微生物接种仪

[size=3][font=宋体]和大家分享几个微生物检验操作[/font][font=Arial]Flash[/font][font=宋体]短片，请用暴风影音打开。[/font][/size][font=Arial][/font][font=宋体][size=3]之三接种[/size][/font]

微生物接种和菌种保藏注意事项下列各方法可根据实验室具体条件与需要选做。 (一) 液体石蜡保藏法 1.液体石蜡灭菌 在250mL三角烧瓶中装入100mL液体石蜡，塞上棉塞，并用牛皮纸包扎，12l℃湿热灭菌30min，然后于40℃温箱中放置l4d(或置于105～110℃烘箱中lh)，以除去石蜡中的水分，备用。 2.接种培养 同斜面传代保藏法。 3.加液体石蜡 用无菌滴管吸取液体石蜡以无菌操作加到已长好的菌种斜面上，加入量以高出斜面顶端约1cm为宜。 4.保藏 棉塞外包牛皮纸，将试管直立放置于4℃冰箱中保存。利用这种保藏方法，霉菌、放线菌、有芽孢细菌可保藏2年左右，酵母菌可保藏1～2年，一般无芽孢细菌也可保藏1年左右。 5.恢复培养 用接种环从液体石蜡下挑取少量菌种，在试管壁上轻靠几下，尽量使油滴净，再接种于新鲜培养基中培养。由于菌体表面粘有液体石蜡，生长较慢且有粘性，故一般须转接2次才能获得良好菌种。 (二) 冷冻干燥保藏法 1.准备安瓿管 选用内径5mm，长10.5cm的硬质玻璃试管，用10%HCl浸泡8～10h后用自来水冲洗多次，最后用去离子水洗1～2次，烘干，将印有菌名和接种日期的标签放人安瓿管内，有字的一面朝向管壁。管口加棉塞，121℃灭菌30min。 2.制备脱脂牛奶 将脱脂奶粉配成20%乳液，然后分装，121℃灭菌30min，并作无菌试验。 3.准备菌种 选用无污染的纯菌种，培养时间，一般细菌为24～48h，酵母菌为3d，放线菌与丝状真菌7～10d。 4.制备菌液及分装 吸取3mL无菌牛奶直接加入斜面菌种管中，用接种环轻轻搅动菌落，再用手摇动试管，制成均匀的细胞或孢子悬液。用无菌长滴管将菌液分装于安瓿管底部，每管装0.2mL。 5.预冻 将安瓿管外的棉花剪去并将棉塞向里推至离管口约15mm处(图24—2A)，再通过乳胶管把安瓶管连接于总管的侧管上，总管则通过厚壁橡皮管及三通短管与真空表及干燥瓶、真空泵相连接(图24—1)，并将所有安瓶管浸入装有干冰和95%乙醇的预冷槽中，(此时槽内温度可达-40～-50℃)，只需冷冻1h左右，即可使悬液冻结成固体。 6.真空干燥 完成预冻后，升高总管使安瓿管仅底部与冰面接触，(此处温度约-10℃)，以保持安韶管内的悬液仍呈固体状态。开启真空泵后，应在5～15min内使真空度达66.7Pa以下，使被冻结的悬液开始升华，当真空度达到26.7～13.3Pa时，冻结样品逐渐被干燥成白色片状，此时使安瓿管脱离冰浴，在室温下(25~30℃)继续干燥(管内温度不超过30C)，升温可加速样品中残余水分的蒸发。总干燥时间应根据安瓿管的数量，悬浮液装量及保持剂性质来定，一般3~4h即可。 7.封口样品 干燥后继续抽真空达1.33Pa时，在安瓿管棉塞的稍下部位用酒精喷灯火焰灼烧，拉成细颈并熔封(图24-2B、C)，然后置4℃冰箱内保藏。 8.恢复培养 用75%乙醇消毒安瓿管外壁后，在火焰上烧热安瓿管上部，然后将无菌水滴在烧热处，使管壁出现裂缝，放置片刻，让空气从裂缝中缓慢进入管内后，将裂口端敲断，这样可防止再用无菌的长颈滴管吸取菌液至合适培养基中，放置在最适温度下培养。 冷冻干燥保藏法综合利用了各种有利于菌种保藏的因素(低温、干燥和缺氧等)，是目前最有效的菌种保藏方法之一。保存时间可长达10年以上。

