切片粘定仪

6 种固定液短时间固定对冰冻切片制片效果影响冰冻切片是一种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度，然后进行切片的方法。由于其制作过程较石蜡切片快捷、简便，而多应用于手术中的快速病理诊断。但在冰冻切片制过程中影响制片的质量因素较多，从而影响手术中的快速病理诊断。因此，快速制作一张高质量的冰冻切片对于确保病理诊断极其重要。其中固定是冰冻切片制作中关键步骤之一，对切片的制片质量有着重要的影响。本文通过6种不同固定液短时固定对冰冻切片制片染色的比较，探讨不同固定液对冰冻切片制片效果的影响。1资料与方法1.1材料选自病理科手术切除的新鲜组织标本40例，包括有乳腺、甲状腺、胃、子宫、卵巢等组织。1.2固定液6种固定液分别为：10%福尔马林；95%酒精；AF固定液；丙酮∶甲醇∶乙醚酒精（乙醚∶酒精1∶1）。1.3方法1.3.1取材及切片取材大小为1.5cm×1.5cm，厚2～3mm的新[/font

一、石蜡切片 把修好的蜡块装在旋转切片机上，即可进行切片(section)。切片必须保持切片刀锐利，切片厚度通常为5～7um，也可根据染色需要切成不同厚度，一般不旋转式切片机超过10um。切好的蜡带，放人40℃左右的温水中将蜡片展平。良好的切片应无刀痕、裂痕，切片厚度均一平整。切片如有上述问题，在进行免疫组织化学染色时会出现假阳性现象。为能得到平整无皱褶的组织切片。可采用两次展片，即先将组织切片漂浮在30％的乙醇溶液中进行第一次展片，然后将切片捞起，再次放人45～50℃的水浴中进行第二次展片，乙醇的浓度和水温可视组织不同和石蜡熔点的高低自行调整。此过程是利用乙醇溶液与水之间的张力差展开切片的皱褶。为防止脱片，载玻片要涂黏片剂。对HE染色的切片，可在载玻片上涂抹薄层蛋白甘油，但蛋白甘油因含蛋白易导致非特异性免疫反应，故用于免疫组织化学染色的切片常用多聚赖氨酸、3—氨丙基—乙氧基甲硅烷等处理。二、冰冻切片 冰冻切片(fiozen section)是酶组织化学和免疫组织化学染色中最常用的一种切片方法，其最突出的优点是能够较[font='Songti SC Regu

1、从一抗的选择方面来看。有的一抗既能做石蜡切片又能做冰冻切片，而有的一抗只能做冰冻切片，关键取决于所要检测的抗原稳定性，有的抗原不稳定，经过组 织固定，脱水、透明、浸蜡、包埋、脱蜡等一系列的做石蜡切片的步骤，所检测的抗原易被破坏，这时只能用冰冻切片来做，检测这类抗原的一抗只能做冰冻切片， 而那些稳定的抗原，能经受住石蜡切片的的考验，一般来讲也可以用冰冻切片来做，总得来讲，对于既可以用冰冻切片也可以用石蜡切片检测的抗原，用石蜡切片检 测的染色效果要比冰冻切片好一些。2、从研究目的来看。石蜡切片对组织细胞的定位很准确，而长期冻存组织的冰冻切片可能因冰晶的形成破坏组织细胞形态的结构，并造成抗原的弥散，从而定位不准确。3、从抗原的保真性来看。冰冻切片对抗原的保真很好，而石蜡切片在组织固定，脱水、透明、浸蜡、包埋、脱蜡等过程中可能会对抗原的性质造成影响。4、从操作步骤的繁琐程度看。染色过程冰冻切片简单，而石蜡切片要求脱蜡入水、抗原修复等过程，比较繁琐。5、总之，石蜡切片对标本的长期保存较合适，且组织细胞形态结构保持好；而冰冻切片适合对新鲜组织的制片，然后立即固定、染色效果较好，且免疫荧光中可以相对避免石蜡自发荧光的干扰

石蜡切片操作步骤：1、取材2、固定3、脱水：30%--50%---70%（每步60分钟）---85%---95%--100%---100%（每步30钟）。4、透明：转入1/2二甲苯＋1/2无水酒精混合液20ml透明1h，纯二甲苯20ml透明1h，再用纯二甲苯20ml透明40min，并回收各液。5、浸蜡：（1）将材料分别放入25%、50%、75%的石蜡-二甲苯溶液中，每级30分钟。该过程在高于石蜡熔点3℃的温箱中进行；（2）将材料放入溶解的纯蜡中，时间为30分钟，该过程再重复两次。在高于石蜡熔点3℃的温箱中进行。6、包埋（1）将溶解好的石蜡在加入预先折好的纸船中，石蜡溶解后应过滤后使用，以免含杂质影响切片；（2）材料放入纸船，并摆好在蜡中的位置，如果包埋的组织块较多，应进行编号；（3）将纸船放置在冷水上加速冷却过程。7、切片（1）修整：用刀片修成方形或长方形蜡块；（2）以少许热蜡液，将蜡块底部粘附于小木块上，以少许石蜡融化在蜡块边缘，加强粘附的强度；（3）木块粘附于切片机上，调整切片机，使蜡块切面与切片刀刃平行；（4）切成连续的蜡带，切片刀的锐利度、蜡块的硬度都会影响切片质量，可用热水或冷水适当改变石蜡的硬度，也可在冰箱中放置一段时间；（5）分割蜡带，分开的蜡片放在45℃温水上，使蜡片展开。8、粘片与烤片（1）可用粘片剂防止蜡片滑脱，但粘附剂通常容易被染色而使切片背景有颜色，影响观察，实验表明，载玻片洗的足够干净，一般不会滑片；（2）用载玻片捞取展开后的蜡片，调整蜡片的位置使位于载玻片中央，自然干燥。9、脱蜡与醇化（1）将切片放入纯二甲苯溶液中10分钟，使石蜡完全溶解，共2次；（2）溶去石蜡的切片依次放入75%、50%、25%二甲苯-乙醇溶液中，每级10分钟；（3）再将切片依次放入100%、95%、90%、80%、70%、60%、50%的乙醇溶液中进行醇化，每级10分钟。10、染色（1）将切片放入番红染液中30分钟，番红染色后，将切片依次放入50%、60%、70%、80%的乙醇溶液中分级洗脱，每级10分钟；（2）洗脱后的切片放入固绿染液中染色1分钟；11、脱水、透明与封片（1）染色后的切片依次放入90%、90%、95%、100%乙醇溶液中分级洗脱，每级10分钟；（2）洗脱后的切片依次放入25%、50%、75%、100%、100%二甲苯溶液中透明，每级10分钟，出现浑浊表示脱水不彻底，需重来；（3）滴1-2滴中性树胶，将洁净的盖玻片倾斜放下，封片，镜检，选择好的贴上标签，性切片制作完成。

分光光度法测聚酯切片中锑含量，采用行标，用硫酸溶解加入双氧水，用碘化钾抗坏血酸做显色剂，吸光度不稳定，空白校零后吸光度一直上涨，样品颜色不断变淡，吸光度一直降低，这是什么原因，有办法稳定吗

中药切片机使用方法　　　　1、调节:调节时先松开固紧铜柱螺母,其次转动螺母与铜柱上的厚薄方向调节,厚薄调妥后,必须把螺母与铜柱拧紧。如果刀盘与刀片平行,切勿开机。刀盘必须低于刀片,才可开机截切。调节最厚约3mm,薄则无级调变。　　　　2、更换刀片:用六角把手插入该机侧面孔位。转动可以调盘方向再换刀,换刀时松掉刀片的二只六角螺丝,插入刀片更换即可。中药切片机注意事项　　　　1、刀盆常擦油,以免粘垢,如出现药片留尾与细碎片时,这显示软化不妥或刀片不锐利,必须更换或磨刀。调得太薄,尚不好截切。　　　　2、切片如甜云、生地、元参、天麻等粘性药物,表面带水截切。本厂是专业制造多功能EF系列制丸机、AB系列中小型切片机及CD系列粉碎机。产品具有：噪音低、功效高、价廉物美、使用安全等特点。具有装饰柜台大方美观的作用，是适应药店、医院、药材加工场、化工、科研等单位使用。

