BD FACSAria&trade Fusion 流式细胞分选仪突出性能与生物安全更好结合的分选解决方案集安全、高性能、分选于一体基于2003年首次推出的BD FACSAria智能分选技术，新型BD FACSAria Fusion&trade 集专利技术于大成，具有多色分析性能，操作简便。现在，这一分选核心技术结合高端生物安全专业技术，成就了BD FACSAria Fusion，为实验室研究者提供了细胞分选和生物安全相结合的解决方案。流式细胞分选中的生物安全问题日益受到中心实验室的重视，他们关注生物样本对操作者可能造成的暴露危害。为了满足这一需求，BD与全球领先的生物安全设备供应商Baker公司强强联合，为BD FACSAria Fusion量身定制了生物安全柜，为生物安全问题提供了专业的解决方案。BD FACSAria Fusion所配的生物安全柜严格按照Class II Type A2生物安全等级设计，符合美国国家卫生基金会International Standard 49、欧洲European Standard 12469和澳大利亚Australian Standard AS 2252.2–2009等一 系列国际生物安全标准。同时，BD FACSAria Fusion细胞分选仪还提供不带生物安全柜的配置，并可以在以后需要的时候很方便的现场升级安装。为了进一步提高生物安全防护，BD FACSAria Fusion采用了诸多双重保险设计，将操作者可能受到的暴露风险减少至最低。例如，在生物安全柜保护操作者免受分选产生的气溶胶危害的同时，一个内置的气溶胶控制系统AMS）可以帮助排除气溶胶，而且AMS与生物安全柜独立工作，更加提高了生物安全性。为了达到理想的灵敏度和分辨率， BD FACSAria Fustion设计了精确集成的液流系统和光学系统，以达到最佳的信号检测。在多色实验中，优化的光纤引导的激光使每个荧光通道的检测灵敏度和分辨率得到进一步提升。专利的流动室技术和光胶耦合石英杯确保了高性能、高安全性和高简便性。BD FACSAria Fusion使原本复杂的细胞分选实验变得很简单，从而服务于更多的研究者和应用领域。高灵敏度的多色分析和分选应用广受赞誉的可靠性和易用性让该系统独树一从稳定性流动室技术到稳定性光路设计，再到软件操控的仪器设置和操作， BD FACSAria Fusion实现了简单高效的细胞分析和分选。光胶耦合的石英杯流动室BD FACSAria Fusion的核心是专利的新一代方形石英杯流动室，它与激光器、光胶耦合的荧光收集光路一起构成了一套真正意义的稳定性光路系统。BD专利的石英杯设计确保激光准确聚焦到样本流上，不仅能使样本能获得理想的激发效率，同时还能使发射光信号得到最大程度的收集。稳定性光路不但大大缩短了开机启动时间，也提高了实验间以及不同操作者间的可重复性，并且实现了每日质控的自动化。更重要的是，它还提高了荧光收集效率并优化了分辨率，因此特别适合多色应用的需求，甚至在高速分选时同样具有高灵敏度和分辨率。此外，BD FACSAria Fusion的新一代流动室设计进一步提高了侧群细胞 (SP) 应用和细胞DNA周期分析实验的分辨率。高性能分析，高性能分选BD FACSAria Fusion卓越的分析性能和荧光检测灵敏度比肩最新技术水平的专业分析型仪器。这是因为其运用了与BD FACSCanto&trade 、BD FACSVerse&trade 以及BD LSRFortessa&trade 相同的光胶耦合石英杯和稳定性的光路结构。这种流动池和喷嘴的设计可以达到高数值孔径的光信号收集。细胞或颗粒以低速通过分析区域以便收集更多的光信号，之后包裹着细胞或颗粒的液流在通过喷嘴后加速，从而确保高性能细胞分选的实现。在传统的空气激发系统中，对颗粒进行分析和分选时的速度是相同的，与之相比，具备了精密配合的光学和液流系统的BD FACS Fusion表现出更优越的光学检测灵敏度。更好的生物安全保障稳定性光路以及软件操控的设计减少了操作者与仪器之间直接接触的频率，这也为操作者提供了更好的生物安全保障。液流室和喷嘴高灵敏检测弱表达细胞群BD FACSAria Fusion 对于光学系统的不断改进，提高荧光检测灵敏度的水平。专门为优化信噪比而选择的全新激光器进一步提高了对弱表达细胞群的检测分辨率，确保目标细胞分选时圈门更加便捷、准确。