接种方法1：划线法。 [img]https://picasso-static.xiaohongshu.com/fe-platform/89214fad0c95300ab58a96037fddafa0415d387e.png[/img]适用范围：用于菌种分离纯化，获得单菌落。 [img]https://picasso-static.xiaohongshu.com/fe-platform/ae143d3423b5af03ae6b63dc197872ec6a59a6ff.png[/img]操作方法：接种环蘸取少量待分离样品，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来，如果划线合适的话，经培养后，可得到单菌落。 优点：可以观察菌落特征，对混合菌进行分离。缺点：不能进行菌落计数。 接种方法2：涂布法。 [img]https://picasso-static.xiaohongshu.com/fe-platform/89214fad0c95300ab58a96037fddafa0415d387e.png[/img]适用范围：用于菌落计数。 [img]https://picasso-static.xiaohongshu.com/fe-platform/ae143d3423b5af03ae6b63dc197872ec6a59a6ff.png[/img]操作方法：先将培养基熔化后趁热倒入无菌平板中，然后用无菌吸管吸取0.1mL菌液接种在已凝固的琼脂平板上。再用无菌涂布棒将菌液在平板上涂抹均匀，将涂布好的平板静置30min，使菌液渗透至培养基内，然后将平板倒转，过夜培养，至长出菌落后即可计数。 优点：可以计数，观察菌落特征。缺点：接种前需梯度稀释，吸收量较少，操作繁琐，平板不干燥效果不好，容易蔓延。 接种方法3：倾倒法。 [img]https://picasso-static.xiaohongshu.com/fe-platform/89214fad0c95300ab58a96037fddafa0415d387e.png[/img]适用范围：用于菌落计数。 [img]https://picasso-static.xiaohongshu.com/fe-platform/ae143d3423b5af03ae6b63dc197872ec6a59a6ff.png[/img]操作方法：吸取1mL菌液加入平板中，倒入已融化并冷却至45~50℃的细菌培养基，轻轻转动平板，使菌液与培养基混合均匀，冷疑后倒置，过夜培养，至长出菌落后即可计数。 优点：可以计数，较方便。缺点：接种前需梯度稀释，不能观察菌落特征。 接种方法4：斜面法。 [img]https://picasso-static.xiaohongshu.com/fe-platform/89214fad0c95300ab58a96037fddafa0415d387e.png[/img]适用范围：用于菌种保藏。 [img]https://picasso-static.xiaohongshu.com/fe-platform/ae143d3423b5af03ae6b63dc197872ec6a59a6ff.png[/img]操作方法：用接种环或接种针伸入菌种管内，挑取适量菌落。伸入斜面培养管内，先从斜面底部到顶端拖一条接种线，再自下而上蜿蜒划线，或直接自下而上地蜿蜒划线。接种完成之后，用火焰灭菌培养管口，并塞上棉塞，适温培养。 接种方法5：液体培养基法。 [img]https://picasso-static.xiaohongshu.com/fe-platform/89214fad0c95300ab58a96037fddafa0415d387e.png[/img]适用范围：用于菌液比浊实验。 [img]https://picasso-static.xiaohongshu.com/fe-platform/ae143d3423b5af03ae6b63dc197872ec6a59a6ff.png[/img]操作方法：用无菌接种环挑取菌落或标本，在试管内壁与液面交界处轻轻研磨，使细菌均匀得散落在液体培养基中进行适温培养。 接种方法6：螺旋法。 [img]https://picasso-static.xiaohongshu.com/fe-platform/89214fad0c95300ab58a96037fddafa0415d387e.png[/img]适用范围：用于菌落计数。 [img]https://picasso-static.xiaohongshu.com/fe-platform/ae143d3423b5af03ae6b63dc197872ec6a59a6ff.png[/img]操作方法：对数减少的样品容量以阿基米德螺旋线的形式被自动分注在旋转式培养基表面。培养基上每一点的容量可以被知晓和校准。菌液的浓度可以通过培养皿上一定区域的菌落数量除以同区域样品分注量来计算。 优点：菌液无需稀释，自动化接种，效率高，可节省实验耗材和时间。缺点：实验成本较高，适用于样品量较大的实验。

将乳糖胆盐发酵的产气产酸的管接种到伊红美蓝培养基上是用接种环挑取一环到其培养基上去培养，先要将接种环在酒精灯上灼烧灭菌，再插入待接种的样液，用划z字形的方式在培养基上划线，一般是划三个部分，划完了第一部分后，接种环为什么又要重新过一下酒精灯的火焰， 冷却后再接种划第二次，再过一下酒精灯的火焰，冷却，再划第三部分呢，不明白划每一小部分接种环为什么要再过一下火焰，冷却

问个问题，微生物培养，比如真菌，和金葡，增菌是在工作台进行，是不是接种BP平板需要在生物安全柜进行，那么划板之后还可以继续放到培养室吗，还是可以在生物安全柜边上当一个培养箱？真菌技数是不是要在安全柜进行？？

