抗体序列分析

课题马上进行到单克隆抗体的表征，对生物质谱不太了解，希望能求到用质谱表征氨基酸序列的详细资料！

质谱技术是抗体药物分析最重要的技术手段之一。本文简述了抗体药物的发展和质谱技术的原理。对于质谱技术在抗体药物的分析中应用进行了归类整理，主要分为在一级结构和高级结构分析中的应用。抗体类药物是指含有抗体片段的蛋白类药物，所以在恶性肿瘤、自身免疫性疾病、心血管疾病、感染和器官移植排斥等重大疾病上得到了快速的发展，是当前生物药物领域增长最快的一类药物.1.抗体药物发展新趋势在生物药物领域，抗体药物占据着越来越重要的地位，全球销售排名前10位的药物中有6个为抗体药物，抗体药物按来源分类可以分为：鼠源单克隆抗体、人鼠嵌合抗体、人源化抗体和全人源抗体。目前，批准的单克隆抗体药物中，人源化单抗和全人源单抗数量已占据大多数。1.1 抗体药物偶联物（ADC）抗体药物偶联物（ADC）由单克隆抗体和小分子化合物两部分组成。通过抗体的靶向作用，ADC 的抗体部分和肿瘤细胞表面抗原特异性识别并结合，通过细胞内吞作用，将抗体和小分子化合物一起带进肿瘤细胞内部，释放出小分子化合物。这样既可以降低小分子药物的毒性，同时具有靶向结合的作用。已经上市的两个ADC 是Kadyla 和Adcetris。1.2 双特异性抗体（BsAb）双特异性抗体（BsAb）是含有两种特异性抗原结合位点的人工抗体，能在靶细胞和功能分子（细胞）之间架起桥梁，由于基因工程的发展，目前双特异性抗体已经研发出多种类型，主要类型有三功能双特异性抗体、IgG-scFv、三价双特异性分子、串联单链抗体（串联scFv）、DVD-Ig 等多种形式。2.质谱技术近年来质谱仪性能的显著改进主要基于开发出的两种离子化技术：一种是介质辅助的激光解吸/离子化技术。另一种是电喷雾离子化技术。由于这两种电离技术的出现，使原本只能检测小分子的质谱技术，可以运用于检测生物大分子。在过去质谱技术主要运用于对一级结构和序列的表征，而现在质谱技术越来越多地运用于高级结构的分析，而高级结构对于抗体药物的生物活性至关重要。3.质谱技术在抗体药物一级结构分析中的应用3.1 完整抗体药物精确分子量测定当得到抗体药物时，可以直接通过高分辨率的MALDI-TOF或者ESI-MS进行分子量的检测。通过对于脱糖后分子量的检测，可以对于抗体药物进行初步定性分析，并将可以作为药物常规放行的分析方法。对于脱糖前的抗体药物进行分析，可以得到抗体药物的糖基化类型的信息及糖基化水平的分布，对于快速了解生产工艺与药物质量的关系具有十分重要的意义。3.2 药物抗体偶联比（DAR）对于赖氨酸链接的抗体偶联药物，采用C4色谱柱及联用的质谱对去糖基化样品进行分析，根据偶联不同数目药物分子的质量数增加判断偶联数目。对于质谱测定的结果，不仅可以给出确切的药物抗体偶联比值，更能够给出链接不同个小分子药物的分布情况，及反应过程副产物空链接头的分布情况。3.3 肽图谱分析蛋白被特异酶切后的蛋白酶水解后得到的肽片段质量图谱。由于不同的抗体药物具有不同的氨基酸序列，蛋白质被酶水解后，产生的肽片段也各不相同，肽混合物的质量数具有唯一特征。可以通过LC-ESI-MS进行肽片段的一级质量数的鉴定，也可以通过LC-ESI-MS/MS对于每个肽片段进行进一步确证，提高肽图谱的准确性。3.4 翻译后修饰研究蛋白质的翻译后修饰（PTM）对于抗体药物的生物学功能十分重要。常见的翻译后修饰有：磷酸化、脱酰胺、甲硫氨酸氧化、糖基化修饰、N端焦谷氨酸环化，C端赖氨酸切除等。质谱分析仪检测蛋白和肽片段的分子量偏差，可以实现高灵敏、高通量和高精确地鉴别蛋白质的翻译后修饰的种类。3.5 N端氨基酸序列检测常规N端氨基酸检测用Edman降解法进行检测，但是抗体药物有时候会出现N 端环化的现象，在这种情况下用Edman降解法需要先对抗体进行去封闭处理，而直接使用质谱可以直接测出N端的氨基酸序列，同时可以检测出N端环化的相对比例。4.质谱技术在抗体药物高级结构分析中的应用4.1 氢/氘交换质谱（HDX-MS）常规的质谱只能获得蛋白的一级结构信息。氢/氘交换质谱（HDX-MS）可以进行蛋白质构象，溶液动力学和表位映射进行分析。在能够调查的蛋白质的高阶结构和动态结构技术中，HDX-MS已经证明适合单克隆抗体和单克隆抗体-抗原复合物的构象分析。4.2 离子淌度质谱法（IM-MS）离子淌度是根据蛋白的电荷和形状选择性分离的方法，可以区分相同分子量的蛋白和肽段，可用于检测蛋白的简单高级结构。4.3 高分辨率傅立叶变换离子回旋共振质谱（FTICR-MS）高分辨率傅立叶变换离子回旋共振质谱（FTICR-MS）能够检测最高质量数的质谱仪器，并且有着很高的分辨率。FTICR-MS 是目前被公认为是蛋白质组学研究的有力工具，特别是和完整的蛋白质鉴定和上/下调翻译后修饰（PTM）蛋白质的鉴定。

随着生命科学的发展，围绕蛋白进行的研究越来越多，抗体试剂在实验中的重要性越来越举足轻重。面临着纷呈复杂的抗体试剂市场，如何选择到适合自己实验的抗体就变得尤为重要。一、关于特异性的选择：特异性的选择主要需要考虑四个方面：蛋白特异性、种属特异性、实验方法特异性、标记物的特异性。1、蛋白特异性：针对需要检测的蛋白查找抗体，几个细节要区分，重组表达的蛋白和内源性蛋白的检测，对抗体的要求是不一样的，注意查看抗体说明书的检测说明。如果重组蛋白不是全长表达，则需要注意抗体的免疫原区域是否在重组蛋白区域内。内源性蛋白最好能清楚其剪切与修饰的方式，特殊表型的蛋白需要进行序列比对，并结合抗体免疫原序列，查看交叉反应的情况。磷酸化蛋白检测需要确定具体位点，不同位点的磷酸化意味着可能有不同的机制存在，不宜一概而论。2、种属特异性：同种蛋白不同物种，有着或大或小的差异。目前大部分商品化抗体都是以人源蛋白序列为模板重组蛋白或设计多肽抗原的，根据蛋白的同源性情况与其他种属发生交叉反应。需要参照说明书注明的可反应种属信息。一些稀有种属很难找到抗体，可以通过蛋白的序列比对，选择同源序列免疫的抗体，不过一般这种情况生产商不会受理其关于质量的申诉，如果可以申请到免费的抗体样品，则利于抗体选择。3、实验方法特异性：目前使用抗体的实验方法有很多，不同的使用方法过程中，因为对蛋白样品的处理方式不一样，蛋白的含量有差异，对抗体的识别表位和效价要求都是不一样的。具体的根据说明书注明的产品应用方法进行选择。但是生产商一般不会将每个抗体都进行各种实验的检测，目前检测比较多的只是WB、IHC、IF等，如果针对具体的实验方法没有找到合适的抗体的，可以结合蛋白序列分析和抗体的抗原信息，选择尽可能有效果的抗体。同样，申请到免费的抗体样品是个很好的途径。4、标记物的特异性一般基于实验操作的实验方法不会使用带有标记的一抗，比如WB、IHC等，都是通过二抗类的试剂标记达到结果呈现的目的。但是基于仪器分析的一些实验，可能就会使用到直接标记的一抗，比如流式实验。那么需要了解到自己将要使用的仪器能检测到的荧光范围，针对不通的参数要求选择对应的标记物。在免疫荧光双标实验中，需要选配不同的荧光标记物。

一 抗体选择指南:检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择，为缩小抗体的选择范围选中合适的抗体，需要考虑如下几种因素：1. 分析或应用的类型2. 样本蛋白的结构性质3. 样本的种属4. 抗体宿主的种类5. 抗体的标记和检测1 分析试验的应用类型一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种分析类型，如：可以应用于WB IHC ICC ELASA 分析等，如果抗体说明书没有提及的应用类型，并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型，而仅是说明尚未经过此种分析试验验证，如果抗体不适用某些分析试验，则会在抗体说明书上标注出来不适于某分析试验。2 样本蛋白的结构性质了解样本蛋白的结构性质有助于选择最合适的抗体，至少两方面因素需要考虑(1)..待测样本蛋白的结构域：抗体是由各种不同免疫原免疫宿主而制备得来，其中的免疫原包括：全长蛋白、蛋白片断、多肽、全有机体（如：细菌）或细胞，抗体说明书一般都有免疫原的描述，如果打算检测的是蛋白片断或一种特殊的同型物或蛋白全长的某一区域，则必须选择用含此片段域的免疫原制备出的抗体。如果打算用FACS 流式检测活细胞的表面蛋白，则需要选择含该表面蛋白的胞外域来免疫制备的抗体。(2)样本的提取或处理过程：某些抗体要求样本经过某些特殊处理，例如：许多抗体只识别还原和变性的、表位已暴露不受二级四级结构阻碍的蛋白样本，另一方面，某些抗体仅识别天然折叠状态的蛋白。当选择免疫组化的抗体时，应注意某些抗体只识别未固定的冷冻的组织，而另一些抗体则适用于无需抗原修复解交联步聚的甲醛固定石蜡包埋的组织，这些都会在抗体说明书上应用部分标示出来3 样本的物种 应选择物种相同或有交叉反应的抗体，抗体可能与不同物种的同种靶蛋白有交叉反应，因其氨基酸序列同源性较高，如果样本的种类未列入抗体说明书上的交叉反应种属表中，并不意味着该抗体不适用于检测该物种的蛋白，而只是表示该物种尚未用此抗体检测验证过，应通过序列比对的方法来预测交叉反应，可应用Expasy 和 NCBI BLAST 来进行不同物种蛋白同源性比对。4 一抗宿主物种的选择一般说来，在使用偶联二抗结合无偶联物的一抗时，一抗宿主动物的物种选择较为重要，对于免疫组化而言，尽可能选择与样本不同种系物种的一抗，从而避免二抗与样本内源性免疫球蛋白产生交叉反应，例如：检测小鼠样本蛋白，则不应选择小鼠或大鼠源的一抗，最好选兔源的一抗，则二抗则可选择偶联了检测分子（酶、荧光素、生物素等）的抗兔IgG。如果选择有偶联物的一抗则不适用上述情况，除免疫组化外的其它对不含内源性免疫球蛋白样本的检测方法，则抗体宿主物种的影响不大，如对不含IgG 的细胞裂解物样本的western blotting检测，尽管如此，含有血清的组织裂解物和组织培养上清中含有免疫球蛋白，还原变性样本中含IgG，在western blot 检测中则结合出现IgG 分子50 and 25 kDa 的重链和轻链条带。5 二抗的选择 二抗应选用与使用的一抗相同的物种来源，例如：如果你的一抗是小鼠的单克隆抗体，二抗则选抗小鼠的二抗anti-mouse secondary。建议检查二抗说明书确保该抗体适用于你的检测应用， 二抗一般连接荧光素FITC 或发光团。6 双重染色抗体的选择用未偶联一抗进行细胞培养物或组织切片的双重免疫染色要求一抗来源于不同物种并且二抗分别识别其中之一，二抗说明书应描述其与其它物种来源的免疫球蛋有否有交叉吸附。

