色谱铺板器

请教：最近找一个薄层色谱的自动铺板器。国内的基本是一次铺板只能是4张20*20cm。没有一次8张20*20cm，请教同仁知道，最好能有厂家名称和联系方式。谢谢

我公司做薄层色谱,需大量硅胶板，因此欲求购薄层层析铺板器（手动、自动最好都有）详细信息及报价请发送至：[color=#DC143C]shboyg@126.com[/color][color=#DC143C]请可以提供本产品的供应商及时给与留言或留下联系方式！[/color]

我单位想购买一台薄层自动铺板器，听说重庆的厂家生产的好，但找不到厂家的联系方法，烦请哪位大侠赐教。

现在都还自己铺板吗

铺板的时候应注意些什么呀？

当固定相与黏合剂混合搅拌时，要到什么程度才能铺板？

AC-174铺板和栏杆系统跨度梯度验收标准

硅胶G里已经添加粘合剂煅石膏了，为什么还用CMC-Na铺板？谢谢！

本人最近在用薄层鉴别陈皮药材，发现药典的规定是：吸取上述对照品和对照药材及供试品，分别点于同一用0.5％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯甲醇一水(100：17：13)为展开剂，展至约：3cm，取出.晾干，再以甲苯一乙酸乙酯甲酸一水(20：10：1：1)的上层溶液为展开剂，展至约8cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。我按照上述方法进行操作，有几个疑问：薄层检测陈皮药材时，为什么不用CMC-Na铺板？而用NaOH呢？难道他们会反应？但用NaOH铺的板太不结实了。展开系统又是如何摸索出来的？两次展开，目的何在？刚刚接触薄层色谱，有点不明白。请高手指教。

请问各位，涂布器是什么样子啊？我们要做薄层色谱，要铺板，想买涂布器，又不知道涂布器什么样子？谁有涂布器的图片，发张来看看，感激感激！！

目的： 1. 药典：薄层色谱法系将供试品溶液点于薄层板上，在展开容器内用展开剂展开，使供试品所含成分分离，所得色谱图与事宜的对照物按同法所得的色谱图对比，并可用薄层扫描仪进行扫描，用于鉴别、检查或含量测定。 2. 如果你是做鉴别的话，薄层的系统适用性主要是做检测限和分离度； 3. 如果你是做含量测定，比如说用薄层扫描法，薄层的系统适用性应该做线性范围、同板精密度、异板精密度、回收率； 4. 手工铺制的板子，只适宜于定性分析，不宜于分离定量； 5. 化学药一般是作有关物质，需要一定的载药量，所以要适当增加厚度； 6. 中药一般较难分离，需要薄板，以增加分离度； 7. 手工铺制的板子常用的有：硅胶G板和硅胶CMC-Na板。前者是煅石膏（石膏经140℃烘烤3-4小时）与硅胶按1-1.3：10混合均匀。每份硅胶G加水2-3份调成糊状，即可使用。后者的操作各位大虾已有论述。 8. 如果你铺板目的是做分析用的话，肯定得很仔细用心；如果仅是天然药化那种粗略检查过柱子得到的馏分纯度，那就没有必要这么复杂了，也就是说速度可以快点，板的要求也没有必要这么高； 9. 单纯的手铺板，技巧要求很高的，如果有铺板器（也是完全手动的那种），铺出的板子基本上可以保证均一的。 10. 要喷硫酸乙醇并定量的最好铺水板；铺水板是最考技术的，主要是碾磨技术，大家可以探讨一下； 11. 硫酸乙醇显色作定量分析的品种，但凡加了CMC-Na的板都易烘糊，尤其是温度高于100度时，后改用不加CMC辅的水板来作，就不会有烘糊现象，故也可推论CMC易于与硫酸起糊化反应。感觉辅水板关键是硅胶G与水的比例要达1：3.5左右，而且研磨后要尽快涂布，不能易于凝固而难于涂布。

我在做一个项目的检测，检查项中的一项是薄层色谱分析，方法上用的是硅胶H板，可是买来薄层层析硅胶H，铺板，进行检测，在254nm的紫外灯下检测不显色是什么原因呢？有知道的，请帮帮忙，分析分析原因在那里，方法是成熟的检测方法，大家一致在用的

层析用硅胶G＋5％CMC（1：3），铺好的玻璃板上硅胶层有好多小坑，这应该是打浆时有气泡的缘故。有什么经验可以除去气泡？CMC溶液应放置，取上清液。其次配浆时可采用研钵手工制浆。效果挺好的。没碾匀，加点甲醇 大家还有没有什么其他好的建议！

1、最基本的装备层析缸、色谱板、薄层储板箱，点样毛细管。有了这些您就可以进行薄层色谱工作了，这些东西已经被集成在TK-I型薄层实验启动包里,当然还要买些薄层色谱书籍；2、薄层板观察检视薄层板观察检视是薄层工作者的基本工作,这时TU-II型暗箱式紫外观察仪就必不可少了;照相留底,那麽GoodSee-II型暗箱式薄层摄影仪能为您完成这些工作;中药指纹图谱GoodLook-1000型全自动薄层成像系统是您的最优选择；3、质检定量，请选购一台KH-2100型双波长薄层色谱扫描仪；4、新方法的科研开发,请选用KH-3000型全波长薄层色谱扫描仪；5、点样不准确是造成薄层定量失误的主要原因，如有薄层色谱扫描仪，请务必选用SP-II型电动薄层点样器，将极大提高您定量的精确性与重复性；6、喷雾液滴过大造成样点扩散，也造成薄层定量失误，请务必选用TS-I型超细电动薄层喷雾器，提高您定量的精确性与重复性；7、硫酸-醇显色剂，请使用TH-I数控薄层显色加热器，防止使用封闭式烘箱造成内壁腐蚀与产生大量烟雾,控温准确,加热均匀;8、确定定量的准确程度，请选用具有高度重复性的德国MERCK标准测试板；9、预制板太贵，请选用TD-II全自动铺板机，铺出来的预制板板又快又好。

我是新手,一直在做TLC,但以前板都是买的,现在老板要求自己铺,但我不知道怎么铺,从那里可以找到方法?我们要求的是60F254.