[font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]接种方法1：划线法。[/color][/size][/font] [img]https://picasso-static.xiaohongshu.com/fe-platform/89214fad0c95300ab58a96037fddafa0415d387e.png[/img][font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]适用范围：用于菌种分离纯化，获得单菌落。[/color][/size][/font] [img]https://picasso-static.xiaohongshu.com/fe-platform/ae143d3423b5af03ae6b63dc197872ec6a59a6ff.png[/img][font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]操作方法：接种环蘸取少量待分离样品，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来，如果划线合适的话，经培养后，可得到单菌落。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]优点：可以观察菌落特征，对混合菌进行分离。缺点：不能进行菌落计数。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]接种方法2：涂布法。[/color][/size][/font] [img]https://picasso-static.xiaohongshu.com/fe-platform/89214fad0c95300ab58a96037fddafa0415d387e.png[/img][font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]适用范围：用于菌落计数。[/color][/size][/font] [img]https://picasso-static.xiaohongshu.com/fe-platform/ae143d3423b5af03ae6b63dc197872ec6a59a6ff.png[/img][font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]操作方法：先将培养基熔化后趁热倒入无菌平板中，然后用无菌吸管吸取0.1mL菌液接种在已凝固的琼脂平板上。再用无菌涂布棒将菌液在平板上涂抹均匀，将涂布好的平板静置30min，使菌液渗透至培养基内，然后将平板倒转，过夜培养，至长出菌落后即可计数。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]优点：可以计数，观察菌落特征。缺点：接种前需梯度稀释，吸收量较少，操作繁琐，平板不干燥效果不好，容易蔓延。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]接种方法3：倾倒法。[/color][/size][/font] [img]https://picasso-static.xiaohongshu.com/fe-platform/89214fad0c95300ab58a96037fddafa0415d387e.png[/img][font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]适用范围：用于菌落计数。[/color][/size][/font] [img]https://picasso-static.xiaohongshu.com/fe-platform/ae143d3423b5af03ae6b63dc197872ec6a59a6ff.png[/img][font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]操作方法：吸取1mL菌液加入平板中，倒入已融化并冷却至45~50℃的细菌培养基，轻轻转动平板，使菌液与培养基混合均匀，冷疑后倒置，过夜培养，至长出菌落后即可计数。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]优点：可以计数，较方便。缺点：接种前需梯度稀释，不能观察菌落特征。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]接种方法4：斜面法。[/color][/size][/font] [img]https://picasso-static.xiaohongshu.com/fe-platform/89214fad0c95300ab58a96037fddafa0415d387e.png[/img][font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]适用范围：用于菌种保藏。[/color][/size][/font] [img]https://picasso-static.xiaohongshu.com/fe-platform/ae143d3423b5af03ae6b63dc197872ec6a59a6ff.png[/img][font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]操作方法：用接种环或接种针伸入菌种管内，挑取适量菌落。伸入斜面培养管内，先从斜面底部到顶端拖一条接种线，再自下而上蜿蜒划线，或直接自下而上地蜿蜒划线。接种完成之后，用火焰灭菌培养管口，并塞上棉塞，适温培养。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]接种方法5：液体培养基法。[/color][/size][/font] [img]https://picasso-static.xiaohongshu.com/fe-platform/89214fad0c95300ab58a96037fddafa0415d387e.png[/img][font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]适用范围：用于菌液比浊实验。[/color][/size][/font] [img]https://picasso-static.xiaohongshu.com/fe-platform/ae143d3423b5af03ae6b63dc197872ec6a59a6ff.png[/img][font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]操作方法：用无菌接种环挑取菌落或标本，在试管内壁与液面交界处轻轻研磨，使细菌均匀得散落在液体培养基中进行适温培养。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]接种方法6：螺旋法。[/color][/size][/font] [img]https://picasso-static.xiaohongshu.com/fe-platform/89214fad0c95300ab58a96037fddafa0415d387e.png[/img][font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]适用范围：用于菌落计数。[/color][/size][/font] [img]https://picasso-static.xiaohongshu.com/fe-platform/ae143d3423b5af03ae6b63dc197872ec6a59a6ff.png[/img][font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]操作方法：对数减少的样品容量以阿基米德螺旋线的形式被自动分注在旋转式培养基表面。培养基上每一点的容量可以被知晓和校准。菌液的浓度可以通过培养皿上一定区域的菌落数量除以同区域样品分注量来计算。[/color][/size][/font] [font=system-ui, -apple-system, &][size=16px][color=#333333]优点：菌液无需稀释，自动化接种，效率高，可节省实验耗材和时间。缺点：实验成本较高，适用于样品量较大的实验。[/color][/size][/font]

不知道我来对地方没有.我不是学生物的,但是最近老板交代了新任务.哪位高手能否指导一下什么是接种量?如何计算?还有生物降解速率的计算公式.

国家卫健委：全国新冠疫苗接种超11亿剂次，接种人数超过6.3亿，接种率已超40%；钟南山：科兴、国药等常用国产疫苗对德尔塔变异株有效；

无菌室（接种室）或接种箱　　要培养微生物，首先就需要接种，而接种必须在无菌条件下进行。这就需要建造无菌室或接种箱，为接种创造必要的条件。　　无菌室可以建在实验室内，作为实验室的一个小套间。面积为4～5平方米，高2.5米左右。无菌室外应连接一个小缓冲间，面积为2平方米左右。缓冲间和无菌室的门不要建在同一条直线上，以减少空气中杂菌进入无菌室。　　无菌室和缓冲间应作到清洁、密闭性好，室内最好有换气设备，以便在工作结束后更换室内空气。两个房间中应各安装l盏30瓦紫外线灯管和照明用的日光灯，无菌室的紫外线灯应悬吊在工作台的正上方，距台面1米，以发挥最大的消毒功能。无菌室内的工作台等用具用品，应经常保持清洁，避免杂菌污染。　　如果没有条件建造无菌室，可以用木制的接种箱代替。接种箱结构简单，容易制作，其正面安装玻璃，便于观察。箱前方开两个圆洞各接连1只套袖，操作时将两臂从套袖伸入箱内进行操作。箱内也应悬吊一盏紫外线杀菌灯和一盏日光灯。接种箱的尺寸规格见图9-1。恒温箱　　用于恒温条件下培养微生物。恒温箱的调温范围一般为20～45℃之间。培养酵母菌和霉菌时，一般可调至28℃，培养细菌和放线菌时，可根据菌种的生长温度进行调温，一般为30～37℃。电烘箱（干燥箱）　　用于玻璃器皿等物的烤干和灭菌。电烘箱的调温的范围一般为40～180℃，对玻璃器皿等物进行灭菌时，可将温度调至160℃，灭菌4小时，即可将器皿上的微生物全部杀死。灭菌完毕后，在电烘箱温度还没有降到50～70℃以前，不要打开电烘箱，以免器皿破裂。冰箱　　用于保藏菌种和需要低温保存的药品。

