收型长酶标仪

在用酶联免疫法测定抗原或抗体时，不论是定量试验还是定性试验都要求使用酶标仪进行测定。一般的酶标仪在测定中均有单波长和双波长的模式，并且采用的都是垂直光路。但在日常工作中有时会不太重视单波长和双波长的选择，对使用单、双波长给测定结果带来的较大差异也不很了解，并且实际工作中也出现了使用单波长检测导致抗HCV部分弱阳性的漏检。因此，本人就酶标仪在选择单、双波长使用方面谈谈个人的体会，供同道参考。一 材料和方法1.材料 由上海科华公司提供的乙肝表面抗原测定试剂盒；eppendorf 20-20ul的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url][/color][/url]。2.仪器 上海科华公司的ST-360酶标仪和BIO-RAD 550酶标仪。3.方法 底物液配制：底物液A、B各5ml混合，加入微量酶标记物，再加入5ml终止液，呈微黄色，混匀待用；利用上海科华公司提供的乙肝表面抗原试剂盒的酶标板，用94孔中准确加入150ul配制好的上述底物液，另2孔中加入150ul已终止的空白底物液作空白。在BIO-RAD 550酶标仪上分别进行450nm单波长和450nm及655nm（无630nm）的双波长检测，在ST-360上分别进行450nm单波长和450nm及630nm的双波长检测吸光度各两次。二　结果　　1.分别对所得结果进行统计，发现单、双波长测定结果有较大的差异，双波长测定结果的CV值远小于单波长测定，结果见表1。2.对ST-360两次重复测定结果进行分析，结果基本一致，见表2。表1酶标板吸光度在两台酶标仪上的测定统计结果酶标仪 BIO-RAD550 ST-360 波长 450nm 450nm+655nm 450nm 450nm+630nm 最小值 0.125 0.126 0.130 0.131 最大值 0.154 0.139 0.153 0.141 均值 0.1356 0.1329 0.1399 0.1361 标准差 0.00671 0.00267 0.00467 0.00247 CV（%） 4.94 2.01 3.34 1.82 最大值/最小值 1.232 1.103 1.177 1.076 表2 ST-360酶标仪两次吸光度测定统计结果波长 450mnm 450nm+630nm 1 2 1 2 最小值 0.130 0.129 0.131 0.131 最大值 0.153 0.152 0.141 0.141 均值 0.1399 0.1391 0.1361 0.13711 标准差 0.00467 0.00495 0.00247 0.00229 CV（%） 3.34 3.56 1.82 1.67 三　讨论　　1.酶标仪与分光光度计、自动生化分析仪等的吸光度测定有所不同，一般分光光度计是水平光路，而酶标仪则是垂直光路，但测定原理相同，都是使用朗伯-比耳定律，测定的都是样本的吸光度。垂直光的特点是标本吸光度受液体浓缩或稀释的影响小，不足之处是受被测样本液面是否水平、酶标板透光性、孔底是否平整等的影响较大。2.酶标仪在用单波长测定吸光度时，除受到测定干扰（样本的浊度、干扰色等）和电路干扰（包括噪音、漂移、电压等）等因素外，受液体表面张力的影响也很大。在检测过程中，由于液体表面张力的作用，液体的表面不是一个平面，而是形成一个凹面，从侧面看似凹透镜，这样不可避免会影响光路的正常通过。由于凹液面的影响，光线在通过液体时，除正常被液体吸收一部分外，尚有部分被折射和反射（如光线通过凹透镜那样），影响吸光度的检测。而酶标仪使用的又是通过光导纤维传播的点光源，如果每次能在同一部位检测，吸光度的重复性将得到保证，但由于机械运动等造成的误差，不可能保证每孔都在相同部位被检测，因此造成了孔与孔之间有一定的差异。结果见表1，整块板单波长检测的CV在3%以上，吸光度最高值和最低值的相对误差达17%以上。3.在双波长测定中，减少了测定干扰和电路干扰，因此测定结果明显好转，结果见表1，整块板样本的CV在2%以下。ST-360在进行稳定性观察中，如表2所示，两次检测结果基本一致，这表明ST-360的稳定性较好。同时，从表1也可以看到，科华公司生产的ST-360与BIO-RAD 550的检测结果一致，两者的检测性能基本相同。4.由于液体表面张力的不同，导致单波长测定时的误差较大。并且用不同的洗涤剂会影响到最后加入底物和终止液后的液面情况，用加入表面活性剂的洗涤液清洗后，形成的液面更凹，对单波长检测的影响更大，并且与表面活性剂的浓度成正比。而且中性蒸馏水洗涤后，单、双波长检测的结果基本一致。5.在酶联免疫法测定抗原抗体中，由于所使用的底物不论是邻苯二胺（OPD）-H2O2，还是四甲基联苯胺（TMB）-H2O2，显色终止后，在630nm和655nm处的吸光度值都只有吸收峰处（492nm/450nm）吸光度值的1%以下，因此，利用双波长检测，不会影响检测灵敏度。建立在进行酶联免疫检测时，酶标仪比色应该首选双波长。这样可以提高临界值处标本的分析正确度，减少实验误差。

根据酶标仪国家检定规程中，有一项是测酶标仪波长准确度的，请问酶标仪能测波长吗？

随着检验医学的发展，酶标仪在临床检验中得到了越来越广泛的应用。那么，什么样的酶标仪最受临床检验人员欢迎，又应当怎样选择酶标仪呢？ 首先，酶标仪体积不宜太大。检验室空间有限，仪器体积太大会占据很多空间，给其他工作带来不便。这也是小巧玲珑、外形美观的机型受人青睐的原因。此外，在检验过程中，经常会有样品液体外溅，所以酶标仪外壳要易于消毒、清洁。 第二，可容纳更多的信息。随着医保制度改期的进行和《医疗事故处理条例》的颁布实施，在处理日趋增多的医疗纠纷过程中，医院事故技术鉴定材料的重要性不言而喻。而检验结果准确与束往往会引起争仪，因此检验中的原始记录即成为判定的依据。在临床检验中，酶标仪比色后的打印记录是最原始的记录之一，如果这份打印记录能显示足够的信息量，将为法律评判提供极大的便利。 第三，仪器操作要简便，国产的酶标仪，菜单应该用中文来显示。尽管目前检验人员的素质有限大幅度提高，懂英语的人也为数不少，但看中文毕竟比看英文方便、明确。有些国内厂商在仿造进口酶标仪时，连显示器上的文字一同“进口”，这种做法值得商榷。 第四，厂商能配置易损部件。酶标仪在临床上使用频率较高，一些部件的损坏率也较高，如放酶标仪的卡夹、滑槽等。厂商能及时地配置易置易损部件，对保证酶标仪正常运行和延长期寿命是非常重要的。第五，对比色和打印的要求。有些医院标本量比较大，酶反应终止后，如果不能及时比色，将会影响检测结果。而一台好的酷标仪能够快捷地进行比色和打印，不仅为检测人员节省了大量的时间，而且确保了检验结婚的准确性。酶标仪的自检和校准从上述所获的酶标仪性能的有关信息资料，基本上可以说是间接的，有了目标以后，如果还想获得对某一酶标仪的感性认识，可以对其进行自检，主要有下述几个方面。（一）外观酶标仪上应有仪器名称，型号，编号，生产厂家，出厂日期和电源电压；各调节旋钮，按键和开关均能正常工作，外表面无明显机械损伤；显示文字应清楚完整。（二）酶标仪的稳定性（漂移） 选用492nm波长，在吸光度o．0A处，测定标称值为1．0A的光谱中性滤光片（测定操作按仪器说明进行），记录仪器示值或均值，10min后再次记录仪器示值或均值，前后两次测定值之差不应超过±0．005A。（三）吸光度测定的准确度选用405，492和620 nm波长，以空气为参比，分别测定标称值为0．5和1．0A的光谱中性玻璃滤光片，用专用测试板代替酶标板，按仪器说明连续测定3次，按下式计算准确度：AA＝1／3（A、+A。+A3）—A：（A：为标准值）。（四）吸光度测定的重复性波长选择同（3），在酶标板第一排加注空白溶液，第二排加入浓度为200rig／ml的重铬酸钾溶液，重复测定5次。记录每次测定的第二排吸光度值，取第二排任一孔吸光度值与各次对应孔吸光度值。 （五）酶标仪的线性选用540nm波长，将标称值o．5，1．0A中性滤光片分别放入专用测试板样本位置中，以空气为参比，各重复测定3次；然后将以上两片中性滤光片叠加后置于专用测试板的同一孔位中，重复测定3次。 （五）测定速度的检定 ．选用492nm波长，放人96孔酶标板进行测定，用秒表计测仪器打印出全部数据的时间。酶标仪除了在选购时，应尽可能自检外，在使用中也应定期检定，以保证酶标仪测定的有效性。