薄层板的的制备及性质薄层板的制备是将吸附剂涂布在大小适当的戴板上，形成一定厚度的薄膜。制备一定规格的薄层板，是保证获得满意的分离效果及良好的Rf值重现性必不可少的条件。具体制备方法及有关问题分别讨论如下：（一）载板：戴板应对各种展开溶剂、化学显色试剂以及温度都具有稳定性，同时又应有一定的机械强度以便重复使用。常用的戴板中，以玻璃最好，一般玻璃只要表面平整光滑，厚度在2—4厘米，允差±0.1—0.2毫米即可。戴板大小无绝对规定，由斯塔尔推荐的标准规格为20×20厘米、20×10厘米。作为一般简单的快速薄层分离，也可用显微镜戴玻片作戴板。至于制备薄层色谱，所用戴板可达20×100厘米。戴板应非常干净，才能保证良好的粘着效果。故玻板应先用肥皂水洗净，再在重铬酸洗液内浸泡，然后清洗干净，最后用蒸馏水淋洗，晾干后备用。玻璃板的缺点是不易保存。其他材料的戴板中，最常用的为塑料板。塑料戴板制备薄层板操作复杂，因此多为成品薄层板出售。其优点为使用简便，缺点为高温下抗腐蚀性差。其他如不锈钢板也有应用。（二）吸附剂糊的配制：在选择好适当的戴板后，应根据需要，制备一定粘度的吸附剂匀浆供制备薄层板用。常用各种吸附剂糊的调制方法如下：（1）硅胶1）加石膏粘合剂：取硅胶G20克，置于玻璃乳钵中，将40毫升蒸馏水分两次加入，第一次加入30—35毫升，充分研磨后，再加入剩余的水。迅速小心研磨，直至开始出现凝胶状，立即铺板。吸附剂的加水量和加水后的搅拌时间相当重要，是制备薄层板成败的关键。若加水量过多，则吸附剂不易胶化；过少则胶化过快造成涂布困难。搅拌时间无具体规定，一般在45—65秒左右，以吸附剂开始出现凝胶状态时为佳，此时粘度增大，光泽洁白；超过此时则凝胶固化，不易涂布。目前不同厂牌及批号的吸附剂加水量及搅拌时间都有所不同，可以根据具体情况选择最佳条件。（其他无机吸附剂如氧化铝G、硅藻土G的制备方法与硅胶G相似）2）加淀粉粘合剂：一般是在吸附剂中加入约5%的淀粉及二倍量的水，在沸水浴上加热，不断搅拌至呈一定的粘稠度，进行铺板。3）加羟甲基纤维素粘合剂：通常取硅胶55克或氧化铝60—80克，加1%羟甲基纤维素水溶液100毫升，调成糊状，进行铺板。（2）纤维素粉1）天然纤维素粉：配成15%的纤维素水悬浮液，在电磁搅拌器上混合30—60秒钟，纤维素粉不需加任何粘合剂，即可铺板。2）微结晶纤维素粉：配制成15%—30%的水悬浮液，电磁搅拌器上充分混合1分钟，即可铺板。搅拌过久可能形成凝胶而失败。3）乙酰化纤维素粉：根据纤维素乙酰化的程度不同，称取适量，加95%乙醇，充分搅拌后铺板。（3）聚酰胺粉取聚酰胺粉12克，加甲醇50毫升，用力充分振摇后铺板。若加入2。5克纤维素粉及40毫升甲醇，在电磁搅拌器上混合成浆，可制成坚固的薄层板。（4）离子交换剂1）离子交换树脂：取5克纤维素MN300加少量水搅拌几分钟，再加20—30毫升蒸馏水，继续搅拌，加30克Dowex50树脂，最后加25毫升水，铺板。2）离子交换纤维素：用蒸馏水配制成10—20%离子交换纤维素，按一般吸附剂铺板法进行铺板，粘着效果良好。（三）薄层板制备：薄层板的制备方法，目前常用的有浸渍法、倾注法、喷雾法及涂布法。其中最常用的方法为涂布法。各法简述如下：（1）浸渍法：用于小型薄层板的制备，如戴玻片板。所用的吸附剂糊，最好用有机溶剂来配制，如氯仿-丙酮或氯仿-甲醇混合液。将两张玻片背靠背地贴紧，放在吸附剂糊中浸渍，取出后放在水平板上，即可在玻片上形成薄层。（2）倾注法：与浸渍法类似，操作简便，不需特殊仪器。将一定量的吸附剂糊，均匀地倾注在玻片上，再入置水平板上，使其形成厚度较为均匀的薄层。（3）喷雾法：采用气体压力喷雾方法，将吸附剂糊均匀地喷洒在玻片上，形成一层薄层。（4）涂布法：本法为实验室最常用的薄层板制备法。薄层涂布器由涂布台及涂布仪二者组成，有商品出售。也可以自制，基本结构如图4—1，材料可用不锈钢或有机玻璃。图4—2为一种自制的简易涂布器。这种涂布器有一个活动的闸板，涂布时吸附剂从闸板下的缝隙流出，涂在载板上。根据薄层厚度的要求不同，可制成多种规格缝隙的闸板，以便调换。一般有250、275、500、750、1000和2000微米等规格的闸板。商品涂布器种类较多，最常用的为斯塔尔型涂布器。涂布法制备薄层板易精确控制厚度，是其最大的优点。其他三种方法都具有不易控制薄层厚度的缺点。（四）薄层板的活化与贮存：吸附薄层色谱的薄层板，首先应具有一定的吸附活性，才能达到良好的分离效果。薄层板的活度与吸附剂中水份含量有关，水份含量高，则活度减弱。因此，为达到某一规定的吸附活度，就应加温除去薄层中的水份。这一过程称为薄层板的活化，其操作为：将涂布后的薄层板在常温下放置15—20分钟，使水份蒸发、吸附剂凝固。这一过程中薄层板有如下现象：（1）开始薄层板表面有闪亮光泽。（2）几分钟后光泽消失。（3）最后薄层凝固，颜色变白，水份蒸发约50%。薄层板的活度级可用标准色素测定，其方法如下：（1）硅胶薄层板的活度测定：称取标准色素奶油黄、苏丹红及靛酚蓝各40毫克，溶于100毫升苯中，将此混合溶液点于已活化的薄层板上，用正已烷或石油醚展开10厘米，所有色素均应停留在原点；而用苯展开10厘米时，则应分离成三个清晰的斑点。其Rf值应分别为：奶油黄0.58，苏丹红0.19，靛酚蓝0.08。而且展开溶剂前沿的上升速度应在30分钟移动10厘米。（2）氧化铝板的活度测定：称取偶氮苯30毫克，对甲氧基偶氮苯、苏丹黄、苏丹红及对氨基偶苯各20毫克，分别溶于50毫升四氯化碳中，并各取10微升点于已活化的氧化铝板上，用四氯化碳为展开溶剂，根据标准色素的Rf值（下表），查出其活度级。薄层板活化后，应立即使用，若特殊情况需要保存时，可在活化后，立即贮存于硫酸干燥器内，以免吸收空气中的水份及某些气体而影响活度。保存时间约一周，不宜过长。（五）烧结薄层板的制备及性质：目前，硅胶和氧化铝薄层板应用较广，但这种薄层板还有不足之处。首先必须临时制备，较为麻烦，而且只能使用一次，吸附剂消耗量大，不够经济；其次这种薄层板非常脆弱，无论在使用或者保存上都不够方便。（六）薄层板质量规格：根据以上各种方法制成的薄层板，其质量应符合下列要求。（1）表观性状：应表面平整、光滑、无印痕和气泡，对光观察均匀。（2）机械强度：薄层板在浸入展开溶剂内及喷洒显色剂等操作过程中，薄层不脱落，加热过程不裂缝。（3）毛细管性能：展开过程中，溶剂前沿应呈一水平线，上升速度适当，250微米厚度的薄层板，用苯展开时，上升10厘米应在30—40分钟为佳。（4）薄层厚度：薄层厚度应均匀一致，符合实验要求，分析用薄层板，一般为250—500微米，而制备用薄层板为500—2000微米。薄层厚度影响动相溶剂展开的速度。以正已烷-乙酸乙酯（9+1）为展开溶剂，在一规定时间内在不同厚度的硅胶板上展开，结果各板展开的距离不等，见图4—5。从图中还可以看出在250微米厚度以内，薄层板愈薄，展开速度愈慢。第二节 点样薄层色谱中，点样与色斑的形成有一定关系。要求滴加的样品溶液原点应尽可能小，一般直径不超过3毫米为适宜。对于薄层定量测定，更应使各原点面积大小基本一致。点样的方法有以下两种；（一）直接点样法：首先在薄层板上用硬质铅笔或解剖针，在距底边3厘米或2.5厘米处，轻轻描划出点样的起始线。并根据规定的展开距离（10厘米或12厘米）在薄层板上端画出展开溶剂前沿的到达线。然后用微量注射器或尖端磨细的血色素吸管，直接将样品溶液点加在起始线上，每点之间距离为1.5厘米。点样时可用空气流缓缓吹过点样原点，以便溶剂迅速挥发，原点面积不至过大。微量注射器最适用于薄层色谱的点样。但一般尖针头液滴不易落下，也易搓戳破薄层，故不适用。简单的改进方法可将针头磨平，但如不小心又会使针孔被吸附剂颗粒堵死。对于样品溶液只有10微升以内的点样，手工操作即可，但在10微升以上时，手工点样不可避免地会造成失误，同时也过于劳累、烦琐。故一般是将注射器固定在一个架子上操作。将针尖同薄层板的距离和滴液的速度控制恒定，因此原点大小也可以控制，而且又可以同时点几个样品，故其优点较多。点样时应注意不使针尖将薄层板戳成小孔，以免形成非圆形的不规则色斑。因为如果原点有小孔，在展开时通过原点中心轴的溶剂，将比小孔周围的溶剂慢一些，这样Rf值较高的化合物色斑就呈三角形，而Rf值较低的化合物色斑就呈新月形。若点样溶液体积过大，原点的面积也增大，会影响结果。这种情况，可选择一种能使所有待分离化合物的Rf值都等于1的展开溶剂，先作一短距离展开，此时待分离化合物将沿展开溶剂前沿，形成一个与底边平等行的细线，此线即可作样品的起始线，不过原点不是一个圆点，而是一根细线。对于制备薄层色谱，需要尽可能地增大制备量，点样量就需要增大，因此常采用线状点样，点样体积可达几百微升。薄层点样应力求迅速，一般不超过10分钟。因为薄层板暴露的时间过长，会吸收空气中的水份而改变活度，影响分离效果。因此，点样时要求有纯熟的技术。（二）滤纸移样法：直接点样法，很难使原点面积大小一致，也很难控制直径在3毫米以内，而且又容易损伤薄层的表面，特别是在薄层板上进行测量面积定量时，这些缺点会影响测定结果。滤纸移样法可以克服上述缺点，其操作方法为；用内径为3毫米的皮带冲，将色谱滤纸冲成圆片，用细标本针挑起滤