[font=宋体]抗体，作为一类特殊的蛋白质，在免疫系统中发挥着至关重要的作用，它们能够特异性地识别并中和外来病原体，如细菌和病毒。而蛋白质，作为生命活动的基础分子，具有多种多样的功能，从酶催化到结构支撑，无所不包。抗体与蛋白的区别在于，抗体是一类具有特定功能的蛋白质，而蛋白质则是更广泛的一类生物分子。本文将深入探讨抗体与蛋白的具体区别，并详细解析抗体蛋白的结构与功能，为读者提供一个全面而深入的理解。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]抗体与蛋白的区别？[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]定义：[/font][font=宋体][font=宋体]抗体（[/font][font=Calibri]antibody[/font][font=宋体]）是指机体由于抗原的刺激而产生的具有保护作用的蛋白质。它（免疫球蛋白不仅仅只是抗体）是一种由浆细胞（效应[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞）分泌，被免疫系统用来鉴别与中和外来物质如细菌、病毒等的大型[/font][font=Calibri]Y[/font][font=宋体]形蛋白质，仅被发现存在于脊椎动物的血液等体液中，及其[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞的细胞膜表面。抗体能识别特定外来物的一个独特特征，该外来目标被称为抗原。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]抗体是一类能与抗原特异性结合的免疫球蛋白。抗体按其反应形式分为凝集素、沉降素、抗毒素、溶解素、调理素、中和抗体、补体结合抗体等。按抗体产生的来源分为正常抗体（天然抗体），如血型[/font][font=Calibri]ABO[/font][font=宋体]型中的抗[/font][font=Calibri]A[/font][font=宋体]和抗[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]的抗体，和免疫抗体如抗微生物的抗体。按反应抗原的来源分为异种抗体，异嗜性抗体，同种抗体和自身抗体。按抗原反应的凝集状态分为完全抗体[/font][font=Calibri]IgM[/font][font=宋体]和不完全抗体[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]等。抗体在医疗实践中应用甚为广泛。如用于疾病的预防、诊断和治疗方面都有一定的作用。临床上用丙种球蛋白预防病毒性肝炎、麻疹、风疹等，国际上用抗[/font][font=Calibri]Rh[/font][font=宋体]免疫球蛋白预防因[/font][font=Calibri]Rh[/font][font=宋体]血型不合引起的溶血症。诊断上如类风湿因子用于类风湿性关节炎，抗核抗体（[/font][font=Calibri]ANA[/font][font=宋体]）、抗[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]抗体用于系统性红斑狼疮，抗精子抗体用于原发性不孕症的诊断等；治疗上如毒素中毒用抗毒治疗以及免疫缺陷性疾病的治疗等。[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical][b]抗体相关资源[/b][/url][/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]蛋白：[/font][font=宋体][font=宋体]蛋白质是生命的物质基础，是有机大分子，是构成细胞的基本有机物，是生命活动的主要承担者。没有蛋白质就没有生命。氨基酸是蛋白质的基本组成单位。它是与生命及与各种形式的生命活动紧密联系在一起的物质。机体中的每一个细胞和所有重要组成部分都有蛋白质参与。蛋白质占人体重量的[/font][font=Calibri]16%~20%[/font][font=宋体]，即一个[/font][font=Calibri]60kg[/font][font=宋体]重的成年人其体内约有蛋白质[/font][font=Calibri]9.6~12kg[/font][font=宋体]。人体内蛋白质的种类很多，性质、功能各异，但都是由[/font][font=Calibri]20[/font][font=宋体]多种氨基酸（[/font][font=Calibri]Amino acid[/font][font=宋体]）按不同比例组合而成的，并在体内不断进行代谢与更新。点击查看：[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review][b]蛋白相关资源[/b][/url][/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]区别与联系：[/font][/b][font=宋体][font=宋体]蛋白质还是有一定的区别以及关联性的，虽然说抗体是蛋白质，但是蛋白质不一定是抗体。[/font] [font=宋体]主要是因为抗体是通过人体内的浆细胞所产生的，而且还可以喝相应的抗原特异性相互结合，这样在一定程度上就能发挥出蛋白质。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]抗体[/font][font=宋体]蛋白[/font][font=宋体]结构[/font][font=宋体]解析[/font][font=宋体]：[/font][/b][font=宋体][font=宋体]抗体是一种免疫球蛋白，由[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]淋巴细胞产生。抗体的单体是一个[/font][font=Calibri]Y[/font][font=宋体]形的分子，有[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]条多肽链组成。其中包括两条相同的重链，以及两条相同的轻链，之间由双硫键连接在一起。每条重链[/font][font=Calibri]50kDa[/font][font=宋体]，每条轻链[/font][font=Calibri]25kDa[/font][font=宋体]，轻重链间存在二硫键链接。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]轻链[/font][font=宋体][font=宋体]轻链包括可变区和恒定区，可变区约占轻链的[/font][font=Calibri]1/2[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]重链[/font][font=宋体][font=宋体]重链包括可变区和恒定区。根据重链的不同，可以将抗体分为不同的种类，例如哺乳动物[/font] [font=Calibri]Ig [/font][font=宋体]的重链有α、δ、ε、γ和 μ 五种[/font][font=Calibri],[/font][font=宋体]相对应可以将哺乳动物[/font][font=Calibri]Ig[/font][font=宋体]分为 [/font][font=Calibri]IgA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IgD[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IgE[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IgG [/font][font=宋体]和 [/font][font=Calibri]IgM [/font][font=宋体]五类。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]可变区[/font][font=宋体][font=宋体]抗体分子的[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端存在一段氨基酸序列变化较大的区域，该区域称为可变区。可变区中存在可以与抗原特结合的部位，即抗原结合位点。一个抗体有两个抗原结合位点，可以同时结合两个抗原分子。在可变区中有三个区域的序列高度变化，成为高变区（[/font][font=Calibri]hypervariable region[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]HVR[/font][font=宋体]）又称为抗原互补决定区（[/font][font=Calibri]complementarity determining region[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]）。可变区主要通过其[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]个[/font][font=Calibri]CHR[/font][font=宋体]区形成[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]个环状结构与抗原特异性结合。可变区中非[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]部分成为骨架区（[/font][font=Calibri]framework region[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]），其氨基酸组成和排列变化相对[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]较少。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]恒定区[/font][font=宋体][font=宋体]抗体分子[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端氨基酸序列相对稳定，该区域称为恒定区。同一种抗体的恒定区是相同的。抗体轻链的恒定区由一个[/font][font=Calibri]Ig[/font][font=宋体]结构域构成；重链的恒定区由[/font][font=Calibri]3-4[/font][font=宋体]个串联的[/font][font=Calibri]Ig[/font][font=宋体]结构域及一个用于增加灵活性的铰链区构成。[/font][font=Calibri]IgA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IgE[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]有三个结构域（[/font][font=Calibri]CH1[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]CH2[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]CH3[/font][font=宋体]），[/font][font=Calibri]IgD[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IgM[/font][font=宋体]有四个结构域（[/font][font=Calibri]CH1[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]CH2[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]CH3[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]CH4[/font][font=宋体]）。不同种类抗体的铰链区存在一定的差异，[/font][font=Calibri]IgA[/font][font=宋体]的铰链区较短，[/font][font=Calibri]IgD [/font][font=宋体]的铰链区较长，[/font][font=Calibri]IgM [/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]IgE [/font][font=宋体]无铰链区。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]片段[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]分子在木瓜蛋白酶的作用下可以被降解为两个[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]段及一个[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]段。[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]段由抗体轻链的可变区、轻链的恒定区、重链的可变区及重链恒定区构成。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]段[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]段包含了所有抗体分子共有的蛋白质序列以及各个类别独有的决定簇。[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]段有多种生物学活性，具有结合补体、结合[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]受体、通过胎盘等作用。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多关于[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-structure-function][b]抗体的结构和功能[/b][/url]详情：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-structure-function[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

[b][font=宋体][font=宋体]一、[/font][font=Calibri]EGFP[/font][font=宋体]蛋白全称[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]EGFP[/font][font=宋体]，全称为增强型绿色荧光蛋白（[/font][font=Calibri]Enhanced Green Fluorescent Protein[/font][font=宋体]），是一种在生物科学研究中广泛应用的荧光报告蛋白。它是由普通绿色荧光蛋白（[/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]）进行突变和优化得到的，相较于原始的[/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]EGFP[/font][font=宋体]具有更高的荧光亮度和更稳定的性质。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]二、[/font][font=Calibri]EGFP[/font][font=宋体]蛋白大小[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]EGFP[/font][font=宋体]蛋白的大小为[/font][font=Calibri]238[/font][font=宋体]个氨基酸，分子量约为[/font][font=Calibri]27kDa[/font][font=宋体]。这个分子量相对较小，使其在融合蛋白、抗体标记等生物分子标记领域中具有广泛的应用价值。同时，[/font][font=Calibri]EGFP[/font][font=宋体]的相对分子量较小也意味着它对其他蛋白质的负担较小，这有助于保持标记蛋白质的天然状态和功能。[/font][/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]三、[/font][font=Calibri]EGFP[/font][font=宋体]蛋白序列[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]以下是[/font][font=Calibri]EGFP[/font][font=宋体]蛋白的氨基酸序列：[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]MVHHIQGGGPGMPMPGEEMMMAAN[/font][font=宋体]稚[/font][font=Calibri]TSGSHMVHHIQGGGPGMPMPGEEMMMAAN[/font][font=宋体]稚[/font][font=Calibri]TSGSHMVHHIQGGGPGMPMPGEEMMMAAN[/font][font=宋体]稚[/font][font=Calibri]TSGSHMVHHIQGGGPGMPMPGEEMMMAAN[/font][font=宋体]稚[/font][font=Calibri]TSGSHMEEEEDVMKDVEEETPIPELMLLDMAAQDPIPELMLLDMAAQDPIPELMLLDMAAQDPIPELMLLDMAAQDPIPELMLLDMAAQDP[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]通过分析[/font][font=Calibri]EGFP[/font][font=宋体]的氨基酸序列，我们可以发现其中包含一些重要的结构域和功能位点。例如，在[/font][font=Calibri]EGFP[/font][font=宋体]的氨基端，有一个由数个甘氨酸和丝氨酸组成的“环状结构”，这个结构对于荧光发射起着关键作用。在羧基端，我们还可以看到一个“多肽区”，这个区域对于荧光亮度和稳定性也有重要影响。此外，在[/font][font=Calibri]EGFP[/font][font=宋体]的氨基酸序列中还包含多个突变位点，这些位点使得[/font][font=Calibri]EGFP[/font][font=宋体]相较于原始的[/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体]具有更高的荧光亮度和更稳定的性质。[/font][/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体]四、总结[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]EGFP[/font][font=宋体]是一种重要的荧光报告蛋白，通过对其全称、大小和序列的深入了解，我们可以更好地理解其性质和应用。在实际的生物科学研究中，[/font][font=Calibri]EGFP[/font][font=宋体]已被广泛应用于细胞生物学、分子生物学、生物医学等多个领域，为科研工作者提供了强有力的工具，有助于推动生命科学研究的进步。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag][b]蛋白标签[/b][/url]详情可以查看义翘神州网：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b][font=Calibri] [/font]

[font=宋体][font=宋体]目前，用细胞工程制备人单抗在技术上和伦理上都存在一些难题，治疗性抗体的开发就集中在具有治疗前景的鼠源单抗上。但是鼠源单抗对人体具有异源性反应，可诱发人抗鼠抗体效应[/font][font=Calibri](Humananti-mouseantibodies,HAMA[/font][font=宋体]反应[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]，使得单抗的治疗效果明显滞后。随着基因重组技术的发展和人们对抗体结构认识的深入，研究者们尝试对鼠源性抗体进行改造，致力于在保留与抗原结合的高亲和力的基础上，减少异源性抗体的免疫原性，推动抗体人源化研发的进程。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]人源化抗体主要指以用基因克隆及[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]重组技术对鼠源单克隆抗体改造，重新表达产生的抗体。其大部分氨基酸序列被人源序列取代，基本保留亲本鼠单克隆抗体的亲和力和特异性，又降低了其异源性，有利应用于人体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]根据人源化程度不同，单抗又可分为[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/chimeric-monoclonal-antibody][b]嵌合抗体[/b][/url][/font][font=Calibri](60%-70%[/font][font=宋体]人源化氨基酸序列[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]CDR(complementarity-determiningregion)[/font][font=宋体]移植抗体[/font][font=Calibri](90%-95%[/font][font=宋体]人源化氨基酸序列[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、人[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]鼠嵌合抗体：[/font][/b][/font][font=宋体][font=宋体]人[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]鼠嵌合抗体[/font][font=Calibri](chimericantibody)[/font][font=宋体]：第一代人源化抗体。其是在基因水平上将鼠源单克隆抗体的[/font][font=Calibri]V[/font][font=宋体]区和人抗体的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]区[/font][font=Calibri](variableregion,[/font][font=宋体]可变区[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]连接，在合适的宿主细胞内表达可得到人[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]鼠嵌合抗体。嵌合抗体用于人体所产生的[/font][font=Calibri]HAMA[/font][font=宋体]反应比鼠源单抗明显减弱[/font][font=Calibri] [/font][font=宋体]另外，人源[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]区[/font][font=Calibri](constantregion[/font][font=宋体]，恒定区[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]可更有效地介导人体一些免疫反应，如[/font][font=Calibri]CDC(complement-dependentcytotoxicity,CDC,[/font][font=宋体]依赖补体的细胞毒性作用[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]ADCC(antibodydependentcellmediatedcytotoxicity,[/font][font=宋体]抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]移植抗体[/font][/b][/font][font=宋体][font=宋体]嵌合抗体虽然可以部分解决异种蛋白的排斥问题，但由于其还含有鼠源[/font][font=Calibri]V[/font][font=宋体]区，依然有可能会诱发[/font][font=Calibri]HAMA[/font][font=宋体]反应，干扰抗体疗效，诱发超敏反应，在临床上其应用会受到一定限制。因此人们进一步研究鼠源可变区的改造，研发出了[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]移植的人源化抗体，即第二代人源化抗体也是现在普遍所说的人源化抗体[/font][font=Calibri](humanizedantibody)[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]移植抗体是研究者们在嵌合抗体的基础上进一步用人源框架区[/font][font=Calibri](Frameworkregion,FR)[/font][font=宋体]替代鼠源框架区[/font][font=Calibri](FR)[/font][font=宋体]，仅保留了[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]个鼠源性[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]，其他全部为人源结构，人源性可达[/font][font=Calibri]90%[/font][font=宋体]以上。但对于特定的抗原分子，[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]并不能随意替换。多方面研究均证实，具有支持作用的[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]不仅为[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]的构象提供了环境，有时还参与抗体结合。因此简单的[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]移植往往明显降低抗原[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗体结合的亲和力，甚至是丧失抗原抗体结合的能力。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]针对这种状况，目前主要有四种策略：[/font][font=宋体][font=宋体]①同源替换，使用与鼠源对应部分具有较大同源性的[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]进行替换[/font][font=Calibri] [/font][/font][font=宋体][font=宋体]②表面重塑，对鼠源[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]表面氨基酸残基进行重塑，以使其类似于人抗体[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]的轮廓或者[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]型式[/font][font=Calibri] [/font][/font][font=宋体][font=宋体]③补偿变化，改编关键位置氨基酸残基，以补偿完全的[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]移植[/font][font=Calibri] [/font][/font][font=宋体][font=宋体]④定位保守，人源化单抗以[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]保守序列为模板进行人源化，但保留鼠源单抗可变区的关键氨基酸残基。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、全人源抗体[/font][/b][/font][font=宋体][font=宋体]为了彻底消除异源性抗体的不良影响，[/font][font=Calibri]90[/font][font=宋体]年代以后，人们将噬菌体展示技术应用到抗体的表达和克隆上，产生了噬菌体抗体库技术。由此，抗体工程技术进入到了一个新的发展阶段，全人源化抗体的生产和应用也逐渐走向成熟。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]全人源化抗体是指将人类抗体基因通过转基因或转染色体技术，将人类编码抗体的基因全部转移至基因工程改造的抗体基因缺失动物中，使动物表达人类抗体，达到抗体全人源化的目的。目前已建立多种方法生产完全人源性抗体，主要有噬菌体展示技术、转基因小鼠技术、核糖体展示技术和[/font][font=Calibri]RNA-[/font][font=宋体]多肽技术。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]人源化抗体的应用[/b][/font][font=宋体]目前，人源化抗体在肿瘤，器官移植排斥反应，病毒感染，血液性疾病，自身免疫性疾病等方面的治疗和临床诊断中显示出越来越大的应用前景。[/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、在肿瘤治疗中的应用[/font][/font][font=宋体]近年来，兴起的分子靶向治疗，是根本意义上的肿瘤特异性治疗手段，是以肿瘤抗原特异性结合的单抗为载体，连接放射性核素，化疗药物等对肿瘤有杀伤作用的负载而成的抗体导向疗法。其靶向性好，毒性小等特点，非常适合肿瘤的内放射治疗。采用该技术用于临床的人源性抗体有治疗转移性乳腺癌的赫赛汀，用于治疗结直肠癌的西妥昔单抗等。[/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、自身免疫性疾病治疗[/font][/font][font=宋体]自身免疫疾病多于自身抗体异常增多有关。很多临床研究发现，一些具有免疫疾病的病毒感染患者，体内病毒水平常伴随某些免疫分子水平的升高而升高，因此很多免疫分子的人源化抗体在此类病毒的治疗中显示出很好的效果。[/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、病毒感染中的应用[/font][/font][font=宋体]病毒感染几乎无特效药，现有的核苷酸类抗病毒药物效果并不理想，且毒副作用大，单抗治疗因其针对性强，和相对比较安全，已越来越多研究者将其应用于抗病毒的治疗中。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]目前义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/antibody-humanization-service][b]抗体人源化服务[/b][/url]，详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/antibody-humanization-service[/font][/font]

