抗折弹定仪

作为一种天然的生物大分子，DNA不仅是生命的密码，还可作为制造纳米级构件和机器的通用元件。由于DNA的尺寸为纳米级别，具有刚性结构、编码性强的特点，于是，DNA纳米技术的研究者利用DNA分子的自组装特性，根据核酸碱基互补配对的作用，设计并在试管中构造出精确而复杂的、纳米级精度的有序结构。这一新兴的领域被称为DNA折纸技术，科学家使用比头发丝还细一千倍的DNA和RNA等核酸分子，折叠、自组装成复杂的结构。 日前，上海交通大学的樊春海教授、中科院上海应用物理研究所的李宾研究员和胡钧研究员等人联合在《NatureCommunications》发表题为“Capturingtransient antibody conformations with DNA origamiepitopes”的文章，报道了一种三角形的DNA折纸骨架，其具有特定位置的锚定和空间组织的人工表位，可在室温下捕获免疫球蛋白Gs(IgGs)的瞬时构象。其中，DNA折纸表位(DOEs)允许表位瞬间的程序化空间分布，从而可以使用原子力显微镜(AFM)对功能复合物进行直接成像。 在本文中，作者建立了IgG亲和力对单分子水平上3-20nm内表位横向距离的关键依赖性。瞬时构象的高速AFM成像进一步为在单一事件中从单价到二价的IgG亲和力提供了结构和动态证据，这为包括病毒中和、诊断检测和癌症免疫疗法在内的各种应用提供了非常创新的思路和研究方法。 图1：基于DOE的IgGs捕获 图2：HS-AFM表征DOE限制的IgG构象灵活性和Fab-Fab距离 图3：IgG与DOEs结合的动力学 图4：引起IgG亲和力的工程DOEs 综上所述，作者设计了DOEs，通过利用DNA折纸技术的空间可寻性来模拟表位在病毒颗粒上的距离分布。DOEs的定位能力和刚度使IgG能够在室温下冻住，以便在单分子水平对瞬时的功能性IgG结合构象进行高分辨率成像。通过对DOEs上抗原决定簇横向距离的可编程控制，可以精确确定抗原决定簇与抗原决定簇之间的亲和力。此外，该DOE平台还支持HS-AFM和smFRET分析，以探测DOE上单个IgG结合的动力学。研究发现IgGs可以响应从短到长的表位距离，采取从高紧密度到远距离伸展的灵活构象。重要的是，当两个表位间隔约10nm时，二价IgG的结合动力学和效率最高。总之，DOEs的可设计性和可编程性提供了一种直观的方法来模仿病毒表位的分布。因此，DOEs不仅增加了在单分子水平上理解Ab-Ag相互作用的设计空间，而且为免疫工程提供了潜在的强大平台。 DNA折纸表位(DOEs)的制备需要精密的工艺，需要进行准确的浓度确定后，方可进行抗体结合的相关表征及动力学研究。而文中DOEs的浓度确定即由德国ImplenNanophotometer超微量分光光度计完成。 我们非常荣幸能够服务于国内顶级的科研机构，助力用户完成开拓性的成果，这也是Nanophotometer的实力展现和价值体现。独特的样品压缩技术、无需校准的光程设计、以及高性能的NPOS操作系统，可以加速您的研究进程，获得可靠的、一致的结果。有关Nanophotometer的详细信息，欢迎咨询Implen中国以及各地合作伙伴。 Implen GmbH因普恩（北京）国际贸易有限公司

美国、英国最早推广新冠家庭快速抗原检测，交过医保的居民均可预定免费检测包。网上申请后，检测包直接包邮到家，操作方便，可独立完成，仅需30min内便能得到结果。如果结果显示“两条杠”、但无症状，不需核酸检测确认，直接自我居家隔离。欧洲各国、日本、印度、以色列等均在大力推行抗原检测的方法，甚至在英国、新加坡、巴西、法国、意大利等国，抗原检测结果被作为入境标准之一。迅速普及的家庭抗原快检带动了新冠抗原检测的市场繁荣，千亿抗原检测市场拉开序幕！面对日益趋紧的疫情形势，3月11日，国家卫健委宣布开放抗原检测，此后广东、河南、山东等省份相继发布关于新冠抗原检测试剂集采实施方案，截至目前，国家药监局已批准24个新冠病毒抗原检测试剂产品… … 开放抗原检测，速度之快，令人咋舌。截至目前国内已有24个产品获批 资料来源：国家药监局出口额超700亿元国内抗原企业赚翻天德尔塔、奥密克戎等一再掀起海啸，忙坏了中国工人，澳大利亚的抗原检测试剂盒70%以上源自中国......中国制造，在国际上发挥了不可或缺的作用。根据中国海关的统计数据，2021年全年我国抗原检测相关产品的出口额超过700亿元，3月20日，海关统计数据平台更新了1月和2月的进出口数据，前两个月我国新冠试剂出口货值达到326亿元，且我国出口的新冠试剂依然绝大部分为抗原检测试剂，国内新冠抗原产商接单接到手软，简直赚翻了！去年我国抗原检测相关产品出口额较大 图片来源：德邦证券研报九安医疗拿下美国百亿订单金额，现已回款70亿1月14日，九安医疗宣布又拿下一笔81亿元新冠试剂采购合同，此前九安医疗刚公布拿到合计21亿元的美国政府订单，合同总计超过100亿。1月14日早间，九安医疗公告称，美国子公司iHealth Labs.Inc与美国ACC （美国陆军合约管理指挥部）代表美国HHS（美国卫生与公众服务部)就iHealth新冠抗原家用自测OTC试剂盒产品（以下简称“iHealth试剂盒”）于当地时间2022年1月13日签署采购合同并生效。九安医疗曾于3月10日晚间公告，其美国子公司当前已履行完成上述合同的交货义务，累计收到货款4.65亿美元。九安医疗4月1日公告，截至美国当地时间2022年3月30日，美国ACC（美国陆军合约管理指挥部）再陆续向其子公司iHealth Labs Inc（简称“美国子公司”）支付货款共计6.45亿美元，约合人民币40.96亿元。综上，截至目前，美国ACC已累计向公司美国子公司支付货款11.1亿美元，约合人民币70.47亿元，上述货款已全部到账。上述情况符合合同规定的交货和付款安排，该合同在正常履行过程中。网友直呼，回款真快！ 信息来自公开资料，据不完全统计新冠抗原订单金额合计近400亿人民币，器械之家制表宝太生物与美国Innova公司独家合作宝太生物拥有与美国Innova公司的独家合作关系。根据协议，宝太生物独家生产Innova品牌的SARS-CoV-2快速抗原检测试剂盒，并且由拥有该抗原检测试剂盒的知识产权的所有人Innova独家经营。2021年上半年，Innova公司给中国厂家的订货金额高达147亿元，应该也都是给到了宝太。这在宝太官方发布的新闻里得到印证，“今年以来，海沧区出口的新冠病毒快速诊断产品约占全国的1/3，其中宝太生物占了绝对比重，其制造的新冠快速自检产品在G7峰会上亮相使用。” “今年，以新冠病毒检测为代表的体外诊断表现尤为突出，1-7月实现产值近200亿元。”亚辉龙十余架专机送产品到日本今年2月份，亚辉龙(688575)发布公告称，日本株式会社医学生物学研究所（简称“MBL”）已于2月11日发送采购订单，拟向公司采购新冠抗原检测试剂盒，金额价税合计5294.17万美元，约合人民币3.37亿元。后续，再次追加5000万美元的订单。生产线上，数千名工人穿戴着无尘服有序忙碌；日程单上，十余架专机将把产品运往日本东京… … 3月28日，亚辉龙公告已收到合计10,294.17 万美元货款，并且交货完毕。国内3家IVD企业同时拿下英国共77亿订单英国宣布从2022年4月1日起，结束对全民免费的新冠核酸检测。这无疑给新冠抗原自测试剂盒在英国市场再次带来了大量的使用需求。 3月21日，英国政府网公布了3份新冠抗原试剂采购合同的信息，东方生物、艾康生物、基蛋生物分别间接获得5.95亿英镑、2.378亿英镑、0.85亿英镑的合同，三份合同涉及金额共9.18亿英镑，都是从2月23日开始，截止时间均是8月20日。从这次三家IVD企业取得英国77亿的大订单来看，让很多新冠抗原试剂盒厂家羡慕不已，后续很大可能会吸引大量企业进入英国抗原检测试剂市场。不过想要进入英国市场，企业的新冠检测试剂就必须通过英国注册后才能在英国市场自由销售，否则将可能面临制裁。国内合作正酣千亿抗原检测市场正在扩容诺唯赞与上海药械合作上海新一轮疫情爆发，启动大范围新冠抗原筛查，上千万人份试剂调拨上海。3月16日，诺唯赞发布一份为2.15亿元的产品经销合同。据公告，全资子公司南京诺唯赞医疗与上药医疗器械签订了超过2亿元的抗原《经销合同》。国药器械与3家IVD企业签约3月24日，29日，31日，国药器械分别与明德生物、乐普医疗、亚辉龙签订战略合作协议，在多方面展开合作。这也与这几家企业近期获得抗原试剂注册证有密切关系。抗原试剂测在国内充分应用在吉林疫情中，抗原检测得到应用。吉林省工信厅表示，3月15日就有1200万人份抗原检测试剂发往吉林开展检测。分别来自北京热景生物800万人份、广州万孚生物310万人份、北京安沃夫40万人份和重庆明道捷测生物50万人份。在上海抗疫中，3月26日就有1400多万人进行了抗原检测，包括艾康、明德、诺唯赞、万孚等各大获批品牌。随后，上海4月2日起离沪要求具备48小时核酸+24小时抗原；4月3日，上海全市开展抗原检测。而在安徽合肥，机场、车站、路口检测点，都开展了核酸+抗原的双检。在当前“动态清零”的总方针下，各地的防疫措施中抗原检测会应用的越来越广。国内抗原市场规模进一步提升从各大券商的分析中，也可以看出他们对抗原检测的看好。华安证券分析师谭国超认为，综合来看，长期视角下抗原检测市场规模有2700亿元；德邦证券分析师陈铁林认为，国内14亿人口每年的抗原检测规模按出厂口径约为 840 亿至 1680 亿；中泰证券研报表示，预测国内单月市场规模为177亿-266亿元，如考虑到居民、企业自费购买情况，预计新冠抗原检测产品采购需求有望进一步提升。

抗疫给相关医疗器械带来的红利正在逐步消退，“造富神话”后业绩又是否必定为“断崖式下跌”？ 日前，深圳市理邦精密仪器股份有限公司（300206.SZ，以下简称“理邦仪器”）发布2022年半年报。上半年，公司收入约8.58亿元，同比减少3.4%，净利润约1.5亿元，同比减少18.7%。其中第二季度实现营收4.68亿元，净利润约1亿元，支撑起公司上半年业绩“脸面”。 在接受相关投资者调研时，理邦仪器表示，公司目前以实现营收的快速增长作为首要目标。今年二季度净利润环比翻倍增长，主要由于公司品牌影响力提升，加之持续性研发投入，各产品线规模效应显现。 上半年，公司的超声影像、妇幼健康业务收入分别同比增长29.91%、9.38%，合计贡献收入约2.67亿元，其他业务收入均出现下跌。 近日，理邦仪器董秘办相关工作人员对《中国经营报》记者表示，从去年第二季度开始，疫情订单因素消除，相关市场销售逐步趋于正常状态。“疫情目前仍对公司的发展造成影响，既有正面也有负面。如上半年由于国内疫情反复，给公司的供应链及市场拓展带来一定程度的不利因素。” 非涉疫产品稳住业绩 根据披露，理邦仪器目前业务主要涵盖病人监护、心电诊断、妇幼健康、超声影像、体外诊断、智慧医疗等。上半年，与疫情直接相关的监护类产品仍是公司收入的主要来源。该项业务营收约2.81亿元，同比减少20.12%，毛利率为51.45%，同比减少0.78个百分点。 公告显示，理邦仪器的病人监护业务主要包括急危重症监护方案、床旁监护方案、智能生命体征查房方案等。 就在2020年，受益于疫情带动的监护设备采购潮，公司监护业务的营收从2019年的3.97亿元增长至14.71亿元，同比增长270.65%，带动当年公司整体营收由2019年的11.36亿元增长至23.19亿元，增幅达104.06%，净利润同比增长395.37%至6.53亿元。 只不过，从2021年开始，理邦仪器监护类产品的市场销售逐步恢复至正常状态。其中，由于部分疫情订单在2021年第一季度交付和确认收入，该季度公司整体实现营收5.09亿元，第二、三、四季度分别收入3.76亿元、3.73亿元和3.77亿元，趋向常态化销售。整体而言，公司营收较2020年下降29.42%，净利润下降64.57%。 今年上半年，公司的监护类产品收入仍出现同比下滑。对此，理邦仪器表示，今年该项业务的增长目标是实现收入与去年（5.99亿元）持平或略有增长。 对业绩产生主要影响的监护类产品正在逐步恢复之时，与疫情非直接相关产品线所贡献的收入，让理邦仪器有了平稳落地的喘息机会。 今年上半年，理邦仪器的5大产品线中，仅有妇幼健康、超声影像的收入出现同比增长，增幅分别为9.38%、29.91%，合计收入占比为31.1%。事实上，2020年及2021年，上述两项业务的收入也呈现持续增长的状态。 其中，妇幼健康是理邦仪器的传统业务板块。公司早期以多普勒胎心仪和胎儿、母亲监护仪系列产品切入市场，并逐步拓展至妇幼诊疗，推出阴道镜、妇科高频电刀等系列产品。2019年，公司进入盆底康复领域。2020年，该项业务收入2.24亿元，同比增长0.79%，占总收入比例9.68%；2021年，其收入2.65亿元，同比增长18.3%，占比16.22%。 另一方面，超声影像业务在2021年的收入增幅达到40.1%至1.83亿元（2020年增速为3.78%）。对于该项业务近两年来的表现，理邦仪器表示，前两年疫情期间，很多医院将主要精力集中在核酸检测以及发热门诊方面，超声类设备采购需求受到一定抑制，随着疫情影响逐步退去，超声产品前期被抑制的市场需求得到恢复，整个行业需求回暖。 记者注意到，今年上半年，深圳开立生物医疗科技股份有限公司（300633.SZ）的彩超业务为其带来5.43亿元营收，同比增长25.59%；深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司（300760.SZ，以下简称“迈瑞医疗”）医学影像业务（包含超声产品）营收32.64亿元，同比增长22.2%。 第二季度，理邦仪器的收入同比增长24.27%，净利润同比增长66.78%。公司认为，妇幼健康及超声影像业务的快速增长是带动当期销售额提升的主要原因之一。 增速是否可持续？ 理邦仪器曾表示，疫情带来涉疫产品需求增长的同时，与疫情非直接相关的业务受到负面影响。那么，妇幼健康、超声影像产品线在近两年实现正向增长的逻辑何在？ 对于妇幼业务，理邦仪器表示，公司新切入的盆底康复业务目标人群与产科业务的目标人群一致，可充分利用公司前期在妇幼领域所积累的品牌、资源及用户基础等方面所形成的竞争优势，缩短盆底康复业务的市场导入期，带动销售，从而突破公司在妇幼领域的市场空间上限。 截至2021年年末，理邦仪器在妇幼健康业务研发项目中，F12新一代胎监、PA4及PR4便携式生物刺激反馈仪的进展为“试产、即将上市”。 超声业务方面，理邦仪器表示，该项业务收入增长的驱动力主要在于公司多年来持续性研发投入，产品线覆盖高中低档，同时持续提升性能。此外，公司持续建设国际化营销渠道，受益于全球超声市场需求回暖。 华鑫证券指出，理邦仪器过往彩超设备主要以低端产品为主，且产品型号较为单一，终端医院渠道缺少竞争力，因此收入上未能实现快速增长。2018年以来，公司推出的多款产品定位中高端市场，并对图像、功能、算法进行升级优化。 记者注意到，2021年，理邦仪器经过更新换代的LX9系列推车式彩超上市，该产品新增人工智能应用功能。除此之外，公司没有披露超声业务存在其他在研项目。 截至2022年6月30日，理邦仪器已获得注册证的超声产品共有7个，包括推车式全数字彩色超声诊断系统、便携式全数字彩色超声诊断系统、全数字超声诊断系统。 在与疫情相关产品线收入出现波动时，非涉疫产品线比以往承担着更多的业绩支撑作用。在上半年取得一定成绩之后，理邦仪器常规业务的增长是否可持续？ 对于妇幼业务，理邦仪器日前在接受投资者调研时表示，未来，随着公司妇科、产科产品的更新换代，加之盆底康复业务（含家用盆底业务）的拓展，以及妇幼信息化综合解决方案的加持，公司妇幼业务将打开长期成长空间。 超声业务方面，理邦仪器表示，该业务未来会继续保持快速增长态势。一方面，公司的销售面向全球市场，目前超声产品的销售基数还很低，随着产品在质量、品牌影响力等方面的提升，超声产品的国际市场占有率将继续增加。另一方面，目前超声产品的临床应用场景已逐渐向其他科室分化，市场空间持续扩大，公司也将继续紧跟市场需求。 事实上，国内超声设备市场规模正在不断扩大，行业龙头也在快速超越。 根据灼识咨询估计，2016年～2020年，中国超声设备市场规模由86.7亿元增至127亿元，年复合增长率为10%；2021年～2025年，市场规模预计从139.7亿元增至186.5亿元，年复合增长率约7.5%。 中信建投证券于今年5月发布的研报指出，国内二、三级公立医院和独立影像中心主要采购中高端超声设备，基层医疗机构和体检中心以中低端超声设备为主，私立医院对低中高三种类型均有涉及。广发证券数据统计显示，国内市场上，目前中低端超声已基本实现国产化，而高端超声占据50%的市场份额，是未来国产扩容的主要市场。 根据迈瑞医疗口径，2021年，其超声业务首次超越进口品牌成为国内第二。2022年上半年，公司的超声业务市场份额已站稳国内第二，后期将开发完善妇产、心血管、麻醉、介入等临床解决方案，并通过对高端超声领域的技术积累，实现高端客户群的全面突破。

德国啤酒享誉世界，每年产量达100亿升，其中相当部分销往国外。研究人员最新发现，一些德国啤酒因生产中使用的过滤物质被砷污染。但研究人员同时说，啤酒中砷含量不高，“不太可能”带来健康风险。　　德国慕尼黑工业大学的研究人员7日在华盛顿举行的美国化学学会全国会议上公布了上述发现，但他们没有说明受污染的啤酒品牌。研究人员认为，消费者不必为此担忧，因为这些德国啤酒的“砷含量依然处于低水平”.此前也有报告显示，意大利等至少6国的啤酒砷含量比德国啤酒还高。　　研究人员对140份德国啤酒样本进行了砷和铅等物质的检测。世界卫生组织规定饮用水中砷的限值是每升0.01毫克，而一些啤酒样本中的砷含量已超过这一限值。　　德国啤酒含砷的原因何在?研究人员分析了麦芽、啤酒花等原料以及生产环节，结果发现，一种被称为硅藻土的过滤物质或许是罪魁祸首。硅藻土在啤酒生产中的主要作用是滤去原液啤酒中的酵母蛋白质和啤酒花树脂等悬浮微粒，以使酒液清亮透明。领导研究的穆罕默德科尔汉说：“我们发现，硅藻土或许就是啤酒砷污染的主要来源。检测表明，一些硅藻土样本会释放出砷。”　　但科尔汉同时说，这种过滤技术只让啤酒的砷含量“略微增加，饮用这些啤酒不太可能让人患病”.与砷问题相比，“酒精中毒的风险是一个更加现实的问题”.　　德国啤酒一向被视作世界啤酒之王，发生砷超标，消费者会怎样看待?　　在本报发起的“德国啤酒砷超标，对此你的反应是?”的调查中，有57.1%的受访者将票投给了“淡定，或因外国标准定得严才会略超标”,同样也有57.1%的受访者选择了“关切，望厂商能改进工艺进一步保障产品安全”,另外还有14.3%的受访者表达了“其他”意见，比如说，研究人员判定这部分德国啤酒砷超标的依据是世界卫生组织规定的饮用水砷标准，不够科学，因为人饮用啤酒的量肯定小于饮用水的量，不应该简单地把饮用水标准硬套给啤酒，而应以专门针对啤酒定的标准来衡量是否超标。

昨天(19日)，丹东市领导会见了浙江超硬磨具、浙江龙飞集团石化仪表、日本NetCom株式会社、大连科瑞科技、大连大洋伯斯特电子、浙江全通市政建设这6家有意落户仪器仪表产业基地的企业代表，并现场办公帮助企业解决项目用地、厂房建设、优惠政策、研发支持、产品推广等方面的问题，促进企业落户园区。　　这6家企业各具特色。其中，浙江超硬磨具有限公司是浙江省规模最大的超硬磨具专业生产企业，准备在丹投资建设西湖城商业地产项目、研发中心在内的4个项目共计投资12亿元 大连科瑞科技有限公司是一家科研、开发、制造、销售于一体的高科技企业，产品气相色谱仪及色谱配件等已经打入美国市场 浙江全通市政建设有限公司有意打造仪器仪表配套平台，为园区企业提供配件，形成园区物流 大连大洋伯斯特电子有限公司产品已出口多个国家，神舟六号、神舟七号火箭推进剂计量都选用了他们生产的流量计。　　市领导代表市委市政府对中外企业家看好丹东，准备在丹东投资兴业表示欢迎，在帮助协调解决投资者关心的问题的同时，郑重承诺：丹东市委、市政府一定当好企业服务员，只要企业入驻，各项优惠政策一定落到实处，全力以赴帮助解决项目建设和生产中遇到的难题。投资者纷纷表示，丹东市委、市政府高效务实的工作作风令他们深受感动和鼓舞，坚定了来丹投资兴业的信心。　　记者进一步了解到，目前，已有57户企业落地仪器仪表产业园区，签订投资协议书的企业也达到了125户，这6家企业也将陆续签约、注册，成为仪器仪表产业基地的新成员。

Southern Biotech第二波感恩回馈促销活动即将开始，猪抗体大幅降价，最低折扣5.5折，活动详情如下：【活动时间】2016年3月1日起至2016年3月25日，时间紧迫，抓紧抢购哦！【活动内容】活动期间，凡购买“Southern Biotech促销猪一抗”产品列表中的产品，即可享受5.5折特惠。【活动代码】PIGDAY2016 ，请在下订单时务必备注此代码。SBA（Southern Biotechnology Associates, Inc.或简称SouthernBiotech）公司建于1982年，由美国伯明翰的阿拉巴马大学（UAB）的Dr. Max Cooper细胞免疫学实验室的科学家创建。SBA致力于高质量、高亲和纯化的二抗的生产、纯化和标记。 同时，SBA还提供各种亲和纯化的多克隆和单克隆抗体，其中包括：荧光素和酶标记物，低内毒素/不含叠氮化物（LE/AF）制剂，F(ab)和F(ab' )2片段化抗体，此外还有纯化的免疫球蛋白、血清以及细胞外基质蛋白等产品。Southern Biotech促销猪一抗产品列表目录号产品名称亚型克隆号规格目录价促销价4500-01Mouse Anti-Porcine CD1-UNLBIgG2a76-7-40.5 mg502527644500-02Mouse Anti-Porcine CD1-FITCIgG2a76-7-40.5 mg562530944500-08Mouse Anti-Porcine CD1-BIOTIgG2a76-7-40.5 mg547530114500-09Mouse Anti-Porcine CD1-PEIgG2a76-7-40.1 mg322517744510-01Mouse Anti-Porcine CD3e-UNLBIgG1PPT30.5 mg412522694510-02Mouse Anti-Porcine CD3e-FITCIgG1PPT30.5 mg487526814510-08Mouse Anti-Porcine CD3e-BIOTIgG1PPT30.5 mg472525994510-09Mouse Anti-Porcine CD3e-PEIgG1PPT30.1 mg322517744510-13Mouse Anti-Porcine CD3e-SPRDIgG1PPT30.1 mg337518564510-30Mouse Anti-Porcine CD3e-AF488IgG1PPT30.1 mg352519394511-01Mouse Anti-Porcine CD3e-UNLBIgG2bBB23-8E60.5 mg412522694511-02Mouse Anti-Porcine CD3e-FITCIgG2bBB23-8E60.5 mg487526814511-08Mouse Anti-Porcine CD3e-BIOTIgG2bBB23-8E60.5 mg472525994511-09Mouse Anti-Porcine CD3e-PEIgG2bBB23-8E60.1 mg322517744515-01Mouse Anti-Porcine CD4-UNLBIgG2b74-12-40.5 mg412522694515-02Mouse Anti-Porcine CD4-FITCIgG2b74-12-40.5 mg487526814515-08Mouse Anti-Porcine CD4-BIOTIgG2b74-12-40.5 mg472525994515-09Mouse Anti-Porcine CD4-PEIgG2b74-12-40.1 mg322517744515-13Mouse Anti-Porcine CD4-SPRDIgG2b74-12-40.1 mg337518564515-30Mouse Anti-Porcine CD4-AF488IgG2b74-12-40.1 mg352519394520-01Mouse Anti-Porcine CD8a-UNLBIgG2a76-2-110.5 mg502527644520-02Mouse Anti-Porcine CD8a-FITCIgG2a76-2-110.5 mg562530944520-08Mouse Anti-Porcine CD8a-BIOTIgG2a76-2-110.5 mg547530114520-09Mouse Anti-Porcine CD8a-PEIgG2a76-2-110.1 mg322517744520-13Mouse Anti-Porcine CD8a-SPRDIgG2a76-2-110.1 mg337518564520-30Mouse Anti-Porcine CD8a-AF488IgG2a76-2-110.1 mg352519394525-01Mouse Anti-Porcine Monocyte/Granulocyte-UNLBIgG174-22-150.5 mg502527644525-02Mouse Anti-Porcine Monocyte/Granulocyte-FITCIgG174-22-150.5 mg562530944525-08Mouse Anti-Porcine Monocyte/Granulocyte-BIOTIgG174-22-150.5 mg547530114525-09Mouse Anti-Porcine Monocyte/Granulocyte-PEIgG174-22-150.1 mg322517744525-30Mouse Anti-Porcine Monocyte/Granulocyte-AF488IgG174-22-150.1 mg352519394530-01Mouse Anti-Porcine CD21-UNLBIgG1BB6-11C9.60.5 mg502527644530-02Mouse Anti-Porcine CD21-FITCIgG1BB6-11C9.60.5 mg562530944530-08Mouse Anti-Porcine CD21-BIOTIgG1BB6-11C9.60.5 mg547530114530-09Mouse Anti-Porcine CD21-PEIgG1BB6-11C9.60.1 mg322517744530-30Mouse Anti-Porcine CD21-AF488IgG1BB6-11C9.60.1 mg352519394550-01Mouse Anti-Porcine B Cell Subset-UNLBIgMBB6-10A100.5 mg502527644550-02Mouse Anti-Porcine B Cell Subset-FITCIgMBB6-10A100.5 mg562530944550-08Mouse Anti-Porcine B Cell Subset-BIOTIgMBB6-10A100.5 mg547530114550-09Mouse Anti-Porcine B Cell Subset-PEIgMBB6-10A100.1 mg322517746050-01Goat Anti-Porcine IgG(H+L)-UNLBIgG 1.0 mg6003306050-02Goat Anti-Porcine IgG(H+L)-FITCIgG 1.0 mg7504136050-04Goat Anti-Porcine IgG(H+L)-APIgG 1.0 mL15758666050-05Goat Anti-Porcine IgG(H+L)-HRPIgG 1.0 mL10505786050-08Goat Anti-Porcine IgG(H+L)-BIOTIgG 1.0 mg11256196050-30Goat Anti-Porcine IgG(H+L)-AF488IgG 1.0 mg18751031