甘草的薄层鉴别，需要铺1%NaOH的硅胶G板。铺板时，没有用CMC调硅胶，是用硅胶G和1%NaOH溶液研匀，铺板。可研磨的过程中，不断有气泡产生（此情况用CMC铺板时，未出现）加了几滴乙醇赶气泡，不过继续研磨又有气泡了最后，板上有许多小麻点！第一次我感觉NaOH没有溶解好，所以我用滤纸将NaOH溶液过滤了一到，不知道板上这些小点是气泡还是滤纸引起的？后来我重新配了NaOH，没有过滤，而是超声，但铺出来的板还是有小麻点！按道理来说，一般小麻点都是因为CMC引起的，可我没有用呀！到底是什么原因，高手帮我分析下，万分感谢！

手工铺板是非常考验你的耐力的事情，最好是找实验室的GGJJMMDD们一起，一来速度快，二来大家仪器交流心得。我认为，第一个关键的地方，你的CMC-Na溶液必须配制的好，放置的也要很好，完全分层之后只能取上清液。上清液要澄清透明，时间太长的CMC-Na可能会发黄，如果有霉菌出现的话，绝对不能使用。第二就是硅胶和CMC-Na溶液的比例可以适当的调节，根据你所需要薄层板的软硬来微调。可以一个人研磨，一个人缓慢的倒CMC-Na溶液。研磨时最能考验你的定力，我觉得你该找女生来磨，但是那种太文弱的不行。研磨时要顺着一个方向，速度不宜快，要顺着研钵的边缘，观察仔细，一定要把气泡赶尽杀绝。研磨好的因改是均匀的，没有气泡，没有固体的粉末类异物，溶液有一定的粘性。最后，铺板，我觉得是各人各喜欢，可以顺着板中间倒，也可以顺着某个边缘倒，倒时也要注意不能引入小气泡。可以用玻璃棒引着溶液平铺在玻璃板上（顺便说一句，玻璃板应该很干净，没有划痕，没有缺口，4个角要“健全”），如有需要，可以双手10个指头拖住玻璃板，有节奏的颠，使得硅胶分摊匀称。尤其是4个角，容易高出玻璃板其他部位，所以要格外注意。颠好的板，表面看上去要光滑平整，没有气孔。铺好的板，要找个干净的地方放置晾干，这个过程也是耐心的等着它，请勿打扰！自然晾干后，活化一下（105摄氏度40分钟左右），置于密封的干燥器保存。最后想说一下，如果你铺板目的是座分析用的话，肯定得很仔细用心。如果仅是天然药化那种粗略检查过柱子得到的馏分纯度，那就没有必要这么复杂了，也就是说速度可以快点，板的要求也没有必要这么高！

1、 最基本的装备：就是层析缸、色谱板、薄层储板箱，点样毛细管，有了这些您就可以进行薄层色谱工作了，这些东西已经被集成在TK-I型薄层实验启动包里,当然还要买些薄层色谱书籍； 2、薄层板观察检视是薄层工作者的基本工作,这时TU-II型暗箱式紫外观察仪就必不可少了,如果您还需要照相留底,那麽GoodSee-II型暗箱式薄层摄影仪能为您完成这些工作 如果您在研究中药指纹图谱,GoodLook-1000型全自动薄层成像系统是您的最优选择 2、 如果需要质检定量，请选购一台KH-2100型双波长薄层色谱扫描仪；如果需要新方法的科研开发,请选用KH-3000型全波长薄层色谱扫描仪； 3、 点样不准确是造成薄层定量失误的主要原因，如有薄层色谱扫描仪，请务必选用SP-II型电动薄层点样器，将极大提高您定量的精确性与重复性； 4、 喷雾液滴过大造成样点扩散，也造成薄层定量失误，请务必选用TS-I型超细电动薄层喷雾器，提高您定量的精确性与重复性； 5、 如果使用硫酸-醇显色剂，请使用TH-I数控薄层显色加热器，防止使用封闭式烘箱造成内壁腐蚀与产生大量烟雾,控温准确,加热均匀 6、如果您想确定定量的准确程度，请选用具有高度重复性的德国MERCK标准测试板； 7、 如果您觉得预制板太贵，请选用TD-II全自动铺板机，铺出来的预制板板又快又好。 from 海科哲生化科技公司

