组织包埋

包埋盒五大使用方法1.取材时将组织块放于写有该组织编号的一次性包埋盒中,上盖(不锈钢)脱水盒盖,放入脱水篮中进入脱水机或手工脱水。 2.将包埋底模存于烤箱的下层(或单独的一层)。 3.包埋时将脱好的组织连同脱水篮也放在内有包埋盒底模的同一烤箱内。打开脱水盒盖,将脱水盒盖放在一边,根据组织块大小选取包埋底模,用镊子在酒精灯上加热,夹取组织块放于底模内,上覆装组织脱水的写有该组织块编号的一次性包埋盒,倾倒石蜡少许,以不溢出为宜,少置片刻。 4.把冰箱冷冻室内的冰盒取出,将包埋好的蜡块,放于冰盒冷冻片刻约5min10min,冬季时间短,夏季时间长些,将蜡块从底模中取出,收集其余蜡块,将包埋盒两边的多余蜡除去,即可切片。 5.包埋盒底模及脱水盒盖分类整理好重新放入烤箱备用,本科把脱水盒盖装在脱水篮中,在下一次用之前用热水将蜡冲去即可再用。 通过这种方法不仅利于蜡块的保存,也节约了石蜡。

常用包埋剂及配方目前在电镜技术上使用的包埋剂种类颇多，但普遍使用的是环氧树脂，在免疫和细胞化学技术中还会使用到丙烯酸树脂。 环氧树脂（epoxy resin） 环氧树脂是一类具有末端环氧基的甘油多聚酯。它的分子中有两种反应基团，即环氧基团（epoxide group）和氢氧基团（hydroxyl group）。其末端基团易与含有活性氢原子的化合物如胺类（如DMP-30，DMAE，乙二胺等，又称催化剂或加速剂）反应，使单体首尾相连接形成长链聚合物。此外，在单体中的氢氧基团能与有机酸酐（如MNA，DDSA，九烷基琥珀酸酐，NSA等，又称硬化剂或固化剂）结合，使单体分子形成横桥。所以，环氧树脂以单体渗入细胞组织，而这种单体在一定的温度条件下，在硬化剂和加速剂作用下，就形成一个非常耐溶剂和耐化学腐蚀的交链稳定的三维空间聚合体。为了改善聚合体（包埋块）的切割性能，还会在环氧树脂包埋配方中加入增塑剂，以调节包埋块的韧性。 环氧树脂包埋剂对细胞微细结构有较好的保存性能，聚合后体积缩小较少，而且在真空中能经受较长时间的轰击。但它的操作不太方便，反差较弱。 环氧树脂的型号较多，常用Epon812，Spurr树脂（ERL-4206）等，现介绍最常用的两种环氧树脂 Epon812包埋剂 Epon812是一种进口树脂，它是一种长链的脂肪族环氧化合物，是目前国际上普遍采用的一种优良包埋剂，粘度为150-210cP。该包埋剂的配制方法甚多，但一般都按1961年Luft提出的配方进行。其配方如下： A液：Epon812 62ml DDSA 100ml B液：Epon812 100ml MNA 89ml上述配方若改变A液和B液的比例则可调节聚合块硬度，A液多则软，B液多则硬。通常冬天使用$A:B=2:8$；夏天使用$A:B=1:9$，可视组织的硬度和气候不同选择其比例。配制时可先分别配制A液和B液，然后将A液和B液按一定比例混合后，再加入$1\%-2\%$的加速剂，边加边搅拌，使其充分混合。为了方便操作，也有人将Epon812，DDSA，MNA三种成分按一定比例直接混合使用。Epon812的聚合温度为：37℃过夜，60℃24-36小时。 根据南方地区的气候条件，可用下列配方：Epon812 51ml DDSA 12ml MNA 37ml DMP-30 1.8-2ml聚合条件&室温过夜，60℃8-12hDDSA是十二烷基琥珀酸酐（Dodecenylsuccinic anhydride）的简称。它是一种可得到软性包埋块的长链脂肪族分子。 MNA是甲基内次甲基二甲酸酐（Methyl Nadic anhydride）的简称，又称六甲酸酐，它有两个链环，能获得较硬的包埋块。 DMP-30是2，4，6-三（二甲基氨基甲基）苯酚（2，4，6-Tris（dimethylaminomethyl）phenol）的简称。它能加速固化过程。 Spurr树脂（ERL-4206包埋剂） 这是1969年由Spurr推荐使用的包埋剂，所以也称Spurr树脂。它含有两个环氧基，是一种低粘度的环氧树脂。由于具有粘度低的特点，所以近年来一些实验室已开始使用它。其配方可按下表中各种成分的比例，即可获得不同性能的包埋块。