海三为科学Sanotc获得英国迪贝Omnifit层析柱2021年度的官方授权 英国迪贝Omnifit层析柱官方宣布中国地区一级代理商是上海三为科学仪器有限公司。 Omnifit 系列色谱层析柱对于中低压液相色谱或连续流化学应用有很好的性能，易于安装，组装和操作，有非常高的额定压力值，化学相容性和额定温度值。 迪贝（Diba)Omnifit层析柱6.6mm直径耐压6MPA，35mm直径耐压1MPA。pH稳定性1-14，还有耐温4-25度系列，耐温4-150度系列不同的柱子供客户选择。 荣昌生物，嘉和生物，嘉因生物，苏桥生物等都采购我们大批量的原装进口色谱柱，用于实验室的科学研究工作。英国迪贝Omnifit层析柱适用于连接GE AKTA （Cytiva思拓凡），伯乐Bio-Rad等生物蛋白层析系统使用。Cytiva（思拓凡）的前身是GE医疗生命科学事业部，现在隶属于丹纳赫集团旗下的生命科学平台。 迪贝流体全新的Omnifit Labware色谱柱原产于英国，对于中低压液相色谱或连续流化学应用有很好的性能，易于安装、组装和操作，可提供小于1毫升到940毫升、内径从5mm 到50mm、长度从50mm到500mm的各种尺寸，适用压力范围广，化学兼容性好，额定温度高，可以和GE AKTA系列蛋白纯化系统、Sanotac Biolot 蛋白纯化系统、Biorad NGC高压层析系统等蛋白分离纯化系统和制备液相色谱系统配套使用。 EZ色谱柱的设计适合大多数标准的实验室色谱应用。他们适用于水溶液体系并与常用的液相色谱应用溶剂兼容，如蛋白质纯化的溶剂。完整的Omnifit Labware柱提供一组装好的-FF,-AF或-AA配置，包括所需尺寸的玻璃管和您选择的两个末端件，预组装25μm PE 筛板。 EZ SolventPlus色谱柱为高的化学兼容性设计。蹦硅酸盐玻璃和PEEK材质，Chemraz O型圈和PTFE筛板，接触流路的只有惰性材料。ETFE末端螺帽和接头螺帽确保系统的化学惰性连接。完整的EZ SolventPlus 色谱柱提供一组装好的-FF,-AF或-AA配置，包括所需尺寸的玻璃管和您选择的两个末端件，预组装30μm PTFE 筛板。 百柯流体一贯重视中国市场，上海三为科学将一如既往地用心为客户提供各类产品；我们相信通过这次官方授权，直接面对好客户，也将更好了解客户需求，迅速做出回应，将为客户提供更好的服务。 我们一切努力，只为助力您出色的实验结果！

p style="text-align: center "span style="color: rgb(0, 0, 0) "strongspan style="font-family: 楷体, 楷体_GB2312, SimKai "(李昌厚 中国科学院上海生物工程研究中心 上海 200233)/span/strong/span/pp style="text-align: left "strong style="color: rgb(255, 0, 0) "　　(一)HPLC仪器工作原理、结构组成/strongbr//pp　　a href="https://www.instrument.com.cn/zc/23.html" target="_blank"HPLC/a的工作原理：样品进入输液系统(泵) → 进样系统 → 分离系统(柱)→检测系统 → 数据处理系统→打印输出结果。/pp　　工作原理图如下图所示：/pp style="text-align: center"img style="max-width: 100% max-height: 100% width: 450px height: 278px " src="https://img1.17img.cn/17img/images/201911/uepic/d138b1ae-40e0-4884-b89f-fafb779f1cc4.jpg" title="01.png" alt="01.png" width="450" height="278" border="0" vspace="0"//ppspan style="color: rgb(255, 0, 0) "strong　　(二)结构组成及各个部件的重要性/strong/span/pp　　a href="https://www.instrument.com.cn/zc/23.html" target="_blank"HPLC/a一般都是由输液系统(泵) 、进样系统 、 分离系统(柱)、检测系统、数据处理系统组成。各部分简述如下：/pp　　strong1、输液系统(高压泵)及其重要性/strong/pp　　高压泵是关键部件之一，按原理分为两种类型：一类是恒流泵，一类是恒压泵。恒流泵，无论色谱柱的阻力如何变化、无论外界有何影响，它输出的流动相的流速可以基本保持不变，这正好是HPLC系统工作的基本要求 而恒压泵输出的基本上是恒定不变的压力，在正常情况下，由于HPLC系统的阻力不会变化，所以恒压也可以达到恒流的效果。但是由于色谱柱、温度等可能会有变化，所以可能导致流量变化，这是HPLC使用者不希望看到的结果。所以一般来讲，恒流泵比恒压泵好(横流泵的使用多于恒压泵)。目前我国有近20家企业在生产各种不同类型的HPLC，但是基本上都是采用恒流泵 例如：北京普析公司的L600系列、北京东西电子的LC-5510、 北京瑞利公司的SY-8100 、大连依利特公司的5100、上海伍丰公司的LC100、上海仪电公司的LC210、浙江福立公司的LC1190等等仪器都是采用的高压恒流泵输液。/pp　　高压泵的质量直接影响整个HPLC的质量，是用户关注的核心部件之一。HPLC高压泵的重要性及使用者对高压泵的具体要求如下：/pp　　(1)耐高压/pp　　耐高压是HPLC系统对高压泵的基本要求之一，一般来讲，平均粒径为4µ m左右的填料、内径为5mm左右的色谱柱，当流动相流速为1-3mL/min时，要求输液泵的最高工作压力达到34.47-41.36Mpa(5000-6000psi) 目前国际上商品HPLC泵的最高工作压力一般为41.36Mpa (5000psi)左右。但随着填料粒径的不断减小，粒径为1-2.5µ m范围的小粒径无孔色谱填料的应用推广，流动相在色谱柱中的阻力会更大，所以，2004年国际上出现了超高压液相色谱，要求输液泵能够耐更高的压力。目前市场上已有达到68.94Mpa(10000psi)的高压恒流泵(如：Altex 100A)。/pp　　(2)稳定性好、脉动小/pp　　输液高压泵的稳定性和脉动大小会直接影响HPLC系统的稳定性(漂移和重复性)、影响系统的噪声、降低灵敏度，特别是HPLC系统采用电化学检测器和示差等检测器，或进行梯度分离时更加重要，因此目前国际上很多高压泵的压力脉动都可以控制在1%以内。/pp　　(3) 流量连续可调、流量范围宽/pp　　目前国际上HPLC的高压泵，大多数流动范围可以达到0.001-10.0mL/min(制备色谱的流量更大，有时要求达到数千mL/min)，可以同时满足各种不同内径的色谱柱的分析工作要求。/pp　　(4) 流量重复性好/pp　　很多HPLC的泵的流量重复性可以达到0.07%(RSD)。但是重复性与测试方法有关，目前国际上一般采用两种方法测试：一是重量法，收取泵的单位时间里的流出液，在天平上直接称其重量，判断重复性 二是保留时间法，根据保留时间的长短，来判断流量的重复性。在HPLC的分析工作中，其定性分析一般是根据保留时间。高压泵的重复性(RSD)是极其重要的指标之一，也是影响HPLC整机系统重复性的一项非常重要的性能技术指标。/pp　　(5)死体积小/pp　　高压泵的死体积会影响HPLC的分析精密度和准确度，特别是影响梯度洗脱的效果，一般总是希望死体积越小越好。因为高压泵的死体积小，有利于溶剂的快速置换，并且有利于把系统的气泡及时排出。/pp　　(6) 流量准确度高/pp　　HPLC高压泵的流量准确度很重要，直接影响分析测试数据的重复性(可靠性)。目前国内外HPLC的泵流量重复性一般在1%左右(与测试方法有关)，最好的可达到0.06%(采用保留时间法 如美国waters、日本岛津、中国普析通用的高压泵等就是如此)。/pp　　(7) 具有梯度洗脱功能/pp　　目前国际上的HPLC仪器，一般都具有梯度洗脱功能 因为，往往等度洗脱不能解决的分析工作，如果采用梯度洗脱的方法，就可能很好的解决问题。因此，HPLC的使用者，往往需要仪器的高压泵具有流速程序和梯度洗脱程序。/pp　　除上述几点外，对HPLC的高压泵的要求还有耐用、流速可控程、具有压力检测保护功能、维修方便等。虽说不是所有的泵都要求具有上述要求，但是很多泵具有这些功能，例如：美国waters公司的Alliance系列、美国Agilent公司的1200系列 中国北京普析通用公司的L600系列、大连的依利特公司的P230系列、上海伍丰公司的LC-100系列和浙江福立公司的LC1190系列高压泵等，基本上都具有这些功能，一般都能满足液相色谱分析工作的要求。/ppstrong　　2、分离系统(色谱柱)/strong/pp　　人们一般所讲的分离系统主要指色谱柱及其附件，它是一个非常重要、非常复杂的核心部分。