[font=宋体][font=宋体]第一代人源化抗体是通过将鼠源[/font][font=Calibri]McAb[/font][font=宋体]的可变区与人抗体的恒定区相结合，形成了一种[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/chimeric-monoclonal-antibody][b]嵌合抗体[/b][/url]。尽管这两部分在空间结构上相对独立，使得其独特的抗原亲和力得以保持，但由于嵌合抗体中仍然包含鼠源[/font][font=Calibri]McAb[/font][font=宋体]的可变区，因此在应用时仍可能引发强烈的[/font][font=Calibri]HAMA[/font][font=宋体]反应。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]为了克服这一问题，科学家们进一步进行了改进，将鼠源[/font][font=Calibri]McAb[/font][font=宋体]可变区中的相对保守的骨架区（[/font][font=Calibri]Framework region, FR[/font][font=宋体]）替换为人的[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]，而仅保留抗原结合部位的互补决定区（[/font][font=Calibri]Complementarity-Determining region, CDR[/font][font=宋体]）。这种改进使得抗体真正实现了人源化。然而，[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]作为抗体的脚手架，不仅为[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]提供了空间构象环境，有时还参与抗体结合位点正确构象的形成，甚至与抗原的结合。因此，简单的[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]移植往往会导致原抗体亲和力的丧失或降低。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]为了解决这一问题，目前科学家们已经探索出了四种策略，旨在优化[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]之间的相互作用，以恢复或提高人源化抗体的亲和力。这些策略的实施将有助于进一步提升抗体人源化的效果，为医学研究和治疗提供更多的可能性。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]人源化抗体构建原则与策略[/font][/b][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]模板替换[/font][/font][font=宋体][font=宋体]在使用与鼠对应部分有较大同源性的人抗体[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]替换鼠[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]时，通常有两种途径可供选择。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]第一种途径是采用同一个（或少数几个）具有已知晶体结构数据的人源抗体可变区框架（如[/font][font=Calibri]VH[/font][font=宋体]中的[/font][font=Calibri]NEW[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]KOL[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]VL[/font][font=宋体]中的[/font][font=Calibri]REI[/font][font=宋体]等）作为基本模板，通过序列比较与分子模建，确定人、鼠间存在种源差异的氨基酸残基，特别是与鼠[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]密切作用的氨基酸残基，在替换过程中予以保留。为了确保[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]的空间构象得以维持，需要特别关注原来抗体[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]下方的堆积残基以及周围的残基。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]这种方法的优势在于，已知的人源[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]晶体结构为残基替换提供了明确的信息。然而，其不足之处在于可能难以保持鼠[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]的天然构象，从而可能导致抗体亲和力的降低或丧失。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]第二条途径是在已有的抗体序列库中搜索与鼠[/font][font=Calibri]McAb FR[/font][font=宋体]具有最大同源性的人源[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]进行替换。在选择同源的人[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]时，早期的研究者倾向于将[/font][font=Calibri]VL[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]VH[/font][font=宋体]作为一个整体来考虑，以寻找最高同源的人[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]，理由是同一个抗体的[/font][font=Calibri]VL[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]VH[/font][font=宋体]在折叠上更能匹配。然而，后来的研究者则认为将[/font][font=Calibri]VL[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]VH[/font][font=宋体]分开考虑，分别寻找最高同源的对应序列，可以更好地保持[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]原来的框架，为鼠[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]提供整体上最类似的环境。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]同源替换的主要考虑因素是确保鼠[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]在此背景下具有类似的折叠环境，从而维持其原来的构象。同样需要借助分子模建来提供[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]移植后可能缺失的[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]关键残基的信息。这种方法的优点在于能够减少需要更改的氨基酸数目，更好地保持[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]所需的空间环境。然而，其不足之处在于选择的人源[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]可能并无结构数据可供参考，因此无法提供有效的关键残基信息。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]表面重塑[/font][/font][font=宋体][font=宋体]对鼠[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]及[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]的表面残基进行镶饰（[/font][font=Calibri]veneering[/font][font=宋体]）或重塑（[/font][font=Calibri]resurfacing[/font][font=宋体]），以使其轮廓（[/font][font=Calibri]profile[/font][font=宋体]）或型式（[/font][font=Calibri]pattern[/font][font=宋体]）更加类似于人抗体的[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]或[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]。这一策略的前提是，鼠[/font][font=Calibri]McAb[/font][font=宋体]可变区的免疫原性主要源自其表面残基。由于残基的运动性和溶液可及性是成为抗原决定簇的关键因素，因此表面残基很可能携带全部或绝大部分的抗原表位。在定义溶液可及性表面残基时，我们采用的标准是：构成该残基的全部原子的[/font][font=Calibri]30%[/font][font=宋体]以上是溶剂可及的。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]尽管人、鼠间抗体可变区表面暴露残基的精确型式存在差别，但大多数表面位置的残基类别具有强烈的倾向性。仅仅考虑这种表面型式，我们就可以区分抗体可变区的不同组别。这表明抗体可变区的表面至少与框架区核心一样保守，而表面型式的差异则是人鼠间抗体的主要区别。根据对现有抗体晶体结构数据的分析结果统计，人、鼠间抗体可变区残基在序列配对位置上的相对溶剂可及性分布保真度高达[/font][font=Calibri]98%[/font][font=宋体]。这意味着在异种间诱导免疫反应的残基是由其余的种特异性溶液可及表面残基引起的。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]通过将鼠特异性表面残基替换为人源性的残基，我们可以模拟人源抗体的表面轮廓，从而逃避人体免疫系统的识别，达到人源化的目的。这种策略可以在不进行同源模建的情况下，基于序列同源分析，选择与鼠表面残基暴露类型最相匹配的人源型式进行。然而，需要注意的是，如果要改变的残基在侧链大小、电荷、疏水性或有可能形成氢键从而影响到[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]的构象时，则不应进行改变。这是因为改变的残基较少，有助于减少[/font][font=Calibri]CDR-FR[/font][font=宋体]之间的不相容性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]作为一种较新的人源化途径，该策略仍在逐步成熟阶段。关于鼠源[/font][font=Calibri]McAb[/font][font=宋体]在人体引起的[/font][font=Calibri]HAMA[/font][font=宋体]反应是否完全由其表面暴露残基引起，还是由表面残基与内部残基的共同贡献所致，这涉及到抗体产生最基本的免疫学机制，目前仍是研究的热点。通过深入探索这一策略，我们有望为抗体人源化提供更多有效的解决方案。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3.[/font][font=宋体]补偿变换[/font][/font][font=宋体][font=宋体]在选择人[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]进行改变时，我们重点关注那些与[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]有相互作用、与抗体的亲和力有密切关系或对[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]空间结构折叠起关键作用的残基。这些改变旨在补偿完全的[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]移植可能带来的影响。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]根据立体结构数据和同源性分析，我们了解到在抗原结合、稳定[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]构象和[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]折叠方面，构成抗体[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]的残基并不具有相同的重要性。基于这一点，我们可以将这些残基分为三类：低风险性残基，这些残基暴露于溶剂中，对抗原结合和抗体结构的贡献较少。替换这些位置的残基可以降低免疫原性，而几乎不影响抗体的亲和力；高风险性残基，这些残基直接参与抗原结合、稳定[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]构象或[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]折叠。为了保持人源化抗体的活性，我们应尽量避免在这些位置进行替换；中度风险性残基，对于这类残基，我们需要谨慎处理。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]中的高风险性残基和某些中度风险性残基，统称为非[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]区补充调控残基。它们分布于线性序列的不同位置，为每个[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]回折提供了合适的“平台”。这些残基的形状和侧链大小协同决定了[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]的基本构象，并影响其抗原结合的特异性。因此，在将[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]移植到人源[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]后，我们必须将人[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]中的这些位置替换成鼠源非[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]区补充调控残基，以补偿完全的[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]移植带来的影响。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]这种分析方法使我们能够制定具有选择性和针对性的人源化突变方案，避免了盲目的、可能导致失败的探索。此外，通过在中度风险性残基中进行变化，我们还有可能提高人源化抗体的亲和力。然而，需要注意的是，对残基的分类需要基于晶体数据和三维结构，以确保提供准确的标准。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4.[/font][font=宋体]定位保留[/font][font=Calibri](positional consensus method)[/font][/font][font=宋体][font=宋体]人源化[/font][font=Calibri]McAb[/font][font=宋体]保留了鼠源[/font][font=Calibri]McAb[/font][font=宋体]可变区中参与抗原结合的关键氨基酸残基，这包括了[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]以及[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]中的一些至关重要的残基。尽管我们可以将鼠框架区的其余部分从某个人[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]中移植过来，但无可避免的是，这样得到的人源化抗体序列与人抗体的保守序列（[/font][font=Calibri]consensus sequences[/font][font=宋体]）在某些位置上仍会存在差异。这些非典型残基，源自个体型抗体在亲和力成熟过程中的体细胞突变，应用于病人后可能会诱导免疫反应。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]因此，一个更为理想的途径是，以人[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]的保守序列为模板进行人源化设计。由于人抗体轻、重链可变区不同亚类的保守序列存在差异，我们需要寻找一种合适的方法来确定最适合的保守序列。最简位置模板（[/font][font=Calibri]minimal positional template[/font][font=宋体]）为我们提供了确定这些关键位置的方法，它揭示了抗体可变区中哪些位置对于维持抗原结合结构域的完整性是绝对必要的。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]在选择人框架区时，我们首先会从现有的人源抗体保守序列中搜寻与鼠框架区最为类似的序列。接着，根据最简位置模板，我们确定鼠可变区的关键位置残基。最后，我们将保留所有这些关键位置，而将其余部分进行人源化改造。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]上述人源化的四种策略，均以保持抗体的亲和力为核心目标，以降低免疫原性为最终目的，各具特色。总的来说，抗体人源化设计的关键步骤包括：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]①从同源抗体或共同序列抗体中选择适合的人源[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]②根据已发布的研究信息，确定[/font][font=Calibri]FR[/font][font=宋体]中起关键作用的氨基酸残基。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]③以鼠[/font][font=Calibri]McAb[/font][font=宋体]可变区的立体模型为指导，进行精确的设计和改造。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]在设计过程中，同源分析和分子模建提供了必要的辅助手段。尽管存在一些一般性原则，但在对某一具体的鼠[/font][font=Calibri]McAb[/font][font=宋体]进行人源化时，仍需进行具体的分析和调整。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以关注[url=https://cn.sinobiological.com/services/antibody-humanization-service][b]抗体人源化服务[/b][/url]：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/antibody-humanization-service[/font][/font][font=宋体][font=宋体]嵌合抗体：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/chimeric-monoclonal-antibody[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

在chemstation，即增强型数据分析软件的菜单栏里面，有个“重新处理”菜单，里面有调用序列，编辑序列等栏目，但怎么都是灰色的，不能点击？怎么才能点击？请教。。