其配方如下： Spurr树脂包埋剂配方 成分（g）标准硬度 硬 软 快速聚合配方 缓慢聚合配方 VCD 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 DER-736 6.0 4.0 7.0 6.0 6.0 NSA 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 DMAE 0.4 0.4 0.4 1.0 0.2 聚合时间70℃（h） 8 8 8 3 16 混合时间（天） 3-4 3-4 3-4 2 7 VCD是二氧化乙烯环己烯（vinylcyclohexene dioxide）的简称。它的分子小，粘度低，聚合块硬度大。 DER-736是diglycidyl ether of a polypropylene glycol的简称。它属于脂肪族，分子小，有低粘度性质，可调节包埋块的硬度。 NSA是nonenylsuccinic anhydride的简称。它是一种特殊的硬化剂，应避免暴露在潮湿的大气中，以防环氧或酐链的水解作用。 DMAE是dimethylaminoethanol的简称。它是催化剂，增加催化剂的比例，可以缩短聚合的时间。 Spurr树脂最终硬度可用DER-736的量来调节。配制时，先把前三种成分混合后，最后才加入DMAE，但从开始到混合完成，达到淡黄色状态需3-7天。此包埋剂在$70\,^{\circ}\mathrm{C}$，一般8小时即可完全聚合，用陈旧的包埋剂时，则聚合时间会减少。因Spurr树脂嗜氧，聚合时不要加盖。包埋剂最好是用新鲜配制，但为了方便，可预先配制好保存在低温和防潮的环境中。Spurr树脂与Epon812树脂相比粘度低，操作方便，但毒性比Epon812树脂大，所以操作时要更加小心，此外，Spurr树脂各成分间的分子量大小差异较大，在组织中的渗透速度不一，容易个别成分造成渗透不均，而导致局部聚合不完全，染色效果不佳。 丙烯酸树脂（acrylic resin） 丙烯酸树脂无色透明的，由丙烯酸衍生物聚合而成。丙烯酸单体粘度低，可以在低温下渗透及聚合，因而能满足免疫和细胞化学技术低温操作的要求。其聚合方式有两种，热聚合和紫外线照射聚合。但它对脂类等成分的抽提比环氧树脂严重，为此它也需要在较低的温度下使用才可能减少抽提作用。此外，聚合前后丙烯酸树脂的体积变化较环氧树脂大（体积大约收缩$10-20\%$），并且它在电子束的照射下稳定性比环氧树脂低，放热的聚合过程可引起组织细胞结构的损伤，致敏性也比环氧树脂强，使用时要小心防护。一般来说，除了免疫和细胞化学技术外，超微结构的研究并不推荐使用它。在电镜中使用较多的丙烯酸树脂有伦敦白胶（LR White）和Lowicryl系 列的树脂。 伦敦白胶（LR White） 伦敦白胶含有7种不同的丙烯酸单体和2种增塑剂，引发剂是BPO（dibenzoyl peroxide），加速剂为N，N-dimethyl paratoluidine，但具体的配方和成分没有报道。它的粘度低，渗透能力强，可用于较大的组织块或致密的组织，由于它有一定的亲水性，方便水性染料进入，染色效果佳，使用非常方便，通常买回来的是已经混合好的试剂，它的有效期仅为12个月。伦敦白胶可以微溶于水，因而可以采用部分脱水方案，但不能使用丙酮作为脱水剂。氧气会抑制聚合反应的进行，因而聚合时要在模块中注满包埋剂并盖紧盖子。为了方便运输和储存，也有未加BPO的伦敦白胶（uncatalysed LR White）出售，这种试剂需要加入催化剂（9.9g催化剂/500gLR White）充分搅拌并室温放置24小时以上才能使用。Lowicryl系列包埋剂 Lowicryl系列包埋剂是专为低温包埋设计的包埋剂。它有两种类型：一种是极性树脂，K4M和K11M；另一种是非极性树脂，HM20和HM23。极性树脂亲水，使样品保存在一个水性的环境中从而较少蛋白质变性，且染色的效果较好。而非极性树脂的切割性能比较好。两种树脂通常都在隔绝氧气的情况下低温紫外线照射聚合。Lowicryl系列包埋剂全部以试剂盒的形式出售，有详细的说明书提供参考。