一般a href="https://www.instrument.com.cn/zc/23.html" target="_blank"液相色谱/a柱的结构如下图所示，包括柱管(大多采用不锈钢制作)、填料(后面将详细讨论)、接头(一般用不锈钢制作)、卡套(一般用不锈钢制作)、压帽、密封环、滤片、螺丝(一般用不锈钢制作)、连接管道(一般用不锈钢制作)等等。/pp　　HPLC的色谱柱主体组成(结构)如下：/pp　　1)色谱柱结构：色谱柱主体组成一般如下图所示：/pp style="text-align: center"img style="max-width: 100% max-height: 100% width: 600px height: 216px " src="https://img1.17img.cn/17img/images/201911/uepic/a9f17695-9bf3-481b-82d0-caccb66de0ce.jpg" title="02.jpg" alt="02.jpg" width="600" height="216" border="0" vspace="0"//pp style="text-align: center "图中：1-色谱柱的塑料保护头；2-柱头螺丝；3-刃环；4-密封环；5-滤片(筛板)；6-柱体(不锈钢管)；7-色谱柱填料。/pp　　色谱柱的筛板(过滤板)一般是用不锈钢或钛合金材料制作，其孔径一般在0.2-20μm之间，孔径大小主要取决于柱填料的粒度，它是一个非常重要的零件，它可以防止填料漏出。同时，防止色谱柱工作时杂质进入柱内引起分离效果下降，甚至容易引起色谱柱堵塞等等。色谱柱与输液管连接处一般需要使用不锈钢制作的卡套和不锈钢制作的固紧接头螺钉，它们也非常重要，否则色谱柱系统会漏液，结果使柱压下降、流动相或样品漏出，严重影响分析测试结果，甚至不能进行分析测试工作。/pp　　2)色谱柱分类：/pp　　从类型上来说，色谱柱可以分为制备型和分析型两大类，一般分析型的柱使用最多。如果细分，色谱柱又可以分为常规柱、窄径柱、毛细管柱、制备柱和半制备柱等等。为提高分析速度，有人经常使用短柱，其柱长5-10cm，填料粒径多为3μm左右。很多分析工作者比较强调分析灵敏度，因此发展了窄径柱、毛细管柱和微径柱。这些柱子的优点是：所需样品少、所需流动相少、灵敏度高、容易控制温度。但是它们对检测器的流动池、柱外的管道、接头、进样阀等要求大大提高了。/pp　　色谱柱的柱效是最重要的关键指标，一般都取决于固定相的性能和装柱技术。一般HPLC的色谱柱固定相(填料)大致有三种：硅胶或以硅胶为基质的填料、聚合物填料和无机物填料。正相色谱柱大多采用硅胶类填料，反相色谱柱则多以硅胶为基质组成的官能团类的填料。以聚合物为填料的色谱柱最大的特点是PH值可在1-14之间都能用，疏水性强。但无机填料色谱柱一般只是限于特殊用途，比较少用。/pp　　因为HPLC的样品都为溶液，而溶液受温度影响很大，例如：温度对溶剂的溶解能力、色谱柱的柱效、流动相的粘度都会产生影响。如果温度升高，可能会提高溶液在流动相中的溶解度，可以降低分配系数K 降低流动相粘度可以降低柱压，有利于保护色谱柱，延长色谱柱的寿命。但是，温度不能太高，否则会产生气泡。/pp　　HPLC工作者还必须注意不同的温度，对色谱柱的保留时间、分离效果，及检测器的灵敏度都会有影响，特别是对示差折光器的灵敏度、最小检出限的影响很大。所以，很多HPLC特别注意对恒温系统的设计，这些都是HPLC设计者、使用者应该重视的问题。/pp　　作者的长期实践证明：色谱柱的技术含量很高，它除了与色谱柱的结构有关外，更加重要的还有：既与固定相的性能有关，又与装柱时的填充料和填充技术有关。有些使用者根据使用要求自己装色谱柱，大多数使用者都是使用已经装好的商品色谱柱。不管是哪种柱，在使用前一定要对色谱柱进行认真的考察 使用期间或放置一段时间后，也要重新检查、测试。这个问题目前国内很多HPLC使用者很不了解或很不重视 他们以为买来的色谱柱，一定就是合格的、好用的色谱柱，并不知道它还有与系统是否相匹配的问题 不知道它会对前面的高压泵、后面的检测器有什么影响等等。所以在使用过程中，总是磕磕碰碰，不能得到最佳的分析结果。/pp　　HPLC的色谱柱(分离柱)是极其重要的部件之一，根据填料的不同一般可分为：反相柱、正相柱、其它柱三类，分别简述如下。/pp　　(1)反相色谱柱：它是使用最多的一种色谱柱 一般约占75%左右 其中，C18柱约占 65% C8柱占15%左右 苯基柱 5%。反相色谱是目前应用得最为广泛的一种高效液相色谱方法。C18 在反相色谱中应用得最为广泛，大概超过一半以上。/pp　　(2)正相色谱柱：正相色谱柱也经常被使用，约占20%左右。/pp　　(3)其它色谱柱 (手性柱, 离子交换柱): 约占10%左右。/pp　　要用好、保护好色谱柱，是一个需要特别重视的问题，如果稍有不慎，就有可能降低色谱柱的柱效、缩短色谱柱的寿命，甚至损坏色谱柱。/ppstrong　　3、检测系统/strong/pp　　检测器种类很多也非常重要，但是使用最多的是光学类检测器，占比约75%左右，这里重点光学类检测器。/pp　　1)光学类检测器基本功能：提供准确的波长、提供足够小的检测限(灵敏度，这是用户最关心的问题之一)、提供小的噪声、飘移和重复性，给出最终检测结果。/pp　　2)最常用HPLC检测器的类型/pp　　在国内外的科技界，很多色谱工作者认为高压泵和色谱柱是HPLC的核心，检测器只是一种光谱仪器，没有分离就不成为色谱。所以，通常认为高压泵和色谱柱最重要。而光谱工作者认为光谱仪器是HPLC的核心，没有它，分析检测结果什么也不知道，高压泵只是输液、色谱柱只是分离，关键要靠检测器检测才有测试结果，所以检测器最重要。作者认为上述两种说法都不完全正确，应该说HPLC系统中每个部分都重要，千万不能偏看哪个部分，否则将得不到可靠的分析检测数据。/pp　　目前，国内外科技工作者最常用的检测器有以下几种：蒸发光检测器、分子荧光检测器、示差折光检测器、各类紫外可见光谱检测器、各类质谱检测器、各类AAS(原子吸收光谱)检测器、各类原子荧光检测器等等。在各类联用技术中，凡与HPLC的泵、柱联用的仪器，都可以称之为检测器。/pp　　3)光学类检测器的主要技术指标：/pp　　光学类检测器是所有检测器中使用最多的一种，它的主要技术指标如下：/pp　　(1)波长范围：长波和短波两端决定仪器的适用范围，限制或决定仪器的适用性。例如：一般只有氘灯的紫外检测器，就不能测试吸收峰在618nm的强致癌物质孔雀石绿，以及吸收峰在200nm的紫外吸收物质，因为氘灯没有618nm这根谱线，而在200nm时能量弱、信噪比差。/pp　　(2)波长准确度：影响摩尔吸光系数、影响仪器的灵敏度，比较仪器时很重要。/pp　　(3)波长重复性：影响分析数据的重复性。/pp　　(4)光谱带宽：大家不大注意，它是分析误差来源之一，一般采用谱线轮毂法测试。/pp　　(5)噪声：非常重要，一般光谱仪器有多大的噪声，就可能在测试结果中增加多大的误差。/pp　　有些仪器采用软件平滑噪声，作者认为不是好办法。因为平滑时一是信号也损失了一部分，二是硬件的噪声并没有去掉。测试结果表面上噪声小了，其实信噪比没有变化。所以，作者认为应该从算法上着手，采用目前国际上一种最先进的利用软件、算法降噪技术，这种技术只降噪声，不影响信号，这是光谱仪器研发工作者应该重视的问题。/pp　　(6)稳定性(含漂移、重复性)：它直接限制光谱仪器的可靠性。/pp　　(7)光度范围：应该注意多少浓度范围内能给出准确数据。/pp　　(8)量程：应重视最灵敏量程，不能用最大量程测试仪器的灵敏度(后面将有论述)。/pp　　4) 几种特别值得重视的HPLC检测器/pp　　(1)最常用的：紫外检测器(UVD)(占70%左右)、荧光检测器(FLD)(占10%) 、视差折光检测器(RID )(占3%)、其他检测器(如质谱等等，占17%)。/pp　　(2)还有目前使用非常多的、质量型检测器：蒸发光散射检测器--ELSD， (已上药典，可以替代RID)。/pp　　(3)用户目前特别关注的新型检测器：质谱检测器、化学发光检测器、放射性检测器、光电导检测器、旋光检测器、电喷雾检测器(最新的质量检测器，后面还将详细讨论)等等。/pp　span style="color: rgb(255, 0, 0) "strong　(三)HPLC整机几项最关键的性能技术指标的测试方法/strong/span/ppstrong　　1、灵敏度的测试方法/strong/pp　　a href="https://www.instrument.com.cn/zc/23.html" target="_blank"HPLC/a的灵敏度可定义为：一、定量的物质，通过HPLC的检测器时，仪器所给出的信号大小就叫做该HPLC的灵敏度，有时也称为响应值。对使用者来讲，总是希望HPLC仪器有较高的灵敏度，因为灵敏度高，就意味着对等量的同一样品进行检测时，仪器有较大的输出信号。但是，灵敏度的高低，并不能表示HPLC仪器的检测能力。只有检出限，才能表示仪器的最大检测能力。/pp　　HPLC灵敏度的测试方法：主要根据信噪比的定义进行测试。一般取信号等于或大于噪声2倍时的检测量或浓度(信号强度)作为HPLC的信号大小。信号与噪声二者相除即为仪器的信噪比(灵敏度，但是要求S/N≧2)。