1、 最基本的装备：就是层析缸、色谱板、薄层储板箱，点样毛细管，有了这些您就可以进行薄层色谱工作了，这些东西已经被集成在TK-I型薄层实验启动包里,当然还要买些薄层色谱书籍； 2、薄层板观察检视是薄层工作者的基本工作,这时TU-II型暗箱式紫外观察仪就必不可少了,如果您还需要照相留底,那麽GoodSee-II型暗箱式薄层摄影仪能为您完成这些工作 如果您在研究中药指纹图谱,GoodLook-1000型全自动薄层成像系统是您的最优选择 2、 如果需要质检定量，请选购一台KH-2100型双波长薄层色谱扫描仪；如果需要新方法的科研开发,请选用KH-3000型全波长薄层色谱扫描仪； 3、 点样不准确是造成薄层定量失误的主要原因，如有薄层色谱扫描仪，请务必选用SP-II型电动薄层点样器，将极大提高您定量的精确性与重复性； 4、 喷雾液滴过大造成样点扩散，也造成薄层定量失误，请务必选用TS-I型超细电动薄层喷雾器，提高您定量的精确性与重复性； 5、 如果使用硫酸-醇显色剂，请使用TH-I数控薄层显色加热器，防止使用封闭式烘箱造成内壁腐蚀与产生大量烟雾,控温准确,加热均匀 6、如果您想确定定量的准确程度，请选用具有高度重复性的德国MERCK标准测试板； 7、 如果您觉得预制板太贵，请选用TD-II全自动铺板机，铺出来的预制板板又快又好。

按说我铺板铺了也有几年时间了，没有好的老师带带我，这几年也是自家在摸索着铺，硅胶水比例是按1：3的比例，缓缓加水，边加边缓慢搅拌（延一个方向）用研锤将较大气泡赶出，但还是有较小气泡在里边（当时是看不到的），等过后晾干后发现板面上有好多小坑坑，这些小坑坑在板湿的时候看不见，但干了就有了，这是为什么？大伙有啥好办法？看人家商品板多好，又光又亮又结实，那次我的板和人家商品板的一比，我的板跳到地上自己自杀了，真事儿！另外我还有个想法，我把硅胶搅拌好后放在真空中抽一下会不会好一点，我只是这样想但没试过，有人试过没有？高人指点一下，你们铺的板都是啥样子？有啥诀窍？

[font='times new roman'][size=18px]生物实验中的基础操作[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]—[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]铺板，流式及蛋白浓度测定[/size][/font][font='times new roman'][size=18px]铺板[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]以每孔[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]×[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]10[/color][/size][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#000000]4[/color][/size][/sup][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]个细胞平铺于[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]96[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]孔板中，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]37 [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]°C[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]恒温培养箱中培养。铺板后，分别于[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]24 h[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]48 h[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]72 h[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]96 h[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]120 h[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]在每孔加入[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]10 [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]μ[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]L[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] CCK-8[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]溶液，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]37 [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]°C[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]恒温培养箱中孵[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]4 h[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]。并用酶标仪测定波长[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]450 nm[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]处[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]OD[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]值，利用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Graphpad[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] prism5[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]计算增殖情况。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=18px]流式细胞术[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1. [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]收集对照组和实验组细胞[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]([/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]包括培养上清中的细胞[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000])[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，收集[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]10 ×10[/color][/size][/font][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#000000]5[/color][/size][/sup][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]个[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]细胞，用预冷[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]PBS[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]离心洗涤。用双蒸水稀释[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]5×Binding Buffer[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]为[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1 ×[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]工作液，取[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]500 [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]μ[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]L[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] 1 × Binding Buffer [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]重悬细胞。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]2. [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]每管加入[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]5 [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]μ[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]L[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] Annexin V-APC [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]和[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]10 [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]μ[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]L[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] 7-AAD[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]3. [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]轻柔涡旋混匀后，室温避光孵育[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]5 [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]min[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]4. [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]上机进行分析[/color][/size][/font][font='宋体'][size=16px][color=#000000]。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=18px]细胞总蛋白质提取，测定蛋白浓度及蛋白变性[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]将对数生长期的对照组及实验组细胞移入[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]15 mL [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]离心管中，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]900 rpm/min [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]离心[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] 8 min[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，并用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] PBS [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]溶液洗涤[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] 2 [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]次，以去除培养基中血清的影响。分别加入[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] 100 μL [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]蛋白裂解液，与细胞充分混匀。冰上裂解[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]小时后，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]4[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]°C[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]12000 rpm/min [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]离心[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] 15 min[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，将上清移至新的离心管中，得到细胞总蛋白，并采用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] BCA [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]法测定蛋白浓度。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=18px]蛋白免疫印迹实验[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]配制浓度为[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]10%[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]或[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]12%[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的分离胶，加入最后[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]TEMED[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]试剂搅拌均匀后，迅速灌胶，用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]乙醇压齐分离胶[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]。待分离胶凝固后，弃去上层的乙醇，用滤纸将乙醇吸干，注意不要[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]将纸屑污染胶板。配制浓缩胶，插入梳子，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]待胶凝固[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]。开始凝胶电泳实验，缓慢拔出梳子，将胶夹紧放入电泳槽，槽内倒入电泳液，蛋白样品以等质量上样，按照实验设计加入蛋白[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] Marker[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]和[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]×[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]上样缓冲[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]液。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]上层胶[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]60 V[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]电压，样品跑至下层分离胶时，电压调至[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]90 V[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，继续[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]跑胶至[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]蓝线到达分离胶底部停止。将[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] PVDF [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]膜浸泡在甲醇中约[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] 30 s [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]激活后备用。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]将转膜夹板[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、滤纸、胶按照“黑板—滤纸—凝胶—[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]PVDF [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]膜—滤纸—白板”的顺序夹好备用，注意每一层避[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]免产生气泡。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]转膜槽中[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]放入夹板，周围放入冰袋，倒入[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]转膜液[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，恒流[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] 200mA [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]转膜[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] 2.5 h[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]（[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]转膜时间[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]根据分子量大小设置）。用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]TBST[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]配制[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]5%[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]牛奶封闭液对[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] PVDF [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]膜进行封闭，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]转膜完成[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]后，将转好的膜放入封闭盒内，倒入牛奶封闭液，室温，摇床[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]上慢摇孵育[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] 2 h[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]洗膜[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]: TBST [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]洗[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] 3 [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]次，每次[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]10 min[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]。配制[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]一[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]抗，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]4 [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]°C[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]孵育过夜。洗膜，配制二抗，室温静孵[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] 1 h[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]TBST [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]洗[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] 3 [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]次，每次[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] 10 min[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]。配制[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] ECL [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]发光液，室温条件下孵育[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] 3 min[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]ECL [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]显影，化学发光成像仪曝光，保存图片。[/color][/size][/font]