请问用于做植物材料透射电镜的树脂包埋块所用的硅胶包埋板哪里有卖？

微胶囊包埋技术是近些年发展起来的一项新技术，广泛用于纺织、香料、化妆品、印染、食品等工业部门。其原理就是将固体、液体或气体物料包埋在以微米计的微型胶囊中，在一定的条件下控制被包埋的物料预期释放出来。通过这种包埋和释放过程，一方面可以在未释放前保护物料，还可以通过释放方式、时间、速度和量的控制使物料发挥充分功能。 由于微胶囊化技术的独特性能优势，目前已广泛运用于各行各业，食品领域，其常用于包埋食品工业中的活性成分，能有效稳定包合物物化性质，减少氧化、钝化光敏性及热敏性，降低挥发性。化工领域，微胶囊化技术可用于降低客体分子的刺激性、减缓其释放速率，如降低洗衣粉的刺激性，延长空气清新剂香味持续时间等，与我们的生活息息相关。[b][color=red]为大家带来以下详细的微胶囊包埋技术的行业应用文章。敬请关注：[/color][/b]（一）微胶囊包埋技术及其在食品中的应用（二）微胶囊包埋技术在保健品中的应用（三）微胶囊包埋技术在食品包装中的应用（四）微胶囊包埋技术在益生菌中的应用（五）微胶囊包埋技术在油脂中的应用（六）微胶囊包埋机在调味品中的应用（七）微胶囊包埋技术在产品研发及生产中的应用（八）微胶囊包埋技术在食品中的应用（九）微胶囊包埋技术在药品生产过程中的应用 ……

在定量过程中，常常遇到大峰包住小峰的情况，即包埋峰，那么如何使用GC-MS来定量包埋峰呢？欢迎大家给点建议

大家新年快乐!有个问题想问问。用SPURR树脂包埋植物材料的时候,发现包埋块靠下一小薄层有些脆,但上层就很好.是吸水的原因么?包埋过程中需要除湿机除湿吗?需要带口罩防水气吗?

双歧菌种被淀粉包埋，将菌种按照4789.34溶解后，用显微镜查看样液中有成团的现象，就是淀粉粘连在一起导致菌种没有完全分散，怎样破解淀粉包埋的这种情况呢。之前使用α-淀粉酶将样液进行酶解1h，效果不是很显著

请问 包埋做什么用？。如果看断面的扫描，用包埋剂来封吗？

请教各位高手，怎么去除包埋过程中的气泡问题？我用的是618环氧树脂，固化剂是乙二胺！说明书上说加《8％的固化剂，但是固化后有很多气泡，不知为何！请各位大侠指点一二，小弟不胜感激！！

大家好！请问北京哪里可以做树脂包埋切片？我有两个薄膜样品，想做一下实验。多谢！

我是新手请问包埋用什么类型的树脂？（最好是没气泡，可以打磨）谢谢

向大家请教几个问题，本人刚接触超薄切片，要把一种常温下是脆性固体的材料包埋做超薄切片，现在关于包埋剂的选择有些困难，因为做包埋块有几个问题：1）材料本身很脆，常温下是块状固体，直接切肯定会碎掉，必须要包埋，但是担心粉末状态下与树脂包埋剂混合会混合得不均匀；2）如果液相状态下混合，材料本身需要加热到290~300℃才会液化，这么高温的液体与包埋剂混合，不知道哪种包埋剂会承受；3）也在网上查了一些，像M-Bond 610胶，G1胶貌似都可以，但是关于这两种包埋剂的一些性能和具体适用介绍很少或是不太详细，我本人刚接触这些东西，实在是菜鸟，想请教一下这方面比较熟悉的朋友们，大家能不能给我指点一下，先谢谢了！

想把试剂包埋在一种外壳当中，使用其反应时缓慢释放出来，请问有没有什么好的包埋剂？？？

用环氧树脂包埋PAN基碳纤维原丝和碳纤维时，如何配比树脂比例，已经包埋条件？

要观察纤维束的截面,用树脂包埋,然后切片,请问上海哪儿有条件可以做?