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[align=center][font='times new roman'][size=20px]获得一张完美超薄切片的“八要素”[/size][/font][/align][align=center]吴佳楠，魏 潜[/align][align=center][font='楷体']（中国农业科学院作物科学研究所，重大平台中心，北京100081）[/font][/align][align=left][font='times new roman']摘要：[/font][font='times new roman']组织细胞经过取材、固定、清洗、脱水、渗透、包埋和聚合、切片、染色[/font][font='times new roman']等一系列[/font][font='times new roman']的技术流程被制备成超薄切片后才能在透射电子显微镜下观察其超微形态结构。由于前期制样的环节多且复杂，每一个环节出现一些微小失误，经过叠加都会被放大，在进行超微结构观察时就会出现褶皱、空洞、裂纹、污染等“人工假象”。要去除这些“人工假象”，就需要在每个环节按照规定的要求仔细的操作，并时刻观察样品的状态，挑选符合要求的样品进入下一环节。这八个环节规定的要求[/font][font='times new roman']包含着[/font][font='times new roman']制备组织细胞超薄切片的关键点，也是获得完美电镜照片的关键点，这些关键点可以统称为“八要素”。[/font][/align][font='times new roman']关键词[/font][font='times new roman']：[/font][font='times new roman']透射电子显微镜；细胞结构；制样；切片；污染；[/font][align=left][font='楷体']中图分类号：Q-336；Q246；Q942.4[/font][/align][align=center][font='times new roman'][size=20px]The "eight Elements" to get a perfect picture of ultrastructure[/size][/font][/align][align=center][font='times new roman']WU Jianan[/font][font='times new roman'][sup][size=13px] [/size][/sup][/font][font='times new roman'],WEI QIAN[/font][/align][align=center][font='times new roman']([/font][font='times new roman']Major Platform Center, Institute of Crop Sciences, [/font][font='times new roman']Chinese [/font][font='times new roman']Academy of Agricultural Sciences,Beijing[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']100081, China[/font][font='times new roman'] )[/font][/align][font='times new roman']Abstract[/font][font='times new roman']：[/font][font='times new roman']Tissue cells were prepared into ultrathin sections by sampling, fixation, cleaning, dehydration, infiltration, embedding [/font][font='times new roman']as well as[/font][font='times new roman'] polymerization, slicing, staining and other technical processes before[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']ultrathin sections could be observed under transmission electron microscope. Due to the [/font][font='times new roman']number[/font][font='times new roman'] and complex[/font][font='times new roman']ity of the[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']processes[/font][font='times new roman'] of sample preparation in early stage[/font][font='times new roman']s[/font][font='times new roman'], small mistakes in each [/font][font='times new roman']process[/font][font='times new roman'] will be magnified after superposition, [/font][font='times new roman']which may lead to[/font][font='times new roman'] "artificial illusion" such as folds, voids, cracks and pollution [/font][font='times new roman']during[/font][font='times new roman'] observ[/font][font='times new roman']ation[/font][font='times new roman']. To remove these "artificial illusion", it is necessary to operate carefully in accordance with the requirements of each [/font][font='times new roman']process[/font][font='times new roman'], and observe the [/font][font='times new roman']status[/font][font='times new roman'] of[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']sample[/font][font='times new roman']s[/font][font='times new roman'] at all times, and select sample[/font][font='times new roman']s[/font][font='times new roman'] that meet the requirements to enter the next [/font][font='times new roman']process[/font][font='times new roman']. The requirements specified in these eight steps are the key points for preparing ultrathin sections of tissue cells and obtaining perfect electron microscope pictures. These key points can be collectively referred to as the "eight elements".[/font][font='times new roman']Keywords：[/font][font='times new roman']Transmission electron microscope Cell structure Sample preparation. Slice Pollution [/font][font='times new roman']超薄切片是[/font][font='times new roman']透射电子显微镜[/font][font='times new roman']观察[/font][font='times new roman']生物体组织细胞超微结构的[/font][font='times new roman']主要载体[/font][font='times new roman']。超薄切片[/font][font='times new roman']的制备需要经过一系列的技术操作，包括[/font][font='times new roman']组织目标位置[/font][font='times new roman']的[/font][font='times new roman']取材固定[/font][font='times new roman']、[/font][font='times new roman']清洗、脱水、渗透、包埋和聚合、切片和染色等。[/font][font='times new roman']超薄切片的质量影响着组织超微结构，这取决于每一个环节需要按照技术要求操作，而这些技术要求中涉及到一些关键点，这些关键点可以称为[/font][font='times new roman']制备一张完美的超薄切片的[/font][font='times new roman']八个[/font][font='times new roman']关键要素，简称“八要素”。[/font][font='times new roman'][size=18px]1完美超薄切片的“八要素”[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1.1取材要精准[/size][/font][font='times new roman']取材是进行超薄切片制备的第一步，也是关键的一步。取材位置的准确与否，关系到超薄切片中是否包含需要观察的组织；在确定取材位置的前提下，样品块的大小在一定程度上影响着超薄切片的质量。所以在进行取材之前，需要查阅相关文献，确定实验目的，从整体把握所需观察的组织细胞位于植株的相对位置[/font][font='times new roman'][sup][size=13px][1][/size][/sup][/font][font='times new roman']。对于有特殊观察位置的[/font][font='times new roman']组织[/font][font='times new roman']要将观察位置限定在取材范围的中心部分，再向四周扩充部分组织，用以保护观察位置，防止取材时的人为损伤。由于固定液渗透速率的限制，样品块的大小要控制在1mm[/font][font='times new roman'][sup][size=13px]3[/size][/sup][/font][font='times new roman']以内，对于无法将组织的各个层面控制在1mm[/font][font='times new roman'][sup][size=13px]2[/size][/sup][/font][font='times new roman']以内，至少要保证有一组相对位置的组织面积为1mm[/font][font='times new roman'][sup][size=13px]2[/size][/sup][/font][font='times new roman'][sup][size=13px][2][/size][/sup][/font][font='times new roman']。比如横截面较大的植物茎秆，保证茎秆的取样高度在1mm以内，根据横截面的大小进行2-[/font][font='times new roman']4[/font][font='times new roman']等分，最终得到高度为1mm的扇形茎秆组织，尽可能的保存相对较多的维管组织，便于在光镜定位时有可选择性。[/font][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/09/202209191405052537_1192_3446098_3.jpeg[/img][align=center][font='times new roman']图1 茎秆取材方式[/font][/align][font='times new roman']同一处理中的不同植株有不同的生长状态，在组织结构上也有明显的差异，不同植株在取材时产生的偏差会对实验结果带来不利的影响[/font][font='times new roman'][sup][size=13px][2][/size][/sup][/font][font='times new roman']。所以在进行取材时，对照组和处理组的取材要结合植株的具体生长状态决定，要做到具有相对参考性。为了提高结果的可靠性，需要在严格控制的条件下通过重复试验进行验证，包括同一处理不同植株和同一处理不同批次的重复试验[/font][font='times new roman'][sup][size=13px][2][/size][/sup][/font][font='times new roman']。[/font][font='times new roman'][size=16px]1.2[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]固定要及时[/size][/font][font='times new roman']细胞是生物体进行生物化学作用的主要场所，富含大量的酶。当组织离开生物体后，其细胞会因为酶的作用发生降解，细胞内的各种细胞器也会随之发生变化。所以在取材的时候要尽快的进行固定，固定液可以与组织细胞内的蛋白质、脂质、糖原等生物大分子发生交联反应，在分子水平上保持细胞的生活状态，防止细胞超微结构的损伤[/font][font='times new roman'][sup][size=13px][3][/size][/sup][/font][font='times new roman']。同时，固定液与生物大分子产生稳定的交联结构，可以有效的防止细胞结构在清洗和脱水过程中的丢失。固定液的渗透存在一定的阻力，通过抽真空的方式加速固定液的渗透，同时也可以将植物组织中的空气抽出，获得良好的固定效果。对于不易固定或者长时间漂浮在固定液面上的组织，可以通过在固定液中滴加Trion X-100、Tween-20的方式提高固定效果。[/font][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/09/202209191405048943_7757_3446098_3.jpeg[/img][align=center][font='times new roman']图2 [/font][font='times new roman']固定良好与固定不良的叶绿体（bar：2um）[/font][/align][align=center][font='times new roman']1：[/font][font='times new roman']固定良好[/font][font='times new roman']的叶绿体；2：[/font][font='times new roman']固定不良的叶绿体[/font][/align][font='times new roman'][size=16px]1.3清洗要彻底[/size][/font][font='times new roman']组织细胞经过醛类固定液固定后，需使用相同的缓冲液充分漂洗，才能进行后固定。残留的醛类固定液会与后固定使用的四氧化锇反应产生沉淀；经四氧化锇后固定的组织细胞在脱水之前也需要使用形同的缓冲液充分清洗，洗去未参与反应的四氧化锇，这些残余的四氧化锇会被脱水使用的乙醇还原，产生不溶性的二氧化锇沉淀[/font][font='times new roman'][sup][size=13px][2][/size][/sup][/font][font='times new roman']。这些沉淀的形态，在电镜下可见为细小的颗粒状，主要积附在细胞结构的脂膜、基质等部位，是一种“人工假象”，影响组织细胞超微结构的观察。[/font][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/09/202209191405057967_8886_3446098_3.jpeg[/img][/align][align=center][font='times new roman']图3 [/font][font='times new roman']清洗彻底与不彻底的叶绿体（bar：2um）[/font][/align][align=center][font='times new roman']1：[/font][font='times new roman']清洗不彻底造成的黑色颗粒污染“锇黑”[/font][font='times new roman']；2：清洗干净无黑色颗粒污染[/font][/align][font='times new roman'][size=16px]1.4脱水要充分[/size][/font][font='times new roman']生物样品需要脱水的因素有以下几点：[/font][font='宋体']①[/font][font='times new roman']生物组织含水量较高，直接用于电镜观察会污染镜筒[/font][font='times new roman'][sup][size=13px][2][/size][/sup][/font][font='times new roman']；[/font][font='宋体']②[/font][font='times new roman']电镜的真空环境会抽提组织中的水分造成细胞结构塌陷；[/font][font='宋体']③[/font][font='times new roman']渗透所需的树脂不溶于水，需要使用有机试剂将组织内[/font][font='times new roman']外[/font][font='times new roman']的水分置换[/font][font='times new roman'][sup][size=13px][4][/size][/sup][/font][font='times new roman']。[/font][font='times new roman']需要注意的是，不同的组织所需的脱水时间是不一样的。对于有细胞壁和液泡的植物组织，其脱水时间就要比动物组织相应的延长，以此来保证脱水的充分，因为残余的水分会造成细胞结构肿胀，出现空腔[/font][font='times new roman'][sup][size=13px][2][/size][/sup][/font][font='times new roman']。同时残留的水分也会影响树脂的渗透，导致局部结构破碎。因此，脱水时间要根据样品的特性进行适当调整。但是，过分的脱水会导致细胞结构丢失，这也是一种人为假象。[/font][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/09/202209191405052448_6233_3446098_3.jpeg[/img][/align][align=center][font='times new roman']图4 脱水[/font][font='times new roman']问题（bar：2um）[/font][/align][align=center][font='times new roman']1：脱水[/font][font='times new roman']不充分产生空腔（[/font][font='times new roman']红色箭头指向部分[/font][font='times new roman']）[/font][font='times new roman']；[/font][/align][align=center][font='times new roman']2：脱水充分的叶绿体没有空腔[/font][/align][font='times new roman'][size=16px]1.5渗透要均一[/size][/font][font='times new roman']生物组织较为柔软，需要以树脂作为[/font][font='times new roman']载体[/font][font='times new roman']，为超薄切片提供应力支撑，同时也保证生物切片能够耐受电子束的轰击。植物组织细胞存在一些较难渗透的结构，如细胞壁、淀粉粒、脂质体等，渗透不良会造成这些结构与周围组织硬度不均一，在切片的时候产生褶皱、颤痕、裂纹[/font][font='times new roman'][sup][size=13px][5][/size][/sup][/font][font='times new roman']，甚至部分组织细胞会在在切片的时候碎片化，影响超微结构的观察。