薄层色谱法标准操作规程 依据：《中华人民共和国药典》2000年版二部。 内容： 1 简述：薄层色谱法，是将适宜的固定相涂布于玻璃板上，成一均匀薄层。等点样、展开后，与适宜的对照物按同法所得的色谱图作对比，用以进行药品的鉴别，杂质检查或含量测定的方法。 2 仪器与材料： 2.1 玻板：除另有规定外，用5cm×20cm，10cm×20cm或20cm×20cm的规格，要求光滑，平整、洗净后的不附水珠，晾干。 2.2 固定相或载体：最常用的有硅胶G、硅胶GF、硅胶H、硅胶HF254，其次有硅藻土、硅藻土G、氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素、微晶纤维素F254等。其颗粒大小，一般要求直径为10—40µ m。薄层涂布，一般可分无粘合剂和含粘合剂两种；前者系将固定相直接涂布于玻璃板上，后者系在固定相中加入一定量的粘合剂，一般常用10—15%煅石膏（CaSO4• 2H2O在140℃烘4小时），混匀后加水适量使用，或用羧甲基纤维素钠水溶液（0.5—0.7%）适量调成糊状，均匀涂布于玻璃板上。也有含一定展开液或缓冲液的薄层。 2.3 涂布器：应能使固定相或载体在玻璃板上涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。 2.4 点样器：常用具支架的微量注射器或定时毛细管，应能使点样位置正确集中。 2.5 展开室：应使用适合薄层板大小的玻璃制薄层色谱展开缸，并有严密盖子，除另有规定外，底部应平整光滑，应便于观察。 3 操作方法： 3.1 薄层板制备：除另有规定外，将1份固定相和3份水在研钵中向一方向研磨混合，去除表面的泡后，倒入涂布器中，在玻璃板上平稳地移动涂布器进行涂布（厚度为0.2—0.3mm），取下涂好薄层的玻璃板，置水平台上于室温下晾干，后在110℃烘30分钟。即置有干燥剂的干燥箱中备用。使用前检查其均匀度（可通过透射光和反射光检视）。 3.2 点样：除另有规定外，用点样器点样于薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边2.0cm，点样直径为2——4mm，点间距离约为1.5—2.0cm，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。 3.3 展开：展开室如需预先用展开剂饱和，可在室中加入足够量的展开剂，并在壁上贴二条与室一样高、宽的滤纸条，一端浸入展开剂中，密封室顶的盖，使系统平衡或按正文规定操作。将点好样品的薄层板放入展开室的展开剂中，浸入展开剂的深度为距薄层板底边0.5—1.0cm（切勿将样点浸入展开剂中），密封室盖，等展开至规定距离（一般为10—15cm），取出薄层板，晾干，按各品种项下的规定检测，如需用薄层扫描仪对色谱斑点作扫描检出，或直接在薄层上对色谱斑点作扫描定量，则可用薄层扫描法。薄层扫描的方法，除另有规定外，可根据各种薄层扫描仪的结构特点及使用说明，结合具体情况，选择吸收法或荧光法，用双波长或单波长扫描。由于影响薄层扫描结果的因素很多，故应在保证供试品的斑点在一定浓度范围内呈线性的情况下，将供试品与对照品在同一块薄层上展开后扫描，进行比较并计算定量，以减少误差。各种供试品，只有得到分离度和重现性好的薄层色谱，才能获得满意的结果。 4 注意事项： 4.1 所用玻璃板应洗净不挂水珠，光滑平整。 4.2 铺板要均匀，厚度适宜，并于室温下晾干后在110℃活化30分钟，置于有干燥剂的干燥箱或干燥器中备用。 4.3 点样点一般为圆点，不能太大。薄层层析操作要点铺板 铺板用的匀浆不宜过稠或过稀：过稠，板容易出现拖动或停顿造成的层纹；过稀，水蒸发后，板表面较粗糙。匀浆配比一般是硅胶G:水=1：2～3，硅胶G:羧甲基纤维素钠水溶液=1:2。研磨匀浆的时间，根据经验来定，与空气湿度有关，一般通过拿起研棒时匀浆下滴的情况来判断，越稠越难下滴。匀浆的稀稠除影响板的平滑外，也影响板涂层的厚度，进一步影响上样量。涂层薄，点样易过载；涂层厚，显色不那么明显。通常，板的质量对薄层鉴别的影响不是很大，影响最大的是展开剂的配制和展开系统的饱和。 点样 尽量用小的点样管。如果有足够的耐性，最好只用1微升的点样管。这样，点的斑点较小，展开的色谱图分离度好，颜色分明。样品溶液的含水量越小越好，样品溶液含水量大，点样斑点扩散大。样品溶液的溶剂一般是无水乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯。点好样的薄层板用电吹风的热风吹干或放入干燥器里晾干。 展开剂配制 选择合适的量器把各组成溶剂移入分液漏斗，强烈振摇使混合液充分混匀，放置，如果分层，取用体积大的一层作为展开剂。绝对不应该把各组成溶液倒入展开缸，振摇展开缸来配制展开剂。混合不均匀和没有分液的展开剂，会造成层析的完全失败。各组成溶剂的比例准确度对不同的分析任务有不同的要求，尽量达到实验室仪器的最高精确度，比如：取1ml的溶剂，应使用1ml的单标移液管，移液管应符合计量认证要求，尽管多数时候这不是必须的。 展开系统的饱和 一般使用的是双槽的展开缸，一槽用来放展开剂，另一槽可加入氨水或硫酸。把待展开的板放入两槽间的平台，斜架着，盖上展开缸的盖子。让展开剂的蒸气充满展开缸，并使薄层板吸附蒸气达到饱和，防止边沿效应，饱和时间在半个小时左右。展开时难免要打开盖子把薄层板放入展开剂中，不过对薄层板与蒸气的吸附平衡影响不大，当然动作应该尽量轻、快。 温湿度的控制 温湿度对薄层影响都很大。不冻结的前提下，通常温度越低分离越好，较难的分离需在低温下分离，例如人参皂苷。湿度的影响，估计主要是影响薄层板的吸附能力，导致选择性（容量因子）的变化，湿度应根据实际情况确定。温度控制使用空调器或冰柜，湿度控制是通过在另一展开槽放置相应浓度的硫酸。 显色 喷显色剂显色最重要是有好的雾化器。薄层色谱小知识1、怎样提高点样效率？ 点样是造成TLC定量误差的主要来源。实验证明：定量毛细管更适合较小体积的点样；微量注射器更适合较大体积的点样。这主要是因为微量注射器受小气泡、溶液回爬现象的影响较大。为避免不同定量毛细管理体制的占样误差，建议一块薄层板上最好用同一只定量毛细管。但应注意更换样品时，应将毛细管用超声波或不同极性溶课剂清洗干净。在制备样品时，溶样溶剂黏度不能过高，以便于点样；溶剂沸点过低则进样体积易变，过高则会改变展开剂组成；对样品溶解度过高会使样点发生空心现象，常用的溶剂为甲醇、乙醇、丙酮。经典TLC样点原点一般为直径3mm点间距离1-2cm底边距离1.5cm HPLC样点原点一般为直径1mm点间距5mm底边距1cm. 2、展开剂的选择 TLC与HPLC相比，一个突出的优点就是流动相的选择具有更大的灵活性，流动相的选择的目的是使绝大部分样品的Rf值位于0.1－0.7之间并达到较好的分离，与此对应的是流动相要有适当的强度和组成。流动相强度越大，溶质Rf值越大，但很可能降低分离能力；另外单一溶剂很难分离较复杂的混合物、根据相似相溶原理，要使用多元溶剂体系。一般展开剂体系选择如下：根据分离样品性质、薄层色谱板性质选择一个二元溶剂体系，通过调节溶剂比例以寻求适合Rf值，适合的Rf值找到后，再寻求极性参数相同的二元溶剂体系两个，以这三个组成为三点组成一个三角形，则可看到：三角形顶点是二元体系，边是三元体系，三角形内是四元体系，并且极性一致，可根据几何原理得出任一点组成，这种方法较为直观，也较简单。 3、TLC的通用显色方法 理想的显色希望灵敏度高，斑点颜色稳定、斑点与背景间的对比度好，斑点的大小及颜色的深度与物质的量成正比，在样品组成并不完全已知的情况下，通用显色方法显得尤为重要，通用显色方法主要有： 1、紫外照射法：方便、不破坏样品； 2、碘蒸气法：通用性强，与紫外法结合灵敏度高于该两法单独使用； 3、荧光试剂：制造荧光背景，使原来紫外下无荧光物质被鉴别，有荧光物质更明显； 4、硫酸溶剂：对绝大多数有机物有效，但有破坏性。

