笼式系统

抗体和蛋白生产的细胞系开发，特别是用于治疗性目的，确保细胞系起源于单个细胞或者单细胞繁殖是非常关键的。传统的克隆方法，例如有限稀释法和FACS，都是用统计分析方法确定单克隆性的可信度。本文重点介绍了CloneSelect Imager成像系统基于客观的成像图片更直观、准确地证实细胞系的单克隆性。

在分子克隆过程中，筛选含有插入基因片段的重组质粒转化子是一项必不可少的工作。一种称为“蓝白斑筛选”的颜色报告基因可以根据克隆颜色快速区分出重组和非重组的克隆。尽管蓝白筛选提供了一个直观的辨别重组克隆的方法，但是，在克隆挑取过程中，过多的人工操作过程存在主观、速度慢、易出错等问题。Molecular Devices QPix400系列微生物克隆筛选系统提供了一个自动化的解决方案，尤其针对蓝白克隆筛选，通过白光成像提供了准确高效的克隆转化检测方法。这个解决方案整合了QPix Software2.0蓝白筛选模块、QPix颜色滤片以及可调平板适配器。本文重点描述了使用QPix420系统进行颜色克隆筛选实验的结果，通过DNA测序进一步验证了挑取克隆的准确性。优势?通过白光高效监控转化效率?准确区分白色、蓝色或浅蓝色等颜色?智能化软件选择模块，可以自动或自定义筛选

QTray 琼脂板用于大规模的培养和筛选微生物克隆。通过加入 48 格的分隔器，多种微生物样品可以在同一块 QTray 上单独培养 ( 图1，左 )。可以利用 QPix 460 系统轻松涂布分格的 QTray 板。不过同样可以在不分格的QTray 板上培养不同的微生物样品，当然这需要克服交叉污染的隐患。在这个应用文章中，我们将阐述 QPix 460 系统如何通过自定义涂布模式用于涂布不分格的 QTray 板，从而降低样品间交叉污染的可能性。

本实验采用 Agilent 7100 毛细管电泳系统和自制凝胶缓冲液进行市售单克隆抗体药物分析。实验结果表明，该方法可以出色的完成对治疗性单克隆抗体药物的非糖基化重链的分析，且重现性良好。采用该方法可代替商品试剂盒进行单克隆抗体纯度测定，且分析时间更短，运行成本更低。

有限稀释是一个普遍接受的建立单克隆性的方法，它基于统计概率因此只有很少一部分（ 10-30% ）的微孔能被接种单个细胞。流式细胞分选是另一种传统的克隆方法，它可以高效地接种单个细胞至微孔内，但是液体剪切力会对被分选细胞的活率造成不可忽视的影响1-2 。此外，仪器维护和培训产生的高昂成本对一些资源有限的用户造成障碍。因此，急需高性价比的细胞株开发流程和高效的克隆方法。CloneSelect™ Single-Cell Printer™ f.sight™ （ f.sight ）被开发用于满足这些需求， 它可以柔和地接种单个细胞至微孔，同时记录整个细胞接种过程，提供单克隆性的图像证据以及优异的接种后细胞生长用于细胞株开发。

生物药品审批的监管标准一直都在不断变化。其中用于细胞系单克隆来源的监管例驱使我们要在生物药物开发过程中使用更有效的技术或方法。许多研究人员通常使用成像系统(如CloneSelect Imager)在液体培养基中验证单克隆和监控细胞的生长。其实，CloneSelect Imager系统也可以在半固体培养基中对细胞进行像。细胞在半固体培养基中的位置比较固定，使研究人员可以更加准确地在不同时间点对同一个细胞进行成像。