Abcam位于英国的剑桥科学园，成立于1998 年，专门生产和分销研究型抗体。我们的在线目录 (www.abcam.cn）已有差不多100,000种抗体和试剂，并不断添加，供应予全球百多个国家。Abcam 于2005年11月在伦敦证券交易所上市，在美国马萨诸塞州、日本东京及香港均设有分公司。Abcam 一直致力加强产品线，为使研究员更容易找到蛋白质研究试剂产品，在2011并购了美国的 MitoSciences 公司，加强了免疫分析方面的产品供应；同年也并购了英国的 Ascent Scientific 公司，开展了生化试剂的供应。在2012年，Abcam 并购了美国的 Epitomics 公司，成为一家有领导地位的RabMAbs? 供应商。Abcam 的目标是给世界上最好的抗体建立最大的在线目录，为各地科学家提供尖端产品，成为各国科学界的重要伙伴。我们为所有产品提供技术支持来使客户获得预期的结果。为提供高质量的抗体来指向尽可能多的靶蛋白，我们尽所能在尽可能多的应用和物种中检测每种抗体。我们相信诚信才是上策，在我们的网站上会发布有关我们每一种产品的尽可能多的信息。

大家好，本周为大家分享一篇发表在Analytical Chemistry上的文章，Ion Mobility-Mass Spectrometry and Collision-Induced Unfolding of Designed Bispecific Antibody Therapeutics1，文章的通讯作者是密歇根大学的Brandon副教授。　　双特异性抗体(bispecific antibodies, bsAbs)是一类重要的新兴疗法，能够同时靶向两种不同的抗原，已被开发作为对某些单克隆抗体疗效有限疾病的治疗手段。尽管bsAbs具有独特的优势，但它的结构较为复杂，需要特殊的制备工艺，“knobs-into-holes”(KiH)是其中一种可以用于制备bsAbs的技术，这种技术通过将knob链CH3结构域表面的特定氨基酸突变为较大氨基酸，将hole链上的突变为较小氨基酸，从而实现“knobs-into-holes”的配对形式，提高不同轻重链在配对时的正确配对率，产生正确的bsAbs。然而，由于抗体治疗药物分子量较大，通常比传统的小分子药物表现出更大的结构复杂性和异质性，对KiH bsAb 高级结构的完整表征对定义bsAb的结构功能关系，以及确保最终治疗的稳定性、有效性和安全性都至关重要。目前已开发的分析方法有很多，但是普遍存在样品消耗量大、数据采集和解析时间较长等缺点。近年来，非变性离子迁移质谱(ion mobility-mass spectrometry, IM-MS)和碰撞诱导去折叠(collision-induced unfolding，CIU)逐渐被证实是用于分析单克隆抗体高级结构的有效方法，能够从存在结构异质性和杂质的几微克样品中表征单抗治疗药物的高级结构。IM可以根据气相蛋白离子的电荷和旋转平均碰撞截面(collision cross sections，CCSs)在毫秒时间尺度上对蛋白进行分离。当与质谱耦合时，可以很容易地将质荷比相同但CCS不同的离子区分开来，而CIU可以使IM-MS同步提供蛋白质结构和构象稳定性信息。CIU根据二硫键、糖基化水平、结构域交换特性等信息来区分差异。　　在这篇文章中，作者描述了定量CIU在bsAbs中的首次应用，扩展了非变性IM-MS和CIU的能力，用于稳定表征KiH bsAb及其亲本knob和hole同型二聚体单抗的高级结构。　　图1 Native、未修饰的knob(蓝色)和hole(橙色)同型二聚体，以及KiH bsAb异型二聚体(绿色)的CIU实验。(A)24+电荷态(左)及其相应重复RMSD基线(右)的平均CIU指纹图谱(n=3)。所有的指纹图谱都显示了白色虚线框所示的三个主要特征。在(B) 5 V、(C) 65 V、(D) 110 V时的标准化TWCCSN2分布。在较低的激活电位下，所有抗体均具有相似的CCS，在较高的加速电位下则存在显著差异。(E)两两的RMSD分析显示，与重复的RMSD基线(虚线)相比，抗体之间的整体高级结构差异。(F)CIU50分析说明了KiH bsAb模型的稳定性如何保持在knob和hole的同型二聚体之间。　　如图1所示，bsAb的稳定性似乎与本文研究的KiH模型的两个亲本同型二聚体单克隆抗体相关。在电压为65V时，KiH bsAb的TWCCSN2分布与亲本knob同型二聚体单抗的分布相似 而在110V时，则与亲本hole同型二聚体单抗的分布相似。并且KiH bsAb的稳定性介于两种亲本同型二聚体单抗的稳定性之间。与指纹图谱中记录的第一次CIU转换相对应的是CIU50-1值，第二次的则是CIU50-2值，从3组样本的数据分析推测，CIU50-1和CIU50-2很可能代表了KiH bsAb和mAb结构中不同结构域的局部稳定性。　　图2 knob和hole的半体CIU数据。(A)16+电荷态的平均CIU指纹图谱(n=3).(B)两两RMSD分析显示，半体之间的高级结构存在显著差异。(C)CIU50分析显示，蛋白质稳定性存在显著差异。　　为了更好地展示KiH bsAb不同结构域的CIU特征，作者记录了同型二聚体单抗IM-MS光谱中16+电荷态的knob和hole半体的CIU数据。从图2A的指纹图谱可以看出，每种结构都包含4种主要的CIU特征，但是图2B的RMSD分析显示两种半体的高级结构之间存在显著差异。CIU50分析进一步表明，在观察到的两次展开过渡中，knob半体明显比hole半体更稳定。作者推测造成这种CIU主要差距的原因可能是Fab结构域的差异。　　图3 Fab和Fc片段的CIU数据。(A)13+电荷态的平均CIU指纹图谱(n=3).(B)两两RMSD分析显示，knob和hole的Fab片段之间存在显著差异。(C)CIU50分析显示，不同片段之间稳定性存在显著差异。　　为了进一步将CIU特征联系到KiH bsAb的结构域当中，作者对木瓜蛋白酶消化后产生的Fab和Fc片段进行了CIU分析。从图3A可以看出，knob和hole的Fab片段都具有3种CIU特征，但是嵌合的Fc片段则具有4种CIU特征。尽管knob和hole的Fab片段具有相似的CIU指纹图谱，但是RMSD分析显示它们之间的高级结构仍然存在较大差异，并且knob的Fab片段稳定性明显高于hole的。至于Fc片段的稳定性则远高于两种Fab片段，可能的原因是重链CH3结构域的强非共价作用以及knobs-into-holes配对的影响。　　图4 去糖基化后的knob、hole同型二聚体和KiH bsAb异型二聚体24+离子(n=3)。(A)比较对照组和去糖基化抗体的RMSD分析显示，高级结构有显著差异。CIU50-1(B)和CIU50-2(C)分析显示抗体去糖基化后表现出显著的不稳定性。(D)对照组和去糖基化抗体之间的CIU50值差异图。　　先前的研究已经证明，CIU对不同水平的单抗糖基化很敏感，其中去糖基化会导致单抗高级结构的不稳定。作者利用高分辨率非变性轨道阱质谱分辨添加PNGaseF前后同型二聚体mAb和KiH bsAb糖型的变化。实验结果显示，KiH bsAb表现出高度糖异质性，包含至少12种不同的糖型。这很可能归因于组装的KiH bsAb中每个独立的knob和hole重链上存在独特的糖基化，进一步增加了其复杂性。　　总而言之，这篇文章展示了IM-MS结合CIU用于建立KiH bsAb及其亲本同型二聚体之间高级结构联系的能力。单独的CCS不足以解决此研究中抗体之间细微的高级结构差异。相比之下，CIU指纹图谱则可以分辨和区分每一个等截面的抗体。这一解释bsAb CIU细节的能力，加上对KiH bsAb稳定性的更深入理解，有可能提供支持KiH bsAb发现和发展的关键信息。　　撰稿：梁梓欣　　编辑：李惠琳　　文章引用：Ion Mobility-Mass Spectrometry and Collision-Induced Unfolding of Designed Bispecific Antibody Therapeutics　　李惠琳课题组网址www.x-mol.com/groups/li_huilin　　参考文献　　Villafuerte-Vega, R. C., Li, H. W., Slaney, T. R., Chennamsetty, N., Chen, G., Tao, L., & Ruotolo, B. T. (2023). Ion Mobility-Mass Spectrometry and Collision-Induced Unfolding of Designed Bispecific Antibody Therapeutics. Analytical Chemistry.

11月7日，卫生部全国细菌耐药监测网负责人肖永红教授表示，针对目前医生多凭经验用药的现状，我国卫生部门已着手制定抗菌药物的管理办法。此次国内报告的两例婴儿身上携带的NDM-1酶屎肠球菌病例，有可能是在医院内的环境中感染，这说明这种耐药基因可能是我们在用药的过程中产生的。　　肖永红表示，“超级细菌”事件已经引起了国家对于抗生素使用的关注，目前，卫生部正在制定抗菌药物管理办法，建立合理使用抗菌药物的科学体系，将对临床抗生素的使用进行规范和强化，同时，对医院使用的药品中，抗生素类药品所占的比例进行限定，“许多医生会在患者没有任何需要使用抗生素的情况下，擅自使用抗生素，这个办法出台后，就会有明确的规范，具有强制效力，对医生起到警示作用”。　　肖永红称，抗生素在我国不合理使用的情况很严重，按照世卫组织的规定，在100个住院病人中，使用抗生素的人数上限为30人，而我国却是70个人在用，比世卫宽松的标准高出了两倍多 就使用的剂量来说，100个住院病人每天用抗生素不应超过40份，但我国已达到了80份。　　卫生部公布的统计年报显示，住院患者中，仅有10%的人是因为细菌感染，加上院内感染、手术预防用药等，需要用抗生素治疗的比例在30%左右，但临床已经达到70%。　　不当使用抗生素的直接后果是耐药，以感染大肠杆菌的患者为例，如果是敏感菌导致，治疗仅需5000元，致死率为5%，但如果是耐药菌，死亡率将升至10%至15%，花费也将达到1.5万。　　■对话　　超级细菌在全球范围的发病情况呈现怎样趋势?它的出现是否应引起公众对抗生素使用的警觉?针对相关问题，世卫组织西太平洋区域办公室抗生素耐药工作组长DeanShuey博士回答了本报记者提问。　　不要用抗生素治流感等小病　　记者：超级细菌是否已全球蔓延?　　DeanShuey博士：我们尚不清楚蔓延的程度，因为许多国家并未或者无能力检查该基因。截至9月中旬，下列国家已发现含此基因的细菌：澳大利亚、孟加拉、加拿大、中国、印度、巴基斯坦和美国。几乎可以肯定，还会有更多的国家出现此类病例。　　记者：超级细菌有多危险?　　DeanShuey博士：一旦出现对抗生素的耐药迹象，就会令人担忧。同时，如果病人感染的病菌对多种抗生素耐药，治疗会十分困难。但仍有一两种抗生素可能有效，因此尽管处理耐多药细菌很难，在某种程度上仍是可治疗的。据我们目前所知，中国尚无超级细菌直接造成的死亡病例。超级细菌确实是一种有可能危及生命的严重问题。　　耐多药细菌的出现并不是一件新闻。60多年前人类发现了抗生素，此后的十年间耐多药细菌引起的问题就开始显现，现在问题日趋恶化。更多的细菌开始产生耐药性，与此同时，新抗生素的发现频率正在放缓。　　包括中国在内的所有国家都在面临细菌耐药性的问题　　记者：问题的根源是什么?应该采取怎样的措施?　　DeanShuey博士：世卫组织给成员国提出了以下建议：首先，制定全面的国家计划，明确抗生素耐药控制工作的负责单位。通过建立有力的疾病监测及实验室系统，提高各单位发现和监控抗生素耐药问题的能力。同时，鼓励人类卫生部门和肉畜行业合理使用高质量抗生素。因为上述两个领域对抗生素的滥用或不当使用，正是形成抗生素耐药的主要原因。　　应该采取如下步骤：逐渐形成一种体制，使抗生素只能通过专业医务人员的处方获得，而不能作为非处方药 鼓励大众服完处方抗生素的整个疗程，不要病情好转就停服，也不要用抗生素治疗病毒感染和普通流感等小病。　　杜绝假冒伪劣药品。取消不良的激励机制，使医务人员和医疗机构不必以药养医。对肉畜使用抗生素的情况进行监管，防止不当使用。　　我们认为，应鼓励社区和医疗机构预防及控制感染，鼓励开展研究，优化现有抗生素和诊断工具的应用，同时鼓励发现新型抗生素和诊断工具。虽然采取这些措施，也许不能完全消除抗生素耐药问题，但可以减轻问题的严重性。如果我们不采取行动，终有一天细菌感染会变得几乎无法医治。

在广告界，"无抗生素"的鸡蛋就像超级英雄一样，总是站在聚光灯下。但是，评价一颗蛋的品质，可不仅限于“抗生素残留”。其实，国家已经制定的国标里面对"抗生素残留"有严格限定。市场监管局会定期对鸡蛋进行"体检"，一旦发现有"超标"的鸡蛋，就会毫不犹豫地开出"罚单"。评价一颗蛋的品质，除了需要留意它是否"无抗生素"，还需要从蛋的大小与形状（蛋形指数）、蛋壳的质量以及内在的营养成分这三个维度去看。就像婴儿的诞生受到遗传、环境和母亲健康的影响，蛋品的品质也受到遗传、管理以及禽类疾病等因素的影响。1 蛋形指数蛋形指数是指鸡蛋短径与长径之比，一般情况下，标准值为0.7-0.75。如果蛋形指数小于0.7，说明鸡蛋长而窄；反之，如果蛋形指数大于0.75，说明鸡蛋短而宽。蛋形指数对鸡蛋品质的影响体现在三个方面：（1）外观：过大或过小的蛋形指数会影响鸡蛋的外观。蛋形指数大于标准值时，鸡蛋较为圆胖，甚至会出现畸形鸡蛋，影响外观美观度。反之，蛋形指数小于标准值时，鸡蛋会显得过于细长，不够美观，也不利于储存运输。（2）口感：不同蛋形指数的鸡蛋口感也会有所不同。研究发现，蛋形指数0.65-0.75之间的鸡蛋质地较佳，口感更好。（3）营养：蛋形指数的大小也与鸡蛋中营养成分的分布有关。研究表明，蛋形指数较小的鸡蛋蛋黄中含有更高的蛋白质和胆固醇，而蛋形指数较大的鸡蛋蛋白质和胆固醇含量更高。2 影响蛋壳质量的因素蛋壳质量约占蛋重的10%~11%，蛋壳质量是蛋鸡养殖场和饲料生产者普遍关注的问题，它与种鸡的种蛋入孵率、孵化率、鸡苗质量以及商品蛋鸡的鲜蛋产量、经济效益密切相关，据估计，因蛋壳质量低劣造成的蛋损失约为6%。褐壳蛋在我国市场上占有的比例较大，蛋壳的着色虽然不影响鸡蛋的营养价值，但对消费者的心理有一定影响，所以近几年大家对褐壳蛋着色的关注度比往年更高。3 影响内在营养的因素内在营养与蛋重密切相关，蛋白质、碳水化合物、脂肪和钙的摄入量均可影响蛋重。通过调控鸡群的采食量以及日粮蛋白质、氨基酸与能量水平可以适当调整蛋重。增加采食量，提高日粮蛋白质和蛋氨酸、赖氨酸水平能够增加蛋重 提高日粮能量水平，减少采食量，可以适当降低蛋重。在日粮中加入一定量的油脂，增加饲料中的亚油酸含量，也能够在一定水平上增加蛋重。常见的与蛋品品质检测相关的专业仪器如下表所示：Description产品名称Model No.型号Brand/Origin品牌/产地用途多功能蛋品质分析仪ETP-01美国ORKA鸡蛋重量 蛋白高度蛋黄颜色 哈弗值 国际标准等级一体化蛋品质量测定系统ETU-01美国ORKA测量7个指标包括蛋品分析仪，蛋壳强度，厚度的功能蛋壳强度仪EFR-01美国ORKA蛋壳强度蛋壳厚度测定仪ESTG-2美国ORKA无需破损蛋壳厚度蛋壳颜色测定仪QCR英国TSS蛋壳颜色测定蛋粉蛋液分析仪MULTISCAN3000X澳大利亚NI蛋粉蛋液成分快速测定高胶强度测定仪RTC-3002D日本鸡蛋凝胶强度测定罗氏比色扇FQ-1A罗氏蛋黄颜色比对蛋品质量分析仪CDR FOODLAB意大利CDR对于全蛋蛋液，蛋粉，蛋黄的检测，主要分析L-乳酸，D-3羟丁酸 胆固醇，叶黄素，胡萝卜素含量分析家禽饲养隔离安全柜FIC美国PLAS-LABS提供净化、传递、消毒、负压、自动饲喂、温度控制、红光照明设备自动禽类分级系统VTS2000天翔飞域评估禽胴体长度，宽度，面积，破损，分级等指标数显蛋白高度测定仪EQ-1A北京天翔飞域鸡蛋蛋白高度测定蛋壳强度测定仪KQ-1A北京天翔飞域蛋壳强度测定鸭蛋鹅蛋蛋壳强度测定仪KQ-1B北京天翔飞域鸭蛋鹅蛋蛋壳强度专用便携式蛋壳强度测定仪KQ-1C北京天翔飞域便携式测量蛋壳强度蛋壳厚度测定计TQ-1A北京天翔飞域蛋壳厚度测定蛋壳颜色测定仪SCQ-1A北京天翔飞域蛋壳颜色测定 LAB值蛋壳白度测定仪QCR-1A北京天翔飞域蛋壳白度测量禽蛋相对密度测定仪EggD-1A北京天翔飞域禽蛋密度测量鸡蛋胚胎观察器VIEW-1A北京天翔飞域胚胎发育观察和记录家禽育种体重管理系统PBW-1A北京天翔飞域家禽重量管理以及系统蛋形指数测定计NFN-1A北京天翔飞域鸡蛋长径，短径以及蛋形测定胸角器CAM-1A北京天翔飞域测量鸡鸭等禽类胸的角度，判断胸肌发达情况气室高度测定系统EGCQ-1A北京天翔飞域鸡蛋气室成像，鸡蛋气室高度无损测量，鸡蛋分级蛋粉蛋液冻干机IC-01C初始密码蛋粉蛋液冻干以及水分测定蛋粉蛋液水分测定仪ELP-1A北京天翔飞域蛋粉蛋液水分快速测定数字化蛋斑评定仪Mottled Egg-1A北京天翔飞域蛋斑质量自动评定、蛋壳质量评价蛋壳评分仪ESC-1A北京天翔飞域水印蛋评价，蛋壳质量评价

微光汇聚成星河疫情面前，没有旁观者，只有参与者。自鞍山出现疫情以来，欧波同集团以实际行动调动团队将抗疫物资及时汇聚到抗疫前线，诠释着欧波同人同舟共济、同心抗疫的坚定信心。以实际行动践行社会责任担当，为助力打赢疫情防控阻击战贡献力量。4月18日上午，集团大巴满载欧波同人的爱心开往鞍山高新区管委会。该批防疫物资包括：医用口罩、N95口罩、医用防护面罩、医用护目镜、医用手套等。根据其捐赠意向和区域防疫工作需要，欧波同团队积极对接鞍山高新区管委会落实接收事宜。及时满足医务工作者、基层抗疫人员等一线工作者们的需求，积极助力鞍山市疫情防控工作。凝心聚力战疫情，共克时艰显担当。想要最终打赢这场防疫攻坚战，离不开医务工作者、社区工作者和全体志愿者们的倾情付出与市民的理解配合，同时也需要动员社会公益力量的支持参与。在鞍山从严从紧加强社会面疫情防控的重要阶段，欧波同集团将继续积极调配社会捐赠物资，助力疫情防控工作，努力彰显企业责任担当。微光凝聚成星河。医务工作者、社区工作者、志愿者和群众的积极配合，共同组成了一幅幅全民众志成城的抗疫画卷，我们相信，只要大家齐心协力，就一定能汇聚成战胜疫情的“磅礴力量”，筑起抵御病毒的“铜墙铁壁”。