问专家几个关于酶标仪的问题：1。微孔板式紫外可见连续波长酶标仪和连续光谱荧光仪，全自动多功能酶标仪 ，光栅式酶标仪 ，连续光谱扫描式酶标仪，化学发光酶标仪 ，它们有哪些具体不同，应用上有些什么不同2。什么叫终点法检测，动力学法检测3。振板功能作用是什么4。什么叫OD值，测核酸，蛋白质OD值是多少？5，什么是线形回归，多顶式回归，阀值吸光率，多点吸光率2。

分光光度计和酶标仪区别分光光度计：利用单色仪或特殊光源提供的特定波长的单色光通过标样和被分析样品，比较两者的光强度来分析物质成分的光谱仪器。分光光度法则是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析。常用的波长范围为：(1)200～400nm的紫外光区,(2)400～760nm的可见光区,(3)2.5～25μm（按波数计为4000cm～400cm）的红外光区。所用仪器为紫外分光光度计、可见光分光光度计（或比色计）、红外分光光度计或（或原子吸收分光光度计）。酶标仪：实际上就是一台变相的专用光电比色计或分光光度计,其基本工作原理与主要结构和光电比色计基本相同。酶标仪按照功能的不同划分,可以分为（1）光吸收酶标仪（可见酶标仪，紫外/可见酶标仪）（2）荧光酶标仪（3）化学发光酶标仪。分光光度计和酶标板存在一些不同之处，具体差别体现在以下几个方面：（1）盛装待测溶液的容器：分光光度计用的是比色皿，酶标仪使用的是塑料微孔板(酶标板)。比色皿只能起到盛装溶液的作用，每个比色皿一次只能盛装一种溶液。酶标板常用透明的聚乙烯材料制成，对抗原抗体有较强的吸附作用，因此用它作为固相载体，酶标板通常为48孔或96孔，每个微孔可以盛装不同的溶液。（2）光路的方向：分光光度计是水平光路，而酶标仪则是垂直光路。由于酶标板盛样本的塑料微孔板是多排多孔的,光线只能垂直穿过,因此酶标仪的光束都是垂直通过待测溶液和微孔板的,光束既可是从上到下,也可以是从下到上穿过比色液。垂直光的特点是标本吸光度受液体浓缩或稀释的影响小，不足之处是受被测样本液面是否水平、酶标板透光性、孔底是否平整等的影响较大。（3）光路的长度：由于光密度（OD值）与吸光系数, 待测组分的浓度以及光路长度成正比关系。分光光度计采用的比色杯的宽度通常是1cm，所以光路长度固定为1cm。因此不同仪器，不同批次测量的数据具有同样的可比性。而酶标仪采用的是垂直光路, 所以光路的长度应该是液体液面的高度。所以测得的值受到样品的体积的影响。[font=宋体

酶标仪的选择、自检和校准 一、酶标仪的选择 面对类型如此众多的酶标仪，实验室在选择时往往有难以适从的感觉。一般来说，用于酶免疫测定比色的酶标仪可分为普通酶标仪，多功能全自动酶标仪和全自动酶免疫分析系统等，普通酶标仪的功能基本上相当于一个微孑L板比色计，而多功能全自动酶标仪除了有微孔板比色功能外，还有酶标动力学，紫外乃至凝集等多种检测功能；全自动酶免疫分析系统则有试剂“开放”和“限定”之分，所谓试剂“开放”是指不同品牌的ELISA试剂均可用于该仪器，而试剂“限定”则必须使用仪器专用的酶免测定试剂。实验室在选择酶标仪时，一般应遵循这样几条原则： 1．根据工作需要去选择。切忌刻意去求功能多，因为一则如果仪器功能过多，易出故障，二则有些功能如酶标动力学或凝集等，可能根本就用不上；如果拟购置的酶标仪主要是用于定性测定，则不必要求完美的定量所需的软件系统。至于全自动酶免疫分析系统则对工作量比较大的血站或大型医院较为适用，对于日常工作量不太大的实验室，就无必要。 2．根据酶标仪的性能去选择。反应酶标仪性能的指标主要有测定波长范围，滤光片配置，检测速度，吸光度范围，线性范围，分辨率，准确度，精密度等。 3．根据自己实验室的财力去选择。酶标仪品种类型多，由于性能不一，价格自然也就相差较大，实验室可根据自己的财力去选择性能／价格比较为合适的酶标仪。 4．根据售后服务去选择。实验室仪器买了以后，就跟我们家里使用的家用电器一样，在使用过程中及使用一段时间之后，很可能就会有保修或维修方面的问题，因此一定要选择售后服务好的公司的酶标仪。 5．根据实验室人员的外语水平去选择。进口酶标仪现有不少已使用中文人机对话，对于英语上有困难的实验室，应尽可能选用此类酶标仪。 确定了选择原则以后，就是怎样去选择了。选择的步骤首先是要获取有关酶标仪的信息资料，一般有这样几条途径： ①向已购不同酶标仪的多家实验室同行咨询访问，获取最直接的使用效果的信息； ②酶标仪销售商的信息广告及介绍； ③权威机构的仪器评估报告。 获取了尽可能多的酶标仪信息资料后，就是对不同类型的酶标仪的性能指标进行比较，选择较为适合本实验室的一种或二，三种再向销售商作进一步的详细咨询了解，以决定选择哪一种进行自检。二、酶标仪的自检和校准从上述所获的酶标仪性能的有关信息资料，基本上可以说是间接的，有了目标以后，如果还想获得对某一酶标仪的感性认识，可以对其进行自检，主要有下述几个方面。 (一)外观 酶标仪上应有仪器名称，型号，编号，生产厂家，出厂日期和电源电压；各调节旋钮，按键和开关均能正常工作，外表面无明显机械损伤；显示文字应清楚完整。 (二)酶标仪的稳定性(漂移) 选用492nm波长，在吸光度o．0A处，测定标称值为1．0A的光谱中性滤光片(测定操作按仪器说明进行)，记录仪器示值或均值，10min后再次记录仪器示值或均值，前后两次测定值之差不应超过±0．005A。 (三)吸光度测定的准确度 选用405，492和620 nm波长，以空气为参比，分别测定标称值为0．5和1．0A的光谱中性玻璃滤光片，用专用测试板代替酶标板，按仪器说明连续测定3次，按下式计算准确度：AA＝1／3(A、+A。+A3)—A：(A：为标准值)。 (四)吸光度测定的重复性 波长选择同(3)，在酶标板第一排加注空白溶液，第二排加入浓度为200rig／ml的重铬酸钾溶液，重复测定5次。记录每次测定的第二排吸光度值，取第二排任一孔吸光度值与各次对应孔吸光度值。按下式计算重复性： （五）酶标仪的线性选用540nm波长，将标称值o．5，1．0A中性滤光片分别放入专用测试板样本位置中，以空气为参比，各重复测定3次；然后将以上两片中性滤光片叠加后置于专用测试板的同一孔位中，重复测定3次。线性误差： 式中A1为第一片中性滤光片吸光度均值，A：为第二片中性滤光片吸光度均值，A1，2为两片中性滤光片叠加后的吸光度均值。 (六)测定速度的检定 ． 选用492nm波长，放人96孔酶标板进行测定，用秒表计测仪器打印出全部数据的时间。 酶标仪除了在选购时，应尽可能自检外，在使用中也应定期检定，以保证酶标仪测定的有效性。 附：200ttg／ml重铬酸钾溶液的配制 将重铬酸钾固体试剂放人称量瓶中(去盖)置于烘箱中，在105±5℃下烘2h后，置于干燥器内冷却30min，在分析天平上准确称取o．2829g，置于100ml烧杯中，用o．05mol／L稀硫酸溶解后，移入500ml容量瓶中，以少量o．05mol／L稀硫酸洗烧杯3次，洗液并入容量瓶中，用0．05mol／L稀硫酸稀释至刻度线，摇匀。

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各大虾,目前小生想买一台能做荧光,化学发光,还有光吸收的多功能酶标仪,这种仪器总体上有两大类:一是采用滤光片的,另一类是连续波长(采用单色仪),我现在拿不定,请各大虾帮我分析一下这两类的各自的优点.谢谢!

