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锁阳咖啡中咖啡因含量的测定锁阳咖啡以天然锁阳为基础，配以速溶咖啡，是近几年涌现出的一种新型的固体饮料。锁阳主产于甘肃、青海、内蒙，其中以甘肃嘉酒地区的锁阳产量最大、质地最优。锁阳可调节生理机能、均衡营养、促进血液循环、滋肝健肾。锁阳咖啡是锁阳和咖啡的有机结合，越来越受到消费者的青睐。但是人们在饮用锁阳咖啡的同时却容易忽略咖啡的品质，咖啡因是咖啡中的一种重要成分,也是衡量其质量的一项重要指标,作为一种中枢兴奋剂,能兴奋大脑皮层,但易上瘾,因而国家对其制定了相应的标准。本实验用SN/T 1391-2004 《进出口速溶咖啡检验规程》中速溶咖啡中咖啡因的测定方法测定锁阳咖啡中咖啡因的含量。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/07/201307291536_454526_2764104_3.jpg1.方法提要样品用水溶解过滤后，用配有紫外检测器的高效液相色谱(HPLC)测定咖啡因，外标法定量。2.试剂和材料所有试剂除特殊注明外,均为分析纯,水为超纯水。2.1 乙睛:色谱纯;2.2 咖啡因标准品:纯度≥99%;2.3 标准储备液(100m g/L),准确称取 。0.0100 g 咖啡因标准品于100m L容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，作为标准储备液。根据需要再用水将标准储备液稀释成适当浓度的标准工作液。3.仪器和设备3.1高效液相色谱仪配紫外检测器。3.2超声波振荡器。4.测定步骤4.1 提取称 取 0.1g(准确至 0.0001 g )均匀试样于 100m L容量瓶中，加人 80m L水，置超声波振荡器中超声20 min，冷却后用水定容至刻度并混匀，过0.45滤膜后，供HPLC测定。4.2 测定4 .2 .1 色谱条件a) 液 相色谱仪，配紫外检测器，检测波长273n m;b) 色 谱柱:C,。柱(25cm×4.6m mID,5um)柱或相当柱;c) 流 动相:乙睛一水一乙酸(16+83十1);d) 流 速 0.5 m L/min;e) 进 样 量 5uL4.2.2 色谱测定根据样液中咖啡因的含量情况，选定峰面积相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中的咖啡因的响应值均应在仪器的检测线性范围内对标准工作溶液和样液等体积参插进样测定。在上述色谱条件下，咖啡因的保留时间约为9min。 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/07/201307291536_454528_2764104_3.jpg 标准溶液色谱图 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/07/201307291537_454529_2764104_3.jpg 标准曲线 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/07/201307291537_454530_2764104_3.jpg 样品色谱图 4.2.3[/size
茶 咖啡碱测定 中华人民共和国国家标准 GB 8312-87 Tea-Determination of caffeine content 本标准适用于茶叶中咖啡碱的测定。 在茶叶水浸出物中除去叶蛋白、茶多酚等物质后,留下的生物碱其测定波长为274nm者,均称茶叶咖啡碱。1 原理 茶叶中的咖啡碱易溶于水,除去干扰物质后,用特定波长测定其含量。 2 仪器和用具 实验室常规仪器及下列各项:2.1 紫外分光光度仪。 2.2 分析天平: 感量0.0001g。 3 试剂和溶液 本标准所用试剂,除另有规定外,均为分析纯(AR) 水为蒸馏水。3.1 碱性乙酸铅溶液: 称取50g碱性乙酸铅(HG 3-1396-81),加水100mL,静置过夜。 3.2 盐酸(GB 622-77): 0.01N溶液,取0.9mL盐酸,用水稀释1L,摇匀。 3.3 硫酸(GB 625-77): 9N溶液,取硫酸250mL,用水稀释至1L,摇匀。 3.4 咖啡碱标准液: 称取100mg咖啡碱(纯度不低于99％)溶于100mL水中,作为母液,准确吸取5mL加水至100mL作为工作液(1mL含咖啡碱0.05mg)。 4 操作方法 4.1 取样 按GB 8302-87《茶 取样》的规定取样。4.2 试样的制备 按GB 8303-87《茶 磨碎试样的制备及其干物质含量测定》的规定,制备试样。4.3 测定步骤 4.3.1 试液的制备 按GB 8305-87《茶 水浸出物测定》中3.4.1的规定,制备试液。 