[/font][font='times new roman']通过以下几个方面可以有效的增加渗透的效果：[/font][font='宋体']①[/font][font='times new roman']在树脂的选择方面，植物组织可以选择黏度低、渗透速率较快的Spurr树脂，配置比例参照坚硬配方；[/font][font='宋体']②[/font][font='times new roman']配置、保存树脂和渗透[/font][font='times new roman']、包埋[/font][font='times new roman']所需的容器最好提前一天在[/font][font='times new roman']烘箱中[/font][font='times new roman']72[/font][font='宋体']℃[/font][font='times new roman']烘烤过夜，去除吸附在表面的水分；[/font][font='宋体']③[/font][font='times new roman']Spurr树脂配制需将四个组份按比例混合，使用磁力搅拌器充分搅拌均匀，保证每一滴树脂的成分均一；配制好的树脂若当天不使用，需放在4[/font][font='宋体']℃[/font][font='times new roman']冰箱中低温保存，室温[/font][font='times new roman']下[/font][font='times new roman']树脂[/font][font='times new roman']会[/font][font='times new roman']缓慢聚合、黏度增加；[/font][font='宋体']④[/font][font='times new roman']树脂渗透采用抽真空的方式辅助进行，利用外力增加渗透效果，同时在真空皿中铺一层吸水硅胶，防止树脂渗透的时候吸潮；[/font][font='宋体']⑤[/font][font='times new roman']根据植物组织种类调整树脂渗透的时间和次数，对于坚硬或者致密的组织，树脂渗透的次数要增加，时间要延长；[/font][font='宋体']⑥[/font][font='times new roman']每次更换树脂的时候，要尽可能的吸走组织表面附带的多余树脂，可以采用将组织从待更换的树脂中挑出，放入新树脂中的方法，减少老旧树脂的残留。[/font][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/09/202209191405060340_3508_3446098_3.jpeg[/img][align=center][font='times new roman']图5 [/font][font='times new roman']渗透问题对比（bar：5um）[/font][/align][align=center][font='times new roman']1：[/font][font='times new roman']渗透均一[/font][font='times new roman']的茎秆组织；2：[/font][font='times new roman']渗透不均[/font][font='times new roman']一的茎秆组织有[/font][font='times new roman']裂纹（[/font][font='times new roman']红色箭头指向部分[/font][font='times new roman']）[/font][/align][font='times new roman'][size=16px]1.6[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]包埋要定向[/size][/font][font='times new roman']植物组织生长具有明显的方向性，要根据观察部位相对于组织整体的位置确定包埋的方向。在包埋聚合时，组织在包埋板中的位置会发生偏移，需要定时进行调整，一般在聚合开始前的4-6小时，树脂[/font][font='times new roman']会呈现由粘稠到稀薄的变化过程[/font][font='times new roman']，可以利用牙签深入树脂中调整组织位置；当超过6小时之后，树脂的粘稠度会直线上升，调整组织位置会受到较大的阻力，组织容易受损。对于方向偏移的组织，切片呈现的细胞形态及排列会发生变化，甚至形变，这对于观察细胞生长发育变化和组织半薄定位产生较大的影响。所以，在包埋的时候一定要控制好样本的方向性，防止它在聚合的过程中发生位置偏移。[/font][align=center][img]" style="max-width: 100% max-height: 100% [/img][/align][align=center][font='times new roman']图6 水稻根[/font][font='times new roman']尖中柱细胞（红色方框标注部分）[/font][/align][font='times new roman'][size=16px]1.7[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]切片要平整[/size][/font][font='times new roman']切片是呈现细胞形态关键环节，厚度一致、平整连续的切片是一个组织前处理良好的标准之一。若在切片上出现刀痕、颤痕、褶皱、切片破损现象，可以在一定程度上反应组织的渗透、树脂块的硬度、切片刀、切片环境等问题。[/font][font='宋体']①[/font][font='times new roman']刀痕（异物损伤）：刀痕是垂直于刀口并纵贯切片的划痕[/font][font='times new roman'][sup][size=13px][6][/size][/sup][/font][font='times new roman']，会破坏细胞结构，一般是由于组织块中有硬质颗粒，损伤刀口后在切片上留下痕迹；或者组织块破碎掉下来的粉末，粘在刀口上，反过来损伤切片[/font][font='times new roman'][sup][size=13px][7][/size][/sup][/font][font='times new roman']。这[/font][font='times new roman']些都是[/font][font='times new roman']因为树脂渗透不良[/font][font='times new roman']造成的，[/font][font='times new roman']可以修掉硬质颗粒和破碎的组织、清洗掉粘在刀口上的颗粒后再切片。[/font][font='宋体']②[/font][font='times new roman']颤痕（[/font][font='times new roman']震动[/font][font='times new roman']损伤）：颤痕是平行于刀口而横贯切片的、平行排列、切片厚度周期性变化的一组波纹。主要是因为树脂软硬程度不同（内部）和样品头松动、环境波动（外部）两种因素造成的。内部因素的产生在于树脂渗透不良、树脂配制时混合不均匀、树脂比例不合适[/font][font='times new roman']、较软[/font][font='times new roman']（spurr树脂可以增加736的比例）、聚合不彻底等，可以通过将树脂块进一步修整缩小切面、在烘箱中高温烘烤树脂块、增加刀角、降低切片速度等进行调整[/font][font='times new roman'][sup][size=13px][7][/size][/sup][/font][font='times new roman']；对于外部因素，则需要考虑切片机的震动、切片环境的稳定程度（是否有风）、样品头的松紧、树脂块的长短等，逐项排除、确定问题、进行调整。[/font][font='宋体']③[/font][font='times new roman']褶皱（挤压损伤）：褶皱有两种形态，一种是在切片中形成的，渗透不良、质地较软的组织，在切片时受到刀刃的挤压形成褶皱，电镜下观察为波纹状；另一种是在捞片过程中形成的，在于捞片时槽液的颤动和有膜载网亲水性不均一，使得切片贴合载网的过程中受到干扰，从而形成不规则的长线状褶皱[/font][font='times new roman'][sup][size=13px][8][/size][/sup][/font][font='times new roman']。增加渗透时间和次数、提高渗透效果、调整树脂的比例；使用捞片环捞片、增加载网的亲水性可以在一定程度上减少褶皱的形成。[/font][font='宋体']④[/font][font='times new roman']切片破损（[/font][font='times new roman']缺失损伤[/font][font='times new roman']）：切片空洞和切片碎沫化都是切片破损。固定时真空不足、换液接触空气、树脂渗透不充分是形成切片空洞的主要因素[/font][font='times new roman'][sup][size=13px][9][/size][/sup][/font][font='times new roman']，电镜下可见部分组织缺失，被圆形空腔取代且无树脂填充；脱水不充分、树脂吸潮或者渗透不充分则会导致切片呈现碎沫化，或者切片漂浮在水面上片刻后[/font][font='times new roman']化[/font][font='times new roman']开，主要在于组织中残留水分。解决上述问题的关键在于减少空气的干扰、防止水分渗入、保持环境干燥、脱水渗透要充分。[/font][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/09/202209191405062147_3733_3446098_3.jpeg[/img][align=center][font='times new roman']图7 [/font][font='times new roman']切片问题（红色箭头指向部分）（bar：10um）[/font][/align][align=center][font='times new roman']1：[/font][font='times new roman']切片刀痕（异物损伤）[/font][font='times new roman']；2：[/font][font='times new roman']颤痕（[/font][font='times new roman']震动[/font][font='times new roman']损伤）[/font][font='times new roman']；[/font][/align][align=center][font='times new roman']3：[/font][font='times new roman']褶皱（挤压损伤）[/font][font='times new roman']；4：[/font][font='times new roman']空洞（[/font][font='times new roman']缺失损伤[/font][font='times new roman']）[/font][/align][font='times new roman'][size=16px]1.8[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]染色要干净[/size][/font][font='times new roman']生物组织的主要成分为C、H、O、N，对高能电子束的散射能力较弱，在电镜下成像的衬度较差[/font][font='times new roman'][sup][size=13px][10][/size][/sup][/font][font='times new roman']，细胞结构信息不清晰。由于重金属染液对细胞结构有特异性的结合能力，经染色后的组织切片对电子束的散射能力因结合重金属的多少而不同，在电镜下呈现出结构清晰的电镜图片[/font][font='times new roman'][sup][size=13px][11][/size][/sup][/font][font='times new roman'][sup][size=13px][12][/size][/sup][/font][font='times new roman']。[/font][font='times new roman']然而，在实际的染色过程中，由于环境和pH的影响，染液成分会在切片上形成沉淀，沉淀对电子束的散射能力较强，在电镜下呈现出黑色颗粒，对组织细胞超微结构的观察产生影响。不同染液的沉淀形态和形成的因素不同（表1），但从整体上控制染液的pH、保证环境温湿度在合理的范围内，保证染色在密闭的环境下进行，可以大大减少染液沉淀的形成。[/font][align=center][font='times new roman']表1 染液沉淀形态与形成因素[/font][/align][table][tr][td][align=center][font='times new roman']染液种类[/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman']沉淀形态[/font][/align][/td][td=2,1][align=center][font='times new roman']形成因素[/font][/align][/td][/tr][tr][td=1,5][align=center][font='times new roman']柠檬酸铅[/font][/align][/td][td=1,5][align=center][font='times new roman']不规则块状（图7a）[/font][/align][/td][td=1,2][align=center][font='times new roman']CO[/font][font='times new roman'][sub][size=13px]2[/size][/sub][/font][font='times new roman']污染[/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman']配染液的水未除CO[/font][font='times new roman'][sub][size=13px]2[/size][/sub][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='times new roman']染色时CO[/font][font='times new roman'][sub][size=13px]2[/size][/sub][/font][font='times new roman']污染[/font][/align][/td][/tr][tr][td=2,1][align=center][font='times new roman']染液pH降低（吸收CO[/font][font='times new roman'][sub][size=13px]2[/size][/sub][/font][font='times new roman']）[/font][/align][/td][/tr][tr][td=2,1][align=center][font='times new roman']染色环境潮湿[/font][/align][/td][/tr][tr][td=2,1][align=center][font='times new roman']未冲洗干净，染液残留[/font][/align][/td][/tr][tr][td=1,3][align=center][font='times new roman']醋酸双氧铀[/font][/align][/td][td=1,3][align=center][font='times new roman']细长针尖状（图7b）[/font][/align][/td][td=2,1][align=center][font='times new roman']长时间存放，见光分解，pH4[/font][/align][/td][/tr][tr][td=2,1][align=center][font='times new roman']染色时染液干燥[/font][/align][/td][/tr][tr][td=2,1][align=center][font='times new roman']未冲洗干净，染液残留[/font][/align][/td][/tr][/table][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/09/202209191405056257_5413_3446098_3.jpeg[/img][/align][align=center][font='times new roman']图7 [/font][font='times new roman']染色污染（红色箭头指向部分）[/font][/align][align=center][font='times new roman']1：铅[/font][font='times new roman']污染[/font][font='times new roman']；2：:铀[/font][font='times new roman']污染[/font][/align][font='times new roman'][size=18px]2[/size][/font][font='times new roman'][size=18px] [/size][/font][font='times new roman'][size=18px]结论[/size][/font][font='times new roman']生物组织需经过取样、固定、清洗、脱水、渗透、包埋、切片和染色等八个主要步骤获得的超薄切片，主要应用于超微结构的观察，是形态学研究中的基础部分，可以认为是后续“进阶”实验的基石。超微结构的真实完整是实验结果可信度的来源，一张高质量的超薄切片便是来源的依据。一张超薄切片的诞生经历的过程复杂，关键点众多，需按照每一阶段规定的要求，仔细操作、认真完成，才能在透射电子显微镜下呈现真实完美的细胞超微结构。[/font][font='times new roman'][size=18px]参考文献：[/size][/font][1] [font='times new roman'][size=14px][color=#000000]周晨明，朱艳，孟丽，等.透射电镜样品取材和固定应注意的若干问题[J].医学理论与实践，2020,33(14):2416[/color][/size][/font][2] [font='times new roman'][size=14px][color=#000000]丁明孝，梁凤霞，洪健，等.生命科学中的电子显微镜技术[M].1.北京：高等教育出版社，2021，11.[/color][/size][/font][3] [font='times new roman'][size=14px][color=#000000]周卫东, 韦存虚, 陈义芳,等. 不同固定方法对水稻胚乳细胞超微结构的影响[J]. 扬州大学学报：农业与生命科学版, 2005, 26(3):48-51.[/color][/size][/font][4] [font='times new roman'][size=14px][color=#000000]董渭祥, 高小彦. 植物超薄切片制备技术[J]. 植物生理学通讯, 1982(5)：32-35.[/color][/size][/font][5] [font='times new roman'][size=14px][color=#000000]黄静, 彭彬. 常规透射电镜生物样品制样条件的摸索总结[J]. 川北医学院学报, 2021,35(1):119-121.[/color][/size][/font][6] [font='times new roman'][size=14px][color=#000000]吕广艳, 高船舟, 曲淑贤,等. 透射电镜超薄切片污染产生的原因及对策[J]. 医学信息(上旬刊), 2006, 19(12):2195-2196.[/color][/size][/font][7] [font='times new roman'][size=14px][color=#000000]肖欣, 周正平. 生物样品透射电镜超薄切片质量问题探讨[J]. 贵州医药, 2015, 39(12):1103-1104.[/color][/size][/font][8] [font='times new roman'][size=14px][color=#000000]金立强, 张东生. 超薄切片皱褶的形成特点和消除方法[J]. 南京医科大学学报：自然科学版, 2007, 27(2):207-208.[/color][/size][/font][9] [font='times new roman'][size=14px][color=#000000]马莉, 张欠欠, 王逢会. 电镜超薄切片常见问题初探[J]. 现代妇女：理论前沿, 2014(12):224.[/color][/size][/font][10] [font='times new roman'][size=14px][color=#000000]黄远洁, 莫肖敏, 孟春梅,等. 3种常规透射电子显微镜超薄切片染色方法的对比分析[J]. 广西医科大学学报, 2015, 32(6):912-913.[/color][/size][/font][11] [font='times new roman'][size=14px][color=#000000]何晓华, 刘斌, 郭付振. 生物样品超薄切片染色方法的改进[J]. 教育教学论坛, 2019(47):74-75.[/color][/size][/font][12] [font='times new roman'][size=14px][color=#000000]祁荣, 郭丽. 透射电子显微镜超薄切片批量染色方法的建立[J]. 中国医药科学, 2022, 12(9):32-34.[/color][/size][/font]