我们准备买一台带荧光连续光谱的酶标仪，请问各位大侠哪个牌子的好。我以前用过美国Molecular Devices的酶标仪，荧光部分重现性不好。

今天使用了一下酶标仪，光知道操作，但是不知道原理，所以从网上查了查，正好和大家分享下^_^ 酶标仪测定的原理是在特定波长下，检测被测物的吸光值。 　特定波长下，同一种被检测物的浓度与被吸收的能量成定量关系。 　　检测单位用OD值表示， OD是optical delnsity（光密度）的缩写，表示被检测物吸收掉的光密度， OD＝1og（1／trans），其中trans为检测物的透光值。根据Bouger-amberT-beer法则，OD值与光强度成下述关系： E＝OD=logΙ0/Ι其中E表示被吸收的光密度， Ι0 为在检测物之前的光强度，Ι为从被检测物出来的光强度。 　　OD值由下述公式计算： 　　E＝OD=C×D×E 　　C为检测物的浓度 　　D为检测物的厚度 　　E为摩尔因子 　　在特定波长下测定每一种物质都有其特定的波长，在此波长下，此物质能够吸收最多的光能量。如果选择其它的波长段，就会造成检测结果的不准确。因此，在测定检测物时，我们选择特定的波长进行检测，称为测量波长。 　　但是每一种物质对光能量还存在一定的非特异性吸收，为了消除这种非特异性吸收，我们再选取一个参照波长，以消除这个不准确性。在参照波长下，检测物光的吸收最小。检测波长和参照波长的吸光值之差可以消除非特异性吸收。 　　Anthos 酶标仪检测值计算 　　仪器中的检测器接收透过被检测物的光能量，转换成二进位数字信号，最大为4095。仪器定义没有光源下的透光值为 0％，没有检测物的透光值为100％。则实际检测中，检测物的透光值均在 0％一100％之间。透光值 的计算如下： 　　T＝（Meas―Min）／（Max―Min） 　　其中T为透光值， Meas为检测的二进位数值， Min为在 0％的情况下检测的二进位数值， Max为在100％的情况下检测的二进位数值，举例如下： 　　MaX=3600 Mn=20 Meas＝30 　　T=（30-20）/3600-20)＝0．0028 　　OD＝1og（1/T）=1og（1/0.0028）=2.552 　　Anthos 酶标仪的中心定位 　　仪器会自动对酶标孔进行中心定位，中心定位是要消除酶标孔底的凸凹引起的厚薄不均带来检测的不准确。在对每一个酶标仪进行检测时，仪器其实要进行35个点的测量，选取最中间的5个点的均值为本孔的OD值。 　　光源的参照通道 　　参照通道是用来校准由于电压不稳或灯泡磨损带来的影响。 　　酶标仪的用途和其它提示 　　用于ELISA试剂的测定，广泛用于各种实验室，包括临床实验室。 　　质量控制 　　质量控制是试剂检测的重要因素。请按照试剂说明书的要求进行质量控制。 　　空白校正 　　有一些试剂盒的说阴书将空白孔设置为空气，其它大多数空白孔的设置是用试剂来设置的，请按照试剂盒的说明书要求进行。 　　检测结果的解释 　　由于有相当多的因素会影响检测的结果，如不同的酶标板，检测试剂的体积，都会造成OD值的不，因此，只有使用同一酶标板反应的试剂检测结果才能比较和分析。对结果的临床解释请依照试剂盒的说明书进行。 酶标仪的使用注意事项 1、工作环境 　　酶标仪是一种精密的光学仪器，因此良好的工作环境不仅能确保其准确性和稳定性，还能够延长其使用寿命。根据DIN VDE 0871条例，仪器应放置在无磁场和干扰电压的位置。依据DIN 45 635 －19条例： 　　仪器应放置在低于40分贝的环境下。 　　为延缓光学部件的老化，应避免阳光直射。 　　操作时环境温度应在15℃－40℃之间，环境湿度在15％－85％之间。 　　操作电压应保持稳定。 　　操作环境空气清洁，避免水汽，烟尘。 　　保持干燥、干净、水平的工作台面，以及足够的操作空间。 2、操作注意事项 　　酶标仪的功能是用来读取酶联免疫试剂盒的反应结果，因此要得到准确结果，试剂盒的使用必须规范。许多医院在使用酶标仪之前是通过目测判断结果，操作过程随意性较大，在使用酶标仪后如果不能及时纠正操作习惯，会造成较大误差。在酶标仪的操作中应注意以下事项： 　　使用加液器加液，加液头不能混用。 　　洗板要洗干净。如果条件允许，使用洗板机洗板，避免交叉污染。 　　严格按照试剂盒的说明书操作，反应时间准确。 　　在测量过程中，请勿碰酶标板，以防酶标板传送时挤伤操作人员的手。 　　请勿将样品或试剂洒到仪器表面或内部，操作完成后请洗手。 　　如果使用的样品或试剂具有污染性、毒性和生物学危害，请严格按照试 　　剂盒的操作说明，以防对操作人员造成损害。 　　如果仪器接触过污染性或传染性物品，请进行清洗和消毒。 　　不要在测量过程中关闭电源。 　　对于因试剂盒问题造成的测量结果的偏差，应根据实际情况及时修改参数，以达到最佳效果。 　　使用后盖好防尘罩。 　　出现技术故障时应及时与厂家联系，切勿擅自拆卸酶标仪。

是电磁波，波长100nm～400nm称为紫外光， 400nm～780nm之间的光可被人眼观察到，大子780nm称为红外光。人们只所以能够看到色彩，是因为光照射到物体上被物体反射回来。绿色植物之所以是绿色，是因为植物吸收了光中的红色光谱。酶标仪测定的原理是在特定波长下，检测被测物的吸光值。 　　检测单位：　　光通过被检测物，前后的能量差异即是被检测物吸收掉的能量，特定波长下，同一种被检测物的浓度与被吸收的能量成定量关系。　　检测单位用OD值表示， OD是optical delnsity（光密度）的缩写，表示被检测物吸收掉的光密度， OD＝1og（1／trans），其中trans为检测物的透光值。根据Bouger-amberT-beer法则，OD值与光强度成下述关系：E＝OD=logΙ0/Ι其中E表示被吸收的光密度， Ι0 为在检测物之前的光强度，Ι为从被检测物出来的光强度。 　　OD值由下述公式计算：　　E＝OD=C×D×E　　C为检测物的浓度　　D为检测物的厚度　　E为摩尔因子 　　在特定波长下测定每一种物质都有其特定的波长，在此波长下，此物质能够吸收最多的光能量。如果选择其它的波长段，就会造成检测结果的不准确。因此，在测定检测物时，我们选择特定的波长进行检测，称为测量波长。　　但是每一种物质对光能量还存在一定的非特异性吸收，为了消除这种非特异性吸收，我们再选取一个参照波长，以消除这个不准确性。在参照波长下，检测物光的吸收最小。检测波长和参照波长的吸光值之差可以消除非特异性吸收。 　　Anthos 酶标仪检测值计算　　仪器中的检测器接收透过被检测物的光能量，转换成二进位数字信号，最大为4095。仪器定义没有光源下的透光值为 0％，没有检测物的透光值为100％。则实际检测中，检测物的透光值均在 0％一100％之间。透光值的计算如下：　　T＝（Meas—Min）／（Max—Min）　　其中T为透光值， Meas为检测的二进位数值， Min为在 0％的情况下检测的二进位数值， Max为在100％的情况下检测的二进位数值，举例如下：　　MaX=3600 Mn=20 Meas＝30　　T=（30-20）/3600-20)＝0．0028　　OD＝1og（1/T）=1og（1/0.0028）=2.552 　　Anthos 酶标仪的中心定位　　仪器会自动对酶标孔进行中心定位，中心定位是要消除酶标孔底的凸凹引起的厚薄不均带来检测的不准确。在对每一个酶标仪进行检测时，仪器其实要进行35个点的测量，选取最中间的5个点的均值为本孔的OD值。 　　光源的参照通道　　参照通道是用来校准由于电压不稳或灯泡磨损带来的影响。　　酶标仪的用途和其它提示　　用于ELISA试剂的测定，广泛用于各种实验室，包括临床实验室。　　质量控制　　质量控制是试剂检测的重要因素。请按照试剂说明书的要求进行质量控制。　　空白校正　　有一些试剂盒的说阴书将空白孔设置为空气，其它大多数空白孔的设置是用试剂来设置的，请按照试剂盒的　　说明书要求进行。　　检测结果的解释　　由于有相当多的因素会影响检测的结果，如不同的酶标板，检测试剂的体积，都会造成OD值的不同，因此，　　只有使用同一酶标板反应的试剂检测结果才能比较和分析。对结果的临床解释请依照试剂盒的说明书进行。