新激光器的优异性能使得弱表达细胞群发出更亮的荧光，从而便于被分析及后续的圈门分选。适应不同大小颗粒的喷嘴不同尺寸的喷嘴使用户可以分选不同大小的样本颗 粒。喷嘴有四种尺寸可选：70 m、85 m、100 m和130 m。喷嘴位于细胞被激光激发的下方，更换更为方便，安装位置精确，不会发生偏差。这意味着在每次插入喷嘴后，可以得到可重复的液滴形态，不需要重新调节仪器设置，使仪器具有可重复的设置和校正状态。软件中包括了不同喷嘴的特异分选设置，使压力及分选设置与使用的喷嘴相匹配。BD Accudrop技术简化了液滴延迟时间的确定专利的BD FACS&trade Accudrop技术帮助使用者确定正确的液滴延迟时间，软件自动化操作简化了液滴延迟的确定。一旦液滴延迟时间被确定，系统会自动调节并维持恒定的断点，此技术称为Sweet Spot。如果遇到管路堵塞，系统将自动停止分选并保护收集管。液流经过流动室后通过喷嘴加速，形成分选液滴。因为颗粒的检测在喷嘴上方，所以插入或移走喷嘴时都无需调整光路或液流。系统工程设计改进的内置流体系统使操作更容易，更安全方便的鞘液桶和废液桶鞘液桶，清洗液桶以及废液桶都放在系统底部的一个抽屉里，易于操作。抽屉中包括10L不锈钢鞘液桶和10L容积的废液桶，鞘液桶可进行高压。另外，抽屉中还有 3个5L的辅助清洁液桶，用于自动无菌分选液路的处理和仪器关机。BD FACSAria Fusion可以连接实验室的空气过滤和干燥系统，也可以选配压缩机。样本进样仓在样本采集期间，进样仓被加压，使样本进入石英杯检测流动室。样本进样仓的温度控制和混匀功能都可以用 BD FACSDiva&trade 软件进行调节，从而保证长时间分选时细胞的活性，并持续细胞的悬浮混匀状态。该系统提供从1.0 mL的微量管至15 mL的离心管等多种上样管固定架。进样端可安装35 m和50 m的样本滤器，可以在分析和分选过程中避免管路堵塞。液流系统、电子系统。光学系统与液流车完美融合，使维护和维修更加便捷。从分选装置到收集仓从样本进样仓直至分选收集管的封闭管道能够分离气溶胶，并且通过液体抽吸装置抽空分选装置中的气溶胶。分选装置设计成为固定位置的电偏转板，能够对细胞进行更高效和重复更好的定向偏转，并准确进入特定的分选收集装置。分选仓内安装有一个抽吸装置抽屉，能够在在分选开始前遮蔽分选收集管，并在Sweet Spot软件监测到堵塞发生时自动关闭，以保护样品收集管和其中的样品。分选收集仓的独特结构设计使得放入样品收集管基座变得十分方便。收集管基座的设计能够保证收集管的无菌状态。你还可以选配一个温度控制装置，用以控制样品收集管或玻片或多孔板的温度。方便的无菌设置和清洗程序液流系统的创新，如易于插拔的喷嘴，自动化的分选设置，易于更换的滤膜等，使仪器设置更为方便和快捷。一体化阀门组合形成了全新的液流管路。软件向导使无菌分选设置更简便和高效。此外，在样本运行后，样本进样针内外都会自动进行冲洗，避免残留消并除样本间的交叉污染。特出的灵敏度和分辨率更高效率的多色检测BD首创的在光学系统方面的革新设计能有效的最大化检测信号，并在多色检测中很大的提高每个通道的灵敏度和分辨率。增强的灵敏度和分辨率意味着即便信号很弱的细胞群也可以轻易地被识别和分选。光学系统方便优化多色检测和抗体组合的设计，以求达到最佳结果。用户可以选择照射样本细胞的激发光波 长，以及引导散射光和荧光信号通过特定的滤光片到达检测器的收集光路。激发光和收集光路上的创新设计在减小激发光损失的同时，也显著改善了信号收集效率，从而使每个样本都能获取得到良好的信号。激发光路激发光路的组成包括：多根引导光纤、固定波长的激 光、光束整形装置和消色差聚焦透镜。各激光聚焦形成的光斑在空间上相互分离，并各自聚焦成形 (9 x 65 微米)。光斑聚焦越集中，荧光标记的微粒通过激发点时产生的信号就越强。光胶耦合的荧光透镜能很大限度的将发射光从检测点传递给荧光收集光路。由于光路和样本流均固定，仪器光路的正交在不同实验、不同日期间一直保持不变。手动调校光路会因为每次调校状态不同而导致实验结果有变化。而固定光路设计避免了这种问题，保证仪器光路稳定，对实验结果不会有影响。收集光路光纤将发射光从光胶耦合石英杯传递给检测器接收装置。基于八角形和三角形专利设计的收集光路，能最大限度的检测来自每个激光束照射点的信号，其原理是让波长最长的光 (光子能力最低)优先透射进入第一个光电倍增管 (PMT)，并通过一系列的长通二色分光镜将较短波长的光反射到下一个PMT检测器。