4.3.2 测定 用移液管准确吸取试液(4.3.1)20mL移入250mL容量瓶中,加入10mL0.01N盐酸(3.2)和 2mL碱性乙酸铅溶液(3.1),用水准确稀释至刻度,充分混匀,静置澄清过滤,准确吸取滤液 50mL,注入100mL容量瓶中,加入0.2m19N硫酸溶液(3.3),加水稀释至刻度,混匀,静置澄清过滤。用10mm比色杯,在波长274nm处,以试剂空白溶液作参比,测定吸光度(A)。 4.3.3 咖啡碱标准曲线的制作 分别吸取0、5、10、15、20、25、30mL咖啡碱工作液(3.4)于一组100mL容量瓶中,各加入4.0mL盐酸溶液(3.2),用水稀释至刻度,混匀,用10mm石英比色杯,在紫外分光光度仪上选择狭缝0.1～0.18mm,在波长274nm处,以试剂空白溶液作参比,测定吸光度(A)。将测 得的吸光度与对应的咖啡碱浓度绘制标准曲线。 5 结果计算 5.1 计算方法和公式 茶叶中咖啡碱含量,以干态质量百分率表示,按下式计算: C 250 100 ──×L1×──×── 1000 20 50 咖啡碱(％)＝───────────×100 M×m 式中:C--根据试样测得的吸光度(A),从咖啡碱标准曲线上查得的咖啡碱相应含量,mg/mL L1--试液总量,mL M--试样用量,g m--试样干物质含量百分率。如果符合重复性(5.2)的要求,取两次测定的算术平均值作为结果。 5.2 重复性 同一样品的两次测定值之差,每100g试样不得超过0.2g。 6 结果报告 试验报告应包括下列内容: a. 使用的方法 b. 测定的结果(取小数点后一位) c. 本标准中末规定的或另加的操作 d. 试样的名称和产地 e. 试验日期,操作人员。附加说明: 本标准由全国食品工业标准化技术委员会提出。 本标准由中国农业科学院茶叶研究所、商业部杭州茶叶加工研究所和上海进出口商品检验局负责起草。 本标准主要起草人李名君、钟萝、严家辉、程坤、郭雯飞、王济安。 中华人民共和国商业部1987-11-19批准 1988-07-01实施
咖啡的主要成分是咖啡因，可以作用于神经细胞中一种叫做腺嘌呤核苷的化学物质，是一种中枢神经兴奋剂，能够暂时的驱走睡意并恢复精力。 不过，咖啡对有些人是有好处的，但是对某些人却产生负面影响，这主要是与咖啡因的在不同人的代谢能力有关的。 咖啡因在肝脏中被分解产生三个初级代谢产物副黄嘌呤，可可碱，茶碱。咖啡因在摄取后45分钟内被胃和小肠完全吸收。吸收后它会分布于身体的所有器官之中，转化过程符合化学动力学一级反应，这些化合物进一步代谢，最终通过尿液排泄。 如果某些人的这个酶的代谢比较快，摄入的咖啡因很快就会被清除出体外，因此咖啡因起作用的效果就很有限，不能令人产生特别明显的兴奋感。而对于另一些人，他们这个酶代谢速度慢，咖啡因在体内的清除速度很慢，起作用时间也就较长，这样的人往往一杯咖啡就会令他们夜不能寐，有的还会影响食欲，呕吐和痉挛，也可能出现胃炎或心脏病等不良反应。 所以这也解释了一般人普遍担心的咖啡会影响睡眠问题，其实和你对咖啡因的代谢力有很大的关系。由于每个人对咖啡因代谢的能力不同，平均来说，咖啡因在体内的运作，大约能维持3～4个小时，所以即使在晚餐后饮用，也不至于造成太大的困扰。但有些人的代谢力较差，可能会持续作用8～12个小时；或者体质对咖啡因比较敏感，就得特别注意喝咖啡的时间，避免影响作息，因为不论是多喝开水或是增加运动，都无法有效的促使咖啡因快速代谢。*********************************** 以上对咖啡因的代谢方面做了简单的科普，可如何对咖啡因代谢物进行检测呢?由于咖啡因代谢物从化学结构上来看，这一类化合物具有相似的母体结构，不同之处在于甲基的位置，属于位置异构体。（见下图）http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/01/201601071109_581149_2452211_3.png 对于分离这些代谢物来说，对色谱柱的分离能力要求比较高，下面我们看看使用迪马Spursil色谱柱分离9种咖啡因代谢物的分离效果情况色谱柱：Spursil C18规格：150 x 4.6 mm, 5 μm流动相：甲醇/ 水+1% 乙酸=10/90流速：1.0 mL/min柱温：室温检测器：UV 254 nm样品：1. 尿酸2. 黄嘌呤3. 7- 甲基黄嘌呤4. 1- 甲基尿酸5. 3- 甲基黄嘌呤6. 1,3- 二甲基尿酸7. 可可碱8. 1,7- 二甲基黄嘌呤9. 茶碱http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/01/201601071110_581151_2452211_3.png总结：Spursil 色谱柱能够在13分钟之内将它们全部分开且达到基线分离～棒棒哒http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09505.gif
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