这类的包埋剂有专门销售的吗？还是需要自己配制的？

环氧树脂包埋测试样品对电镜有污染吗？有的话具体有哪些，帮忙解答一下谢谢！

求助，想观察纤维的横截面，谁知道纤维的包埋怎么做???谢谢！！

请教含氧化铁的高分子材料用什么树脂包埋？如果高分子材料中含银，又该采用何种方法包埋？

谁有生物包埋剂 Spurr树脂使用说明书？希望共享一份，谢谢

有些郁闷阿，最近的一个样品竟然测出了Cl。基本信息是这样的 ：粘土，十六烷基三甲基干法改性 包埋制样后上机测试 PS：我想了解一下包埋制样的具体过程，是不是有什么新东西填进去阿？盼望回复，谢谢各位！

各位老师，你们好。我用高能球磨法制备了TiAlNb粉末，粒度在10微以下，现在拍一下透射电镜，然后测试方说要包埋切一下才行，我想请教一下金刚石刀能不能切啊，因为他们没有做过这种粉末，他们也不知道，各位老师请解答一下，谢谢了感谢各位老师

大家好，我们实验室需要对固体催化剂（主要成分是氧化铝）、分子筛进行超薄切片，请对这种金属氧化物材料选用哪种包埋剂、环氧树脂为好呢!还没有用过，请各位朋友给予指点，最好能给出厂家、牌号等信息，谢谢！！

【序号】： 1002-0306(2004)05-0099-02【作者】： 庄桂东, 朱玉强, 何熹, 马文全, 迟玉森, 【题名】：微胶囊包埋技术在速溶苹果粉的研制中的应用 【期刊】： 食品工业科技【年、卷、期】：2004年 第05期【全文链接】：无急需该资料，因为是新手没有钱，否则就悬赏了。多谢大侠们了！

[font=宋体][font=宋体]组织芯片[/font][font=Calibri](tissue chip)[/font][font=宋体]，也称组织微阵列[/font][font=Calibri](tissue microarrays)[/font][font=宋体]，是生物芯片技术的一个重要分支，是将许多不同个体组织标本以规则阵列方式排布于同一载体（使用载玻片最多）上，进行同一指标的原位组织学研究。该技术自[/font][font=Calibri]1998[/font][font=宋体]年问世以来，以其大规模、高通量、标准化等优点得到大范围的推广应用。其最大优势在于，芯片上的组织样本实验条件完全一致。节省时间、节省试剂更是显而易见的。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]TMA[/font][font=宋体]构建原理可以概括为以下四个步骤：[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]选取待研究的组织。人们利用组织芯片技术对人体各组织均有研究，包括肝脏，前列腺，心脏，乳房等等，据相关数据显示，在大脑组织中的应用最多。医学上常选取一些病变器官进行研究。根据制作方法来分，微阵列主要有石蜡包埋的组织微阵列和冰冻微阵列两种。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]经检测后标记出待研究的区域。组织微阵列的检测仪主要是高性能显微镜、荧光显微镜或共聚焦荧光显微镜。适用的检测技术有苏木精—[/font][font=Calibri]HE[/font][font=宋体]染色，免疫组织化学[/font][font=Calibri](IHC)[/font][font=宋体]染色，原位杂交[/font][font=Calibri](ISH)[/font][font=宋体]，荧光原位杂交（[/font][font=Calibri]FISH[/font][font=宋体]），原位[/font][font=Calibri][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=宋体]，寡核苷酸启动的原位[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成（[/font][font=Calibri]PRINS[/font][font=宋体]）等。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]3.[/font][font=宋体]使用组织芯片点样仪将标记好的组织按设计排列在空白蜡块模上。首先要利用打孔机在已经标记好的靶位点上进行打孔，将组织芯转入蜡块模孔中，重复操作可转入上千个样品组织芯。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]4.[/font][font=宋体]使用切片机对阵列蜡块进行连续切片即获得组织芯片。根据制作方法来分，微阵列主要有石蜡包埋的组织微阵列和冰冻微阵列两种。后者可以克服上述前者的多种缺陷（含醛基的化合物）可能损伤[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]或使目标抗原结构断裂或破坏抗原——抗体结合位点，另外，石蜡包埋乙醇固定过的组织也无法避免[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]降解。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]组织芯片的出现，与基因芯片配合使用在寻找疾病基因中有很好的互补作用。在肿瘤研究中发挥着重要作用。将基因芯片筛选出的基因作成探针，再将探针与组织芯片中众多的肿瘤组织进行荧光原位杂交，寻找肿瘤发生发展的相关因素。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]组织芯片应用：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]组织芯片的应用范围十分广泛，涉及到生命科学的基础研究、临床研究、应用研究以及新药开发等多个领域。它可以应用于多种染色技术，如[/font][font=Calibri]HE[/font][font=宋体]染色、免疫组织化学染色、原位杂交、荧光原位杂交、原位[/font][font=Calibri][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=宋体]、原位[/font][font=Calibri]RT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=宋体]以及寡核苷酸启动的原位[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成等。此外，组织芯片还可以与核酸、蛋白质、细胞、组织、微生物等相关技术相结合，分别在基因、转录和表达产物的生物学功能这三个水平上进行深入研究。随着组织芯片的广泛应用，现代医药学、基因组学和蛋白组学的研究将得到极大的推动和发展。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]目前义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/tissue-tma-array-service][b]石蜡组织芯片定制服务[/b][/url]，更多详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/tissue-tma-array-service[/font][/font][font=Calibri] [/font]

