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流式细胞术是一种基于散射光信号和荧光信号对单个细胞或颗粒进行多参数高通量快速检测的技术,在生物医学领域有广泛的应用前景。在免疫学相关的基础科研工作中,流式细胞术亦是免疫表型及功能分析的重要手段。其中,高质量的单细胞悬液制备是流式检测的关键步骤,直接影响流式检测的结果。该研究选用一种较难制备的原代组织样本——小鼠肠道固有层,选择两种酶解消化方法,从细胞得率、活性、免疫细胞标志物等多个指标进行比较,找到更适用于小鼠肠道固有层免疫细胞获取的酶解方法,结合多参数配色方案,实现了对肠道免疫细胞各主要类群的全面分析。
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上海九院的精准院雷鸣课题组通过解析端粒蛋白质TRF1和其结合蛋白TERB1相互作用的结构基础,进一步解出TERB1-TERB2与TERB2-MAJIN两个相互作用复合物的晶体结构后,构建了特异性破坏TERB1-TERB2或TERB2-MAJIN相互作用的两个Terb2突变体小鼠模型,通过流式分析和分选技术,发现两个Terb2突变体小鼠模型表现出一致的减数分裂过程的缺陷,包括完全破坏端粒与LINC复合物的结合、损伤同源染色体配对的效率和准确率,从而造成联会的异常和减数分裂过程的停滞,并最终导致雄性与雌性小鼠的不育。该项研究阐明了端粒通过TERB1-TERB2-MAJIN复合物附着在核膜的结构基础,证实了端粒的核膜附着和端粒与LINC复合物的结合是两个分开调控的步骤,揭示了MAJIN介导的端粒-核膜附着对减数分裂同源染色体配对的重要功能。
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流式细胞术,具有检测速度快、 测量参数多、采集数据量大、分析信息全面、分选纯度高、方法灵活等特点,被广泛的应用于众多生命科学研究及临床医学邻域。本报告将分享几个孔板分选的应用实例,并探讨实验中的设置优化,以实现高纯度高质量的细胞分选,满足克隆筛选、多组学分析等下游实验需求。
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流式分选应用浅析
时间:2022/10/24 15:43
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2004年进入中科院生物物理所...
流式细胞术细胞分选技术是一种在对流动中的单个细胞的荧光标记进行高通量、高灵敏度、高精确度、多参数检测的基础上,进行高通量、高纯度的分选回收的技术,其综合的功能特点难有其它技术可替代。由于可检测的颗粒种类、细胞参数众多,流式分选的应用也非常丰富多样。此报告试图分析流式分选应用实验的一些重要的共通性部分及其内容、特点等,并介绍一些特定实验情形的要点。希望能为开发、优化各种具体的流式分选应用实验方法提供一个良好的基础。
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在进行流式分选实验时,针对各类样品,喷嘴的选择至关重要。如果喷嘴选择得到,不仅能保证细胞活性,同时也提高的分选效率,可获得事半功倍的效果。结合平台这几年的一些流式分选案例,分享用不同规格喷嘴分选造血干细胞(稀有细胞)、肝实质细胞、小鼠神经元的经验。最后简单介绍一下大颗粒分选装置,用于模式生物的分选。
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成像流式技术结合了成像技术的亚细胞水平空间分辨率和流式技术的高速高通量,近年来发展迅猛。成像流式技术发展到今天,在速度、荧光维度和以及分选能力等方面都有了突破。在这里细数市面上的成像流式分析和分选仪,通过介绍仪器的原理和应用,为大家展现成像流式技术的进展。
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通过一个最近完成的小鼠20色流式方案,分享其中经验和技巧。
1:20色流式方案的设计依据?
2:多色方案中异质性自发荧光处理原理、技巧?
3:分析案例结果展示。
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28c AML MRD 方案建立
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在AML疾病进展和化疗抵抗过程中,我们发现具有 MDSC 特征的炎性单核细胞,介导了AML的免疫耐受。近期,我们通过CyTOF为核心的多组学技术,首次阐释新冠肺炎无症状感染者的免疫学特征,发现与持续无症状感染者(asymptomatic)相比,潜伏期无症状感染者(presymptomatic)存在单核细胞分化阻滞和过度活化的现象,这一现象可能与淋巴细胞耗竭和免疫阻滞相关。在这两方面的研究中,我们都发现单核细胞发挥着关键的免疫调控作用。
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Standard BioTools(原Fluidigm)首创的质谱流式(CyTOF)技术,以金属同位素替代传统荧光标签,结合质谱与流式细胞术的优势,对数百万细胞同时进行50+标志物分析,实现单细胞水平表型、信号通路及功能的多维研究。下一代质谱流式系统——CyTOF XTTM,基于CyTOF超高检测通道优势,在自动化、通量及工作效率等性能获得全面升级,帮助基础、临床及制药研究人员更加快速、高效地实现目标,为健康和疾病领域提供可靠且可重复的见解,助力转化医学的飞速发展。