为什么要用冻干的方法制备稳定的蛋白药物产品？在蛋白药物治疗的早期研发中，有必要设计一种在运输和长期储存期间稳定的配方。显然，水溶剂的液体产品对于生产来说是很容易且经济的，对于终端使用者也是十分方便的。水溶剂的液体产品存在的问题1. 大多数的蛋白以液体状态存在时，易于化学（脱酰胺或氧化）和/或物理降解（聚合，沉淀） 2. 如果严格控制水溶剂蛋白的储存条件，并且对配方进行合理设计，可以减缓其降解，但是在实际的运输过程中，精确控制储存条件通常是行不通的，蛋白会因受到多种应力的作用而变性，包括摇动，高低温，冷冻等 3. 尽管会设计配方和运输条件尽可能规避这些应力导致的损害，但是仍然不能足够阻止在长期储存过程中造成的损害。例如，在某些情况下，尽量减少化学降解的条件会导致物理损伤，反之亦然，那么就无法找到提供必要的长期稳定性的折衷条件。解决方案：冻干配方设计合理的冻干配方，理论上可以解决以上存在的所有这些问题。在干燥的样品中，降解反应可以得到充分的抑制或减缓，蛋白产品在室温状态可以仍然维持其稳定性，保存期可达到数月或数年的时间。而且，在运输过程中，短期的温控偏离，冻干的蛋白样品通常也不会受到损害。即使在两种或多种降解途径需要不同条件才能实现最大热力学稳定性的情况下，干燥产品中反应速率的降低也可以实现长期的稳定性。因此，一般来说，当配方前研究表明在液体配方中不能获得足够的蛋白稳定性时，冷冻干燥提供了颇有吸引力的替代方案。冻干蛋白配方可能遇到的问题然而，相对水针剂产品，只需要简单灌装即可来说，冻干过程较为复杂，且耗时、成本高，再有，一个十分关心的问题，如果配方中没有合适的稳定赋形剂，大多数蛋白制剂在冻干的过程中至少部分会因冻结应力和脱水应力而变性，结果通常是不可逆的聚合，通常是在冻结之后立即聚合或在储存过程中，小部分蛋白分子发生聚合。因为大多数的蛋白药物是非肠道给药，即使只有百分之几的蛋白聚合也是不可以接受的。因此，只是简单的设计一个配方，允许蛋白能承受冻干过程中的应力，但是无法确保冻干后的样品能有长期的稳定性。一个较差的冻干配方，蛋白很容易发生反应，须要求在零度以下储存，这样的配方应当认为是不成功的。本文将提供一些实践的指导，用于配方的设计，可以在冻结和干燥过程中保护蛋白，并且在室温条件下长期储存和运输过程中具有很好的稳定性。再有，会简要地讨论，配方设计须考虑到工艺条件的物理限制，已获得最终低水分含量的良好蛋糕。我们将不讨论冻干工艺的设计和优化，也不会偏离关于赋形剂选择的实用建议，以解决关于这些化合物稳定蛋白质的机制的争论。有丰富经验的药物科学家可能跟这篇文章的内容也没有很大的关系，但是可以将蛋白药物产品推向市场，然而，我们的目标主要是针对对于稳定的冻干蛋白配方设计还不太了解以及具有很大挑战的那些研发人员提供一个很好的开始。 配方设计的主要制约因素有哪些？当合理设计冻干配方时，需要考虑的因素很多，从整体来看，工作会比较复杂，但如果能很好的理解决定最终成功的主要限制因素，那么就会容易很多。01蛋白的稳定性首先记住蛋白产品选择冻干方法的主要原因是其不稳定性，整个配方中最敏感的成分也是蛋白质，那么在配方设计中首要关心的是赋形剂的选择，能够提供蛋白好的稳定性。02最终药物配置在配方研发开始之前，须确定好最终药物的配置，需要考虑的问题包括给药途径（常为非肠道给药），共同给药的其他物质，产品体积，蛋白浓度，冻干盛装容器（西林瓶、预充针或其它）等，如果最终药物需要多次使用，在配方中需要加入防腐剂，这个可能会降低蛋白的稳定性。03配方张力在选择赋形剂时，可能会考虑设计等张溶液，甘露醇和甘氨酸通常是良好的张力调节剂，这些赋形剂经常优于NaCl,因为NaCl具有较低的共晶融化温度和玻璃态转变温度，使得冻干更难进行。另外，如果样品中含有相对低的蛋白量，经常会加入填充剂，避免在冻干的过程中蛋白损失，甘露醇和甘氨酸同时也可以充当这个角色，因为他们会最大程度的结晶并且形成机械强度较高的蛋糕结构。然而，须意识到单独使用晶体类的赋形剂通常不能够在冻干过程和储存期间给蛋白提供足够的稳定性。04产品的蛋糕结构最终冻干的样品须具有优雅的外观结构，较强的机械强度并且没有出现任何塌陷和/或共晶融化，水分残留要相对较低（1g水/100g 干物质），如果产品发生塌陷，不仅外观不能接受，而且会导致样品最终的水分含量较高，复水时间延长。05产品玻璃化转变温度为了确保干燥后蛋白具有长期稳定性，非晶态成分（包含蛋白）的玻璃转化温度要高于计划的储存温度。水是无定形相的增塑剂，需要保持较低的水分含量确保样品的Tg 要高于运输和储存的最高温度。06产品塌陷温度一般来说，达到最终的目标，在整个冻干过程中，需要维持产品温度在其玻璃转化温度以下。在干燥过程中，当冰晶升华时，对于非晶态样品，产品温度须维持在其塌陷温度以下，塌陷温度通常与热致相变温度（也就是最大冻结浓缩无定形相的玻璃态转变温度Tg’）一致，同时，也有必要维持产品温度在任何晶体成分的共晶融化温度以下。在实际中，这些温度可以通过差示扫描量热仪DSC或冻干显微镜来测定。在配方开发中有必要测定产品的塌陷温度。 冻干显微镜Lyostat5及搭配使用的DSC模块为什么要测定塌陷温度？在低于产品的塌陷温度下干燥是需要付出代价的，产品的温度越低，干燥的速度越慢，干燥的成本就越高。通常，在-40℃以下干燥是不实际的，同时样品能降低到的温度还受一些物理条件的限制，比如冻干机的性能以及产品的配方。在配方开发过程中，药物研发人员应该与工艺工程师（设计冻干工艺人员）紧密配合，并且清楚了解放大化生产型冻干机与实验室研发冻干机的区别是非常重要的，通常情况下，生产型冻干机和实验室冻干机在工艺参数控制方面会有所不同，一部分原因是生产型冻干机较大，在冻干过程中每瓶样品的产品温度差异较大。因此，如果对冻干过程熟悉的研发人员可以提供有用的信息帮助配方科学家做出正确的判断，避免由于误判导致将较好的配方排除在外。对于塌陷温度较低的产品，也有一些方法，如可以通过控制过程参数来实现短时快速干燥。配方设计需平衡蛋白稳定性和塌陷温度很明显，配方设计的一个目标是保证蛋白稳定性的前提下提供较高的塌陷温度，产品的塌陷温度主要取决于配方的组成，如果蛋白的含量超过所有溶质的20%，会对Tg’有较大的的影响。尽管单纯的蛋白溶液通常用DSC很难测出Tg’，根据实验得出，增加蛋白含量，对于大多数的配方来说，均可以提高Tg’。通过外推法得到纯的蛋白溶液的Tg’，大约为-10℃，远远高于大多数的单一赋形剂的Tg’(如蔗糖的Tg’为-32℃)，因此，从工艺过程的经济角度考虑，更期望配方中较高的蛋白质和稳定剂比例，然而，蛋白的稳定性通常随着稳定剂与蛋白含量比例的增加而提高，因此须在高的塌陷温度和较好的稳定性方面做出平衡。并且，如下文讨论的内容，随着蛋白浓度的增加，蛋白质在预冻过程中抵抗冻结应力损伤的能力就会得到改善，那么在高蛋白浓度和高稳定剂和蛋白重量比的情况下，稳定性是最好的，这样，就会导致整个配方较高的固形物浓度，给工艺带来困难，总浓度超过10%的配方将比较难冻干。如何改变Tg'？在升华之前对配方进行一些处理可以改变Tg’，如经常使用的退火处理，在退火处理过程中，会从无定形相中移走一小部分成分，如使用甘氨酸作为晶体的填充剂，取决于预冻的方法，可能一部分的甘氨酸分子会保留在样品的无定形相中，甘氨酸具有相对较低的Tg’(-42℃)，因此让甘氨酸尽可能的结晶是非常重要的，这样可以提高样品中无定形相的Tg’，加快干燥，节省成本。对于赋形剂结晶，设计理想完善的方案，可以用DSC模仿冻结和退火工艺的条件来进行，这个方法可以参考Carpenter 和 Chang的文章内容。 在哪些步骤蛋白需要维持稳定性？实际上，从灌装到最终干燥的产品复水，每一步均会对蛋白造成损伤，并且要求配方的成分能够抑制蛋白的降解。在快速处理步骤（如灌装，预冻，干燥和复水等）中，主要的问题通常是物理损害，如低聚物的形成和/或蛋白沉淀；通常，蛋白从液体到固体的转变，相对与减缓化学变化，更多的会减缓蛋白的物理变化的速率，因此，储存过程中的化学降解经常是更严重的稳定性问题。在储存期间或复水时，蛋白也会发生聚合。在预冻和干燥过程中，受到冻结和干燥应力的作用，蛋白的结构很容易遭到破坏，如果在这些过程中，能够抑制蛋白去折叠（变性），那么降解过程就会达到最小化，因此，配方设计主要的关注点就是在这些过程中能够保护蛋白，在干燥后的样品中具有较高的Tg及较低的含水量，能阻止样品内部发生化学反应，更好的保持蛋白的天然性能。01在预冻过程中的蛋白的稳定性特定的蛋白是否易受冷冻破坏的影响取决于许多因素，除了在配方中包含适当的稳定剂外。一般来说，会考虑三个很重要的参数：蛋白浓度，缓冲液的种类以及预冻方法。蛋白浓度增加蛋白质的浓度能够提高蛋白对冻结变性的抵抗力，可以通过简单地测定冻融后蛋白聚合的百分比，该百分比与蛋白质浓度呈反比。通常，如果预冻过程中去折叠的蛋白分子部分与浓度无关，那么预计增加蛋白浓度会增加蛋白聚合。然而，现在人们认为，增加蛋白质浓度会直接减少冷冻诱导的蛋白质去折叠。据推测，冻结阶段的损伤包括蛋白在冰水界面的变性，假设只有有限数量的蛋白分子在这个界面变性，增加蛋白的初始浓度会导致较低比例的变性蛋白。处于实际的目的，将蛋白浓度作为一个重要的考虑因素，在配方开发过程中尽可能保持较高的浓度，就显得特别简单了。缓冲液种类缓冲液的选择也是非常关键，主要引起问题的是磷酸钠和磷酸钾，在预冻和退火过程中，二者的pH值会有明显的变化。对于磷酸钠，其二元碱形式的容易结晶，导致在冷冻样品中，剩余的无定形相中的pH会降到4或更低。对于磷酸钾，其二氢盐结晶后，pH会变到接近9. pH改变的风险以及对蛋白的损害可以通过提高最初的冷却速度，限制退火步骤的时间，降低缓冲液的浓度等来控制，所有这些措施可以降低盐类结晶的机会。快速冷冻，不进行退火也限制了蛋白质在暴露在冷冻状态下的时间。尽管其他的赋形剂能够辅助抑制pH的改变，较好的方法是避免使用磷酸钠和磷酸钾。在预冻阶段pH有较小变化的缓冲液包括柠檬酸盐，组氨酸，Tris溶液等。预冻方法排除由于pH变化造成的问题，在实验中发现，预冻过程中，蛋白质受破坏的程度跟冷却的速率有关系，较快的冷却速度形成的冰晶体较小，冰的比表面积越大，受破坏的程度越大，这个推测是由于蛋白在冰水界面变性导致。冷却的速度通常受冻干机设备本身性能的限制，然而，一些对冷冻敏感的蛋白，即使慢速冷却也会导致其变性。02、在干燥和储存过程中蛋白的稳定性尽管整个蛋白分子在预冻过程中保持了其原有的结构，然而，在后续的脱水干燥过程中如果不加入合适的稳定剂也会面临变性的风险。简单的说，当去除蛋白分子的水合外层时，蛋白质天然的结构便遭到破坏。对多个蛋白的红外光谱研究表明：无合适的稳定剂存在时，在干燥的蛋白样品中，其结构将会遭到去折叠。如果样品迅速复水，损伤的程度（如，聚合百分比）与干燥蛋白质的红外光谱的非天然表现直接相关。因此，降低复水后结构的破坏需要减小预冻和主干燥过程中蛋白结构的去折叠。而且，即使样品立即复水后100%的天然蛋白分子被恢复，干燥的固体中也会有相当一部分去折叠的分子。在复水过程中分子内的再折叠可以主导分子间的相互作用，从而导致聚集，在复水后表现为100%的天然分子。适当的赋形剂可以阻止或至少减轻蛋白结构的去折叠，配方是否成功可以通过红外光谱检查干燥后蛋白的二级结构来立即判断，更重要的是，发表的一些研究显示，干燥样品的长期稳定性取决于干燥过程中天然蛋白的保留量，如果干燥后的蛋白样品存在结构上的去折叠，即使样品在低于其Tg温度以下储存，蛋白也会很快被破坏，因此，红外光谱法可作为蛋白配方的另外一种工具，研发人员可以在冻干后对样品进行检测，确定其结构是否遭到破坏。欢迎先关注我们，下一期内容将继续为大家带来“实用建议：如何合理设计稳定的冻干蛋白配方（二）”，详细分享：蛋白样品冻干的首选赋形剂有哪些、基于成功蛋白冻干配方会导致最终失败的一些细节问题等。莱奥德创冻干技术分享关注“莱奥德创冻干工场“，立即获取冻干线上技术分享内容。基于对于冻干研发的一些考量，莱奥德创创建了金字塔冻干技术分享平台：包含了从冻干理论基础，到配方和工艺开发，再到放大及生产，以及进阶的设备管理和线上线下专题内容分享。内容结合了来自Biopharma的冻干理论指导体系、来自于莱奥德创产品经理及应用工程师的实践经验总结及国内外专家的专题内容。获取方式Step 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冻干设备租赁服务。400-006-9696www.lyoinnovation.com莱奥德创冻干工场中国(上海)自由贸易试验区富特南路215号自贸壹号生命科技产业园4号楼1单元1层1002室德祥科技德祥科技有限公司成立于1992年，总部位于中国香港特别行政区，分别在越南、广州、上海、北京设立分公司。主要服务于大中华区和亚太地区——在亚太地区有27个办事处和销售网点，5个维修中心和2个样机实验室。30多年来，德祥一直深耕于科学仪器行业，主营产品有实验室分析仪器、工业检测仪器及过程控制设备，致力于为新老客户提供更完善的解决方案。公司业务包含仪器代理，维修售后，实验室咨询与规划，CRO冻干工艺开发服务以及自主产品研发、生产、销售、售后。与高校、科研院所、政府机构、检验机构及知名企业保持密切合作，服务客户覆盖制药、医疗、商业实验室、工业、环保、石化、食品饮料和电子等各个行业及领域。2009至2021年间，德祥先后荣获了“最具影响力经销商”、“年度最佳代理商“、”年度最高销售奖“等殊荣。我们始终秉承诚信经营的理念，致力于成为优秀的科学仪器供应商，为此我们从未停止前进的脚步。我们始终相信，每一天都在使这个世界变得更美好！

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p　　2020年开年，一场突如其来的新冠病毒疫情肆虐中华大地，全国人民迎来抗疫战斗的特殊时期，除奋战在一线的医务工作者、政府相关职能部门人员之外，各行各业也纷纷承担起社会责任，为抗击疫情贡献力量，科学仪器行业也是其中的重要一员。上海和泰仪器有限公司（以下简称：和泰）虽然只是一家国产仪器行业的小企业，既不能像医务人员或相关政府职能部门人员一样冲在抗疫第一线，也没有直接生产抗疫物资和设备，但仍然本着一份“大企业大担当、小企业小责任“的理念，为与科学仪器行业紧密相关的，日以继夜奋斗在抗疫一线的各级政府疾病控制中心用户们提供力所能及的帮助与服务。/pp　　实验室纯水系统作为便捷的实验室纯水供应设备，几乎是每个分析测试实验室必不可少的仪器设备。就常规的实验室通用设备而言，只要产品质量过硬，用个十年八年都不需要服务。而实验室纯水系统则不一样，即使产品做的再好，也需要定期的维护、保养，及耗材配件的更换等。因此，技术支持和服务对于实验室纯水系统的用户来说非常重要且必不可少。和泰作为一家国产实验室纯水系统供应商，早在抗疫伊始的大年初七（1月31日），就发起了携手抗议的倡议，联合和泰各级代理商，以及各地的技术服务中心，对购买过和泰HHitech及泽拉布The lab实验室纯水系统的全国200多个各级疾控中心客户，实行在2020年度内享受免费维修与保养的服务，践行和泰所秉持的“大企业大担当、小企业小责任“的理念。/pp style="text-align: center "img style="max-width: 100% max-height: 100% width: 600px height: 361px " src="https://img1.17img.cn/17img/images/202006/uepic/b72d26c0-dc95-41ac-8306-85044e769f14.jpg" title="1.png" alt="1.png" width="600" height="361" border="0" vspace="0"//pp style="text-align: center "strong图：和泰工程师为各级疾控中心用户提供免费维保服务/strong/pp　　和泰所提供的免费维保服务具体可以概括为“三免”，即免费维修，免费保养，免费更换耗材，由和泰技术服务部门与全国各省，市，自治区，直辖市的和泰服务中心提供，服务对象为全国已经购买或2020年即将购买和泰实验室纯水系统的各疾病预防控制中心用户。迄今为止，和泰已先后为察哈尔右翼后旗疾病预防控制中心、东莞疾控、阜康市疾病预防控制中心、广东省佛山市顺德区疾病预防控制中心、广西南宁市隆安县疫控中心、湖南祁东疾控、吉林省白城市镇赉县疾病预防控制中心、茂名市疾病预防控制中心、内蒙古赤峰市巴林右旗疾病预防控制中心、内蒙古乌兰察布市兴和县疾病预防控制中心、怒江州疾病预防控制中心、平湖市疾病预防控制中心、太原市晋源区疾控中心、太原市小店区疾控中心、乌鲁木齐市疾病预防控制中心、阳曲县疾病预防控制中心、黟县疾控中心等多家疾控中心客户提供了免费耗材或上门维保服务，大家对和泰所提供的全年免费维保服务给予了充分的肯定与表扬，认为和泰作为小企业，在疫情期间能拿出及时优质的服务与真金白银的产品回馈客户，分担了他们的压力，解决了他们在使用仪器时的后顾之忧，为抗疫后端贡献了自己独有的一份力量。/pp　　除了给奋战在抗疫一线的各级疾控中心用户提供免费维保服务之外，和泰也为特殊时期受疫情影响的广大实验室用户们提供了“用心守护，为爱延保“的延保服务，即在2020年1月24日（含）至3月31日（含）期间，保修期到期的HHitech和泰及The lab泽拉布全线实验室纯水产品，统一将保修期延长至3月31日；若购买的延保服务在2020年1月24日（含）至3月31日（含）期间过期，保修期同样将延长至2020年3月31日；如果纯水系统需要返厂维修，可选择快递员上门取件，维修后的产品均会全面清洁处理后返还，双向邮费全面。/pp　　通过“携手抗疫“的倡导和 ”为爱延保“的服务，和泰尽自己最大力量消除了疫情对和泰实验室纯水系统保修期的影响，解决了用户的后顾之忧，积极助力抗疫，践行了众多中国企业在特殊时期的社会担当。/pp　　除了特殊时期的特殊担当之外，其实和泰一直都在默默地为广大客户提供着专业且优质的服务。自2017年起，HHitech和泰-技术服务部就以“用心坚持专业，致力服务用户”为理念，策划并开展了“全国终端用户巡访活动“。该活动主要针对已售出的和泰纯水产品，进行免费的系统检测、故障维修、保养服务、优化升级以及实验室纯水使用知识的培训。巡访过程中，和泰始终以”客户满意“为行动纲领，用心倾听用户的意见与建议，积极响应用户的应用需求，解决纯水系统在实际使用中的问题。/pp style="text-align: center "img style="max-width: 100% max-height: 100% width: 450px height: 450px " src="https://img1.17img.cn/17img/images/202006/uepic/5f16e19a-a5cc-450e-9b27-f8b53e3cb7e6.jpg" title="2.png" alt="2.png" width="450" height="450" border="0" vspace="0"//pp style="text-align: center "strong图：和泰用户巡访活动精彩回顾/strong/pp　　自2017年以来的三年多时间，和泰已经走访了全国21个省（自治区/直辖市），2020年上半年受疫情影响，和泰的用户巡访活动暂时告停。随着全国疫情形势的逐渐好转，预计从7月份起，和泰将继续推进“全国终端用户巡访活动“，并在一些用户较为集中的地区陆续举办产品技术交流会，致力于继续为广大实验室用户带来至臻完美的服务。/pp　　strong相关专题：/stronga href="https://www.instrument.com.cn/zt/hhitech" target="_blank" style="color: rgb(0, 112, 192) text-decoration: underline "span style="color: rgb(0, 112, 192) "strong相伴共成长 和泰全国行——和泰全国终端用户巡访活动/strong/span/a/pp　　strongHHitech和泰：/strong中国知名纯水系统制造商，“2017年度科学仪器行业最受关注仪器“，连续2届”国产好仪器“获得者，自成立以来，秉承“您的需要，我们创造-Create for your need ”的理念，“专业、稳健、进取、创新” 的精神，一直专注于实验室、医疗、工业超纯水产品的革新与发展，致力于为实验室、医疗、工业客户提供专业而全面的纯水系统解决方案。/p

共同战疫 2020年 免疫球蛋白含量快速测定安东帕Abbemat系列全自动折光仪 随着新型冠状病毒感染的肺炎确诊越来越多，医疗物资需求也越来越大，其中，静注人免疫球蛋白是目前防控新冠状病毒感染肺炎的重要药品之一。人免疫球蛋白人免疫球蛋白是取健康献血员的新鲜血浆或保存期不超过2年的冰冻血浆，每批最少应由1000名以上健康献血员的血浆混合。用低温乙醇蛋白分离法分段沉淀提取免疫球蛋白组分，经超滤或冷冻干燥脱醇、浓缩和灭活病毒处理等工序制得，其免疫球蛋白纯度应不低于90%。然后配制成蛋白浓度为10%的溶液，加适量稳定剂，除菌滤过，无菌灌装制成。人免疫球蛋白作为重要的医疗用品，选择合适的含量检测方法具有重大意义。目前，中国药典明确规定人血浆中蛋白可采用折射仪法进行测定。折光率作为物质浓度和纯度的表征，可用于物质含量的测定。将折光仪用于免疫球蛋白含量的测定，不但操作简单，其快速、准确的优势，可帮助制药企业节约大量时间成本，这在需要大量生产与检测免疫球蛋白的特殊时期，尤为关键！

导读抑郁症是一种独立的情绪障碍性精神疾病，主要表现为情绪低落，对周围事物缺乏兴趣，自我评价呈负面性，容易产生一些不良的情绪，甚至轻生行为。据不完全统计,目前我国抑郁症发病率高达5%～6%，近年来呈上升趋势。随着抗抑郁症新药品种的日益增多，临床治疗的用药难度和复杂性也随之增加。为完善抑郁症规范化治疗，实现用药剂量个体化，提高疗效，防止药物中毒，抗抑郁药血药浓度监测的临床应用也日益广泛，通过药物浓度监测可以了解患者的服药依从性以及药物间的相互作用，有助于确定合并用药原则，让高发且难以根治的抑郁症治疗更精准化和规范化。 抑郁症已悄然侵入你我的生活《中国国民心理健康发展报告（2019-2020）》显示，18至34岁青年是成人中最焦虑的群体，我国青少年抑郁检出率为24.6%，其中重度抑郁为7.4%；2021年教育部对政协《关于进一步落实青少年抑郁症防治措施的提案》进行了答复，其中明确将抑郁症筛查纳入学生健康体检内容，建立学生心理健康档案，评估学生心理健康状况，对测评结果异常的学生给予重点关注。 临床治疗用药的难度和复杂性药物治疗是当前抑郁障碍（抑郁症）治疗最主要的、也是最行之有效的方式之一（有效率约60%~80%-数据来源于《中国抑郁障碍防治指南》）。抗抑郁药物治疗中非常重要的一项原则是：因人而异的个体化用药，即全面考虑患者症状特点、年龄、身体状况、药物耐受性、有无并发症等。此外，由于抑郁障碍（抑郁症）病因相对复杂，临床治疗常伴随药量增减、停药、换药、药物相互作用等情况，因此，临床治疗用药的难度和复杂性也随之增加。 岛津方案助力临床33种常见抗抑郁药物TDM检测由于LC-MS/MS检测法的先天优势，其出色的抗干扰能力、高灵敏度以及一针进样多重分析能力，使其在治疗药物浓度监测应用中广受青睐。为满足抗抑郁药物检测的广谱性需求，岛津公司提供33种抗抑郁药物联合检测方案，单次进样分析4分钟就可以实现33种常见抗抑郁药物检测，该方法分析速度快，覆盖范围广，定量范围宽，前处理简洁明了，符合临床要求，大幅提高TDM效率及检测通量。 l 分析性能满足临床检测要求采用同位素内标蛋白沉淀法提取人血清中33种抗抑郁药物，通过LC-MS/MS内标法定量分析。2 μL进样量下即可满足33种抗抑郁药LOD 0.02~8 μg/L，各化合物线性相关系数r0.9990，质控品准确度在86%~111%内，精密度RSD(n=6)在0.9%~2.9%内，分析性能均满足临床检测要求。 图1. 33种抗抑郁药物LCMSMS色谱图 表1. 抗抑郁药物血清基质校准品和质控品分析性能 l Shim-pack GIST C18色谱柱，惰性硅胶填料，pH范围1-10，极性化合物保留更好！治疗抗抑郁症的药物多为碱性化合物，结构上具有极性基团，得益于GIST系列的高惰性硅胶基质，使得Shim-pack GIST C18能耐受1-10的pH范围，对极性化合物有更好的保留性能，可以用于分离离子型化合物而不易引起柱吸附，键合相采用封尾技术，有效改善碱性化合物的拖尾效应，提高色谱峰重现性。 8类典型抗抑郁药物LLOQ色谱图（流动相A：0.1%甲酸水 流动相B：甲醇/乙腈=1/1, v/v） 结语岛津抗抑郁症治疗药物监测方案覆盖33种抗抑郁药，由繁化简，解决传统检测方法分析时限长、抗干扰能力弱、灵敏度不佳等问题，助推精神科疾病精准医疗。我们号召社会大众关爱和守护抑郁症人群，把更多的温暖和关心给抑郁症患者，让抑郁症患者尽快摆脱疾病，拥抱欢乐多彩的人生。 文中推荐技术方法方案仅用于医学等相关专业人士技术交流，不作为临床诊断依据。

p style="text-indent: 2em text-align: justify "strong仪器信息网讯 /strong2月14日，中国生物集团宣布，从已经治愈的新冠病毒康复者血液中提取了抗体，成功制备出特免血浆，可有效改善患者的临床症状。/pp style="text-align:center"img style="max-width:100% max-height:100% " src="https://img1.17img.cn/17img/images/202002/uepic/dea3fc43-3bbe-4a29-bd37-914666374f14.jpg" title="1.png" alt="1.png"//pp style="text-indent: 2em text-align: justify "据悉，2月8日，以新型冠状病毒感染的肺炎诊疗方案（试行第五版）为指南，首期在江夏区第一人民医院开展了3名危重患者的新冠特免血浆治疗，目前连同后续医院治疗的危重病人超过了10人。临床反映，患者接受治疗12至24小时后，实验室检测主要炎症指标明显下降！淋巴细胞比例上升，血氧饱和度、病毒载量等重点指标全面向好。/pp style="text-indent: 2em text-align: justify "中国生物方面集团方面称在疫苗和特效治疗药物尚未完全研制成功的情况下，才用这种特免血浆制品可大幅降低危重患者病死率，是目前最为有效的方法之一。/pp style="text-indent: 2em text-align: justify "据仪器信息网了解，这一由中国生物承接研发的项目是科技部组织制定的“公共安全风险防控与应急技术装备”重点专项之一，项目全名为“2019-nCoV感染恢复期患者特异血浆和特异免疫球蛋白制备”项目。项目成果——span style="text-indent: 2em "新冠特免血浆制品是由康复者捐献的含高效价新冠病毒特异性抗体的血浆，经过病毒灭活处理，并对抗新冠病毒中和抗体、多重病原微生物检测后制备而成，用于新冠肺炎危重患者的治疗。/span/pp style="text-indent: 2em text-align: justify "/p