/ppstrong　　2、检测限测试方法/strong/pp　　讲HPLC的指标、给出HPLC的谱图，应该实事求是的给出使用的灵敏度量程(一般使用最灵敏量程)，给出样品浓度(一般是噪声的3倍左右)，才能说明仪器的检测限或灵敏度。/ppstrong　　3、光学类检测器噪声的测试方法/strong/pp　　HPLC的噪声是一种与被测样品无关的、随机输出的信号。国际上对噪声的定义、测试方法各异。例如：美国材料协会制订的测试标准(ASTM)，规定噪声分为长噪声、短噪声、和超短噪声三种。长噪声是指每小时内有6个至60个变化周期的噪声，所以，测定时间至少应该测试一小时 短噪声是指每小时内有1个至10个变化周期的噪声，所以，测定时间至少应该测试10分钟至60分钟内 超短噪声是指每分钟内有10个以上的变化周期的噪声，所以，测定时间应该大于1分钟。/pp　　从使用者的角度看，噪声又分为静态噪声和动态噪声。其测试方法如下：/pp　　1)静态噪声测试：冷态开机(关机2小时后开机)，预热30分钟，连续测试1小时。在这1小时里，任取10分钟(包含最差的峰-峰值)，在这10分钟里取峰对峰值(P-T0-P)的最大值，就是仪器的噪声。但是，10分钟里的峰对峰(P-T0-P)值，不同于10分钟里的任一地方的峰-峰(P-P)值，即：“10分钟里的峰对峰”值，不等于瞬时的峰-峰(P-P)值，测试数据前面应加“± ”符号。/pp　　注意：开机30分钟后，仪器调整到最灵敏度档(如：对量程为0.005-3.0AUFS的仪器，取0.005AUFS，即纵坐标设置为0.005A) 设置波长λ=250nm(有人设置500 nm，但最好测试250 nm) 设置0 Abs(即时间扫描，吸光度从0点开始测试) 光谱带宽(SBW)=2nm(固定光谱带宽的仪器不需选择)。/pp　　在上述条件下，连续测试1小时(用仪器上的CRT指示输出，或用数字电压表监测)。在1小时内，任取10分钟的峰对峰值(P-T0-P)，其最大者前面加“± ”符号，即是仪器的噪声。目前，国际上大多数科技工作者，基本上采用这种方法测试HPLC仪器的静态噪声。/pp　　有些科技工作者，认为在10分钟的峰对峰值(P-T0-P)前如果要加“± ”符号，就应对峰-峰值的绝对值先除“2”。这种做法是不妥的，会低估仪器的噪声。因为噪声是随机的，可能是“+”值也可以是“-”值。/pp　　上述仪器条件的设置，在有些仪器上是不需要的，因为由于计算机的发展和普遍应用，很多仪器的坐标设置，完全由仪器的计算机自动设置。/pp　　2)动态噪声测试：/pp　　作者在研发检测器和使用HPLC时所采用的测试动态噪声方法如下：连接恒流泵、液相色谱分离柱和检测器。在恒流泵和检测器中有移动相(流动相)流动。/pp　　具体操作方法如下：/pp　　冷态开机，预热30分钟，设恒流泵的流速1mL/min 检测器设置：仪器调整到最灵敏度档(如：0.005AUFS 即纵坐标设置为0.005AU) 波长λ=250nm(有人设置500 nm，但最好测试250 nm)、0 Abs(即时间扫描，吸光度和时间都从0点开始测试)，光谱带宽(SBW)=2nm(固定光谱带宽的仪器不能选择)，连续测试1小时，可以用仪器上的CRT指示噪声在这1小时里，任取10分钟(包含最差的峰-峰值)，在这10分钟里取峰对峰值(P-T0-P)的最大值，就是仪器的噪声。但是，10分钟里的峰对峰(P-T0-P)值，不同于10分钟里的任一地方的峰-峰(P-P)值，即：“10分钟里的峰对峰”值，不等于瞬时的峰-峰(P-P)值。测试数据前面应加“± ”符号。目前，国际上基本上采用这种方法测试HPLC仪器的动态噪声。有时候，为了节省时间，也可以在漂移测试的基础上检测噪声。但是开机时间就不是30分钟，而是2小时。这样所得测试数据稍小于开机30分钟的数据(因此，给出数据时要说明方法)，数据处理方法仍如上所述。/pp　　3)目前国内外的HPLC制造商，往往在仪器样本上给出的都是检测器的静态噪声，同时注明了仪器的状态(检测器空池)。这样做，对于使用者了解整个仪器系统中的检测器性能有利，也是可以的。但是不符合使用者的总体要求，因为使用者的总体要求是：整个HPLC系统(包括泵、柱、检测器)处在使用状态(动态)的情况下，整机的噪声有多大。所以，作者认为静态噪声可以给出，也可以不给出，但是动态噪声必须给出。/pp　　注意：噪声测试时，国际接轨的做法是在500nm。但是有些厂商却给出700nm处测试的噪声，这也是不对的。因为波长短，能量大 500nm处的能量比700nm处大，所以在700nm处测试的噪声，数据会偏小，数据不真实。/pp　　4)中国的HPLC国家标准(2011版)和计量检定规程JJG705-2002也规定了噪声的测试方法，但是分别都还有一些值得推敲的问题，请大家自己参阅。/pp　　5)这里特别需要提出的是：目前有些国外HPLC生产厂商，为了吸引用户，制造了一些违背仪器学理论的指标。例如：国外某厂商，在招标中给出HPLC的噪声时，先采用计算机对噪声进行平滑，并且采用最大量程测试，结果给出的HPLC噪声非常小、谱图基线非常平直、谱峰尖而陡直，给人的印象是世界一流的HPLC。其实不然，给出的数据和谱图都是虚假的。如果用盲样进行比对测试，因为他们的HPLC的噪声大，信噪比差，灵敏度差，所以立即败下阵来。/pp　　我国三聚氰胺国标的建立过程中的比对测试结果就是如此，专家们从三家公司(两家外企,一家国产仪器公司(普析通用公司))的三种HPLC全方位比对测试的结果(标样由国家标物中心提供)中，最后选用了国产北京普析通用的早期HPLC产品L6作为国家建标的仪器(L6是《原料乳三聚氰胺快速测定--液相色谱法》国家标准中采用的唯一国产仪器)，其根本原因是L6的比对测试数据准确可靠、噪声小、S/N高、性价比高等等。/ppstrong　　4、稳定性(基线漂移和重复性)测试方法：/strong/pp　　这里包括仪器的静态基线漂移和动态基线漂移的测试方法：/pp　　一般来说，使用者不关心单个检测器的静态指标，所以，可以不专门测试检测器的静态基线漂移。但是，作者认为设计、制造者应该测试静态基线漂移这个指标，测试方法与测试整机(系统)的动态基线漂移完全相同。/pp　　动态基线漂移测试方法如下：冷态开机，预热2小时，连续测试1小时。1小时内的最大最小值之差就是动态漂移。(也有测试更长时间的，例如作者在FLD检测器研发时，为了考察仪器的长时间漂移，连续测试48小时，仪器的漂移小于5mV)。/ppstrong　　5、重复性及其测试方法：/strong与漂移测试方法相同，对仪器进行多次测试(作者认为一般是5-7次)，其数据的符合程度就是重复性，一般用RSD表示。/pp　strong　6、量程范围及其测试方法/strong/pp　　1)定义/pp　　仪器能适用测量的范围或仪器能满足测量要求的范围叫量程范围。其表示方法为AUFS(Absorbance Unit Full Scale)或AU/FS(Absorbance Unit/Full Scale)。80年代以前，也有很多人用OD(光密度)这个概念表示Abs(Absorbance)，即用ODFS来表示UVD的量程，但是OD不符合光对物质吸收的物理概念，不符合仪器学理论，所以，目前国际上已经废除“OD”概念，不能再使用“ODFS”了。/pp　　在实际的日常分析工作中，也有化学工作者用具体的化学物质来描述HPLC的量程。但是不同物质，由于摩尔吸光系数不同，表现出的灵敏度也不同，所以作者认为用具体的化学物质来描述HPLC的量程不符合仪器学理论的要求。作者认为，给出AUFS最合适，其最大优点是这种表示方法与样品的性质无关，便于比较同一类型检测器的性能优劣。但是这种表示方法对使用者来说不大直观、不大方便。目前，国际上的HPLC仪器的量程范围一般为：0.005-2.5AUFS(例如Waters的HPLC)。少数优质仪器的下限为0.001AUFS,但是有些仪器给出0.001-3.0AUFS的量程是有水分的，因为UVD的杂散光一般都比较大，而杂散光是光吸收类分析仪器主要分析误差的来源，它主要限制被分析样品浓度(吸光度)的上限。所以，HPLC的UVD给出0.001-3.0AUFS的量程一般是不准确的。/pp　　目前，国内外很多HPLC仪器的UVD生产厂商不给仪器的量程，这是不妥的。因为，不给量程范围就意味着不知道检测器的灵敏度(下限)，不知道多少吸光度时仪器能达到满度。当然，目前有很多HPLC仪器的UVD生产厂商，给出了仪器对某一物质的最小检测浓度或最小检测量，这在某种程度上也可以反映仪器的灵敏度，并且对使用者来说，比较方便、比较直观。但是，这种表示方法只是对某一物质而言，特别是会带来样品处理产生的误差、容易低估仪器噪声的影响，因此，从仪器学理论的角度来看是不科学的。/pp　　2)量程范围测试方法/pp　　目前，国际上对HPLC的UVD的量程范围设计指标，一般在0.005-3.0AUFS内。作者在研制HPLC的UVD检测器时，用原上海大华仪表厂生产的XWT-204记录仪的1V档测试。当对数放大器的差分放大器的总输出为1V时，记录仪满度(100格)。当仪器的有效光电信号从0.005-3.0V时，均可保证对数放大器的输出为1V 此时，这个0.005-3.0V对应的吸光度为0.005-3.0Abs。