切片机分为很多种类，包括药材类切片机，器材类切片机，食品类切片机，组织切片类切片机等。按其结构又可分为摇动式切片机、轮转式切片机、滑动式切片机、推动式（雪橇式）切片机等。组织切片机是一种对人体组织及动植物组织作病理切片分析的设备。组织切片机一般分为：轮转式切片机和冷冻切片机。轮转式切片机：是借转动手摇轮进行切片动作。蜡块台镶装于可在沟槽内上下运动的金属夹座中，借微动螺旋向前推进切断平整的切片。有的转轮式切片机的机头上装有三只旋钮和一个紧固旋钮能使其向各个方向偏转并紧固，便于调整蜡块的切面。切片刀的切制角度可以调整（切片刀倾斜）。由于这种切片机上使用的是一种重而大的切片刀，故除切制硬组织时一般不发生颤动。切片厚度借旋钮可以1-30微米之间调[font='Songti S

[url=http://www.f-lab.cn/slide-dryers/slide-dryer.html][b]石蜡切片干燥器[/b][/url]专业为超薄[b]石蜡切片烘干[/b]而设计的[b]石蜡切片烘干仪[/b],一次可同时烘干44个切片,提供室温到99摄氏度的温度范围,温度采用LED显示技术。切片干燥器采用氧化发黑表面工艺提供超高的对比度，并自动记忆先前设定的参数。切片干燥器优点1） 叠瓦式设计：切片干燥器采用叠瓦式设计，纵向具有四个斜角的切片加热板提高干燥效率的同时还充分利用了空间，一次性可干燥多个切片,也消除了操作人员接触加热板而烫伤的风险。2）微处理器温控加热系统切片干燥器内置微处理，自动管理设定的切片加热干燥温度点，有效干燥了玻璃切片的水分。 [img=石蜡切片干燥器]http://www.f-lab.cn/Upload/embedding-systems-slide-dryer.jpg[/img]切片干燥器技术参数干燥温度范围：室温-99摄氏度达到设定温度所需时间：10-15分钟工作环境温度：0-40摄氏度用电要求：220V/50Hz功耗：300W尺寸：415 x 310 x 120 mm干燥面积：: 295 x 270 mm净重： 6.2 kg石蜡切片干燥器：[url]http://www.f-lab.cn/slide-dryers/slide-dryer.html[/url]