p　　摘 要：随着抗体药物上游大规模高效培养技术的飞速发展，抗体蛋白的表达浓度有了大幅度的提高，这给下游纯化工艺带来了巨大的压力。为了突破下游技术瓶颈，整个世界生物制药产业都加大了对下游技术的革新力度，近年来也取得了丰硕的成果。本文就抗体药物的纯化策略、最新技术进展以及技术应用等方面做一个调研，以期能对本部门的相关研究工作有所助益。/pp　　关键词：抗体 下游工艺 纯化 技术进展/pp　　自1997年来，全球抗体药物市场经历了一个快速发展的阶段，总销售额从1997年的3.1亿美元增长到2008年的400亿美元，复合增长率高达55%，而且增长势头还在持续 [1]。国际上通常把年销售额超过10 亿美元的品牌药称为“重磅炸弹”药物，很大一部分抗体药物都已迈入“重磅炸弹”行列。在2008年全球15大药品中，抗体药物占据了1/3，且排名仍在上升，这意味着几乎每种单抗药物的成功开发都代表着巨大的市场前景[2]。受益于此，全球主要的生物制药公司都获利颇丰，可见抗体药物具有巨大的经济价值和社会价值。/pp　　抗体药物生产技术门槛高，需要掌握抗体筛选、抗体重组、高表达细胞株构建和大规模悬浮培养等核心技术，其下游关键技术是长期以来的薄弱之处。哺乳动物细胞表达系统具有活性高、稳定性好等优点，已成为抗体等生物制品最重要的系统之一，为抗体药物的产业化提供可能。目前，国际上该项技术发展较快，已趋成熟，以默克公司为代表的流加培养生产规模达10000L以上，以贝尔公司为代表的灌流培养生产规模达200L以上，蛋白表达浓度为1-10g/L。我国在该技术领域起步较晚，基础较差，但近年来经过努力，已经实现了该项技术的突破，流加培养规模达500L以上，灌流培养规模达100L以上，蛋白表达浓度为0.2-2g/L[2]。/pp　　随着动物细胞表达抗体产品大规模高效培养技术的快速发展，下游纯化工艺越来越成为抗体药物生产中主要的技术瓶颈[3]。因此，如何提高下游工艺的生产效率就成为了抗体药物研发必须解决的问题。本文就国际上高表达抗体蛋白下游工艺的研究进展做一个调研，使本人及同事们能了解国际上的研究成果和发展趋势，以期能对本部门的相关研究工作有所助益。/pp　　1. 抗体药物纯化策略/pp　　每个单抗的等电点、电荷密度、疏水性、糖基化程度等生化性质各不相同。选择单抗的纯化方法，既要了解它们的共性，又要了解它们的个性，从而制定相应的纯化策略(表1)。/pp　　1.1 抗体药物下游工艺一般策略/pp　　CHO和NSO等哺乳动物细胞表达系统主要用来生产治疗性单抗，临床剂量大(数十至几百毫克/dose)，批产量达公斤级，纯度要求极高。层析技术是抗体分离纯化的核心技术，一般采用经典的三步纯化策略：粗纯-中间纯化-精细纯化。粗纯的主要目的是捕获、浓缩和稳定样品，约80%的下游工艺用Protein A亲和层析进行快速捕获，一步即可达到95%以上的纯度。治疗用抗体一般使用动物细胞大规模高密度无血清悬浮培养进行生产，不仅对终产品的单体含量有严格的规定，还必须去除各种潜在的杂质以满足药品安全的要求，因此在粗纯之后还需要进行中间纯化和精细纯化，去除宿主细胞蛋白(HCP)、宿主DNA、抗体聚集体和变体等，常用的层析技术有离子交换、凝胶过滤、疏水层析等[4]。/pp　　2003 年初，中国SFDA下属的中国药品与生物制品检定所(NICPBP)公布了《人用单克隆抗体质量控制技术指导原则》[5]。生产者除须保证最终抗体产品纯度，还需要验证所用的纯化方法能有效对潜在的污染物，如HCP、免疫球蛋白、宿主DNA、用于生产腹水抗体的刺激物、内毒素、培养液成分、层析凝胶析出成分(脱落的Protein A配基)进行去除 并能有效的去除/灭活病毒。也就是说，在设计下游工艺时，需多角度综合考虑抗体本身的性质、抗体的来源、发酵培养技术、发酵液蛋白浓度、宿主杂质、抗体批间的差异、潜在污染及病毒灭活等问题。此外，治疗用抗体在生产和纯化过程中还会由于糖基化程度不同、蛋白酶作用、以及脱氨基和脱酰胺等反应而产生带电性质不同的多种抗体变体 另外，抗体氧化、聚集和片段化也是常见的降解途径[4]。针对这些变体，一方面，在表达和纯化过程中选择参数(如pH、盐浓度等)时要充分考虑到目标抗体的稳定性 另一方面，应控制细胞培养的条件(DO、渗透压等)，同时加快下游分离纯化的速度，最大程度上避免抗体在纯化过程中产生变体，从而保证终产品的均一性和高的比活，也有利于控制终产品的内毒素水平。/pp style="text-align: center "span style="font-size: 14px "　　表1 单抗特性及纯化策略/span/pp style="text-align: center "img title="11111.png" style="float: none " src="http://img1.17img.cn/17img/images/201808/insimg/e2693d21-e711-4b42-bb9c-53b5b7848f82.jpg"//pp style="text-align: center "img title="2222.png" style="float: none " src="http://img1.17img.cn/17img/images/201808/insimg/5035b8d3-81f1-4e6b-96d7-3e12b347a344.jpg"//pp　　1.2 新型的两步层析技术与纯化工艺整合/pp　　近年来，GE Healthcare公司开发出了新型的亲和捕获介质Mabselect SuRe和混合作用模式的强阴离子交换介质Capto adhere(这两种介质的主要特点将在下文详细介绍)。凭借着MabSelect SuRe的卓越性能以及Capto adhere的复合多除杂功能，使得抗体纯化工艺由经典的三步层析转变为两步层析得以实现。这种新型的两步层析技术的工艺流程是：在细胞培养表达以后，采用0.2-0.45μm的中空纤维膜技术进行澄清，然后用MabSelect SuRe捕获，酸性条件洗脱后直接pH 4.0 病毒灭活，澄清过滤后穿透方式上Capto adhere，这一步离子交换之前或之后会有一步20nm纳滤去病毒，最后50K膜超滤浓缩和洗滤进行缓冲液置换。整个工艺如图1,这一工艺平台已经尝试过多个不同的抗体并取得成功(表2),同时很多实验表明这一工艺平台适合多数抗体的生产。有些抗体如果通过优化结果不甚满意, 通过增加一步Capto Q也基本上可以达到要求或是采用Capto S-Capto Q(这两种介质的主要特点将在下文详细介绍)的工艺步骤[4]。/pp style="text-align: center "　img width="450" height="374" title="1.jpg" style="width: 435px height: 258px " src="http://img1.17img.cn/17img/images/201808/insimg/401b7d6a-ad5b-4c9a-9eee-2376ebef51fa.jpg"//pp style="text-align: center "　span style="font-size: 14px "图1　抗体生产两步层析法主导的抗体纯化最新工艺[6]/span/pp　　Mabselect SuRe可以达到99%以上的抗体纯度，亲和洗脱峰使用Capto adhere的流穿模式进行精纯：使抗体分子流穿而聚合体、HCP、脱落的Protein A配基等杂质结合在柱上加以去除。这样仅用两步层析就可以得到符合药用级质量要求的高纯度抗体产品，大大缩短了工艺时间，提高了生产效率，同时增加了收率，降低了生产成本。/pp style="text-align: center "img width="599" height="164" title="2.jpg" style="width: 580px height: 159px " src="http://img1.17img.cn/17img/images/201808/insimg/ce7191a4-3940-4315-8122-856bbbadbc24.jpg"//pp style="text-align: center "　　span style="font-size: 14px "表2 两步法用于多种抗体的纯化结果(括号内数值为纯化前)[4]/span/pp　　2. 抗体药物下游技术最新研究进展/pp　　2.1 样品澄清/pp　　2.1.1 中空纤维膜过滤技术/pp　　中空纤维膜是近年来发展起来的新型切向流膜分离技术,与盒式膜包相比,中空纤维膜可以直接处理高固含量和高黏度的粗料液,具有容尘量高、速度快、剪切力小、成本低等优点。目前,中空纤维微滤膜已经广泛用于生物制药的各个领域[7]。/pp　　对于动物细胞培养液,可以将高密度的培养液直接用中空纤维微滤膜(0.22或0.45μm)进行澄清,而无需事先经过离心和预过滤,步骤少,速度快,收率高,成本低。和离心机比较,具有极高的澄清度,因此中空纤维澄清后的细胞培养液可直接Protein A亲和层析进行纯化。/pp　　中空纤维膜澄清细胞培养液的优势有：(1)步骤少,速度快,收率更高(通过有效的洗滤可使样品收率稳定而且高于离心机)，同时最大程度上避免抗体降解而影响产品均一性。(2)成本低：不仅省去了连续流高速离心机昂贵的前期投资和运转的日常维护成本，还节省了离心后死端过滤的成本。中空纤维膜物理化学性质稳定，可以通过清洗而反复使用，成本低廉。(3)有利于内毒素控制：中空纤维膜稳定的化学性质可以耐受1M NaOH 40-50℃和氧化剂NaClO的清洗，从而有效去除内毒素 封闭的系统，也更有利于生产过程中内毒素的控制。此外，大部分中空纤维滤柱还可以进行高压灭菌。(4)低剪切力：中空纤维采用低剪切力的开放式流道，不仅可以处理含有高固含量的料液，还避免了蛋白质活性分子在高剪切力下的聚集变性，有利于抗体的稳定。(5)工艺耐用性强：相比死端过滤，中空纤维澄清具有很好的操作灵活性和耐用性，可以通过调整操作参数(流速、TMP)处理不同性质的细胞培养液。(6)易于线性放大：通过维持切向流速、TMP 等参数恒定，方便地进行线性放大，生产规模的处理量可达几千升料液，目前国内销售最大的中空纤维膜过滤系统已达400m2且生产稳定[8]。/pp　　2.1.2 深层过滤介质/pp　　深层过滤采用两种机制去除颗粒。首先是拦截，颗粒由于自身的物理尺寸在过滤器内被截留。它们可能被困在过滤器表面，因此根本没有进入基质，或在通过深层过滤基质的曲径时被俘获(筛选)。颗粒拦截伴随过滤器压差增高，因为它的基质被不断累积的颗粒堵塞。第二种机制是吸附，比过滤器拦截精度更小的颗粒能够从流体中被吸附去除。这种机制是通过深层过滤基质上的净电荷实现的[26]。/pp　　目前应用比较广泛的双层膜深层过滤介质有Millipore公司的Millistak+HC、Sartorius公司的Sartobran-P、Pall公司的Supradisc HP等。Millistak+HC深层过滤介质由纤维素和无机助滤剂(聚丙稀粘合的硅藻土)组成，包裹在聚丙烯外壳内 它由两层全厚度深层滤板(上游一层粗过滤和下游一层精细过滤)组成，附带一层RW01纤维素膜终过滤。Sartobran-P深层过滤介质由醋酸纤维素滤膜、聚丙烯外壳和支撑层组成，加强型的滤膜有良好的机械强度，有利于在反复的过滤和灭菌过程中保持完好无损 采用了折叠膜，在体积小巧的同时还保证了超大的过滤面积。Supradisc HP深层过滤介质由纤维素、硅藻土、带正电荷树脂和聚丙烯组成 也由两层全厚度深层滤板(上游一层粗过滤和下游一层精细过滤)组成。/pp　　2.2最新抗体捕获技术/pp　　2.2.1 MabSelect介质/pp　　MabSelect是第一个使用高流速琼脂糖凝胶作为骨架的新型Protein A层析介质，专为大规模抗体纯化而设计，适合快速高效的进行抗体生产和放大，已经成为单抗纯化和放大的标准介质。/pp　　MabSelect的特点有：(1)更高的流速和动态载量：Protein A经基因工程改造，C端含一个半胱氨酸，形成一个定向的硫酯键，同时增加了对IgG的有效结合。Protein A和凝胶偶联时采用了全新的单点偶联工艺，降低了空间位阻，因此可以在使用更高流速的条件下增加动态载量：在线形流速为500cm/hr和柱床高度为20cm(停留时间2.4min)的条件下，每毫升MabSelect的动态载量可以达到 30mg IgG。(2)更低的非特异性吸附，抗体纯度更高：Mabselect介质高度亲水性的琼脂糖骨架最大程度上降低了非特异性吸附，使得洗脱峰中杂蛋白和DNA更少，有利于后期抗体的精细纯化。著名的抗体生产商IDEC公司以及R.Hahn的研究显示，Mabselect对CHO细胞HCP的吸附比其它Protein A介质低7倍[9-10]。R.L.Fahrner等的研究显示，Mabselect所得抗体的DNA残留量比其它Protein A介质低30%[11]。(3)更低的Protein A脱落：MabSelect由于通过新型环氧共价交联技术，Protein A的脱落比其它同类介质低，这不仅有利于抗体纯化，还延长了介质的使用寿命，降低了生产成本。(4)更易于工艺的线性放大：通过实验室条件的优化，MabSelect 可以在保持线性流速和上样比例等参数不变的条件下，通过增加柱直径进行线性放大。(5)MabSelect 易于清洗与除菌，寿命更长、更经济：在长期连续的生产中，有效的在位清洗(CIP)有助于延长介质使用寿命，但一般的Protein A介质往往不能耐受NaOH，只能使用高浓度的尿素或盐酸胍进行清洗，效果远不如NaOH且成本非常高。而MabSelect的CIP和除菌程序简单，用很常规、经济的试剂如50mM NaOH+1M NaCl或50mM NaOH+0.5M Na2SO4就可以有效去除沉淀和变性物质 用非离子去污剂或酒精可以去除通过疏水作用结合的物质 用0.1M醋酸和20%酒精可以在位灭菌(SIP)。经测试，Mabselect配合CIP(50mMNaOH+1M NaCl)纯化三百次后，抗体产品纯度与收率不变[12]。/pp　　2.2.2 MabSelect Xtra介质/pp　　Mabselect Xtra介质是在Mabselect介质的基础上优化而来，是目前市场上所有的商品化Protein A介质中载量最高的亲和层析介质之一。它除了具有MabSelect介质的全部特点外，还具有载量最高和非特异性吸附更低的特点。/pp　　Mabselect Xtra介质使用孔径更大的多孔高流速琼脂糖作为骨架，同时减小介质粒径。这样不仅增加了比表面积和配基密度，还降低了传质阻力，从而有效的增加了动态载量。其动态载量超过41mg/ml，在工艺生产过程中可以有效减少层析柱的体积，从而降低生产成本。R.Hahn的研究显示，Mabselect Xtra对CHO细胞HCP的吸附比其它Protein A介质更是低了近10倍[13]。/pp　　2.2.3 MabSelect SuRe介质/pp　　MabSelect SuRe介质也是在Mabselect介质的基础上优化而来，是目前市场上唯一耐强碱的Protein A亲和层析介质，寿命最长，稳定性最好[10]。它除了具有MabSelect介质的全部特点外，还具有以下特点：(1)可以耐受0.1-0.5M NaOH：MabSelectSuRe具有不同于其它Protein A介质的同型四聚体配基-SuRe配基，即使在强碱条件下也不易变性或脱落，可以用高达0.5M NaOH进行CIP和SIP，能有效去除沉淀和变性物质，大大降低了抗体产品被内毒素污染和批间交叉污染的风险，有利于延长介质使用寿命，同时还大大降低了CIP和SIP的成本。(2)更温和的洗脱，避免抗体聚集，提高收率：同型四聚体配基避免了不同配基与抗体Fc段亲和性的差异，也消除了某些域对Fab段的亲和作用，使得洗脱条件更加均一而温和。Mabselect SuRe介质可以用更高的pH进行洗脱，有效避免了抗体在低pH下的聚集，产品纯度和均一性更高，浊度也更低[14]。(3)不同抗体洗脱所需pH差异小：由于消除了对抗体Fab段的亲和作用，使得同一种属亚型的不同抗体分子洗脱所需的条件更接近，有利于平台技术的建立，进一步降低了不同的抗体分离纯化工艺的研发成本。(4)SuRe 配基稳定性更好：SuRe配基对碱和蛋白酶更稳定，纯化过程中脱落更少( 10ppm)，有利于后期脱落配基的进一步去除。/pp　　2.2.4 ProSep-vA Ultra介质/pp　　ProSep-vA Ultra介质是将自然界非动物性来源的Protein A交联于700Å 的多孔性玻璃珠骨架上，是刚性和不可压缩的介质。ProSep-vA Ultra介质具有如下特点：低反压性 不收缩、不溶胀 高动态载量 极低的Protein A脱落 高重复使用性，标准化的清洗和除菌操作[27]。/pp　　2.2.5 ProSep Ultra Plus介质/pp　　ProSep Ultra Plus介质是在ProSep-vA Ultra介质基础上优化而来，也是目前市场上所有的商品化Protein A介质中载量最高的亲和层析介质之一。它除了具有ProSep-vA Ultra介质的全部特点外，还具有载量最高、纯化效率更高、工艺更易于放大、成本更低等特点[28]。/pp　　2.2.6 MEP Hypercel介质/pp　　MEP Hypercel复合作用模式介质是一种灵活的层析介质设计，也称之为疏水电荷诱导层析(HCIC)，用于捕获和纯化从实验室到生产规模的抗体和各种重组蛋白。MEP Hypercel介质由一个独特的连接4-巯基乙基吡啶(4-MEP)的刚性纤维素骨架组成。纤维素骨架赋予高孔隙率、化学稳定性和低非特异性吸附。平均直径80-100μm，在低反压下有优良的流速特性。MEP Hypercel介质在大规模使用时具有显著优势，基于它的配基结构，可选择性地捕获免疫球蛋白。组合其它传统的方法如离子交换、疏水作用，甚至用在Protein A之后从不同的料液中直接捕获或中度纯化抗体，以增强对宿主DNA、HCP和聚合体的清除。MEP Hypercel介质有助于建立一个简化的工艺流程，节省操作步骤(例如洗滤、超滤等) 预计有更长的使用寿命，因为它可以耐受苛刻的CIP方法(0.5-1M NaOH，30-60分钟接触时间)，而所有因素都有利于降低成本[29]。/pp　　2.3最新精细纯化技术/pp　　2.3.1 CaptoFamily系列介质/pp　　新型的Capto S，Q系列介质是以高流速琼脂糖为骨架，同时交联了非常“柔软”的葡聚糖链，这样不仅增加了比表面积，同时降低了传质阻力和空间位阻，使得介质在高流速下的动态载量大大增加，有利于提高生产效率，降低成本。/pp　　Capto S，Q系列介质可以装填在直径60cm的工业层析柱中使用高达500cm/h 的流速进行纯化(柱高30cm)。这样不仅有利于工艺放大后大规模层析柱的填装，还大大提高了生产效率，每步层析更短的操作时间也有效避免了抗体分子在分离纯化过程中产生各种变体和聚合体，使得收率更好，终产品的活性更高、性质更均一。/pp　　2.3.2 Captoadhere介质/pp　　为了进一步减少抗体分离纯化步骤，提高特定杂质的去除效率，以满足日益增长的治疗用抗体的生产需要，2007 年初，GE Healthcare公司推出了新型复合作用模式的强阴离子交换介质：Capto adhere介质。Capto adher介质专为治疗用抗体的分离纯化而设计，其配基综合了阴离子交换、氢键和疏水等多种复杂的作用方式，因此对于抗体的聚合体具有非常独特而高效的去除能力。此外，通过有效的实验设计(DoE)，流穿模式的Capto adher介质还可以同时有效去除脱落的Protein A配基、HCP、宿主DNA、内毒素和潜在的病毒，并使得结合MabSelect SuRe的抗体两步层析纯化工艺成为现实(表3)。Capto adhere还具有很强的病毒去除能力，如MVM病毒的去除能力可达5.9个Log。目前，新型的两步法抗体层析纯化工艺已经被国内外诸多知名药企广泛用于多种抗体的分离纯化，各项指标均符合治疗用抗体的要求。Capto adher层析还可以和阴离子交换(Capto Q)和疏水层析等结合使用，以达到更高的质量要求[15]。/pp style="text-align: center "　　img title="3.jpg" src="http://img1.17img.cn/17img/images/201808/insimg/4aa1c980-c9be-44e9-82b5-899ba9f7eec9.jpg"//pp style="text-align: center "span style="font-size: 14px "表3 两步层析纯化工艺对污染物的去除效果[15]/span/pp　　2.3.3膜层析技术/pp　　PALL Life Science公司自10余年前颠覆性地开发出独一无二的层析产品-Mustang膜层析系列产品后，经过不断地技术改造，于近年推出全新Mustang Q XT家族，扩展了膜层析工艺放大产品线。膜层析技术，相对于传统的柱层析，无需层析填料和层析柱等复杂构件，直接通过膜式过滤器，经过简单的过滤环节即可达到纯化目的。Mustang Q以16层超级打褶的聚醚砜过滤膜作为基架，上面偶联了季胺基等功能基团，可以使生物分子流经的时候与功能位点迅速结合，具有高流速和高动态载量等优点。/pp　　Sartorius Stedim公司也开发出了一整套膜层析技术，包括Sartobind S,Q,C和D离子交换、Sartobind IDA(亚氨基二乙酸)金属螯合、Sartobind醛、Sartobind环氧基和Sartobind Protein A(重组)等膜层析系列产品。Sartobind在很多蛋白和病毒纯化应用中可以取代传统耗时、繁琐的层析步骤。膜吸附器的快速纯化特点使蛋白分离可以在高流速下获得高收率，较传统柱层析流速最高能提高100倍，达到20-40 CV/min。传统颗粒胶95%以上的结合位点集中在颗粒胶内部。Sartobind膜层析的结合位点是均一地交联到交叉偶联的增强纤维素骨架内0.5-1μm厚的薄层上。大孔结构和快速吸附结合特性使膜吸附器可以忽略扩散时间因素。同时多微孔膜结构不存在传统颗粒胶的孔内扩散问题。在对流情况下，流动相的分子运动只由泵压力决定。因此，膜吸附器具有操作周期极短、流速和处理能力极高的特点[30]。/pp　　与离子交换柱层析相比，离子交换膜层析技术已经被证明利用高动态结合能力吸附大量的生物分子，如病毒、HCP和宿主DNA。最近，阴离子交换膜层析技术已经被作为柱层析技术的替代技术用于Protein A亲和捕获后的mAb中微量污染物的去除[16]。/pp　　2.4终产品的浓缩洗滤/pp　　多维纯化得到的洗脱峰可以用Kvick Lab/Process盒式膜包进行快速浓缩和缓冲液置换。Kvick盒式膜包的优点有：(1)无热原：很多时候，仅用0.5M NaOH 清洗难以彻底去除膜表面的热原。Kvick盒式膜包化学性质非常稳定，可以使用1M NaOH在40-50℃下进行彻底的SIP/CIP，避免最终超滤浓缩时引入热原而影响产品质量。(2)孔径均一、速度快：Kvick盒式膜包孔径更均一，甚至可以使用50-100K的膜包进行抗体浓缩而不漏过，速度更快，大大节省了操作时间。(3)易于线性放大：通过保持流速、TMP等参数恒定，可以直接线性放大到生产规模。/pp　　Amicon Ultra系列超滤离心管可以用来进行抗体的快速浓缩、脱盐及缓冲液置换。它具有如下特点：(1)效率高：一步法离心达到25到80倍浓缩。(2)节省时间：垂直结构的膜，避免堵膜，减少浓差极化，可以用超快离心速度极短时间完成 最少10分钟即可完成浓缩、脱盐或缓冲液置换。(3)收率高：独特的反转离心设计，有利于取得最大回收率且避免了人为移液误差 低吸附滤膜和聚丙烯内壳，使回收率高达90%以上。(4)不漏液、无损失：100%完整性测试确保不漏液 独特的死体积设计避免过度离心至干，没有样品损失。(5)广泛的化学相容性：与广泛的溶剂兼容，适用于pH1-pH9，热封膜杜绝了粘合剂和下游溶出物污染。/pp　　Vivaspin系列超滤离心管同样是进行蛋白质快速浓缩和缓冲液置换的常用产品。获得专利的垂直膜配合狭长的流道设计，有效地避免滤膜堵塞，提高浓缩速度 同时在浓缩管底部设计有死端结构，确保即使离心时间过长也不会发生样品被甩干的现象。Vivaspin可灵活选用三种不同材质的超滤膜：聚醚砜、三醋酸纤维和Hydrosart。它的另一个特点是有两种回收浓缩液的方法，既可以直接用移液器从浓缩管底部吸取，也可以将浓缩液反转离心到回收管内，加盖密封保存，这两种方法都保证了高回收率。Vivaspin经过一次离心，最高可以将蛋白溶液浓缩300倍。/pp　　2.5终产品的除菌除病毒过滤/pp　　浓缩后的样品，最终经过0.22μm无菌滤器进行除菌过滤。ULTA Pure SG，HC除菌滤器具有过滤速度快、化学稳定性好、载量高和溶出物少等优点，细菌挑战实验表明其除菌能力大于7log。除菌过滤过程的优化主要从三个方面入手：操作过程中过膜压力的控制、过膜流速以及单位膜载量控制，这三个参数优化以后，可以在同种类型、材质的NFF膜上进行线性放大，否则很容易影响收率。/pp　　Durapore除菌级亲水性滤膜由亲水性PVDF材料制造，具有可靠的除菌保证以及低蛋白吸附量、低析出、无纤维脱落、广泛的化学兼容性等优点，是常用的除菌滤膜。Durapore 0.22μm亲水性滤膜用于液体除菌或去除微粒，0.1μm亲水性滤膜用于液体中去除微粒、微生物和支原体。装有Durapore亲水性滤膜的滤器有Millipak、Opticap XL、Opticap XLT、筒式滤器和Optiscale等。Millipak滤器独特的堆叠盘状设计使残留量最小并且无颗粒脱落，因此适合于高附加值产品的终端过滤和灌装。Millipak和Opticap XL滤器都有O型圈垫片和软管倒钩连接的上游排气阀和排空阀设计，使操作简单易控。Opticap XL和XLT滤器的结构设计，特别耐高温、高压条件，在除菌过程中提供更高的稳定性和可靠性，同时更易清洗。Optiscale一次性滤器专为小规模工艺筛选和工艺放大所设计，是工艺评估的理想工具。/pp　　目前被广泛应用的生物制品病毒去除的方法是纳米膜过滤。纳米膜过滤有如下优点：(1)针对性强，实用性广：纳米膜过滤只与病毒和目的蛋白的大小有关，无论病毒是否有脂包膜外壳、是否耐热，纳米膜过滤都能将之去除。(2)毒性小，下游污染少：能有效去除杀灭病毒后可能留下的如抗原和核酸蛋白混合物等病毒标志物，有效降低下游污染，是纳米膜的另一特点。大多数病毒灭活处理都使用有毒或致突变的理化试剂，从而必须在使用后从蛋白质溶液中清除，而纳米膜过滤不存在毒性问题，只是在验证中要考虑到滤器浸出物的风险。(3)蛋白活性高，回收率高：纳米膜过滤是在正常条件下的pH、渗透压和温度下进行的温和的生产步骤，其蛋白回收率和活性都很高，通常在90%—95%。基于体外分析、实验研究和临床经验，纳米膜过滤试验都没有显示出蛋白质改变或是新抗原的产生。纳米膜过滤不改变制品特性，这一特点促进了监管机构认可和产品的注册。/pp　　日本Asahi Kasei公司于1989年推出了第一款专门为清除生物制药产品中病毒颗粒而设计的过滤器Planova，由亲水铜铵再生纤维素制成的中空纤维微孔膜，装入聚碳酸酯壳体中。Millipore公司的Viresolve NFP膜是一种复合PVDF膜，过滤盒被设计来从高纯蛋白溶液中移除小型病毒，如B19，蛋白质溶液中，B19的去除量通常 4 log。PALL Life Science公司的Ultipor VF DV50和DV20膜式过滤器可以从生物流体中去除显著数量级的病毒，同时目标蛋白可以很好地通过。滤芯由三层独特的亲水、低蛋白吸附的PVDF滤膜经新月型打褶方式构成，过滤面积大，具有可靠、安全和高流量等特点。Sartorius Stedim生产的Virosart CPV为聚醚砜过滤器，能去除 4 log的PPV和 6 log的逆转录病毒。/pp　　2.5扩张柱床吸附层析技术/pp　　扩张柱床吸附层析技术(EBA)是上世纪九十年代初期进入下游生产，整合了发酵和下游纯化的技术。新一代STREAMLINE Direct扩张柱床设备及介质是EBA技术中最成熟的产品。通过条件优化，STREAMLINE能直接从浑浊的发酵液中捕获目标生物分子，细胞碎片及不吸附的杂质穿过扩张床内悬浮的介质被冲洗掉，将以往澄清、浓缩、捕获等步骤整合为一步，达到粗纯化的效果(图2)[17]。/pp　　STREAMLINE的操作过程如下[17-18]：(1)起始：将STREAMLINE介质倒入扩张柱中。(2)平衡：从下向上流的缓冲液，将STREAMLINE柱内的吸附介质悬浮起来，形成稳定的、充分平衡好的扩张床。(3)上样：发酵液带菌体从柱底进入，目标生物产品吸附在STREAMLINE介质上 不吸附的宿主杂质及菌体碎片随液流从柱顶排出。(4)淋洗/穿透：进一步用缓冲液将不吸附的杂质洗掉。(5)洗脱：洗脱液洗脱目标生物产品。(6)CIP/再生：用1M NaOH+1M NaCl进行CIP。整个操作过程如图3所示。/pp style="text-align: center "img title="4.jpg" src="http://img1.17img.cn/17img/images/201808/insimg/07a79270-4b7d-4fe5-bc9a-125837562297.jpg"//pp style="text-align: center "　span style="font-size: 14px "　图2　传统纯化工艺与STREAMLINE [17]/span/pp style="text-align: center "img title="5.jpg" src="http://img1.17img.cn/17img/images/201808/insimg/333de887-f92b-405d-9094-9ec89635f74d.jpg"//pp style="text-align: center "span style="font-size: 14px "　　图3 STREAMLINE的基本工作原理和操作过程[18]/span/pp style="text-align: center "　span style="font-size: 14px "　(箭头示液体过柱时的流向)/span/pp　　STREAMLINE介质是一系列包裹着石英芯，以琼脂糖为骨架的介质。特殊设计的STREAMLINE扩张柱床可以产生稳定的向上拔的扩张液流，每一颗不同比重的STREAMLINE介质，悬浮在自身重力和扩张升力平衡的位置原地扰动。STREAMLINE 技术是稳态扩张，样品流均匀分布整个床体，目标产物吸附均匀，穿透小，回收率高，类似于固定床吸附性层析[19]。/pp　　3. 抗体最新下游技术应用实例/pp　　Lonza Biologics公司是全球最大的抗体合同生产商之一，为了开发一个稳定的20000L的抗体生产工艺，其纯化开发部门对多个不同的抗体亲和层析凝胶进行了有效的比较，他们发现Mabselect SuRe的动态载量高、使用寿命最长、Protein A脱落最低，实验数据明确支持放大到1.4m直径的柱子用于20000L培养规模的经济生产[4]。/pp　　德国的Roche公司一种用于肿瘤治疗的单抗已进入临床Ⅲ期。他们将目前几种Protein A介质进行充分的比较之后，选择了高载量、更易于装柱和寿命更长的Mabselect。目的抗体是通过无血清培养的转染的杂交B淋巴细胞表达的IgG1。将过滤后的无细胞上清上样到Mabselect填充的FineLINE柱，直径300cm，柱高20cm，上样的浓度是30mg/ml。洗脱后，洗脱液立即用磷酸钾中和pH值到6.8-7.0，再用凝胶过滤检测，结果表明比活超过90%，纯度在95%以上[20]。/pp　　Cytheris公司是法国一家生物制药公司，目前正在研制一种用CHO细胞表达的免疫调节剂(临床Ⅱ期)。原先的工艺采用传统层析法，但不能稳定去除病毒。改进后，在工艺的第一步使用Mustang Q对污染物进行捕获，取得了25%去除率的良好结果 同时对MVM、MLV和Re03三种病毒也达到超过4个Log的滴度降效果，而整个工艺对病毒的去除效率普遍提高了7-11个Log。说明Mustang Q的使用对下游层析起到了很好的保护作用。/pp　　在第五届生物制药工艺优化大会上，Crucell公司介绍了他们对腺病毒(AAV)纯化工艺的摸索。与传统的层析填料相比，Mustang Q膜层析的开放孔道的设计使对病毒的动态载量大大提高30倍左右，回收率在80%以上。用40L的膜层析柱相当于1000L的传统层析柱的效果，节省了验证工作，提高了工艺经济性，十分有利于放大生产。/pp　　德国的Boehringer Mannheim公司生物制药部，用STREAMLINE技术代替传统工艺生产400L CHO细胞培养的Fc融合蛋白，结果样品回收率提高14%，缓冲液减少25%，时间缩短47%[17]。/pp　　世界最大的制药公司-GlaxoSmithKline公司，使用特别设计的BioProcess全自动层析系统和STREAMLINE扩张柱生产药用脂蛋白疫苗，比原工艺产品体积缩小2倍，纯化系数1.5，内毒素减少100倍[17]。/pp　　日本YOSHITOMI公司正在使用多套STREAMLINE 1000系统生产人重组白蛋白，与原生产工艺产品纯度相同，产率提高30%，时间减少一半，年产量为12.5吨[17]。/pp　　AVECIA公司重新设计临床Ⅲ期药品生产工艺，选用STREAMLINE技术及SOURCE新型凝胶，生产效率提高12倍，回收率提高1倍[17]。/pp　　2001年，ILEX制药公司的CAMPATH获得FDA批准。该单克隆抗体使用Sartobind Q离子交换层析模块以流穿的方式进行精制，这是膜吸附器首次被批准应用于治疗性蛋白的生产，证明了膜层析技术通过了证实和测试[30]。/pp　　4. 展望/pp　　随着抗体产品上游大规模高效培养技术的进一步发展,实验室规模哺乳动物细胞表达水平可以达到25g/L，如果这一水平能够有效放大到生产,将对下游生产纯化带来更大的压力。所以下游纯化工艺的技术发展也是势在必行。/pp　　以下一些发展方向可能成为下游工艺未来发展的重要关注点：(1)刚性更好、载量更高、耐碱性更好的完全亲水琼脂糖凝胶的开发[4]。(2)优化操作次序，降低缓冲液消耗的更大规模生产线的应用[21]。(3)通过单抗的氨基酸序列预测下游工艺关键参数：亲和层析洗脱pH条件、离子交换层析洗脱pH和盐浓度条件、病毒灭活pH等[22]。(4)下游工艺的成本消耗占全部成本的50-80%，亲和捕获是下游工艺的最关键步骤，通过改进亲和配体，提高捕获能力，节省成本[23]。(5)新型层析系统全程实时控制纯化过程，在线检测HCP、宿主DNA、Protein A等的含量[24]。(6)由于在去除杂质方面的优势，膜层析将会得到飞速的发展，未来工艺甚至可能完全基于膜层析而不是柱层析[25]。/pp　　参考文献/pp　　[1] 刘亚明,薛章.生物制药：迎接抗体药物的黄金时代.医药细分子行业研究报告,2009./pp　　[2] 陈志南.基于抗体药物的我国生物制药产业化发展前景.2008中国药学会学术年会暨第八届中国药师周论文集,2008./pp　　[3]Gail Dutton.Trends in Monoclonal AntibodyProduction.Feature Articles,2010, 30(4)./pp　　[4]孙文改,苗景赟.抗体生产纯化技术.中国生物工程杂志,2008,28(10):141-152./pp　　[5]《人用单克隆抗体质量控制技术指导原则》.NICPBP(中国药品与生物制品检定所),2003./pp　　[6]Capto adhere：用于生产单抗的两步纯化操作.GE Healthcare公司技术资料./pp　　[7]中空纤维滤柱分离纯化应用集锦.GE Healthcare公司技术资料./pp　　[8]中空纤维膜过滤技术在单抗生产中的应用.GE Healthcare公司技术资料./pp　　[9]Amersham Biosciences.Downstream Gab’02 Abstracts,Extended Reports from the 2nd International Symposium on DownstreamProcessing of Genetically Engineered Abtibodies and Related Molecules. PortoPortugal,2002,12-14./pp　　[10] R.Hahn,R.Schlegel,A.Jungbauer.Comparison of Protein A affinity sorbents.JChromatogr B,2003，790：35-51./pp　　[11] R.L.Fahrner,et al. Performancecomparison of Protein A affinity chromatography sorbents for purifyingrecombinant monoclonal antibodies.BiotechnolAppl Biochem,1999，30：121-128./pp　　[12] K.Brorson,J.Brown,et al.Identification of protein A media performanceattributes that can be monitored as surrogates for retrovirus clearance duringextended re-use.Journal ofChromatography A,2003，989：155-163./pp　　[13] R.Hahn,et al.Comparison of Protein A affinity sorbents Ⅲ,Life time study.J Chromatogr A,2006，1102：224-231./pp　　[14] S. Ghose,et al. Antibody Variable RegionInteractions with Protein A: Implications for the Development of GenericPurification Processes. Biotechnol Bioeng,2005，92(6)：665-673./pp　　[15]用复合配基阴离子交换柱去除单克隆抗体(Mab)的污染物.BioProcessInternational技术资料./pp　　[16]利用Mustang Q膜层析从Protein A纯化的单克隆抗体中去除污染. PALL LifeScience公司技术资料./pp　　[17]整合发酵和下游纯化的新技术：扩张柱床吸附技术.GE Healthcare公司技术资料./pp　　[18]余晓玲,米力，姚西英，陈志南.扩张柱床吸附层析与固定柱床层析纯化单克隆抗体的比较.中国生物工程杂志,2003,23(1):61-64./pp　　[19]High-throughput monoclonal antibody purification.GE Healthcare公司技术资料./pp　　[20]抗体纯化手册.GE Healthcare公司技术资料./pp　　[21]Purification Strategies to Process 5 g/L Titers ofMonoclonal Antibodies. BioPharm International技术资料./pp　　[22] T.Ishihara,T.Kadoya.Accelerated purification process development ofmonoclonal antibodies for shortening time to clinic:Designand case study of chromatography processes.J Chromatogr A,2007，1176(1-2)：149-156./pp　　[23] A.Cecilia,A.Roque,et al.Antibodies and Genetically Engineered RelatedMolecules:Production and Purification.BiotechnolProg,2004，20：639-654./pp　　[24] S.Flatman,I.Alam,et al.Process analytics for purification of monoclonal antibodies.JChromatogr B,2007，848：79-87./pp　　[25]ProcessChromatography:Five Decades of Innovation.BioPharmInternational技术资料./pp　　[26]双层滤板膜堆在单抗工艺上的大规模澄清过滤应用评估.BioProcessInternational技术资料./pp　　[27]Affinity Chromatography Media.Millipore公司技术资料./pp　　[28]ProSep Ultra Plus ChromatographyMedia.Millipore公司技术资料./pp　　[29]MEP Hypercel混合模式层析填料. PALL LifeScience公司技术资料./pp　　[30]Sartobind膜层析技术高效的蛋白纯化工具. SartoriusStedim公司技术资料./pp/p