中国工程院陈薇院士团队和康希诺生物公司团队合作研发的雾化吸入接种5型腺病毒载体新冠疫苗(Ad5-nCoV)在著名国际学术期刊《柳叶刀传染病》发表1期临床研究数据显示，雾化吸入接种Ad5-nCoV具有良好的耐受性，未引起任何与疫苗相关的严重不良事件。这也是全球首个公开发表的新冠疫苗黏膜免疫临床试验结果。(央广网)

微生物培养的仪器问题对于微生物的研究，拥有大量的实验材料是十分必要的，这就需要进行微生物的培养。而且，对于某些微生物病原体的检测，也是需要进行微生物的培养。所以微生物培养用的培养基的制作也就成为了最基本的实验技术。 然而现今培养基已经可以工业化生产，技术也比较成熟，也就对培养基不是那么重视了。常识性的，培养基分为天然的（Defined Media）和合成的（Complex Media） 。天然培养基是提供接近于微生物生长的自然环境的营养物质，然而为此付出的代价是我们并不完全清楚其中的物质的组成或其含量，这种培养基可以用于实验用基本培养基和生产，但在作某些实验时得到的数据会不稳定。合成的培养基是用多种高纯化学试剂配制成的，各种成分和含量都是已知的。虽然制作成本高，也很烦琐，但成分精确，重复性强，用于对于营养、代谢、生理生化特性的研究等要求较高的工作。然而可以在这种微生物培养基上生长的微生物十分有限，原应是许多微生物的生长代谢我们并不完全了解，无法配出微生物满意的营养基质。现在的微生物培养技术已经相当成熟了，然而其中总有令人不满的地方。比如，无论何时空气中总有微生物，无论是制作培养基过程中还是将微生物接种到培养基上时总会和空气接触，很容易想到不久后长出的菌落到底是谁的，样品的？还是空气的？这些也许是无法避免的，但确实会带来很多麻烦。整个过程充满着失败的可能性，没有先进的仪器设备就无法降低这种可能性，对于研究这种时时处处在身边的小东西我们总显得有点力不从心。用铁丝接种环划线就很容易弄坏培养基，更别说分离出单菌落了。这需要经验和技术，对于一个研究微生物的人来说本不该去关心的经验和技术。前人也许是这样的，但我们未必也需要这样。对于无法用肉眼观察的东西，研究和培养是很困难的，尤其是没有先进的仪器设备的时候，那种痛苦是可想而知的。我们现在用的固体培养基大都是用琼脂。在琼脂发现以前，想要做细菌的纯培养是非常困难的，那时候只有液体培养基，根本无法进行纯培养。后来用凝胶培养基，但很多细菌都无法在基质上正常生长，直到琼脂被用来做固体培养基的基质，才解决了这个难题。应为琼脂是多聚糖的硫酸盐，其中主要是D-半乳糖，一般微生物很难分解利用它。这在微生物培养上是一次很大的革新。由于材料容易获得，而且本身的特性又很好，所以至今仍在使用。然而，微生物的培养依旧受到很大限制。我们对微生物的了解还不够多，许多微生物的培养只能用天然培养基，这在要求可重复的实验中会带来很大的麻烦；另外，条件的限制导致很多实验都无法达到无菌环境，实验结果有多少是可靠的，很难说明。微生物的培养只是一种手段，但却是一种很重要的手段。虽然只要能说明研究成果就可以了，但在实际操作中也确实有着非常繁琐，难以操作的地方存在，只要做过微生物培养的实验便可以知道，想要做出漂亮的结果是非常困难的，其中需要改进的地方有很多，比如有没有办法就算再不是无菌的环境下也能尽量减少空气中细菌的干扰，可不可以用更柔软的材料做接种环来划线，有没有其他的方法来给涂布棒灭菌。不然实验失败很难找出其中的原因。虽然实验失败的可能性很多，但我们至少应该减少它发生的可能性。微生物培养基是微生物实验必不可少的组成，它以及与它有关的组成构成了微生物培养的装置，这些仪器和操作中的不确定因素太多，这样做出的实验结果是没有说服力的。这些仪器和操作有待于改进。（因为我的基础太差，所以无法指出其中需要改进的地方到底应该改成怎样，但已经明显体会到了这些仪器以及操作的不足之处。）