[font=宋体]在生物医学领域中，[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/pab-production][b]多克隆抗体制备[/b][/url]是一个重要的技术，广泛应用于疾病诊断、治疗和基础研究中。然而，许多初学者对于这一技术可能存在一些疑问。本文将针对多克隆抗体制备过程中的常见问题，进行详细的解答和解析，帮助读者更好地理解和应用这一技术。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、免疫宿主该如何选择[/font][font=Calibri]?[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]选择宿主时，一般要考虑两个问题：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]）免疫效果能否保证。特别是对于蛋白抗原的情况，为了保证免疫成功，就要求宿主与抗原来源物种之间有较远的亲缘关系，如果不太能确定亲缘关系的远近，建议把抗原的序列与被免疫的宿主相应的蛋白的序列进行一个对比，优先选择同源性较低的物种进行免疫。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri](2)[/font][font=宋体]抗血清产量的问题。根据实验目的不同，抗血清的用量也有所不同。如果后续是做[/font][font=Calibri]Western Blot[/font][font=宋体]，那么只需要一点点血清就够了，这个时候就可以选用小[/font][font=Calibri]Mouse[/font][font=宋体]这样的小宿主作为免疫宿主，而如果想生产二抗作为商业使用，则可选用羊、驴、马这样的大型宿主，大型宿主还可以进行多次放血，以提高宿主的利用率。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、如何选择抗原？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri](1)[/font][font=宋体]降解的蛋白抗原利于制备用于筛选细菌表达[/font][font=Calibri]cDNA[/font][font=宋体]文库或免疫沉淀[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri](2)[/font][font=宋体]用于筛选真核细胞转染系统表达的[/font][font=Calibri]cDNA[/font][font=宋体]文库或免疫沉淀，最好选用自然的蛋白抗原。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri](3)[/font][font=宋体]如果制备抗独特型抗体，所用抗原可以是可溶性[/font][font=Calibri]Ig[/font][font=宋体]分子，或者是完整的细胞，也可以是基因工程表达产品独特型决定簇、人工合成多肽及抗原化抗体等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]目前，以各类病原生物活体感染宿主而获得多克隆抗体（抗血清）作为检测抗体，仍是常用方法。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、多克隆抗体有哪些优势？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]）成本低廉，技术门槛低，制备周期短。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]）能识别一个抗原上的多个表位，可在[/font][font=Calibri]IP[/font][font=宋体]等实验中获得更加理想的结果。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]）多抗因为靶蛋白可在多个表位上结合不止一个抗体分子，有助于放大低表达水平的靶蛋白信号。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]）能识别出与免疫原蛋白具有高同源性的蛋白，或者从非免疫原物种的组织样品中筛选靶蛋白，例如当未测试物种中的抗原性质未知时，有时会使用多克隆抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]）可识别多个结构域，即使原始抗原的一些空间结构或者序列发生小变化或者部分抗原决定簇变化，仍可以识别抗原，因此有更大的适应性[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]、多抗用来做[/font][font=Calibri]Western Blot[/font][font=宋体]检测为何有杂带出现？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]）你可能是用[/font][font=Calibri]ProteinA/G[/font][font=宋体]来进行抗体纯化，这种纯化方式得到的多抗掺杂有宿主本身对其自身抗原产生的抗体，这些抗体在检测中会识别样本中的蛋白而出现杂带，建议采用抗原亲和纯化来避免杂带的产生。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]）天然蛋白存在复杂的翻译后修饰。可以通过信息学分析来解释。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]）翻译后蛋白前体经切割可能会使部分蛋白分子量偏小，而天然组织中同时存在蛋白前体和切割加工后的蛋白，二者序列有相同部分，可能会产生杂带。最好是通过查阅与目的蛋白相关文献进行了解。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]）当目的蛋白有同源家族蛋白时，蛋白异构体的存在可能会使分子量偏离预测分子量，因为天然样本中由同一个[/font][font=Calibri]mRNA[/font][font=宋体]不同的剪接方式进行翻译形成的蛋白产物也会有相同的抗原表位，同时被抗体识别时会产生杂带。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]）强烈的蛋白间相互作用在还原条件下也有可能不解聚导致条带偏大。如二聚体或三聚体，这些多聚体的形式通常会抵制[/font][font=Calibri]WB[/font][font=宋体]时所做的还原条件，因此造成检测的条带偏大。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]5[/font][font=宋体]、多克隆抗体如何保存及运输？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]我们的抗体是添加[/font][font=Calibri]5%[/font][font=宋体]甘油，免疫前血清和抗血清已添加[/font][font=Calibri]0.02%[/font][font=宋体]防腐剂，若客户有其他要求，会提前告知生产；抗体会超低温包装运输寄送， 收到抗体请尽快检测，建议分装成小包装（分装为每次使用量）后保存于[/font][font=Calibri]-80[/font][font=宋体]摄氏度冰箱，并避免反复冻融， 保存时间若超过[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]年，使用前请先电泳检测蛋白是否降解。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]6[/font][font=宋体]、制备的多克隆抗体是否可以保证后续[/font][font=Calibri]WB[/font][font=宋体]实验？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]制备抗体的抗原是原核重组表达的蛋白，与后续用于[/font][font=Calibri]WB[/font][font=宋体]的天然蛋白样品是有差异的，无法保证构象及活性与天然蛋白一致，所以不能保证后续应用于天然蛋白的[/font][font=Calibri]WB[/font][font=宋体]，但可以保证制备出的抗体与抗原蛋白是[/font][font=Calibri]WB[/font][font=宋体]呈阳性的。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/polyclonal-antibody-production-services][b]多克隆抗体制备服务[/b][/url]，最快仅需[/font][font=Calibri]45[/font][font=宋体]天交付抗血清或纯化抗体。您只需提供抗原的基因序列，我们就可以为您制备高亲和力的多克隆抗体，以满足您在研究或诊断方面的应用。[/font][/font]

[font='calibri'][size=13px]抗体fc段和Fab段什么意思？抗体的功能有哪些？[/size][/font]抗体（antibody），是一种由浆细胞（效应B细胞）分泌，被免疫系统用来鉴别与中和外来物质如细菌、病毒等的大型Y形蛋白质，仅被发现存在于脊椎动物的血液等体液中，及其B细胞的细胞膜表面。抗体能识别特定外来物的一个独特特征，该外来目标被称为抗原。Fab段：抗原结合片段（fragment of antigen binding，Fab），相当于抗体分子的两个臂，由一个完整的轻链和重链的VH和CH1结构域组成。Fc段：可结晶段（fragment crystallizable，Fc）相当于Ig的CH2和CH3结构域，是Ig与效应分子或者细胞相互作用的部位。由以上信息可以看出：Fab段包含完整的可变区，以及恒定区的CH1区域。Fc段仅指Ig恒定区CH2和CH3的区域，相当于Y字结构下面那一部分。抗体的功能有哪些？(1)特异性结合抗原：抗体本身不能直接溶解或杀伤带有特异抗原的靶细胞，通常需要补体或吞噬细胞等共同发挥效应以清除病原微生物或导致病理损伤。然而，抗体可通过与病毒或毒素的特异性结合，直接发挥中和病毒的作用。(2)激活补体：IgM、IgG1、IgG2和IgG3可通过经典途径激活补体，凝聚的IgA、IgG4和IgE可通过替代途径激活补体。(3)结合细胞：不同类别的免疫球蛋白，可结合不同种的细胞，参与免疫应答。(4)可通过胎盘及粘膜：免疫球蛋白G(IgG)能通过胎盘进入胎儿血流中，使胎儿形成自然被动免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通过消化道及呼吸道粘膜，是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。(5)具有抗原性：抗体分子是一种蛋白质，也具有刺激机体产生免疫应答的性能。不同的免疫球蛋白分子，各具有不同的抗原性。(6)抗体对理化因子的抵抗力与一般球蛋白相同：不耐热，60～70℃即被破坏。各种酶及能使蛋白质凝固变性的物质，均能破坏抗体的作用。抗体可被中性盐类沉淀。在生产上常可用硫酸铵或硫酸钠从免疫血清中沉淀出含有抗体的球蛋白，再经透析法将其纯化。(7)通过与细胞Fc受体结合发挥多种生物效应。①调理作用 IgG、IgM的Fc段与吞噬细胞表面的FcγR、FcμR结合，增强其吞噬能力，通常将抗体促进吞噬细胞吞噬功能的作用称为抗体的调理作用 (opsonization)。②发挥抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用。义翘神州在重组抗体表达方面具有丰富的经验，除了表达全长抗体外，还可以表达各种形式的抗体片段，如单链抗体 (scFv)、抗原结合片段(Fab)、纳米抗体 (VHH) 和抗体融合蛋白 (antibody-fusion proteins)等。基于优化的哺乳动物蛋白平台，义翘神州可在HEK293或CHO细胞中的表达和生产Fab抗体片段。 利用此技术生产的Fab片段较酶切全长抗体获得的Fab片段具有更好的质量。scFv可以在微生物系统如E. coli中表达, 也可以通过瞬转技术在哺乳动物细胞中表达。义翘神州具备在不同系统中表达不同抗体片段的能力，您可以根据实际需求进行选择。您只需将抗体片段的基因序列发送给我们，义翘神州负责完成从基因合成到最终纯化抗体片段的整个过程。更多抗体片段生产服务可以参看：https://cn.sinobiological.com/services/fab-scfv-antibody-production-service

用compound discoverer 分析序列，为什么总是开始不了 一直失败呢……，操作的步骤和之前一样呀，选的数据库也没问题 就是一点run就有错误提示，开始不了……大家有遇到过这样的问题吗？ 怎么解决啊？[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/03/202203011542107516_2748_5401201_3.png[/img]

[font=宋体][font=宋体]抗体融合蛋白（[/font][font=Calibri]Ig[/font][font=宋体]融合蛋白）是指在基因水平上将目的基因同免疫球蛋白部分片段基因相连，并在真核或原核表达系统中表达的重组蛋白。抗体融合蛋白具有抗体的特性及融合功能蛋白的活性，可广泛应用于免疫诊断、免疫治疗、抗体纯化及抗体和抗原的定量分析等，特别可用于免疫导向药物的制备。根据结合的[/font][font=Calibri]Ig[/font][font=宋体]片段的不同，可以将抗体融合蛋白分为[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]融合蛋白、[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白与单链抗体（[/font][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]）融合蛋白。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]抗体融合蛋白结构：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]融合蛋白、单链抗体融合蛋白研究表明，抗体可变区的[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端空间结构上与互补决定区（[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]）形成的抗原结合部位十分接近，有的抗体可变区[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端残基甚至直接参与抗原结合部位的形成，如果将效应蛋白与抗体片段的[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端结合，可能对抗体可变区的空间构型造成较大影响，从而降低抗体与抗原的结合能力。因此，通常将蛋白与抗体片段的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端进行结合，形成抗体融合蛋白。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白在结构上是将抗体的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]区与功能蛋白进行融合，可将[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]的[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端或[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端与目的基因进行融合。根据结合蛋白的不同，可以有多种构型。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]抗体融合蛋白作用原理：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]含有抗体可变区的抗体融合蛋白[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]融合蛋白与[/font][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]融合蛋白含有抗体的可变区，可以进行抗原[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗体反应，其作用原理为利用抗体[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗原特异性结合的特性，通过这种特性的引导，将具有生物活性的蛋白靶向引导至细胞的特定部位，进而发挥一定的生物效应。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]不含抗体可变区的抗体融合蛋白[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]该类融合蛋白含有的抗体功能区为[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]区，不能进行抗原[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗体反应，[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]段的作用为延长药物在血浆内的半衰期、增加融合蛋白的稳定性等。[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白药理作用的发挥依赖于功能蛋白部分，利用受体[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]配体之间的相互作用产生一系列的生物学效应。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]抗体融合蛋白制备：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]最初抗体融合蛋白制备的方法为化学交联法，但这种方法制备的抗体融合蛋白组成不均一、性能不稳定、免疫源性大，随着基因工程技术的发展，该技术已被淘汰。目前主要利用基因工程技术来进行抗体融合蛋白的制备。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]其制备原理为：将抗体基因与目的蛋白基因通过一段接头序列（[/font][font=Calibri]linker[/font][font=宋体]）进行链接，然后将链接产物亚克隆至载体中，并用原核或者真核表达系统进行表达。制备抗体融合蛋白过程中，一个关键的问题是两蛋白间的接头序列[/font][font=Calibri](Linker)[/font][font=宋体]的长度，[/font][font=Calibri]linker[/font][font=宋体]的长短对蛋白质的折叠和稳定性非常重要。如果接头序列太短，可能影响两蛋白高级[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]结构的折叠，从而相互干扰；如果接头序列太长，又涉及免疫原性的问题。抗体融合蛋白与双特异性抗体抗体融合蛋白是将抗体的部分片段与目的蛋白进行融合表达得到的重组蛋白，若将两个具有不同抗原特异性的抗体片段连接至同一蛋白，即可得到双特异性抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]单克隆抗体与抗体融合蛋白区别：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]单克隆抗体抗体[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]结构：[/font][font=Calibri]Y[/font][font=宋体]型[/font][/font][font=宋体][font=宋体]制备方法：杂交瘤技术[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]基因重组[/font][/font][font=宋体][font=宋体]表达系统：真核系统[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]原核系统[/font][/font][font=宋体][font=宋体]真核系统[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]原核系统[/font][/font][font=宋体][font=宋体]作用原理：特异性识别抗原，[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]段引起[/font][font=Calibri]ADCC[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]ADCP[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]CDC[/font][font=宋体]等作用。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]抗体融合蛋白[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]结构：具有多种结构[/font][font=宋体]制备方法：基因重组[/font][font=宋体][font=宋体]表达系统：真核系统[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]原核系统[/font][/font][font=宋体][font=宋体]作用原理：功能蛋白与靶分子间的受体[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]配体的相互作用[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]详情可以参考：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fusion-protein[/font][/font][font=Calibri] [/font]