体积排阻色谱(SEC)是制药行业分析单克隆抗体等生物治疗药物的常用技术。SEC的应用贯穿整个产品生命周期从药物发现到商业化。在产品的生命周期中，分析方法常常需要转换至同一机构的各个实验室，或转换至各个合同组织，因此法规指南要求实验室间的方法转换过程必须验证方法的等效性，以确保产品质量和一致性。正如用于产品放行检测采用的所有分析方法一样，我们必须确保分析仪器稳定可靠且各实验室都能轻松部署。ACQUITY Arc系统是一款可以填补HPLC与UPLC® 之间的性能差距的LC平台，它能够让用户在各实验室之间实现无缝的方法转换。借助Arc Multi-flow path技术，用户可以轻松重现传统HPLC分析方法以及应用UHPLC方法1。本研究采用单克隆抗体评估了从Agilent 1100系列仪器到ACQUITY Arc系统的SEC方法转换，将峰面积和保留时间作为评估指标验证各平台之间的等效性，并且评估了ACQUITY Arc系统的系统重复性。最后，我们还将验证方法转换所用的HPLC方法提升为UHPLC方法，从而获得更好的分离度和更快的分析速度。

QPix 400 系列是目前全世界最专业的微生物克隆筛选系统，全球装机量超过800 套。早在上世纪 90 年代，大规模的测序工作迫切的需要一款性能可靠的自动化微生物克隆挑选系统。

本应用简报介绍了采用 Agilent 1260 Infinity 生物惰性四元液相色谱系统进行单克隆抗体肽图分析的应用解决方案，并证明了其可靠性。该仪器具有生物惰性和耐腐蚀性，再结合简单且重现性好的方法，使得该解决方案尤其适用于生物制药行业中单克隆抗体的QA/QC 分析。为了获得更高的分离度和检测灵敏度，我们将方法转移到 Agilent 1290Infinity 液相色谱系统上，并使用了亚 2 μm 粒径色谱柱。1290 Infinity 液相色谱系统卓越的性能范围（压力与流速）克服了由于使用较小粒径填料和较长色谱柱导致背压上升的挑战，使该系统成为高分离度和高灵敏度分析应用的理想选择。

色谱数据系统（又称 CDS）是确保现代色谱实验室高效可靠运作的关键——它必管理从仪器控制到数据存储和处理，直至生成最终结果的全部分析流程。适用于所有的色谱实验室——日常检测、开发或研究——无论是否需要合规。

单克隆抗体 (mAb) 作为治疗药物具有重要意义，因此人们对能够表征这种复杂分子的高分离度分析方法的需求正不断增长。mAb 的一个重要特性是它的电荷状态可能会在生产过程期间和之后发生变化。而毛细管等电聚焦 (cIEF) 正是一种非常有效的测量 mAb 电荷异质性的方法。本应用简报中展示了如何利用 Agilent 7100 CE 系统的 cIEF 对 mAb电荷异构体进行高分离度的分析。

细菌筛选常见于分子克隆构建重组细菌的实验中。它也被用于检测特定蛋白质的表达和活性。QPix 400系列微生物克隆筛选系统可检测一系列荧光波长，从而在细菌实验中开拓了多色荧光筛选功能。手工挑选微生物克隆是一个耗时且繁杂的过程，利用QPix系统，则可以在一个小时内挑取超过3000个克隆。此外，QPix400系列的成像模块可以通过荧光强度筛选克隆，从而更加准确地获得目标克隆，简化下游分析。本文介绍了如何利用QPix系统的多色荧光通道筛选各种的荧光细菌。

本测试方案旨在通过恒温恒湿箱模拟产品工作、存储时的温湿度环境，对尼龙纺织原料在此环境下一段时间后所受到的影响是否在可接受的范围内的测试。

虽然采购色谱数据系统的主要推动因素是为了合规和确认，而SAFC Madison选择Chromeleon变色龙色谱数据系统的主要原因之一是该系统非常直观，并且有一个易于使用的界面。这是软件开发遵循Operational Simplicity™ 原则的一个有力证明。