超薄切片技术是电镜样品的重要制备方法之一，随着科学研究的发展，需对样品的特定部位进行精准超薄切片的领域越来越多，但现有的超薄切片机无法实时原位观测样品的侧切面，导致定位过程繁琐、效率低、精度差。超薄切

咨询高分子样品的超薄切片问题？高分子的样品，类似白色塑料，样品倒是很硬的，设定是70nm，可是切片出来的基本是金黄色，片有时也会出现颤痕，不知道什么原因？有谁知道，非常感谢！

1. 新鲜组织立即在恒冷冰冻切片机内切片( 也可- 80℃保存)，厚度为 5～6μm。2. 载玻片可不打底，裱片后，立即用电吹风吹干。3. 如不马上染色，可密封后- 20℃保存。4. 染色前用冷丙酮在 4℃固定 10-20 分钟。5. PBS 洗 2 次，每次 5 分钟，( 必要时应用 0.1%柠檬酸钠+0.1%triton打孔)6. 3% H2 O2灭活内源性过氧化物酶，20 分钟，避光；7. 用 PBS 洗 2 次，每次 5 分钟；8. 正常血清封闭：从染片缸中取出切片，擦净切片背面水分及切片正面组织周围的水分 （保持组织呈湿润状态,）滴加正常山羊或兔血清 （与第二抗 体 同源动物血清）处理，37℃，15 分钟。附：正常血清配制 ( 或按试剂盒规定的浓度配制)：按 1:20比例，用 PBS 配制，每张切片需要量按 50μ+5μl (10%抛洒量) 计算。9．滴加第一抗体：用滤纸吸去血清，不洗，直接滴加第一抗体，37℃ 2 小时（也可置于 4℃冰箱过夜） 。10．PBS：5 分钟，2 次（置于摇床） 。11．滴加生物素化的二抗，37℃，40 分钟。12．PBS：5 分钟，2 次（置于摇床） 。13．滴加三抗 （SAB 复合物） ，37℃，40 分钟。14．PBS：5 分钟，2 次（置于摇床） 。15．DAB 显色，镜下观察，适时终止（自来水冲终止） 。附：DAB 的配制① 储备液(DAB 25mg/ml)的配制：DAB 250mg + PBS 10ml，待完全溶解后分装成 1ml，100μl，50μl ，20μ l 等，-20℃，冻存。② 工作液：DAB 储备液 20μl + PBS 1000μl + 3% H2O2 5μl16．自来水（细水）充分冲洗。17．苏木素复染，室温，30 秒，自来水冲洗。18．自来水冲洗返蓝，15 分钟。19．梯度酒精脱水：80%，2 分钟 95%，2 分钟 100%，2 次，5 分钟。20．二甲苯透明：I ，II （二甲苯）各 5 分钟21．封片：加拿大树胶（或中性树胶）封片。

最近在超薄切片过程中总是遇到这样的问题：修块后样品在正式开始切片时，样品总是非常容易就将钻石刀凹槽中的水吸到其表面，完全无法切片。以前并没有遇到过类似的情况，起初以为是水表面张力过大，尝试兑了一定量酒精，无效；再推测用的水不够纯净，造成一定影响，换了超纯水尝试，依然无果；最后拿出以前已经成功切片的样品进行尝试，结果也非常容易就在表面吸上了水。怀疑是钻石刀有什么异样，然而光镜下看一如以往，唯一奇怪的在于最近每次凹槽中盛的水，倒出来的颜色是蓝色的，似乎表面有褪色，并且看到有过去切的树脂片沾在凹槽表面（不是钻石刀头处）。目前把钻石刀泡在超纯水中加一滴洗洁精泡着。有木有遇到类似问题的大虾给点解决办法，也希望能交流下钻石刀日常维护的经验吧。。

最近实验需求一些动物组织切片，比如有癌变的动物组织切片，不限动物种类或器官种类，有切片服务的公司也可以给提供一下，不胜感激！

冷冻切片机 仪器价格： 12万元 购置日期：2001年 仪器所在地：中医肝病研究所实验室 联 系 人： 顾宏图 联系电话： 51322444 收费标准： 暂未定 开放时间： 8：00～17：00 仪器简介： 徕卡CM1850是应用于组织学和临床组织病理学的一种快速低温恒冷切片机，它是将切片机置于冷冻室以外的低温恒冷切片机。CM1850的特色之一是具有宽敞的冷冻室，快速冷冻室可同时存放多达10个样品，并和一个可持续冷却的吸热器相连，以保证样品托上的样品快速冷却。切片刀温度可冷却到-35℃，样本可以快速冷冻到-40℃。切片机有狭槽盖防护，避免残渣进入机器内部。增强绝热性能（真空面板）及温度控制系统，减低压缩机运作费用及提高耐用性，比传统绝热系统使用寿命长，可以保证冷冻箱温度，例如：在35℃室温保持-35℃。同时可以做到电脑诊断维护。高质量无焊接缝的不锈钢冷冻室表面光滑利于清洁和防止污染。切片机配备双速马达驱动粗进，控制键布置在左方靠手，符合人工学原理。具备自动及人工除霜功能。独特设计的玻璃反卷板可保证连续的切片。切片机具备方便的调节功能，可快速及精确对样本切片定位。切片机推进系统运作平稳、流畅，切片厚度为1～60μm，切片精度可达1μm，最大样品直径55mm。 应用范围 可提供各种冰冻切片服务。 目前应用于： 1. 为快速病理诊断提供冰冻切片。已成为癌症诊断的重要工具。 2. 细胞学：显示脂肪、脂类以及特种组织成份。 3. 免疫细胞化学、免疫组织化学和分子生物学技术等研究工作。 4. 神经生物学研究。 5. 常规组织胚胎学研究。 6. 皮肤病理学研究。 7. 动脉血管外科学研究。 同类仪器情况 ： 中药研究所: SPOCTRA MXA190 2002年 倪跃元 解剖实验室： LION 1998年 余安胜 张建华