p　　随着抗体药物上游大规模高效培养技术的飞速发展，抗体蛋白的表达浓度有了大幅度的提高，这给下游纯化工艺带来了巨大的压力。为了突破下游技术瓶颈，整个世界生物制药产业都加大了对下游技术的革新力度，近年来也取得了丰硕的成果。本文就抗体药物的纯化策略、最新技术进展以及技术应用等方面做一个调研，以期能对本部门的相关研究工作有所助益。br//pp　　自1997年来，全球抗体药物市场经历了一个快速发展的阶段，总销售额从1997年的3.1亿美元增长到2008年的400亿美元，复合增长率高达55%，而且增长势头还在持续 [1]。国际上通常把年销售额超过10 亿美元的品牌药称为“重磅炸弹”药物，很大一部分抗体药物都已迈入“重磅炸弹”行列。在2008年全球15大药品中，抗体药物占据了1/3，且排名仍在上升，这意味着几乎每种单抗药物的成功开发都代表着巨大的市场前景[2]。受益于此，全球主要的生物制药公司都获利颇丰，可见抗体药物具有巨大的经济价值和社会价值。br//pp　　抗体药物生产技术门槛高，需要掌握抗体筛选、抗体重组、高表达细胞株构建和大规模悬浮培养等核心技术，其下游关键技术是长期以来的薄弱之处。哺乳动物细胞表达系统具有活性高、稳定性好等优点，已成为抗体等生物制品最重要的系统之一，为抗体药物的产业化提供可能。目前，国际上该项技术发展较快，已趋成熟，以默克公司为代表的流加培养生产规模达10000L以上，以贝尔公司为代表的灌流培养生产规模达200L以上，蛋白表达浓度为1-10g/L。我国在该技术领域起步较晚，基础较差，但近年来经过努力，已经实现了该项技术的突破，流加培养规模达500L以上，灌流培养规模达100L以上，蛋白表达浓度为0.2-2g/L[2]。/pp　　随着动物细胞表达抗体产品大规模高效培养技术的快速发展，下游纯化工艺越来越成为抗体药物生产中主要的技术瓶颈[3]。因此，如何提高下游工艺的生产效率就成为了抗体药物研发必须解决的问题。本文就国际上高表达抗体蛋白下游工艺的研究进展做一个调研，使本人及同事们能了解国际上的研究成果和发展趋势，以期能对本部门的相关研究工作有所助益。/pp　　1. 抗体药物纯化策略/pp　　每个单抗的等电点、电荷密度、疏水性、糖基化程度等生化性质各不相同。选择单抗的纯化方法，既要了解它们的共性，又要了解它们的个性，从而制定相应的纯化策略(表1)。/pp　　1.1 抗体药物下游工艺一般策略/pp　　CHO和NSO等哺乳动物细胞表达系统主要用来生产治疗性单抗，临床剂量大(数十至几百毫克/dose)，批产量达公斤级，纯度要求极高。层析技术是抗体分离纯化的核心技术，一般采用经典的三步纯化策略：粗纯-中间纯化-精细纯化。粗纯的主要目的是捕获、浓缩和稳定样品，约80%的下游工艺用Protein A亲和层析进行快速捕获，一步即可达到95%以上的纯度。治疗用抗体一般使用动物细胞大规模高密度无血清悬浮培养进行生产，不仅对终产品的单体含量有严格的规定，还必须去除各种潜在的杂质以满足药品安全的要求，因此在粗纯之后还需要进行中间纯化和精细纯化，去除宿主细胞蛋白(HCP)、宿主DNA、抗体聚集体和变体等，常用的层析技术有离子交换、凝胶过滤、疏水层析等[4]。/pp　　2003 年初，中国SFDA下属的中国药品与生物制品检定所(NICPBP)公布了《人用单克隆抗体质量控制技术指导原则》[5]。生产者除须保证最终抗体产品纯度，还需要验证所用的纯化方法能有效对潜在的污染物，如HCP、免疫球蛋白、宿主DNA、用于生产腹水抗体的刺激物、内毒素、培养液成分、层析凝胶析出成分(脱落的Protein A配基)进行去除 并能有效的去除/灭活病毒。也就是说，在设计下游工艺时，需多角度综合考虑抗体本身的性质、抗体的来源、发酵培养技术、发酵液蛋白浓度、宿主杂质、抗体批间的差异、潜在污染及病毒灭活等问题。此外，治疗用抗体在生产和纯化过程中还会由于糖基化程度不同、蛋白酶作用、以及脱氨基和脱酰胺等反应而产生带电性质不同的多种抗体变体 另外，抗体氧化、聚集和片段化也是常见的降解途径[4]。针对这些变体，一方面，在表达和纯化过程中选择参数(如pH、盐浓度等)时要充分考虑到目标抗体的稳定性 另一方面，应控制细胞培养的条件(DO、渗透压等)，同时加快下游分离纯化的速度，最大程度上避免抗体在纯化过程中产生变体，从而保证终产品的均一性和高的比活，也有利于控制终产品的内毒素水平。/pp style="text-align: center"img src="https://img1.17img.cn/17img/images/201810/uepic/1eb75a7d-0f0f-4f60-8224-a3984ccff0e3.jpg" title="表1.png" alt="表1.png"//pp style="text-align: center "img src="https://img1.17img.cn/17img/images/201810/uepic/f8ff0f67-6f0b-4295-ab81-05543e5efbd8.jpg" title="表2.png" alt="表2.png"/br/strong表1 单抗特性及纯化策略/strong/pp　　1.2 新型的两步层析技术与纯化工艺整合/pp　　近年来，GE Healthcare公司开发出了新型的亲和捕获介质Mabselect SuRe和混合作用模式的强阴离子交换介质Capto adhere(这两种介质的主要特点将在下文详细介绍)。凭借着MabSelect SuRe的卓越性能以及Capto adhere的复合多除杂功能，使得抗体纯化工艺由经典的三步层析转变为两步层析得以实现。这种新型的两步层析技术的工艺流程是：在细胞培养表达以后，采用0.2-0.45μm的中空纤维膜技术进行澄清，然后用MabSelect SuRe捕获，酸性条件洗脱后直接pH 4.0病毒灭活，澄清过滤后穿透方式上Capto adhere，这一步离子交换之前或之后会有一步20nm纳滤去病毒，最后50K膜超滤浓缩和洗滤进行缓冲液置换。整个工艺如图1,这一工艺平台已经尝试过多个不同的抗体并取得成功(表2),同时很多实验表明这一工艺平台适合多数抗体的生产。有些抗体如果通过优化结果不甚满意, 通过增加一步Capto Q也基本上可以达到要求或是采用Capto S-Capto Q(这两种介质的主要特点将在下文详细介绍)的工艺步骤[4]。/pp style="text-align: center "　　img src="https://img1.17img.cn/17img/images/201810/uepic/a804fe1c-9660-4ab2-8cc4-177870630ce5.jpg" title="图1.png" alt="图1.png" style="text-align: center "//pp style="text-align: center "strong图1　抗体生产两步层析法主导的抗体纯化最新工艺[6]/strong/pp　　Mabselect SuRe可以达到99%以上的抗体纯度，亲和洗脱峰使用Capto adhere的流穿模式进行精纯：使抗体分子流穿而聚合体、HCP、脱落的Protein A配基等杂质结合在柱上加以去除。这样仅用两步层析就可以得到符合药用级质量要求的高纯度抗体产品，大大缩短了工艺时间，提高了生产效率，同时增加了收率，降低了生产成本。/pp style="text-align: center"img src="https://img1.17img.cn/17img/images/201810/uepic/3ef7b3a2-9f79-4e74-8a71-6a6cbcbea5ec.jpg" title="图2.png" alt="图2.png"//pp style="text-align: center "strong表2 两步法用于多种抗体的纯化结果(括号内数值为纯化前)[4]/strong/pp　　2. 抗体药物下游技术最新研究进展/pp　　2.1 样品澄清/pp　　2.1.1 中空纤维膜过滤技术/pp　　中空纤维膜是近年来发展起来的新型切向流膜分离技术,与盒式膜包相比,中空纤维膜可以直接处理高固含量和高黏度的粗料液,具有容尘量高、速度快、剪切力小、成本低等优点。目前,中空纤维微滤膜已经广泛用于生物制药的各个领域[7]。/pp　　对于动物细胞培养液,可以将高密度的培养液直接用中空纤维微滤膜(0.22或0.45μm)进行澄清,而无需事先经过离心和预过滤,步骤少,速度快,收率高,成本低。和离心机比较,具有极高的澄清度,因此中空纤维澄清后的细胞培养液可直接Protein A亲和层析进行纯化。/pp　　中空纤维膜澄清细胞培养液的优势有：(1)步骤少,速度快,收率更高(通过有效的洗滤可使样品收率稳定而且高于离心机)，同时最大程度上避免抗体降解而影响产品均一性。(2)成本低：不仅省去了连续流高速离心机昂贵的前期投资和运转的日常维护成本，还节省了离心后死端过滤的成本。中空纤维膜物理化学性质稳定，可以通过清洗而反复使用，成本低廉。(3)有利于内毒素控制：中空纤维膜稳定的化学性质可以耐受1M NaOH 40-50℃和氧化剂NaClO的清洗，从而有效去除内毒素 封闭的系统，也更有利于生产过程中内毒素的控制。此外，大部分中空纤维滤柱还可以进行高压灭菌。(4)低剪切力：中空纤维采用低剪切力的开放式流道，不仅可以处理含有高固含量的料液，还避免了蛋白质活性分子在高剪切力下的聚集变性，有利于抗体的稳定。(5)工艺耐用性强：相比死端过滤，中空纤维澄清具有很好的操作灵活性和耐用性，可以通过调整操作参数(流速、TMP)处理不同性质的细胞培养液。(6)易于线性放大：通过维持切向流速、TMP 等参数恒定，方便地进行线性放大，生产规模的处理量可达几千升料液，目前国内销售最大的中空纤维膜过滤系统已达400m2且生产稳定[8]。/pp　　2.1.2 深层过滤介质/pp　　深层过滤采用两种机制去除颗粒。首先是拦截，颗粒由于自身的物理尺寸在过滤器内被截留。它们可能被困在过滤器表面，因此根本没有进入基质，或在通过深层过滤基质的曲径时被俘获(筛选)。颗粒拦截伴随过滤器压差增高，因为它的基质被不断累积的颗粒堵塞。第二种机制是吸附，比过滤器拦截精度更小的颗粒能够从流体中被吸附去除。这种机制是通过深层过滤基质上的净电荷实现的[26]。/pp　　目前应用比较广泛的双层膜深层过滤介质有Millipore公司的Millistak+HC、Sartorius公司的Sartobran-P、Pall公司的Supradisc HP等。Millistak+HC深层过滤介质由纤维素和无机助滤剂(聚丙稀粘合的硅藻土)组成，包裹在聚丙烯外壳内 它由两层全厚度深层滤板(上游一层粗过滤和下游一层精细过滤)组成，附带一层RW01纤维素膜终过滤。Sartobran-P深层过滤介质由醋酸纤维素滤膜、聚丙烯外壳和支撑层组成，加强型的滤膜有良好的机械强度，有利于在反复的过滤和灭菌过程中保持完好无损 采用了折叠膜，在体积小巧的同时还保证了超大的过滤面积。Supradisc HP深层过滤介质由纤维素、硅藻土、带正电荷树脂和聚丙烯组成 也由两层全厚度深层滤板(上游一层粗过滤和下游一层精细过滤)组成。/pp　　2.2最新抗体捕获技术/pp　　2.2.1 MabSelect介质/pp　　MabSelect是第一个使用高流速琼脂糖凝胶作为骨架的新型Protein A层析介质，专为大规模抗体纯化而设计，适合快速高效的进行抗体生产和放大，已经成为单抗纯化和放大的标准介质。/pp　　MabSelect的特点有：(1)更高的流速和动态载量：Protein A经基因工程改造，C端含一个半胱氨酸，形成一个定向的硫酯键，同时增加了对IgG的有效结合。Protein A和凝胶偶联时采用了全新的单点偶联工艺，降低了空间位阻，因此可以在使用更高流速的条件下增加动态载量：在线形流速为500cm/hr和柱床高度为20cm(停留时间2.4min)的条件下，每毫升MabSelect的动态载量可以达到 30mg IgG。(2)更低的非特异性吸附，抗体纯度更高：Mabselect介质高度亲水性的琼脂糖骨架最大程度上降低了非特异性吸附，使得洗脱峰中杂蛋白和DNA更少，有利于后期抗体的精细纯化。著名的抗体生产商IDEC公司以及R.Hahn的研究显示，Mabselect对CHO细胞HCP的吸附比其它Protein A介质低7倍[9-10]。R.L.Fahrner等的研究显示，Mabselect所得抗体的DNA残留量比其它Protein A介质低30%[11]。(3)更低的Protein A脱落：MabSelect由于通过新型环氧共价交联技术，Protein A的脱落比其它同类介质低，这不仅有利于抗体纯化，还延长了介质的使用寿命，降低了生产成本。(4)更易于工艺的线性放大：通过实验室条件的优化，MabSelect 可以在保持线性流速和上样比例等参数不变的条件下，通过增加柱直径进行线性放大。(5)MabSelect 易于清洗与除菌，寿命更长、更经济：在长期连续的生产中，有效的在位清洗(CIP)有助于延长介质使用寿命，但一般的Protein A介质往往不能耐受NaOH，只能使用高浓度的尿素或盐酸胍进行清洗，效果远不如NaOH且成本非常高。而MabSelect的CIP和除菌程序简单，用很常规、经济的试剂如50mM NaOH+1M NaCl或50mM NaOH+0.5M Na2SO4就可以有效去除沉淀和变性物质 用非离子去污剂或酒精可以去除通过疏水作用结合的物质 用0.1M醋酸和20%酒精可以在位灭菌(SIP)。经测试，Mabselect配合CIP(50mMNaOH+1M NaCl)纯化三百次后，抗体产品纯度与收率不变[12]。/pp　　2.2.2 MabSelect Xtra介质/pp　　Mabselect Xtra介质是在Mabselect介质的基础上优化而来，是目前市场上所有的商品化Protein A介质中载量最高的亲和层析介质之一。它除了具有MabSelect介质的全部特点外，还具有载量最高和非特异性吸附更低的特点。/pp　　Mabselect Xtra介质使用孔径更大的多孔高流速琼脂糖作为骨架，同时减小介质粒径。这样不仅增加了比表面积和配基密度，还降低了传质阻力，从而有效的增加了动态载量。其动态载量超过41mg/ml，在工艺生产过程中可以有效减少层析柱的体积，从而降低生产成本。R.Hahn的研究显示，Mabselect Xtra对CHO细胞HCP的吸附比其它Protein A介质更是低了近10倍[13]。/pp　　2.2.3 MabSelect SuRe介质/pp　　MabSelect SuRe介质也是在Mabselect介质的基础上优化而来，是目前市场上唯一耐强碱的Protein A亲和层析介质，寿命最长，稳定性最好[10]。它除了具有MabSelect介质的全部特点外，还具有以下特点：(1)可以耐受0.1-0.5M NaOH：MabSelectSuRe具有不同于其它Protein A介质的同型四聚体配基-SuRe配基，即使在强碱条件下也不易变性或脱落，可以用高达0.5M NaOH进行CIP和SIP，能有效去除沉淀和变性物质，大大降低了抗体产品被内毒素污染和批间交叉污染的风险，有利于延长介质使用寿命，同时还大大降低了CIP和SIP的成本。(2)更温和的洗脱，避免抗体聚集，提高收率：同型四聚体配基避免了不同配基与抗体Fc段亲和性的差异，也消除了某些域对Fab段的亲和作用，使得洗脱条件更加均一而温和。Mabselect SuRe介质可以用更高的pH进行洗脱，有效避免了抗体在低pH下的聚集，产品纯度和均一性更高，浊度也更低[14]。(3)不同抗体洗脱所需pH差异小：由于消除了对抗体Fab段的亲和作用，使得同一种属亚型的不同抗体分子洗脱所需的条件更接近，有利于平台技术的建立，进一步降低了不同的抗体分离纯化工艺的研发成本。(4)SuRe 配基稳定性更好：SuRe配基对碱和蛋白酶更稳定，纯化过程中脱落更少( 10ppm)，有利于后期脱落配基的进一步去除。/pp　　2.2.4 ProSep-vA Ultra介质/pp　　ProSep-vA Ultra介质是将自然界非动物性来源的Protein A交联于700Å 的多孔性玻璃珠骨架上，是刚性和不可压缩的介质。ProSep-vA Ultra介质具有如下特点：低反压性 不收缩、不溶胀 高动态载量 极低的Protein A脱落 高重复使用性，标准化的清洗和除菌操作[27]。/pp　　2.2.5 ProSep Ultra Plus介质/pp　　ProSep Ultra Plus介质是在ProSep-vA Ultra介质基础上优化而来，也是目前市场上所有的商品化Protein A介质中载量最高的亲和层析介质之一。它除了具有ProSep-vA Ultra介质的全部特点外，还具有载量最高、纯化效率更高、工艺更易于放大、成本更低等特点[28]。/pp　　2.2.6 MEP Hypercel介质/pp　　MEP Hypercel复合作用模式介质是一种灵活的层析介质设计，也称之为疏水电荷诱导层析(HCIC)，用于捕获和纯化从实验室到生产规模的抗体和各种重组蛋白。MEP Hypercel介质由一个独特的连接4-巯基乙基吡啶(4-MEP)的刚性纤维素骨架组成。纤维素骨架赋予高孔隙率、化学稳定性和低非特异性吸附。平均直径80-100μm，在低反压下有优良的流速特性。MEP Hypercel介质在大规模使用时具有显著优势，基于它的配基结构，可选择性地捕获免疫球蛋白。组合其它传统的方法如离子交换、疏水作用，甚至用在Protein A之后从不同的料液中直接捕获或中度纯化抗体，以增强对宿主DNA、HCP和聚合体的清除。MEP Hypercel介质有助于建立一个简化的工艺流程，节省操作步骤(例如洗滤、超滤等) 预计有更长的使用寿命，因为它可以耐受苛刻的CIP方法(0.5-1M NaOH，30-60分钟接触时间)，而所有因素都有利于降低成本[29]。/pp　　2.3最新精细纯化技术/pp　　2.3.1 CaptoFamily系列介质/pp　　新型的Capto S，Q系列介质是以高流速琼脂糖为骨架，同时交联了非常“柔软”的葡聚糖链，这样不仅增加了比表面积，同时降低了传质阻力和空间位阻，使得介质在高流速下的动态载量大大增加，有利于提高生产效率，降低成本。/pp　　Capto S，Q系列介质可以装填在直径60cm的工业层析柱中使用高达500cm/h 的流速进行纯化(柱高30cm)。这样不仅有利于工艺放大后大规模层析柱的填装，还大大提高了生产效率，每步层析更短的操作时间也有效避免了抗体分子在分离纯化过程中产生各种变体和聚合体，使得收率更好，终产品的活性更高、性质更均一。/pp　　2.3.2 Captoadhere介质/pp　　为了进一步减少抗体分离纯化步骤，提高特定杂质的去除效率，以满足日益增长的治疗用抗体的生产需要，2007 年初，GE Healthcare公司推出了新型复合作用模式的强阴离子交换介质：Capto adhere介质。Capto adher介质专为治疗用抗体的分离纯化而设计，其配基综合了阴离子交换、氢键和疏水等多种复杂的作用方式，因此对于抗体的聚合体具有非常独特而高效的去除能力。此外，通过有效的实验设计(DoE)，流穿模式的Capto adher介质还可以同时有效去除脱落的Protein A配基、HCP、宿主DNA、内毒素和潜在的病毒，并使得结合MabSelect SuRe的抗体两步层析纯化工艺成为现实(表3)。Capto adhere还具有很强的病毒去除能力，如MVM病毒的去除能力可达5.9个Log。目前，新型的两步法抗体层析纯化工艺已经被国内外诸多知名药企广泛用于多种抗体的分离纯化，各项指标均符合治疗用抗体的要求。Capto adher层析还可以和阴离子交换(Capto Q)和疏水层析等结合使用，以达到更高的质量要求[15]。/pp style="text-align: center"img src="https://img1.17img.cn/17img/images/201810/uepic/282961ea-e704-47d1-aabd-f044e108f59c.jpg" title="图3.png" alt="图3.png"//pp style="text-align: center "strong表3 两步层析纯化工艺对污染物的去除效果[15]/strong/pp　　2.3.3膜层析技术/pp　　PALL Life Science公司自10余年前颠覆性地开发出独一无二的层析产品-Mustang膜层析系列产品后，经过不断地技术改造，于近年推出全新Mustang Q XT家族，扩展了膜层析工艺放大产品线。膜层析技术，相对于传统的柱层析，无需层析填料和层析柱等复杂构件，直接通过膜式过滤器，经过简单的过滤环节即可达到纯化目的。Mustang Q以16层超级打褶的聚醚砜过滤膜作为基架，上面偶联了季胺基等功能基团，可以使生物分子流经的时候与功能位点迅速结合，具有高流速和高动态载量等优点。/pp　　Sartorius Stedim公司也开发出了一整套膜层析技术，包括Sartobind S,Q,C和D离子交换、Sartobind IDA(亚氨基二乙酸)金属螯合、Sartobind醛、Sartobind环氧基和Sartobind Protein A(重组)等膜层析系列产品。Sartobind在很多蛋白和病毒纯化应用中可以取代传统耗时、繁琐的层析步骤。膜吸附器的快速纯化特点使蛋白分离可以在高流速下获得高收率，较传统柱层析流速最高能提高100倍，达到20-40 CV/min。传统颗粒胶95%以上的结合位点集中在颗粒胶内部。Sartobind膜层析的结合位点是均一地交联到交叉偶联的增强纤维素骨架内0.5-1μm厚的薄层上。大孔结构和快速吸附结合特性使膜吸附器可以忽略扩散时间因素。同时多微孔膜结构不存在传统颗粒胶的孔内扩散问题。在对流情况下，流动相的分子运动只由泵压力决定。因此，膜吸附器具有操作周期极短、流速和处理能力极高的特点[30]。/pp　　与离子交换柱层析相比，离子交换膜层析技术已经被证明利用高动态结合能力吸附大量的生物分子，如病毒、HCP和宿主DNA。最近，阴离子交换膜层析技术已经被作为柱层析技术的替代技术用于Protein A亲和捕获后的mAb中微量污染物的去除[16]。/pp　　2.4终产品的浓缩洗滤/pp　　多维纯化得到的洗脱峰可以用Kvick Lab/Process盒式膜包进行快速浓缩和缓冲液置换。Kvick盒式膜包的优点有：(1)无热原：很多时候，仅用0.5M NaOH 清洗难以彻底去除膜表面的热原。Kvick盒式膜包化学性质非常稳定，可以使用1M NaOH在40-50℃下进行彻底的SIP/CIP，避免最终超滤浓缩时引入热原而影响产品质量。(2)孔径均一、速度快：Kvick盒式膜包孔径更均一，甚至可以使用50-100K的膜包进行抗体浓缩而不漏过，速度更快，大大节省了操作时间。(3)易于线性放大：通过保持流速、TMP等参数恒定，可以直接线性放大到生产规模。/pp　　Amicon Ultra系列超滤离心管可以用来进行抗体的快速浓缩、脱盐及缓冲液置换。它具有如下特点：(1)效率高：一步法离心达到25到80倍浓缩。(2)节省时间：垂直结构的膜，避免堵膜，减少浓差极化，可以用超快离心速度极短时间完成 最少10分钟即可完成浓缩、脱盐或缓冲液置换。(3)收率高：独特的反转离心设计，有利于取得最大回收率且避免了人为移液误差 低吸附滤膜和聚丙烯内壳，使回收率高达90%以上。(4)不漏液、无损失：100%完整性测试确保不漏液 独特的死体积设计避免过度离心至干，没有样品损失。(5)广泛的化学相容性：与广泛的溶剂兼容，适用于pH1-pH9，热封膜杜绝了粘合剂和下游溶出物污染。/pp　　Vivaspin系列超滤离心管同样是进行蛋白质快速浓缩和缓冲液置换的常用产品。获得专利的垂直膜配合狭长的流道设计，有效地避免滤膜堵塞，提高浓缩速度 同时在浓缩管底部设计有死端结构，确保即使离心时间过长也不会发生样品被甩干的现象。Vivaspin可灵活选用三种不同材质的超滤膜：聚醚砜、三醋酸纤维和Hydrosart。它的另一个特点是有两种回收浓缩液的方法，既可以直接用移液器从浓缩管底部吸取，也可以将浓缩液反转离心到回收管内，加盖密封保存，这两种方法都保证了高回收率。Vivaspin经过一次离心，最高可以将蛋白溶液浓缩300倍。/pp　　2.5终产品的除菌除病毒过滤/pp　　浓缩后的样品，最终经过0.22μm无菌滤器进行除菌过滤。ULTA Pure SG，HC除菌滤器具有过滤速度快、化学稳定性好、载量高和溶出物少等优点，细菌挑战实验表明其除菌能力大于7log。除菌过滤过程的优化主要从三个方面入手：操作过程中过膜压力的控制、过膜流速以及单位膜载量控制，这三个参数优化以后，可以在同种类型、材质的NFF膜上进行线性放大，否则很容易影响收率。/pp　　Durapore除菌级亲水性滤膜由亲水性PVDF材料制造，具有可靠的除菌保证以及低蛋白吸附量、低析出、无纤维脱落、广泛的化学兼容性等优点，是常用的除菌滤膜。Durapore 0.22μm亲水性滤膜用于液体除菌或去除微粒，0.1μm亲水性滤膜用于液体中去除微粒、微生物和支原体。装有Durapore亲水性滤膜的滤器有Millipak、Opticap XL、Opticap XLT、筒式滤器和Optiscale等。Millipak滤器独特的堆叠盘状设计使残留量最小并且无颗粒脱落，因此适合于高附加值产品的终端过滤和灌装。Millipak和Opticap XL滤器都有O型圈垫片和软管倒钩连接的上游排气阀和排空阀设计，使操作简单易控。Opticap XL和XLT滤器的结构设计，特别耐高温、高压条件，在除菌过程中提供更高的稳定性和可靠性，同时更易清洗。Optiscale一次性滤器专为小规模工艺筛选和工艺放大所设计，是工艺评估的理想工具。/pp　　目前被广泛应用的生物制品病毒去除的方法是纳米膜过滤。纳米膜过滤有如下优点：(1)针对性强，实用性广：纳米膜过滤只与病毒和目的蛋白的大小有关，无论病毒是否有脂包膜外壳、是否耐热，纳米膜过滤都能将之去除。(2)毒性小，下游污染少：能有效去除杀灭病毒后可能留下的如抗原和核酸蛋白混合物等病毒标志物，有效降低下游污染，是纳米膜的另一特点。大多数病毒灭活处理都使用有毒或致突变的理化试剂，从而必须在使用后从蛋白质溶液中清除，而纳米膜过滤不存在毒性问题，只是在验证中要考虑到滤器浸出物的风险。(3)蛋白活性高，回收率高：纳米膜过滤是在正常条件下的pH、渗透压和温度下进行的温和的生产步骤，其蛋白回收率和活性都很高，通常在90%—95%。基于体外分析、实验研究和临床经验，纳米膜过滤试验都没有显示出蛋白质改变或是新抗原的产生。纳米膜过滤不改变制品特性，这一特点促进了监管机构认可和产品的注册。/pp　　日本Asahi Kasei公司于1989年推出了第一款专门为清除生物制药产品中病毒颗粒而设计的过滤器Planova，由亲水铜铵再生纤维素制成的中空纤维微孔膜，装入聚碳酸酯壳体中。Millipore公司的Viresolve NFP膜是一种复合PVDF膜，过滤盒被设计来从高纯蛋白溶液中移除小型病毒，如B19，蛋白质溶液中，B19的去除量通常 4 log。PALL Life Science公司的Ultipor VF DV50和DV20膜式过滤器可以从生物流体中去除显著数量级的病毒，同时目标蛋白可以很好地通过。滤芯由三层独特的亲水、低蛋白吸附的PVDF滤膜经新月型打褶方式构成，过滤面积大，具有可靠、安全和高流量等特点。Sartorius Stedim生产的Virosart CPV为聚醚砜过滤器，能去除 4 log的PPV和 6 log的逆转录病毒。/pp　　2.5扩张柱床吸附层析技术/pp　　扩张柱床吸附层析技术(EBA)是上世纪九十年代初期进入下游生产，整合了发酵和下游纯化的技术。新一代STREAMLINE Direct扩张柱床设备及介质是EBA技术中最成熟的产品。通过条件优化，STREAMLINE能直接从浑浊的发酵液中捕获目标生物分子，细胞碎片及不吸附的杂质穿过扩张床内悬浮的介质被冲洗掉，将以往澄清、浓缩、捕获等步骤整合为一步，达到粗纯化的效果(图2)[17]。/pp　　STREAMLINE的操作过程如下[17-18]：(1)起始：将STREAMLINE介质倒入扩张柱中。(2)平衡：从下向上流的缓冲液，将STREAMLINE柱内的吸附介质悬浮起来，形成稳定的、充分平衡好的扩张床。(3)上样：发酵液带菌体从柱底进入，目标生物产品吸附在STREAMLINE介质上 不吸附的宿主杂质及菌体碎片随液流从柱顶排出。(4)淋洗/穿透：进一步用缓冲液将不吸附的杂质洗掉。(5)洗脱：洗脱液洗脱目标生物产品。(6)CIP/再生：用1M NaOH+1M NaCl进行CIP。整个操作过程如图3所示。/pp　　/pp style="text-align: center"img src="https://img1.17img.cn/17img/images/201810/uepic/dba748ae-d64e-479c-8fb1-ea738ef437da.jpg" title="图4.jpg" alt="图4.jpg"//pp style="text-align: center "strong图2　传统纯化工艺与STREAMLINE [17]/strong/pp style="text-align: center"img src="https://img1.17img.cn/17img/images/201810/uepic/0f71d1a8-a218-43f5-8c1f-917bd4f432a5.jpg" title="图5.png" alt="图5.png"//pp style="text-align: center "strong图3 STREAMLINE的基本工作原理和操作过程[18](箭头示液体过柱时的流向)/strong/pp　　STREAMLINE介质是一系列包裹着石英芯，以琼脂糖为骨架的介质。特殊设计的STREAMLINE扩张柱床可以产生稳定的向上拔的扩张液流，每一颗不同比重的STREAMLINE介质，悬浮在自身重力和扩张升力平衡的位置原地扰动。STREAMLINE技术是稳态扩张，样品流均匀分布整个床体，目标产物吸附均匀，穿透小，回收率高，类似于固定床吸附性层析[19]。/pp　　3. 抗体最新下游技术应用实例/pp　　Lonza Biologics公司是全球最大的抗体合同生产商之一，为了开发一个稳定的20000L的抗体生产工艺，其纯化开发部门对多个不同的抗体亲和层析凝胶进行了有效的比较，他们发现Mabselect SuRe的动态载量高、使用寿命最长、Protein A脱落最低，实验数据明确支持放大到1.4m直径的柱子用于20000L培养规模的经济生产[4]。/pp　　德国的Roche公司一种用于肿瘤治疗的单抗已进入临床Ⅲ期。他们将目前几种Protein A介质进行充分的比较之后，选择了高载量、更易于装柱和寿命更长的Mabselect。目的抗体是通过无血清培养的转染的杂交B淋巴细胞表达的IgG1。将过滤后的无细胞上清上样到Mabselect填充的FineLINE柱，直径300cm，柱高20cm，上样的浓度是30mg/ml。洗脱后，洗脱液立即用磷酸钾中和pH值到6.8-7.0，再用凝胶过滤检测，结果表明比活超过90%，纯度在95%以上[20]。/pp　　Cytheris公司是法国一家生物制药公司，目前正在研制一种用CHO细胞表达的免疫调节剂(临床Ⅱ期)。原先的工艺采用传统层析法，但不能稳定去除病毒。改进后，在工艺的第一步使用Mustang Q对污染物进行捕获，取得了25%去除率的良好结果 同时对MVM、MLV和Re03三种病毒也达到超过4个Log的滴度降效果，而整个工艺对病毒的去除效率普遍提高了7-11个Log。说明Mustang Q的使用对下游层析起到了很好的保护作用。/pp　　在第五届生物制药工艺优化大会上，Crucell公司介绍了他们对腺病毒(AAV)纯化工艺的摸索。与传统的层析填料相比，Mustang Q膜层析的开放孔道的设计使对病毒的动态载量大大提高30倍左右，回收率在80%以上。用40L的膜层析柱相当于1000L的传统层析柱的效果，节省了验证工作，提高了工艺经济性，十分有利于放大生产。/pp　　德国的Boehringer Mannheim公司生物制药部，用STREAMLINE技术代替传统工艺生产400L CHO细胞培养的Fc融合蛋白，结果样品回收率提高14%，缓冲液减少25%，时间缩短47%[17]。/pp　　世界最大的制药公司-GlaxoSmithKline公司，使用特别设计的BioProcess全自动层析系统和STREAMLINE扩张柱生产药用脂蛋白疫苗，比原工艺产品体积缩小2倍，纯化系数1.5，内毒素减少100倍[17]。/pp　　日本YOSHITOMI公司正在使用多套STREAMLINE 1000系统生产人重组白蛋白，与原生产工艺产品纯度相同，产率提高30%，时间减少一半，年产量为12.5吨[17]。/pp　　AVECIA公司重新设计临床Ⅲ期药品生产工艺，选用STREAMLINE技术及SOURCE新型凝胶，生产效率提高12倍，回收率提高1倍[17]。/pp　　2001年，ILEX制药公司的CAMPATH获得FDA批准。该单克隆抗体使用Sartobind Q离子交换层析模块以流穿的方式进行精制，这是膜吸附器首次被批准应用于治疗性蛋白的生产，证明了膜层析技术通过了证实和测试[30]。/pp　　4. 展望/pp　　随着抗体产品上游大规模高效培养技术的进一步发展,实验室规模哺乳动物细胞表达水平可以达到25g/L，如果这一水平能够有效放大到生产,将对下游生产纯化带来更大的压力。所以下游纯化工艺的技术发展也是势在必行。/pp　　以下一些发展方向可能成为下游工艺未来发展的重要关注点：(1)刚性更好、载量更高、耐碱性更好的完全亲水琼脂糖凝胶的开发[4]。(2)优化操作次序，降低缓冲液消耗的更大规模生产线的应用[21]。(3)通过单抗的氨基酸序列预测下游工艺关键参数：亲和层析洗脱pH条件、离子交换层析洗脱pH和盐浓度条件、病毒灭活pH等[22]。(4)下游工艺的成本消耗占全部成本的50-80%，亲和捕获是下游工艺的最关键步骤，通过改进亲和配体，提高捕获能力，节省成本[23]。(5)新型层析系统全程实时控制纯化过程，在线检测HCP、宿主DNA、Protein A等的含量[24]。(6)由于在去除杂质方面的优势，膜层析将会得到飞速的发展，未来工艺甚至可能完全基于膜层析而不是柱层析[25]。/pp　　参考文献/pp　　[1] 刘亚明,薛章.生物制药：迎接抗体药物的黄金时代.医药细分子行业研究报告,2009./pp　　[2] 陈志南.基于抗体药物的我国生物制药产业化发展前景.2008中国药学会学术年会暨第八届中国药师周论文集,2008./pp　　[3]Gail Dutton.Trends in Monoclonal AntibodyProduction.Feature Articles,2010, 30(4)./pp　　[4]孙文改,苗景赟.抗体生产纯化技术.中国生物工程杂志,2008,28(10):141-152./pp　　[5]《人用单克隆抗体质量控制技术指导原则》.NICPBP(中国药品与生物制品检定所),2003./pp　　[6]Capto adhere：用于生产单抗的两步纯化操作.GE Healthcare公司技术资料./pp　　[7]中空纤维滤柱分离纯化应用集锦.GE Healthcare公司技术资料./pp　　[8]中空纤维膜过滤技术在单抗生产中的应用.GE Healthcare公司技术资料./pp　　[9]Amersham Biosciences.Downstream Gab’02 Abstracts,Extended Reports from the 2nd International Symposium on DownstreamProcessing of Genetically Engineered Abtibodies and Related Molecules. PortoPortugal,2002,12-14./pp　　[10] R.Hahn,R.Schlegel,A.Jungbauer.Comparison of Protein A affinity sorbents.JChromatogr B,2003，790：35-51./pp　　[11] R.L.Fahrner,et al. Performancecomparison of Protein A affinity chromatography sorbents for purifyingrecombinant monoclonal antibodies.BiotechnolAppl Biochem,1999，30：121-128./pp　　[12] K.Brorson,J.Brown,et al.Identification of protein A media performanceattributes that can be monitored as surrogates for retrovirus clearance duringextended re-use.Journal ofChromatography A,2003，989：155-163./pp　　[13] R.Hahn,et al.Comparison of Protein A affinity sorbents Ⅲ,Life time study.J Chromatogr A,2006，1102：224-231./pp　　[14] S. Ghose,et al. Antibody Variable RegionInteractions with Protein A: Implications for the Development of GenericPurification Processes. Biotechnol Bioeng,2005，92(6)：665-673./pp　　[15]用复合配基阴离子交换柱去除单克隆抗体(Mab)的污染物.BioProcessInternational技术资料./pp　　[16]利用Mustang Q膜层析从Protein A纯化的单克隆抗体中去除污染. PALL LifeScience公司技术资料./pp　　[17]整合发酵和下游纯化的新技术：扩张柱床吸附技术.GE Healthcare公司技术资料./pp　　[18]余晓玲,米力，姚西英，陈志南.扩张柱床吸附层析与固定柱床层析纯化单克隆抗体的比较.中国生物工程杂志,2003,23(1):61-64./pp　　[19]High-throughput monoclonal antibody purification.GE Healthcare公司技术资料./pp　　[20]抗体纯化手册.GE Healthcare公司技术资料./pp　　[21]Purification Strategies to Process 5 g/L Titers ofMonoclonal Antibodies. BioPharm International技术资料./pp　　[22] T.Ishihara,T.Kadoya.Accelerated purification process development ofmonoclonal antibodies for shortening time to clinic:Designand case study of chromatography processes.J Chromatogr A,2007，1176(1-2)：149-156./pp　　[23] A.Cecilia,A.Roque,et al.Antibodies and Genetically Engineered RelatedMolecules:Production and Purification.BiotechnolProg,2004，20：639-654./pp　　[24] S.Flatman,I.Alam,et al.Process analytics for purification of monoclonal antibodies.JChromatogr B,2007，848：79-87./pp　　[25]ProcessChromatography:Five Decades of Innovation.BioPharmInternational技术资料./pp　　[26]双层滤板膜堆在单抗工艺上的大规模澄清过滤应用评估.BioProcessInternational技术资料./pp　　[27]Affinity Chromatography Media.Millipore公司技术资料./pp　　[28]ProSep Ultra Plus ChromatographyMedia.Millipore公司技术资料./pp　　[29]MEP Hypercel混合模式层析填料. PALL LifeScience公司技术资料./pp　　[30]Sartobind膜层析技术高效的蛋白纯化工具. SartoriusStedim公司技术资料./p