酶标仪使用时为什么要用双波长？而检定时又要用单波长？

[b]全自动酶标仪ut-6550[/b]是一款基于滤光片的高品质[b]自动光吸收酶标仪[/b]和[b]全自动酶标分析仪[/b],波长范围340nm~750nm[color=#000000],测量快速,测量准确性高,重现性好,广泛用于科学研究和临床医学应用,在[color=#000000][color=#000000]全自动酶标仪品牌中具有竞争力的全自动酶标仪价格。[/color][/color][/color][color=#000000][color=#000000][color=#000000][b]全自动酶标仪ut-6550[/b][/color]适用96孔板，可满足不同通量的要求。7英寸触屏液晶显示，易于使用，不需操作键盘，数据和程序可保存在仪器内，或者通过U盘导出。是实验室酶标仪的理想选择。[/color][/color][color=#000000][color=#000000][color=#000000][b]全自动酶标仪ut-6550[/b][/color][/color][/color]是一个广泛，可靠的研究和临床应用多样性的强大的工具，它读取各种96威尔斯板，并配备了震动功能。它可以作为一个独立的工具或PC控制下的常规或应用软件，是易于使用的软件。[color=#000000][color=#000000][color=#000000][b]全自动酶标仪ut-6550[/b][/color][/color][/color]酶标仪配备了四个标准的滤光片,波长分别为405, 450, 492、和630nm。我们还提供定制间隔从5 ~ 9nm到340~750nm的滤光片服务。[color=#000000][color=#000000][color=#000000][b]全自动酶标仪ut-6550[/b]具有[/color][/color][/color]高视觉和逻辑软件的用户界面，它可以提供一个全面的嵌入式计算，如空白的减法，定量曲线拟合、定性分类和动力学计算，以及通用的报表工具，使数据还原。[align=center][img=全自动酶标仪]http://www.f-lab.cn/Upload/UT-6550.jpg[/img][/align][color=#000000][color=#000000][b][url=http://www.f-lab.cn/microplate-readers/ut-6550.html]全自动酶标仪ut-6550[/url]特点[/b][/color][/color]:[color=#000000]7英寸触屏显示器，操作便捷，无需操作键盘，简单易用软件配置丰富，即可单机使用，也可与电脑连接，还可以通过安卓平板电脑控制，结果实时输出可视化布板，方便实用[color=#000000]吸光度范围：0~4.000Abs，满足不同测量要求[/color][color=#000000]8位滤光片轮，标配4片滤光片，可选配340nm~750nm波长滤光片内置软件可以提供仪器的控制和数据分析，可直接外接U盘[/color][/color][color=#000000]检测速度快，在6s内即可完成96孔微孔板整板检测无需打开机盖，即可完成对光源和滤光片的更换[/color][color=#000000]可以连接电脑输出数据也可直接连接打印机8通道高精度光纤测量系统，酶标孔中心精确自动定位具备对光路，机械运动等进行自检和诊断功能[/color][color=#000000]具备振板功能，振板时间和速度可调[/color][color=#000000]光源节能设计，最大限度延长光源寿命[/color][color=#000000]多种数据输出接口，方便数据传输和处[color=#000000]理[/color][/color][color=#000000][color=#000000]更多酶标仪洗板机：[url]http://www.f-lab.cn/microplate-readers.html[/url][/color][/color]

一、酶标仪的选择面对类型如此众多的酶标仪，实验室在选择时往往有难以适从的感觉。一般来说，用于酶免疫测定比色的酶标仪可分为普通酶标仪，多功能全自动酶标仪和全自动酶免疫分析系统等，普通酶标仪的功能基本上相当于一个微孑L板比色计，而多功能全自动酶标仪除了有微孔板比色功能外，还有酶标动力学，紫外乃至凝集等多种检测功能；全自动酶免疫分析系统则有试剂“开放”和“限定”之分，所谓试剂“开放”是指不同品牌的ELISA试剂均可用于该仪器，而试剂“限定”则必须使用仪器专用的酶免测定试剂。实验室在选择酶标仪时，一般应遵循这样几条原则：1．根据工作需要去选择。切忌刻意去求功能多，因为一则如果仪器功能过多，易出故障，二则有些功能如酶标动力学或凝集等，可能根本就用不上；如果拟购置的酶标仪主要是用于定性测定，则不必要求完美的定量所需的软件系统。至于全自动酶免疫分析系统则对工作量比较大的血站或大型医院较为适用，对于日常工作量不太大的实验室，就无必要。2．根据酶标仪的性能去选择。反应酶标仪性能的指标主要有测定波长范围，滤光片配置，检测速度，吸光度范围，线性范围，分辨率，准确度，精密度等。3．根据自己实验室的财力去选择。酶标仪品种类型多，由于性能不一，价格自然也就相差较大，实验室可根据自己的财力去选择性能／价格比较为合适的酶标仪。4．根据售后服务去选择。实验室仪器买了以后，就跟我们家里使用的家用电器一样，在使用过程中及使用一段时间之后，很可能就会有保修或维修方面的问题，因此一定要选择售后服务好的公司的酶标仪。5．根据实验室人员的外语水平去选择。进口酶标仪现有不少已使用中文人机对话，对于英语上有困难的实验室，应尽可能选用此类酶标仪。确定了选择原则以后，就是怎样去选择了。选择的步骤首先是要获取有关酶标仪的信息资料，一般有这样几条途径：①向已购不同酶标仪的多家实验室同行咨询访问，获取最直接的使用效果的信息；②酶标仪销售商的信息广告及介绍；③权威机构的仪器评估报告。获取了尽可能多的酶标仪信息资料后，就是对不同类型的酶标仪的性能指标进行比较，选择较为适合本实验室的一种或二，三种再向销售商作进一步的详细咨询了解，以决定选择哪一种进行自检。二、酶标仪的自检和校准从上述所获的酶标仪性能的有关信息资料，基本上可以说是间接的，有了目标以后，如果还想获得对某一酶标仪的感性认识，可以对其进行自检，主要有下述几个方面。(一)外观酶标仪上应有仪器名称，型号，编号，生产厂家，出厂日期和电源电压；各调节旋钮，按键和开关均能正常工作，外表面无明显机械损伤；显示文字应清楚完整。(二)酶标仪的稳定性(漂移) 选用492nm波长，在吸光度o．0A处，测定标称值为1．0A的光谱中性滤光片(测定操作按仪器说明进行)，记录仪器示值或均值，10min后再次记录仪器示值或均值，前后两次测定值之差不应超过±0．005A。(三)吸光度测定的准确度选用405，492和620 nm波长，以空气为参比，分别测定标称值为0．5和1．0A的光谱中性玻璃滤光片，用专用测试板代替酶标板，按仪器说明连续测定3次，按下式计算准确度：AA＝1／3(A、+A。+A3)—A：(A：为标准值)。(四)吸光度测定的重复性波长选择同(3)，在酶标板第一排加注空白溶液，第二排加入浓度为200rig／ml的重铬酸钾溶液，重复测定5次。记录每次测定的第二排吸光度值，取第二排任一孔吸光度值与各次对应孔吸光度值。按下式计算重复性：（五）酶标仪的线性选用540nm波长，将标称值o．5，1．0A中性滤光片分别放入专用测试板样本位置中，以空气为参比，各重复测定3次；然后将以上两片中性滤光片叠加后置于专用测试板的同一孔位中，重复测定3次。线性误差：式中A1为第一片中性滤光片吸光度均值，A：为第二片中性滤光片吸光度均值，A1，2为两片中性滤光片叠加后的吸光度均值。(六)测定速度的检定 ．选用492nm波长，放人96孔酶标板进行测定，用秒表计测仪器打印出全部数据的时间。酶标仪除了在选购时，应尽可能自检外，在使用中也应定期检定，以保证酶标仪测定的有效性。附：200ttg／ml重铬酸钾溶液的配制将重铬酸钾固体试剂放人称量瓶中(去盖)置于烘箱中，在105±5℃下烘2h后，置于干燥器内冷却30min，在分析天平上准确称取o．2829g，置于100ml烧杯中，用o．05mol／L稀硫酸溶解后，移入500ml容量瓶中，以少量o．05mol／L稀硫酸洗烧杯3次，洗液并入容量瓶中，用0．05mol／L稀硫酸稀释至刻度线，摇匀。