无菌室（接种室）或接种箱要培养微生物，首先就需要接种，而接种必须在无菌条件下进行。这就需要建造无菌室或接种箱，为接种创造必要的条件。　　无菌室可以建在实验室内，作为实验室的一个小套间。面积为4～5平方米，高2.5米左右。无菌室外应连接一个小缓冲间，面积为2平方米左右。缓冲间和无菌室的门不要建在同一条直线上，以减少空气中杂菌进入无菌室。　　无菌室和缓冲间应作到清洁、密闭性好，室内最好有换气设备，以便在工作结束后更换室内空气。两个房间中应各安装l盏30瓦紫外线灯管和照明用的日光灯，无菌室的紫外线灯应悬吊在工作台的正上方，距台面1米，以发挥最大的消毒功能。无菌室内的工作台等用具用品，应经常保持清洁，避免杂菌污染。　　如果没有条件建造无菌室，可以用木制的接种箱代替。接种箱结构简单，容易制作，其正面安装玻璃，便于观察。箱前方开两个圆洞各接连1只套袖，操作时将两臂从套袖伸入箱内进行操作。箱内也应悬吊一盏紫外线杀菌灯和一盏日光灯。接种箱的尺寸规格见图9-1。恒温箱　　用于恒温条件下培养微生物。恒温箱的调温范围一般为20～45℃之间。培养酵母菌和霉菌时，一般可调至28℃，培养细菌和放线菌时，可根据菌种的生长温度进行调温，一般为30～37℃。电烘箱（干燥箱）　　用于玻璃器皿等物的烤干和灭菌。电烘箱的调温的范围一般为40～180℃，对玻璃器皿等物进行灭菌时，可将温度调至160℃，灭菌4小时，即可将器皿上的微生物全部杀死。灭菌完毕后，在电烘箱温度还没有降到50～70℃以前，不要打开电烘箱，以免器皿破裂。冰箱　　用于保藏菌种和需要低温保存的药品。高压蒸汽灭菌锅　　是微生物学实验中最重要的灭菌工具，用于一般培养基和玻璃器皿等物的灭菌。在15磅/英寸2压力下（121.6℃），灭菌15～30分钟，可以杀死包括芽孢在内的全部微生物。离心机　　用它使菌体和液体培养基分开。一般多使用普通小型“蘑菇”式离心机，最高转数为4000转/分，用电力启动。如果没有条件置备电动离心机，可用手摇离心器代替。接种针　　用于接种和分离微生物。根据不同用途做成针状、环状、钩状、刀状和铲状等。接种针由针头和针柄两部分组成。针头由白金或铬镍合金（细电炉丝）制成，长约7厘米。针柄可用玻璃棒或铝管制成，长约20厘米。将针头烧结在针柄上即成。

国家卫健委：全国累计接种新冠疫苗超1亿剂次，将推进全人群免费接种

国家卫健委发布新冠疫苗接种技术指南：①60岁以上人群，建议接种；②既往新冠感染者可在半年后接种1剂疫苗；③暂不推荐18岁以下人群接种新冠疫苗；④其他疫苗与新冠疫苗接种间隔应大于14天；⑤女性不必仅因接种疫苗而延迟怀孕计划；⑥哺乳期女性接种后建议继续母乳喂养。(人民日报)

名称： 标本的接种和移种法SOP关键词：接种和移种目的：使细菌能得到充分的生长和能分离出单个菌落获得纯培养而供分析鉴定之用适用范围：临床微生物室实验室标本的接种和移种法接种标本是细菌实验室的一项基本操作技能，目的是使细菌能得到充分的生长和能分离出单个菌落获得纯培养而供分析鉴定之用，所以作此项技术的操作应按以下方式进行：1.左手的操作要点：左手负责持平板、试管、烧瓶等物品，操作中，左手应尽量减少摆动，否则，不利于保持物品的无菌状态。1.1左手持物品时，最好固定在一个空间方位上，以避免因移动使空气中的细菌进入器皿，造成随机性污染。1.2所持的器皿其开口尽量避免向上，持平皿时，可以让平板的表面与地面尽量垂直，试管与器皿烧瓶也可倾斜。当从标本器皿或平板上挑取接种物或菌落后应立即塞上试管塞或扣上平皿，随即接种标本。2.右手的操作要点：握有接种工具的右手，将接种环或针沿伸到标本之前应作好接种环或针，镊子等工具的火焰消毒工作，待冷却后才沿伸到标本容器中挑取接种物，在挑取标本后，其接种工具应尽量避免接触试管壁及试管口等。随后将接种物在培养基上分离划线。3.移种或接种的基本步骤：3.1右手持接种工具，在火焰上烧灼3次灭菌。3.2左手持起标本容器或原代培养物的平皿或试管等。3.3用接种工具挑取适量标本或细菌，挑取标本时，应注意选择真实反映感染情况的部分，如粪便挑取粘液脓血部分。纯化细菌应从原代培养物上挑取单个菌落。从液体培养基中取菌，只需将接种环在培养液中蘸取一环即可。3.4接种时可根据要求采用不同的接种方法。3.5接种后，应在火焰上反复烧灼接种工具并作一定的编号记录，所用工具应放回原处。