芬兰赫尔辛基大学和美国约翰•霍普金斯基大学梅尔癌症中心科学家研发出一项组织培养技术，能够使得在手术中移除的正常和癌变的前列腺组织保持一周活性，并能够在实验中正常发挥功能。这项研究发表在11月1日的《癌症研究》期刊上。通常，病理学家用石蜡包埋法储存机体组织，但石蜡会杀死组织导致很快冻结。许多实验室在烧瓶里培养前列腺细胞，但是这些细胞却不能像在前列腺中那样粘在一起。在Marikki Laiho领导的这项研究中，他们将来自18个病人的前列腺组织标本切成具有精确厚度的薄片，以维持整个组织的良好气体和生长因子交换。之后，Laiho等将组织放入由64种成分组成的溶液中，维持组织的生物功能。研究中通过验证前列腺组织细胞的特殊标记物的存在状态来确保组织活性。Laiho等已经利用该组织培养技术测定了DNA损伤修复蛋白的表达水平。Laiho说，该组织培养技术是理解在前列腺组织的不同部位哪些DNA修复蛋白能够被激活或不被激活的一个要素，并且有助于发展以DNA修复蛋白为靶点的癌症治疗方法。

四、水洗 1．目的： 洗去渗入组织中的固定液，终止固定。以免影响对组织内结构的观察、分析和研究。 2．原则和方法： 固定后的组织块的冲洗，一般情况下是置水龙头下以自来水流水冲洗，这样可以使组织中的固定液随时溢出，洗得更干净彻底，有些还需要进行特殊的洗涤。 （1）各种以水配制的固定液如甲醛，都必须用流水冲洗，大块组织一般冲洗24小时，小块组织一般冲洗2—10小时。 （2）固定液为多聚甲醛时，用于免疫组织化学等特殊染色的应将组织投入PB缓冲液中，每60分钟更新洗涤液一次，累计6小时。 （3）固定液为酒精或是酒精混合液，一般不需用水冲洗，其组织块的洗涤应用与固定液浓度相等垢酒精换洗或者直接进行脱水的程序。 （4）用锇酸或含有锇酸的固定液固定的组织，必须用流水彻底冲洗干净。 （5）经含有苦味酸的固定液固定的组织块，无论其固定液是水溶性还是酒精溶性，都应充分冲洗，水溶性固定液固定的组织块一般须冲洗12小时，再进入70%的酒精溶液洗涤，酒精溶性固定液固定的组织块直接进入70%的酒精溶液洗涤，该溶液可以脱掉苦味酸的黄色，但最好从50%酒精开始洗涤。 （6）冲洗好的组织可存放在75%酒精内 五、脱水包埋 （一）脱水 1．脱水的目的 组织内的水不能和支持剂混合，所以必须把组织中的水分彻底脱除。脱水有利于组织的透明和浸蜡，有利于组织的永久保存。 2．脱水剂 （1）乙醇：可作固定剂，又可脱水剂，但乙醇与水混合时有较剧烈的物理反应。高浓度的酒精对组织有强烈收缩及脆化的缺点，因此用乙醇脱水不能直接入纯酒精中脱水，而必须经过由高到低的一系列不同浓度的酒精，逐渐取代组织中水分，以保证组织脱水彻底，并避免组织过度收缩和硬化。 （2）丙酮：脱水能力比酒精强，但对组织的收缩更大，在组织学制片中较少使用，多用于病理快速切片，或用于某些组化水解酶的固定。 （3）正丁醇：是较好的脱水兼透明剂，可与酒精及石蜡混合，用于脱水是可先经过各种不同浓度的正丁醇和乙醇混合液，再入正丁醇，进行石蜡包埋时，可先用正丁醇和石蜡等量混合液，然后浸入纯石蜡包埋，正丁醇用于脱水的优点是很少引起组织收缩和脆硬，可替代二甲苯，是很好的脱水剂，但由于价格较贵，不常使用。 3．步骤 （1）乙醇脱水过程 50%乙醇 6~8小时 75%乙醇 6~8小时 85%乙醇 3~5小时 95%乙醇 1~2小时 95%乙醇 1~2小时 100%乙醇Ⅰ 1小时 100%乙醇Ⅱ 1小时 （2）丙酮脱水 如果是丙酮固定的组织，则不必再经过乙醇，可以用新丙酮更换一次，便直接浸入二甲苯或苯中透明。其他水溶液固定的组织，均按上述乙醇脱水方法脱水，亦可由100%乙醇中移入丙酮继续脱水2~4小时再入二甲苯透明，透明后浸蜡包埋。 （3）正丁醇脱水 组织用正丁醇脱水前，先经50%乙醇脱水，然后移入正丁醇和乙醇混合液进行脱水。 50%乙醇 6~12小时 50%乙醇+20%正丁醇+30%蒸馏水 5~8小时 50%乙醇+35%正丁醇+15%蒸馏水 4~6小时 45%乙醇+45%正丁醇+10%蒸馏水 3~5小时 25%乙醇+75%正丁醇 2~3小时 25%乙醇+75%正丁醇 1~2小时 15%乙醇+85%正丁醇 1~2小时 5%乙醇+95%正丁醇 1~2小时 100%正丁醇Ⅰ 1小时 100%正丁醇Ⅱ 1小时 4．