要求从0.005-3.0Abs时，光度准确度都能保证在1%以内(即1V± 10mv)。如此测量3次并取均值，即是HPLC的量程范围(0.005-3.AUFS)。/pp　　目前，国内外许多制造商都用萘或者蒽来测试HPLC系统的灵敏度，这种做法也可以，但是从仪器学理论角度考量，作者认为不科学。因为：①、不能给出仪器的测量范围，只能给出萘的最小检测浓度 ②、试样的配制会带来很多误差 ③、这种方法所作的测试，实际上是计算出来的灵敏度，而不是测试出来的真正的灵敏度，不能反应仪器真正的灵敏度。如果实际测试，肯定比计算的数据大很多。④、不与国际接轨，不便比较不同仪器的性能。虽说近几年国内外采用此方法的科技工作者比过去多，但是不能掩盖方法的局限性。所以，最好的方法还是给出仪器的测量范围。/pp　　还有人用静态噪声的2倍或3倍来计算最小检测浓度，这样计算出来的结果，同样是不真实的。因为从仪器学理论角度来看，一般在正常情况下，最小检测浓度是在系统处在动态的情况下测试的，所以计算最小检测浓度就必须用动态噪声，而不能用静态噪声。/pp　　还有人测试HPLC的最小检测浓度时，采用一些计算公式(如：Csubmin/sub=2NC/H× 20，式中：Cmin 为最小检测浓度，N为仪器的噪声 C为浓度，H为峰高)，计算时不考虑移动相的流速，这是不妥的。不考虑移动相的流速或计算公式中去掉移动相的流速，就意味着是静态的最小检测浓度，而使用者需要的是系统的动态最小检测浓度。所以作者认为这种计算方法很不合理，对使用者来讲是没有意义的，这种计算方法不可采用。/ppspan style="color: rgb(255, 0, 0) "strong　　(四)HPLC仪器的最新进展/strong/span/pp　　1、二维及多维液相色谱仪的发展：美国EKSIGENT公司和日本KYA TECH公司生产的纳升级二维高效液相色谱仪，其组合了纳米微柱和二维液相色谱技术，可直接用于蛋白质组学、基因组学研究工作中。/pp　　2、毛细管和纳升高压液相色谱仪的发展，美国DIONEX公司生产Ulti Mate毛细管和纳升高效液相色谱仪，可进行微柱、毛细管柱和纳升柱三种微柱液相色谱分析。/pp　　3、超高压液相色谱仪(UPLC)自从2004年WATERS公司推出ACQUITY UPLC后，JASCO、AGILENT、THERMO-FISHER SCIENTIFIC、SHIMADZU、DIONEX、HITACHI、上海通微等都先后推出了各自的超高效液相色谱议。/pp　　4、新型的电喷雾检测器的问世，它是最新的质量检测器之一，其工作原理如下图：/pp style="text-align: center"img style="max-width: 100% max-height: 100% width: 450px height: 274px " src="https://img1.17img.cn/17img/images/201911/uepic/43ae4d13-cdcc-4cce-8a3b-28e4fa106938.jpg" title="微信图片_20191107160156.png" alt="微信图片_20191107160156.png" width="450" height="274" border="0" vspace="0"//pp　　淋洗液从HPLC柱子进入 Corona (1) →在气腔中被氮气或空气雾化 (2) →小液滴进入干燥管 (3) →大液滴进入废液管 (4) →干燥的颗粒进入混合腔(5) →另一路气流经过带电Corona体(6) →带电气体和干燥的颗粒混合使颗粒带电 (7) →离子阱把多余的电荷去除(8) →带电颗粒进入采集器，电荷被高灵敏度静电计测量(9)→信号传输到色谱数据软件(10)/pp　　5、新型的HPLC仪器不断问世/pp　　目前，HPLC仪器面临三大挑战：高速度、高灵敏度、高分离效率。所以，近几年各国的科技工作者都很重视对HPLC仪器的研发。近几年，我国的有关生产厂商在这方面取得了令人瞩目的成就，例如：/pp　　1)浙江福立分析仪器股份有限公司，从HPLC的色谱柱填料这个核心部件入手，研发成功了优质的、新型的LC5190超高效液相色谱仪(UPLC)。/pp　　很多UPLC采用2微米填料的分离柱，柱效比常规HPLC提高了3倍，柱压上升了9倍。但是，因为色谱柱纵向温度梯度分布改变，导致色谱峰增宽、分离效率下降，有时还会引起出峰顺序的变化。浙江福立分析仪器股份有限公司突破了一系列关键技术、采用了多种专利技术：他们采用3微米的新型核壳型分离填料色谱柱，使系统压力降低到常规HPLC范围，解决了2微米分析柱的不足，保证了UPLC超高效的分离分析结果的同时，降低了柱压，研发成功了全新的LC5190超高效液相色谱仪。该仪器的理论塔板数与采用2微米的全多孔型柱效相同，但是压力只有其1/2左右。特别是仪器的性价比、长期稳定性、可靠性等都提高了，维修也更加简便了。该仪器的高精度输液系统、低残留进样系统、精准的温控柱温箱和高灵敏度紫外检测器、荧光检测器等保证了仪器的先进性、可靠性。仪器具有智能化工作站系统，可以全面满足用户的各种应用需求，符合GMP/GLP要求。/pp　　2)上海伍丰公司推出了EX1700s-HPLC超快速高效液相色谱仪/pp　　该仪器为国内最早推向市场的超快速高效液相色谱仪，与常规HPLC相比，分离能力强，出峰对称性更好，基线更稳定，分辨率更高，分析时间大大缩短，降低了客户成本。/pp　　该仪器的输液系统最大输出压力：80MPa，流量范围：0.001-5.000mL/min 流量设定值误差：Ssubs/sub≤± 1%(水，20℃, 1mL/min，10MPa) Ssubs/sub≤± 2%(水，20℃, 1mL/min，40MPa)。流量稳定性误差：SsubR/sub≤ 0.3%(1mL/min)(10MPa)。/pp　　3)上海伍丰推出了第三代LC-100液相色谱仪/pp　　第三代LC-100可选择分析型系统、半制备型系统、制备型系统。新增全新溶剂管理器，可实现在二元梯度系统基础上轻松切换至4-8种溶剂，并可选配脱气单元及柱温箱，大大提升用户体验。可选择手动进样或自动进样系统，数据工作站分析软件可根据客户需求提供两个版本的选择，符合GMP、FDA、3Q等认证需求。/pp　　4)上海通微公司的高效微流电色谱仪和定量毛细管电泳仪问世/pp　　高效微流电色谱仪为国家科技部“十二五”重大攻关项目，是国际首创的一种新型HPLC仪器 在柱效、分离速度等很多方面都优于UPLC，其柱效比UPLC高10倍、5秒钟可以分离5个芳香烃(一般HPLC需要10-20秒)。该仪器总体优于UPLC，又是一个国际首创。定量毛细管电泳仪也是国际首创(一般毛细管电泳仪，定量分析精度很差)。/pp　　HPLC仪器的进展发展很快，远不止如上所述。因篇幅所限，此不赘述。/ppstrong　　(五)几个有关问题/strong/pp　　1、分析仪器和仪器分析工作者应该“不忘各自的初心，牢记各自的使命”。分析仪器制造者的初心是什么?应该是为用户服务，做出的仪器质量好，稳定可靠，能满足使用者的使用要求。分析仪器工作者的使命是什么?应该是做出的仪器好用，质量稳定可靠。所以，分析仪器制造商应该尽量到用户中去，认真去了解用户的需求，仪器制造商必须将仪器专业技术与仪器应用技术紧密结合，这样，仪器制造商才能作出优质仪器、才能提供可靠性好的仪器，才能保证仪器使用者得到最佳分析检测结果。/pp　　仪器使用者的初心是什么?应该是得到最佳分析测试数据。仪器使用者的使命是什么?就是用好仪器，认真学习或搞清楚仪器的性能指标的物理意义、对分析误差的影响，认真选择仪器条件、认真做好样品前处理，努力将仪器用在最佳条件下。这样，才能得到最佳分析检测数据，才能得到分析误差最小的分析检测结果。/pp　　我国目前的现状是：做仪器的人，不知道使用者在如何使用仪器，不知道使用者对仪器的具体要求，所以，做出的仪器就不大好用或者不好用，这是制造者与使用者脱节的原因。而使用者不知道制造者在如何制造仪器，不知道仪器的性能指标的物理意义、对分析误差的影响，所以，买仪器时要求指标越高越好，结果根本用不上。实验室里仪器堆得满满的，但是很多仪器用不上，造成大大的浪费。所以，不忘初心，牢记使命，制造仪器和使用仪器的科技工作者紧密结合非常重要。/pp　　2、没有理论指导的仪器研发和生产工作都是闭着眼睛抓麻雀，一定要重视仪器学理论 /pp　　从事HPLC仪器研发和使用的科技工作者，只有重视仪器学理论才能做好HPLC仪器、才能用好HPLC仪器。仪器学理论是一把金钥匙，一通百通，它可以使你做出稳定可靠的优质HPLC仪器，使你在使用HPLC仪器时，能够调整好最佳仪器条件、保证得到准确可靠的分析检测数据。/pp　　目前我国的20多家HPLC仪器生产商和广大HPLC用户，对仪器学理论重视不够，基本上不了解HPLC各项性能指标的物理意义和它们对分析误差的影响，特别是不懂得HPLC仪器的各项指标如何影响分析检测数据的误差。这是中国分析仪器及其应用落后国外先进水平或与国外存在差距的主要原因之一。因此，仪器学理论非常值得广大科技工作者们重视。/pp　　3、从仪器学、分析化学和应用实践的要求来讲，目前国产HPLC要求基本上都能满足使用要求，并且深受国外科技工作者青睐。