分光光度计和酶标仪都是实验室常用的两种仪器，它们的测定原理是相同的，都是使用朗伯-比耳定律，测定的都是样本的吸光度。酶标仪按照功能的不同划分,可以分为(1)光吸收酶标仪(可见酶标仪，紫外/可见酶标仪)(2)荧光酶标仪(3)化学发光酶标仪。分光光度计按照波长及应用领域的不同可以分为：(1)可见光分光光度计(2)紫外分光光度计(3)红外分光光度计(4)荧光分光光度计(5)[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Wp][color=#3333ff]原子吸收[/color][/url]分光光度计。　　分光光度计和酶标板存在一些不同之处，具体差别体现在以下三个方面：　　(1)盛装待测溶液的容器：分光光度计用的是比色皿，酶标仪使用的是塑料微孔板(酶标板)。比色皿只能起到盛装溶液的作用，每个比色皿一次只能盛装一种溶液。酶标板常用透明的聚乙烯材料制成，对抗原抗体有较强的吸附作用，因此用它作为固相载体，酶标板通常为48孔或96孔，每个微孔可以盛装不同的溶液。　　(2)光路的方向：分光光度计是水平光路，而酶标仪则是垂直光路。由于酶标板盛样本的塑料微孔板是多排多孔的,光线只能垂直穿过,因此酶标仪的光束都是垂直通过待测溶液和微孔板的,光束既可是从上到下,也可以是从下到上穿过比色液。垂直光的特点是标本吸光度受液体浓缩或稀释的影响小，不足之处是受被测样本液面是否水平、酶标板透光性、孔底是否平整等的影响较大。　　(3)光路的长度：由于光密度(OD值)与吸光系数, 待测组分的浓度以及光路长度成正比关系。分光光度计采用的比色杯的宽度通常是25px，所以光路长度固定为25px。因此不同仪器，不同批次测量的数据具有同样的可比性。而酶标仪采用的是垂直光路, 所以光路的长度应该是液体液面的高度，所以测得的值受到样品的体积的影响。

二手多功能酶标仪（envision），原价130多万，有发票，2011年买的。有需要请联系

酶标仪和分光光度计都是实验室常用的分析测量工具，它们的测定原理是相同的，都是使用朗伯-比耳定律，测定的都是样本的吸光度。 一、酶标仪和分光光度计的三大差别 酶标仪即酶联免疫检测仪。是酶联免疫吸附试验的专用仪器又称微孔板检测器。可简单地分为半自动和全自动2大类，但其工作原理基本上都是一致的，其核心都是一个比色计,即用比色法来进行分析。测定一般要求测试液的最终体积在250μL以下，用一般光电比色计无法完成测试，因此对酶标仪中的光电比色计有特殊要求。 分光光度计，又称光谱，是将成分复杂的光分解为光谱线的科学仪器。测量范围一般包括波长范围为380~780 nm的可见光区和波长范围为200～380 nm的紫外光区。不同的光源都有其特有的发射光谱,因此可采用不同的发光体作为仪器的光源。 同为，实验室内测定吸光度的仪器，酶标仪和分光光度计存在一些不同之处，具体差别体现在以下三个方面： （1）盛装待测溶液的容器： 分光光度计用的是比色皿，酶标仪使用的是塑料微孔板(酶标板)。比色皿只能起到盛装溶液的作用，每个比色皿一次只能盛装一种溶液。酶标板常用透明的聚乙烯材料制成，对抗原抗体有较强的吸附作用，因此用它作为固相载体，酶标板通常为48孔或96孔，每个微孔可以盛装不同的溶液。 （2）光路的方向： 分光光度计是水平光路，而酶标仪则是垂直光路。由于酶标板盛样本的塑料微孔板是多排多孔的,光线只能垂直穿过,因此酶标仪的光束都是垂直通过待测溶液和微孔板的,光束既可是从上到下,也可以是从下到上穿过比色液。垂直光的特点是标本吸光度受液体浓缩或稀释的影响小，不足之处是受被测样本液面是否水平、酶标板透光性、孔底是否平整等的影响较大。 （3）光路的长度： 由于光密度(OD值)与吸光系数, 待测组分的浓度以及光路长度成正比关系。 分光光度计采用的比色杯的宽度通常是1cm，所以光路长度固定为1cm。因此不同仪器，不同批次测量的数据具有同样的可比性。 而酶标仪采用的是垂直光路, 所以光路的长度应该是液体液面的高度。所以测得的值受到样品的体积的影响。 二、酶标仪和分光光度计的优缺点比较 分光光度计： 优点：1、检测波长范围较宽；2、加样量不一致对测量结果没有影响。 缺点：1、工作量大，操作繁琐，耗时；2、耗试剂；3、结果稳定性差，重复性较差，误差较大；4、对于微量物质，难以检测到。 主要应用领域：药品检验、药物分析、环境检测、卫生防疫食品、化工、科研等领域对物质进行定性、定量分析。 酶标仪： 优点：1、一次性处理样品量大，省时；2、样本、试剂用量少；3、操作简单，重复性好，检测速度快、效率高。 缺点：1、酶标仪96孔板在紫外光区有较强的紫外吸收，应尽量避免在300nm以下使用酶标仪进行含量测定；2、必须确保微孔板每个孔加样量严格一致，对实验者的操作技能提出了更高的要求。 主要应用领域：临床检验、生物学研究、农业科学、食品和环境科学等。

实验思路，酶标仪可以高通量定量测定有紫外吸收的物质，所以我们合成的新材料如果有特定的紫外吸收，可以用酶标仪测定反应后的溶剂中剩余的材料，从而测定产物的接枝率。

近年来，随着多功能酶标仪在国内各高校实验室逐渐推广开来，多功能酶标仪品牌和型号也逐渐多了起来，乱花渐欲迷人眼。除了三大传统优势品牌PE、MD和TECAN，还出现了众多后来者插足此市场，如收购了芬兰雷勃的Thermo、从发光起家的Berthold、针对药筛领域的BMG以及新兴的BioTek等品牌。各品牌都有各自的一个甚至多个系列产品线，特性各不相同，选购时各种技术参数、技术指标令人眼花缭乱　　本文尝试从用户实际使用的角度，探讨应该如何看待花样繁多的参数特性，希望能帮助大家找到真正合适自己的多功能酶标仪。一、滤片Vs光栅　　多功能酶标仪的分类方法众多，但最简单的莫过于用他们的滤光方式来作分界线。一般来说，可以分为滤光片型和光栅型两大类。当然也有一些型号，例如Synergy4和EnVision等，一台机器里面同时装上了滤光片和光栅。但是滤片和光栅并不能同时完成同一个检测，还是想用光栅的时候用光栅，该用滤片的时候用滤片 还有一些实验非用其中一个不可，另一模块实现不了的。所以这类仪器本质上还只是把滤片和光栅放在了一起，并没有使两者糅合而产生新的技术突破。　　总体来说，滤片技术由于发展已久，配合二向色镜(其实也就是另一模式的滤光反光滤镜)等光路系统，可以实现大部分实验的需要。目前常规多功能酶标仪中最高的检测灵敏度就是用滤光片型做出来的，例如TECAN Infinite F500的荧光检测的灵敏度可以达到0.04 fmol/孔(荧光素，384孔/80ul)。　　但是滤光片型仪器由于受限于滤片的波长和数量限制，不可能满足日益增加的实验类型的检测需要，而且有时需要对物质的吸收、激发和发射光谱进行研究，所以后来就诞生了光栅型的仪器。　　最先推出光栅的是MD公司，其光栅习惯上称为单光栅。由于光纯度的不足，在光栅的后面又加入了一组带阻滤片，再把杂光过滤一遍，达到了5×10-4的杂光率，基本与纯粹的滤光片系统一致。后来TECAN又发展出了双光栅技术，通过两次光栅滤光，杂光率降到了10-6。后来，Thermo、BioTek和PE的部分新款仪器等都使用了类似双光栅技术。由于激发和发射各用了一组双光栅，此类机器又被称为四光栅型多功能酶标仪。　　光栅型酶标仪的推陈出新，使得用户在波长选择上不再受限，而且在杂光率、带宽控制等性能上还超越了滤光片系统。例如，TECAN公司在2008年底推出使用了第三代四光栅系统的M1000酶标仪，杂光率降到了2×10-7的新低，还实现了带宽2.5～20nm连续可调。这些都是目前滤光片型酶标仪所不能或者较难实现的。