pstrong仪器信息网讯/strong 8月24日下午，“智护新生健康全球”联合国儿童基金会（UNICEF）海尔太阳能疫苗冰箱采购签约仪式暨第100000台疫苗冰箱下线仪式在海尔黄岛工业园生物医疗工厂隆重举行。联合国儿童基金会技术总监、全球疫苗联盟战略发展总监、青岛市出入境检验检疫局等领导及海尔生物医疗总经理刘占杰博士出席了仪式。本次联合国儿童基金会共采购1000万美元海尔太阳能疫苗冰箱，率先用于埃塞俄比亚的儿童疫苗安全储存。br//pp style="text-align: center"img src="http://img1.17img.cn/17img/images/201708/insimg/32c6cc85-cfd8-488b-903f-80895f85150e.jpg" title="6.jpg"//pp style="text-align: center "strong联合国儿童基金会采购签约仪式/strong/ppbr//pp style="text-align: center"img src="http://img1.17img.cn/17img/images/201708/insimg/29174fd0-2289-4d83-8c16-905b0ece3912.jpg" title="3.jpg"//pp style="text-align: center "strong海尔疫苗冰箱第10万台下线仪式/strong/ppspan style="color: rgb(31, 73, 125) "strong差异化产品和小微生态圈交互方案成就联合国全球大单/strong/span/pp　　为了改善非洲及落后国家儿童得不到及时地疫苗接种，危害生命健康的现状，世界卫生组织确定了《全球免疫战略规划》，要求2020年前非洲国家免疫覆盖率由目前20%提高到90%，同时，联合国儿童基金会启动了新一轮的全球免疫规划项目。/pp　　面对这一全球大单，海尔太阳能疫苗冰箱凭借差异化产品和小微机制下的生态圈交互方案，成功打破了所有欧美品牌的垄断，一举中标！一、差异化的产品：太阳能疫苗冰箱，打破了传统依靠电力和燃油驱动的产品，纯太阳能，完全不用电，更不用蓄电池；一次使用，保温长达7天，完全适合缺电或无电的非洲偏远地区，保证儿童接种疫苗安全；二、生态圈交互保障方案：搭建全球资源生态圈体系，各利益攸关方共建、共享、共赢，保障准时交付，稳定运行，全生命周期不坏的差异化优势成功超越所有竞争品牌；三、拥有独一技术门槛：A级防冻保护可实现箱内温度更均匀，保证疫苗不冻结；并通过世界卫生组织（WHO）23项严苛检验，国内唯一全冷链获得WHO/PQS权威认证，成功入选WHO采购目录，通过近乎完美的产品方案实力，最终赢得联合国儿童基金会的认可和美誉。并与海尔生物医疗签署疫苗冰箱长期采购协议，海尔生物医疗成为了UNICEF长期供应商。/ppspan style="color: rgb(31, 73, 125) "strong10年10万台，守护全球儿童健康/strong/span/pp　　此项目的签约，也迎来海尔疫苗冰箱累计第100000台下线。在全球，自2004年至今，海尔疫苗冰箱连续四次中标印度卫生部世界银行贷款项目，累计6万台。印度近万家基层医疗卫生机构全部使用专用疫苗存储设备，确保印度儿童疫苗安全接种得以普及。同时海尔疫苗冰箱相继进入埃塞俄比亚、尼加拉瓜为代表的非洲及拉丁美洲65个国家和地区；在中国，海尔医用冷藏箱也相继中标全国二十余省市“国家计划免疫”项目，中标率达80%。10年，累计10万台，保护了全球2亿儿童的健康，因为疫苗安全存储，带来的及时、安全的疫苗接种，使500万非洲新生儿免于疾病的侵袭和危害，这极大地解决了全球基层卫生防疫现状。海尔疫苗冰箱为全球基层卫生事业奉献了一个中国品牌的力量。/ppbr//pp style="text-align: center"img src="http://img1.17img.cn/17img/images/201708/insimg/e6f5aff1-f121-453d-986a-b714e0272c30.jpg" title="1.jpg"//pp style="text-align: center "strong第100000台海尔疫苗冰箱/strong/ppspan style="color: rgb(31, 73, 125) "strong基点，起点，只为全球用户健康的未来/strong/span/pp　　此时，采购签约仪式的圆满落幕，不仅体现了联合国组织用户对海尔疫苗冰箱的认可和信任，更是期望和希冀；累计10万台疫苗冰箱的下线，则是全球用户给予海尔生物医疗品牌和实力的表彰。/pp　　未来，海尔生物医疗将继续通过疫苗冰箱、超低温冰箱等低温冷链核心优势，向深冷存储、自动化存储扩展，做大做强低温冷链产品方案群，努力成为全球低温冷链行业第一品牌；同时整合全球资源，通过搭建社群生态圈，进入分子诊断，基因检测，细胞治疗等上下游产业链，为中国和全球用户的大健康服务。/p