[align=center]Leica RM2245半自动轮转式切片刀使用心得[/align][align=center]西安国联质量检测技术股份有限公司[/align][align=center]安评中心：胡楠[/align]Leica RM2245是带独立控制面板的半自动轮转式切片机，用来制作不同硬度的样品薄切片，以供医疗机构实验室作组织学、病理学石蜡切片。这台仪器，主要有仪器控制面板、独立控制面板、手轮锁定装置、平滑旋转的手轮、手轮制动杆、刀架上的护刀器、可调节方向的样品夹固定器、侧向移动锁杆、带侧向移动的E型刀架、切片刀和刀架底座。由于该仪器使用时，需要装置上锋利的刀片，因此，该经过专业的培训再进行操作。在仪器使用过程中，有很多需要注意的事项。以下是我在使用过程中总结出来的需要注意的要点。首先，在仪器使用前，打开电源开关，要注意LOCK框中的黄色LED灯光是否亮起。若亮起，则表明手轮锁定。此时，可以正常的安装刀片。安装刀片时，转动刀架上的制动杆，翻下护刀器，从刀架的一侧将刀片插入，用镊子小心将刀片推入刀架合适的位置上，锁定刀架制动杆。其次，在使用过程中，应该确认操作模式。按TRIM和SECT按钮切换操作模式。如果SECT亮起，则为切片模式；如果TRIM亮起，则为修片模式。用控制面板上的箭头来调节刀架位置。应将刀架调试在合适的位置，这样有利于顺利切片。转动手轮时，应匀速转动，这样切片薄厚均匀，较少有刀痕。如果切片过程中需暂停，切记锁定手轮，注意安全。最后在完成切片或者修片操作后，要对切片机进行维护。长时间不使用仪器时，应将刀片取出。将切片废物槽内的废弃切片丢入垃圾桶，并将一起上粘附的蜡进行清理。对于该仪器，我是初次接触，在以后的工作学习中，会有更多收获。

一、染色注意事项 1．染色之前一定要了解清楚所用的染色液的配制方法，不同的染色液染色后的处理是不一样的。 2．染色过程中所用的时间要根据染色时的室内温度、染液的新鲜程度及实验室的实际情况等灵活掌握。在室温高、切片、染色液又是新配制的，染色时间就要短，反之时间就长。 3．伊红有水溶的和醇溶的，如果用的是水溶的，应该在脱水前进行染色，如果是醇溶的，应使用与溶解伊红等浓度的酒精开始脱水。 4．在二甲苯脱蜡之前可以先在60℃烤箱内0.5~1小时，这样可以使切片粘附更牢固不易脱片，也有利于脱蜡。 5．二甲苯在HE染色中有脱蜡、透明的作用。二甲苯脱蜡的好坏主要取决于切片在二甲苯内放置的时间和脱蜡时的温度以及二甲苯的使用次数。染好的切片必须经过透明，有利于显微镜观察，同时并为封片起到了桥梁作用。 6．用梯度酒精脱水时，在低浓度酒精中时间不宜过长，到高浓度时逐步延长脱水时间。以免脱水不彻底，影响二甲苯透明的效果。 7．在酸性分化液内停留的时间不要过长，分化不可过度，避免使细胞核内该染上色的结构脱色。不需分化处理的苏木精染色时要注意掌握染色时间，以防止组织切片染色背景过深或细胞核、胞质染色不足。

【网络讲座】：超薄切片技术在材料科学研究中的应用 - 应用实例及实验技巧 【讲座时间】：2016-12-16 14:00【主讲人】：谢佩松，徕卡仪器有限公司，超薄切片技术应用专家 11年超薄切片实践经验，先后4次前往徕卡纳米技术部总部参与学习培训；并多次作为上机指导老师参与国内徕卡超薄切片workshop活动；在材料科学领域，不论是有机高分子材料，还是无机固体材料等都积累有丰富的超薄切片经验。【会议简介】超薄切片技术是一种常见的透射电镜制样技术，在材料科学领域有着非常广泛的应用，尤其适合有机高分子材料和无机粉体材料，可以非常简单方便的获得纳米级切片，供透射电镜观察；对金属材料和其它无机材料也有一定的应用。另外，因为这一技术也可以非常方便的获得样品的截面信息，因此在扫描电镜和原子力显微镜制样方面也有一定的应用。 本次讲座，会展示各种不同类型样品的实验结果，并就各种类型样品制样技巧加以详细阐述，让听众得以充分了解这一技术的应用范围，同时，也能够学习到相应样品的制样技巧。-------------------------------------------------------------------------------1、报名条件：只要您是仪器网注册用户均可报名参加。2、报名参会：http://www.instrument.com.cn/webinar/meeting/meetingInsidePage/2231 4、报名及参会咨询：QQ群—290101720，扫码入群“电镜”http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/01/201701191701_669647_2507958_3.gif