国产高档HPLC产品已经出口到国外(包括发达国家和发展中国家) 而国人却盲目迷信进口HPLC，大量进口国外的HPLC，中国的HPLC主市场仍被外国仪器占领，实在令人费解。中国的科技工作者，应该从民族高度看国产仪器和进口仪器。在购买、使用各类HPLC仪器时，应该要有爱国情怀，要有骨气，要大胆使用能满足使用要求的国产仪器。/ppstrong　　(六)主要参考文献/strong/pp　　1)李昌厚著，高效液相色谱仪器及其应用，北京：科学出版社，2014/pp　　2)李昌厚著，仪器学理论与实践，北京：科学出版社，2008/pp　　3) 李昌厚著，紫外可见分光光度计仪器及其应用，北京：化学工业出版社，2010/pp　strong　作者简介：/strong/ppimg style="float: left width: 150px height: 201px " src="https://img1.17img.cn/17img/images/201911/uepic/15287b28-efe6-463a-a959-a67fef165df1.jpg" title="04 (1).jpg" alt="04 (1).jpg" width="150" height="201" border="0" vspace="0"/　　李昌厚，男，中国科学院上海生物工程研究中心原仪器分析室主任、兼生命科学仪器及其应用研究室主任、教授、博士生导师、华东理工大学兼职教授；终身享受国务院政府特殊津贴。/pp　　主要研究方向：分析仪器及其应用研究 长期从事光谱仪器(紫外吸收光谱、原子吸收光谱、旋光光谱、分子荧光光谱、原子荧光、拉曼光谱等)；色谱仪器(液相色谱、气相色谱等)及其应用研究；特别对《仪器学理论》等有深入研究。/pp　　以第一完成者身份，完成科研成果15项。由中科院组织专家鉴定 其中13项达到鉴定时国际上同类仪器的先进水平，2项填补国内空白 以第一完成者身份获得国家和省部级(中国科学院、科技部、上海市)科技成果奖5项(含国家发明奖1项)；发表论文183篇，出版专著5本；曾任中国仪器仪表学会分析仪器分会第五届、第六届副理事长、国家认监委计量认证/审查认可国家级常任评审员、国家科技部“十五”、“十一五”、“十二五”和“十三五”重大仪器及其应用专项的技术专家组成员或组长、上海市科学仪器专家组成员、《光学仪器》副主编、《生命科学仪器》副主编、《光谱仪器与分析》副主编等十多个学术团体的领导职务。/ppstrong　　扩展阅读/strong/ppspan style="color: rgb(255, 0, 0) "strong　　/strong/spana href="https://www.instrument.com.cn/zt/lc" target="_blank" style="color: rgb(255, 0, 0) text-decoration: underline "span style="color: rgb(255, 0, 0) "strong《包罗万象 液相色谱技术及应用大赏》/strong/span/a/ppspan style="color: rgb(255, 0, 0) "strong　　/strong/spana href="https://www.instrument.com.cn/zt/spzfl" target="_blank" style="color: rgb(255, 0, 0) text-decoration: underline "span style="color: rgb(255, 0, 0) "strong《走进色谱的“心脏” 色谱柱新技术新应用》/strong/span/a/pp style="text-align: left "span style="font-family: 楷体, 楷体_GB2312, SimKai "strongbr//strong/span/p

一、问：液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么？答：1.筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子。2.存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子二、问：用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在？如何解决？答：关于漂移问题：1.温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定2.流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等3.柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡关于快速变化问题1.流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定2.泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。3.流动相不合适，解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合三、问：HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法答：1.样品量不足，解决办法为增加样品量 医.学教育网搜集整理2.样品未从柱子中流出。可根据样品的化学性质改变流动相或柱子3.样品与检测器不匹配。根据样品化学性质调整波长或改换检测器4.检测器衰减太多。调整衰减即可。5.检测器时间常数太大。解决办法为降低时间参数6.检测器池窗污染。解决办法为清洗池窗。7.检测池中有气泡。解决办法为排气。8.记录仪测压范围不当。调整电压范围即可。9.流动相流量不合适。调整流速即可。10.检测器与记录仪超出校正曲线。解决办法为检查记录仪与检测器，重作校正曲线。四、问：做HPLC分析时，柱压不稳定，原因何在？如何解决？答：原因可能有：1.泵内有空气，解决的办法是清除泵内空气，对溶剂进行脱气处理；2.比例阀失效，更换比例阀即可；3.泵密封垫损坏，更换密封垫即可；4.溶剂中的气泡，解决的办法是对溶剂脱气，必要时改变脱气方法；5.系统检漏，找出漏点，密封即可；6.梯度洗脱，这时压力波动是正常的。五、问：我购买的HPLC柱验收测试时柱压过高，请问为什么？答：柱压过高是HPLC柱用户最-常碰到的问题。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的问题，您可按下面步骤检查问题的起因。1.拆去保护预柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压仍高，再检查；2.把色谱柱从仪器上取下，看压力是否下降，否则是管路堵塞，需清洗，若压力下降，再检查；3.将柱子的进出口反过来接在仪器上，用10倍柱体积的流动相冲洗柱子，（此时不要连接检测器，以防固体颗粒进入流动池）。这时，如果柱压仍不下降，再检查；4.更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质，正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。

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p style="line-height: 1.75em text-indent: 2em "span style="font-family: 宋体, SimSun "色谱柱技术始于上世纪50年代，随着填料和填充技术的发展，色谱柱技术日益成熟，功能也日趋完善，目前已被广泛应用于生命科学、环保、材料、食品、药物开发等领域。/span/pp style="line-height: 1.75em text-indent: 2em "span style="font-family: 宋体, SimSun "液相色谱柱在色谱分析系统中主要起着分离检测物质的作用，如同色谱系统的心脏，同时也是易损耗品。为了减少损耗，色谱柱的使用维护至关重要！/span/pp style="line-height: 1.75em text-indent: 2em "span style="font-family: 宋体, SimSun "液相色谱柱使用过程常用问题包括色谱柱连接、色谱柱活化、色谱柱使用、色谱柱维护、色谱柱保存等。