注意事项： （1）脱水的过程应逐步地而不应骤然地进行，不能操之过急。 （2）脱水的时间应根据组织块的大小和组织的类型而定。 （3）组织块在高浓度，特别是无水乙醇内不能放置的时间太长。无水乙醇吸水能力太强，容易造成组织块的过度硬化，使得切片理组织易碎裂。 （4）在脱水的过程中可以将组织块停留在70%~80%的酒精中。 （5）每次更换新的脱水剂时（组织块从低浓度到高浓度），都要把组织块放在吸水纸上吸干，装组织块的容器也要控干水分，以免将水及低浓度脱水剂带入高浓度脱水剂中，影响脱水效果。 （6）脱水剂的先择要根据实验的要求及实验室的条件 （二）透明 1．透明的目的 置换组织内的脱水剂，为下一步的浸蜡起到桥梁作用； 使组织呈现不同程度的透明状态，有利于光线的透过。 2．透明剂 （1）二甲苯：是现在应用最广的一种透明剂，价格较便宜，不能和水混合，遇水则变成乳白色浑浊，因此必完全脱水后才能使用；易溶于酒精又能溶解石蜡，透明力强；其最大的缺点是容易使组织收缩变硬变脆，所以组织不能在其停留过久，透明时间视组织块的大小、性质而定；有的组织如肌肉、肌腱、软骨、骨、皮肤、头皮及眼球等，不宜用二甲苯透明，因组织过硬不易切片；长时间接触，对粘膜有刺激作用。 （2）苯：性质与二甲苯相似，对组织收缩也较小，组织也不易变脆，但透明较慢，组织在其内可以滞留12~24小时，但毒性较大。 （3）香柏油：用为透明剂，效果很好，有高度透明作用，能与醇和二甲苯混合，香柏油对组织的硬化及收缩程度比任何其他透明剂都要小，但透明的速度较慢，3mm以下厚度的组织块需12小时以上。香柏油与石蜡不易融合，即香柏油不易被石蜡取代，因此经香柏油透明以后，可经过二甲苯短时间媒浸，再进行石蜡包埋。肌肉、皮肤、血管、膀胱、垂体及肾上腺等用香柏油效果较好。 3．二甲苯的步骤：两次透明 第一次透明约40分钟 第二次时间不一定，要视透明效果而定 4．注意事项 （1）时间不宜过长，否则组织会变脆； （2）组织块脱水必彻底。 （三）浸蜡、包埋（石蜡包埋法） 1．浸蜡 （1）浸蜡的目的 置换组织中的透明剂，为包埋做准备。 （2）浸蜡的步骤 在60度恒温蜡箱中放置3个蜡杯，分别编号1（52℃~54℃）、2（52℃~54℃，或54℃~56℃）、3（56℃~58℃），其中分别盛软蜡、软蜡、硬蜡，取透明好的组织块放入软蜡中各1小时，迅速取出放入硬蜡，同样放置1小时。如果时间来及包埋，可以将已经完成浸蜡的组织块取出放在温箱外，第二天继续。 （3）注意事项 温箱中的温度必须严格控制在60℃的范围，不能超过60℃；浸蜡时间不宜过长。浸蜡温度过高或时间过长使组织收缩过度收缩和脆变。 2．包埋 （1）步骤 ①准备包埋蜡：一般应用硬蜡（56~58℃或60~62℃）为好，所用的石蜡要求透明无杂质，新的石蜡要反复熔凝，并有一定的粘韧性，可以加一些蜂蜡。蜡的熔点应与组织的硬度相适应。包埋用过的石蜡可以反复使用。 ②准备包埋框：可以用金属的，也可以用硬纸摺叠。 ③点燃酒精灯，准备好无齿尖镊子，需作标记应先写好标签。 ④在金属框中倒入硬蜡，然后用无齿镊子取组织块放入石蜡中，置好方向。可室温下冷却。 ⑤包埋框或纸盒内的蜡逐渐凝结，若表面已凝结形成一层固体状，即可放入冷水中，加速其凝固。 ⑥待蜡块完全凝固以后，便可拆卸包埋框架， 或拆开纸盒，取出蜡块。 （2）注意事项 ①包埋时夹取组织的镊子，用酒精灯随时烧热，以免石蜡凝结后粘附在镊子上，造成蜡块凝固不均匀。 ②包埋操作要迅速，组织从浸蜡杯中取出置入包埋框中的时间应尽量缩短。 ③包埋后的蜡块应呈均质半透明状，如果出现白色混浊状，一般出现在组织周围或组织的底部，应考虑这样几个方面的问题：a. 脱水不彻底。b.包埋蜡温度低了，组织进行包埋时，包埋框中的蜡已成凝结状。c.组织内还残留有较多的透明剂，d.石蜡不纯。 ④包埋箱中的温度必须保持恒定。 ⑤如包埋得不好，可将蜡块溶化，重新浸蜡和包埋。 ⑥较小的组织可在脱水透明时开始用伊红染色 石蜡切片基本步骤之四 切片