1.0 材料与设备设备：1.1 二速研磨/抛光机 1.2 奥林匹斯(Olympus)显微镜.材料：1.1 冷埋树脂粉；1.2 冷埋树脂固化剂（可用水晶树脂胶系列代替）；1.3 透明切片模；1.4 研磨砂纸（P180#、P600#、P1000#、P1500#、P2000#、P2500#、P3000#）；1.5 金相切片微蚀液；1.6 抛光布；1.7 强力胶泥1.8 抛光粉；辅料：1.1 10%的硫酸除氧化；1.2 酒精清洗残留胶渍；1.3 两个量具（用于装树脂粉末和固化剂）；1.4 搅拌条；1.5 吸水棉。2.0 程序：2.1 准备测试样品标本：2.1.1从生产板中剪切需检测样品。依附图Fig 1所示在相应的区域切取样品标本。2.1.2对于检孔的板而言，为防止被检查区域被损坏，样品剪切应保证离孔边缘最少1mm。注意剪切测试时不能穿过孔，否则会因为会损坏孔边缘和外观，导致在孔壁有空洞或分层。2.2装备与镶埋样品标本：2.2.1 塑钢透明切片模的准备：2.2.1.1 用胶纸封住塑钢透明切片模的两端，然后在中间装上少许强力胶泥用于固定样品；2.2.1.2用镊子夹住被剪切的样品，标准样品被剪切的边缘离孔边缘保留1mm，剪切的边缘朝上平放置于塑钢透明切片模中间。2.2.2 铸造样品的过程：2.2.2.1先后倒入合适体积比的冷埋树脂粉和冷埋树脂固化剂于量杯中（如果用树脂胶系列，则先后倒入合适体积比的树脂胶、促化剂和树脂固化剂）；2.2.2.2用搅拌条轻轻搅拌，确保树脂粉与固化剂充分混合至到树脂粉末完全溶解。树脂系列原料混合调配体积比是确保样品成型的关键。2.2.2.3慢慢将混合树脂倒入切片模具中，倒树脂时必须从样品的一侧往下倒，以确保树脂穿流过孔，从而清除孔内的空气，避免树脂在后续的固化过程中产生气泡。不要直接从样品上面直接倒入混合树脂，否则将很容易导致空气滞留在树脂模型中，从而导致后续的操作误差影响到实验数据的真实性。2.2.2.4混合树脂变硬前，在不得以的情况下，可以用搅拌条去除切片模具内的气泡。2.2.2.5混合树脂完全固化在5-15分钟。2.2.2.6模型完全固化后，我们需要对固化模进行以下质量检查。* 样品与混合树脂之间不能有间隙。* 混合树脂填实好镀通孔。* 混合树脂中不能有气泡。2.3研磨带样品标本的切片模：2.3.1：用180#与600#砂纸在二速研磨/抛光机上带水流进行粗磨切片模，砂轮速度设定在200rpm进行研磨（参阅图4）。如果样品含有大直径的孔，粗磨应停止在孔中心线附近，可是如果样品含有小直径的孔，粗磨应停止在孔边缘以外，不要磨破孔。粗磨应按2.3.2到2.3.4细磨的同样方式进行。2.3.2：用两个手指拿住固化模，1个手指逆着研磨砂纸旋转方向轻轻按住确保压力均匀。2.3.3：样品方向与砂轮旋转方向垂直参照Fig2。在研磨期间，为确保两旁，前后压力相同，在研磨过程中通过目视检查研磨表面确保平躺不倾斜，同时不断以1800方向更换样品。2.3.4：研磨最后，以开始步骤将样品旋转900去掉表面划痕，将切片模放在显微镜下检查划痕是否被去掉。2.3.5：从轮子上取下180#或600#砂纸，更换1000#砂纸进行第二次研磨。2.3.6：根据2.3.2至2.3.4用1000#砂纸重复研磨，1000#砂纸研磨后更换1500#砂纸，更换砂纸前千万别忘了旋转样品900以去除切片表面划痕。2.3.7：从轮子上取下1000#砂纸更换1500#砂纸进行第一次细磨。根据2.3.2至2.3.4用1500#砂纸重复研磨，1500#砂纸研磨后更换2000#砂纸，更换砂纸前千万别忘了旋转样品900以去除切片表面划痕。2.3.8：从轮子上取下1500#砂纸更换2000#砂纸进行第二次细磨。根据2.3.2至2.3.4用2000#砂纸重复研磨，1500#砂纸研磨后更换2000#砂纸，更换砂纸前千万别忘了旋转样品900以去除切片表面划痕。2.3.9：从轮子上取下2000#砂纸更换2500#砂纸进行第三次细磨。根据2.3.2至2.3.4用2500#砂纸重复研磨，2000#砂纸研磨后更换2500#砂纸，更换砂纸前千万别忘了旋转样品900以去除切片表面划痕。2.3.10：从轮子上取下2500#砂纸更换3000#砂纸进行第四次细磨。根据2.3.2至2.3.4用3000#砂纸重复研磨，2500#砂纸研磨后更换3000#砂纸，更换砂纸前千万别忘了旋转样品900以去除切片表面划痕。此步骤是指模表面要求细磨后进行镜面抛光才进行的工作（如拍照要求）。同样需要旋转样品900以去除切片表面划痕。注意：用相同型号砂纸去掉划痕是很重要的，因为较细砂纸不能除掉较粗砂纸产生的划痕。2.4抛光带样品标本的切片模：2.4.1：在二速研磨/抛光机上的另一个旋转轮上先后加上少许抛光粉然后用少许的水湿润抛光粉后进行样品标本的表面镜面抛光处理，砂轮速度设定为200rpm左右。2.4.2：用两个手指拿着切片模，一个手指轻按在旋转抛光布上，在抛光期间，保持切片模从00到900，900到1800最后到00，以确保不会只因一个方向抛光产生深的划痕。2.4.3：切片模抛光应在5-10秒内完成以防样品表面表面变暗。2.4.4：抛光后用自来水冲洗切片模，然后在Olympus显微镜下检查样品标本的抛光镜面抛光效果（参见图1所示）。2.5样品标本的微蚀处理：2.5.1：当下述情况出现时, 我们可以采用切片微蚀液对样品进行侧蚀处理。a.基铜上再镀铜：如果基层铜与电镀铜之间的层与层看不清楚而又要求测量电镀铜的厚度。如果切片仅用于检查空洞或其它目的时，可以不要求微蚀处理。b.镍上再镀金和基层铜上再镀镍：如果金与镍或镍与铜层相连看不清楚而又要求测量金或镍厚度。c.基铜上镀铅锡：如果铅锡与铜之间看不清楚而又要求测量铅锡厚度。2.5.2：用吸液管取一滴微蚀液于切片上，5秒钟后，用水冲洗切片再擦干。2.5.3：腐蚀后在显微镜下检查样品，看层与层连接处能否看清楚，如果不清楚，按重复操作2.5.2直到层与层之间能看清楚（参见图2所示）。2.5.4样品腐蚀不应超过10秒，避免引起样品过腐蚀。注意：腐蚀后样品必须用清水清洗并马上擦干以防样品延长腐蚀。2.6 用显微镜测量测试样品（参见图2）。2.7清洗测试样品进行再测量（除氧化）：2.7.1此程序用于当样品切片模表面被氧化看不清，隔一段时间后要求再测量。2.7.2用吸液管取一滴硫酸液于切片顶面上。2.7.3过 5秒后，然后用清水冲洗，再擦干样品切片。2.7.4去掉氧化层后在显微镜下检查看样品表面是否能看清楚。2.7.5蚀刻样品不应超过10秒否则会引起过腐蚀、切记，腐蚀后样品必须用水清洗后立即擦干以免样品延长腐蚀。

现在有一批样品照透射需要做切片，可惜天津大学有TEM但是没有切片的。希望能有人推荐一些天津附近能做切片的地方，谢谢

我在做表层含纸纤维比较多的纸样品时,不管用液氮冷冻切片,还是用切片机切都有很多纸纤维溢出,请问那位高手做过类似的样品,指教一下,谢谢!

这次参加催化会议，有位老师提到了对分子筛类材料做TEM观察的时候把样品要先包埋后超薄切片，这样观察时候可以排除活性组分负载于分子筛外表面的情况。我有个问题想向各位版友咨询一下，一般包埋-切片的步骤是否麻烦，需要什么样的原料与设备。包埋时候是不是把我的无机粉末撒到环氧树脂里就成了？树脂固化后只是用切片就可以直接去观察了么？不需要其他减薄手段么？各位对于超薄切片机有没有什么厂家和型号推荐一下啊！多谢了！