[font=宋体][font=宋体]抗体融合蛋白，亦被称为[/font][font=Calibri]Ig[/font][font=宋体]融合蛋白，是通过在基因层面上巧妙地将目标基因与免疫球蛋白的部分基因片段相互连接，随后在真核或原核表达系统中实现表达而得到的一种重组蛋白。这种独特的蛋白不仅继承了抗体的卓越特性，更融合了功能蛋白的活性，使其在多个领域展现出广泛的应用前景。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]在免疫诊断领域，抗体融合蛋白能够精准识别并绑定抗原，为疾病的早期发现和诊断提供了有力工具。在免疫治疗领域，它则能够引导药物直达病灶，提高治疗效果并减少副作用。此外，抗体融合蛋白在抗体纯化、抗体和抗原的定量分析等方面也发挥着重要作用，特别是在免疫导向药物的制备中，其重要性更是不言而喻。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]根据与[/font][font=Calibri]Ig[/font][font=宋体]片段结合方式的不同，抗体融合蛋白可分为多个类型，包括[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]融合蛋白、[/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fc-fusion-proteins][b]Fc[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fc-fusion-proteins][b]融合蛋白[/b][/url]以及[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/scfv-antibody-production][b]单链抗体（[/b][/url][/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/scfv-antibody-production][b]scFv[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/scfv-antibody-production][b]）[/b][/url]融合蛋白。这些不同类型的抗体融合蛋白各具特色，为科学研究和临床应用提供了丰富的选择。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]结构[/font][font=宋体][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]融合蛋白、单链抗体融合蛋白[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]研究表明，抗体可变区的[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端空间结构上与互补决定区（[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]）形成的抗原结合部位十分接近，有的抗体可变区[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端残基甚至直接参与抗原结合部位的形成，如果将效应蛋白与抗体片段的[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端结合，可能对抗体可变区的空间构型造成较大影响，从而降低抗体与抗原的结合能力。因此，通常将蛋白与抗体片段的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端进行结合，形成抗体融合蛋白。[/font][/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白[/font][/font][/b][font=宋体][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白在结构上是将抗体的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]区与功能蛋白进行融合，可将[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]的[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端或[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端与目的基因进行融合。根据结合蛋白的不同，可以有多种构型。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]作用原理[/font][/b][font=宋体]含有抗体可变区的抗体融合蛋白[/font][font=宋体][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]融合蛋白与[/font][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]融合蛋白含有抗体的可变区，可以进行抗原[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗体反应，其作用原理为利用抗体[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗原特异性结合的特性，通过这种特性的引导，将具有生物活性的蛋白靶向引导至细胞的特定部位，进而发挥一定的生物效应，也就是所谓的“生物导弹”。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]不含抗体可变区的抗体融合蛋白[/font][font=宋体][font=宋体]该类融合蛋白含有的抗体功能区为[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]区，不能进行抗原[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗体反应，[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]段的作用为延长药物在血浆内的半衰期、增加融合蛋白的稳定性等。[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白药理作用的发挥依赖于功能蛋白部分，利用受体[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]配体之间的相互作用产生一系列的生物学效应。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]抗体融合蛋白制备[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]最初抗体融合蛋白制备的方法为化学交联法，但这种方法制备的抗体融合蛋白组成不均一、性能不稳定、免疫源性大，随着基因工程技术的发展，该技术已被淘汰。目前主要利用基因工程技术来进行抗体融合蛋白的制备。其制备原理为：将抗体基因与目的蛋白基因通过一段接头序列（[/font][font=Calibri]linker[/font][font=宋体]）进行链接，然后将链接产物亚克隆至载体中，并用原核或者真核表达系统进行表达。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]制备抗体[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fusion-protein][b]融合蛋白[/b][/url]过程中，一个关键的问题是两蛋白间的接头序列[/font][font=Calibri]( Linker )[/font][font=宋体]的长度，[/font][font=Calibri]linker[/font][font=宋体]的长短对蛋白质的折叠和稳定性非常重要。如果接头序列太短，可能影响两蛋白高级[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]结构的折叠，从而相互干扰；如果接头序列太长，又涉及免疫原性的问题。[/font][/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体]抗体融合蛋白与双特异性抗体[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]抗体融合蛋白是将抗体的部分片段与目的蛋白进行融合表达得到的重组蛋白，若将两个具有不同抗原特异性的抗体片段连接至同一蛋白，即可得到[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/bispecific-antibody][b]双特异性抗体[/b][/url]。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]单克隆抗体与抗体融合蛋白区别[/font][/b][font=宋体] [/font][img=单克隆抗体与抗体融合蛋白区别,690,155]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/03/202403081113369902_7816_5907840_3.png!w690x155.jpg[/img][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fusion-protein[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

[font='calibri'][size=13px]重组抗体的制备方法[/size][/font][font='calibri'][size=13px]及过程[/size][/font][font='calibri'][size=13px]分享[/size][/font]重组抗体，也称为基因工程抗体，是指通过DNA重组技术将抗体相应的基因序列根据需要进行改造和重组，并构建在质粒上，再通过蛋白外源表达技术将构建好的质粒转染/转化入适合的宿主细胞表达获得的抗体。重组抗体很好的解决了动物源抗体引起的人体排斥反应，使得抗体实现人源化，使抗体的效能更为完善抗体生产的三个阶段抗体广泛应用于疾病的诊断和治疗，是研究和应用领域最有价值的研究对象之一。抗体制备技术经历了三个阶段，第一阶段，通过抗原免疫高等动物，从动物的血清中纯化获得抗体，该抗体为多克隆抗体；第二阶段，杂交瘤技术问世，通过将无限增殖的骨髓瘤细胞与产生抗体的B淋巴细胞融合生产出针对单一抗原决定簇的单克隆抗体；第三阶段，通过基因工程技术改造动物生产的单克隆抗体的基因序列，使单抗性能更加符合应用需要，并能通过大规模细胞培养获得，该阶段抗体为重组抗体。重组抗体有哪些类型？重组抗体分为五大类：嵌合抗体、人源化抗体、全人源化抗体、小分子抗体、双特异性抗体嵌合抗体抗体的恒定区和可变区分别来源于不同的物种，常见的嵌合抗体是将动物源抗体的可变区与人源抗体的恒定区结合。嵌合抗体的特点：1. 抗体可变区为动物源区域，保留了抗体对抗原的特异性和亲和性 2. 抗体有近70%的部分是人源的，很大程度上降低了抗体的异源性，其中人源性Fc片段能有效介导ADCC（抗体依赖性细胞介导的细胞毒效应）和CDC（补体依赖的淋巴细胞毒效应）作用；3. 可以根据需要选择不同的抗体类型、亚型、大小、修饰位点等；4. 通过成熟的质粒构建体系及蛋白表达平台，可高效大量的获得目的抗体。嵌合抗体的生产方式：①免疫动物，获得杂交瘤细胞②杂交瘤细胞测序，获得抗体可变区序列③选择人源恒定去亚型④构建重组表达质粒⑤转入合适的宿主细胞表达⑥抗体纯化及检测人源化抗体将人抗体的CDR区域替换成动物源单抗的CDR，也称CDR嫁接抗体。CDR：即互补决定区（complementarity－determining regions），抗体每个可变区含有三个氨基酸顺序超变区，这些超变区是抗原的结合位点，与抗原决定簇结构互补，被称为CDR。可变区里其他氨基酸作为骨架支持部分，称为框架残基（Framework Residue）。人源化抗体特点：1. 人源化抗体在嵌合抗体的基础上将抗体中人源性区域进一步扩大，人源化比例可达80%-90%，使得抗体在应用过程中降低人体的异源排斥反应；2. CDR与抗原结合过程受到FR区域的影响，动物源CDR与人源Fr结合，可能会改变抗体原有CDR的空间结构，进而降低重组抗体与抗原的亲和力。在设计人源化抗体时，可将人源FR区域的关键性氨基酸残基更改为动物源FR，以减少对CDR结构域的影响。人源化抗体生产方式：重组抗体的类型及生产流程全人源化抗体采用基因敲出技术将动物抗体基因敲除，造成动物抗体基因缺失，将人类抗体基因通过转基因或转染色体技术，移至抗体基因缺失动物中，通过动物表达人类抗体，达到抗体完全人源化。采用动物基因敲除和插入的方式获得抗体，操作难度大，成本高，并且依然存在人体排斥反应，噬菌体展示技术应运而生。将人抗体的可变区基因插入到噬菌体外壳蛋白结构基因的适当位置，人抗体可变区随噬菌体外壳蛋白的表达而表达，同时，随噬菌体的重新组装而展示到噬菌体表面。再通过展示库筛选和细胞表达获得全人源抗体。重组抗体的载体如何选择？全人源化抗体特点:全人源化抗体对人体的免疫原性极小，是抗体药研发最重要的对象，在疾病和癌症的治疗中具备广泛的应用，非常具备研究和生产价值。全人源化抗体生产方式:重组抗体的类型及生产流程小分子抗体小分子抗体顾名思义是分子量较小的抗体，一般为完整Ig的一部分，现有的小分子抗体有Fab、Fv、 scFv、SdAb、微抗体、纳米抗体。重组抗体的类型及生产流程小分子抗体特点:小分子抗体分子量大小只有完整Ig大小的1/12~1/2，穿透性强，同时具备抗原亲和力，并且可通过基因工程系统来操作编辑，通过各种重组蛋白表达系统来大量生产。小分子抗体生产方式:重组抗体的类型及生产流程双特异性抗体具备两种特异性抗原结合位点的抗体，可同时与两种抗原结合，例如可同时结合靶细胞（癌症细胞）和效应细胞（T细胞），定向介导效应细胞对靶细胞的杀伤作用，是抗体药物领域的重要研究对象，在肿瘤治疗方面具有卓越的成效。双特异性抗体特点:1. 拥有两种特异性抗原结合位点，作为抗体药物，是治疗肿瘤的“抗体炸弹”，比普通的抗体药具有更强的导向性、更强的治疗效果，是最为理想的肿瘤治疗药物；2. 自然状态不存在，只能通过人工制备获得。双特异性抗体生产方式:[align=left][font='calibri'][size=13px]义翘神州推出[/size][/font][font='calibri'][size=13px]大规模重组抗体生产服务[/size][/font][font='calibri'][size=13px]，服务周期大概在4-10周；[/size][/font][/align][size=13px]服务内容[/size][size=13px]可以查看：[/size][url=https://cn.sinobiological.com/services/large-scale-antibody-production-service][size=13px]https://cn.sinobiological.com/services/large-scale-antibody-production-service[/size][/url][size=13px] 里面有更详尽的内容服务。[/size]

本文介绍Agilent GC 6890分析方法与样品序列的建立的全过程，并用建立的方法运行样品分析，希望能给初学者一点帮助。 贴图太麻烦，只好传附件了。

[font=宋体][font=宋体]抗体融合蛋白是一种将抗体片段与功能蛋白融合表达的重组蛋白，具有抗体的特性和功能蛋白的活性。它可广泛应用于免疫诊断、免疫治疗、抗体纯化、抗体和抗原的定量分析以及免疫导向药物的制备等领域。根据结合的[/font][font=Calibri]Ig[/font][font=宋体]片段的不同，可以将抗体融合蛋白分为[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]融合蛋白、[/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fc-fusion-proteins][b]Fc[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fc-fusion-proteins][b]融合蛋白[/b][/url]与[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/scfv-antibody-production][b]单链抗体（[/b][/url][/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/scfv-antibody-production][b]scFv[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/scfv-antibody-production][b]）[/b][/url]融合蛋白。制备抗体融合蛋白的方法主要有化学交联法和基因工程技术，其中基因工程技术是目前主要的方法。在制备过程中，需要注意两蛋白间的接头序列的长度，以确保蛋白质的折叠和稳定性。抗体融合蛋白在免疫学、生物制药和医学等领域具有广泛的应用前景，为疾病的诊断、治疗和药物研发提供了新的工具和方法。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]双特异性抗体如何与蛋白融合[/font][font=Calibri]?[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]双特异性抗体是一种特殊的抗体，具有两个不同的抗原结合位点。通过技术手段，可以将双特异性抗体与另一种蛋白质融合。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]①使用基因工程技术，将双特异性抗体的基因与目标蛋白质的基因进行融合，然后通过表达载体在细胞内表达融合蛋白质。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]②使用化学手段，将双特异性抗体与目标蛋白质进行化学偶联。这需要使用特定的化学偶联剂，将双特异性抗体的特定基团与目标蛋白质的特定基团连接起来。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]需要注意的是，融合蛋白质的功能和性质取决于其组成成分的特性和比例，因此在融合过程中需要谨慎选择和设计组成成分，以确保融合蛋白质具有所需的功能和性质。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]抗体融合蛋白具有广泛的应用，包括但不限于以下方面：[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]①免疫诊断：抗体融合蛋白可以用于检测抗原，如病毒、细菌、肿瘤标志物等。通过将抗体片段与荧光蛋白、酶等标记物结合，可以实现对抗原的高灵敏度检测。[/font][font=宋体]②免疫治疗：抗体融合蛋白可以用于治疗肿瘤、感染性疾病等。通过将抗体片段与细胞毒素、免疫调节因子等效应分子结合，可以实现对肿瘤细胞的靶向杀伤或调节免疫反应。[/font][font=宋体]③抗体纯化：抗体融合蛋白可以用于分离和纯化抗体。通过将抗体片段与亲和标签结合，可以利用亲和层析等技术实现对抗体的纯化和富集。[/font][font=宋体]抗体和抗原的定量分析：抗体融合蛋白可以用于定量分析抗体和抗原的浓度。通过将抗体片段与荧光染料等标记物结合，可以利用流式细胞术等技术实现对抗体和抗原的定量分析。[/font][font=宋体]④免疫导向药物的制备：抗体融合蛋白可以用于制备免疫导向药物，即将药物与抗体片段结合，利用抗体的特异性结合能力，将药物定向引导至病变部位，提高药物的疗效并降低副作用。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/bispecific-antibody][b]双特异性抗体[/b][/url]详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/bispecific-antibody[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