从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。平板分离法普遍用于微生物的分离与纯化。其基本原理是选择适合于待分离微生物的生长条件，如营养成分、酸碱度、温度和氧等要求,或加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。 微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落，通常是由一个细胞繁殖而成的集合体。因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。获取单个菌落的方法可通过稀释涂布平板或平板划线等技术完成。值得指出的是，从微生物群体中经分离生长在平板上的单个菌落并不一定保证是纯培养。因此，纯培养的确定除观察其菌落特征外，还要结合显微镜检测个体形态特征后才能确定，有些微生物的纯培养要经过一系列分离与纯化过程和多种特征鉴定才能得到。 土壤是微生物生活的大本营，它所含微生物无论是数量还是种类都是极其丰富的。因此土壤是微生物多样性的重要场所，是发掘微生物资源的重要基地，可以从中分离、纯化得到许多有价值的菌株。本实验将采用不同的培养基从土壤中分离不同类型的微生物。 将微生物的培养物或含有微生物的样品移植到培养基上的操作技术称之为接种。接种是微生物实验及科学研究中的一项最基本的操作技术。无论微生物的分离、培养、纯化或鉴定以及有关微生物的形态观察及生理研究都必须进行接种。接种的关键是要严格的进行无菌操作，如操作不慎引起污染，则实验结果就不可靠，影响下一步工作的进行。

国家卫健委：自2020年12月15日新冠病毒疫苗重点人群接种工作实施以来，疫苗接种量已超1000万剂次。多地在接种过程中总结了许多有益做法，总体来看，全国新冠疫苗接种平稳有序。(央视新闻)

食品微生物实验室建设时无菌室的建设很关键，食品微生物检测对象主要分为细菌、真菌、致病菌，一般要求独立设置细菌检测、真菌检测、致病菌检测的无菌室，但受资金、场地等条件限制时，只够建设一间无菌室，细菌、真菌、致病菌接种操作均在同一间无菌室进行，是否可行？有哪些注意事项？

微生物在自然界中都是混杂地生活在一起，要想研究和利用某种微生物，须把它从混杂的微生物群中分离出来，以得到只含该种微生物的培养物。微生物学中，将在实验室条件下从一个细胞或一种细胞群繁殖得到的后代称为纯培养（pure culture）。分离纯培养的方法通常有以下几种：1．稀释法（1）平皿倾注法 （2）平板涂布法 预先制备平板。然后制备并吸取适度稀释的菌液，滴于各平板中央（每皿一滴，约0.05ml），用无菌刮刀将菌液均匀涂布于平板表面。2．平板划线法 划线的方式很多，其目的都是使平板上菌体逐渐变稀，最终形成单菌落。划线用平板也要预先制备。常用的是以下两种方式：（1）针尖稍弯的接种针火焰灭菌并冷却后，取样；在靠近平皿边缘处的平板上，将针尖的弯曲部位接触平板，接种棒与平板面成30°～40°角，划3条～4条平行线；转动平皿约50°角，灼烧接种针，冷却后，通过前一区划2条～3条平行线，并继续划2条～3条不通过前一区的平行线；再转动平皿……如此划4区～5区（图3—5A）。此种方法适用于分离纯化固体培养基上的培养物。（2）灼烧并冷却的接种环取样后，在平板上作连续划线（图3—5B）。此适用于液体样品。3．单细胞挑取法 把一滴菌悬液置于载玻片上，用安装在显微镜挑取器上的极细的毛细吸管，在显微镜下对准某一个单独的细胞吸取，再接种于培养基上培养。此法限于高度专业化的科研。4．利用选择培养基分离法（1）采用选择性高的培养基 例如，以纤维素为唯一碳源，分离分解纤维素的微生物；用无氮培养基分离自生固氮菌；在15ml培养基中加25％乳酸1滴～2滴以抑制细菌生长，把受细菌污染的霉菌分离出来。（2）培养基中加抑制剂 例如，结晶紫10mg/L可抑制G+细菌生长，利于分离G-细菌；KMnO4100mg/L抑制细菌和霉菌生长，利于分离放线菌；制霉菌素50mg/L或放线酮50mg/L利于分离纯化放线菌；分离纯化霉菌或放线菌时，加链霉素30mg/L、金霉素2mg/L可抑制细菌生长。5．其他 如，高温处理（80℃ 15min或100℃ 10min）分离芽孢杆菌；4％KOH处理痰液，分离结核杆菌等等。

水质 五日生化需氧量(BOD5)的测定 稀释与接种法HJ 505—2009 中对于接种液的要求：可购买接种微生物用的接种物质，接种液的配制和使用按说明书操作。请问：这种接种液在哪里可以买到？大家有用过的吗？