稻瘟病是极具毁灭性的水稻病害之一，俗称“水稻癌症”，是影响水稻高产、稳产的主要限制性因素。稻瘟病在全球85个水稻种植国家和地区发生，对全球粮食安全造成严重威胁。长期实践证明，培育和推广抗稻瘟病品种是防治稻瘟病最经济、环保和有效的措施，隆科638S与晶4155S是袁隆平农业高科技股份有限公司于2014年培育出的抗病优质高配合力中籼型两用核不育系。隆平高科研究院通过对2015—2019年通过国家审定的隆两优和晶两优系列杂交稻品种区试稻瘟病抗性评价数据进行分析，并利用基于KASP技术开发的针对16个稻瘟病抗性基因的标记组合，对隆两优和晶两优系列杂交稻品种进行基因型检测（检测平台：成都瀚辰光翼科技有限责任公司GeneMatrix高通量基因分型系统），为隆两优和晶两优系列杂交稻品种的布局和进一步改良提供理论依据。该研究结果，发表于作物学报2022.48(05)，题为“隆两优与晶两优系列杂交稻的稻瘟病抗性基因分析”。

中国药典要求苯丙酸诺龙的系统适用性溶液色谱图中，出峰顺序依次为丙酸睾酮峰与苯丙酸诺龙峰，丙酸睾酮峰与苯丙酸诺龙峰之间的分离度应大于10.0。

目的：流通池模拟难溶性药物米拉贝隆缓释制剂的溶出，建立米拉贝隆体内和体外的相关性（IVIVC）模型，开发具有预测能力的体外溶出方法。方法：Loo-Riegelman法对三种不同释放速率制剂的体内血药浓度进行反卷积分获得相应的累积吸收百分数（Fabs%），建立体外溶出目标曲线。以纯水为试验介质，流速4.0mLmin-1的试验条件下进行制剂R（贝坦利®，50mg）和制剂T1、T2（50mg）的溶出试验，通过高效液相色谱法测定溶出度，梯形面积法获得制剂的累积溶出百分数（Fdiss%）。结果：立了米拉贝隆缓释制剂体内累积吸收与体外溶出度之间的A级 IVIVC（回归系数大于0.9）, 制剂的外部预测误差在规定范围内。结论：研究建立的米拉贝隆缓释制剂IVIVC模型经验证具有较好的预测能力，该方法拥有的良好区分力及线性模型也可以为质量控。

苄嘧磺隆属于磺酰脲类除草剂，具备活性高、用量少、选择性强的特点，是现代农业中常用除草剂。本方案参考GB 23558-2009《苄嘧磺隆可湿性粉剂》采用福立LC5090高效液相色谱仪搭载紫外检测器对不同百分含量的苄嘧磺隆农药样品进行了相关分析。

十二烷基硫酸钠毛细管电泳法 (CE-SDS) 是中国药典 2015 版附录收载的单克隆抗体药物纯度表征方法，其相对于聚丙烯酰胺凝胶电泳法 (SDS-PAGE) 具有更快的分析速度、更好的分离度、更优越的重现性和更准确的定量，且更加自动化。CE-SDS 方法能够完成SDS-PAGE 方法不能完成的针对非糖基化重链的定量分析。通过与商品化试剂盒的对比，证明该方法能够有效的分离还原单克隆抗体的非糖基化重链和重链，具有良好的重现性和定量准确性，且价格低廉，简便易行。

ClonePix 2是最新一代的高效细胞克隆筛选系统(图 1)，主要用于抗体和蛋白类药物研发，适用于杂交瘤细胞的筛选，以及稳定高表达细胞株的筛选。ClonePix系统的全球装机量已经超过300套，其中排名前十的生物制药企业都是ClonePix系统的用户。相比涉及大量手工操作的有限稀释法，ClonePix 2系统利而更快速地获得优质克隆。在争分夺秒的抗体药物研发竞赛中，ClonePix 2系统可以帮助获得更多的时间和生产成本优势，最终获得更大的市场。用半固体培养基和荧光原位成像技术允许对更多克隆进行筛选，从

前言复方紫龙片为复方制剂，其组份为每片含广地龙0.417g、紫河车0.167g、奈氏双球菌粉0.001g、白色葡萄球菌粉0.001g、甲型链球菌粉0.001g。其功效为用于喘息型和单纯型慢性支气管炎。本实验参照《中国药典 2020年版 第四部 0731 蛋白质含量测定 第一法 凯氏定氮法》对复方紫龙片的包衣片及素片中的蛋白质含量进行测定。