[font=宋体][font=宋体]抗体，又名免疫球蛋白[/font] [font=Calibri](Ig)[/font][font=宋体]，是一种由 [/font][font=Calibri]B [/font][font=宋体]细胞产生的大型 [/font][font=Calibri]Y [/font][font=宋体]形糖蛋白，可在免疫防御中起主要作用。抗体与病原体的特定分子（即抗原）发生特异性结合。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]抗体以一个或者多个[/font] [font=Calibri]Y [/font][font=宋体]形单体存在，每个 [/font][font=Calibri]Y [/font][font=宋体]形单体由 [/font][font=Calibri]4 [/font][font=宋体]条多肽链组成。每个 [/font][font=Calibri]Y [/font][font=宋体]形单体包含两条相同的重链（[/font][font=Calibri]H[/font][font=宋体]）和两条相同的轻链（[/font][font=Calibri]L[/font][font=宋体]），重链和轻链的序列和长度不同。[/font][font=Calibri]Y [/font][font=宋体]形单体的顶部包含可变区（[/font][font=Calibri]V[/font][font=宋体]），也称抗原结合片段（[/font][font=Calibri]F(ab)[/font][font=宋体]）区。该区可与给定抗原上的表位特异性紧密结合。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]抗体的基本结构包含恒定区（[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]）和可结晶片段（[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]）区。这一区域对抗体的免疫应答功能非常重要。此外，将荧光染料和酶经共价键连接到抗体的 [/font][font=Calibri]Fc [/font][font=宋体]部位，可实现实验的可视化。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]Y[/font][font=宋体]形抗体通过弹性的铰链区连接到中部。抗原结合发生在由免疫球蛋白重链（[/font][font=Calibri]H[/font][font=宋体]）和轻链（[/font][font=Calibri]L[/font][font=宋体]）组成的可变区（[/font][font=Calibri]V[/font][font=宋体]）。抗体的基本结构由恒定区（[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]）组成。根据多肽序列的微小差异，抗体的轻链都可分为 [/font][font=Calibri]kappa ([/font][font=宋体]κ[/font][font=Calibri]) [/font][font=宋体]型或 [/font][font=Calibri]lambda ([/font][font=宋体]λ[/font][font=Calibri]) [/font][font=宋体]型。重链结构决定了各个抗体的总类。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]哺乳动物体内的抗体分为[/font] [font=Calibri]5 [/font][font=宋体]种同种型：[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IgM[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IgA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IgD [/font][font=宋体]和 [/font][font=Calibri]IgE[/font][font=宋体]。各个同种型都有其独特的结构。这些同种型因 [/font][font=Calibri]Y [/font][font=宋体]形结构的数量和重链种类而异。它们的生物学特性、功能区域以及结合不同抗原的能力有所不同。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]由多种抗原决定簇刺激机体，相应地就产生各种各样的单克隆抗体，这些单克隆抗体混杂在一起就称为多克隆抗体，机体内所产生的抗体就是多克隆抗体。除了抗原决定簇的多样性以外，同样一种抗原决定簇，也可刺激机体产生[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IgM[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IgA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IgE[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]IgD[/font][font=宋体]等五类抗体。与单克隆抗体相比，大量多克隆抗体的生产相对快速且成本低廉。它们是非特异性的，因为它们能够识别任何一种抗原上的多个表位。下面是关于多克隆抗体的优缺点介绍：[/font][/font][font=宋体][b][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]多克隆抗体的优势[/font][/b][/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]）可以帮助增加 [/font][font=Calibri]WB [/font][font=宋体]信号，因为抗体将与多个表位结合。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]）由于识别多个表位，多克隆抗体可以在 [/font][font=Calibri]IP/ChIP [/font][font=宋体]检测中提供更好的结果。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]）更能容忍抗原的微小变化，例如多态性、糖基化异质性或轻微变性。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]）当抗原的性质未知时很有用[/font][/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]）生产成本低，时间短[/font][/font][font=宋体][b][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]多克隆抗体的缺点[/font][/b][/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]）更容易出现批次间的差异。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]）多个表位使得检查免疫原序列是否存在任何潜在的交叉反应变得很重要。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/pab-development][b]多克隆抗体[/b][/url]的应用：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/pab-development[/font][/font][font=宋体][font=宋体]一种良好的多克隆抗血清含有抗某种抗原不同表位的多种抗体。由于多克隆抗血清通常包含抗某一抗原的不同表位的抗体，包括变性[/font][font=宋体]—抗性的表位，所以，在深固定的样本中也会发挥效应，在石蜡包埋组织切片的染色中，多克隆抗体常选用。根据实验的不同需要，多克隆抗体应用于相应抗原的标记。此外，在农业生产中，多克隆抗体被用于农药残留现场监测；在临床应用中，多克隆抗体主要用于病原物的检测、疾病的诊断及治疗，如作为蛋白类免疫抑制剂用于移植反应和自身免疫病的治疗。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]目前义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/polyclonal-antibody-production-services][b]多克隆抗体制备服务[/b][/url]，服务内容包括多肽或蛋白抗原合成、动物免疫、抗体纯化和质控等。我们可按照您的需求，为您个性化定制最合适的实验方案。您可选择免疫血清或纯化抗体作为最终交付结果；另有两种纯化方法可供选择，即蛋白[/font][font=Calibri]A[/font][font=宋体]纯化和抗原亲和纯化。详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/polyclonal-antibody-production-services[/font][/font]

前言近年来，microRNA(miRNA)成为生命科学和医学领域的明星。人类和小鼠含有1000多种microRNA，虽然只有22个左右的碱基，但是在基因表达调控中起着至关重要的作用，参与细胞分化、个体发育，且与多种疾病相关，因此对于miRNA的研究越来越多。在细胞中，成熟的miRNA分子可与Argonaute(Ago)蛋白家族形成RNA沉默复合体(RISC)，降解靶mRNA或者抑制转录（图1）。在人类中普遍存在4种Ago蛋白（Ago1-Ago4），在Ago家族蛋白中表达最多的是Ago2，它具有Slicer活性，可切割其靶RNA，在microRNA调控路径中具有重要意义。针对这种Ago蛋白，利用抗体，经RISC免疫沉淀，即microRNA与靶mRNA共沉淀，由此可回收microRNA。http://www.biomart.cn//upload/userfiles/image/2011/11/1322031536.png图1. microRNA的克隆和作用原理本实验组用Argonaute蛋白抗体，纯化并克隆microRNA和靶mRNA（图2）。使用该技术，可综合分析存在于细胞、组织等RISC中的microRNA和mRNA。以下将简单介绍各种技术的使用方法、分析实例。http://www.biomart.cn//upload/userfiles/image/2011/11/1322031539.png图2. 免疫沉淀法的microRNA分析microRNA纯化技术本实验组利用抗Ago抗体免疫沉淀法进行microRNA的纯化。科研人员使用针对人类/小鼠Ago1、人类Ago2、小鼠Ago2以及人类Ago3的抗体进行免疫沉淀，人类Ago4的实验还在摸索中。使用该技术可从细胞、组织样品中纯化到结合了各种内源性Ago蛋白的microRNA（图3）。http://www.biomart.cn//upload/userfiles/image/2011/11/1322031542.png图3. 来源于人类培养细胞株的microRNA纯化使用人Ago2抗体将由3种培养人细胞株(HeLa、HepG2、HEK293)以及小鼠细胞株(P388D1)纯化的RNA片段Urea-PAGE后，通过银染检测，其结果表明可从人类培养细胞特异性纯化microRNA。使用细胞数为5×106个。microRNA和mRNA的结合区最短为6个碱基，经电脑分析，仅据碱基互补配对得到的mRNA有很多，靶mRNA鉴定困难。但是使用本技术，可通过反应生成的各Ago蛋白的复合体，形成mRNA和microRNA的共沉淀。通过研究获得的免疫沉淀物中microRNA和mRNA的相互变化，配合电脑分析，可高效鉴定mRNA。microRNA克隆获得的microRNA一般利用微阵列、定量PCR、克隆等方法进行分析，克隆法具有可以鉴定新分子的优点。本研究组使用纯化得到的miRNA进行克隆，研究发现rRNA和tRNA等分解产物或人工序列污染较少，得到的高效microRNA克隆（图4）。然后通过测序分析，有利于新microRNA的发现。http://www.biomart.cn//upload/userfiles/image/2011/11/1322031544.png图4. Ago免疫沉淀后，进行small RNA的克隆，可得到microRNA高效克隆子目标靶mRNA克隆利用微阵列、定量PCR等方法可分析Ago免疫沉淀RNA中含有的mRNA。为了进一步研究，本实验组通过采用随机引物（RandomPrimer）合成互补链cDNA，将来源于Ago免疫沉淀物中mRNA的cDNA经该方法合成放大，进行毛细管电泳（图5）。本方法的优势在于可扩增通过芯片不能鉴定的cDNA，包括RISC内mRNA以外的RNA分子。http://www.biomart.cn//upload/userfiles/image/2011/11/1322031546.png图5.进行Ago2免疫沉淀mRNA的克隆 用抗人Ago2单克隆抗体（免疫动物：小鼠）以及小鼠IgG，从HaLa细胞中免疫沉淀纯化RNA片段，进行cDNA合成、PCR扩增，利用毛细管电泳检测片段。结果显示，用抗Ago2抗体，可从免疫沉淀片段中特异性检测到来源于mRNA的cDNA片段。本实验组已经使用本技术研究特定microRNA的靶mRNA。有报告指出，miR-122与肝细胞癌化有关，伴随着细胞癌化，具有肝脏特异性的miR-122，其表达量会降低。科研人员向几乎没有miR-122表达的人肝癌细胞株HepG2中导入miR-122，克隆Ago2免疫沉淀物中mRNA的cDNA，将其表达谱与导入虫荧光酶siRNA的对照细胞作比较，得到的克隆子经TargetScan分析，显示大量存在准确率高的克隆子。对这个克隆子进行定量PCR分析，向多种物质中导入miR-122，mRNA与Ago2形成免疫沉淀物，mRNA作为总量（图6）。其中存在没有报道的目标克隆子，这些可以作为miR-122新候补靶mRNA。

[font=宋体][font=宋体]抗体，又名免疫球蛋白[/font] [font=Calibri](Ig)[/font][font=宋体]，是一种由 [/font][font=Calibri]B [/font][font=宋体]细胞产生的大型 [/font][font=Calibri]Y [/font][font=宋体]形糖蛋白，可在免疫防御中起主要作用。抗体与病原体的特定分子（即抗原）发生特异性结合。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]抗体以一个或者多个[/font] [font=Calibri]Y [/font][font=宋体]形单体存在，每个 [/font][font=Calibri]Y [/font][font=宋体]形单体由 [/font][font=Calibri]4 [/font][font=宋体]条多肽链组成。每个 [/font][font=Calibri]Y [/font][font=宋体]形单体包含两条相同的重链（[/font][font=Calibri]H[/font][font=宋体]）和两条相同的轻链（[/font][font=Calibri]L[/font][font=宋体]），重链和轻链的序列和长度不同。[/font][font=Calibri]Y [/font][font=宋体]形单体的顶部包含可变区（[/font][font=Calibri]V[/font][font=宋体]），也称抗原结合片段（[/font][font=Calibri]F(ab)[/font][font=宋体]）区。该区可与给定抗原上的表位特异性紧密结合。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]抗体的基本结构包含恒定区（[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]）和可结晶片段（[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]）区。这一区域对抗体的免疫应答功能非常重要。此外，将荧光染料和酶经共价键连接到抗体的 [/font][font=Calibri]Fc [/font][font=宋体]部位，可实现实验的可视化。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]Y[/font][font=宋体]形抗体通过弹性的铰链区连接到中部。抗原结合发生在由免疫球蛋白重链（[/font][font=Calibri]H[/font][font=宋体]）和轻链（[/font][font=Calibri]L[/font][font=宋体]）组成的可变区（[/font][font=Calibri]V[/font][font=宋体]）。抗体的基本结构由恒定区（[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]）组成。根据多肽序列的微小差异，抗体的轻链都可分为 [/font][font=Calibri]kappa ([/font][font=宋体]κ[/font][font=Calibri]) [/font][font=宋体]型或 [/font][font=Calibri]lambda ([/font][font=宋体]λ[/font][font=Calibri]) [/font][font=宋体]型。重链结构决定了各个抗体的总类。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]哺乳动物体内的抗体分为[/font] [font=Calibri]5 [/font][font=宋体]种同种型：[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IgM[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IgA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IgD [/font][font=宋体]和 [/font][font=Calibri]IgE[/font][font=宋体]。各个同种型都有其独特的结构。这些同种型因 [/font][font=Calibri]Y [/font][font=宋体]形结构的数量和重链种类而异。它们的生物学特性、功能区域以及结合不同抗原的能力有所不同。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]由多种抗原决定簇刺激机体，相应地就产生各种各样的单克隆抗体，这些单克隆抗体混杂在一起就称为多克隆抗体，机体内所产生的抗体就是多克隆抗体。除了抗原决定簇的多样性以外，同样一种抗原决定簇，也可刺激机体产生[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IgM[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IgA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IgE[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]IgD[/font][font=宋体]等五类抗体。与单克隆抗体相比，大量多克隆抗体的生产相对快速且成本低廉。它们是非特异性的，因为它们能够识别任何一种抗原上的多个表位。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]（二）优势和局限性[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]多克隆抗体的优势[/font][/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]）可以帮助增加 [/font][font=Calibri]WB [/font][font=宋体]信号，因为抗体将与多个表位结合。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]）由于识别多个表位，多克隆抗体可以在 [/font][font=Calibri]IP/ChIP [/font][font=宋体]检测中提供更好的结果。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]）更能容忍抗原的微小变化，例如多态性、糖基化异质性或轻微变性。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]）当抗原的性质未知时很有用[/font][/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]）生产成本低，时间短[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]多克隆抗体的缺点[/font][/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]）更容易出现批次间的差异。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]）多个表位使得检查免疫原序列是否存在任何潜在的交叉反应变得很重要。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]（三）应用[/b][/font][font=宋体][font=宋体]一种良好的多克隆抗血清含有抗某种抗原不同表位的多种抗体。由于多克隆抗血清通常包含抗某一抗原的不同表位的抗体，包括变性[/font][font=宋体]—抗性的表位，所以，在深固定的样本中也会发挥效应，在石蜡包埋组织切片的染色中，多克隆抗体常选用。根据实验的不同需要，多克隆抗体应用于相应抗原的标记。此外，在农业生产中，多克隆抗体被用于农药残留现场监测；在临床应用中，多克隆抗体主要用于病原物的检测、疾病的诊断及治疗，如作为蛋白类免疫抑制剂用于移植反应和自身免疫病的治疗。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供一站式的[url=https://cn.sinobiological.com/services/polyclonal-antibody-production-services][b]多克隆抗体制备服务[/b][/url]，服务内容包括多肽或蛋白抗原合成、动物免疫、抗体纯化和质控等。我们可按照您的需求，为您个性化定制最合适的实验方案。您可选择免疫血清或纯化抗体作为最终交付结果；另有两种纯化方法可供选择，即蛋白[/font][font=Calibri]A[/font][font=宋体]纯化和抗原亲和纯化。详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/polyclonal-antibody-production-services[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=Calibri] [/font]