/span/pp style="text-align: center"img style="max-width:100% max-height:100% " src="https://img1.17img.cn/17img/images/202007/uepic/f8604747-9570-4f4c-ab4c-38392323be4a.jpg" title="1.png" alt="1.png"//pp style="line-height: 1.75em text-indent: 2em "span style="font-family: 宋体, SimSun " /spanspan style="font-family: 宋体, SimSun " /span/pp style="line-height: 1.75em text-indent: 2em "strongspan style="font-family: 宋体, SimSun "1、色谱柱连接/span/strong/pp style="line-height: 1.75em text-indent: 2em "span style="color: rgb(192, 0, 0) "strongspan style="font-family: 宋体, SimSun "色谱柱安装方向/span/strong/span/pp style="line-height: 1.75em text-indent: 2em "span style="font-family: 宋体, SimSun "色谱柱安装应按照同一个方向连接使用，且需要按照色谱柱上的方向指示连接，strong尽量避免色谱柱反向连接！/strong/span/pp style="line-height: 1.75em text-indent: 2em "span style="font-family: 宋体, SimSun "常见色谱柱连接的问题主要有两种，安装色谱柱时管线伸出接头长度过长，使得螺纹拧入较浅，会导致密封性不好而漏液，进一步引起基线漂移或响应降低；反之，会在管线前段出现死体积，引起峰形展宽，灵敏度降低。/span/pp style="line-height: 1.75em text-indent: 2em "span style="font-family: 宋体, SimSun "理想的接头连接应具备以下特性：管线与接口之间无死体积；在超高压和高温下始终避免泄漏；优异的长期使用稳定性，防止管线滑动；简便易用。/span/pp style="text-align: center"img style="max-width:100% max-height:100% " src="https://img1.17img.cn/17img/images/202007/uepic/84c8701f-71fc-4530-a9f0-a1a71937ed61.jpg" title="2.png" alt="2.png"//ppbr//pp style="line-height: 1.75em text-indent: 2em "span style="font-family: 宋体, SimSun "管线的选择也非常重要，分析型液相系统最常用的规格是0.12和0.17mm内径的管线。更换管线时首先要确认当前管线的规格、并更换相同内径和长度的管线，否则会造成更换前后结果的不一致，因为管线体积会影响系统柱外体积，从而影响峰形和保留时间。/spanspan style="font-family: 宋体, SimSun text-indent: 2em " /span/pp style="line-height: 1.75em text-indent: 2em "strongspan style="font-family: 宋体, SimSun "2、反相柱活化平衡/span/strong/pp style="line-height: 1.75em text-indent: 2em "span style="font-family: 宋体, SimSun "1） 首先，使用甲醇或乙腈冲洗约20 倍柱体积 。/span/pp style="line-height: 1.75em text-indent: 2em "span style="font-family: 宋体, SimSun "2）若流动相含有缓冲盐，使用与流动相中初始比例相等比例的超纯水和有机相冲洗过渡约20 倍柱体积，再用含缓冲盐的流动相平衡冲洗约20 倍柱体积或以上。 /span/pp style="line-height: 1.75em text-indent: 2em "span style="font-family: 宋体, SimSun "3） 若流动相不含缓冲盐，可直接用流动相平衡色谱柱，大约20 倍柱体积或以上。 /span/pp style="line-height: 1.75em text-indent: 2em "span style="font-family: 宋体, SimSun "4）当基线和压力平稳后测试，判断是否充分平衡以连续进样结果的重现为准。若不够可延长流动相的平衡时间。/span/pp style="line-height: 1.75em text-indent: 2em "strongspan style="font-family: 宋体, SimSun "3、反相柱冲洗保存/span/strong/pp style="line-height: 1.75em text-indent: 2em "span style="font-family: 宋体, SimSun "1）使用50:50 甲醇或乙腈与水的混合溶液冲洗20-30 倍的柱体积；/span/pp style="line-height: 1.75em text-indent: 2em "span style="font-family: 宋体, SimSun "2）使用纯甲醇或乙腈冲洗20-30倍柱体积；/span/pp style="line-height: 1.75em text-indent: 2em "span style="font-family: 宋体, SimSun "3）储存之前将堵头紧紧密封在柱端接头上，以免填料变干。/span/pp style="line-height: 1.75em text-indent: 2em "strongspan style="font-family: 宋体, SimSun "4、反相色谱柱清洗再生/span/strong/pp style="line-height: 1.75em text-indent: 2em "span style="font-family: 宋体, SimSun "清洗或反冲清洗反相色谱柱时，用以下溶剂至少各30倍柱体积冲洗色谱柱：/span/pp style="line-height: 1.75em text-indent: 2em "span style="font-family: 宋体, SimSun "断开色谱柱与检测器的连接，将管线留在色谱柱末端，将其放入接收液体的烧杯中，先用不含缓冲液盐的流动相冲洗（水/有机相），然后用 100% 有机相（甲醇和乙腈）冲洗，检查压力是否回归正常，如果没有，再进行下一步操作。/span/pp style="line-height: 1.75em text-indent: 2em "span style="font-family: 宋体, SimSun "如压力没有回归正常，丢弃色谱柱或考虑用更强的条件清洗：75% 乙腈/25% 异丙醇、100% 异丙醇、100% 二氯甲烷 、100% 己烷。/span/pp style="line-height: 1.75em text-indent: 2em "span style="color: rgb(192, 0, 0) "strongspan style="font-family: 宋体, SimSun text-indent: 2em color: rgb(84, 141, 212) "值得注意的是，无论是使用己烷还是二氯甲烷，使用之前或恢复使用反相流动相之前必须用异丙醇进行冲洗。/span/strong/span/pp style="line-height: 1.75em text-indent: 2em "span style="color: rgb(192, 0, 0) "strongspan style="font-family: 宋体, SimSun "关于色谱柱反冲/span/strong/span/pp style="line-height: 1.75em text-indent: 2em "span style="font-family: 宋体, SimSun "虽然色谱柱不应轻易反冲，但当明确知道超压来自颗粒物堵塞筛板或柱头污染时，反冲是最有效补救方法。反冲色谱柱可使颗粒物快速被冲出，此外还可快速冲出柱头强吸附污染物，柱子反冲后最好仍然正向连接使用。不过，反冲也会带来负面影响，如可能导致柱床松动、发生保留时间改变、小粒径的色谱柱反冲可能导致填料流出等。/span/pp style="line-height: 1.75em text-indent: 2em "span style="font-family: 宋体, SimSun "其中，可以反冲的色谱柱有：粒径大于2um的色谱柱（2.7、3、3.5、4、5μm等）；而不可反冲的色谱柱有：粒径小于2um的色谱柱（1.8μm RRHD/RRHT；1.9μm Poroshell）。