酶标仪即酶联免疫检测仪,是酶联免疫吸附试验的专用仪器.可简单地分为半自动和全自动2大类,但其工作原理基本上都是一致的,其核心都是一个比色计,即用比色法来分析抗原或抗体的含量.ELISA测定一般要求测试液的最终体积在250u l以下,用一般光电比色计无法完成测试,因此对酶标仪中的光电比色计有特殊要求.酶标仪实际上就是一台变相的专用光电比色计或分光光度计,其基本工作原理与主要结构和光电比色计基本相同. 图示是一种单通道自动进样的酶标仪工作原理图.光源灯发出的光波经过滤光片或单色器变成一束单色光,进入塑料微孔极中的待测标本.该单色光一部分被标本吸收,另一部分则透过标本照射到光电检测器上,光电检测器将这一待测标本不同而强弱不同的光信号转换成相应的电信号.电信号经前置放大,对数放大,模数转换等信号处理后送入微处理器进行数据处理和计算,最后由显示器和打印机显示结果. 微处理机还通过控制电路控制机械驱动机构X方向和Y方向的运动来移动微孔板,从而实现自动进样检测过程.而另一些酶标仪则是采用手工移动微孔板进行检测,因此省去了X,Y方向的机械驱动机构和控制电路,从而使仪器更小巧,结构也更简单.酶标仪操作规程1．开启仪器电源开关，预热5分钟，同时启动电脑。 　　2．启动Magellan.exe程序，加入程序主界面，仪器微孔板架同时自动打开。 　　3．将待测微孔板在板架上放好。 　　4．根据不同的测量要求，设置好测定波长和测量模式后，进行检测。 　　5．保存检测结果或进行打印。 　　6．关闭计算机和主机电源，登记使用记录。

实际上就是一台变相的专用光电比色计，其基本工作原理与主要结构和光电比色计基本相同. 图示是一种单通道自动进样的酶标仪工作原理图.光源灯发出的光波经过滤光片或单色器变成一束单色光,进入塑料微孔极中的待测标本.该单色光一部分被标本吸收,另一部分则透过标本照射到光电检测器上,光电检测器将这一待测标本不同而强弱不同的光信号转换成相应的电信号.电信号经前置放大,对数放大,模数转换等信号处理后送入微处理器进行数据处理和计算,最后由显示器和打印机显示结果. 微处理机还通过控制电路控制机械驱动机构X方向和Y方向的运动来移动微孔板,从而实现自动进样检测过程.而另一些酶标仪则是采用手工移动微孔板进行检测,因此省去了X,Y方向的机械驱动机构和控制电路,从而使仪器更小巧,结构也更简单. 　　微孔板是一种经事先包理专用于放置待测样本的透明塑料板,板上有多排大小均匀一致的小孔,孔内都包埋着相应的抗原或抗体,微孔板上每个小孔可盛放零点几毫升的溶液.其常见结构规格有40孔板,55孔板,96孔板等多种,不同的仪器选用不同规格的孔板,对其可进行一孔一孔地检测或一排一排地检测.酶标仪所用的单色光既可通过相干滤光片来获得,也可用分光光度计相同的单色器来得到.在使用滤光片作滤波装置时与普通比色计一样,滤光片即可放在微孔板的前面,也可放在微孔板的后面,其效果是相同的.下图便是目前常用的酶标仪光路系统图.光源灯发出的光经聚光镜,光栏后到达反射镜,经反射镜作90°反射后垂直通过比色溶液,然后再经滤光片送到光电管.从酶标仪工作框图和光路图上可看出,它和普通的光电比色计有以下几点差异:　　(l)盛装待测比色液的容器不再使用比色皿,而是使用塑料微孔板.微孔板常用透明的聚乙烯材料制成,对抗原抗体有较强的吸附作用,故用它作为固相载体.　　(2)由于盛样本的塑料微孔板是多排多孔的,光线只能垂直穿过,因此酶标仪的光束都是垂直通过待测溶液和微孔板的,光束既可是从上到下,也可以是从下到上穿过比色液.　　(3)酶标仪通常不仅用A,有时也使用光密度OD来表示吸光度.酶标仪可分为单通道和多通道2种类型,单通道又有自动和手动2种之分.自动型的仪器有X,Y方向的机械驱动机构,可将微孔板L的小孔一个个依次送入光束下面测试,手动型则靠手工移动微孔板来进行测量.在单通道酶标仪的基础上又发展了多通道酶标仅,此类酶标仅一般都是自动化型的.它没有多个光束和多个光电检测器,如 12个通道的仪器设有 12条光束或 12个光源,12个检测器和12个放大器,在X方向的机械的作用下,样品12个为一排被检测.多通道酶标仪的检测速度快,但其结构较复杂价格也较高.

用酶标仪测肉制品中的兽药残留挺快捷的，可怎样设定曲线呢？请说说你们的经验吧！谢谢！

要测胆汁酸含量，我的样品量比较少，想用酶标仪测，但是不知道具体用哪个波长，打算用紫外-可见分光光度计做全波长扫描，请问在酶标仪上可以直接用紫外-可见分光光度仪全扫描的最大吸收波长吗？

酶标仪使用注意事项 　　1、 工作环境　　酶标仪是一种精密的光学仪器，因此良好的工作环境不仅能确保其准确性和稳定性，还能够延长其使用寿命。A. 仪器应放置在无强磁场和干扰电压的位置。B. 仪器应放置在噪音低于40分贝的环境下。C. 为延缓光学部件的老化，应避免阳光直射。D. 操作环境温度应在15°C~40°C之间，环境湿度在15%~85%之间。E. 操作时电压应保持稳定。F. 操作环境空气清洁，避免水汽、烟尘。G. 保持干燥、干净、水平的工作台面，以及足够的操作空间。　　2、 操作注意事项　　许多医院在使用酶标仪之前是通过目测判断结果，操作过程随意性较大，在使用酶标仪后操作必须规范。A. 使用移液器加液，移液枪头不能混用。B. 洗板要干净，避免交叉污染。C. 严格按照试剂盒的说明书操作，反应时间准确。D. 请勿将样品或试剂洒到仪器表面或内部，操作完成注意做好清洁工作。E. 不要在测量过程中关闭电源。F. 对于因试剂盒问题造成的测量结果的偏差，应根据实际情况及时修改参数，以达到最佳效果。G. 使用后盖好防尘罩。H. 出现技术故障时应及时与厂家联系，切勿擅自拆卸酶标仪。酶标(ELISA，EIA)诊断试剂盒操作中出现的问题：现象、可能原因和解决办法　注意：1、 不同厂家生产的试剂盒因生产工艺和操作方法略有不同，务必按照所用试剂盒严格操作，否则容易产生检测结果的不确定性.2、 若不同批号试剂的不同组分(A液或酶工作液)，或不同试剂的不同组分进行交叉使用，有可能出现显色浅或本底高，花板等情形。3、 加样时样品量误差，对于阴或很阳的标本影响不大，但对阈值附近的标本影响极大，建议校对加样器。4、 反应时间的误差，做大量标本时，第一孔和最后一孔以及一些特殊标本可能影响较大。5、 由于滴瓶的精密性肯定不如加样器，不排除不同滴头滴量的误差。另外滴加过程中是否产生气泡、速度是否均匀，是否颤动等影响液量的因素均可导致以上情况。高标准要求时应使用加样器。6、 阈值附近实际上是个灰区(gray scale),不能截然分为阴性、阳性，国外厂家均要求对这部分可疑标本进行奇数次复检，以次数多者为准，如一次阳两次阴最后判为阴，但实际上是否为阴不好说，只有判为可疑，临床上可以让患者过一段时间后再测。7、 肉眼观察稍显色，酶标仪打印为阴性的标本在实际工作中是难以避免的，肉眼目测结果不可靠，应以酶标仪判读为准。8、 由阴性变为强阳性原因多为操作过程中漏加试剂等有关。9、 临界值附近标本波动为正常现象，任何试剂均不可避免。可以考虑将标本做奇数次复检。