7月25日，河南师范大学、郑州大学常俊标教授作为发明人，河南真实生物科技有限公司研发的口服小分子新冠病毒肺炎治疗药物阿兹夫定（Azvudine，简称FNC）注册申请获得国家药监局应急附条件批准。阿兹夫定片是我国自主研发的口服小分子新冠病毒肺炎治疗药物。2021年7月20日，国家药监局已附条件批准本品与其他逆转录酶抑制剂联用治疗高病毒载量的成年HIV-1感染患者。此次为附条件批准新增适应症，用于治疗普通型新型冠状病毒肺炎（COVID-19）成年患者。国家药监局要求上市许可持有人继续开展相关研究工作，限期完成附条件的要求，及时提交后续研究结果。FNC作为一种抑制病毒RNA依赖性RNA聚合酶（RdRp）的核苷类似物，能特异性作用于新冠病毒RdRp，从而抑制病毒复制。其药物靶向性强且长效，具有口服剂量低、效果好、副作用小、适应范围广的优势，且对新冠病毒变异株（阿尔法、贝塔、德尔塔、奥密克戎）有明显效果。由于该药物在靶细胞内半衰期超过120个小时，所以有望成为未来预防新冠肺炎的首选药物。新冠肺炎疫情暴发以来，常俊标教授联合河南真实生物科技有限公司首席科学家杜锦发博士、王朝阳董事长、刘勇常务副总，中国医学科学院蒋建东院士、王辰院士、彭小忠研究员，首都医科大学附属北京地坛医院张福杰教授，郑州大学第一附属医院余祖江教授、任志刚博士等带领的科研攻关团队投身科技抗疫一线。科研团队依托河南师范大学省部共建细胞分化调控与靶向药物国家重点实验室（筹）、国家药监局创新药物研究与评价重点实验室、河南省功能有机分子与药物创新重点实验室、河南真实生物科技有限公司、中国医学科学院药物研究院、中国医学科学院医学生物研究所、北京协和药厂、首都医科大学附属北京地坛医院、郑州大学第一附属医院等平台，克服种种困难和不利因素，完成了该药物的药理学、药代学、作用机制、药效学、临床试验等系列工作，并积极推动FNC抗新冠药物的研发和上市工作。图 | 常俊标教授，2022年3月起任郑州大学副校长2020年1月，河南师范大学作为项目承担单位，常俊标教授作为首席科学家的河南省新型冠状病毒防控应急科研攻关项目“抗新型冠状病毒的药物筛选”获河南省科技厅立项；2020年3月，申请专利“核苷类化合物在治疗冠状病毒感染性疾病中的用途”得到国家知识产权局受理；2020年4月，FNC获国家药品监督管理局治疗新型冠状病毒肺炎Ⅲ期临床批件，开始在国内开展治疗新冠肺炎的Ⅲ期临床试验。同期，研发团队与科技部国际合作司对接，争取在国外开展相关临床研究；2021年，FNC获得国外治疗新型冠状病毒肺炎Ⅲ期临床批件。在国内外Ⅲ期临床中，入组患者涵盖了新冠肺炎病例的轻症、中症及重症，并以病毒载量和临床获益作为评价指标，有利于对药物的疗效做出全面、综合的评价。2021年8月，河南师范大学作为项目牵头单位，常俊标教授主持的“新型核苷化合物的合成及抗新冠病毒（SARS-CoV-2）的活性研究”项目获国家自然科学基金重点项目立项资助。2021年11月，河南师范大学作为项目牵头单位，河南真实生物科技有限公司、中国医学科学院、北京协和药厂、首都医科大学附属北京地坛医院、中日友好医院等单位共同申报，常俊标教授主持的“抗新型冠状病毒小分子药物研发”项目获国家重点研发计划公共安全风险防控与应急技术装备应急专项立项。2022年4月，FNC治疗新冠肺炎的国内外Ⅲ期临床试验完成揭盲。

11月7日，卫生部全国细菌耐药监测网负责人肖永红教授表示，针对目前医生多凭经验用药的现状，我国卫生部门已着手制定抗菌药物的管理办法。　　此次国内报告的两例婴儿身上携带的NDM-1酶屎肠球菌病例，有可能是在医院内的环境中感染，这说明这种耐药基因可能是我们在用药的过程中产生的。　　肖永红表示，“超级细菌”事件已经引起了国家对于抗生素使用的关注，目前，卫生部正在制定抗菌药物管理办法，建立合理使用抗菌药物的科学体系，将对临床抗生素的使用进行规范和强化，同时，对医院使用的药品中，抗生素类药品所占的比例进行限定，“许多医生会在患者没有任何需要使用抗生素的情况下，擅自使用抗生素，这个办法出台后，就会有明确的规范，具有强制效力，对医生起到警示作用”。　　肖永红称，抗生素在我国不合理使用的情况很严重，按照世卫组织的规定，在100个住院病人中，使用抗生素的人数上限为30人，而我国却是70个人在用，比世卫宽松的标准高出了两倍多 就使用的剂量来说，100个住院病人每天用抗生素不应超过40份，但我国已达到了80份。　　卫生部公布的统计年报显示，住院患者中，仅有10%的人是因为细菌感染，加上院内感染、手术预防用药等，需要用抗生素治疗的比例在30%左右，但临床已经达到70%。　　不当使用抗生素的直接后果是耐药，以感染大肠杆菌的患者为例，如果是敏感菌导致，治疗仅需5000元，致死率为5%，但如果是耐药菌，死亡率将升至10%至15%，花费也将达到1.5万。

2013年1月16日，台湾地区“行政院”农业委员会发布农粮字第1021048062号令，订定发布“蛋黄果品种试验检定方法”全文11点，并自即日生效。如下：　　一、本检定方法依植物品种审议委员会组织及审查办法第八条规定订定。　　二、本检定方法适用于山榄科(Sapotaceae)蛋黄果属(Lucuma)蛋黄果( Lucuma nervosa A. DC.)的所有品种(包含人为杂交、自然实生或营养系变异)。　　三、检定机构的委任或委托，由“行政院”农业委员会依植物品种性状检定及追踪检定的委任或委托办法的规定办理。　　四、品种栽培试验性状检定的要项如下：　　(一)栽植时间：以每年春秋两季为原则。　　(二)检定材料：申请者应提供检定品种及对照品种的嫁接苗各十株以上，嫁接苗应健康具活力且未遭受主要病虫害感染，于每年十月下旬至一月中旬送达指定检定机构。检定植株非经检定机构同意，不得经任何药剂或化学药品处理。　　(三)栽培环境：以田间栽培为原则。因表现品种特性需要者，可参考品种说明书提供的栽培注意事项管理，以维持植株正常生长。　　(四)栽培管理：依蛋黄果惯行栽培法进行。因表现品种特性需要者，应参考品种说明书提供的栽培注意事项管理，以维持植株正常生长。　　(五)试验设计：田间设计采用完全逢机设计，至少二重复。总调查株数至少为五株。　　五、试验期间以完成二个生长周期的试验观察检定为原则。必要时，可由检定机构提经植物品种审议委员会(以下简称审议委员会)决定延长。　　六、检定地点以检定机构的所在地为原则。　　七、性状调查应依蛋黄果品种性状表(如附件)所列规定办理。　　八、对照品种应为可取得的已公开品种，选取性状最接近者，提经审议委员会审定后实施。　　九、申请品种的主要性状为对环境逆境或病虫害的抗耐性等特殊性状时，检定机构应依其特性拟订检定计划，提经审议委员会审定后实施。　　十、品种可区别性、一致性及稳定性的认定，应由检定机构完成检定报告书后，提经审议委员会审定。　　十一、性状检定过程如有疑义，应由检定机构或审议委员会参考相关国际规范处理。

国务院总理李克强9月24日主持召开国务院常务会议，部署完善固定资产加速折旧政策、促进企业技术改造、支持中小企业创业创新，决定进一步开放国内快递市场、推动内外资公平有序竞争。　　会议指出，顺应新技术革命潮流，推动中国经济向中高端水平迈进，必须更大力度推进企业技术改造。要用既利当前、更惠长远的改革办法，完善现行固定资产加速折旧政策，通过减轻税负，加快企业设备更新、科技研发创新，扩大制造业投资，促进大众创业，这对于传统产业&ldquo 破茧化蝶&rdquo ，增强经济发展后劲和活力，实现提质增效升级和持续稳定增长，具有重要意义。会议确定，一是对所有行业企业2014年1月1日后新购进用于研发的仪器、设备，单位价值不超过100万元的，允许一次性计入当期成本费用在税前扣除 超过100万元的，可按60%比例缩短折旧年限，或采取双倍余额递减等方法加速折旧。二是对所有行业企业持有的单位价值不超过5000元的固定资产，允许一次性计入当期成本费用在税前扣除。三是对生物药品制造业，专用设备制造业，铁路、船舶、航空航天和其他运输设备制造业，计算机、通信和其他电子设备制造业，仪器仪表制造业，信息传输、软件和信息技术服务业等行业企业2014年1月1日后新购进的固定资产，允许按规定年限的60%缩短折旧年限，或采取双倍余额递减等加速折旧方法，促进扩大高技术产品进口。根据实施情况，适时扩大政策适用的行业范围。会议要求加快落实上述政策，努力用先进技术和装备武装&ldquo 中国制造&rdquo ，推出附加值更高、市场竞争力更强的产品。　　会议认为，扩大全方位主动开放，打造内外资企业一视同仁、公平竞争的营商环境，是我国长期坚持的重大政策取向。目前我国国际快递业务已基本对外资开放，主要城市国内快递业务也已对部分外资企业分批开放。依据我国加入世界贸易组织时的承诺，进一步放开国内市场，让国内外快递企业同台竞争，有利于倒逼国内企业改善经营管理、提升服务水平，使广大消费者有更多选择。同时，推动快递业成为现代服务业发展的&ldquo 黑马&rdquo ，也能促进物流业上台阶，进一步搞活流通、拉动内需，增加社会就业，为稳增长、调结构、惠民生积极出力。会议决定，全面开放国内包裹快递市场，对符合许可条件的外资快递企业，按核定业务范围和经营地域发放经营许可。会议强调，要坚持放管结合，确保快递行业有序健康发展。一是完善经营许可程序，加强资质审核。简化手续，提高效率。二是推进快递与电子商务、制造业联动发展，与综合交通运输体系顺畅对接，支持解决城市快递车辆通行难等问题。保障寄递安全。三是鼓励快递企业兼并重组，完善和落实重组备案、外资并购审查等制度。加强代理和加盟企业管理，严肃查处非法经营、超范围经营、违规代理等行为。让快递这一朝阳产业更加红火，为刺激居民消费创造条件，便利广大商家和亿万群众。　　会议还研究了其他事项。

近期，全国疫情卷土重来，确诊数字大幅增长，部分城市学校停课、企事业单位停摆，疫情对经济生活的影响再度显现，科学仪器行业也再次面临新冠疫情带来的冲击。疫情之下，我们看到了特殊时期仪器同行们的守望互助，以及抗疫路上科学仪器人的最美“逆行”...... 对此，仪器信息网特别开展了“2022年仪器圈抗击新冠疫情纪实”专题活动，广泛征集科学仪器企业在本轮抗击疫情中的突出事迹，展示弘扬仪器圈英勇抗击疫情的事迹与精神。本期，让我们一起来看一下，丹东百特仪器有限公司的抗疫纪实。4月25日，为应对突然爆发的新冠疫情，中国最大的边境城市丹东实行全域静态管理，整座城市按下了暂停键。丹东百特员工紧急行动，积极投身抗击疫情，妥善安排工作生活。俗话说患难见真情。一个企业、一个品牌和一个团队的担当，不是看它说什么，而是看它怎么做。丹东百特仪器有限公司作为国家高新技术企业，在做优做强企业的同时，始终勇于承担社会责任，积极参与和支持家乡的抗击疫情工作。在丹东实行静态管理的第二天，公司就雪中送炭，率先向本次疫情的重点区域——丹东市振兴区捐赠10万元抗疫资金，为尽快战胜疫情贡献一份力量。早在三年前新冠疫情爆发之初，百特就向丹东市慈善总会捐助10万元抗疫资金，向社会各界捐赠一百多只红外测温枪和大批口罩等防疫物资，百特全体党员还共同捐赠一笔5万余元的“特殊党费”作为抗疫资金，为当时抗击疫情和复工复产做出了贡献。三年来，丹东百特与全体员工在扶贫帮困、捐资助学、抗击疫情等方面捐款捐物累计超过130万元，用实际行动彰显了责任与担当。实行居家办公的第二天，公司召开了全体职工视频大会。董青云总经理叮嘱大家，要相信党和政府，积极参与疫情防控工作，同时做好自身防护，不信谣不传谣。他对公司员工侯建和刘贵贤成主动报名社区抗疫志愿者的行为提出表扬，并鼓励其他年轻员工积极报名，为打赢疫情防控歼灭战贡献力量。居家办公期间，董青云总经理要求公司对外开展线上培训、线上销售、远程调试、远程服务等工作，做到停工停产不停服务；对内安排各部门和岗位完善技术方案、撰写项目报告、分析实验数据、开展技术和工作标准规范学习等一系列活动，为复工复产后的百特增添更加强劲的动力。视频会议上，董青云总经理向全体百特员工郑重承诺：“无论停工停产多长时间，大家的工资都会照常发、按时发。”掷地有声的承诺给全体员工增添了战胜疫情的信心和力量，同时也表达了公司与员工风雨同舟、共克时艰的坚定决心。讲诚信、尽责任，百特是一个温暖的大家庭。针对居家隔离带来一系列的生活不便和问题，公司领导和全体员工积极行动，为在方舱医院集中隔离的员工孩子送热水瓶和衣物，并对员工进行心理疏导和安慰，同时为生活用品准备不足的员工家里联系送去粮油米面、肉蛋蔬菜，为家有需要就医老人的员工联系救护车上门接送等。公司一位员工的父亲长期患有重病，需要定期到医院做透析，由于居住区被划为重点封控区，这项以往平常的事便成了难题；公司上下积极联系有关部门和领导，街、区、市领导和疾控部门紧急调动资源，顺利解决了这个难题。对此，丹东市政协宋立跃主席动情地说：“当官不为民做主，不如回家卖红薯。解决老百姓遇到难事儿了是领导义不容辞的责任，有事尽管告诉我们，我们一定全力以赴。”有这样积极行动的政府和体察民情的领导，丹东一定会尽早战胜疫情，重现生机。 丹东百特作为中国粒度测试领域的领军企业，作为丹东本地的一家著名的高新技术公司，在平常时期以为用户提供高性能粒度仪器和专业服务为己任，在疫情期间也必将尽到企业的社会责任，不忘初心，牢记使命，风雨同舟，共克时艰。

2023年9月20日禾信仪器(688622)发布公告称公司于2023年9月19日召开业绩说明会。仪器信息网摘录科学仪器行业相关内容以飨读者。　　问：日本启动福岛核污染水排海,对未来业绩是否有影响? 日本启动福岛核污染水排海,公司是否已有订单,对未来业绩是否有影响? 公司在碳达峰、碳中和方面布局情况?　　答：公司一直关注日本排海涉及到的水放射性元素检测，也在关注各个研究机构发布的放射性元素的种类，目前公司的电感耦合等离子体质谱(ICPMS)、磁质谱、单颗粒气溶胶质谱(SPMS)等相关设备，均可在此场景下发挥作用。目前尚无相关订单，仍在与相关的科研及业务单位进行测试、论证中，该次污染水排海事件对质谱仪器的需求情况、仪器的匹配性等，尚在论证阶段中，暂无法预估对公司经营业绩的影响，敬请广大投资者注意投资风险，谢谢!　　另，公司基于国家碳达峰、碳中和规划目标，在碳排放规划咨询服务、碳监测网络建设、碳排放量核算体系等方向均有所布局，公司通过硬件和服务相结合，落实减污降碳、助力实现双碳目标，目前处于市场拓展阶段，亦已取得相关订单，谢谢!　　问：公司医疗及实验室领域等新业务领域产品业务拓展情况?　　答：尊敬的投资者您好，医疗、实验室新业务领域是公司中短期内重点拓展方向，也是未来业绩重要增长点，目前公司医疗、实验室领域等新业务拓展顺利。随着国家政策助力、业务有序开展及市场逐渐开拓，公司在医疗及实验室等新业务领域的订单和收入有望逐步增加，谢谢!　　问：医疗反腐对贵公司是否有影响?　　答：尊敬的投资者您好，公司目前医疗领域收入占比不大，因此医疗反腐短期来看对公司的影响较小。从长远来看，医疗反腐有助于推动医疗行业各个环节的规范化、合规化，对促进行业公平竞争和技术创新具有积极影响，有利于推进医疗领域的持续健康发展，谢谢!　　问：公司在碳达峰、碳中和方面布局情况?　　答：尊敬的投资者您好，公司基于国家碳达峰、碳中和规划目标，在碳排放规划咨询服务、碳监测网络建设、碳排放量核算体系等方向均有所布局，公司通过硬件和服务相结合，落实减污降碳、助力实现双碳目标，目前处于市场拓展阶段，亦已取得相关订单，谢谢!　　问：贵公司的竞争对手有哪些?这些竞争对手哪些是做的比较好的?贵公司与竞争对手相比有哪些优势，贵公司哪些方面做了而竞争对手没做?　　答：尊敬的投资者您好，国际上，公司主要竞争对手分析仪器行业巨头主要包括沃特世、丹纳赫、布鲁克、安捷伦、赛默飞、岛津等 国内的主要竞争对手主要包括天瑞仪器、聚光科技、钢研纳克等。　　公司经过多年的技术积累，质谱产品在环境监测等领域已经完成产业化并获得市场认可，在国产品牌中具有较强的竞争优势。在医疗健康、食品安全等通用质谱应用领域较国际竞争对手产品性能尚有一定差距。但在相关政策的指引下，公司正不断加大研发投入，逐渐缩小与国际竞争对手的技术差距。公司的竞争优势主要体现在(1)在细分领域市场占有率高，具备产品及服务优势，且可以不断推出具有竞争力的差异化产品和服务 (2)全面布局通用质谱产品线，相比更加全面，在国产替代的大形势下，市场前景乐观 (3)具备新领域的市场拓展能力，通过客户共建及标杆示范，新产品和新服务能够很快被客户接受 (4)具备较快的新产品研发、迭代能力 (5)能够为客户提供综合服务，快速满足市场需求。与其他国产厂家相比，公司坚持以正向研发为主，一直专注于质谱技术的开发与应用，充分发挥已取得的先发优势，不断提升核心竞争力。　　禾信仪器(688622)主营业务：质谱仪研发、生产、销售及技术服务。　　禾信仪器2023中报显示，公司主营收入1.58亿元，同比上升44.23% 归母净利润-3431.49万元，同比下降101.99% 扣非净利润-4084.05万元，同比下降30.98% 其中2023年第二季度，公司单季度主营收入1.01亿元，同比上升56.95% 单季度归母净利润-1795.31万元，同比下降285.66% 单季度扣非净利润-1817.29万元，同比下降48.34% 负债率54.19%，投资收益-84.67万元，财务费用350.16万元，毛利率48.48%。

我国的抗生素一半用于临床，一半用于畜牧养殖业　　动物产品中残留抗生素，已经成为耐药菌产生的重要原因之一　　广州市妇婴医院曾抢救过一名体重仅650克、25个孕周的早产儿。头孢一代，无效!头孢二代，无效!头孢三代四代，仍然无效!再上“顶级抗生素”：泰能、马斯平、复兴达……通通无效!后来的细菌药敏检测显示，这个新生儿对7种抗生素均有耐药性!　　新生儿耐药或来自母亲。孕妇在吃大量抗生素残留肉蛋禽时，很可能将这些抗生素摄入。动物产品中残留抗生素，已经成为耐药菌产生的重要原因之一。　　中国社会科学院农村发展所尹晓青副研究员对山东、辽宁的部分农村畜禽养殖户进行了调查。调查发现，为了避免感染疾病，不同类型的生猪养殖户广泛使用工业饲料。工业饲料一般被认为是抗生素、激素及其他添加药物的载体。被调查养殖户中，有50%养殖户在饲料里不同程度地添加了抗生素及其他药物。　　细菌性疾病是导致动物患病的主因。专家认为，养殖业之所以存在不合理使用抗生素现象，主要源于动物防沼疾病的需要。面对比市场风险更为严峻的传染性疾病风险，一些养殖户不得不为畜禽下猛药，凭经验饲养、凭感觉用药，很容易造成畜禽产品抗生素残留超标。　　事实上，兽用抗生素用量远远超过了动物治疗疾病的需要量。北京饲料工业协会会长谢仲权介绍说，20世纪60年代，西方国家将生产抗生素的废渣用作饲料喂猪，可使猪或其他动物长得更快。后来，他们把所有抗生素发酵残渣都用作家禽、家畜的饲料添加剂。这种添加剂是人工合成的，在动物体内无法得到有效降解，形成了抗生素残留。动物源性食品中发生抗生素高残留的几率就大大增加了。　　中国农业科学院饲料研究所副所长齐广海研究员认为，饲料中抗生素的合理使用能够起到提高动物生产性能，改善饲料转化效率，预防疾病等作用。但抗生素的长期使用和滥用带来的负面作用也引起关注，主要体现在：一是病菌产生耐药性问题 二是引起动物免疫机能下降，死亡增多 三是畜禽产品中的药物残留问题，直接危害人类的健康。动物产品中出现药物残留的不外乎两个方面，一是允许使用抗生素的非法超量添加，二是未经批准抗生素的非法添加。　　北京大学临床药理研究所肖永红教授等专家调查推算，中国每年生产抗生素原料大约21万吨，其中有9.7万吨抗生素用于畜牧养殖业，占年总产量的46.1%。抗生素的滥用在全世界的养殖业都是非常普遍的，但在中国显得更为严重。　　动物产品残留抗生素的量一般极低，对机体的直接毒性也很小，但长期食用后，可在体内蓄积，给人体健康带来危害。专家提醒说，经常食用含有抗生素的“有抗食品”，即使是微量的，也可能使人出现荨麻疹或过敏性症状及其它不良反应 长期食用“有抗食品”，消费者的耐药性也会不知不觉增强，等于在人体内埋下一颗“隐形炸弹”，将来一旦患病，很可能就无药可治。　　养殖业违规使用抗生素现象依然存在，加强监管“有抗食品”刻不容缓　　据记者了解，关于饲料中抗生素的使用，我国已经有严格的规定：仅有少量抗生素可以作为促生长剂在饲料中使用，而且对不同动物不同生理阶段使用抗生素的种类、剂量以及停药期有严格规定。　　尽管我国饲料中药物的使用有严格规定，问题主要出在非法使用。齐广海说，我国目前要做到不在饲料中使用抗生素很难，美国这样的发达国家尚做不到。　　齐广海认为，目前在养殖模式上有一种误区，认为散养或小规模饲养的畜禽由于不吃工业饲料，安全性比规模化养殖要高。事实上，大规模饲养由于饲养管理比较规范，动物在饲养过程中不易患病，需要用以治疗的抗生素用量少，虽然饲料中可能合法添加促生长类抗生素，但整个饲养过程中使用的抗生素总量并不高。二散养条件下由于环境较差，畜禽容易患病，往往需要使用抗生素治疗疾病，因此散养模式下使用的抗生素也不一定比规模化养殖少。　　中国社会科学院中医药事业国情调研组在调研中发现，中小养殖户不仅大量使用具有严重毒副作用的淘汰类别抗生素，就连人类还在试用的某些抗生素也已经用于畜禽鱼类。许多畜禽鱼不是病死的，而是过量用药致死。　　1996年，我国颁布的食品卫生标准中，对兽药的残留检测还只限于四环素族抗生素一项。入世后，发达国家对我国出口贸易设置壁垒。例如2002年出口欧盟的蜂蜜中氯霉素超标，造成了出口企业的数亿美元的损失。　　近年来，我国已经开始重视动物性食品的药残问题。2002年，农业部修订发布了《动物源性食品中兽药最高残留限量》。但是，部分还在使用的兽药渔药，还没有制定药物残留标准。部分兽药(含治疗药和禁用药)的残留检测方法还未建立。　　齐广海呼吁，有关部门应该积极行动起来，从保障人民健康的角度，重视动物性食品中药残的监管及其相关技术标准制定工作，加强监管“有抗食品”刻不容缓。　　养防并举，减少抗生素使用，从源头上解决食品安全问题　　正是鉴于“有抗食品”的危害性，世界卫生组织已成立了慎用抗生素联盟，其成员包括90多个国家，各国采取严厉的手段限制使用抗生素。据悉，瑞典1986年成为首个在动物饲料中部分禁用AGP(抗生素生长促进剂)的国家。自2006年1月1日起，欧盟全面执行此项禁用。美国、日本及我国都出台了相似的法律法规，限制或者禁止抗生素在饲料中的使用。　　专家建议，在动物源性产品生产过程中，要借鉴欧盟的做法，不断完善各类药物和化学合成饲料添加剂的相关管理规定 大力推行、严格执行农产品标识管理，为消费者提供详细的信息，帮助消费者理性选择。同时健全食品生产到餐桌的全程安全监控体系，对动物产品实行市场准入制和产地追溯制，对滥用抗生素的养殖者和销售药物残留超标动物产品的违法行为，依法严惩。　　中国社会科学院中医药事业国情调研组执行组组长陈其广教授介绍，多年来，为克服现代化学合成饲料添加剂与抗生素药物的滥用，我国一些专家与养殖企业一直在探索运用中草药解决抗生素污染问题。　　谢仲权教授不仅出版了《天然物中草药饲料添加剂大全》等学术专著，还主持制定了《天然植物饲料添加剂通则》等国家标准。广东汕头东江畜牧有限公司在养殖行业提出动物“未病先防——健康养殖”的新理念，制定出可操作性强且实用价值高的“治未病”动物保健技术体系。北京大兴区推广“生态环保养猪模式”，用北京洪天力药业有限公司研发的“天然植物免疫增强剂”替代抗生素，既解决了猪肉中的药物残留问题，又提高了出栏率，改善了猪肉品质。　　谢仲权指出，与化学合成物相比，天然物用于饲料添加剂的优势主要有：一是其营养既可促进肌肉生长，又能调控肉的品质，避免了只注重提高畜禽鱼的生长速度而忽略肉质改善的缺陷 二是天然物添加剂在畜禽鱼体内发挥有效作用后可被分解，没有毒害与残留 三是不产生抗药性，可长期使用。　　齐广海认为，抗生素替代品(如微生态制剂、寡糖、抗菌肽等)的研制成为各国学者的研究热点，但目前看来，使用单一产品替代抗生素的难度很大，采用集成创新的综合技术也许是更为现实的选择。　　我国著名畜牧学专家张子仪院士提出，对待畜禽疫病，要在“防重于治”的基础上强调“养重于防”或“养防并举”，增加动物自身的抗逆能力，在“养”字上狠下功夫，这可能才是真正减少抗生素的使用、保障动物性安全的真谛。　　陈其广认为，在改善动物养殖环境的同时，深入发掘利用天然物中草药的优势，改变目前过度依赖化学物质与抗生素作为饲料添加剂和兽(禽、鱼)药局面，创造中国特色的生态养殖新模式，可以从源头上解决食品安全问题。