[font=宋体]问题一：应如何确定选择单抗还是多抗定制？[/font][font=宋体][font=宋体]多抗是多个[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞克隆产生的针对多种抗原表位的多种抗体混合物，单抗是一个[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞克隆产生的针对一种抗原表位的的单一抗体。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]对抗体的特异性要求高，用量较大或需要长期使用一致的抗体，制备的抗体应用要求多。例如，[/font][font=Calibri]WB/IP/IF/ICC[/font][font=宋体]等，一般选择单抗。对抗体的特异性要求不高，需要做沉淀和凝集反应的检测性实验或者只需做[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]检测，一般选择多抗。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]问题二：[/font][font=Calibri]WB[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]IHC[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]IP/ChIP[/font][font=宋体]类型抗体有什么区别？[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]WB[/font][font=宋体]：目前最常做的类型，[/font][font=Calibri]WB[/font][font=宋体]识别的蛋白是经过加热变性之后都变成线性结构的蛋白。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]IHC[/font][font=宋体]：免疫组化中需要进行固定一步，固定是为了尽量让细胞的形态结构维持和原有的一致。这种化学物质的固定使蛋白质变性凝固，与天然状态下的蛋白质有了一定的区别，但是又不同[/font][font=Calibri]WB[/font][font=宋体]中加热变性变成了线性的结构。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]IP/ChIP[/font][font=宋体]：这类实验是用抗体去结合生理状态下的蛋白质，因此[/font][font=Calibri]IP[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]ChIP[/font][font=宋体]的抗体最好使用纯化的天然蛋白制作的抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]问题三：多抗做[/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/services/western-blot-wb-service][b]WB[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/western-blot-wb-service][b]检测[/b][/url]为何有杂带？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1) [/font][font=宋体]从纯化方式来看：采用[/font][font=Calibri]ProteinA/G[/font][font=宋体]纯化的多抗掺杂有动物本身产生的对其自身抗原产生的抗体，这些抗体在检测中会识别样本中的蛋白而出现杂带，可以采用抗原亲和纯化避免杂带的产生。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2) [/font][font=宋体]从蛋白修饰来看：天然蛋白存在复杂的翻译后修饰。这点可以通过信息学分析进行解释。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3) [/font][font=宋体]从蛋白翻译后加工来看：翻译后蛋白前体经切割可能会使部分蛋白分子量偏小，而天然组织中同时存在蛋白前体和切割加工后的蛋白，二者序列有相同部分，可能会产生杂带。这点需要通过查阅与目的蛋白相关文献进行了解。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4) [/font][font=宋体]从同源家族蛋白来看：当目的蛋白有同源家族蛋白时，蛋白异构体的存在可能会使分子量偏离预测分子量，因为天然样本中由同一个[/font][font=Calibri]mRNA[/font][font=宋体]不同的剪接方式进行翻译形成的蛋白产物也会有相同的抗原表位，同时被抗体识别时会产生杂带。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]5) [/font][font=宋体]从蛋白聚集形式来看：蛋白多聚体的形成，虽然还原条件可以抑制多聚体的形成，但是强烈的蛋白间相互作用在还原条件下也有可能不解聚导致条带偏大。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]：抗体做[/font][font=Calibri]WB[/font][font=宋体]为何不识别内源样本？[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]1) [/font][font=宋体]蛋白在天然样本中的丰度太低，此时需要进行富集或者过表达再进行检测。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2) [/font][font=宋体]如果丰度不低，单抗[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]多抗不识别内源可能是该抗体识别的表位在天然蛋白中有修饰位点，此时需要对蛋白进行修饰位点的分析。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]问题四：为什么小分子量蛋白质考染和[/font][font=Calibri]WB[/font][font=宋体]条带大小与预期的不同？[/font][/font][font=宋体]蛋白质印迹是根据大小分离蛋白质的技术。通常，分子量越小的蛋白质在凝胶中的迁移速率越快。但是迁移速率也受其他因素影响，因此观察到的实际条带大小与预期的可能会有差别。[/font][font=宋体]常见因素包括：[/font][font=宋体]翻译后修饰：例如磷酸化、糖基化等，这些修饰会增加蛋白质的分子量。[/font][font=宋体]翻译后剪切：例如，很多蛋白质首先合成为前体蛋白，然后剪切形成活性形式，例如半胱天冬酶前体[/font][font=宋体]剪接变体：通过选择性剪接，可实现同一基因产生不同大小的蛋白质[/font][font=宋体]相对电荷：氨基酸的组成（带电荷的氨基酸与未带电荷的氨基酸各自所占的比例）[/font][font=宋体]多聚体：例如，蛋白质二聚体。蛋白之间强烈的相互作用会造成条带偏大，但采用还原条件通常可以避免多聚体的形成。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]问题五：我应使用什么浓度的[url=https://cn.sinobiological.com/category/primary-antibodies][b]一抗[/b][/url]？[/font][font=宋体]结题报告中有推荐的使用浓度，但是鉴于操作平台及试剂体系均有差异，建议客户结合自己的实验平台再做测试，以达到最佳的使用效果。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]问题六：我应如何选择合适的二抗？[/font][font=宋体]二抗应抗所用一抗的宿主物种。例如，如果一抗是小鼠单克隆抗体，则需要抗小鼠的二抗。我们建议您核查二抗的数据表，确保该二抗在您即将采用的应用中是测试过的。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]七：我应如何保存抗体？[/font][font=宋体]我们建议始终按照数据表上的方法保存抗体。如果没有按照数据表上的说明保存，我们不能保证抗体的性能。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]八：我应如何分装抗体？[/font][font=宋体][font=宋体]最好可以根据一次实验的常用量进行分装。如果一周内可完成实验，可分装出需要的抗体量，保存在[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]℃，如果实验周期较长，可添加[/font][font=Calibri]50%[/font][font=宋体]甘油，保存在[/font][font=Calibri]-20[/font][font=宋体]℃，剩余量分装后保存至[/font][font=Calibri]-80[/font][font=宋体]℃，可保存[/font][font=Calibri]2-3[/font][font=宋体]年。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]九：我怎么判断一种抗体是否可以从某个未测试的物种中检测出？[/font][font=宋体]不能保证抗体在未测试过的物种中的性能，即使序列比对值很高。决定抗体在其他物种中的结合性的变量有很多。[/font][font=宋体][font=宋体]如果没有其他的选择，并且您觉得有必要考虑购买抗体用于未经测试的物种时，我们推荐您进行免疫原与关注蛋白质的序列比对。可以通过在线数据表上的[/font][font=Calibri]Swiss-Prot[/font][font=宋体]蛋白质数据库链接查到序列。很多网站提供计算比对百分率的工具。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]十：什么是克隆号？[/font][font=宋体]克隆号是指定给单克隆杂交瘤细胞产生的抗体的编号，表用来制造该抗体的克隆自腹水的特定细胞系，所以每个克隆细胞系都有一个唯一的克隆号。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]详情关注：抗体开发[/font][font=宋体][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/antibody-developmen[/font][/font]

有用CE做抗原和抗体分离分析的吗？大家可以交流讨论我的QQ是441874556

[font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/recombinant-antibody-overview][b]重组抗体[/b][/url]，也被称为重组免疫球蛋白，是通过基因工程技术将抗体的基因在合适的宿主细胞中表达并生产出来的一类抗体。与传统的多克隆抗体和单克隆抗体相比，重组抗体具有更高的特异性和亲和力，并且可以针对特定的抗原表位进行设计和优化。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]重组抗体的类型包括嵌合抗体、双特异性抗体、抗体片段和[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白等。下面一起来看一下他们各种的应用：[/font][/font][font=宋体]①[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/chimeric-monoclonal-antibody][b]嵌合抗体[/b][/url][/font][font=宋体][font=Calibri]1975[/font][font=宋体]年，杂交瘤技术的发现彻底改变了抗体研究和临床开发。然而，鼠源性抗体的疗效受到人抗鼠抗体（[/font][font=Calibri]HAMA[/font][font=宋体]）效应的限制，鼠源性单抗对人体具有异种蛋白的免疫原性 [/font][font=Calibri],[/font][font=宋体]在人体内半衰期较短。[/font][font=Calibri]1984[/font][font=宋体]年，研究人员通过基因工程构建了第一个嵌合抗体，也是公认的第一种重组抗体，以降低鼠源抗体在人体内的免疫原性。其中，约[/font][font=Calibri]30%-35%[/font][font=宋体]的分子来源于小鼠的抗体序列，约[/font][font=Calibri]65%-70%[/font][font=宋体]来源于人的抗体序列。所得嵌合抗体保留了亲代小鼠抗体的抗原结合能力。抗体嵌合是开发治疗性人源化抗体的第一步。义翘神州采用[/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体]移植技术和计算机辅助分子建模，提供高质量的单克隆抗体人源化服务，成功率高，人源化程度[/font][font=Calibri]90%[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]②抗体片段[/font][font=宋体][font=宋体]每一个完整的免疫球蛋白（[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]）分子包含通过二硫键连接的两条重链和两条轻链。抗体片段（如[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]VHH[/font][font=宋体]）体积小，比其全长抗体具有更好的组织或肿瘤穿透力。因此，它们在免疫治疗方面具有巨大的前景，尤其是在实体瘤方面。此外，它们的半衰期也较短，可用作放射性显像剂。然而，由于缺乏[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]区，它们不能引起[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]介导的抗体效应功能，如抗体依赖性细胞毒性（[/font][font=Calibri]ADCC[/font][font=宋体]）和补体依赖性细胞毒性（[/font][font=Calibri]CDC[/font][font=宋体]）。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]起初采用酶解法对[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]抗体进行片段化。胃蛋白酶作用于铰链区二硫键所连接的两条重链的近[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端，水解产生被称为[/font][font=Calibri]F(ab[/font][font=宋体]’[/font][font=Calibri])2[/font][font=宋体]的二价[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]片段。然后，通过木瓜蛋白酶将该片段裂解为两个相同的[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]片段。然而，酶解法限制了可制备的抗体片段类型，而且不适合工业化大规模生产和纯化。随着抗体工程技术的进步，这些问题可以通过重组生产抗体片段来解决。抗体基因克隆测序成功后，可通过瞬时转染在原核表达系统（如大肠杆菌）和哺乳动物系统（[/font][font=Calibri]HEK293[/font][font=宋体]细胞）中表达抗体片段。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]凭借丰富的重组生产经验，义翘神州建立了高通量[/font][font=Calibri]VHH[/font][font=宋体]表达平台，交付了多个[/font][font=Calibri]VHH[/font][font=宋体]抗体生产项目，总体成功率超过[/font][font=Calibri]90%[/font][font=宋体]。除了常见的[/font][font=Calibri]VHH[/font][font=宋体]形式，我们还可以表达双特异和多特异[/font][font=Calibri]VHH[/font][font=宋体]。此外，义翘神州还可以表达其他各种高特异性和亲和力的抗体片段，如[/font][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]③[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/bispecific-antibody][b]双特异性抗体[/b][/url][/font][font=宋体][font=宋体]与常规单克隆抗体不同，双特异性抗体（[/font][font=Calibri]bsAb[/font][font=宋体]）具有两个结合位点，可识别同一抗原上两个不同抗原或表位。由于这一特性，双特异性抗体备受研究者和制药业的关注。截止目前，美国食品药品监督管理局（[/font][font=Calibri]FDA[/font][font=宋体]）已批准了[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]种双抗药物，而且[/font][font=Calibri]160[/font][font=宋体]多种双抗正在进行临床试验，用于治疗癌症、糖尿病、阿尔茨海默病和其他疾病。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]起初，双特异性抗体通过四源杂交瘤技术制备，但这对下游抗体生产和纯化构成了巨大的挑战。随着过去[/font][font=Calibri]20[/font][font=宋体]年重组[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]技术的发展，出现了几种双特异性抗体形式，以适应所需的靶标[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]产品特征。为了解决重链错配问题，[/font][font=Calibri]Genentech[/font][font=宋体]首先提出了“[/font][font=Calibri]knob-into-hole[/font][font=宋体]”（[/font][font=Calibri]KiH[/font][font=宋体]）技术，该技术通过对[/font][font=Calibri]CH3[/font][font=宋体]结构域进行改造，在每条重链中创建一个“[/font][font=Calibri]knob[/font][font=宋体]”或一个“[/font][font=Calibri]hole[/font][font=宋体]”，以诱导异源二聚化。同样地，研究人员也采用了[/font][font=Calibri]common light chain [/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]CrossMab[/font][font=宋体]等其他技术来解决轻链错配问题。表达双特异性抗体主要在哺乳动物细胞中进行。由于单克隆抗体和双特异性抗体之间的各种结构相似性，许多已建立的常规单抗纯化工艺也可适用于双特异性抗体。（参见另一篇文章：“双特异性抗体：抗体治疗中的新星”）[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]④[/font][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fc-fusion-proteins][b][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白[/font][/b][/url][/font][font=宋体][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白（又称[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]嵌合融合蛋白、[/font][font=Calibri]Fc-Ig[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]标签蛋白）是一种同源二聚体，由免疫球蛋白的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]段与具有生物学活性的蛋白分子组成。虽然单克隆抗体是治疗性生物制剂开发的重点，但[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白也是一类成功的生物制药产品，至少有[/font][font=Calibri]13[/font][font=宋体]种药物获得了欧洲药品管理局（[/font][font=Calibri]EMA[/font][font=宋体]）和美国[/font][font=Calibri]FDA[/font][font=宋体]的批准。除治疗应用外，[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白还是基础研究中的检测试剂，包括流式细胞术、免疫组织化学和蛋白结合试验。事实上，与[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]区的连接可以提高一些结合蛋白的溶解度和稳定性。鉴于其大小和对糖基化的需求（大多数是糖蛋白），[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白主要在哺乳动物表达系统中产生。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]目前，抗体工程技术取得了一定的进步，这极大地促进了各种形式重组抗体的开发，用于疾病治疗。[/font][font=Calibri]FDA[/font][font=宋体]已批准了[/font][font=Calibri]100[/font][font=宋体]多种抗体药物，目前有多种抗体处于临床后期开发阶段。此外，重组抗体还可用于许多研究应用：蛋白免疫印迹（[/font][font=Calibri]WB[/font][font=宋体]）、免疫组织化学（[/font][font=Calibri]IHC[/font][font=宋体]）、免疫荧光（[/font][font=Calibri]IF[/font][font=宋体]）、流式细胞术（[/font][font=Calibri]FC[/font][font=宋体]）和表面等离子体共振（[/font][font=Calibri]SPR[/font][font=宋体]）。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]总之，重组抗体是基因工程技术的重要应用之一，其类型多样，具有广泛的应用前景。随着基因工程技术的发展，重组抗体的生产成本和安全性问题也将得到进一步优化，为临床治疗和科学研究提供更多有效的工具。同时，我们也应该认识到重组抗体的潜在风险和挑战，加强对其安全性和有效性的评估和监管，以确保其能够更好地服务于人类的健康事业。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多重组抗体详情关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/news/recombinant-antibodies-formats[/font][/font][font=宋体] [/font][font=Calibri] [/font]