八角形信号收集系统这一设计是根据光反射比光透射更有效率这一原理。荧光信号以反射的形式传播到每一个PMT检测器，并在到达检测器之前只通过2个滤片。因此可以在光信号损失较小的情况下完成荧光检测。装置在每个PMT检测器之前的带通滤镜允许波长范围内的荧光被收集。更重要的是，这种排列简化了光学阵列中滤镜和分光镜，滤光片更易更换，而且不需要任何校准就可达到良好的信号强度。精密的光学设计BD FACSAria Fusion光学系统方面的诸多革新设计，例如专利的光胶耦合石英杯、八角形检测器和9 x 65µ m 大小的光斑，这些革新设计协同工作，以最大限度提高检测灵敏度和分辨率。通过精密的设计产生出这样一套更高效的光学系统，使得其能够使用较低功率激光，无需通过单纯提高激光器的功率来提升实验灵敏度和分 辨率。而低功率激光又同时可以降低仪器运作的总体费用。小颗粒的分辨率0.3-µ m，0.4-µ m，0.5-µ m，1.0-µ m大小的微球在同一管中用 BD FACSAria Fusion 检测，四个群体都可以和背景信号清楚地区分。灵活配置多色检测方便日后升级，紧随前沿技术满足当前及未来需求对于许多用户而言，一台高端流式细胞分选仪的性能高低取决于其灵活性，而灵活性主要表现在能够同时检测的参数数量。BD FACSAria Fusion 可以支持六根激光器和五个独立光斑。选择多达六根不同波长的激光器，并具有同时进行多达20个参数，18色的检测能力，灵活性表现特出。可升级并向下兼容用户可以根据当前和未来的需求以及预算情况来配置仪器。以后还可以通过升级服务来增加 BD FACSAria Fusion 的激光器数量，以提升其能力。更低的使用成本与空气中激发得分选方式相比，BD FACSAria Fusion独特高效的光学系统的设计使得使用成本降低。BD FACSAria Fusion 通过光纤来传导固体激光器所发出的激光，从而实现了灵敏度和分辨率的最大化。CFP转染的Hela细胞BD FACSAria Fusion 上可以配备445nm激 光，它比405nm激光能更有效地激发CFP 蛋白。CFP转染的Hela细胞可以用445nm和405nm的激光激发，445nm激发得到的区分度明显要高很多。BD FACSAria III 上收集的实验数据小鼠骨髓SP细胞小鼠骨髓来源的细胞用 Hoechst 33342, c-Kit, Sca-1, 和lineage标记，在装有375nm激光器的 BD FACSAria III上采集数据。BD FACSAria Fusion 上同样可以配备这根激光器。SP群体 (红色) 全是c-Kit+ Sca-1++。使用的抗体是c-Kit PE, Sca-1 PE-Cy&trade 7, LineageFITC, CD 34 APC, CD45 APC-Cy7, PI，Hoechst Blue, 和 Hoechst Red。BD FACSAria III 上收集的实验数据与其他BD流式细胞分析仪和分选仪兼容BD FACSDiva 软件 – 从分析到分选BD FACSAria Fusion 使用 BD FACSDiva 软件，对仪器设置、数据获取和数据分析都能够提供快捷有效的控制。软件能自动完成仪器的主要设置过程，很大限度降低人与仪器的直接接触所可能带来的生物安全性的问题。BD FACSDiva 软件被广泛地应用于一系列BD的流式细胞分析和分选仪，包括 BD FACSCanto 和 BD LSRFortessa系统等。研究者的实验设计更为灵活方便，可以将优化好的实验条件和设置快速的转移到另一平台上。例如，分析实验的条件和设置可以轻松应用于分选实验。BD FACSDiva软件具有仪器设置和追踪 (CS&T) 功能，能够帮助仪器完成基线设置，优化仪器的灵敏度和荧光分辨率。因此，BD FACSDiva能大幅减少由于操作失误，确保实验结果的一致稳定。它使得用户可以在仪器连续稳定的前提下快速完成特定实验的条件设置。仪器状态追踪功能会监测一系列仪器设置的数值，并给出状态报告，大大简化了日常质控的流程。Levey-Jennings图谱可以帮助用户了解他们的仪器状态，确定是否需要进一步的维护处理。数据获取和分析BD FACSDiva软件使得科研工作者能够使用自动的数据获取流程，去完成多个数据的预览和保存。软件还能够管理数据获取模板、实验界面设计、以及补偿程序，从而方便数据获取。