酶标仪在临床实验方面应用广泛，可以说它是临床及医学实验不可或缺的基础设备。任何仪器在使用时往往都会出现一些小故障，酶标仪仪器也一样，酶标仪在使用的过程中出现故障后如何解决呢?酶标仪的常见故障　　1、酶标仪开机后无反应　　故障分析：出现这种情况请检查酶标仪电源线是否接好，保险丝是否烧断。　　2、酶标仪开机电源指示灯亮，液晶显示屏能显示字符，但显示时间较短　　故障分析：导致此种现象有两种可能，一是液晶显示器驱动、控制电路出现故障 二是供给液晶显示器的电源电压不正常。　　故障排除：打开酶标仪上盖，通电观察，散热片是否发热，若发热，则用数字万用表直流电压档测三端集成稳压块输出端，观察有无电压输出 若没有，说明电源有故障。由于三端集成稳压块内含过流限制和过热保护电路，为了判断是三端集成稳压块的故障还是后级负载短路引起的故障，可将酶标仪母板上三块电路板逐一拔出，通电再测量三端集成稳压块输出端电压，若拔出液晶显示驱动—控制这块电路块时，三端集成稳压块的输出端电压恢复正常，则可初步判断是电路板上的负载有短路现象。检查该电路板直流供电系统的各个元器件，可能为以树脂壳包装的铝固体电解电容器已击穿造成短路等原因。换上相同规格的电解电容器，即可排除故障。酶标仪的常见故障.jpg　　3、酶标仪测量的结果重现性不好，即使用空板测量误差也在允许的范围之外　　故障分析：检查试剂、判定公式以及光路是否被污染。排除这些问题后，检查微板的卡簧是否卡到位，没有卡到位会造成微板在测量时在机内晃动影响测量结果不准。　　4、酶标仪测量结果OD值偏低　　故障分析：可能是酶标仪灯的能量值偏低，在排除完灯的能量值偏低后，可能是滤光片上有灰尘，用蒸馏水和擦镜纸擦洗干净晾干后故障排除。　　5、酶标仪调不出所编程序　　故障分析：程序必须在相应程序模块下调出，如在临界值模块下编辑储存的程序必须要在临界值模块下调出。　　6、肉眼结果与酶标仪测定结果差异较大　　故障分析：出现这种情况是由于滤光片参数错误，测量滤光片没有正确的进入光路，测量光的波长与正确测量光的波长相差大致使结果失真，可以在“参数”中按滤光片轮中实际的情况设置滤光片。还可能由于电源或其它原因，有时会造成酶标仪存储的滤光片参数丢失或错误，此时应进行检查并重置参数。

光是电磁波，波长100nm～400nm称为紫外光，400nm～780nm之间的光可被人眼观察到，大子780nm称为红外光。人们只所以能够看到色彩，是因为光照射到物体上被物体反射回来。绿色植物之所以是绿色，是因为植物吸收了光中的红色光谱。酶标仪的检测原理是在特定波长下，检测被测物的吸光值。　　检测单位：　　光通过被检测物，前后的能量差异即是被检测物吸收掉的能量，特定波长下，同一种被检测物的浓度与被吸收的能量成定量关系。　　检测单位用OD值表示， OD是optical delnsity(光密度)的缩写，表示被检测物吸收掉的光密度， OD=1og(1/trans)，其中trans为检测物的透光值。根据Bouger-amberT-beer法则，OD值与光强度成下述关系：　　E=OD=logΙ0/Ι其中E表示被吸收的光密度，Ι0 为在检测物之前的光强度，Ι为从被检测物出来的光强度。　　OD值由下述公式计算：　　E=OD=C×D×E　　C为检测物的浓度　　D为检测物的厚度　　E为摩尔因子　　在特定波长下测定每一种物质都有其特定的波长，在此波长下，此物质能够吸收最多的光能量。如果选择其它的波长段，就会造成检测结果的不准确。因此，在测定检测物时，我们选择特定的波长进行检测，称为测量波长。　　但是每一种物质对光能量还存在一定的非特异性吸收，为了消除这种非特异性吸收，我们再选取一个参照波长，以消除这个不准确性。在参照波长下，检测物光的吸收最小。检测波长和参照波长的吸光值之差可以消除非特异性吸收。　　Anthos 酶标仪检测值计算　　仪器中的检测器接收透过被检测物的光能量，转换成二进位数字信号，最大为4095。仪器定义没有光源下的透光值为 0%，没有检测物的透光值为100%。则实际检测中，检测物的透光值均在 0%一100%之间。透光值的计算如下：　　T=(Meas—Min)/(Max—Min)　　其中T为透光值， Meas为检测的二进位数值，Min为在 0%的情况下检测的二进位数值， Max为在100%的情况下检测的二进位数值，举例如下：　　MaX=3600 Mn=20Meas=30　　T=(30-20)/3600-20)=0.0028　　OD=1og(1/T)=1og(1/0.0028)=2.552　　Anthos 酶标仪的中心定位　　仪器会自动对酶标孔进行中心定位，中心定位是要消除酶标孔底的凸凹引起的厚薄不均带来检测的不准确。在对每一个酶标仪进行检测时，仪器其实要进行35个点的测量，选取最中间的5个点的均值为本孔的OD值。　　光源的参照通道　　参照通道是用来校准由于电压不稳或灯泡磨损带来的影响。　　酶标仪的用途和其它提示　　用于ELISA试剂的测定，广泛用于各种实验室，包括临床实验室。　　质量控制　　质量控制是试剂检测的重要因素。请按照试剂说明书的要求进行质量控制。　　空白校正　　有

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课题组有一同学苦于某个实验样品量太多，想用酶标仪代替分光光度计测定OD值。毕竟比色皿一个个测多辛苦，哪有酶标板来得顺畅。我虽然觉得这个想法有点crazy，但一时也找不到太多反驳的理由。毕竟两者原理几乎一样，而且酶标仪似乎功能更加全面；可是如果真的可以完全通用，为什么那些方法和标准里为什么只字不提仪器可以是“紫外-可见分光光度计或连续波长酶标仪”呢？思来想去还是决定先在网上查个意见于是我在本坛挖出了06年的一个帖子 [url]http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20060414/393995/[/url]这里面某些说法就不必再提了，肯定不是答案。比如一个测的是光密度一个测的是吸光度的说法。其实OD和absorbance根本就是一回事（见[url]http://en.wikipedia.org/wiki/Absorbance[/url]）又比如酶标仪用的是滤光片的说法。现在在科研领域，连续波长的酶标仪早就普及了，相对而言医用酶标仪还常有使用滤光片的。我还见过一种说法，说一个是垂直光路一个是水平光路。此话倒是不假，可这种说法无法解决我的疑虑。作为终端用户，关注的只是准不准，符合不符合检测要求，至于实现的技术手段那是黑猫白猫的事情了。不过，在那个帖子的最后一层，我看到这么一种说法[b]“分光光度计测量的是以空白溶液为参比，在约定厚度（一般为1cm）的量池中的相对吸光值。因此不同仪器，不同批次测量的数据具有同样的可比性。而酶标仪测定时其光路长度不确定，也无空白参比，得出的是特定条件下的绝对值，因此即使是同一台仪器，不同测量批次之间也其数据不具备直接的可比性。”[/b]我觉得这种解释很有新意，而且似乎也颇有道理。但遗憾的是，话题直到这里就终结了，于是我想把这个话题继续，大家不妨来讨论一下，到底酶标仪和分光光度计有什么重要差别使得至今没有完全通用呢？