本篇继上一篇“实用建议：“如何合理设计稳定的冻干蛋白配方（一）”继续为大家分享蛋白样品冻干的理想赋形剂有哪些、基于成功蛋白冻干配方会导致Final失败的一些细节问题等。 》》》对于蛋白样品，理想的赋形剂有哪些？从冻干对蛋白的所有危险以及我们需要在各个环节考虑的所有因素来看，快速开发一个稳定的蛋白配方看起来似乎是不可能的。幸运的是，如果我们能够采用合理的方法对配方进行很好的设计，大多数的配方问题是可以得到快速解决。这里，我们主要是对初始配方成分的选择提供基础。在一些情况下，初始的配方很有可能就是走向市场的Final产品。给定的组分，进行不同微小的修改，已经被成功地用于蛋白药物。需要强调的是对于冻干配方，在能够提供良好稳定性和结构的情况下，成分越简单越好。所加入的赋形剂都须要有数据证明对配方起有益的作用。01给定蛋白质维持稳定性的具体条件对于一些通用型的稳定剂，可以有效地保护绝大多数的蛋白质，在选择这些稳定剂之前，我们有必要通过优化影响蛋白物理和化学稳定性的具体因素来选择合适的稳定剂。影响蛋白物理和化学稳定性的具体因素：1. 避免极端的pH值可以显著降低蛋白脱氨基的几率。而且，通过优化溶液的pH值，可以显著提高蛋白在冻干过程中抵抗去折叠的能力。2. 还应该研究其他能提高蛋白质稳定性的特异性配体（通过增加去折叠的自由能）。肝素和其他聚阴离子对生长因子的稳定性影响就是一个很好的例子。3. 其它需要考虑的重要因素是离子强度对蛋白的去折叠和聚合的影响。须意识到，在预冻过程中，由于冰的形成将溶液浓缩，离子强度可增加50倍。因此负责原料药纯化和做药物配方前研究的人员已经对这些问题有了深刻的认识，配方科学家应该在着手设计冻干配方之前与他们进行沟通。即使在针对蛋白质稳定性优化的特定的溶液条件下，但是如果样品需要幸免于冻干的损害并长期保存，有必要加入一些其它的保护剂。首先，我们考虑一些已经用在冻干蛋白配方中的成分，但它们不能提供蛋白的稳定性，而且可能会促进蛋白在储存期间的破坏。我们将提供一个简单、有效的思路，并且讨论选择这些成分的原理。02不能提供蛋白稳定性的赋形剂部分多聚物作为赋形剂的优缺点在冻干工艺的快速开发过程中，为了获得一个强壮的蛋糕结构，一些多聚物，如葡聚糖，羟乙基淀粉，因具有较高的塌陷温度，导致Final产品的Tg也会比较高，常常是受欢迎的赋形剂。不好的是，这些多聚物在冻干过程中不能抑制蛋白结构的去折叠，因此在后续的储存中不能提供稳定性。无法抑制冻干诱导变性的原因大概是聚合物过大而无法与蛋白质氢键合，无法代替脱水过程中损失的水，或者是因为聚合物与蛋白质形成了分离的无定形相。尽管当这些多聚物单独使用时不是一种很好的稳定剂，但是经证实，如果其结合双糖稳定剂可以具有较好好的作用。冻干过程中的有效稳定剂对大量的化合物进行测定，显示在冻干过程在较有效的稳定剂是双糖，但是避免使用还原性糖。还原性糖在冻干过程中可以有效抑制蛋白结构的去折叠，但是在干燥样品的储存过程中，可以通过美拉德反应（糖的羰基和蛋白质上的游离氨基）降解蛋白，结果形成含有降解蛋白的棕色糖浆，而不是含活性蛋白的白色蛋糕状结构。通常，我们减缓这个过程的方法是将样品储存在零度以下，这就失去了产品冻干的意义，这些还原性的糖包括：葡萄糖，乳糖，麦芽糖，麦芽糊精等。在早期的研究中，晶体类的填充剂如甘露醇，甘氨酸在冻干过程中不能提供蛋白很好的稳定性，但是，一些配方使用了这两种物质的混合物，并且成功地推向了市场。在这些案例中，甘露醇和甘氨酸适当的比例可以导致一大部分的化合物保持无定形状态。这部分无定形状态的化合物足以抑制冻干过程中蛋白的去折叠并且提供长期储存的稳定性。但是建议谨慎选择这种方法，因为达到合适的工艺条件再加上合适的赋形剂比例，既耗时又很难办到的。03赋形剂的合理选择如何合理的选择赋形剂？案例分享举个具体的案例说明，假设：1. 蛋白药物的浓度定在2mg/ml；2. 主要的降解途径是冻干后或复水后蛋白的聚合以及储存期间蛋白的脱氨基；3. 优化具体的条件（如用柠檬酸盐缓冲液控制pH为6）只能将冻干和复水后聚合程度降到10%，尽管样品在低于Tg温度的20℃下进行储存脱氨基速度仍然不能接受。加入晶体类的膨胀剂，如甘露醇，保持样品强壮的结构及良好的外观。在这种情况下，主要缺少的成分是非还原性双糖，其在干燥样品中会与蛋白形成无定形的结构，作为主要的稳定剂，主要选择蔗糖或海藻糖。它们在预冻阶段能够很有效地保护蛋白并且能够很好的抑制复水过程中蛋白结构的去折叠。预冻阶段的保护取决于初始糖的总浓度，有时，超过5%（w/t）的浓度可以尽可能大程度地保持蛋白的稳定性。相反，在干燥阶段，蛋白的保护取决于Final糖和蛋白的质量比。一般来说，糖和蛋白的重量比至少为1:1时，可以提供较好的稳定性，当达到5:1时，可以达到很佳的稳定性。保持蛋白的浓度不变，选取一定范围的糖浓度进行筛选和检测，通过干燥样品中天然结构保留率以及复水后蛋白聚合降低的程度来确定最合适的浓度。一般来说，合适的糖浓度，可以在冻干过程中提供蛋白很好的稳定性，并且如果Final样品的Tg高于储存温度，在后期的储存期间也可以提供蛋白较好的稳定性。例如，假定最高的储存温度为30℃，那么Final产品的Tg ＞50℃应该是稳定的，但前提是Final样品的含水量需要达到允许的水平，因为水分的存在会降低样品的Tg。可以使用DSC检测每种样品的Tg值。蔗糖/海藻糖如何选择？蔗糖和海藻糖，作为两种常用的稳定剂，均有其优势和劣势，可根据不同的情况进行选择：● 在任何水分含量的样品中，海藻糖均会有较高的Tg，因此较为容易冻干。另外Tg ＞50℃的条件可以允许样品有较高的残留水分。然而，技术工程师应该能够针对这两种双糖设计经济有效的工艺。如果样品中蛋白浓度较高，可以提高Tg，这样就会弱化海藻糖的作用；● 与蔗糖相比，海藻糖更能抵抗酸解，双糖水解后会产生还原性的单糖，这是需要避免的。通常情况下，如果pH不是很低，如pH4左右或更低，这个应该不是很大的问题；● 蔗糖在冻干过程中抑制蛋白去折叠方面看似比海藻糖更有优势，当蛋白在预冻阶段非常不稳定（需要较高的糖浓度）和/或蛋白浓度较高时，这种优势更明显。海藻糖的相对不稳定性是由于在预冻和干燥过程中其更易于与蛋白之间产生相分离。对于给定的配方，这是否会有问题不能被预测，因此，每种制剂配方都需要检查其保护蛋白的能力。表面活性剂的作用在这里，我们案例中的配方可能就比较完整了，就像许多蛋白质的情况一样。然而，我们假设，即使蔗糖完全抑制可检测的蛋白质去折叠，正如用红外光谱对干燥固体的结构分析所评估那样，在复水后，仍然有1%的聚合蛋白。因为在原始的样品中是没有任何聚合的，假设在冻干过程中，一小部分蛋白发生了去折叠，在复水后，部分这些分子又重新折叠，但是部分聚合在一起。这个实际上看起来是个很普遍的问题，就像在冻干之前一些处理造成的聚合。幸运的是，通过在配方中加入一些非离子型表面活性剂，如聚山梨醇酯（吐温）通常可以抑制蛋白的聚合。要求的浓度通常比较低（＜0.5% w/v），通过将表面活性剂滴定到包含所有其它组分的冻干制剂中，可以识别出理想浓度。应避免加入过量，因为表面活性剂在室温下是液体的状态，如果浓度较高，会降低配方的玻璃态转变温度。然而，通常在优化蛋白质稳定性所需的非常低的浓度下，不会有问题。表面活性剂看作是画龙点睛，通常在冻干产品配方中加入表面活性剂是有利的，可以抑制处理过程中界面引起的去折叠和聚集（如起泡夹带或瓶-液界面引起的）。最重要的是表面活性剂在冻干/复水过程中抑制聚合的能力，目前还不太清楚表面活性剂的保护在哪一步起作用的。有资料证明，表面活性剂在冻融及复水过程中可减少蛋白聚合并且在预冻阶段有助于抑制蛋白的去折叠，对干燥固体中聚集物特定红外波段的检查表明，表面活性剂可以抑制冻干过程中产生的聚集。在复水过程中，曲折叠分子的聚合能通过表面活性剂得到抑制，猜测是通过分子之间的相互作用和/或作为一种润湿剂，加速冻干产品的溶解。如果显示表面活性剂在复水过程中是有益的，则可以通过在稀释剂中加入表面活性剂来达到这种效果。 》》》还有哪些意想不到的危险可能会导致失败？尽管根据上述给出的建议，对于给定蛋白，我们可以设计出成功的配方，但是，还有其他一些问题可能会导致Final失败，特别是在长期储存期间。● 赋形剂中经常会有一些污染物，这些会导致蛋白快速的化学降解，糖类和甘露醇中会含有过渡金属元素，表面活性剂可能被过氧化物污染，所有的这些可以促进蛋白的氧化；● 在储存过程中，水分从胶塞转移到产品，引起水分参与的降解，直接损坏蛋白，并且降低蛋白的Tg,加速蛋白的降解，特别是当储存温度高于Tg 时；● 即使在高温（如40℃）下的储存稳定性研究中，一切都表现出理想的状态，但有一个常见的，但很少报道的事件可能是灾难性的，这个问题可以用下面的故事来说明。产品在实验室中在40℃下储存可以保持几个月的稳定性，在冬季，产品在运输过程中也保持良好的稳定性，没有来自消费者的问题报告，然而，有时在夏季，运输后，在室温下储存仅2周后发现产品过度降解，用差示扫描量热仪DSC对一开始的干燥粉末进行了检查，给出了合理的解释，结果发现，制剂中的甘露醇没有全部结晶，而是形成了Tg约为45℃的亚稳玻璃态，当在夏季运输过程中，超过了这个温度时，甘露醇变发生结晶，最先与甘露醇结合的水被转移到了剩余的无定形相中，蛋白相的水含量增加，降低了它的玻璃化转变温度，因此，加速了蛋白质的降解。这个问题可以使用DSC设计合理的退火方案使甘露醇再预冻阶段全部结晶来避免，另外也可以通过调整甘露醇的浓度，降低残留水分含量，使甘露醇即使在45℃的条件下也不会结晶。 》》》对于给定的蛋白药物，这些信息足够吗？对于大多数的蛋白，上面给出的建议一般会设计出成功的配方，但是，每种蛋白都有其独特的物理化学特性和稳定性要求。因此，针对每种不同的蛋白，配方也需要自定义设计。结合蛋白本身的特性知识以及选择合理的赋形剂可以快速设计出稳定的冻干蛋白配方。最后，在快速冻干工艺中保持干物质的物理性质和在干燥后获得天然的蛋白质之间需要折衷，研究表明：当蔗糖结合葡聚糖一起使用时，由于蔗糖的作用，蛋白质的天然结构可以保留在干燥的固体中；葡聚糖的存在提高了制剂的Tg，并提供了一种无定形的填充剂，快速干燥的同时保留了所需的蛋糕性质；其他的一些聚合物有可能提供与葡聚糖相同的优势，如羟乙基淀粉也具有较高的Tg，通常比葡聚糖更容易接受用于肠胃外给药。期望可以合理地利用这些多聚物作为Tg的调节剂，使得制剂更稳定，更容易快速冻干。莱奥德创冻干技术分享关注“莱奥德创冻干工场“，立即获取冻干线上技术分享内容。基于对于冻干研发的一些考量，莱奥德创创建了金字塔冻干技术分享平台：包含了从冻干理论基础，到配方和工艺开发，再到放大及生产，以及进阶的设备管理和线上线下专题内容分享。内容结合了来自Biopharma的冻干理论指导体系、来自于莱奥德创产品经理及应用工程师的实践经验总结及国内外专家的专题内容。获取方式Step 1：关注公众号 扫码关注莱奥德创公众号Step 2：点击菜单栏“冻干讲堂” Step 3：点击你感兴趣的内容Banner Step 4：开始学习 如果您对上述设备或冻干服务感兴趣，欢迎随时联系德祥科技/莱奥德创，可拨打热线400-006-9696或点击下方链接咨询。译自：《Rational Design of Stable Lyophilized Protein Formulations:Some Practical Advice》 John F.Carpenter,Michael J.Pikal,Byeong S.Chang,Theodore W.RandolpH pHarmaceutical Research, Vol.14,No.8,1997* 如有理解错误之处，还请参考原文关于莱奥德创冻干工场上海莱奥德创生物科技有限公司专注于提供前沿的冻干设备应用和制剂开发相关服务，依托于合作伙伴加拿大ATS集团SP品牌和英国Biopharma Group等的紧密合作，致力于促进中国生物医药技术创新升级，助力中国大健康行业的持续发展。莱奥德创在上海及广州设有实验室，拥有专业的技术团队及国内外专家支持体系。莱奥德创面向生物制药、食品科学等各个领域行业客户，提供冻干研发、放大、委托生产及培训等服务。前期研发● 产品配方特征研究:共晶点温度(Te)、塌陷温度(Tc)、玻璃态转化温度(Tg'、Tg)测定等；● 实验室工艺开发：冻干工艺开发:冻干制剂配方开发，工艺确定，申报材料撰写；● 冻干工艺优化：利用中试冻干机上PAT工具优化及缩短工艺；● 冻干产品质量指标测试：水分含量，冻干饼韧度分析；● 咨询服务：如产品外观问题、产品质量问题、其他troubleshooting等；工艺放大/技术转移● 冻干工艺转移/放大: 远程技术指导+现场服务；● 小批量冻干生产(NON-GMP)，临床一期生产（GMP）；其他业务● 企业小团队线上线下培训服务：冻干原理，工艺开发，设备使用维护等；● 冻干设备租赁服务。400-006-9696www.lyoinnovation.com莱奥德创冻干工场中国(上海)自由贸易试验区富特南路215号自贸壹号生命科技产业园4号楼1单元1层1002室德祥科技德祥科技有限公司成立于1992年，总部位于中国香港特别行政区，分别在越南、广州、上海、北京设立分公司。主要服务于大中华区和亚太地区——在亚太地区有27个办事处和销售网点，5个维修中心和2个样机实验室。30多年来，德祥一直深耕于科学仪器行业，主营产品有实验室分析仪器、工业检测仪器及过程控制设备，致力于为新老客户提供更完善的解决方案。公司业务包含仪器代理，维修售后，实验室咨询与规划，CRO冻干工艺开发服务以及自主产品研发、生产、销售、售后。与高校、科研院所、政府机构、检验机构及知名企业保持密切合作，服务客户覆盖制药、医疗、商业实验室、工业、环保、石化、食品饮料和电子等各个行业及领域。德祥始终秉承诚信经营的理念，致力于成为优秀的科学仪器供应商，为此我们从未停止前进的脚步。我们始终相信，每一天都在使这个世界变得更美好！

p　　在80后90后的童年记忆中，有一个著名的历史故事，司马光砸缸。当陶土做的水缸被石块砸了一下，就破了一个洞，水流出来了，掉在缸里的孩子也得救了。/pp　　而对于女孩子来说，跳皮筋是洋溢着欢快笑声的集体游戏，在牛皮筋的一勾一拉中，旋转，跳跃，不停歇。/pp　　这两个童年记忆，其实包含着一个自然界的普遍规律，玻璃、陶瓷这样的无机材料通常都是又脆又硬的，没有什么弹性，而橡胶这类的有机材料韧性好，弹性足，可以反复拉伸。/pp　　如何让无机材料变得像有机材料那样可以回弹，是世界很多科学家的努力目标。/pp　　这其中就有浙江大学高分子科学与工程学系的高超教授团队。最近，他们的研究取得了突破性进展，设计制备出了高度可拉伸的全碳气凝胶弹性体，并且表现出优异的性能，今后有望应用在柔性器件、智能机器人及航空航天等多个领域。/pp style="text-align: center "　　img src="http://img1.17img.cn/17img/images/201804/insimg/99d0c873-4a30-4542-90ee-86367a879173.jpg" title="3.jpg"//pp　　论文发表在国际著名期刊《自然通讯》，共同第一作者为博士生郭凡、姜炎秋，通讯作者为许震特聘研究员、高超教授。br//pp　　strong打破物质的本性/strong/pp　　材料科学的发展一直与人类文明密切相关。现如今我们已经拥有了各种各样的材料。可是让科学家烦恼的是，无机材料耐高低温但没有弹性，有机材料有弹性却又不耐高低温。/pp　　如果能研究出一种无机材料，在保持耐高低温的同时具备一定的弹性，该多好啊。“这样就能扩大材料的使用范围。我们做科学研究就是要打破物质的本性，这样才能发现新性能，寻找新用途。”/pp　　研究团队在研制这一新材料时，聚焦的无机物材料为碳。因为碳所特有的导电性能，为未来应用提供了更多可能性。他们发现，高分子弹性体，比如橡胶，分子是链状结构，就像柔软的棉线团，有很多缠结的地方可以被拉开，当外力去除，这些高分子的“棉线”又重新缠结变成线团。无机物之所以不能拉长再回弹，就是因为没有相似的结构。/pp　　这时候，高超团队搬出了他们的研究老伙伴，石墨烯。他们希望能在“一片片”的石墨烯中制造出一些褶皱，将高分子的可拉伸“线团结构”拓展成为石墨烯中可拉伸的“纸团结构”，来提高石墨烯的延展性。/pp　　团队借鉴生物学理念，从肌肉和关节的拉伸中寻找答案，设计出类似传统拉缩式灯笼的结构，并用3D技术打印出来，通过限位压缩定型，形成一些“褶皱”。这时候，石墨烯材料可以拉伸100%。/pp style="text-align: center "　　img src="http://img1.17img.cn/17img/images/201804/insimg/96def27c-0e76-4da6-b6ea-cf62831f59ba.gif" title="PT180405000012hNkQ.gif"//pp　　继续拉伸，石墨烯的“一片片”分子结构之间就会出现裂纹。怎么办?团队引入了另外一种纳米材料——碳纳米管，在石墨烯的片层之间打上“补丁”。这样一来，石墨烯就可以拉伸200%了。br//pp　　高超教授说，这种全碳气凝胶弹性体具有优异的抗疲劳性能，在拉伸200%的状态下，可稳定循环至少100圈 在100Hz、1%应变的状态下，可稳定循环至少百万次。“之前一些研究是在有机材料上涂一层无机材料，以此来实现可拉伸。我们这套方法是改变了材料的本身特性。”/pp style="text-align: center "　　img src="http://img1.17img.cn/17img/images/201804/insimg/eb23600f-2e7b-4eed-b973-5aac366964dd.jpg" title="4.jpg"//pp　　对于这一新型材料的未来发展前景，高超教授表示，可以应用到与仿真机器人相关的导电弹性体上，比如电子皮肤等等。“更大的意义，我们希望开拓一个新的研究领域。当大家都在研究气凝胶的压缩性能时，我们希望换一种思路，从拉伸这个方向开展研究。”br//pp　　strong从一只雁到一群雁/strong/pp　　高超团队与石墨烯的情缘已有十年之久。“石墨烯本身是一个‘很小’的材料。国际科研领域已经对它的纳米级结构分析得非常透彻了，我们想看看，把它组装起来变‘大’后会怎么样。”10年前的2008年，高超被引进加入浙大高分子系后，为自己定了一个清晰的全新研究方向——石墨烯宏观组装。/pp　　他用一首儿歌来解释这项研究。“秋天到了，一行大雁往南飞，一会排成一字形一会排成人字形。”当一群大雁在飞行时，我们一眼就能看出雁群的形状，反倒是一只大雁在空中飞的时候，我们很难看清楚它的结构。/pp　　通过群效应团队发现了氧化石墨烯的液晶现象。在一次实验中，团队成员把氧化石墨烯倒进一个杯子，偶然对着光一晃，发现杯中出现了彩色带。这是什么原因呢?团队顺藤摸瓜，发现氧化石墨烯在溶液中的浓度达到某个临界值时，会自发进行取向排列，不但可以流动还高度有序。/pp　　又有一次实验，成员把两条氧化石墨烯纤维放在一起，过了一会儿，这两条纤维居然“焊”在一起了。原来氧化石墨烯有一种“自融合”的本领。/pp　　从这两大发现出发，团队“倒腾”出了四大发明：石墨烯纤维、石墨烯组装膜、石墨烯泡沫、石墨烯无纺布，科研成果发表在《自然通讯》和《先进材料》等国际著名期刊上。/pp style="text-align: center "　　img src="http://img1.17img.cn/17img/images/201804/insimg/4097cb8e-708a-4cfb-ae4d-85994a64a7d4.jpg" title="5.jpg"//pp　　高超说，一流是要不断奋斗出来的，“不是说做好一个工作就行，而是要不断推进”。在团队建设中，高超也非常强调“一流”，认为要有一流的文化、一流的平台、一流的待遇，最终产出一流的成果。他经常跟学生说：“科研首先要发奋，拼搏了才能有所发现，有所发明。还要努力让科研成果转化为对社会有用的产品，让科技发达起来，让国家发达起来。”br//pp　　从最初的几个人，到现在的几十人，高超团队也从“一只大雁”发展到了“一群大雁”。对于过去没钱买研究设备的窘况记忆犹新，对于未来，高超说，他会坚持在首创、极致和影响力三个层面上继续努力。/pp style="text-align: center "　　img src="http://img1.17img.cn/17img/images/201804/insimg/2ca1ddb9-ed63-40a0-8d43-cff98afbd069.jpg" title="6.jpg"//pp　strong　科学也可以诗情画意/strongbr//pp　　对于石墨烯宏观组装研究，高超今年1月还专门写了一首诗来解释其中的奥妙。/pp　　氧化石墨烯/pp　　插层氧化银成金，/pp　　水洗超声片片新。/pp　　纵是千疮身百孔，/pp　　组装修复变烯神。/pp　　高超说，这首诗的大意就是，氧化石墨烯通过插层、氧化、水洗、超声等过程制得，尽管缺陷很多，但可以通过组装及结构修复形成有重要应用价值的石墨烯宏观材料。在他心目中，氧化石墨烯的可塑性太强了，可以在很多领域派上用场。早些年，他还写过另外一首诗来赞美石墨烯。/pp　　烯望/pp　　石陶铜铁竞风流，/pp　　信息时代硅独秀。/pp　　量子纪元孰占优，/pp　　一片石墨立潮头。/pp　　科研工作很忙，这些作品都是高超利用坐火车乘飞机这样的琐碎时间完成的。写诗和骈文是高超业余的重要爱好。他认为科学家也可以写风花雪月的诗句，但如果用诗的语言表达科学，更有利于传播科学，也更能发挥科学家的特长。/pp　　“习总书记曾说，科技创新、科学普及是实现创新发展的两翼，要把科学普及放在与科技创新同等重要的位置。我觉得，研究不能只是成为枯燥的论文，还要让公众能够看懂。”/pp　　他还认为，科学家要多交小朋友，从而提高科学的吸引力和公众的科学鉴赏能力。/p

乳粉，作为婴幼儿和广大消费者日常营养摄入的关键来源，其品质与安全性显得尤为重要。在乳粉的生产和包装流程中，充氮包装（或称气调包装）技术因其在延长产品保质期、保持新鲜度和口感方面的显著效果而被广泛应用。然而，包装内部残留氧气的含量直接影响到充氮包装的质量，因此，进行残氧测试成为了确保乳粉品质与安全性的必要步骤。乳粉在充氮包装后，若包装内部残留氧气过多，将促使乳粉中的脂肪和蛋白质发生氧化反应，这不仅会导致乳粉风味变劣、色泽变化，还会造成营养价值的损失。更为严重的是，过多的残留氧气还可能对消费者的健康构成潜在威胁。通过残氧测试，我们可以准确了解包装内部氧气的残留量，从而评估乳粉的品质和新鲜程度。乳粉作为食品，其安全性无疑是消费者最为关心的方面。在充氮包装过程中，若包装材料存在瑕疵或包装工艺不当，都可能导致包装内部残留过多氧气。这些残留氧气不仅影响乳粉品质，还可能为微生物的滋生提供条件，导致乳粉变质和细菌污染。通过残氧测试，我们可以及时发现包装中的氧气残留问题，并采取相应措施进行改善，从而确保乳粉的安全性。在乳粉的生产过程中，残氧测试和顶空测试主要应用于以下方面：监控包装工艺：通过测试不同包装工艺下乳粉的残氧含量，我们可以评估不同工艺的优劣，进而优化包装工艺，提升乳粉的品质与安全性。评估包装材料：不同材质的包装材料对氧气的阻隔性能有所差异。通过残氧测试，我们可以了解不同包装材料对氧气的阻隔效果，从而选择更适合乳粉包装的材料。监控生产环境：生产环境的湿度、温度等因素也可能影响乳粉的残氧含量。定期进行残氧测试有助于我们监控生产环境的变化，并据此调整生产条件，确保乳粉的品质与安全性。在乳粉的生产和包装过程中，保障产品的品质与安全性一直是乳粉生产企业的首要任务。乳粉充氮包装的残氧测试作为这一环节中的关键步骤，不仅能够准确评估乳粉的品质与新鲜度，还能为乳粉的安全性提供坚实的保障。因此，选择一款高效、准确且易于操作的残氧测试仪、顶空分析仪成为了乳粉生产企业的迫切需求。丹麦MOCON膜康Dansensor原装进口的手持残氧仪CheckPoint 3，正是市场上满足这一需求的杰出代表。这款仪器凭借其良好的性能和便携性，成为了乳粉生产企业进行残氧测试的理想选择。CheckPoint 3手持残氧仪采用固态陶瓷传感器测试氧气浓度，氧气读数分辨率高达0.1%，检测精度为±0.1%。同时，它还配备红外单光束传感器测试二氧化碳浓度，二氧化碳读数分辨率为0.1%，检测精度为±2%（绝对值）。这些较高精度传感器确保了测试结果的准确性和可靠性，为乳粉生产企业提供了强有力的技术支撑。除了较高精度传感器，手持残氧仪CheckPoint 3还具备一系列出色的性能特点。首先，它的分析时间小于10秒，能够快速完成包装袋或容器内顶空气体中氧气和二氧化碳浓度的测试。这对于乳粉生产企业来说，意味着可以更加高效地监控乳粉的品质和安全性。丹麦MOCON膜康Dansensor手持残氧仪CheckPoint 3配备内置采样泵和针头穿刺取样方式，能够自动采集气体样本，无需人工操作。这不仅提高了测试效率，还减少了人为因素对测试结果的影响。丹麦MOCON膜康CheckPoint 3手持残氧仪采用不小于3.5英寸的彩色液晶触摸显示屏，界面直观易懂，操作简便。用户可轻松输入测试方案和配置，如记录操作员信息和产品批次号等。同时，该仪器还支持WiFi连接功能，用户可以通过Web界面实时监控测试结果，并进行数据分析和报表生成。这使得数据管理更加简便、可靠，为乳粉生产企业的决策提供有力支持。丹麦MOCON膜康CheckPoint 3手持残氧仪的丰富配件和轻便易携的特点也是其备受青睐的原因之一。标准配置包括主机、测试针头、过滤器和密封粘垫等，满足用户的基本需求。而仪器重量不超过1Kg，方便用户携带和使用。无论是在生产线上还是实验室中，CheckPoint 3手持残氧仪都能轻松应对各种测试场景。丹麦Dansensor手持顶空分析仪CheckPoint 3凭借其较高精度传感器、快速分析时间、自动取样、直观屏幕显示、WiFi连接和轻便易携等特点，成为了乳粉生产企业进行残氧测试的得力助手。它的应用不仅确保了乳粉的品质与安全性，还为乳粉生产企业的持续发展提供了有力保障。