昨天很荣幸，成为了仪器分析网论坛薄层色谱的实习小版主。本人用过岛津的CS930、CS9301，以及西格玛的SCANNER-3，对薄层扫描仪的使用和操作有切身体会。薄层定量是用两点定标法，但依我的了解，国内很少用自动或半自动点样器，基本上都是采用定量毛细管手工点样。这样就有一个问题，对照品的两个点样量，一般为v和2v，如3ul和6ul。如果用1ul定量毛细管点样，分别点3下和6下，不可置疑地，即使是非常熟练的质检员，点样时也会对薄层板有轻微的划痕，而不同的点样次数，会造成实际点样量不同：在点样一下结束后的吹干时，会把已经带有样品的划痕固定相飞尘吹走，而损失样品。这样，就造成一个系统误差，使两点定下的直线斜率偏低。另外，薄层定量重复性差，也是由于以上所说的原因。所以，大家看到，在2010年版中国药典一部的药材中，以前的益母草、黄连、金果榄等薄层定量全部改为液相了；只剩下一个枸杞子坚守阵地：枸杞子的薄层定量还存在问题。从这里也可以看出，薄层定量会逐步退出“历史的舞台”。至于定性，薄层还是相当令药典委员会的委员们青睐的。几乎90%以上的药材全都采用了薄层鉴别。这里就可以体现出薄层色谱的优点了：成本低，一块板子就可以点几批药材；供试液的制备要求不再要求那么严格等等。总之，我认为，虽然2010年版药典对薄层扫描仪的市场前景有很大冲击，但是如果薄层制作厂家在自动点样器和流动相自动配比和展开系统等上下足功夫，改变目前国内手工点样，甚或手工铺板，展槽展开这种“相当原生态”的现状，还是可以挽回一些市场损失的。

薄层色谱法标准操作规程 依据：《中华人民共和国药典》2000年版二部。内容：1 简述：薄层色谱法，是将适宜的固定相涂布于玻璃板上，成一均匀薄层。等点样、展开后，与适宜的对照物按同法所得的色谱图作对比，用以进行药品的鉴别，杂质检查或含量测定的方法。2 仪器与材料：2.1 玻板：除另有规定外，用5cm×20cm，10cm×20cm或20cm×20cm的规格，要求光滑，平整、洗净后的不附水珠，晾干。2.2 固定相或载体：最常用的有硅胶G、硅胶GF、硅胶H、硅胶HF254，其次有硅藻土、硅藻土G、氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素、微晶纤维素F254等。其颗粒大小，一般要求直径为10—40µ m。薄层涂布，一般可分无粘合剂和含粘合剂两种；前者系将固定相直接涂布于玻璃板上，后者系在固定相中加入一定量的粘合剂，一般常用10—15%煅石膏（CaSO42H2O在140℃烘4小时），混匀后加水适量使用，或用羧甲基纤维素钠水溶液（0.5—0.7%）适量调成糊状，均匀涂布于玻璃板上。也有含一定展开液或缓冲液的薄层。2.3 涂布器：应能使固定相或载体在玻璃板上涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。2.4 点样器：常用具支架的微量注射器或定时毛细管，应能使点样位置正确集中。2.5 展开室：应使用适合薄层板大小的玻璃制薄层色谱展开缸，并有严密盖子，除另有规定外，底部应平整光滑，应便于观察。3 操作方法：3.1 薄层板制备：除另有规定外，将1份固定相和3份水在研钵中向一方向研磨混合，去除表面的泡后，倒入涂布器中，在玻璃板上平稳地移动涂布器进行涂布（厚度为0.2—0.3mm），取下涂好薄层的玻璃板，置水平台上于室温下晾干，后在110℃烘30分钟。即置有干燥剂的干燥箱中备用。使用前检查其均匀度（可通过透射光和反射光检视）。3.2 点样：除另有规定外，用点样器点样于薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边2.0cm，点样直径为2——4mm，点间距离约为1.5—2.0cm，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。3.3 展开：展开室如需预先用展开剂饱和，可在室中加入足够量的展开剂，并在壁上贴二条与室一样高、宽的滤纸条，一端浸入展开剂中，密封室顶的盖，使系统平衡或按正文规定操作。将点好样品的薄层板放入展开室的展开剂中，浸入展开剂的深度为距薄层板底边0.5—1.0cm（切勿将样点浸入展开剂中），密封室盖，等展开至规定距离（一般为10—15cm），取出薄层板，晾干，按各品种项下的规定检测，如需用薄层扫描仪对色谱斑点作扫描检出，或直接在薄层上对色谱斑点作扫描定量，则可用薄层扫描法。薄层扫描的方法，除另有规定外，可根据各种薄层扫描仪的结构特点及使用说明，结合具体情况，选择吸收法或荧光法，用双波长或单波长扫描。由于影响薄层扫描结果的因素很多，故应在保证供试品的斑点在一定浓度范围内呈线性的情况下，将供试品与对照品在同一块薄层上展开后扫描，进行比较并计算定量，以减少误差。各种供试品，只有得到分离度和重现性好的薄层色谱，才能获得满意的结果。4 注意事项：4.1 所用玻璃板应洗净不挂水珠，光滑平整。4.2 铺板要均匀，厚度适宜，并于室温下晾干后在110℃活化30分钟，置于有干燥剂的干燥箱或干燥器中备用。4.3 点样点一般为圆点，不能太大。