1。方法与原理1。1滤光片波长精度检查及其峰值测定　　1。1。1方法及其衡量的标准：用高精度紫外可见分光光度计(波长精度±0。3nm)对不同波长的滤光片进行光谱扫描，检测值与标定值之差即为滤光片波长精度，其差值越接近于零且峰值越大表示滤光片的质量越好，波长精度越高。　　1。1。2理论基础：酶标仪的滤光片质量好坏，直接影响仪器的灵敏度高低，而滤光片的质量又是以其波长精度及其峰值指标来衡量的，因此滤光片波长精度及峰值是衡量酶标仪的重要参数之一，这在厂家的仪器说明书中虽未曾提及，但在仪器的实际使用过程中，我们发现对滤光片波长精度和峰值进行检查是重要的也是必要的，通过检查可以发现滤光片的波长标定值与实测值的符合程度，可以发现滤光片的质量是否符合要求。　　1。2灵敏度和准确度的监测　　1。2。1方法：　　①灵敏度：精确配制6ug/ml重铬酸钾(干燥)溶液(0。05mo1/L硫酸溶解)，加入200ul重铬酸钾溶液于小孔杯中，以0。05mo1/L硫酸溶液作空白，于450nm(参比波长650nm)测定，其吸光度应≥0。01A。　　②准确度：准确配制：1mmo/L对硝基苯酚(提纯品)水溶液，然后以10mmo1/L氢氧化钠溶液25倍稀释之，加入200ul稀释液于小孔杯中，以10mmo1/LNaOH溶液作空白，于405nm(参比波长650nm)检测，其吸光度应在0。4A(0。395～0。408A)左右。　　1。2。2说明：仪器的灵敏度和准确度主要受两个因素影响：一是滤光片波长的精度，二是检测器的质量。通常情况下，滤光片原因导致仪器的灵敏度和准确度下降比较容易检查；而检测器上海口腔医院质量区别则不易被发现，因此我们采用上述两种标准物质溶液对仪器检测器的质量进行定期监测，从而保证了仪器检测结果的可靠性。对于仪器准确性的测定，我们采用了文献报道的方法，经过多次在不同型号仪器间进行反复测定，结果发现该标准物溶液在450nm波长处有一较为恒定的测定值，由于酶标仪与其它分光光度计的光学原理不完全相同，故是否可以作为评价酶标仪准确性的参考方法还有待同行进一步研究考证。　　1。3通道差与孔间差检测　　1。3。1方法及其表达方法：　　①通道差检测：取一只酶标板小孔杯(杯底须光滑、透明、无划痕、无污染)以酶标板架作载体，分别加入三种不同浓度的甲基橙溶液200ul先后置于8个通道的对应位置，蒸馏水调零，采用双波长(测定波长490nm，参比波长630或650nm，以下均相同)连续测三次，观察其不同通道之间测量结果的一致性可用极差值来表示其通道差。　　②孔间差的测量：选择同一厂家、同一批号酶标板条(8条共96孔)分别加入200ul甲基橙溶液(吸光度调至0。065～0。070A)先后置于同一通道，蒸馏水调零，采用双波长检测，其误差大小用±1。96s衡量。　　1。3。2理论解释：为了提高酶标仪的检测速度，根据96孔酶标板的规格特点，目前大多数厂家的中、高档酶标仪均采用8通道的检测器(部分中、低档酶标仪目前仍采用单通道)。因而它们每个通道的检测能力是不尽相同的，它是仪器内部的固有误差，与所测溶液浓度成正相关(不同检测器对不同浓度溶液的响应能力不同)，所以通道差是衡量酶标仪性能良好与否的重要指标之一；其衡量指标用极差表示，这与厂家推荐的指标是一致的；极差值越接近于零，通道差越小，说明同一样品于不同通道检测结果的一致性越好。　　由于不同厂家、不同批号酶标板之间的质量区别，导致孔与孔之间的检测结果也不完全一致，这与水平光路光度计的比色皿质量是否符合要求一样，因此我们认为孔间差是仪器外部的固有误差，只有准确测知孔间差，并对结果作出对应的校正，才能使检验结果更符合实际情况、更准确可靠；采用的评价指标(士1。96s)也是有利于结果校正的。另外，在设计孔间差测量的操作方法上，我们将200ul甲基橙溶液吸光度调至0。065～0。070A，是充分考虑到加样器的误差(上海求精公司，200ul，士2%CV)，其目的是使加样误差控制在仪器的分辨率(0。01A)以下，这样也就避免了孔间差结果不因加样误差而导致假性增高。　　1。4零点飘移　　1。4。1方法：取八只小孔杯，分别置于八个通道的对应位置，均加入200ul蒸馏水并调零，采用双波长或单波长(490nm)每隔30min测定一次，观察8个通道4h内的吸光度变化。其与零点的差值即为零点飘移。　　1。4。2测量原理：酶标仪的零点飘移通常是很小的，这是由于仪器在读数之前，先要做8个通道的本底测量(Io)。然后再读取样品板的各孔测定值(I)，根据Beer‘slaw光吸收值=1ogl0(Io/I)，每次读数经过如此的自动校正，使得读数误差大大降低，如次的测读方法无疑是非常正确的的；另外有的仪器是应用“DRLDYE”检测试条来进行绝对吸光度的校准的，因此在采用单波长测量时，会导致吸光度的假性增高，这种仪器可采取两种方法进行校正，一是选择一合适的参比滤光片进行双波长测定，二是引入修正参数，即在吸光度模式下单波长读取1个空白孔，其测试值和预测值之差值即为修正参数。所以零点飘移是评价仪器在一定时间内零点吸光度的变化趋势，与波长无关，它间接地反映了仪器内部检测系统在单位时间内处于工作状态下的稳定性及仪器的机械性能情况(连续进板、检测、退出)，故它是评估仪器内部电路系统、光学系统(检测器)及机械系统良好与否的指标。　　1。5精密度评价　　1。5。1方法及评价指标：每个通道三只小杯，分别加入200ul高、中、低三种不同浓度的甲基橙溶液，蒸馏水调零，采用双波长作双份平行测定，每日测定两次，连续测定20天。分别计算其批内精密度、日内批间精密度、日间精密度和总精密度及对应的CV值。　　1。5。2理论根据：1984年美国临床实验室标准委员会发表了EP5一T文件并于1992年进行了第二次修订：临床化学仪器精密度性能的用户评价。该评价方案在生化详解仪、血细胞计数仪等仪器和试剂的评价中得到了广泛的应用，使评价仪器的方法得到了统一；而该法应用于酶标仪的评价在国内外则尚未见有类似的报道，我们采用该法对酶标仪进行系统评价，结果是比较满意的。各指标的意义为：批内精密度系由20d中每天两批，每批两次之差(即“批内”)经统计学处理后所得的结果；日内批间精密度系由20d中每天两批测定结果均值之差(即“批间”)经统计学处理后所得的结果；日间精密度表示20d中每天所测均值的标准差即标准误，反映了每日均值的离散度；总精密度则是对批内、批间和日间精密度进行加权统计的结果。其中以批内精密度和总精密度的应用最为广泛，与传统的批内精密度的计算方法(即对同一标本在同一天内同时重复测定多次)相比，前者更符合实验室的实际情况，更有代表性，也更加合理；而总精密度则客观地全面地反映了实验室的总体变异情况。　　1。6线性测定　　1。6。1方法：精确称取甲基橙配制5个系列浓度的溶液，采用双波长平行检测8次求其均值。计算回归方程、相关系数r及标准估计误差Sy，x，并用±1。96Sy，x表示样品的95%测量范围。1。6。2评价指标解释：线性测定也是评价仪器的重要手段之一，因为它是仪器开展定量工作的基础和前提，某些厂家用标准估计误差s来衡量线性，这与实验室通常所采用的相关系数r是一致的，因此在进行线性评估时，我们同时报告r和Sy，x，目的是为了增强用户与厂家之间的可比性。　　1。7双波长评价　　1。7。1方法：在运用酶标仪检测样品时，由于溶液中的小气泡、杯底的水纹印及划痕、小孔杯之间透明度的区别等等，这些都是仪器测定过程中最常见的干扰因素，而标本中的干扰组份(如溶血、黄道)因洗涤而对测定结果影响则较小，因此我们将文献中的双被长评价方法改为：取同一厂、同一批号酶标板条(每个通道2条共24孔)每孔加入200ul甲基橙溶液(吸光度调至0。065～0。070A)先后于8个通道分别采用单波长(490nm)和双波长(测定波长490nm、参比波长630/650nm)进行检测，计算单波长和双波长测定结果的均值、离散度，比较各组之间是否具有统计学区别以考察双波长清除干扰因素的效果。　　1。7。2说明：双波长测定过程中，由于标本中干扰组份的存在以及小孔杯本身质量等原因，常常导致测定结果的假性增高，而酶标仪提供的双波长测定功能则可以消除干扰组份或因素对测定结果的影响。对于标本中干扰组份的清除，在选择参比波长时，我们