为了高效便捷的分析，软件提供了自动设门方式、用户可选的图形结构和批处理功能。存储的数据可以通过图形、门、群体层级以及统计结果，在同一张BD FACSDiva工作表上实现完整分析。通用工作表被保存后，可以用来分析同一实验中的多个样本管数据，从而大大节省时间。有助于提高效率的方式还有：用户自定义的批处理分析、自动化的设门调整、在分析不同数据间暂停、输出统计结果、在进到下一个数据文件前打印结果等等。分选前的快速简单准备打开细胞分选仪开启液流自动化完成仪器设置、质控以及液滴延迟优化化样品条件分选样本索引分选索引分选使得分选细胞到一个多维收集装置如96孔板之后，每一个位置上的细胞表型是可以再回溯的。每个细胞落在收集装置上的位置信息是以X/Y两维的数据形式被保存下来的。因此在分选后，收集装置上的特定位置的细胞可以追踪其流式表型信息。数字化电子系统光胶耦合的石英杯流动室和电子处理系统协同作用可以使每个检测颗粒的信息最大化。电子采样速率和颗粒在流动室中的流动速度精确匹配。BD FACSAria Fusion 每秒70,000个颗粒的上样速度下，采集到的数据量和上样速度线性相关，并且结果准确。BD与Baker共同设计的安全柜符合生物安全标准且节省空间流式细胞术生物安全正在成为越来越多的重点实验室的要求，他们非常关注操作者偶然暴露在生物样本中的潜在危险。BD公司于Baker公司合力设计并建立了一个强大且具有前瞻性的生物安全方案。在购买BD FACSAria Fusion时，您可以选择搭配或者不搭配生物安全柜 (BSC)。因为BD FACSAria Fusion与BSC的衔接严丝合缝，如果将来需要安装BSC，现场升级安装将在一天之内完成。对人员、样本及环境的保护BSC用来保护操作者免受样本中生物试剂的污染威胁。在与传染性样本相关的实验室中，BSC是高效、常用的一级屏障设备中的一员。BSC保护员工和环境免受有害试剂的伤害，保护样品 (细胞) 不被污染。生物安全标准认证Baker公司认证为BD FACSAria Fusion定制的生物安全柜符合二级A2型生物安全柜标准和美国卫生设备基金会 (NSF) 49号国际标准。该生物安全柜同时符合欧洲 12469号标准和澳大利亚AS 2252.2–2009号标准。所有的微生物实验都是在集成系统上进行，以确保与使用状态相同。气流控制BSC通过控制气流的方向、体积和流速来引导潜在有害颗粒远离操作者。空气经过过滤后循环流动于工作站表层，安全柜前方的独立气流在操作者与工作站之间产生一道保护屏障。高效微粒过滤器 (HEPA) 能够去除空气中的微生物和空气微粒 (气溶胶)。HEPA过滤器位于工作区域的空气入口和出口处。在安全柜消耗和补充空气的位置也安装了HEPA过滤器。安全柜中的HEPA过滤器可排除至少 99.97%的热生成DOP烟尘颗粒或者直径0.3um以上的颗粒。可选无生物安全柜配置BD FACSAria Fusion可不选配BSC系统，在日后可快速现场升级安装。即使BD FACSAria Fusion没有配备BSC，密闭的上样至分选的整个通路、液流吸引器、选配的AMS也能降低操作员暴露的危险。BD FACSAria Fusion的气溶胶处理系统BD FACSAria Fusion具有一套多重保护控制的气溶胶处理系统。BD FACSAria Fusion整合的二级A2安全柜确保气溶胶不外泄，并立即通过HEPA被吸入BSC的过滤器中。为了更好地处理气溶胶，独立的气溶胶处理系统 (AMS) 迅速将分选仓中的气溶胶吸出，并将所有微粒捕获于专用的AMS HEPA过滤器中。另外，气溶胶处理系统也连接至分选仓区域。从上样仓至分选收集管的整个密闭通路都可以分离、捕获气溶胶。气溶胶颗粒将会被液流吸引器吸出，或者被 AMS高效抽走。多重保护正在成为生物安全防护的重要一环。有了BD FACSAria Fusion，从上样到分选的整个密闭通路、液流吸引器、二级A2生物安全柜以及气溶胶控制系统，使气溶胶控制系统高度盈余。由于这些系统是相互独立的，使得我们可以逐个测试，保证有效的工作状态和保证具有备用保护功能。多色组合在BD FACSAria Fusion 流式细胞仪上进行10色CD4、CD8记忆和效应细胞与调节性T细胞检测方案。T亚群的检测分析可以轻松实现。
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