药典上说的硅胶G板，是用硅胶G粉和水一起混合，还是用硅胶G粉和羧甲基纤维素钠的水溶液？ｕｓｅ　ｙｏｕｒ　ｈｅａｄ　ｔｈａｎ　ｙｏｕ　ｗｉｌｌ　ｆｉｎｄ　ｔｈｅ　ａｎｓｗｅｒ．ｉｔ　ｉｓ　ｎｅｃｅｓｓａｒｙ　ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｂｙ　ｏｎｅｓｅｌｆ．

淫羊藿为小檗科植物，主要功效为补肾阳，强筋骨，祛风湿。因此，淫羊藿甙在补肾壮阳的保健食品中常是主要的功能因子。关于淫羊藿甙的测定，保健食品方面尚无检验方法，药典对其甙类的检测是薄层色谱法，需铺板，试样萃取，减压蒸馏浓缩，最后用分光光度法测定，既繁琐误差又大。所以本文利用高效液相色谱法对保健食品中淫羊藿甙的测定进行了研究。1　材料与方法1.1　仪器：　Shimadzu LC-6A高效液相色谱系统；SPD-6AV紫外检测器；C-R2A数据处理系统；C18柱（4.6 mm×200 nm, 5u），CSF-3A超声波发生器。1.2　试剂：　 标准溶液：精密称取淫羊藿甙标准品5.0 mg，用甲醇(优级纯)溶解并定容为10.0 mL，此溶液浓度为0.5 mg/mL。该溶液用甲醇稀释5倍，即为0.1 mg/mL的标准使用液。2　仪器条件 流动相：甲醇+水（55+45）；流速0.8 mL/min；检测波长270 nm,0.02AUFS。柱温40℃，流动相过0.45 nm滤膜。3　测定方法3.1　试样处理［6］：取粉碎的固体试样4.0 g，加入70%乙醇40 mL，超声30 min后过滤。用少量70%乙醇洗涤残渣，收集滤液，定容至50 mL，为试样处理液。3.2　测定：取上述试样处理液1 mL，用70%乙醇稀释至5 mL，过0.45μm滤膜，进样5μL，在上述仪器条件下分析，测定峰面积。　　取标准使用液5μL，在同一色谱条件下分析，以相对保留时间定性，峰面积定量。3.3　计算x=(h1×C×V×5×100)/(h2×m)　　x试样中淫羊藿甙的含量，mg/100 g；h1试样峰高或峰面积；C标准溶液浓度，mg/mL；V试样定容体积，mL；h2标准溶液峰高或峰面积；m试样量，g。

薄层色谱法标准操作规程 1 简述：薄层色谱法，是将适宜的固定相涂布于玻璃板上，成一均匀薄层。等点样、展开后，与适宜的对照物按同法所得的色谱图作对比，用以进行药品的鉴别，杂质检查或含量测定的方法。 2 仪器与材料： 2.1 玻板：除另有规定外，用5cm×20cm，10cm×20cm或20cm×20cm的规格，要求光滑，平整、洗净后的不附水珠，晾干。 2.2 固定相或载体：最常用的有硅胶G、硅胶GF、硅胶H、硅胶HF254，其次有硅藻土、硅藻土G、氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素、微晶纤维素F254等。其颗粒大小，一般要求直径为10—40µ m。薄层涂布，一般可分无粘合剂和含粘合剂两种；前者系将固定相直接涂布于玻璃板上，后者系在固定相中加入一定量的粘合剂，一般常用10—15%煅石膏（CaSO4• 2H2O在140℃烘4小时），混匀后加水适量使用，或用羧甲基纤维素钠水溶液（0.5—0.7%）适量调成糊状，均匀涂布于玻璃板上。也有含一定展开液或缓冲液的薄层。 2.3 涂布器：应能使固定相或载体在玻璃板上涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。 2.4 点样器：常用具支架的微量注射器或定时毛细管，应能使点样位置正确集中。 2.5 展开室：应使用适合薄层板大小的玻璃制薄层色谱展开缸，并有严密盖子，除另有规定外，底部应平整光滑，应便于观察。 3 操作方法： 3.1 薄层板制备：除另有规定外，将1份固定相和3份水在研钵中向一方向研磨混合，去除表面的泡后，倒入涂布器中，在玻璃板上平稳地移动涂布器进行涂布（厚度为0.2—0.3mm），取下涂好薄层的玻璃板，置水平台上于室温下晾干，后在110℃烘30分钟。即置有干燥剂的干燥箱中备用。使用前检查其均匀度（可通过透射光和反射光检视）。 3.2 点样：除另有规定外，用点样器点样于薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边2.0cm，点样直径为2——4mm，点间距离约为1.5—2.0cm，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。 3.3 展开：展开室如需预先用展开剂饱和，可在室中加入足够量的展开剂，并在壁上贴二条与室一样高、宽的滤纸条，一端浸入展开剂中，密封室顶的盖，使系统平衡或按正文规定操作。将点好样品的薄层板放入展开室的展开剂中，浸入展开剂的深度为距薄层板底边0.5—1.0cm（切勿将样点浸入展开剂中），密封室盖，等展开至规定距离（一般为10—15cm），取出薄层板，晾干，按各品种项下的规定检测，如需用薄层扫描仪对色谱斑点作扫描检出，或直接在薄层上对色谱斑点作扫描定量，则可用薄层扫描法。薄层扫描的方法，除另有规定外，可根据各种薄层扫描仪的结构特点及使用说明，结合具体情况，选择吸收法或荧光法，用双波长或单波长扫描。由于影响薄层扫描结果的因素很多，故应在保证供试品的斑点在一定浓度范围内呈线性的情况下，将供试品与对照品在同一块薄层上展开后扫描，进行比较并计算定量，以减少误差。各种供试品，只有得到分离度和重现性好的薄层色谱，才能获得满意的结果。 4 注意事项： 4.1 所用玻璃板应洗净不挂水珠，光滑平整。 4.2 铺板要均匀，厚度适宜，并于室温下晾干后在110℃活化30分钟，置于有干燥剂的干燥箱或干燥器中备用。 4.3 点样点一般为圆点，不能太大。 1 简述：薄层色谱法，是将适宜的固定相涂布于玻璃板上，成一均匀薄层。等点样、展开后，与适宜的对照物按同法所得的色谱图作对比，用以进行药品的鉴别，杂质检查或含量测定的方法。 2 仪器与材料： 2.1 玻板：除另有规定外，用5cm×20cm，10cm×20cm或20cm×20cm的规格，要求光滑，平整、洗净后的不附水珠，晾干。 2.2 固定相或载体：最常用的有硅胶G、硅胶GF、硅胶H、硅胶HF254，其次有硅藻土、硅藻土G、氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素、微晶纤维素F254等。其颗粒大小，一般要求直径为10—40µ m。薄层涂布，一般可分无粘合剂和含粘合剂两种；前者系将固定相直接涂布于玻璃板上，后者系在固定相中加入一定量的粘合剂，一般常用10—15%煅石膏（CaSO4• 2H2O在140℃烘4小时），混匀后加水适量使用，或用羧甲基纤维素钠水溶液（0.5—0.7%）适量调成糊状，均匀涂布于玻璃板上。也有含一定展开液或缓冲液的薄层。 2.3 涂布器：应能使固定相或载体在玻璃板上涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。 2.4 点样器：常用具支架的微量注射器或定时毛细管，应能使点样位置正确集中。 2.5 展开室：应使用适合薄层板大小的玻璃制薄层色谱展开缸，并有严密盖子，除另有规定外，底部应平整光滑，应便于观察。 3 操作方法： 3.1 薄层板制备：除另有规定外，将1份固定相和3份水在研钵中向一方向研磨混合，去除表面的泡后，倒入涂布器中，在玻璃板上平稳地移动涂布器进行涂布（厚度为0.2—0.3mm），取下涂好薄层的玻璃板，置水平台上于室温下晾干，后在110℃烘30分钟。即置有干燥剂的干燥箱中备用。使用前检查其均匀度（可通过透射光和反射光检视）。 3.2 点样：除另有规定外，用点样器点样于薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边2.0cm，点样直径为2——4mm，点间距离约为1.5—2.0cm，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。 3.3 展开：展开室如需预先用展开剂饱和，可在室中加入足够量的展开剂，并在壁上贴二条与室一样高、宽的滤纸条，一端浸入展开剂中，密封室顶的盖，使系统平衡或按正文规定操作。将点好样品的薄层板放入展开室的展开剂中，浸入展开剂的深度为距薄层板底边0.5—1.0cm（切勿将样点浸入展开剂中），密封室盖，等展开至规定距离（一般为10—15cm），取出薄层板，晾干，按各品种项下的规定检测，如需用薄层扫描仪对色谱斑点作扫描检出，或直接在薄层上对色谱斑点作扫描定量，则可用薄层扫描法。薄层扫描的方法，除另有规定外，可根据各种薄层扫描仪的结构特点及使用说明，结合具体情况，选择吸收法或荧光法，用双波长或单波长扫描。由于影响薄层扫描结果的因素很多，故应在保证供试品的斑点在一定浓度范围内呈线性的情况下，将供试品与对照品在同一块薄层上展开后扫描，进行比较并计算定量，以减少误差。各种供试品，只有得到分离度和重现性好的薄层色谱，才能获得满意的结果。 4 注意事项： 4.1 所用玻璃板应洗净不挂水珠，光滑平整。 4.2 铺板要均匀，厚度适宜，并于室温下晾干后在110℃活化30分钟，置于有干燥剂的干燥箱或干燥器中备用。 4.3 点样点一般为圆点，不能太大。

