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使用MIP-SDR苏丹红专用SPE小柱检测调味料油辣椒中的苏丹红I实验目的 采用《GBT 19681-2005 食品中苏丹红染料的检验方法 高效液相色谱法》,适用于食品中苏丹红染料的检测。样品经溶剂提取、固相萃取净化后,用反相高效液相色谱—紫外可见光检测器进行色谱分析,采用外标法定量。国标中提及氧化铝层析柱需自制,中性氧化铝105℃干燥 2h,于干燥器中冷至室温,每100g 中加入2mL 水降活,混匀后密封,放置12h 后使用。活度的调整采用标准溶液过柱,将1ug/mL 的苏丹红的混合标准溶液1mL 加到柱中,用5%丙酮正己烷溶液60mL 完全洗脱为准,4 种苏丹红在层析柱上的流出顺序为苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅳ、苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅲ,可根据每种苏丹红的回收率作出判断。苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅳ的回收率较低表明氧化铝活性偏低,苏丹红Ⅲ的回收率偏低时表明活性偏高。操作相当繁琐,我们运用安谱公司MIP-SDR苏丹红专用SPE小柱处理,洗脱液浓缩定容后经0.22微米滤头后,进行液相色谱分析。1. 仪器设备高效液相色谱仪(岛津LC-20A),荧光检测器(岛津RF-20A),色谱柱(Inertsustain- C18 250mm*4.6mm/5um),MIP-SDR苏丹红专用SPE小柱(CNW)2. 试剂丙酮(分析纯);正己烷(色谱纯);甲醇(色谱纯);无水硫酸钠3. 分析步骤称取试样10.0g于离心管中,向离心管中加入10ml水再加入30ml正己烷,高速均质5min, 3000r/min,离心10min,(在离心过程中若取样量加大,可使用100mL离心管)吸出正己烷层,过无水硫酸钠至鸡心瓶中,再向离心管中加入20ml*2正己烷,高速均质、离心,合并正己烷层,无水硫酸钠过滤到鸡心瓶中,最后氮吹蒸发干在保持5min,用5mL正己烷溶解残渣。SPE柱先活化:先用5ml二氯甲烷,再用5ml正己烷,进行活化。上样:样液到小柱子里面,用2ml正己烷润洗鸡心瓶倒入小柱子淋洗:用5ml正己烷淋洗小柱子洗脱:用5ml二氯甲烷,并收集洗脱液浓缩定容:40℃氮吹干,用1ml乙腈定容,超声1min,漩涡20s,过0.22um的膜,上机。http://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gifhttp://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gif4.仪器条件4.1色谱柱: C18 250mm*4.6mm/5um (或相当型号色谱柱)4.2流动相: 溶剂 A 0.1%甲酸的水溶液:乙腈 = 85:15 溶剂 B 0.1%甲酸的乙腈溶液:丙酮=80:204.3梯度洗脱(梯度见图1):流速:1mL/min 柱温:30℃4.4检测波长:苏丹红Ⅰ 478nm 13min后波长变成520nmhttp://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gif图1 梯度5. 结果分析样品中苏丹红的测定 按照上述方法进行苏丹红标液0.2mg/L检测,见图2,样品中苏丹红的色谱图如图3所示,未检出,基线波动较小,同时做了苏丹红I单标定性、苏丹红I加标实验,见图4、5,保留时间11.3min,并无杂质干扰。加标浓度为5.0mg/L,加标回收率为91.48%。http://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gif 图2 0.02mg/L苏丹红标液的色谱图http://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gif 图3 样品苏丹红的色谱图http://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gif图4苏丹红I单标的色谱图http://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gif图5苏丹红I加标的色谱图3. 结论本试验利用MIP-SDR苏丹红专用SPE小柱类似分子印迹技术吸附苏丹红,使用溶剂少,建立了一种快速,高效,可靠的检测技术。具有较高回收率,可达91.48%,适用食品苏丹红的检测。但后期做了基质更为复杂的辣椒酱,测其苏丹红,出现杂峰较多,造成基线不够平稳,淋洗液可尝试改为用3% 异丙醇-正己烷溶液淋洗,希望安谱公司进一步解决。
不知道大家在使用国标检测苏丹红的过程中,对于净化用的氧化铝层析柱有没有考虑过商品化的SPE柱。我们 实验室在多次苏丹红检测中,发现按照国标自己填装的层析氧化铝柱不但耗时、费溶剂最重要的是不稳地,对我们批量做检测的人员来说,实验结果的稳定性非常的重要。基本上我们实验室除了大容积的装柱之外,小的净化柱如Ag柱、H柱、小的中性氧化铝柱等都是购置的商品化小柱,这次安谱的工作人员向我们介绍了 SDR 苏丹红 专用 SPE 小柱,规格是 500mg, 6mL,我们实验室进行了试用并和自己填装的小柱做了个对比。 首先最直观的感觉到是方便,不用干燥降活了吗,我比较喜欢商品化的柱子,这个非常重要的一点,省时省力。呵呵。其次重要的一点是回收率较稳定,而且比自己装的小柱回收率要高,(这里说明一下,我做的回收率只是用标样各自直接上柱洗脱,小偷懒一下,所以回收率都还行,如果要做样品的回收率,各位可以亲自做,到时一起讨论哦),还有一点做苏丹红的检测中大家能感觉到的一个是净化洗脱中使用试剂较多,费时啊,当然也费溶剂了,这个SDR柱在净化洗脱时使用的试剂可以少很多,主要是对我这种在一线检测的人员来说,可以快速完成前处理,而且毒害小一下,因为用的正己烷、丙酮等都不是什么好东东啊 在试用过后,我觉得这个柱子总体不错,已经订购了一些(还没到货),大量使用后再和大家讨论。
昨天发了鸡蛋中苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、G和7B的检测解决方案,有版友马上回复是否有辣椒油中苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、G和7B的检测http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09512.gif还好实验室的小伙伴们勤快,也做了这个应用,今天俺就毫无保留的回馈大家了辣椒油中苏丹红染料Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、G和7B的检测解决方案(参考 GB/T 19681-2005 食品中苏丹红染料的检测方法高效液相色谱法)方法优势辣椒油样品经正己烷溶解后,直接用ProElutSDH苏丹红检测专用固相萃取柱进行净化,高效液相色谱法检测。与国标《GB/T 19681-2005 食品中苏丹红染料的检测方法高效液相色谱法》相比,具有如下优势:1.优化色谱分析条件,梯度分析改为等度,提升分离效果;2.检测范围从原来的苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ四种扩展到苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、7B、G六种,弥补了国标方法中苏丹红检测种类少的不足;3.使用商品化迪马苏丹红专用SPE小柱,简化操作流程:无需按照国标方法手工进行层析柱的填装和中性氧化铝的活度调整,提高工作效率;4.使用迪马苏丹红专用SPE小柱重现性和回收率更好,避免了中性氧化铝活度容易受环境影响而引起苏丹红回收率不稳定的弊端;5.方法检出限10 μg /kg,满足国标GB/T19681-2005最低检出限10μg /kg。以下为详细解决方案,敬请参考!