/span/pp style="line-height: 1.75em text-indent: 2em "strongspan style="font-family: 宋体, SimSun "5、色谱柱使用过程中常见问题/span/strong/pp style="line-height: 1.75em text-indent: 2em "span style="font-family: 宋体, SimSun "液相色谱柱使用过程中最常见的问题包括pH值、温度、溶剂耐受、压力、样品等。色谱柱使用条件不得超出厂家建议的范围，包括最高压力，pH范围，水相耐受，柱温等。当测试条件接近色谱柱使用范围的极限值时，柱寿命会受影响。/span/pp style="text-align: center"img style="max-width:100% max-height:100% " src="https://img1.17img.cn/17img/images/202007/uepic/59a6513a-a6d8-46e8-9bbf-8de6be7224c5.jpg" title="3.png" alt="3.png"//pp style="line-height: 1.75em text-indent: 2em "br//pp style="line-height: 1.75em text-indent: 2em "span style="font-size: 20px "strongspan style="font-family: 宋体, SimSun "问题集锦/span/strong/span/pp style="line-height: 1.75em text-indent: 2em "span style="color: rgb(192, 0, 0) "strongspan style="font-family: 宋体, SimSun "1、C18柱子如何调PH和温度以提高分离度呢？/span/strong/span/pp style="line-height: 1.75em text-indent: 2em "span style="font-family: 宋体, SimSun "答：通过调整pH和柱温优化分离度，这是方法开发中非常重要的手段。简单来讲，中性或不可电离化合物对pH变化不敏感。对于可电离化合物而言，可以通过调整流动相pH值，控制化合物电离状态来改变化合物的反相保留。降低pH可增大酸性化合物保留，而提高pH则可增加碱性化合物保留。通过调整pH改变化合物保留进而优化各个组分之间的分离度。/span/pp style="line-height: 1.75em text-indent: 2em "span style="font-family: 宋体, SimSun "通常提高柱温使得传质加快，保留也会降低，但是不同化合物保留对温度变化敏感程度不同，因此也可以通过调整柱温改变各个组分的保留时间来优化分离度。/span/pp style="line-height: 1.75em text-indent: 2em "span style="color: rgb(192, 0, 0) "strongspan style="font-family: 宋体, SimSun "2、色谱柱总超压可能是什么原因呢？/span/strong/spanspan style="font-family: 宋体, SimSun " /span/pp style="line-height: 1.75em text-indent: 2em "span style="font-family: 宋体, SimSun "答：超压一般是液相流路内部包括色谱柱在内可能有堵塞。需要先做分段排查确定堵塞的部位，再根据堵塞部位排查引起堵塞的可能原因。/span/pp style="line-height: 1.75em text-indent: 2em "span style="font-family: 宋体, SimSun "如果是色谱柱堵塞，比较常见的原因有很多，如样品脏、基质复杂并且没有经过良好的预处理，或者预处理之后进入液相系统后又析出从而造成堵塞或污染（解决方法：加强样品预处理）；色谱柱超压或超出pH范围使用导致填料碎裂，碎屑颗粒堵塞色谱柱（解决方法：根据测试条件选择合适色谱柱，避免超范围使用）；仪器使用过程中部件磨损碎屑造成的堵塞（解决方法：及时更换受损部件）等等，都会引起系统色谱柱压力升高。/span/pp style="line-height: 1.75em text-indent: 2em "span style="color: rgb(192, 0, 0) "strongspan style="font-family: 宋体, SimSun "3、C18柱子出峰时间拖后是什么因素影响？用一段时间出峰时间就拖后了，请问与流动相有没有关系？/span/strong/span/pp style="line-height: 1.75em text-indent: 2em "span style="font-family: 宋体, SimSun "答：液相色谱中影响化合物保留的主要因素包括：样品，色谱柱，流动相（流速，组成，比例等），柱温等。使用过程中发现保留时间漂移的话，需要从以下几个影响因素进行排查：可以先通过对比保留时间漂移前后相同条件下的压力曲线是否重现，从而初步排查可能的原因。若压力曲线不重现，首先确认测试条件是否有改动，检查流动相流速，组成，比例等是否改变，是否存在漏液或进气泡引起的流速和比例变化；对流动相组成变化敏感的样品和方法，应确保每次配制流动相的重现性；检查色谱柱是否堵塞污染；仪器控温是否准确等等，可能的原因比较多，具体原因需要进一步排查。/span/pp style="line-height: 1.75em text-indent: 2em "span style="color: rgb(192, 0, 0) "strongspan style="font-family: 宋体, SimSun "4、色谱柱用什么流动相保存最好？用纯有机试剂是否容易干？/span/strong/span/pp style="line-height: 1.75em text-indent: 2em "span style="font-family: 宋体, SimSun "答：反相柱可以用HPLC级的甲醇或者乙腈保存，注意紧密连接堵头。正常情况下只要堵好堵头，溶剂是不容易干的。当然在保存溶剂中添加5%-10%的水，也没有问题。/span/pp style="line-height: 1.75em text-indent: 2em "span style="color: rgb(192, 0, 0) "strongspan style="font-family: 宋体, SimSun "5、乙腈流动相总是容易聚合，有没有什么解决办法?/span/strong/span/pp style="line-height: 1.75em text-indent: 2em "span style="font-family: 宋体, SimSun "答：乙腈的聚合需要一定条件和时间，务必使用品质可靠的HPLC级溶剂，并且保证所使用溶剂尽可能新鲜。如果是放置保存比较久的乙腈溶剂，使用之前先过滤一下再用会有一定改善。/span/pp style="line-height: 1.75em text-indent: 2em "span style="color: rgb(192, 0, 0) "strongspan style="font-family: 宋体, SimSun "6、小分子极性物质一般选用什么液相色谱柱？/span/strong/span/pp style="line-height: 1.75em text-indent: 2em "span style="font-family: 宋体, SimSun "答：可以先尝试用能够耐受高比例水相的柱子，提高流动相水相比例来增强保留。如果是可电离化合物，如酸性或者碱性化合物，可以在反相模式下先尝试通过调整流动相pH增大保留，酸性化合物需降低流动相pH，碱性化合物则提高流动相pH，根据pH条件选择可以耐受的色谱柱。如果调整pH后反相模式保留仍然很弱，您还可以考虑使用其他保留模式的色谱柱，例如HILIC柱，HILIC-Z,HILIC-OH5，或者纯硅胶的HILIC柱等等，也可以使用离子交换色谱柱或者正相色谱等。/span/pp style="line-height: 1.75em text-indent: 2em "span style="color: rgb(192, 0, 0) "strongspan style="font-family: 宋体, SimSun "7、柱子分离效果差了该怎么处理？/span/strong/span/pp style="line-height: 1.75em text-indent: 2em "span style="font-family: 宋体, SimSun "答：导致色谱柱分离度降低的原因，主要是色谱柱柱效下降及色谱柱选择性发生改变。引起柱效下降的原因比较多，如果是连接不当造成的柱效损失，重新正确连接即可。如果是色谱柱使用中由于柱子污染引起的柱效下降或选择性改变导致的分离度降低，可以尝试对柱子进行清洗再生。如果是色谱柱本身的损伤引起的柱效下降分离度变化，这种通常是不可逆的，只能更换色谱柱，并且在后续使用新色谱柱的时候尽量避免各种损伤柱子的操作。/span/pp style="line-height: 1.75em text-indent: 2em "span style="font-family: 宋体, SimSun "br//span/pp style="line-height: 1.75em text-indent: 2em text-align: right "span style="font-family: 宋体, SimSun " /spanspan style="font-family: 宋体, SimSun text-indent: 2em " i本文根据安捷伦报告整理而成，欲了解更多内容，请点击链接观看视频: /i a href="https://www.instrument.com.cn/webinar/video_113123.html" target="_self"https://www.instrument.com.cn/webinar/video_113123.html /a/span/ppbr//p