在自然条件下，微生物常常在各种生态系统中群居杂聚。为了研究某种微生物的特性，或者大量培养和利用某一种微生物，必须事先从有关的生态环境中分离出所需的菌株，获得纯培养。获得纯培养的方法，称为微生物的纯种分离法，这一过程称为微生物的分离和纯化。欲从含有多种微生物的样品中直接辨认出，并且取得某种所需微生物的个体，进行纯培养，那是困难的。由于微生物可以形成菌落，而每个单一菌落常常很可能是由一种个体繁殖而成。不同微生物的菌落是可以识别和加以鉴定的。因些将样品中不同微生物个体在特定的培养基上培养出不同的单一菌落，再从选定的某一所需菌落中取样，移植到新的培养基中去，就可以达到分离纯种的目的。这也就是常用纯种分离法的原理。在微生物的分离和纯培养过程中，必须使用无菌操作技术。所谓无菌操作，就是在分离、接种、移植等各个操作环节中，必须保证在操作过程中杜绝外界环境中的杂菌进入培养的容器或系统内，从而污染培养物。具体操作方法见本实验有关部分和教师作示范。获得微生物纯培养的常用方法有稀释平板分离法和平板划线分离法等。有条件的单位也可用显微操纵器单细胞分离法。针对不同的分离材料和条件，可以采用不同的分离方法。一、目的要求1. 初步掌握微生物的分离、培养和菌种保藏的基本方法。2. 练习微生物接种、移植和培养的基本技术，掌握无菌操作技术。二、实验材料样品：新鲜土壤。培养基：灭菌的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、淀粉琼脂培养基、马铃薯蔗糖培养基（10mL装）。无菌水：带有玻璃珠装有45mL无菌水三角瓶、装有9 mL无菌水的试管。其它：无菌培养皿、无菌吸管、无菌三角玻棒、台天平、记号笔、接种环、酒精灯、火柴、标签纸、胶水、水泡锅。试剂：5000U/mL链霉素液0.5％重铅酸钾液。

项目 检查情况 整改情况 接种后的平板标识不统一，培养后出结果时易混淆样品、检测项目。微生物大肠菌群检测时，未对培养基、稀释液进行空白对照；盐水未做菌落总数的空白对照实验。超净台空气净度放置时间为15分钟微生物接种培养不做平行样。稀释样品的混匀方法不正确。实验时，吸管尖破损的继续使用，吸样管口破损，使移取液体不准确试管手持方式不正确，看不到液面；拿两只试管时，管口互相接触。吸管中吸入样品后在酒精灯火焰上停留，会将样品中微生物杀死 超净台空气净度从操作开始至操作结束。大肠菌群实验也应同时做大肠培养基、盐水的空白实验。 从操作开始到倾注平板的时间较长（接种后不能及时加入培养基）。倾注平板时琼脂温度低，倒至底部已凝结。 从操作开始应20分钟倾注一次平板。 原料奶细菌总数稀释度选择不当，两个稀释度菌落数生长均较多大肠菌群检测第一步和第二步后出具判定结果，不进行第三步的验证实验。

EP中微生物限度检查：控制菌大肠埃希菌接种在麦康凯肉汤中培养于42-44℃下培养，为什么选这个温度？有什么讲究？不选一般细菌最适温度。

请问一下做微生物时所用的接种环是什么样子，是自制还是购的。再就是经初发酵后用接种环将培养物转接到EC培养液中，这里说的培养物是不是初发酵后，试管里面产酸产气的“倒管（小玻璃管）”？ 请教啦.....

环境检测行业微生物实验室，基本上项目就是细菌总数、粪大肠菌群和总大肠菌群，请教一下有经验的大侠，按照标准要求微生物实验室除了有单独接种室、培养室、准备操作间之外，还有其他单独的空间吗，每一个空间有什么具体要求吗？

(一)常用消毒剂名称浓度使用范围注意问题名称浓度使用范围注意问题升汞0.05%～0.1%植物组织和虫体外部消毒腐蚀金属器皿 硫柳汞0.01%～0.1%生物制品防腐，皮肤消毒多用于抑菌甲醛(福尔马林)10mL/ m3接种室消毒用于熏蒸石炭酸（苯酚）3%～5%接种室消毒（喷雾）器皿消毒杀菌力强来苏水(煤酚皂液)3%～5%接种室消毒，擦洗桌面及器械杀菌力强漂白粉2%～5%皮肤消毒腐蚀金属伤皮肤新洁尔灭0.25%皮肤及器皿消毒 对芽孢无效乙醇70%～75%皮肤消毒对芽孢无效高锰酸钾0.1%皮肤及器皿消毒应随用随配硫磺15g/m2熏蒸，空气消毒*腐蚀金属生石灰1%～3%消毒地面及排泄物腐蚀必强 *10mL/m3加热熏蒸，或迅速加入甲醛10份高锰酸钾中，使其产生黄色浓烟，立即密闭房间，熏蒸6—24h.