四、水洗 1．目的： 洗去渗入组织中的固定液，终止固定。以免影响对组织内结构的观察、分析和研究。 2．原则和方法： 固定后的组织块的冲洗，一般情况下是置水龙头下以自来水流水冲洗，这样可以使组织中的固定液随时溢出，洗得更干净彻底，有些还需要进行特殊的洗涤。 （1）各种以水配制的固定液如甲醛，都必须用流水冲洗，大块组织一般冲洗24小时，小块组织一般冲洗2—10小时。 （2）固定液为多聚甲醛时，用于免疫组织化学等特殊染色的应将组织投入PB缓冲液中，每60分钟更新洗涤液一次，累计6小时。 （3）固定液为酒精或是酒精混合液，一般不需用水冲洗，其组织块的洗涤应用与固定液浓度相等垢酒精换洗或者直接进行脱水的程序。 （4）用锇酸或含有锇酸的固定液固定的组织，必须用流水彻底冲洗干净。 （5）经含有苦味酸的固定液固定的组织块，无论其固定液是水溶性还是酒精溶性，都应充分冲洗，水溶性固定液固定的组织块一般须冲洗12小时，再进入70%的酒精溶液洗涤，酒精溶性固定液固定的组织块直接进入70%的酒精溶液洗涤，该溶液可以脱掉苦味酸的黄色，但最好从50%酒精开始洗涤。 （6）冲洗好的组织可存放在75%酒精内 五、脱水包埋 （一）脱水 1．脱水的目的 组织内的水不能和支持剂混合，所以必须把组织中的水分彻底脱除。脱水有利于组织的透明和浸蜡，有利于组织的永久保存。 2．脱水剂 （1）乙醇：可作固定剂，又可脱水剂，但乙醇与水混合时有较剧烈的物理反应。高浓度的酒精对组织有强烈收缩及脆化的缺点，因此用乙醇脱水不能直接入纯酒精中脱水，而必须经过由高到低的一系列不同浓度的酒精，逐渐取代组织中水分，以保证组织脱水彻底，并避免组织过度收缩和硬化。 （2）丙酮：脱水能力比酒精强，但对组织的收缩更大，在组织学制片中较少使用，多用于病理快速切片，或用于某些组化水解酶的固定。 （3）正丁醇：是较好的脱水兼透明剂，可与酒精及石蜡混合，用于脱水是可先经过各种不同浓度的正丁醇和乙醇混合液，再入正丁醇，进行石蜡包埋时，可先用正丁醇和石蜡等量混合液，然后浸入纯石蜡包埋，正丁醇用于脱水的优点是很少引起组织收缩和脆硬，可替代二甲苯，是很好的脱水剂，但由于价格较贵，不常使用。 3．步骤 （1）乙醇脱水过程 50%乙醇 6~8小时 75%乙醇 6~8小时 85%乙醇 3~5小时 95%乙醇 1~2小时 95%乙醇 1~2小时 100%乙醇Ⅰ 1小时 100%乙醇Ⅱ 1小时 （2）丙酮脱水 如果是丙酮固定的组织，则不必再经过乙醇，可以用新丙酮更换一次，便直接浸入二甲苯或苯中透明。其他水溶液固定的组织，均按上述乙醇脱水方法脱水，亦可由100%乙醇中移入丙酮继续脱水2~4小时再入二甲苯透明，透明后浸蜡包埋。 （3）正丁醇脱水 组织用正丁醇脱水前，先经50%乙醇脱水，然后移入正丁醇和乙醇混合液进行脱水。 50%乙醇 6~12小时 50%乙醇+20%正丁醇+30%蒸馏水 5~8小时 50%乙醇+35%正丁醇+15%蒸馏水 4~6小时 45%乙醇+45%正丁醇+10%蒸馏水 3~5小时 25%乙醇+75%正丁醇 2~3小时 25%乙醇+75%正丁醇 1~2小时 15%乙醇+85%正丁醇 1~2小时 5%乙醇+95%正丁醇 1~2小时 100%正丁醇Ⅰ 1小时 100%正丁醇Ⅱ 1小时 4．注意事项： （1）脱水的过程应逐步地而不应骤然地进行，不能操之过急。 （2）脱水的时间应根据组织块的大小和组织的类型而定。 （3）组织块在高浓度，特别是无水乙醇内不能放置的时间太长。无水乙醇吸水能力太强，容易造成组织块的过度硬化，使得切片理组织易碎裂。 （4）在脱水的过程中可以将组织块停留在70%~80%的酒精中。 （5）每次更换新的脱水剂时（组织块从低浓度到高浓度），都要把组织块放在吸水纸上吸干，装组织块的容器也要控干水分，以免将水及低浓度脱水剂带入高浓度脱水剂中，影响脱水效果。 （6）脱水剂的先择要根据实验的要求及实验室的条件 （二）透明 1．透明的目的 置换组织内的脱水剂，为下一步的浸蜡起到桥梁作用； 使组织呈现不同程度的透明状态，有利于光线的透过。 2．透明剂 （1）二甲苯：是现在应用最广的一种透明剂，价格较便宜，不能和水混合，遇水则变成乳白色浑浊，因此必完全脱水后才能使用；易溶于酒精又能溶解石蜡，透明力强；其最大的缺点是容易使组织收缩变硬变脆，所以组织不能在其停留过久，透明时间视组织块的大小、性质而定；有的组织如肌肉、肌腱、软骨、骨、皮肤、头皮及眼球等，不宜用二甲苯透明，因组织过硬不易切片；长时间接触，对粘膜有刺激作用。 （2）苯：性质与二甲苯相似，对组织收缩也较小，组织也不易变脆，但透明较慢，组织在其内可以滞留12~24小时，但毒性较大。 （3）香柏油：用为透明剂，效果很好，有高度透明作用，能与醇和二甲苯混合，香柏油对组织的硬化及收缩程度比任何其他透明剂都要小，但透明的速度较慢，3mm以下厚度的组织块需12小时以上。香柏油与石蜡不易融合，即香柏油不易被石蜡取代，因此经香柏油透明以后，可经过二甲苯短时间媒浸，再进行石蜡包埋。肌肉、皮肤、血管、膀胱、垂体及肾上腺等用香柏油效果较好。 3．二甲苯的步骤：两次透明 第一次透明约40分钟 第二次时间不一定，要视透明效果而定 4．注意事项 （1）时间不宜过长，否则组织会变脆； （2）组织块脱水必彻底。 （三）浸蜡、包埋（石蜡包埋法） 1．浸蜡 （1）浸蜡的目的 置换组织中的透明剂，为包埋做准备。 （2）浸蜡的步骤 在60度恒温蜡箱中放置3个蜡杯，分别编号1（52℃~54℃）、2（52℃~54℃，或54℃~56℃）、3（56℃~58℃），其中分别盛软蜡、软蜡、硬蜡，取透明好的组织块放入软蜡中各1小时，迅速取出放入硬蜡，同样放置1小时。如果时间来及包埋，可以将已经完成浸蜡的组织块取出放在温箱外，第二天继续。 （3）注意事项 温箱中的温度必须严格控制在60℃的范围，不能超过60℃；浸蜡时间不宜过长。浸蜡温度过高或时间过长使组织收缩过度收缩和脆变。 2．包埋 （1）步骤 ①准备包埋蜡：一般应用硬蜡（56~58℃或60~62℃）为好，所用的石蜡要求透明无杂质，新的石蜡要反复熔凝，并有一定的粘韧性，可以加一些蜂蜡。蜡的熔点应与组织的硬度相适应。包埋用过的石蜡可以反复使用。 ②准备包埋框：可以用金属的，也可以用硬纸摺叠。 ③点燃酒精灯，准备好无齿尖镊子，需作标记应先写好标签。 ④在金属框中倒入硬蜡，然后用无齿镊子取组织块放入石蜡中，置好方向。可室温下冷却。 ⑤包埋框或纸盒内的蜡逐渐凝结，若表面已凝结形成一层固体状，即可放入冷水中，加速其凝固。 ⑥待蜡块完全凝固以后，便可拆卸包埋框架， 或拆开纸盒，取出蜡块。 （2）注意事项 ①包埋时夹取组织的镊子，用酒精灯随时烧热，以免石蜡凝结后粘附在镊子上，造成蜡块凝固不均匀。 ②包埋操作要迅速，组织从浸蜡杯中取出置入包埋框中的时间应尽量缩短。 ③包埋后的蜡块应呈均质半透明状，如果出现白色混浊状，一般出现在组织周围或组织的底部，应考虑这样几个方面的问题：a. 脱水不彻底。b.包埋蜡温度低了，组织进行包埋时，包埋框中的蜡已成凝结状。c.组织内还残留有较多的透明剂，d.石蜡不纯。 ④包埋箱中的温度必须保持恒定。 ⑤如包埋得不好，可将蜡块溶化，重新浸蜡和包埋。 ⑥较小的组织可在脱水透明时开始用伊红染色 石蜡切片基本步骤之四 切片

实验室要做皮革横截面微观感官，需要进行横截面的切片，求一便宜好用的组织切片机要求：1.切出来的试样够平整，放大50倍的情况下不能出现凹凸不平。 2.价格10000以内，好保养，好使用求各位大神推荐下！谢谢！

[align=center]轮转式切片机的应用体会[/align][align=center]西安国联质量检测技术股份有限公司[/align][align=center]安平中心：粟荣霞[/align]切片是病理切片制作过程中关键的步骤。一般病理切片包括轮转式切片机是在病理切片制作过程中很关键的仪器石蜡切片和冷冻切片，而石蜡切片常用的仪器是平推拉切片机和轮转式切片机，而相比于平推式切片机，轮转式切片机切片容易成卷，切片厚度不均匀。因此，就这些问题进行讨论，总结出轮转式切片机应用的一些体会。在石蜡切片之前，首先要进行充分的准备工作：1.将包埋好的是蜡块进行冷冻。2.调节室温小于20℃。3.开启摊片机和烤片机，将温度分别调至40℃和60℃。4.准备载玻片、镊子、毛笔等。冷冻时可将蜡块置于冷台1小时以上或者置于冰箱（2~8℃），置于冰箱时，切片过程中可将其转移到碎冰中。如果温度不够低，切片效果不好时，可放置到-20℃冰箱，时间不宜过长，放置蜡块冻裂。其次，准备工作做好之后，先进行修片，待修片全部结束。进行切片，切片时应迅速，手避免接触石蜡组织包埋面，以防止蜡块温度过高，影响切片效果。此外，切片时，还会卷片，这时用小头毛笔轻轻按压住成卷的切片，进行切片，同时转动毛笔，展开所切新片，那么之后的切片就不会再卷。切完片要进行摊片，先用冷水进行摊片10 min~30 min，再用40℃温水摊片，时间不宜过长。切片的厚度，应根据不同的组织进行相应的调节。仪器的使用过程也是一个不断学习的过程，只有用心去总结，才能提高工作效率与质量。

我初次接触TEM，是准备看细胞的精细结构，完全没有经验，有很多问题想问，现在先问问样品制备的问题。1、细胞准备用抗体金标记蛋白，需要哪些试剂和材料呢？ 支撑膜？包埋树脂？四氧化锇？醋酸饿？缓冲液是电镜专用吗？等等等2、以上试剂和材料在哪里购买？3、细胞厚度有几个微米，应该是需要切成薄片吧。细胞用什么样的切片机？我们实验室肯定没有，你们一般是怎样切片的？哪位大神帮忙解答一下，拜托了http://img0.imgtn.bdimg.com/it/u=511146182,1771180330&fm=21&gp=0.jpg

做高分子材料的超薄切片,切了一天楞是没切好一片.各位有没有好的经验?