近日，苏州赛分科技股份有限公司(以下简称“赛分科技”)再次更新二轮问询函。其在2022年底向科创板提交上市申请，保荐机构为中信证券。　　赛分科技主营液相色谱材料的研发、生产和销售，是江苏省“专精特新”中小企业。主要产品为色谱柱和色谱填料，用于生物大分子药物及小分子化学药物分析检测和分离纯化。　　业绩方面，2019-2021年，赛分科技营收分别为0.73亿元、0.98亿元和1.55亿元，三年复合增长率为44.94% 扣非净利润分别为-0.1亿元、0.06亿元和0.2亿元。2020年，赛分科技实现扣非净利润转正，同比增长209.47%。图源招股书　　最新财务数据显示，2023年上半年，赛分科技实现营收1.34亿元，同比增长79.21% 扣非净利润为0.27亿元，同比增长450.66%。净利润增速是营收增速的5倍多，赛分科技的盈利能力向好。图源招股书　　根据下游应用情况，赛分科技的产品可划分为分析色谱和工业纯化两大领域，为生物制药企业提供从药品研发、临床前(Pre-IND)到临床Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期、生产以及质控全周期的分离纯化产品。图源招股书　　在分析色谱领域，赛分科技的分析色谱产品微球粒径通常为10微米及以下，主要用于药物研发及质检环节的分析检测，实现对不同组分的分离。　　在工业纯化领域，赛分科技的工业纯化产品微球粒径通常为10微米以上，主要用于药物临床研究及规模化生产阶段的分离纯化，实现对目标成分的提取。　　目前，赛分科技的产品已进入全球科学仪器头部企业。2019-2021年，美企赛默飞(Thermo Fisher)和安捷伦(Agilent)稳坐前五大客户的位置。赛默飞和安捷伦是全球知名的科学仪器企业，在2021年营收分别为392.11亿美元和63.19亿美元，全球排名第一和第四。　　2021-2022年，安捷伦连续2年成为赛分科技的最大客户，主要向其采购分析色谱产品，贡献收入分别为0.14亿元和0.15亿元，占比分别为8.86%和7.07%。但是，因全球下游市场景气度下降，安捷伦自身难保，今年上半年仅达成242万元的交易。　　招股书显示，长期以来，我国色谱行业均由Cytiva、Thermo Fisher、Tosoh几大国际主流厂商掌控，是赛分科技的主要竞争对手。　　除了境外竞争对手外，目前国内在液相色谱材料领域的上市公司仅纳微科技(688690.SH)一家。2021年，纳微科技营收为4.46亿元，是赛分科技的近3倍。　　赛分科技的创始人是黄学英博士，硕士毕业于南京大学，后在斯坦福大学做博士后。曾先后在美国戴安公司和美国杜邦公司做研发，戴安是全球第一台离子色谱的生产厂，杜邦则是全球500强化工龙头企业。2002年，黄学英创办美国赛分，是赛分科技的前身。　　赛分科技高层队伍的履历同样出色：任高管的孙召棠博士和任核心技术人员的杨克博士都是麻省理工学院(MIT)博士后，与此同时，高层中除了来自清北、南大、南开等国内知名院校，还有一众海归硕博。　　现任股东中，黄学英合计控制31.59%的股份，为赛分科技的实际控制人。此外，高瓴祈睿在2021年投资0.8亿元入股，现持有1.97%的股份。　　本次上市，赛分科技拟募集8亿元，主要用于扩产和研发。值得注意的是，在2019-2021年，赛分科技已累计投入0.65亿元用于研发，占营收比为19.81%。图源招股书　　据前瞻产业研究院数据，到2026年，全球色谱介质市场规模将达到90亿美元。细数赛分科技的创始和研发团队，绝非只是“三个臭皮匠”的简单组合。那么，众多“诸葛亮”齐聚一堂，能否交出和履历一样亮眼的成绩?

全国中小企业股转系统最新公告显示，伯格森(北京)科技股份有限公司拟挂牌新三板上市。　　伯格森成立于2005年1月20日。公告显示，伯格森2014年度、2015年1-12月营业收入分别为1769.29万元、1604.71万元，净利润分别为-32.61万元、79.73万元。　　资料显示，伯格森(北京)科技股份有限公司主营业务为实验室设备的销售、安装调试及维修保养等服务 提供实验室配套的科研设备解决方案及检测服务 提供实验室设备的代理进口服务等。主要产品有生命科学实验仪器系列、色谱分析仪器系列、光谱分析仪器系列、实验室通用仪器系列和独家代理仪器系列。　　伯格森本次挂牌上市的财务审计为北京兴华会计师事务所(特殊普通合伙)，法律顾问为北京市中银(上海)律师事务所。

仪器信息网讯 2010年5月27日，戴安公司与北京工业技师学院共建“色谱二班”在北京工业技师学院举行了开班仪式。戴安公司市场部经理刘静女士、北京市工业技师学院环境保护与生物制药系李曙光主任等相关人士以及共建“色谱二班”的同学们参加了此次活动。开班仪式由北京市工业技师学院教务处处长魏宣燕女士主持。仪器信息网作为特邀媒体参加了此次活动。开班仪式现场北京市工业技师学院教务处处长魏宣燕女士主持开班仪式戴安公司市场部经理刘静女士　　戴安公司市场部经理刘静女士主要介绍了戴安(DIONEX)公司的离子色谱、液相色谱、样品前处理产品与色谱管理软件——变色龙软件的的发展方向与应用领域。刘静女士介绍到，“作为知名跨国公司，戴安公司是全球化学分析创新方案的引领者，其中，离子色谱、样品前处理仪器是在美国本土生产，液相色谱仪器是在德国生产制造的；同时，戴安中国已有十年的发展历史，其员工近160人，2009年，戴安中国位居戴安销售榜的第二名。”　　同时，刘静女士还对共建“色谱二班”的同学们表示：“2010年3月30日，‘2010戴安中国年’启动，戴安公司与北京工业技师学院共建‘色谱二班’也是其中的活动之一。色谱是监测环境安全、食品安全、药品安全的重要手段，共建色谱班是为了适应现代社会的需要，希望同学们能够成为熟练操作色谱仪器的高级技师。”北京市工业技师学院环境保护与生物制药系李曙光主任　　北京市工业技师学院环境保护与生物制药系李曙光主任说到：“戴安公司与北京工业技师学院共建色谱班，推行‘订单式’人才培养的合作模式在全国范围内尚属首例；共建‘色谱一班’的就业情况良好，就业单位包括核工业北京地质研究所、中国林科院、谱尼检测中心、宝洁等知名公司。目前共建‘色谱二班’有35名学生，希望在戴安公司的支持与我校相关领导老师的教导下，‘色谱二班’的同学们能够努力学习，掌握色谱操作技能，争做社会的有用人才。”合影留念　　开班仪式之后，刘静女士、李曙光主任等人参观了北京工业技师学院的分析实验室，并就共建“色谱二班”的培养、共建实验室的建设等问题进行了交流探讨。参观实验室

2010年版《中国药典》及增补是新中国成立60年来组织编制的第九版药典，注重创新与发展，全面提升了我国药物质量控制的要求与水准，是国家药品标准体系的核心。作为色谱行业的领导者，沃特世（Waters）公司长期以来得到广大制药行业用户的支持与厚爱，其提供的优质色谱柱及消耗品为药品质量控制提供了强有力的保障和技术支撑。为答谢广大用户对沃特世公司的支持与帮助、进一步增进用户之间的交流，特向广大沃特世色谱柱制药领域用户征集2010版中国药典高效液相色谱图，并将汇编成册回馈客户。 一、征集对象 所有沃特世色谱柱制药领域终端用户。 二、征集要求1、所用的Waters色谱柱规格型号、色谱条件完整准确；图谱真实、清晰，基线稳定，目标成分峰型良好，分离度、保留时间、理论塔板数符合要求。三、评审与奖励1、沃特世将邀请专家为本次征集活动进行评审，所有被录用图谱的作者均将获得沃特世特制U盘一个。2、活动将选出前十名对图谱征集贡献最大的单位或个人成为VIP客户，将给予更低的优惠折扣。 四、征集时间及联系方式 征集时间：2013年1月1日-2013年5月31日 Word文件请电邮至info_chemistry@waters.com（请将附件粘贴到邮件中） 联系人：Anne 联系电话：021-61562630 五、附件 该活动解释权归沃特世科技（上海）有限公司所有作者姓名：单位名称：部门/科室：联系电话：E-mail：邮编：通讯地址：样品名称：色谱条件： 色谱图（若提供数个图谱数据，可另附页面）