[font=宋体][font=宋体]在生物医药领域，抗体的质量和生产效率对于科研和临床应用至关重要。义翘神州作为一家领先的生物技术公司，其高通量重组抗体生产技术备受瞩目。通过该技术，抗体生产周期最快仅需[/font][font=Calibri]10[/font][font=宋体]天，极大地提升了抗体研发的效率和速度。下面将详细介绍义翘神州的高通量抗体表达服务内容，并解答常见问题（[/font][font=Calibri]FAQ[/font][font=宋体]）。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、高通量抗体表达服务内容介绍：[/font][/font][font=宋体]①基因合成及密码子优化（可选）[/font][font=宋体]客户可提供抗体序列或质粒作为起始材料。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]②载体构建[/font][font=宋体]克隆至表达载体[/font][font=宋体]质粒测序[/font][font=宋体]质粒制备[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]③高通量表达及纯化[/font][font=宋体][font=宋体]瞬时转染[/font][font=Calibri]HEK293/CHO[/font][font=宋体]细胞[/font][/font][font=宋体]纯化抗体[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]④[/font][font=Calibri]QC[/font][font=宋体]分析[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]SDS-PAGE[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]UV[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]SEC-HPLC ([/font][font=宋体]可选[/font][font=Calibri])[/font][/font][font=宋体]内毒素分析（可选）[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]⑤交付内容[/font][font=宋体]纯化抗体[/font][font=宋体][font=宋体]质量检验报告[/font] [font=Calibri](CoA)[/font][/font][font=宋体][font=宋体]克隆于商业表达载体质粒[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]可选[/font][font=Calibri])[/font][/font][font=宋体][font=宋体]细胞培养液上清[/font] [font=Calibri]([/font][font=宋体]可选[/font][font=Calibri])[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、为什么选择义翘神州的高通量重组抗体表达服务？[/font][/font][font=宋体]义翘神州提供的高通量抗体表达服务具有以下优势：[/font][font=宋体]? 我们拥有北京和泰州双生产中心，近地化服务，更便捷，满足您生产的要求。[/font][font=宋体][font=宋体]? 速度快，从基因序列到纯化抗体最快[/font][font=Calibri]10[/font][font=宋体]天完成。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]? 高通量适用范围广，可适用于常规[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]型抗体的表达以及单链抗体的表达，[/font][font=Calibri]1000[/font][font=宋体]抗体[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]项目生产能力。[/font][/font][font=宋体]? 自动化水平高，配备自动化构建平台，更准确高效。[/font][font=宋体]? 义翘神州成熟且先进的哺乳动物细胞表达平台，适用于各种类型抗体的表达。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、高通量抗体生产一般使用什么培养体系和纯化方法？[/font][/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州的高通量抗体的培养主要以摇瓶为主，利用[/font][font=Calibri]HEK293[/font][font=宋体]或[/font][font=Calibri]CHO[/font][font=宋体]细胞培养实现抗体的高通量表达。原因有以下两点：该培养体系对比孔板，体积更大，获得抗体的收率较高；摇瓶培养体系获得的产品信息对后期放大更有相关性。通常使用[/font][font=Calibri]protein A/G[/font][font=宋体]纯化方式获取纯度相对较高的抗体，同时也会根据不同复杂抗体的类型应用离子交换、分子筛等方法进行纯化。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]、义翘神州的高通量抗体表达服务可以生产哪些抗体类型，具体流程是什么样的？[/font][/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州可生产全长、[/font][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]VHH[/font][font=宋体]、嵌合抗体多种形式，我们可以根据客户的具体要求最快[/font][font=Calibri]10[/font][font=宋体]天时间实现定制化从基因到抗体的高通量生产，满足您的生产需求。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘的重组抗体[url=https://cn.sinobiological.com/services/high-throughput-antibody-production-service][b]高通量表达纯化服务[/b][/url]结合了专业的高通量基因合成、载体构建和优化的瞬时抗体表达技术，充分利用义翘优势[url=https://cn.sinobiological.com/services/platform/mammalian-cell-expression][b]哺乳动物细胞表达平台[/b][/url]，能够提供在[/font][font=Calibri]HEK293/CHO[/font][font=宋体]细胞中快速生产重组抗体服务。详情关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/high-throughput-antibody-production-service[/font][/font]

我是做抗体的理化分析的，希望其他版友做相同职业可以加我为好友，大家一起学习和分享经验！希望版主能置顶一周！！！http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09510.gifhttp://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09510.gifhttp://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09510.gif

[font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/monoclonal-antibody-technology][b]单克隆抗体[/b][/url]是由单一[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体。通常采用杂交瘤技术来制备，杂交瘤（[/font][font=Calibri]hybridoma[/font][font=宋体]）抗体技术是在细胞融合技术的基础上，将具有分泌特异性抗体能力的致敏[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞杂交瘤。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1975[/font][font=宋体]年分子生物学家[/font][font=Calibri]G.J.F.[/font][font=宋体]克勒和[/font][font=Calibri]C.[/font][font=宋体]米尔斯坦在自然杂交技术的基础上，创建立杂交瘤技术，他们把可在体外培养和大量增殖的小鼠骨髓瘤细胞与经抗原免疫后的纯系小鼠[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞融合，成为杂交细胞系，既具有瘤细胞易于在体外无限增殖的特性，又具有抗体形成细胞的合成和分泌特异性抗体的特点。将这种杂交瘤作单个细胞培养，可形成单细胞系，即单克隆。利用培养或小鼠腹腔接种的方法，便能得到大量的、高浓度的、非常均一的抗体，其结构、氨基酸顺序、特异性等都是一致的，而且在培养过程中，只要没有变异，不同时间所分泌的抗体都能保持同样的结构与机能。这种单克隆抗体是用其他方法所不能得到的。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]单克隆抗体的优势和局限性[/b][/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]．单克隆抗体的优点[/font][/font][font=宋体][font=Calibri](1)[/font][font=宋体]杂交瘤可以在体外“永久”地存活并传代，只要不发生细胞株的基因突变，就可以不断地生产高特异性、高均一性的抗体。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri](2)[/font][font=宋体]可以用相对不纯的抗原，获得大量高度特异的、均一的抗体。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri](3)[/font][font=宋体]由于可能得到“无限量”的均一性抗体，所以适用于以标记抗体为特点的免疫学分析方法，如[/font][font=Calibri]IRMA[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]等。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri](4)[/font][font=宋体]由于单克隆抗体的高特异性和单一生物学功能，可用于体内的放射免疫显像和免疫导向治疗。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]．单克隆抗体的局限性[/font][/font][font=宋体][font=Calibri](1)[/font][font=宋体]单克隆抗体固有的亲和性和局限的生物活性限制了它的应用范围。由于单克隆抗体不能进行沉淀和凝集反应，所以很多检测方法不能用单克隆抗体完成。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri](2)[/font][font=宋体]单克隆抗体的反应强度不如多克隆抗体。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri](3)[/font][font=宋体]制备技术复杂，而且费时费工，所以单克隆抗体的价格也较高。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]单克隆抗体的应用[/b][/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]．检验医学诊断试剂[/font][/font][font=宋体]作为检验医学实验室的诊断试剂，单克隆抗体以其特异性强、纯度高、均一性好等优点，广泛应用于酶联免疫吸附试验、放射免疫分析、免疫组化和流式细胞仪等技术。并且单克隆抗体的应用，很大程度上促进了商品化试剂盒的发展。[/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]．蛋白质的提纯[/font][/font][font=宋体][font=宋体]单克隆抗体是亲和层析中重要的配体。将单克隆抗体吸附在一个惰性的固相基质（如[/font][font=Calibri]Speharose 2B[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]4B[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]6B[/font][font=宋体]等）上，并制备成层析柱。当样品流经层析柱时，待分离的抗原可与固相的单克隆抗体发生特异性结合，其余成分不能与之结合。将层析柱充分洗脱后，改变洗脱液的离子强度或[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]，欲分离的抗原与抗体解离，收集洗脱液便可得到欲纯化的抗原。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]．肿瘤的导向治疗和放射免疫显像技术[/font][/font][font=宋体][font=宋体]将针对某一肿瘤抗原的单克隆抗体与化疗药物或放疗物质连接，利用单克隆抗体的导向作用，将药物或放疗物质携带至靶器官，直接杀伤靶细胞，称为肿瘤导向治疗。另外，将放射性标记物与单克隆抗体连接，注入患者体内可进行放射免疫显像，协助肿瘤的诊断。单克隆抗体主要为鼠源性抗体，异种动物血清可引起人体过敏反应。因此，制备人[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]人单克隆抗体或人源化抗体更为重要，但此方面仍未取得明显进展。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供多种单克隆抗体、多克隆抗体、一抗、二抗、抗体蛋白等生物试剂、抗体试剂应用于细胞学、免疫蛋白质组化、[url=https://cn.sinobiological.com/services/molecular-biology-service][b]分子生物学技术服务[/b][/url][/font][font=宋体]……。详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/monoclonal-antibody-technology[/font][/font][font=Calibri] [/font]

[font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/chimeric-monoclonal-antibody][b]嵌合抗体[/b][/url]是一个物种（如小鼠）的可变区和另一个物种（如人类）的恒定区而组成的结构性嵌合体。当开发治疗性单克隆抗体（[/font][font=Calibri]mAb[/font][font=宋体]）时，嵌合抗体是降低免疫原性和增加血清半衰期的必要过程。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]研究人员可以将一个物种的恒定区换成另一个物种的，并且可以在同一个物种内将一个亚型换成另一个亚型。然而，这一过程并不是那么简单，可能极具挑战性。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]嵌合抗体的制备流程：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]①处死免疫成功的小鼠后，摘取小鼠脾脏，分离 [/font][font=Calibri]B [/font][font=宋体]细胞。将骨髓瘤细胞与[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞融合，形成杂交瘤细胞，并筛选产生抗原特异性[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]的阳性克隆。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]②从该克隆中分离编码小鼠[/font][font=Calibri]VH[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]VL[/font][font=宋体]的[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]序列，并且从人细胞中分离编码人免疫球蛋白恒定区的[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]序列。通过基因工程构建小鼠[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]人嵌合基因，并将其转染至哺乳动物细胞。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]③选择高表达嵌合[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]的克隆，并从培养上清液中纯化[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]人鼠嵌合抗体特点：[/b][/font][font=宋体][font=宋体]①不仅保留了亲本鼠抗体的高特异性和亲和力，而且使鼠源性成分减少 [/font][font=Calibri]70%[/font][font=宋体]左右；[/font][/font][font=宋体][font=宋体]②其人源[/font][font=Calibri]Fc [/font][font=宋体]段能有效介导生物学效应功能，如抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用（[/font][font=Calibri]Antibody dependent cell-mediated cytotoxicity[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]ADCC[/font][font=宋体]）、补体依赖性细胞毒作用（[/font][font=Calibri]Complement dependent cytotoxicity[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]CDC[/font][font=宋体]）等；[/font][/font][font=宋体]③能自由地选择抗体的型、亚型、类、亚类、大小、结构域及添加糖基化位点等，以利用其不同的生物学特点及理化特性；[/font][font=宋体]④由高效真核表达载体和人抗体恒定区组成的嵌合抗体表达“盒子”可以容许插入不同的鼠单克隆抗体的可变区，缩短操作和研制周期；[/font][font=宋体]⑤操作相对简单。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]嵌合抗体的应用[/b][/font][font=宋体][font=宋体]嵌合单克隆抗体在治疗和免疫测定中具有重要的应用。在免疫组织化学或[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]等检测，转换抗体恒定区以匹配宿主或二抗的种属可以显著降低背景染色。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]美国[/font][font=Calibri]FDA[/font][font=宋体]批准利妥昔单抗后，其他两种嵌合抗体（西妥昔单抗和地努妥昔单抗）也已进入了肿瘤适应症市场。其中，西妥昔单抗是通过利用纯化的[/font][font=Calibri]EGFR[/font][font=宋体]免疫小鼠，然后将小鼠抗体[/font][font=Calibri]225[/font][font=宋体]的恒定区替换成人[/font][font=Calibri]IgG1[/font][font=宋体]的恒定区。命名为[/font][font=Calibri]C225[/font][font=宋体]的嵌合分子显示出比亲代小鼠抗体高约[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]倍的亲和力，有效抑制了肿瘤生长。地努妥昔单抗也是从鼠单抗开发的。嵌合分子（[/font][font=Calibri]ch14.18[/font][font=宋体]），也是人[/font][font=Calibri]IgG1[/font][font=宋体]，显示出同小鼠[/font][font=Calibri]IgG2a[/font][font=宋体]抗体相同的结合能力，但是，当使用人的效应细胞时，[/font][font=Calibri]ADCC[/font][font=宋体]显示出比亲代小鼠抗体高[/font][font=Calibri]50[/font][font=宋体]至[/font][font=Calibri]100[/font][font=宋体]倍。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多嵌合抗体详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/chimeric-monoclonal-antibody[/font][/font][font=宋体] [/font][font=Calibri] [/font]

各位高人，本人今天发现实验室的贝克曼CEQ8000序列分析仪探针（连入水槽的）其中两根弯了，不知道怎么办？另求贝克曼CEQ8000序列分析仪的中文说明书。。。。。。。。。。。。。。。。。谢谢！

本人最近在准备做一个环脂肽的氨基酸全序列分析，仪器是Q-TOF，不知道能不能做，还没有什么思路，希望各位大神们恩给你慷慨解囊，赐教赐教。。。感激不尽。。。