薄层层析板制备方法有很多，有手工的，也有机械的如果薄层层析板用量较少，可以用手工的，如果用量较，还是用机械的更加方便快捷！　　下面先介绍下配置方法（很简单的，可以试下哦）：　　1.CMC－Na溶液的配置：一般其浓度0.3～0.5％，根据自己经验而定。具体方法如下：先将预用的水加热至60~70℃，然后加入CMC－Na，边加边搅拌，使之溶解，即得。　　2.与硅胶混合：CMC－Na溶液与硅胶的比例为3：1。具体方法如下：先将CMC－Na溶液倒入自动搅拌器或研钵中，然后加入硅胶，搅匀即可。若是在研钵中研磨，按一方向研磨，自下而上，然后自上而下，以赶尽气泡为佳。　　3.铺板：手动或机械。手动铺出的板的薄厚与所加的混合后的硅胶量有关，而机械铺出的板的薄厚与机械所选用的钢板有关，可根据需要来定。但此过程中最关键的是板子边缘铺得好坏，手动铺板一定要将玻璃板边缘硅胶涂匀（我习惯用两头掂法，即板下方的中间垫一物体，两头悬空，两手均匀掂动）。而机械铺板要注意板与板之间平整性，或者由高到低排列。　　4.晾干：自然晾干。　　5.活化：将晾干的板子在105℃烘箱中干燥30min，取出，放入干燥器中，备用。　　这是实验室和检验室薄层层析板常用的制备方法之一，供大家参.

来源：中国医院数字医院图书馆 薄层色谱法(TLC)是较早应用于中药快速分离和定性分析少量物料的非常重要的技术。由于其操作简便、色谱结果直观、显色方法可选性大,兼具分离鉴定双重功能,还可作为HPLC选择色谱体系,预测分离的先导技术。而涉及的设备价格低廉,故应用较为广泛。但TLC亦有其缺陷,其色谱结果易受铺板质量、点样技术、展开剂配制、层析环境中展开剂的饱和度、环境温湿度等因素的影响,有时难于重复 显色又受均匀性、灵敏度、稳定性等影响,均使测定结果偏差较大。最近几年围绕着测定过程的标准化和自动化,薄层色谱技术有了全新的发展,扩大了TLC技术在中药药物定性定量分析中的应用。 1　薄层色谱新技术及原理 1.1　高效薄层色谱(HPTLC) HPTLC的薄板是由较细颗粒的吸附剂用喷雾法制成的。点样采用新的装置,可以自动或半自动完成,在同一块板上点样数增加。展开方式除了同普通TLC一样的直线展开外,还可采用圆心式展开和向心式展开。由于改进了点样技术,板技术,提高了检测灵敏度, HPTLC的分离能力大大提高,比普通TLC提高3倍。同时又保存了TLC在敞开式床上进行分离的优点,可逐步展开,同步检测,并不存在中毒问题。用HPTLC不仅可以定性,还可用于定量分析。对生物体内药物分析,抗菌素发酵成分分析,药物制剂分析及植物药中有效成分的分析有独特的优势。 1.2 　假相薄层色谱假相TLC所使用的的流动相不是有机溶剂,而是低浓度的表面活性剂及环糊精的水溶液,固定剂一般为聚酰胺薄膜。其中以表面活性剂和其他溶剂组成的束胶溶液,以其选择性溶解力,梯度洗脱光学检测方面的独到之处,以及流动相的简单、无毒、不燃烧、价格低廉、处理方便,引起了人们普遍的兴趣。 假相TLC能使一些不溶于水的物质及芳烃异构体得到较好的分离, 还可用于药物中微量杂质的限量检查及体内药物分析。 1.3　反相薄层色谱(RPTLC) 在薄层色谱中,当流动相的极性大于固定相的极性时,就形成反相TLC,一般反相TLC的固定相是化学键合相,虽然制备稍复杂,但其斑点扩散小,广泛用于多种药品的分离,特别适合于组分复杂的混合物的分离。化学键合相硅胶的硅烷化程度也可为分离提供选择性。可根据样品性质选择适当固定相材料,实现最佳分离效果。RPTCL 主要用于极性成分复杂的样品,又可用来考察摸索HPLC的分离条件。