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美国ABI9700PCR基因扩增仪相对其他公司(包括国内外品牌)的普通PCR仪有哪些优势?谢谢各位老师!!!
1971年Kleppe等人在Journal of molecular biology上发表文章首次准确、精炼、客观的阐述了PCR方法,1976年一种从嗜热水生菌(Thermus aquaticus)分离得到的热稳定的DNA依赖的DNA聚合酶的应用大大增加了PCR的效率。而现今所发展出来的PCR则是源于由Saiki和Mullis等人于1988年发表在Science上的一篇论文,Mullis当时服务于Perkin Elmer(PE)公司,因此PE公司在PCR界有着特殊的地位。后来PE被Applied Biosystems Inc.(ABI)公司收购、分拆、再转卖,而PCR的专利和倍受信赖的PCR仪器生产和销售就留在ABI名下。到如今,PCR方法愈发趋向自动化,并从中衍生出更多的新技术方法,可以说,PCR技术是支撑现代分子生物学发展的一块重要基石。这种技术的广泛应用催生了一个庞大的市场,多个公司均有各种类型的商品化PCR仪出售。PCR的专利目前依然掌握在ABI和Roche(罗氏)两大公司手中,去年业界颇为引人瞩目ABI诉MJ公司侵犯侵犯PCR仪知识产权案最终以MJ败诉并宣布破产、最终被Bio-rad收购暂告一段落。其后还会不会有后继的故事还需拭目以待。 PCR原理 DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链,在DNA聚合酶的作用下,以单链为模版,根据碱基互补配对原则复制成新的单链,与模版配对成为双链分子挎贝。在体外实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,并设计与模板DNA的5’端结合的两条引物,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制,多次重复“变性解链—退火—合成延伸”的循环就可以以几何级数大量扩增特定的基因。 发现耐热DNA聚合酶对于PCR的应用有里程碑的意义,该类酶可以耐受90℃以上的高温而不失活,不需要每个循环加酶,使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本,PCR技术得以大量应用,并逐步应用于临床。 从PCR原理可以看出,PCR仪的关键是升降温的步骤。现在偶尔还能听到一些前辈们笑谈早年的PCR实验如何在3个水浴锅中完成的趣闻。经过不断改进,今天的PCR已经越来越完善和智能化。出于市场推广的战略需要,各厂家的PCR仪型号不同,着力宣传的技术指标和参数也不尽统一,编者在这里简单列出选购时我们认为应该考虑的常用指标,希望有助于大家选购PCR仪的选购技巧。PCR仪介绍及其选购 PCR仪的种类总体来说可以分为两大类:PCR扩增仪和实时荧光定量PCR仪,普通的PCR扩增仪又衍生出带梯度PCR功能的梯度PCR仪、和带原位扩增功能的原位PCR仪等等。1996年由ABI公司首先推出将扩增和检测融为一体的实时荧光定量PCR仪,此后很多公司如Eppendorf、ROCHE、Corbett、MJ等等都先后推出不同款式的定量PCR仪。
问题描述:普通[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]出现假阴性结果,不出现扩增条带的可能因素有哪些?解答:[font=宋体]原因需要在[/font][font='Times New Roman', serif][color=#262626][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/color][/font][font=宋体][color=#262626]反应的关键环节上寻找,如下:[/color][/font][font=宋体][color=#262626]([/color][/font][font='Times New Roman', serif][color=#262626]1[/color][/font][font=宋体][color=#262626])[/color][/font][font='Times New Roman', serif][color=#262626]DNA[/color][/font][font=宋体][color=#262626]模板中含有杂[/color][/font][url=https://www.biomart.cn/supply/10010122.htm][font=宋体][color=#262626]蛋白质[/color][/font][/url][font=宋体][color=#262626]①[/color][/font][font='Times New Roman', serif][color=#262626]DNA[/color][/font][font=宋体][color=#262626]模板中蛋白质没有消化完全,特别是染色体中的组蛋白;[/color][/font][font=宋体][color=#262626]②[/color][/font][font=宋体][color=#262626]在提取制备模板时[/color][/font][font='Times New Roman', serif][color=#262626]DNA[/color][/font][font=宋体][color=#262626]丢失过多;[/color][/font][font=宋体][color=#262626]③[/color][/font][font=宋体][color=#262626]模板[/color][/font][font='Times New Roman', serif][color=#262626]DNA[/color][/font][font=宋体][color=#262626]中有过多的[/color][/font][font=宋体][color=#262626]酚残留;[/color][/font][font=宋体][color=#262626]④[/color][/font][font=宋体][color=#262626]模板[/color][/font][font='Times New Roman', serif][color=#262626]DNA[/color][/font][font=宋体][color=#262626]变性不彻底。[/color][/font][font=宋体][color=#262626]([/color][/font][font='Times New Roman', serif][color=#262626]2[/color][/font][font=宋体][color=#262626])酶失活导致[/color][/font][font='Times New Roman', serif][color=#262626][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/color][/font][font=宋体][color=#262626]扩增失败,更换新酶重新实验,或着将新旧两种酶同时使用,根据扩增结果分析是否因酶的活性而导致[/color][/font][font='Times New Roman', serif][color=#262626][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/color][/font][font=宋体][color=#262626]扩增失败。[/color][/font][font=宋体][color=#262626]([/color][/font][font='Times New Roman', serif][color=#262626]3[/color][/font][font=宋体][color=#262626])引物的问题[/color][/font][font=宋体][color=#262626]引物合成质量、引物的浓度、上游和下游引物浓度是否对称等,是[/color][/font][font='Times New Roman', serif][color=#262626][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/color][/font][font=宋体][color=#262626]失败或扩增条带不理想容易弥散的常见原因。有些批次的引物合成质量有问题,上下游引物的浓度与标识的浓度不符,造成低效率的不对称扩增。[/color][/font][font=宋体][color=#262626]([/color][/font][font='Times New Roman', serif][color=#262626]4[/color][/font][font=宋体][color=#262626])[/color][/font][font='Times New Roman', serif][color=#262626]Mg2+[/color][/font][font=宋体][color=#262626]离子浓度对[/color][/font][font='Times New Roman', serif][color=#262626][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/color][/font][font=宋体][color=#262626]扩增效率影响很大,浓度过高可降低[/color][/font][font='Times New Roman', serif][color=#262626][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/color][/font][font=宋体][color=#262626]扩增的特异性,浓度过低则影响[/color][/font][font='Times New Roman', serif][color=#262626][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/color][/font][font=宋体][color=#262626]扩增产量,甚至使[/color][/font][font='Times New Roman', serif][color=#262626][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/color][/font][font=宋体][color=#262626]扩增失败。 [/color][/font][font=宋体][color=#262626]([/color][/font][font='Times New Roman', serif][color=#262626]5[/color][/font][font=宋体][color=#262626])物理原因:变性对[/color][/font][font='Times New Roman', serif][color=#262626][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/color][/font][font=宋体][color=#262626]扩增来说相当重要,如变性温度不合适,变性时间短,极有可能出现假阴性。[/color][/font]以上内容来自仪器信息网《PCR实战宝典》