近日，北京易科泰生态技术公司工程师为中国疾病预防控制中心营养与健康所顺利安装一套8通道动物能量代谢测量系统，该系统主要包括大鼠代谢笼舍、气流发生控制与切换、二次抽样单元、气体分析仪、数据采集器、数据记录及分析软件等模块，广泛用于营养学、呼吸生理学、转化医学、内分泌代谢、心血管等生物医学科学研究。

CloneSelect单细胞分离系统（CloneSelect Single Cell Printer）采用类似喷墨打印的技术，柔和地产生包裹细胞的液滴无接触地直接分配到微孔板中（图1）。同时，该系统借助智能图像分析，确认细胞数目，分析细胞的形态（大小和圆度）及荧光强度，联动的真空装置将不符合要求的液滴（如空液滴或者含多个细胞的液滴）直接吸走，而符合要求的细胞液滴则分配至微孔板，从而实现对单个细胞的分选和接种。单细胞分离系统是一种可比移液器操作的柔和的单细胞分离技术，而流式分选由于高的液体剪切力和电压的影响，会降低敏感细胞和部分受损细胞（如电转后的细胞）的成克隆率，因此单细胞分离系统更适用于基因工程细胞的克隆，维持细胞活力，并提供直接的单克隆性图像证据。

本文参考2020版《中国药典》中记载的中药材锦灯笼液相色谱分析方法，筛选合适的色谱柱，并参照0512通则进行UHPLC方法转换。实验结果显示，可以实现锦灯笼样品中木犀草苷与杂质峰的良好分离，目标峰峰形良好，木犀草苷酸峰理论塔板数大3000，满足药典要求。

中国药典要求醋酸泼尼松龙的系统适用性溶液色谱图中，理论板数按醋酸泼尼松龙峰计算不低于3000，醋酸泼尼松龙峰与醋酸氢化可的松峰之间的分离度应大于2.0。Column:ChromCore 120 C18, 3 μ mDimension:4.6× 150 mm

实验方法原理TA克隆 系统由Invitrogen公司（San Diego，CA）发展而来的商业性试剂盒，它用于PCR 产物的克隆 和测序。其原理是利用Taq酶能够在PCR 产物的3' 末端加上一个非模板依赖的A，而T载体是一种带有3' T突出端的载体，在连接酶作用下，可以快速地、一步到位地把PCR 产物直接插入到质粒载体的多克隆 位点（MCS）中。 外源DNA与载体分子的连接就是DNA重组，这样重新组合的DNA叫做重组体或重组子。重组的DNA分子是在DNA连接酶的作用下，有Mg2+、ATP存在的连接缓冲系统中，将分别经酶切的载体分子与外源DNA分子进行连接。DNA连接酶有两种：T4噬菌体DNA连接酶和大肠杆菌DNA连接酶。两种DNA连接酶都有将两个带有相同粘性末端的DNA分子连在一起的功能，而且T4噬菌体DNA连接酶还有一种大肠杆菌DNA连接酶没有的特性，即能使两个平末端的双链DNA分子连接起来。但这种连接的效率比粘性末端的连接率低，一般可通过提高T4噬菌体DNA连接酶浓度或增加DNA浓度来提高平末端的连接效率。 T4噬菌体DNA 连接酶催化DNA 连接反应分为3 步：首先，T4 DNA 连接酶与辅因子ATP形成酶-ATP复合物；然后，酶-ATP复合物再结合到具有5' 磷酸基和3' 羟基切口的DNA上，使DNA腺苷化；最hou产生一个新的磷酸二酯键，把切口封起来。连接反应通常将两个不同大小的片断相连。因为DNA片断有两个端点，所以切割时出现两种可能，一种是单酶切，另一种是双酶切，这两种酶切方法在基因工程操作中都经常用到。对于单酶切来说，载体与供体的末端都相同，连接可以在任何末端之间进行，这样就导致了大量的自连接产物。为了减少自环的高本底，可对载体进行5' 除磷酸处理，原理是连接酶只能连接DNA片断的3' OH末端与5' 端，所以除磷后载体不会自环。一旦有外源片断插入时，由外源片断提供5' 端就能与载体进行连接。通过这种方法可大大减少由载体的自环造成的高本底。对于双酶切来说，无论载体与供体同一片段上都有不同的末端，这样就避免了载体与供体的自环，能使有效连接产物大大增加。双酶切的另一个特点是能将供体分子定向连接到载体上。 连接反应的温度在37℃时有利于连接酶的活性。但是在这个温度下粘末端的氢键结合是不稳定的。因此采取折中的温度，即12-16℃，连接12-16h（过夜），这样既可最da限度地发挥连接酶的活性，又兼顾到短暂配对结构的稳定。Taq DNA酶扩增的PCR产物，其DNA双链前后末端都有一个游离的A碱基，可以与pGEM-T Easy Vector 末端游离的T碱基互补形成环状重组T质粒。