[b]6月份全省重点保障第2剂次疫苗接种我省四成成年人已接种首剂新冠疫苗 预计6月底将恢复第1剂次的全面接种[/b]华声在线6月3日讯 按照新冠疫苗接种工作的部署和安排，湖南省自5月起开始大规模人群接种，用时仅一个月就提前完成第一阶段目标计划。继5月15日、5月26日全省新冠疫苗总接种剂次先后突破1000万、2000万大关后， 6月2日全省总接种剂次已超过2700万剂，提前一周完成既定的目标计划，即为40%的18岁以上人群接种第1剂次疫苗。进入6月份，全省接种工作的重心是为已接种第1剂次的人群及时完成第2剂次疫苗接种，以便按期完成免疫程序，形成有效的免疫屏障。[b]为什么要为人群及时接种第2剂次疫苗？6月份将迎来接种第2剂次的高峰[/b]注射第1剂次疫苗后，人体产生稳定的免疫机制需要及时接种后续剂次疫苗。截至目前，全省尚有2300多万人未接种第2剂次疫苗，这部分人群占我省已接种总人群的比例达到了86%。按照全程免疫的要求，当中多数人已达到接种第2剂次的时间，少部分人即将超过最大间隔时限要求，若不能及时给他们接种第2剂次疫苗，不仅不利于受种者自身产生免疫力，更会严重影响全省乃至全国疫情防控大局。6月份我省将迎来接种第2剂次疫苗的高峰。我省在5月份集中大量接种第1剂次疫苗后，已接种第1剂次的人群将于6月份陆续达到接种第2剂次要求。为有序有力继续推进全省新冠疫苗接种工作，短时间内迅速提高接种率，快速建立有效的免疫屏障，同时考虑到当前常态化疫情防控的复杂形势，我省计划用不到一个月的时间完成对现有已接种第1剂次疫苗人群的第2剂次疫苗接种。[b]如何知道自己达到了接种第2剂次疫苗的要求？完成全程接种程序，健康码将“披金甲”[/b]根据新冠疫苗接种技术指南（第一版）要求，目前，我省使用的新冠疫苗第2剂次的接种时限要求分别是：1灭活疫苗（Vero细胞，主要由北京生物、武汉生物、北京科兴3个厂家生产）：第2剂接种间隔建议≥3周（21天）、在8周（56天）内尽早完成。2重组新冠病毒疫苗（CHO细胞，主要由安徽智飞生产）：第2剂接种间隔建议≥4周（28天）、在8周（56天）内尽早完成。3腺病毒载体疫苗（主要由康希诺生产）：仅需接种1剂，无需接种第2剂。建议达到上述时限要求的群众主动和接种点预约，及早接种第2剂疫苗，确保疫苗接种的安全有效。目前，我省已将每个人的接种记录上传并关联到了 “湖南省居民健康卡”中，个人可点开自己的电子健康卡查询自己的接种信息，包括接种时间、针次和疫苗厂家等内容。完成全程免疫接种程序的，健康码将显示金色接种标识和外框。如若接种信息未及时在健康码显示，可关注“健康320”公众号，在“健康码金甲问题反馈”中按提示反馈信息。[b]何时再全面恢复第1剂次疫苗的接种？预计6月底全省将恢复[/b]何时再全面恢复第1剂次疫苗的接种？在此期间，因出国和疫情防控等特殊情况需接种第1剂次的，仍可接种第1剂次疫苗。预计6月底全省将恢复第1剂次疫苗的全面接种工作。请有接种需求的群众按照各地联防联控指挥部的统一安排部署，尽量分时错峰接种。

国家卫健委：截止17日，我国已接种新冠疫苗18980.9万剂次，接近1.9亿，接种人数已经位居全球第二

据香港电台网站3月3日报道，香港一名63岁男子2月26日接种科兴新冠疫苗后，28日出现急性呼吸困难，自行到伊利沙伯医院求医，同日死亡。院方表示，死者有糖尿病及慢性支气管炎等长期疾病，抵达医院时清醒但有呼吸困难，认为表征上与接种疫苗无关。香港卫生署表示，当局非常关注事件，并多次重申事件与接种疫苗的因果关系仍未确立。香港电台网站报道称，北京科兴中维生物技术公司通过发言人回应说，公司已获知事件，并已与香港有关部门保持联系。科兴对死者表示深切哀悼，公司会积极配合香港政府的调查，期待早日获得调查结果。香港政府专家顾问、中大呼吸系统科讲座教授许树昌在香港电台一档节目中表示，死者有高血压、高血脂、糖尿病及长期吸烟等4个导致心血管病的高危因素，由患者入院至心跳减慢、最后离世，只相隔几个小时，认为短时间内死亡很大机会是由于心血管疾病所致。香港卫生署卫生防护中心总监林文健3日凌晨在记者会上表示，新冠疫苗临床事件评估专家委员会3日将召开会议对此案进行审视，并会适时发布报告。林文健强调，经香港政府疫苗顾问专家委员会审视，在港接种的疫苗安全情况理想，使用相关疫苗作为预防新冠病毒的效益大于风险。他表示，特区政府不会暂停疫苗接种的程序。

环境检测行业哈。 最近仔细在看HJ505-2009这个标准 对其中几点不解之处向大神们请教：1.微生物含量如何确定？2.有机质含量怎么确定？3.如何判断样品中是否含有难降解或剧毒物质？4.如何判断样品中是否含有硝化细菌？5.对于非稀释接种法，空白试样为什么是用稀释水而不是实验用水？（稀释水是为了给微生物提供一个适于生存的环境吗？那这样跟试样测定条件就不一致，非稀释接种法只加了接种液，没有稀释水）6. 7.2.1.1节中最后一段内容：“若试样中含有微生物毒性物质时，应配制几个不同稀释倍数的试样，选择与稀释倍数无关的结果，并取其平均值。”为什么在这里又要判断是否有毒性物质呢？曲线呈线性关系，则不含抑制物，是不是就是没有毒性物质？选择与稀释倍数无关的结果是为何呢？因为我之前没做过这个，对于以上问题，还请大家分享一下宝贵经验，谢谢！