透射电镜生物样品制备步骤一．取 材组织块小于1立方毫米二．固 定2.5%戊二醛，磷酸缓冲液配制固定2小时或更长时间。用0.1M磷酸漂洗液漂洗 15分 三次1%锇酸固定液固定 2-3小时用0.1M磷酸漂洗液漂洗 15分 三次三．脱 水50%乙醇 15-20分70%乙醇 15-20分90%乙醇 15-20分90%乙醇 90%丙酮（1：1） 15-20分90%丙酮 15-20分以上在4度冰箱内进行100%丙酮 室温 15-20分三次四．包 埋纯丙酮+包埋液（2：1）室温 3-4小时纯丙酮+包埋液（1：2）室温 过夜纯包埋液 37度 2-3小时五．固 化37度烘箱内 过夜45度烘箱内 12小时60度烘箱内 24小时六．超薄切片机切片 50-60 nm七．3%醋酸铀-枸橼酸铅双染色八．透射电镜观察。拍片透射电镜生物样品制备步骤一．取 材组织块小于1立方毫米二．固 定2.5%戊二醛，磷酸缓冲液配制固定2小时或更长时间。用0.1M磷酸漂洗液漂洗 15分 三次1%锇酸固定液固定 2-3小时用0.1M磷酸漂洗液漂洗 15分 三次三．脱 水50%乙醇 15-20分70%乙醇 15-20分90%乙醇 15-20分90%乙醇 90%丙酮（1：1） 15-20分90%丙酮 15-20分以上在4度冰箱内进行100%丙酮 室温 15-20分三次四．包 埋纯丙酮+包埋液（2：1）室温 3-4小时纯丙酮+包埋液（1：2）室温 过夜纯包埋液 37度 2-3小时五．固 化37度烘箱内 过夜45度烘箱内 12小时60度烘箱内 24小时六．超薄切片机切片 50-60 nm七．3%醋酸铀-枸橼酸铅双染色八．透射电镜观察。拍片