本文讨论了采用一套HPLC系统（UltiMate3000钛系统）同时实现单克隆抗体的聚集体的分离和电荷亚型的分离。

98%。QPix400 系列的荧光成像模块可以显著减少下游的工作量，因为通过对荧光蛋白表达的定量，实现了有目的性筛选，确保只挑感兴趣的克隆。QPix 已成为市场上微生物克隆筛选系统的领导者，它可以提供多组荧光滤光片，兼容大多数的荧光克隆载体。基于荧光的重组克隆筛选方法使重组基因表达的筛选更加容易，提供了一个更加准确的筛选方法。

丙酸诺龙和苯丙酸诺龙属于雌激素类药物，具有调节机体代谢和生理功能，在养殖业中常用于提高动物生长，促进蛋白转化率，以达到提高养殖的经济效率。然而，滥用雌激素类药物，会造成动物产品中有不同程度的残留，被人类食用后在人体内发挥着类似雌性激素的作用，能干扰体内荷尔蒙分泌，使生殖机能异常。由于牛奶基质复杂，传统检测手段难以满足如今高灵敏度需求，本文参考农业部1031号公告-1-2008 《动物源性食品中11种激素残留检测液相色谱-串联质谱法》标准，采用岛津三重四极杆质谱仪LCMS-8050建立测定牛奶中丙酸诺龙和苯丙酸诺龙雌激素的方法，该方法稳定可靠，对不同浓度的丙酸诺龙和苯丙酸诺龙的混合标准溶液各平行测试6次，目标化合物的保留时间和峰面积的相对标准偏差分别为0.024 % ~ 0.106 %和1.489 % ~ 5.217%，精密度和重现性良好。对于不同浓度下基质加标回收率范围在87.60% ~ 106.80%之间。该方法可应用于牛奶中丙酸诺龙和苯丙酸诺龙残留的非法添加的定量监测。

随着对食品安全检测需求的加强，各种农产品限量标准越来越低，且农药涉及到的范围越来越广。在食品安全日益受到关注的同时，寻求一种简便快速、准确高效、价格低廉的多农残分析方法，将更能满足食品安全检测的需要。Quanpedia™ 是一款可扩展且可搜索的数据库，其涵盖了定量LC/MS和LC/MS/MS方法信息。它采用以化合物为中心的数据库设计，集液相色谱、MS/MS采集 和TargetLynx™ 定量信息为一体。用户可以从自动优化结果、现有方法和第三方文件中导入信息，也可以手动补充信息。使用它可以轻松部署一站式的多残留分析方法，同时将自动化的化合物优化结果快速整合到样品批次分析中。此外，它还具备共享分析方法的功能。ACQUITY Arc系统能够在同一个平台上运行HPLC和UHPLC分离，是一款可以填补HPLC与UPLC® 之间的性能差距的LC平台。利用Arc Multi-flow path™ 技术，用户可在流路1与流路2之间轻松切换，从而实现无缝的方法转换或改善现有方法。ACQUITY TQD检测器的引入使得科学家能从事高效液相色谱对农药的分析，增加了在利用这台串联四极杆仪器带给实验室的所有优越性。它占地面积小，做为一种有效的分析工具取代了引进大型设备的需要，为任何实验室都提供了绝对的优势。在本应用纪要中，将介绍ACQUITY Arc系统与Xevo TQD质谱检测仪相结合，用于分析茶叶中农药的含量。